Замещенное производное этилендиамина для лечения микобактериальных заболеваний и фармацевтическая композиция на его основе

ЗАМЕЩЕННОЕ ПРОИЗВОДНОЕ ЭТИЛЕНДИАМИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МИКОБАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ Изобретение относится к замещенным производным этилендиамина формулы где R4 выбран из Н или алкила; один из R2 и R3 представляет собой Н, адамантил, норадамантил,1-(1-адамантил)этил или 1-адамантанметил и другой из R2 и R3 представляет собой адамантил, норадамантил, 1-(1-адамантил)этил или 1-адамантанметил; R1 представляет собой Н, линейный или разветвленный алкил, арил, алкенил, алкинил, аралкил, аралкенил, аралкинил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероалкил,гетероарил, галогенид, алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, силил, силокси, амино, включая его соли, где алкил, арил, алкенил, алкинил, аралкил, аралкенил, аралкинил, циклоалкил, циклоалкенил и гетероарил в R1 необязательно замещены ацилом, формилом, гидрокси, галогенацилом, амидом, амино, азидо, алкокси, арилокси, галогеном, карбонилом, простым эфиром, сложным эфиром, тиопростым эфиром, тиосложным эфиром, нитрилом, алкилтио, арилтио, сульфоновой кислотой и ее солями, тиолом, алкенилом, алкинилом, нитро, имином, имидом, алкильной и арильной группами; и фармацевтическим композициям, содержащим упомянутые выше соединения, для лечения микобактериальных инфекций.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ДИПАРТМЕНТ ОФ ХЕЛТ ЭНД ХЬЮМАН СЕРВИСЕЗ; СИКВИЛЛА, ИНКОРПОРЕЙТЕД (US) 013965 Область техники Настоящее изобретение относится к способам и производным этилендиамина для лечения заболевания, вызванного микроорганизмами, в частности туберкулеза. Настоящее изобретение также относится к способам и композициям, обладающим улучшенной противомикобактериальной активностью, а именно к композициям, содержащим новые замещенные производные этилендиамина. Предпосылки изобретения Микобактериальные инфекции часто проявляются в виде заболеваний, таких как туберкулез (ТБ). Инфекции человека, вызванные микобактериями, широко распространены с древних времен, и на сегодняшний день туберкулез остается главной причиной смертности. Хотя параллельно с повышением стандартов жизни с середины XIX века число случаев заболевания уменьшилось, микобактериальные заболевания до сих пор являются основной причиной заболеваемости и смертности в странах с ограниченными медицинскими возможностями. Кроме того, микобактерильные заболевания могут вызывать сильнейшее диссеминированное заболевание у больных с нарушениями иммунной системы. Несмотря на многократные попытки многочисленных всемирных организаций здравоохранения, ни разу не удалось добиться уничтожения микобактериальных инфекций, а также ликвидировать угрозу заражения. Около одной третьей населения планеты инфицировано комплексом Mycobacterium tuberculosis, обычно называемым туберкулез, при этом ежегодно с туберкулезом связывают приблизительно 8 миллионов новых случаев и от 2 до 3 миллионов смертей. Туберкулез является причиной наибольшего числа смертей, вызванных одним этиологическим агентом (см. Dye et al., J. Am. Med. Association, 282, 677-686 (1999) и 2000 WHO/OMC Press Release). После уменьшения количества заболеваний в течение нескольких десятилетий в настоящее время число больных туберкулезом увеличивается. В Соединенных Штатах заражены, вероятно, до 10 миллионов человек. В 1990 г. сообщалось примерно о 28000 новых случаях, что составляет увеличение на 9,4% по сравнению с 1989 г. С 1985 по 1990 гг. наблюдалось увеличение числа случаев туберкулеза на 16%. Проживание в перенаселенных условиях и общее воздушное пространство особенно способствуют распространению туберкулеза, содействуя в некоторых случаях росту заболеваемости, наблюдающемуся среди заключенных тюрем и среди бездомных в больших городах США. Приблизительно половина всех пациентов с "синдромом приобретенного иммунодефицита" (СПИД) приобретут микобактериальную инфекцию, а туберкулез у таких пациентов является особенно изнуряющим осложнением. Больные СПИДом в наибольшей степени подвержены риску развития клинического туберкулеза, и противотуберкулезное лечение представляется менее эффективным, чем у пациентов, не больных СПИДом. Поэтому инфекция часто прогрессирует до фатального диссеминированного заболевания. Микобактерии, отличные от М.tuberculosis, все чаще и чаще обнаруживаются при оппортунистических инфекциях, которые поражают больных СПИДом. Организмы комплекса М.avium-intracellulare(MAC), особенно серотипы четыре и восемь, составляют 68% микобактериальных штаммов, выделенных у больных СПИДом. У больных СПИДом было обнаружено огромное количество MAC (до 1010 кислотоустойчивых бацилл/г ткани), и, следовательно, прогноз для таких больных является неудовлетворительным. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) продолжает содействовать борьбе против туберкулеза, предлагая профилактические инициативы, такие как "Expanded Program on Immunization" (EPI)("Расширенная программа иммунизации"), и программы по соблюдению курса лечения "DirectlyObserved Treatment Short-Course" (DOTS) ("Контролируемый краткосрочный курс лечения"). Для уничтожения туберкулеза в равной мере значимыми являются диагностика, лечение и профилактика. Быстрое обнаружение больных туберкулезом приведет к раннему лечению, при котором предполагается приблизительно 90% излечение. Таким образом, ранняя диагностика крайне важна для борьбы с туберкулезом. Кроме того, соблюдение курса лечения будет гарантировать не только уничтожение инфекции, но также снижение опасности появления штаммов с устойчивостью к лекарственным препаратам. Появление штаммов М.tuberculosis, устойчивых к лекарственным препаратам, является чрезвычайно тревожным феноменом. Доля новых случаев туберкулеза с подтвержденной устойчивостью по крайней мере к одному стандартному препарату увеличилась на 10% в начале 1980-х и на 23% в 1991 г. Соблюдение курса лечения, следовательно, также является важным компонентом в стремлении уничтожить туберкулез и предотвратить появление штаммов, устойчивых к действию лекарственных препаратов. В равной степени важна разработка новых терапевтических агентов, которые эффективны в качестве вакцины и в качестве лекарственных средств при заболевании, вызванном штаммами микобактерий, устойчивых к лекарственным препаратам. Хотя было идентифицировано более 37 видов микобактерий, более 95% всех инфекций человека вызывают шесть видов микобактерий: M.tuberculosis, M.Avium intracellulare, M.kansasii, M.fortuitum,M.chelonae и M.leprae. Наиболее распространенным микобактериальным заболеванием человека является туберкулез, который преимущественно вызывают виды микобактерий, включающие M.tuberculosis,M.bovis или M.africanum (Merck Manual, 1992). Инфекция обычно возникает при вдыхании инфекционных частиц, которые в конце концов попадают в легкие. После того как бациллы поглощаются альвеолярными макрофагами, они могут легко реплицироваться, в конечном итоге разрушая фагоцитарные-1 013965 клетки. Происходит каскадный эффект, при котором деструкция фагоцитарных клеток вызывает миграцию дополнительных макрофагов и лимфоцитов к месту инфекции, что в конечном счете также приводит к их уничтожению. На начальных стадиях заболевание далее диссеминируется, инфицируя макрофаги, которые попадают в местные лимфоузлы, а также в поток крови и другие ткани, такие как костный мозг, селезенка, почки, кости и центральная нервная система (см. Murray et al. Medical Microbiology, TheC. V. Mosby Company 219-230 (1990. До сих пор до конца не известны факторы, которые вносят вклад в вирулентность микобактерий. Многие исследователи полагают, что в морфологию колоний и вирулентность вносят вклад липиды клеточной стенки и поверхности бактерий. Имеющиеся данные показывают, что С-микозиды, находящиеся на поверхности некоторых микобактериальных клеток, играют важную роль в выживании организма внутри макрофагов. Другие микобактерии содержат трегалозу 6,6' димиколат, фактор жгутообразования. Взаимосвязь между морфологией колонии и вирулентностью особенно явно прослеживается у бацилл M.avium, встречающихся по нескольким различиям в формах колоний. Бациллы, которые растут как прозрачные, или шероховатые, колонии на обычных лабораторных средах, способны размножаться в макрофагах в тканевой культуре, вирулентны при введении восприимчивым мышам и устойчивы к антибиотикам. Шероховатые или бесцветные колонии бацилл, которые растут на лабораторной культуральной среде, часто спонтанно становятся непрозрачными колониями, R-форма колонии, при этом они не способны размножаться в макрофагах, невирулентны у мышей и очень чувствительны к антибиотикам. Различие морфологии колоний у бесцветных, шероховатых и матовых штаммов M.avium почти всегда связано с наличием гликолипидного слоя на поверхности бесцветных и шероховатых бактерий, который действует как защитная капсула. Эта капсула, или слой, прежде всего, состоит из С-микозидов, которые,вероятно, защищают вирулентные бактерии M.avium от лизосомальных ферментов и антибиотиков. Напротив, неверулентные, непрозрачные формы M.avium имеют очень мало С-микозида на своей поверхности. И резистентность к антибиотикам, и устойчивость к уничтожению макрофагами характерны для гликолипидного барьера на поверхности M.avium. Диагноз микобактериальная инфекции подтверждается путем выделения и идентификации патогена, хотя обычная диагностика основывается на мазке мокроты, рентгеновском исследовании грудной клетки (CXR) и клинических симптомах. Выделение микобактерии в среде занимает от 4 до 8 недель. Идентификация вида занимает более 2 недель. Существует несколько других способов определения микобактерии, например полимеразная цепная реакция (PCR), прямой метод определения микобактерии туберкулеза или прямой метод определения амплифицированных микобактерий туберкулеза (MTD) и анализы определения, в которых используются радиоактивные метки. Одним из диагностических тестов, который широко используется для определения инфекционных заболеваний, вызванных M.tuberculosis, является проба Манту. Хотя существует большое количество вариаций этого теста, проводимого на коже, обычно используется один из двух препаратов туберкулиновых антигенов: старый туберкулин (ОТ) или очищенное производное белка (PPD). Препарат антигена либо вводят в кожу чрескожным путем, либо наносят местно и затем инвазивно транспортируют в кожу,используя специальный ланцет (тест Tine - инъекционная кожная проба). При проведении диагностического кожного теста сталкиваются с несколькими трудностями. Например, тест Tine не может широко применяться, так как количество вводимого антигена в интрадермальный слой нельзя точно контролировать (см. Murray et al. Medical Microbiology, The C. V. Mosby Company 219-230 (1990. Хотя туберкулиновые пробы широко используются, для получения их результатов обычно требуется 2-3 дня, и часто результаты бывают ошибочны из-за ложноположительных результатов, которые иногда наблюдают у пациентов, которые подвергаются действию микобактериальной инфекции, но при этом здоровы. Кроме того, часто встречаются случаи ошибочного диагностирования, так как положительный результат наблюдается не только у пациентов с активным ТБ, но также и у людей, привитых бациллами Кальметта-Герена (BCG), и у людей, зараженных микобактериями, но у которых нет проявлений заболевания. Следовательно, с помощью туберкулиновой пробы сложно отличить пациентов с активным ТБ от других, например от пациентов, контактирующих с зараженными ТБ на бытовом уровне. Кроме того,туберкулиновая проба часто дает перекрестную реакцию у тех пациентов, которые инфицированы другими микобактериями, не M.tuberculosis (MOTT). Следовательно, в настоящее время доступная диагностика с использованием кожных проб часто дает ошибку и погрешности. Стандартное лечение туберкулеза, вызванного чувствительными к лекарственному препарату бактериями, представляет собой шестимесячный курс, заключающийся во введении четырех препаратов,назначаемых в течение двух месяцев, а затем двух препаратов, назначаемых в течение четырех месяцев. Двумя самыми важными препаратами, назначаемыми на протяжении шестимесячного курса, являются изониазид и рифампин. Хотя курс относительно прост, его осуществление является весьма сложным. В течение первой фазы терапии часто требуется ежедневный прием восьми или девяти пилюль; трудная и неприятная перспектива. Даже у пациентов в тяжелейшем состоянии после нескольких недель лечения часто исчезают симптомы, а через несколько месяцев кажется, что они почти здоровы. Однако, если лечение не продолжается до полного завершения, у пациента может развиться рецидив, и степень рецидива у пациента, не-2 013965 получившего полный курс лечения, является высокой. Для того чтобы обеспечить строгое соблюдение курса лечения, используются различные виды помощи, ориентированной на пациента. Самым эффективным способом, гарантирующим лечение пациентов, является контролируемая терапия, которая заключается в том, что член медицинской бригады следит за приемом пациентом каждой дозы каждого препарата. Контролируемая терапия может осуществляться в клинике, по месту жительства пациента или в любом месте, определяемом по взаимному согласию. Почти все больные туберкулезом, вызванным бактериями, чувствительными к лекарственным препаратам, которые прошли полный курс лечения, будут вылечены и риск рецидива у них очень низкий ("Ending Neglect: The Elimination of Tuberculosis in theHealth Promotion and Disease Prevention, Institute of Medicine. Не опубликовано). Необходимы эффективные курсы лечения, которые включают в себя усовершенствованную вакцинацию и протоколы лечения. На сегодняшний день доступные способы лечения не всегда эффективны из-за трудностей с проведением полного курса лечения, и эти трудности способствуют появлению штаммов микобактерий, устойчивых к действию лекарственных препаратов. Этамбутол (ЕМВ) представляет собой антибиотик, широко применяющийся для лечения ТБ, более 300 миллион доз которого было использовано для лечения туберкулеза в 1988 г. Этамбутол, разработанный лабораториями Lederle Laboratories в 1950-х годах, обладает низкой токсичностью и хорошими фармакокинетическими свойствами. Однако этамбутол имеет относительно высокую минимальную концентрацию ингибирования (MIC), приблизительно 5 мкг/мл, и может вызывать неврит зрительного нерва. Таким образом, существует нарастающая необходимость в новых, более эффективных терапевтических композициях (см., например, патенты США 3176040, 4262122; 4006234; 3931157; 3931152; 29358 и Hausler et al., BioorganicMedicinal Chemistry Letters 11 (2001), 1679-1681). За десятилетия после обнаружения лечебных эффектов этамбутола был достигнут небольшой прогресс в фармакологическом лечении ТБ. Кроме того, в связи с одновременным появлением штаммов, устойчивых к лекарственным препаратам, и большим распространением микобактериальной инфекции становится очевидно, что наиболее значимыми в борьбе против туберкулеза являются новые терапевтические композиции. Необходимы абсолютно эффективные курсы лечения, которые включают в себя усовершенствованную вакцинацию и протоколы лечения. Желательно получение терапевтической вакцины, которая могла бы предотвратить появление туберкулеза и таким образом исключить необходимость лечения. Хотя в настоящее время доступные терапевтические средства, такие как этамбутол, являются эффективными,появление штаммов, устойчивых к лекарственным препаратам, требует разработки новых фармацевтических препаратов и композиций, более универсальных, чем этамбутол. В данный момент доступные терапевтические средства не всегда эффективны из-за сложностей проведения полного курса лечения, что дает возможность появления штаммов микобактерий, устойчивых к лекарственным препаратам. Необходимы новые противотуберкулезные препараты, которые обеспечат высокоэффективное лечение и сократят или упростят химиотерапию при туберкулезе. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к способам и композициям, содержащим производные этилендиамина, эффективные для лечения инфекционного заболевания. Настоящее изобретение также относится к способам и композициям, содержащим производные этилендиамина, с улучшенной активностью против микобактерий, включая замещенные этилендиамины, обладающие улучшенной противотуберкулезной активностью. Настоящее изобретение охватывает замещенные этилендиамины, которые могут быть производными различных аминосоединений. В настоящем изобретении замещенные этилендиамины основаны на следующей структуре: Замещенные производные этилендиамина, описанные здесь, синтезированы и подвергнуты скринингу на их активность следующим образом. Химическую библиотеку замещенных этилендиаминов получали на твердой полистерольной подложке, используя методы смешения и разделения. Этот метод-3 013965 позволяет синтезировать разнообразные замещенные этилендиамины. Эти диамины подвергают скринингу на противотуберкулезную активность, используя биологические анализы in vitro, включая технологию высокоэффективного скрининга (HTS), основанную на недавно расшифрованной геномной последовательности М.tuberculosis, и анализ минимальной концентрации ингибирования (MIC). Способы и композиции, описанные здесь, включают в себя замещенные этилендиамины, которые являются эффективными в отношении заболевания, вызванного инфекционными агентами, включая, но этим не ограничиваясь, бактерии и вирусы. Один из вариантов осуществления данного изобретения относится к способам и композициям, содержащим замещенные этилендиамины, которые являются эффективными в отношении микобактериальной инфекции. Другой вариант осуществления данного изобретения относится к способам и композициям для лечения микобактериальной инфекции, содержащим замещенные этилендиамины, имеющим MIC 50 мкМ или менее. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к замещенным этилендиаминам для лечения микобактериальной инфекции,имеющим MIC 25 мкМ или менее. Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к замещенным этилендиаминам для лечения микобактериальной инфекции, имеющим MIC 12,5 мкМ или менее. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к замещенным этилендиаминам для лечения микобактериальной инфекции, имеющим MIC 5 мкМ или менее. В другом варианте осуществления настоящего изобретения способы и композиции содержат замещенные этилендиамины с активностью Luc HTS, равной 10% или более. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения способы и композиции содержат замещенные этилендиамины, где одна аминогруппа получена из первичного амина, а другая аминогруппа получена из первичного или вторичного амина. В другом варианте осуществления настоящего изобретения способы и композиции содержат замещенные этилендиамины, где один амин получен из цис-(-)миртаминламина, циклооктиламина, 2,2-дифенилэтиламина,3,3-дифенилпропиламина, (+)-борниламина, 1-адамантанметиламина, (+)-изопинокамфеиламина или(-)-изопинокамфеиламина. Настоящее изобретение охватывает различные комплексы солей и другие замещенные производные замещенных этилендиаминов. Настоящее изобретение также охватывает энантиомеры и другие стереоизомеры замещенных этилендиаминов и их замещенных производных. Настоящее изобретение также включает в себя лечение животных, включая, но этим не ограничиваясь, людей. Соответственно объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики заболеваний, вызванных микроорганизмами, а также способы и композиции для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. Другим объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики микобактериальной инфекции, включая, но этим не ограничиваясь, туберкулез. Еще одним объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, а также микобактериальной инфекции, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины. Еще одним объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины. Другим объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины, где диамин имеет MIC 50 мкМ или менее. Другим объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины, где диамин имеет MIC 25 мкМ или менее. Другим объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины, где диамин имеет MIC 12,5 мкМ или менее. Другим объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины, где диамин имеет MIC 5 мкМ или менее. Еще одним объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины, где диамин имеет активность HTS/Luc, равную 10% или более. Другим объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины, где одна аминогруппа получена из первичного амина, а другая аминогруппа получена из первичного или вторичного амина. Еще одним объектом настоящего изобретения являются способы и композиции для лечения и профилактики туберкулеза, использующие композиции, содержащие замещенные этилендиамины,где один амин получен из цис-(-)миртаниламина, циклооктиламина, 2,2-дифенилэтиламина,3,3-дифенилпропиламина, (+)-борниламина, 1-адамантанметиламина, (+)-изопинокамфеиламина или-4 013965 Еще одним объектом настоящего изобретения являются композиции для терапевтического препарата для лечения и профилактики микобактериальной инфекции. Другим объектом настоящего изобретения являются композиции для терапевтического препарата для лечения и профилактики микобактериальной инфекции, вызванной M.tuberculosis complex, M.Aviumintracellulare, M.kansarii, M.fortuitum, M.chelonae, M.leprae, M.africanum, M.microti или M.bovis. Эти и другие объекты, особенности и преимущества настоящего изобретения будут понятны после рассмотрения следующего далее подробного описания вариантов осуществления и прилагаемой формулы изобретения. Краткое описание чертежей На фиг. 1 представлена схема процесса, показывающая различные варианты твердофазного синтеза,использующегося для получения замещенных этилендиаминов. На фиг. 2a-2ac показаны химические структуры различных первичных аминов. На фиг. 3a-3f показаны химические структуры различных нециклических вторичных аминов. На фиг. 4a-4i показаны химические структуры различных циклических вторичных аминов. На фиг. 5 представлена схема характерной реакционной смеси десяти замещенных этилендиаминов. На фиг. 6 представлен график обсчета люминесценции в секунду (LCPS) относительно концентрации, показывающий результаты анализа HTS Luc для объединенных замещенных соединений этилендиамина. На фиг. 7 представлен график LCPS относительно концентрации, показывающий результаты анализа HTS Luc для каждого замещенного производного этилендиамина. На фиг. 8 представлен график LCPS относительно концентрации, показывающий результаты анализа HTS Luc для каждого замещенного производного этилендиамина. На фиг. 9 представлена гистограмма, показывающая суммарные MIC активности для определенных замещенных производных этилендиаминов. На фиг. 10 представлена гистограмма, показывающая суммарную люциферазную активность некоторых замещенных этилендиаминов с активностью по крайней мере 10% относительно этамбутола при 3,1 мкМ. На фиг. 11 представлена гистограмма, показывающая частоту встречаемости выбранных аминомономеров в замещенных производных этилендиамина, которые были активны против туберкулеза. Аминомономеры представлены цифровым обозначением. На фиг. 12 представлен технологически процесс, схематически показывающий синтезN-(циклооктил)-N'-(1R,2R,3R,5S)-(-)-изопинокармфеилэтан-1,2-диамина в виде гидрохлорида (соединение 59). На фиг. 14 показаны параметры масс-спектра одного характерного образца в лунке, содержащей объединенные замещенные производные этилендиаминов. На фиг. 15 показаны параметры масс-спектра соединения 109, N-геранил-N'-(2-адамантил)этан-1,2 диамина. На фиг. 16 показаны данные протонного ЯМР для соединения 109, N-геранил-N'-(2-адамантил)этан 1,2-диамина. На фиг. 17 представлена гистограмма данных анализа колониеобразующих единиц/легкие(CFU/легкие), показывающая увеличение CFU/легкие в течение времени в днях для различных соединений. На фиг. 18 представлена гистограмма данных анализа CFU/легкие, показывающая увеличениеCFU/легкие в течение времени в днях для различных соединений. На фиг. 19 представлена гистограмма данных анализа CFU/легкие, показывающая увеличениеCFU/легкие в течение времени в днях для различных соединений. На фиг. 20 представлена гистограмма данных анализа поражения, показывающая видимые поражения в течение времени после лечения различными соединениями. На фиг. 21 представлена схема, демонстрирующая идентификацию кандидатного лекарственного препарата. На фиг. 22 представлены соединения, которые исследовали на эффективность in vivo. На фиг. 23 представлен график, показывающий результаты исследований in vivo соединений 73 и 109 при дозах 1 и 10 мг/кг (селезенка). На фиг. 24 представлен график, показывающий результаты исследований in vivo соединений 73 и 109 при дозах 1 и 10 мг/кг (легкие). На фиг. 25 представлен график, показывающий исследования in vivo соединений 59 и 111 при дозе 1 и 10 мг/кг (селезенка). На фиг. 26 показан график, показывающий исследования in vivo соединений 59 и 111 при дозе 1 и 10 мг/кг (легкие).-5 013965 На фиг. 27 показан график, показывающий результаты исследования эффективности соединений 58,73, 109 и 111 у мышей C57BL.6, инфицированных M.tuberculosis H37Rv (селезенка). Мышей в.в. инфицировали 5106 CFU M.tuberculosis H37Rv; лечение лекарственными препаратами начинали через 18 дней после инфицирования. Ранний контроль ЕС-ЕС, CFU в легких мышей в день начала химиотерапии. Мыши получали: 1 - необработанная мышь; 2 - INH (25 мг/кг); 3 - ЕМВ (100 мг/кг); 4 - соединение 109 (25 мг/кг); 4 - соединение 109 (10 мг/кг); 4 - соединение 109 (0,1 мг/кг); 5 - соединение 58(25 мг/кг); 6 - соединение 73 (25 мг/кг); 7 - соединение 111 (25 мг/кг). На фиг. 28 представлен график, показывающий результаты исследования эффективности соединений 58, 73, 109 и 111 у мышей C57BL.6, инфицированных M.tuberculosis H37Rv (легкие). Мышей в.в. инфицировали 5106 CFU M.tuberculosis H37Rv; лечение лекарственными препаратами начинали через 18 дней после инфицирования. Ранний контроль ЕС-ЕС, CFU в легких мышей в день начала химиотерапии. Мыши получали: 1 - необработанная мышь; 2 - INH (25 мг/кг); 3 - ЕМВ (100 мг/кг); 4 - соединение 109 (25 мг/кг); 4 - соединение 109 (10 мг/кг); 4 - соединение 109 (0,1 мг/кг); 5 - соединение 58(25 мг/кг); 6 - соединение 73 (25 мг/кг); 7 - соединение 111 (25 мг/кг). На фиг. 29 представлены данные LC/MC исследуемых соединений. На фиг. 30 представлен график, показывающий результаты фармакокинетических (ФК) анализов с"кассетным" введением исследуемых препаратов мышам. Пероральное введение. Соединение NSC 722039 в исследовании показано как соединение 37, NSC 722040 - соединение 59, NSC 722041 - соединение 109. На фиг. 31 представлен график, показывающий результаты фармакокинетических (ФК) анализов с"кассетным" введением исследуемых препаратов мышам. Внутрибрюшинное введение. Соединение NSC 722039 в исследовании показано как соединение 37, NSC 722040 - соединение 59, NSC 722041 - соединение 109. На фиг. 32 представлен график, показывающий результаты фармакокинетических (ФК) анализов с"кассетным" введением исследуемых препаратов мышам. Внутривенное введение. Соединение NSC 722039 в исследовании показано как соединение 37, NSC 722040 - соединение 59, NSC 722041 - соединение 109. На фиг. 33 представлен график, показывающий результаты фармакокинетических (ФК) анализов соединения 109 у мышей. На фиг. 34 показано тканевое распределение соединения 109 у мышей (в.в., 3 мг/кг). На фиг. 35 показано тканевое распределение соединения 109 у мышей (п.о., 25 мг/кг). На фиг. 36 показан метаболизм соединения 109 в моче мыши. На фиг. 37 представлены графики, показывающие, что в моче мыши не было обнаружено глюкоронидазных метаболитов соединения 109. Фиг. 38. Табл. 22. Анализ связывания - итоговые результаты. Фиг. 39. Табл. 23. Анализ связывания - данные ссылочных соединений. Фиг. 40. Табл. 24. Итоговые результаты. Фиг. 41. Схема 1. Синтез библиотеки 100000 соединений аналогов этамбутол на твердой подложке. Схема 2. Эксперименты синтеза SQBisAd на твердой подложке. На фиг. 42 представлена структура характерных заданных диаминов, полученных путем ацилирования аминокислот. На фиг. 43 представлена табл. 25, суммирующая данные плашек с синтезированными диаминами для получения библиотеки 20000 заданных аналогов этамбутола. На фиг. 44 представлена схема 5, показывающая синтез библиотеки диамина, используя в качестве линкеров аминокислоты. На фиг. 45 схематически показано положение аминомономеров в соединениях с физиологической эффективностью, которые были получены в основной библиотеке 100000 соединений аналогов ЕМВ. На фиг. 46 схематически показано структурное разнообразие первичных аминов. На фиг. 47 представлена табл. 26, в которой перечислены аминокислоты, которые использовались при получении библиотеки диаминов. На фиг. 48 представлены карбонильные соединения, которые используются в качестве агентов в синтезе библиотеки диаминов. На фиг. 49 представлена табл. 27, в которой показаны карбонильные соединения, используемые в плашках для синтеза библиотеки диаминов. На фиг. 50 представлены представительные примеры данных MIC и Lux для библиотеки диаминов. На фиг. 51 схематически показано расположение алкилированных мономеров в конечных диаминовых продуктах с противотуберкулезной активностью. На фиг. 52 представлено расположение на характерной 96-луночной плашке для разделения. На фиг. 53 представлен список целевых соединений и их структуры для диаминовой библиотеки с модифицированным линкером.-6 013965 Подробное описание изобретения Настоящее изобретение будет более понятно из следующего далее подробного описания приведенных здесь конкретных осуществлений. Однако, хотя настоящее изобретение описано со ссылками на конкретные детали некоторых его осуществлений, эти детали не следует рассматривать как ограничивающие объем данного изобретения. Текст указанных здесь ссылок включен здесь в полном объеме,включая патентную заявку США, серийный 10/147587, поданную 17 мая 2002 г, и предварительную заявку США, серийный 60/381220, поданную 17 мая 2002 г. Заболеваемость микобактериальными инфекциями, такими как инфекции, вызывающие туберкулез,которая, как казалось, уменьшилась, снова увеличивается и составляет серьезную угрозу для здоровья. Туберкулез (ТБ) является наиболее частой причиной смерти людей при заражении одним этиологическим агентом, ежегодно умирает от 2 до 3 миллионов человек, зараженных туберкулезом. В местах скопления большого числа людей или местах проживания в помещениях, не соответствующих стандартам проживания, все чаще можно обнаружить лиц, страдающих микобактериальной инфекцией. Люди с пораженной иммунной системой подвержены большему риску заражения микобактериальной инфекцией и гибели от нее. Кроме того, появление штаммов микобактерий, устойчивых к лекарственным препаратам,привело к трудностям лечения таких инфицированных людей. Много людей, зараженных микобактериями, являются бедными, или проживают в областях с ограниченными медицинскими возможностями. В результате различных проблем (экономические проблемы,низкий уровень образования и тому подобное) многие из этих индивидуумов не способны соблюдать предписанный курс лечения. В конечном счете непрерывное несоблюдение этими и другими индивидуумами курса лечения привело к распространению болезни. Такое несоблюдение курса лечения часто приводит к возникновению штаммов микобактерий, устойчивых к лекарственным препаратам. Необходимы эффективные композиции и вакцины, направленные на различные штаммы микобактерий, для того, чтобы взять под контроль возрастающее количество заболеваний туберкулезом. Химиотерапия является обычным способом лечения туберкулеза. В настоящее время при некоторых используемых способах химиотерапии требуется сочетание трех или четырех препаратов, вводимых ежедневно в течение 2 месяцев, или введение два раза в неделю в течение от 4 до 12 месяцев. На табл. 1 показано несколько схем лечения при стандартных курсах лечения туберкулеза. Таблица 1 Схемы лечения при стандартных курсах лечения туберкулеза Десятилетия неправильного приема существующих антибиотиков и недостаточное соблюдение длительных и сложных курсов лечения привели к мутациям микобактерий туберкулеза и возникновению эпидемии туберкулеза, устойчивого к лекарственным препаратам, которая угрожает контролю над туберкулезом во всем мире. В период 1950-1970-х гг. было разработано огромное количество использующихся в настоящее время лекарственных препаратов, включая наиболее активно применяемые препараты, такие как изониазид, рифампин, пиразинамид, этамбутол и стрептомицин. Таким образом,ранее разработанная химиотерапия туберкулеза не использует участие геномной последовательностиMycobacterium tuberculosis, революцию, свершившуюся в последние десять лет в разработке фармацевтических препаратов, и применение национальных программ тестирования лекарств и комбинаторной химии. Следовательно, для лечения больных со штаммами M.tuberculosis, устойчивых к действию лекарственного препарата, и скрытыми туберкулезными инфекциями требуются новые противотуберкулезные препараты, которые обеспечивают высокоэффективное лечение, а также сокращают и упрощают химиотерапию туберкулеза. Кроме того, желательно, чтобы эти препараты можно было бы синтезировать недорогим способом, так как демографические данные болезни показывают, что цена является существен-7 013965 ным фактором. Настоящее изобретение относится к способам и композициям, содержащим класс замещенных этилендиаминовых соединений, эффективных для лечения и профилактики заболевания, вызванного микроорганизмами, включая, но не ограничиваясь, бактерии. В частности, способы и композиции по настоящему изобретению эффективны для ингибирования роста микроорганизмов, M.tuberculosis. Способы и композиции по настоящему изобретению предназначены для лечения микобактериальных инфекций у человека, а также животных. Например, настоящее изобретение может, в частности, использоваться для лечения коров, инфицированных М.bovis. Как используется здесь, термин "туберкулез" включает в себя заболевания, обычно связанные с инфекциями, вызванными видами микобактерий, включая М.tuberculosis comlex. Термин "туберкулез" также связан с микобактериальными инфекциями, вызванными микобактериями, иначе, чем M.tuberculosis(MOTT). Другие виды микобактерий включают в себя М.avium-intracellulare, M.kansarii, M.fortuitum,M.chelonae, M.leprae, M.africanum и М.microti, M.avium paratuberculosis, М.intracellulare, M.scrofulaceum,M.xenopi, M.marinum, M.ulcerans. Настоящее изобретение, кроме того, относится к способам и композициям, эффективным для лечения инфекционного заболевания, включая, но ими не ограничиваясь, заболевания, которые вызваны бактериальными, микологическими, паразитическими и вирусными агентами. Примеры таких инфекционных агентов включают в себя следующие: стафилококки, стрептококки, нейссерии, кокки, энтеробактерии, псевдомонады, вибрионы, кампилобактер, представители семейства Pasteurellaceae, бордетелла,франциселла, бруцелла, легионеллы, бактероиды, грамотрицательные бациллы, клостридии, коринебактерии, пропионобактерии, грамположительные бациллы, бацилла сибирской язвы, актиномицеты, нокардия, микобактерии, трептонема, боррелии, лептоспира, микоплазма, уреплазма, рикеттсии, хламидии,системные микозы, оппортунистические микозы, протозоя, нематоды, трематоды, цестодии, аденовирусы, вирусы герпеса, поксвирусы, паповирусы, вирусы гепатита, ортомиксовирусы, парамиксовирусы,коронавирусы, пикорнавирусы, реовирусы, тогавирусы, флавивирусы, бунья-вирусы, рабдовирусы, вирусы иммунодефицита человека и ретровирусы. Настоящее изобретение также относится к способам и композициям, которые эффективны для лечения инфекционного заболевания, включая, но ими не ограничиваясь, туберкулез, лепра, болезнь Крона,синдром приобретенного иммунодефицита, болезнь Лима, болезнь от кошачьих царапин, пятнистая лихорадка Скалистых гор и грипп. Способы и композиции для лечения инфекций по настоящему изобретению содержат одно или несколько замещенных производных этилендиамина. В частности, эти производные охватывают большое разнообразие замещенных производных этилендиамина со следующей общей формулой: где R1NH обычно является производным первичного амина иR2R3N обычно является производным первичного или вторичного амина. Этилендиамины по настоящему изобретению получали с помощью модульного подхода, используя в качестве строительных блоков первичные и вторичные амины, и путем взаимодействия аминогрупп со строительным блоком этиленового линкера. Характерные первичные амины, нециклические вторичные амины и циклические вторичные амины показаны на фиг. 2-4 соответственно. Обычно один из R2 и R3 представляет собой Н, адамантил, норадамантил, 1-(1-адамантил)этил или 1-адамантанметил и другой из R2 и R3 представляет собой адамантил, норадамантил, 1-(1-адамантил)этил или 1-адамантанметил и R1 представляет собой Н, линейный или разветвленный алкил, арил, алкенил,алкинил, аралкил, аралкенил, аралкинил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероалкил, гетероарил, галогенид,алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, силил, силокси, амино, включая его соли, где алкил, арил, алкенил, алкинил, аралкил, аралкенил, аралкинил, циклоалкил, циклоалкенил и гетероарил в R1 необязательно замещены ацилом, формилом, гидрокси, галогенацилом, амидом, амино, азидо, алкокси, арилокси,галогеном, карбонилом, простым эфиром, сложным эфиром, тиопростым эфиром, тиосложным эфиром,нитрилом, алкилтио, арилтио, сульфоновой кислотой и ее солями, тиолом, алкенилом, алкинилом, нитро,имином, имидом, алкильной и арильной группами.-8 013965 Заместитель R1HN получали из первичного амина. Заместитель R2R3N обычно получали из первичного или вторичного амина, но также может быть получен из аминокислоты или предшественника аминокислоты. Аминокислота может преобразовываться в аминоспирт. Если в качестве источника R2R3N группы используется аминокислота, соединение-предшественник может быть выбрано, среди прочих, из следующих соединений и их производных: метиловый эфир d,1-триптофана; этиловый эфир 1-метионина; метиловый эфир 1-лизина (посредством взаимодействия любого первичного амина); этиловый эфир (S)-бензил-1-цистеина; метиловый эфир 1-аргинина (посредством реакции любого первичного амина); этиловый эфир 1-глютаминовой кислоты; метиловый эфир 1-гистидина или(3S(3a,4Ab),8Ab)-N-трет-бутил-D-экагидро-3-изохинолинкарбоксамида. Группа R4 у замещенных производных этилендиамина по настоящему изобретению обычно выбрана из Н или алкила. Примеры химической группы R4 включают в себя Н; метил; этил; пропил; бутил; пентил; гексил; гептил; октил. Обычно R4 выбран из Н, метила, этила, бутила. Однако если R4 представляет собой "Н", то этилендиамин не охватывает этамбутола. Большинство производных этилендиамина, описанных здесь, получали, используя твердофазный синтез, как указано на одной из характерных схем взаимодействия, показанных на фиг. 1. Однако когдаR4 представляет собой Н, то взаимодействие проходит неудовлетворительно, если для R1NH2 используются пространственно затрудненные амины или если для R1NH2 используются диамины, такие как аминоалкиленморфолин или аминоалкиленпиперидины. Если R4 является метилом или фенилом, то использование пространственно затрудненных аминов для R3R2NH является нежелательным из-за пространственного затруднения на участке взаимодействия реакции. В этом случае конкурентная реакция гидролиза с получением соответствующих аминоспиртов и неполное восстановление амидоэтилендиаминов будут препятствовать прохождению реакции по схеме. В результате выход желаемых продуктов диаминов будет низким. Получение этилендиаминов предпочтительно осуществляют в шесть стадий, используя кислую смолу Ринка. На первой стадии синтеза происходит превращение кислой смолы Ринка в хлорид смолы Ринка путем обработки трифенилфосфином и гексахлорэтаном в тетрагидрофуране (ТГФ). После этой стадии следует добавление первичного амина в присутствии основания Хунига (EtN(i-Pr)2) в дихлорэтане. На третьей стадии происходит ацилирование амина, присоединенного к смоле, используя любой из двух путей ацилирования, показанных на фиг. 1. Стадию ацилирования предпочтительно проводить, используя любое соединение из следующих: хлорид -хлорацетила, ацетилбромид -бромметила, бромид -бромэтилацетила, ацетилбромид -бромбутила или ацетилхлорид -хлорфенила, каждый в присутствии пиридина в ТГФ. Также могут быть использованы другие агенты ацилирования,известные специалистам в данной области, однако галогениды -бромацетила дают низкий выход продуктов, что может быть связано с элиминированием HBr. Ацилирование также можно осуществлять путем механизма пептидного присоединения, используя -бромметилуксусную кислоту или-хлорметилуксусную кислоту в присутствии гексафторфосфата бензотриазола-1-илокси-триспирролидинофосфония (PyBrop) и N1N-диизопропилэтиламина (EtN(i-Pr)2) в дихлорметане (ДХМ) и диметилформамиде (ДМФ). Опять же, можно использовать другие агенты ацилирования, известные специалисту в данной области. Стадию ацилирования предпочтительно осуществлять дважды для большего выхода ацилированных продуктов. Введение вторичной аминогруппы предпочтительно осуществляли в присутствии основания Хунига в диметилформамиде (ДМФ). Восстановление промежуточного амин-амида проводили, используяRed-Al (3,4 M раствор бис-(2-метоксиэтокси)алюмогидрида натрия в толуоле). Конечный продукт отщепляли от полимерной подложки, используя 10% раствор (по объему) трифторуксусной кислоты (ТФУ) в дихлорметане (ДХМ). Растворитель упаривали, полученную соль ТФУ диаминовых продуктов анализировали с помощью масс-спектроскопии и подвергали скринингу на активность против M.tuberculosis. Некоторые замещенные этилендиамины, полученные вышеописанным методом твердофазного синтеза,также получали, используя синтез в жидкой фазе, как описано ниже. Получение библиотеки замещенных этилендиаминов. Для получения библиотеки замещенных этилендиаминов предпочтительно используют твердофазный синтез, показанный на фиг. 1. Твердофазный синтез дает по крайней мере три основных преимущества:(i) сокращает необходимость использования хроматографических методов;(ii) использует избыток реагентов для проведения реакции с большим выходом и(iii) использует методы объединения и разделения для синтеза большого количества соединений.-9 013965 Твердофазный синтез библиотек 1,2-диамина ранее проводили путем восстановления коротких пептидов (Cuervo et al., Peptides 1994: Proceedings of the European Peptide Symposium; Maia HSL Ed., Esom:Leiden, 1995, 465-466). Однако, как описано здесь, библиотеку этиленаминов получали, используя амины, а не простые аминокислоты для большего разнообразия блоков мономеров для строительства. Первые три стадии каждого твердофазного синтеза: активацию кислой смолы Ринка, добавление первого амина и стадию ацилирования проводили в 10-миллилитровых пробирках на синтезаторе QUEST 210,производство ARGONAUT TECHNOLOGIES, Inc., Foster City, California. В синтезаторе осуществляется до 20 одновременных взаимодействий в 5- или 10-миллилитровых реакционных сосудах для быстрого синтеза целевых соединений. В синтезаторе предусмотрены программируемый температурный контроль и перемешивание и автоматизированная доставка растворителей в реакционные сосуды. Добавление второго амина, восстановление с помощью Red-Al и отщепление от твердой подложки осуществляли в 2-миллилитровых лунках 96-луночной химически устойчивой плашки. До твердофазного синтеза каждый амин с номерами 1-288, как показано на фиг. 2-4, растворяли в ДМФ как одномолярный раствор и помещали в три 96-луночные плашки (один амин на лунку) с получением трех основных плашек этих аминов. В первых трех стадиях твердофазного синтеза из каждого первичного амина образовывались отдельные галогенацетиламиды и особая R4 группа. Отдельные галогенацетиламиды затем объединяли в группы из 10 или 30. Суспензию объединенных полимеров в смеси 2:1 ДХМ/ТГФ равномерно распределяли в одной, двух или трех реакционных плашках с получением 15-20 мг суспензии на лунку. Число используемых реакционных плашек соответствовало числу имеющихся суспензий. Объединенные полимеры в каждой лунке взаимодействовали с соответствующим амином из основных плашек. На фиг. 5 показана схема характерного объединения. Каждое взаимодействие осуществляется в отдельной лунке в присутствии основания Хунига в ДМФ при 70-75 С в течение 16-20 ч. Каждый получаемый амин-амид восстанавливали, используя 65+мас.% Red-Al при комнатной температуре. После восстановления проводили отщепление 10 об. % ТФУ в ДХМ. Растворители в каждой реакционной лунке упаривали и соли ТФУ диаминов анализировали (масс-спектр) и проводили скрининг на активность против М.tuberculosis. Одну из плашек с объединенными диаминами скринировали на активность противM.smegmatis. Два наугад выбранных ряда каждой плашки; т.е. 24 образца на 96-луночную плашку или 25% библиотеки анализировали с помощью масс-спектроскопии. Конкретные методики и подробное описание способов даны в примерах ниже. Скрининг на активность против M.tuberculosis. Всю библиотеку синтезированных замещенных этилендиаминов (заданное число соединение составляет около 100000), полученную, как описано выше, подвергали скринингу in vitro на активность против M.tuberculosis в этамбутоле (ЕМВ) в чувствительном Luc-анализе. Также определяли MIC (минимальную ингибирующую концентрацию). MIC представляет собой минимальную ингибирующую концентрацию ингибитора роста, в данном случае замещенного этилендиамина, при которой не происходит размножения микроорганизмов при исследовании. Скрининг проводили, используя технологию высокоэффективного скрининга Luc (HTS) с рекомбинантной микобактерией, содержащей промоторную конструкцию люциферазы под ЕВ-индуцибильным геном (Luc-анализ). Luc-анализ и анализ MIC подробно описаны ниже. Эти анализы хорошо известны специалисту в данной области. На основании этого первоначального скрининга была показана противотуберкулезная активность смеси 300+ соединений. На фиг. 6 показаны характерные данные анализа в штамме с репортерным геном люциферазы, содержащем Rv0341 ЕМВ-индуцибильный промотор. На фиг. 6 показан процент максимального числа импульсов люминесценции в секунду (% Max. LCPS) для смеси объединенных соединений в одном ряду (ряд D) в одной из 96-луночных плашек. Разделение реакционных плашек. Скрининг на активность против M.tuberculosis выявил смеси приблизительно 300 активных соединений, которые были отобраны для исследований. В частности, лунки с активностью, равной приблизительно менее 12,5 мкМ в HTS Luc-анализе, и/или с MIC, равной приблизительно менее 12,5 мкМ, были отобраны общим числом 336 лунок. Разделение осуществляли путем отдельного повторного синтеза каждого замещенного производного этилендиамина в каждой активной смеси соединений. Объединенные соединения в каждой активной лунке синтезировали отдельно и подвергали скринингу. Синтез заданных производных диамина в каждой активной лунке выполняли в 96-луночных плашках, используя хранящийся архив-галогенацетиламидов (полимеры с присоединенными галогенациламидами), в соответствии с ранее описанными стадиями реакции (добавление второго амина, восстановление с помощью Red-Al и отщепление от твердой подложки). Полимеры архива хранили в виде отдельных соединений при 4 С; 96-луночные плашки использовали для оставшихся стадий синтеза, как описано выше.- 10013965 Каждое полученное разделением соединение подвергали скринингу, анализу MIC и HTSLuc-анализу. Характерные данные люминесценции полученных разделением соединений показаны на фиг. 7 и 8. На фиг. 7 и 8 показано количество импульсов люминесценции в секунду (LCPS) для каждого соединения. Краткое описание результатов скрининга В целом результаты скрининга разделенных производных показали, что приблизительно 2000 производных этилендиамина обладают ингибиторной активностью в отношении М.tuberculosis. Более 150 из этих соединений демонстрируют значения MIC, равные или меньше приблизительно 12,5 мкМ. На фиг. 9 суммированы данные MIC для всех синтезированных отдельных соединений с MIC, равной 50 мкМ или менее. На фиг. 10 суммированы данные Luc-анализа для всех соединений, которые демонстрируют по крайней мере 10%-ную активность при каждой концентрации (результаты не кумулятивны). ЗначениеMIC и Luc активности получали для неочищенных образцов с химическим выходом, равным приблизительно 20%, на основании предполагаемого 80% выхода на каждой стадии реакции. В Luc-анализе 32 соединения показали активность при 1,56 мкМ и в анализе MIC по крайней мере 11 соединений имелиMIC, равную 3,13 мкМ. Частота встречаемости основных 13 аминов, которые усиливают активность замещенных этилендиаминов, показана на фиг. 11, где каждый амин показан со своим цифровым обозначением. Эти амины включают в себя следующие соединения: 11 2,3-Диметилциклогексиламины 18 3,3-Дифенилпропиламин 44 1-Адамантанметилметиламин 47 2,2-Дифенилэтиламин 63(S)-Циклогексилэтиламин 266 Ундециламин 272 Гераниламин Другие амины, которые усиливают активность замещенных этилендиаминов, показаны в табл. 2. Соединения в табл. 2 расположены по результатам своей MIC. Некоторые соединения, синтезированные в больших количествах (2-60 мг) на синтезаторе Quest и очищенные с помощью ВЭЖХ, используя полупрепаративную колонку С 18, показаны в табл. 3. Как правило, конечная чистота каждого соединения в табл. 3 составляла по крайней мере 90%.- 11013965 Таблица 2 Синтезированные замещенные диэтилендиамины, классифицированные по минимальной ингибирующей концентрации