Применение эритропоэтина для лечения сахарного диабета

ПРИМЕНЕНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭПОПЛУС ГМБХ УНД КО. КГ (DE)(57) Настоящее изобретение относится к применению эритропоэтина для получения фармацевтических композиций для терапии сахарного диабета и его осложнений. 013966 Настоящее изобретение относится к применению эритропоэтина для терапии заболеваний, связанных с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников, и для получения фармацевтических композиций в целях лечения таких заболеваний. Эндотелий сосудов представляет собой слой клеток, который выстилает кровеносные сосуды. Эндотелий отделяет кровь от других слоев сосудов, причем эндотелий является не только пассивным барьером, но и активно участвует в регуляции сосудистого тонуса. Соответственно этому также говорят о зависимой от эндотелия вазодилатации. В силу своего положения эндотелий постоянно подвергается гемодинамическому стрессу и метаболическому стрессу. В случае патогенных состояний, например в случае повышенного кровяного давления, повышенных содержаний липопротеинов низкой плотности(LDL), ограниченной почечной функции или повышенного уровня сахара в крови, часто возникают функциональные дефекты эндотелия, за которыми затем могут следовать морфологически конкретные повреждения, такие как образование атеросклеротических бляшек. Очень ранний симптом измененной,соответственно, редуцированной эндотелиальной функции, соответственно эндотелиальной дисфункции,представляет собой уменьшение зависимой от эндотелия вазодилатации. В случае коронарной болезни сердца (КНК), а также в случае имеющихся факторов риска без КНК,таких как, например, гипертония, гиперлипопротеинемия или диабет, дефекты эндотелиальной функции проявляются в пониженном продуцировании NO (=EDRF) и повышенном продуцировании эндотелина. Высокие уровни эндотелина в плазме приводят к анормальному росту клеток, воспалениям, сосудистым разрастаниям и сильным сужениям сосудов. Нарушения эндотелиальной функции к тому же характеризуются усиленным продуцированием адгезивных молекул, таких как ICAM-1 и VCAM-1, за счет чего к эндотелию в повышенной мере прилипают тромбоциты и моноциты. Обусловленное этим происходит повышение сосудистого тонуса. Таким образом, в самых различных системах возникает неравновесие,что способствует вазоконстрикции, адгезии, агрегации, коагуляции, атеросклерозу и атеротромбозу. Даже ментальный стресс приводит к измеримой эндотелиальной дисфункции, которая может продолжаться вплоть до 4 ч. Эндотелиальные клетки принимают участие также в образовании новых кровеносных сосудов. Образование кровеносных сосудов имеет значение в случае множества процессов, например при эмбриогенезе, репродуктивном цикле у женщин, заживлении ран, росте опухолей и неоваскуляризации ишемических областей. Первоначально постнатальное образование кровеносных сосудов, т.е. образование кровеносных сосудов после родов, сводится главным образом к ангиогенетическим процессам. Под ангиогенезом понимают образование новых кровеносных сосудов за счет появления капилляров из уже существующей сосудистой системы. При ангиогенезе прежде всего с помощью протеолитических ферментов разрушается окружающая кровеносные сосуды базальная мембрана и внеклеточная матрица фрагментируется в периваскулярном пространстве. Высвобождающиеся при этом ангиогенные стимулы вызывают миграцию уже имеющихся, образовавшихся путем дифференцировки эндотелиальных клеток в направлении хемотактического раздражителя, причем они одновременно пролиферируют и перестраиваются. За счет наложения друг на друга эндотелиальных клеток затем образуются новые сосудистые петли с капиллярообразными просветами. После этого происходит синтез новой базальной мембраны. Однако проведенные в недавнее время исследования показывают, что образование новых кровеносных сосудов во взрослом организме основано не только на ангиогенезе, но и также на васкулогенетических механизмах. Под васкулогенезом понимают сосудистое новообразование из дифференцирующихся in situ эндотелиальных клеток-предшественников. Догма, что васкулогенез ограничен эмбриогенезом,опровергнута за счет обнаружения эндотелиальных клеток-предшественников (ЕРС) в периферической крови здоровых людей и животных. При использовании животных моделей подтверждено, что происходящие из костного мозга эндотелиальные клетки-предшественники активно участвуют в неоваскуляризации. Также показано, что в ишемических областях находится специфическая CD34-положительная подгруппа лейкоцитов, которая экспрессирует специфичные к эндотелию антигены. Сверх того, из клеток CD133+ и CD34+ in vitro могут получаться эндотелиальные клетки-предшественники (ЕРС), которые вносят значительный вклад в образование кровеносных сосудов во взрослом организме (Asahara и др.,Science, 275, 964-967 (1997); Crosby и др., Circ. Res., 87, 728-730 (2000); Gehling и др., Blood, 95, 31063112 (2000. Далее, показано, что инъекция выделенных клеток CD34+ или культивированных эндотелиальных клеток-предшественников ускоряет восстановление кровотока у больных диабетом мышейInvest., 105, 1527-1536 (2000. Сверх того, показано, что индуцируемая за счет клеток CD34+ неоваскуляризация улучшает функцию сердца (Kocher и др., Nat. Med., 7, 430-436 (2001. Лежащие в основе мобилизации и дифференцировки эндотелиальных клеток-предшественников механизмы, однако, еще полностью не выяснены. Биологические исследования в отношении молекул и клеток указывают на то, что различные цитокины и ангиогенные факторы роста стимулирующе воздействуют на мобилизацию эндотелиальных клеток-предшественников в костном мозге. Так, известно, что проангиогенные факторы, такие как VEGF и GM-CSF, могут повышать число эндотелиальных клетокпредшественников (Asahara и др., EMBO J., 18, 3964-3972 (1999); Takahashi и др., Nat. Med., 5, 434-438(1999. В случае VEGF (васкулярный эндотелиальный фактор роста) речь идет о находящемся в различных изоформах протеине, связывающем оба рецептора тирозинкиназы VEGF-R1 (flt-1) и VEGF-R2 (flk1), которые находятся, например, на поверхности растущих эндотелиальных клеток (Wernert и др.,Angew. Chemie, 21, 3432-3435 (1999. Активация рецепторов VEGF через путь Ras-Raf-MAP-киназа приводит к экспрессии протеиназ и специфических интегринов на поверхности эндотелиальных клеток,соответственно эндотелиальных клеток-предшественников и, наконец, к инициации пролиферации и миграции этих клеток в направлении ангиогенного стимула. В случае GM-CSF (стимулирующий колонии гранулоцитов и макрофагов фактор) речь идет о цитокине, который до сих пор был известен прежде всего для стимуляции лейкоцитов, включая нейтрофилы, макрофагов и эозинофилов. О PIGF (плацентарный фактор роста) известно, что он стимулирует мобилизацию эндотелиальных клеток-предшественников, но не стимулирует их пролиферацию. Из исследований Llevadot и др. (J. Clin. Invest., 108, 399-405 (2001 следует, что ингибиторы HMG-CoA-редуктазы, в особенности статины, которые используют в качестве снижающих уровень липидов лекарственных средств и которые снижают заболеваемость и смертность в случае коронарной болезни, могут мобилизовывать эндотелиальные клетки-предшественники. Dimmler и др. (J. Clin. Invest., 108, 391-397 (2001 далее показали, что статины, такие как аторвастатин и симвастатин, in vitro и in vivo могут значительно улучшать дифференцировку эндотелиальных клетокпредшественников в мононуклеарные клетки и стволовые клетки CD34+, которые выделяются из периферической крови. Так, обработка мышей статинами приводит к повышенному количеству дифференцированных эндотелиальных клеток-предшественников, причем статины обладают таким же сильным действием, как VEGF. Стимуляция мобилизации и/или дифференцировки эндотелиальных клеток-предшественников представляет собой важную новую терапевтическую стратегию для повышения постнатальной неоваскуляризации, в особенности васкулогенеза, и для лечения заболеваний, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников и/или эндотелиальных клеток. В основу изобретения положена техническая проблема получения средств и разработки способов для повышенной стимуляции эндотелиальных клеток-предшественников и лечения заболеваний, которые связаны в особенности с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников. Согласно настоящему изобретению эта техническая проблема решается за счет применения эритропоэтина и/или его производных для стимуляции физиологической мобилизации эндотелиальных клетокпредшественников, пролиферации эндотелиальных клеток-предшественников, дифференцировки эндотелиальных клеток-предшественников в эндотелиальные клетки и/или миграции эндотелиальных клетокпредшественников в направлении ангиогенного или васкулогенного стимула в организме человека или животного. Согласно настоящему изобретению эта техническая проблема также решается за счет применения эритропоэтина и/или его производных для лечения заболеваний или болезненных состояний, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников и/или эндотелиальных клеток. Согласно изобретению неожиданно установлено, что обработка эритропоэтином приводит к физиологической мобилизации эндотелиальных клеток-предшественников, причем повышается количество циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников и индуцируется их дифференцировка, в особенности при сравнительно низких дозах эритропоэтина. Сверх того, компенсируются возникающие в случае определенных патологических состояний функциональные дефициты эндотелиальных клетокпредшественников. Согласно изобретению показано, что у пациентов с хроническим заболеванием почек в конечной стадии число циркулирующих стволовых клеток точно такое же высокое, как у здоровых испытуемых, однако у этих пациентов эти стволовые клетки потеряли способность к дифференцировке в эндотелиальные клетки из эндотелиальных клеток-предшественников. Так, у пациентов с хроническим заболеванием почек количество клеток, которые являются адгезивноспособными и относятся к эндотелиальному клеточному фенотипу, отчетливо уменьшено по сравнению со здоровыми испытуемыми. Согласно изобретению в настоящее время установлено, что после обработки этих пациентов эритропоэтином количество циркулирующих стволовых клеток значительно возрастает на более чем 50%. При этом в особенности резко повышается количество клеток, которые относятся к эндотелиальному фенотипу. Как обнаружено с помощью функционального теста в отношении клеточной культуры, ухудшенная у пациентов с хроническим заболеванием почек способность эндотелиальных клеток-предшественников к адгезии за счет обработки эритропоэтином повышается в три раза. Способность дифференцирующихся эндотелиальных клеток-предшественников, соответственно эндотелиальных клеток к адгезии представляет собой одну из основных предпосылок образования новых тканей и/или сосудов. Эритропоэтин, таким образом, может индуцировать неоваскуляризацию, в особенности васкулогенез, в тканях или органах, в которых высвобождаются соответствующие васкулогенные или ангиогенные стимулы. Согласно изобретению эритропоэтин (в дальнейшем называемый ЕРО) можно использовать для стимуляции физиологической мобилизации эндотелиальных клеток-предшественников, пролиферации эндотелиальных клеток-предшественников,дифференцировки эндотелиальных клетокпредшественников в эндотелиальные клетки и/или для миграции эндотелиальных клетокпредшественников в направлении васкулогенного или ангиогенного стимула в организме человека или животного, в особенности взрослого организма. Согласно изобретению эритропоэтин поэтому предпоч-2 013966 тительно можно использовать для стимуляции новообразования сосудов за счет васкулогенеза в тканях или органах, в которых имеются патологические изменения сосудов. На основании стимуляции эндотелиальных клеток-предшественников за счет эритропоэтина, сверх того, можно также индуцировать образование эндотелиальной ткани. Согласно изобретению эритропоэтин поэтому можно также использовать для лечения заболеваний организма человека или животного, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников и/или эндотелиальных клеток. Согласно настоящему изобретению под термином "эритропоэтин", соответственно "ЕРО" понимают вещество, которое регулирует рост, дифференцировку и созревание стволовых клеток через эритробласты в эритроциты. Эритропоэтин представляет собой гликопротеин, который включает 166 аминокислот, три сайта гликозилирования и имеет молекулярную массу примерно 34000 Да. В рамках индуцируемой эритропоэтином дифференцировки эритроцитных клеток-предшественников индуцируется синтез глобулина и усиливается синтез гемкомплекса, а также увеличивается число рецепторов ферритина. Благодаря этому клетка может поглощать больше железа и синтезировать функциональный гемоглобин. В зрелых эритроцитах гемоглобин связывает кислород. Таким образом, эритроциты, соответственно содержащийся в них гемоглобин, выполняют ключевую роль в отношении снабжения организма кислородом. Эти процессы возбуждаются за счет взаимодействия эритропоэтина с соответствующим рецептором на поверхности эритроцитных клеток-предшественников (Graber и Krantz, Ann. Rev. Med., 29, 51-56(1978. Эритропоэтин образуется главным образом в почках, однако в меньших количествах также в печени и в головном мозге. В незначительных количествах эритропоэтин находится также в сыворотке и в физиологических условиях, по меньшей мере, частично выделяется в моче. У пациентов с почечной недостаточностью эритропоэтин (в дальнейшем называемый ЕРО) может образовываться только в недостаточной степени, и вследствие этого они страдают анемией. Известна компенсация недостаточного снабжения эритропоэтином за счет введения эритропоэтина. Дальнейшие клинические использования эритропоэтина заключаются в применении эритропоэтина при ятрогенной анемии после химиотерапии или лучевой терапии злокачественных заболеваний или вирусных инфекций (Европейский патент ЕР 0456153-В 1). Из патента США 4732889 известно использование содержащих эритропоэтин композиций для лечения ассоциированной с ревматоидным артритом анемии. Из Международной заявкиWO 88/03808 известно лечение гемохроматоза с помощью содержащих эритропоэтин композиций. Используемое в данном контексте понятие "эритропоэтин" включает эритропоэтин любого происхождения, в особенности человеческий или животный эритропоэтин. Используемое в данном контексте понятие включает не только естественно встречающиеся, т.е. дикого типа, формы эритропоэтина, но и также его производные, аналоги, модификации, мутеины, мутанты или прочие, если они обладают биологическими действиями эритропоэтина дикого типа. Согласно настоящему изобретению под термином "производные" понимают функциональные эквиваленты или производные эритропоэтина, которые при сохранении основной структуры эритропоэтина получают путем замещения одного или нескольких атомов или молекулярных групп, соответственно,остатков, в особенности путем замещения сахаридных цепей, таких как этиленгликоль, и/или аминокислотные остатки которых отличаются от естественно встречающегося человеческого или животного эритропоэтина по меньшей мере одной позицией, которые, однако, по существу, обладают высокой степенью гомологии в отношении аминокислот и сравнимой биологической активностью. Производные эритропоэтина, которые, например, можно использовать согласно настоящему изобретению, известны, в частности, из Международной заявки WO-94/25055, Европейского патента ЕР 0148605-B1 или Международной заявки WO-95/05465. Термин "гомология" означает в особенности идентичность последовательностей по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85% и особенно предпочтительно по меньшей мере более чем на 90, 95, 97 и 99%. Известный специалисту термин "гомология", таким образом, характеризует степень родства между двумя или несколькими полипептидными молекулами, которая определяется соответствием между последовательностями. При этом соответствие может означать как идентичное соответствие, так и консервативную замену аминокислоты. Согласно изобретению понятие "производное" включает также слитые протеины, у которых в Nконцевой части, соответственно в С-концевой части имеются функциональные домены другого протеина. Согласно одному варианту осуществления изобретения в случае этого другого протеина речь может идти, например, о GM-CSF, VEGF, PIGF, статине или другом факторе, который обладает стимулирующим воздействием на эндотелиальные клетки-предшественники. Согласно другому варианту осуществления изобретения в случае другого протеина речь может идти также о факторе, который проявляет стимулирующее воздействие на образовавшиеся путем дифференцировки эндотелиальные клетки, например об ангиогенине или bFGF (главный фактор роста фибробластов). О bFGF известно, что этот фактор роста оказывает сильное митогенное и хемотактическое воздействие на эндотелиальные клетки. Различия между производным эритропоэтина и нативным эритропоэтином могут возникать, например, за счет мутаций, таких как, например, делеции, замещения, инсерции, присоединения, обмены оснований и/или рекомбинации нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последо-3 013966 вательности эритропоэтина. Разумеется, при этом речь может идти также о естественно встречающихся вариациях последовательностей, например о последовательностях из другого организма или о последовательностях, которые мутируют естественным образом, или о мутациях, которые с помощью обычных,известных в данной области средств, например химических агентов и/или физических агентов, целенаправленно вводятся в кодирующие эритропоэтин нуклеотидные последовательности. Согласно изобретению понятие "производное" поэтому включает также мутированные молекулы эритропоэтина, следовательно, мутеины эритропоэтина. Согласно изобретению можно использовать также пептидные или белковые аналоги эритропоэтина. В соответствии с настоящим изобретением понятие "аналоги" включает соединения, которые не обладают никакой аминокислотной последовательностью, идентичной аминокислотной последовательности эритропоэтина, однако трехмерная структура которых очень похожа на таковую эритропоэтина и которые поэтому обладают сравнимой биологической активностью. В случае аналогов эритропоэтина речь может идти, например, о соединениях, которые содержат ответственные за связывание эритропоэтина с его рецепторами аминокислотные остатки в пригодной конформации и которые поэтому могут имитировать основные поверхностные свойства места связывания эритропоэтина. Такого рода соединения описываются, например, Wrighton и др., Science, 273, 458(1996). Используемый согласно изобретению эритропоэтин можно получать различным образом, например путем выделения из человеческой мочи или из мочи и плазмы (включая сыворотку) пациентов, страдающих апластической анемией (Miyake и др., J. В. С., 252, 5558 (1977. Человеческий эритропоэтин,например, также можно получать из тканевых культур человеческих почечных раковых клеток (JA-OS 555790/1979), из человеческих лимфобластов, которые обладают способностью к образованию человеческого эритропоэтина (JA-OS 40411/1982), и из гибридомной культуры, получаемой за счет слияния клеток человеческих клеточных линий. Эритропоэтин также можно получать путем генно-инженерных способов, с помощью пригодной ДНК или РНК, которая кодирует соответствующую аминокислотную последовательность эритропоэтина, путем генной инженерии получают желательный протеин, например, в бактерии, дрожжах, растительной или животной клеточной линии. Такого рода способы описываются,например, в Европейских патентах ЕР 0148605-В 2 или ЕР 0205564-В 2, а также в ЕР 0411678-В 1. Настоящее изобретение в особенности относится к применению эритропоэтина (в дальнейшем называемого ЕРО) и/или его производных для стимуляции физиологической мобилизации эндотелиальных клеток-предшественников, пролиферации эндотелиальных клеток-предшественников, дифференцировки эндотелиальных клеток-предшественников в эндотелиальные клетки и/или для миграции эндотелиальных клеток-предшественников в направлении васкулогенного или ангиогенного стимула в организме человека или животного, в особенности во взрослом организме. Согласно настоящему изобретению под выражением "эндотелиальные клетки-предшественники"(эндотелиальные клетки-предшественники; ЕРС) понимают циркулирующие в системе кровообращения клетки, которые обладают способностью к дифференцировке в эндотелиальные клетки. В случае эндотелиальных клеток-предшественников, встречающихся во время эмбрионального развития, речь идет о ангиобластах. В случае эндотелиальных клеток-предшественников, встречающихся во взрослом организме, речь идет о подобных ангиобластам клетках, которые могут получаться из мононуклеарных клеток, в особенности моноцитов CD34-CD14+ и/или стволовых клеток CD34+, выделяемых из периферической крови. Согласно настоящему изобретению под термином "мобилизация" или "физиологическая мобилизация" понимают процесс активации стволовых клеток и/или клеток-предшественников из костного мозга с помощью факторов роста, причем стволовые клетки и/или клетки-предшественники попадают в круг кровообращения, в особенности в периферическую кровь. Согласно настоящему изобретению под термином "пролиферация" понимают способность клеток к увеличению и к последующему делению на две или более дочерних клеток. Опосредованная эритропоэтином стимуляция эндотелиальных клеток-предшественников, таким образом, касается в особенности количества и вместе с тем поведения при делении эндотелиальных клеток-предшественников. Согласно настоящему изобретению под термином "дифференцировка" эндотелиальных клетокпредшественников понимают развитие происходящих из костного мозга мононуклеарных клеток через эндотелиальные клетки-предшественники в эндотелиальные клетки. Под термином "эндотелиальные клетки" понимают клетки, которые образуют эндотелий, т.е. монослойную клеточную выстилку сосудов и серозных полостей. Эндотелиальные клетки отличаются тем, что они высвобождают активные в отношении сосудов вещества, например сосудорасширяющие вещества, такие как EDRF (происходящий от эндотелия расслабляющий фактор), или сужающие вещества, такие как эндотелин, факторы подавления или активации свертывания крови и факторы регуляции проницаемости сосудов. Эндотелиальные клетки также синтезируют компоненты субэндотелиальной соединительной ткани, в особенности коллагены типа IV и V, клеточно-адгезивные протеины, такие как ламинин, фибронектин и тромбоспондин, факторы роста, например, для гладкомышечных клеток и факторы новообразования сосудов. Согласно настоящему изобретению под термином "миграция" эндотелиальных клетокпредшественников понимают, что находящиеся в кровообращении эндотелиальные клетки-4 013966 предшественники перемещаются в направлении васкулогенного или ангиогенного стимула и концентрируются в области васкулогенного или ангиогенного стимула. Под термином "васкулогенный стимул" понимают химический раздражитель в ткани или кровеносном сосуде организма человека или животного, который специфически действует на эндотелиальные клетки-предшественники и вызывает их перемещение к месту в организме, из которого исходит химический раздражитель. За счет васкулогенного стимула, таким образом, индуцируется процесс васкулогенеза. Под термином "ангиогенный стимул" понимают химический раздражитель в ткани или кровеносном сосуде организма человека или животного,который специфически действует на образовавшиеся путем дифференцировки эндотелиальные клетки и вызывает их миграцию к месту в организме, из которого исходит химический раздражитель. Ангиогенный стимул таким образом вызывает индуцирование ангиогенеза. Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления изобретения предусматривается применение эритропоэтина и/или его производных для лечения болезненных состояний или заболеваний организма человека или животного, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клетокпредшественников, или заболеваний, являющихся следствием предыдущих заболеваний. Согласно настоящему изобретению под терминами "заболевания", "болезненные состояния" или"болезни" понимают нарушения жизненных процессов в органах или во всем организме с последствием субъективно ощущаемых, соответственно, объективно устанавливаемых физических, психических или умственных изменений. Согласно изобретению речь идет в особенности о заболеваниях, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников, т.е. заболеваний, которые либо являются следствием такого рода дисфункции этих клеток, либо опосредуются этими клетками. Под выражением"заболевания, являющиеся следствием предыдущих заболеваний", понимают вторичные заболевания, т.е. присоединяющееся к первичной картине болезни второе заболевание. Согласно настоящему изобретению под термином "дисфункция" эндотелиальных клетокпредшественников понимают нарушение существенных функций клеток, таких как интенсивности обмена веществ, ответ на раздражение, моторика, поведение при делении или поведение при дифференцировке этих клеток. Дисфункция эндотелиальных клеток-предшественников может состоять, например, в том,что эти клетки не пролиферируют или пролиферируют только в недостаточной мере. Так как благодаря применению эритропоэтина стимулируется пролиферация эндотелиальных клеток-предшественников, за счет этого может компенсироваться недостаточное поведение при делении как эндотелиальных клетокпредшественников, так и уже образовавшихся путем дифференцировки эндотелиальных клеток и может повышаться количество эндотелиальных клеток-предшественников, соответственно эндотелиальных клеток. Дисфункция эндотелиальных клеток-предшественников может заключаться, например, в нарушенной способности этих клеток к дифференцировке в эндотелиальные клетки. Дисфункция эндотелиальных клеток-предшественников может быть также обусловлена их нарушенной способностью к адгезии и/или их нарушенной способностью к миграции в направлении ангиогенного или васкулогенного стимула. Такие дисфункции эндотелиальных клеток-предшественников могут приводить к тому, что,например, ухудшается или предотвращается новообразование эндотелиальной ткани и/или васкулогенез. Дисфункция эндотелиальных клеток-предшественников может быть также обусловлена патогенно, например, за счет гипертонии, гиперлипопротеинемии, уремии или диабета. Дисфункция эндотелиальных клеток-предшественников может выражаться, например, в уменьшенном продуцировании NO (=EDRF) за счет NO-синтаз (NOS) из L-аргинина, повышенном продуцировании эндотелина и/или в усиленном продуцировании адгезивных молекул, таких как ICAM-1 и VCAM-1. Согласно изобретению в случае заболеваний, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников, речь идет в особенности о гиперхолестеринемии, сахарном диабете, опосредованных эндотелием хронических воспалительных заболеваниях, таких как васкулиты, эндотелиоз, включая ретикулоэндотелиоз, атеросклероз, коронарная болезнь сердца, ишемия миокарда, стенокардия, обусловленное возрастом сердечно-сосудистое заболевание, ишемические заболевания конечностей, болезнь Рейно, преэклампсия, вызванная беременностью гипертония, хроническая или острая почечная недостаточность, в особенности терминальная почечная недостаточность, сердечная недостаточность, заживление ран, а также заболевания, являющиеся следствием предыдущих заболеваний. Под понятием "сахарный диабет" объединяют различные формы нарушений метаболизма глюкозы с различной этиологией и симптоматикой. За возникновение сосудисто-обусловленных диабетических осложнений ответственна в особенности система AGE-RAGE. AGE (образованные из гликатиона конечные продукты) образуются за счет ряда сложных реакций после продолжительной выдержки протеинов или липидов с редуцирующими сахарами, например с глюкозой. Образование AGE происходит во время нормального процесса старения, а также в повышенной мере при сахарном диабете и болезни Альцгеймера. За счет связывания AGE возникает окислительный стресс, активация фактора транскрипции NF-кВ и вместе с этим нарушение эндотелиального гомеостаза. Настоящее изобретение относится поэтому к применению эритропоэтина для лечения сахарного диабета и заболеваний, являющихся его следствием. Согласно изобретению предусматривается, что эритропоэтин вводят пациенту в терапевтически эффективной дозе, которая является достаточной для лечения состояния вышеуказанного заболевания, в-5 013966 особенности заболевания, которое связано с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников,или для профилактики этого состояния, прекращения прогрессирования такого заболевания и/или облегчения симптомов такого заболевания. Вводимая пациенту доза зависит от множества факторов, например от возраста, массы тела и пола пациента, тяжести заболеваний и т.д. Особенно предпочтительно согласно изобретению эритропоэтин в случае всех применений, способов и композиций в соответствии с настоящим изобретением используют в очень незначительных количествах, которые ниже используемых, как известно, количеств, причем в особенности вводят in vivo, т.е. на пациента, дозы эритропоэтина от 200 до 2000 единиц (Ед.; международные единицы) в неделю, предпочтительно дозы от 500 до 2000 Ед. в неделю, в зависимости от тяжести заболевания и в зависимости от функции почек. В случае предусматриваемых согласно изобретению доз от 200 до 2000 Ед. в неделю и на пациента, в особенности от 500 до 2000 Ед. в неделю и на пациента, речь идет о субполицитемических дозах, т.е. дозах, которые не приводят к эритроцитозу со значениями гематокрита более чем 50%. Предусматриваемые согласно изобретению субполицитемические дозы соответствуют еженедельным дозам примерно от 1 до 90 Ед. ЕРО/кг массы тела, в особенности 1-45 Ед. ЕРО/кг массы тела, или сравнимой недельной дозе аранеспа 0,005-0,45 мкг/кг массы тела, в особенности 0,005-0,225 мкг/кг массы тела. В случае аранеспа речь идет о вдвое полиэтиленгликолированном эритропоэтине. Доза 200-2000 Ед. в неделю на пациента, в особенности 500-2000 Ед. в неделю и на пациента, которая предусматривается согласно изобретению для лечения заболеваний или болезненных состояний, протекающих с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников, является очень низкой по сравнению с обычно используемой для лечения ренальной анемии начальной дозой 50-150 Ед./кг массы тела в неделю (как правило, начинающейся с 4000-8000 Ед. в неделю, при неудовлетворительном результате лечения, однако, также значительно выше). Особенно предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к применению эритропоэтина и/или его производных в качестве биологически активного вещества для получения фармацевтической композиции или лекарственного средства в целях лечения болезненных состояний или заболеваний, которые связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников. Согласно изобретению под термином "биологически активное вещество" понимают гомолочное или чужеродное вещество, которое при контакте с молекулами-мишенями или клетками-мишенями или тканями-мишенями влияет на специфические функции тканей, органов или организмов дифференцированным образом. Согласно изобретению также предусматривается, что эритропоэтин в качестве биологически активного вещества предлагаемой согласно изобретению фармацевтической композиции при контакте с эндотелиальными клетками-предшественниками влияет на их поведение в отношении пролиферации, дифференцировки и/или миграции в организме человека или животного таким образом, что компенсируются дисфункции эндотелиальных клеток-предшественников и можно эффективно бороться,облегчать или устранять возникающие вследствие этих дисфункций заболевания, соответственно, можно эффективно предупреждать эти заболевания. Согласно настоящему изобретению под выражением "фармацевтическая композиция" или "лекарственное средство" понимают смесь, используемую для диагностических, терапевтических и/или профилактических целей, следовательно, способствующую или восстанавливающую здоровье организма человека или животного, которая включает по меньшей мере одно природное или синтетически полученное биологически активное вещество, которое оказывает терапевтическое действие. Фармацевтическая композиция может быть как твердой, так и жидкой смесью. Например, фармацевтическая композиция, включающая биологически активное вещество, может содержать один или несколько фармацевтически приемлемых компонентов. Сверх того, фармацевтическая композиция может включать обычно используемые в данной области добавки, например стабилизаторы, средства для получения готовой формы, смазки, порофоры, эмульгаторы или другие, обычно используемые для получения фармацевтической композиции вещества. Согласно изобретению в особенности предусматривается применение эритропоэтина и/или его производного в качестве биологически активного вещества для получения лекарственного средства в целях лечения сахарного диабета, а также заболеваний, являющихся его следствием. Предлагаемая согласно изобретению фармацевтическая композиция может быть пригодна как для локального, так и для системного введения. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения предусматривается, что фармацевтическая композиция применяется для парентерального, в особенности внутривенного, внутримышечного, интрадермального или подкожного введения. Содержащее эритропоэтин лекарственное средство предпочтительно имеет форму инъекции или инфузии. Согласно следующему применению предусматривается, что содержащая эритропоэтин фармацевтическая композиция вводится перорально. Например, содержащее эритропоэтин лекарственное средство вводят в жидкой форме применения, такой как раствор, суспензия или эмульсия, или твердой форме применения, такой как таблетка. Согласно следующему применению предусматривается, что фармацевтическая композиция пригодна для легочного введения или для ингаляции. Согласно изобретению, следовательно, предусматривает-6 013966 ся, что эритропоэтин терапевтически эффективным образом вводится прямо в легкие пациента. Эта форма введения эритропоэтина позволяет быстро вводить дозу эритропоэтина пациенту без необходимости осуществления инъекции. При поступлении эритропоэтина через легкие в кровообращение могут вводиться значительные количества эритропоэтина через легкие, что приводит к повышенным количествам эритропоэтина в системе кровообращения. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения в случае вводимой через легкие фармацевтической композиции речь идет о водном или неводном растворе или о сухом порошке. При нахождении вводимого через легкие, содержащего эритропоэтин лекарственного средства в форме сухого порошка оно включает предпочтительно содержащие эритропоэтин частицы, причем частицы имеют диаметр меньше чем 10 мкм, так что лекарственное средство может достигать также дистальных областей легких пациента. Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления изобретения предусматривается, что вводимое через легкие лекарственное средство находится в форме аэрозоля. Особенно предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к применению эритропоэтина для получения фармацевтической композиции в целях лечения заболеваний, связанных с дисфункцией эндотелиальных клеток-предшественников, причем фармацевтическая композиция, наряду с эритропоэтином в качестве биологически активного вещества, содержит по меньшей мере одно другое дополнительное биологически активное вещество для стимуляции эндотелиальных клетокпредшественников. В случае другого биологически активного вещества речь идет предпочтительно о биологически активном веществе, которое в особенности стимулирует физиологическую мобилизацию эндотелиальных клеток-предшественников из костного мозга. Согласно изобретению в случае другого биологически активного вещества, однако, речь также может идти о биологически активном веществе, которое в особенности стимулирует поведение в отношении деления, следовательно, пролиферации эндотелиальных клеток-предшественников. Согласно изобретению, однако, существует также возможность того, что другое биологически активное вещество стимулирует в особенности поведение в отношении дифференцировки и/или поведение в отношении миграции эндотелиальных клеток-предшественников. В случае другого стимулирующего эндотелиальные клетки-предшественники биологически активного вещества особенно предпочтительно речь идет о VEGF, PIGF, GM-CSF, ингибиторе HMG-CoA-редуктазы, в особенности о статине, таком как симвастатин, мевастатин или аторвастатин, и/или о доноре NO, в особенности о Lаргинине. Согласно изобретению также предусматривается, что по меньшей мере одно другое биологически активное вещество стимулирует в особенности образовавшиеся путем дифференцировки эндотелиальные клетки, т.е. их пролиферацию и/или миграцию, но не эндотелиальные клетки-предшественники. При этом особенно предпочтительно речь идет о bFGF (основной фактор роста фибробластов) или ангиогенине. Дальнейшие предпочтительные варианты осуществления изобретения следуют из зависимых пунктов формулы изобретения. Изобретение поясняется подробнее с помощью нижеследующих фигур и примеров. На фиг. 1 представлены результаты анализа при использовании клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (FACS) циркулирующих стволовых клеток CD34+ (cSC): (A-D): пробы пациентов; (E-F): изотипические контроли. Стволовые клетки CD34+ идентифицируют с помощью дополнительной экспрессии маркера CD34 (В и F), с помощью характерной от незначительной до средней экспрессии антигена CD45 (С и G) и с помощью характерных свойств в отношении светорассеяния (D и Н). Абсолютное количество cSC рассчитывают на 100000 моно- и лимфоцитов. На фиг. 2 представлено количественное определение циркулирующих стволовых клеток с помощью проточной цитометрии. На фигуре показано зависящее от времени действие обработки эритропоэтином при применении человеческого рекомбинантного эритропоэтина (rhEPO) спустя 0, 2, 4, 6 и 8 недель,n=11, значения соответствуют средним значениямстандартное отклонение. Медиана представлена в: р 0,05 по сравнению с 4 неделями; : р 0,05 виде линии. : р 0,01 по сравнению с 2 неделями; по сравнению с 8 неделями. На фиг. 3 представлено количественное определение культивированных эндотелиальных клетокпредшественников (ЕРС). На фигуре показано, что обработка с помощью rhEPO повышает относительное количество эндотелиальных клеток-предшественников. Эндотелиальные клетки-предшественники выделяют перед обработкой ренальных пациентов с помощью rhEPO, а также спустя 2, 4, 6 и 8 недель после обработки пациентов с помощью rhEPO и характеризуют с помощью их адгезивной способности и обоих маркеров acLDL-Dil и UEA-1 FITC. n=11, значения соответствуют средним значениямстандартное отклонение. Медиана представлена в виде линии. : р 0,01 по отношению к периоду времени перед обработкой; : р 0,001 по отношению к периоду времени перед обработкой. На фиг. 4 представлено количественное определение культивированных эндотелиальных клетокпредшественников (ЕРС). На фигуре показано, что абсолютное количество ЕРС до использования терапии с помощью rhEPO значительно уменьшено по сравнению со здоровыми испытуемыми, подобранны-7 013966 ми по возрасту и полу. Пациенты с ренальной анемией, следовательно, проявляют отчетливую дисфункцию ЕРС по сравнению со служащими в качестве контроля людьми. Спустя 8 недель после начала терапии с помощью rhEPO в отношении ренальной анемии это уменьшенное число функциональных ЕРС компенсируется. EPCs выделяют до терапии ренальных пациентов с помощью rhEPO, а также спустя 2,4, 6 и 8 недель после терапии пациентов с помощью rhEPO и характеризуют с помощью их адгезивной способности и обоих маркеров acLDL-Dil и UEA-1 FITC. n=11. Представлен примерно ход процесса в течение 8 недель и все контроли. Абсолютные значения представлены, с одной стороны, в виде отдельных значений. Дополнительно представлены гистограммы (90-й/75-й/50-й/25-й и 10-й процентиль, а также среднее значение). В качестве здорового контроля служат подобранные по возрасту и полу испытуемые, у которых аналогичным образом выделяют и характеризуют EPCs (n=11). На фиг. 5 представлено воздействие эритропоэтина на заживление раны. На фигуре показано, что при обработке стандартизированной кожной раны, которую наносят мышам посредством тканевого перфоратора, с помощью эритропоэтина рана полностью закрывается уже спустя от семи до восьми дней, в то время как при обработке раны с помощью физиологического раствора хлорида натрия (солевой раствор) рана полностью закрывается только спустя от тринадцати до четырнадцати дней. Обработку эритропоэтином, соответственно, физиологическим раствором хлорида натрия начинают за 7 дней до нанесения раны. Рекомбинантный человеческий эритропоэтин вводят однократно еженедельно (группа n=5) путем подкожной инъекции (0,1 мкг/кг аранеспа). На фиг. 6 показано, что эритропоэтин уменьшает потерю почечной функции после острой почечной недостаточности. Для исследования использовали крыс Sprague Dawley (массой 200-300 г). Крыс наркотизировали с помощью кетамина (120 мг/кг) и ромпуна (10 мг/кг). Одна из подопытных групп получала 0,1 мкг/кг массы тела аранесп один раз в сутки до индукции острой почечной недостаточности. В качестве сравнения служила группа подопытных животных, которым, соответственно, вводили путем подкожной инъекции в то же самое время раствор хлорида натрия. Посредством закрепления артериального зажима на правой почечной артерии прерывали кровоток в почке на 45 мин. В это время с левой стороны осуществляли нефрэктомию. Псевдооперацию осуществляли в случае другой, контрольной группы. При этом вскрывали брюшную полость, препарировали левую почечную артерию, но кровоснабжение не прерывали и отнимали контралатеральную правую почку. Всех животных наркотизировали на 60 мин и спустя 24 ч после операции умерщвляли. Ишемия в течение 45 мин с последующей реперфузией оставшейся правой почки в случае обработанных хлоридом натрия животных приводила к очень большой потере почечной функции. Это отражается на содержании креатинина в сыворотке, которое спустя 24 ч после ишемии-реперфузии в 7 раз больше, чем значение до ишемии-реперфузии (р 0,05). В противоположность этому, у обработанных аналогом эритропоэтина аранеспом животных обнаружили только четырехкратное увеличение содержания креатинина в сыворотке спустя сутки после индукции повреждения за счет ишемии-реперфузии. У левосторонне нефрэктомированных животных с псевдооперированной правой почкой не произошло никакого увеличения значений ретенции. На фигуре представлена концентрация креатинина в сыворотке обработанных эритропоэтином (ЕРО) животных (IR + ЕРО), обработанных с помощью NaCl животных (IR) и псевдооперированных животных (Schein-OP) до повреждения за счет ишемии-реперфузии (IR) и спустя 24 ч после этого. Из фигуры следует, что концентрация креатинина в сыворотке в случае обработанных аранеспом животных спустя 24 ч после повреждения за счет ишемии-реперфузии составляет почти половину по отношению к контролю без обработки с помощью ЕРО (обработка с помощью NaCl). На фиг. 7 представлены кривые выживаемости по Каплану-Майеру двух испытуемых групп после индукции хронической почечной недостаточности, которых обрабатывали либо с помощью аранеспа,либо с помощью NaCl. Для исследования использовали крыс Sprague Dawley в возрасте 8 недель. Крыс наркотизировали с помощью кетамина (120 мг/кг) и ромпуна (10 мг/кг). В день 0 у них отнимали правую почку, которую тотчас после отнятия фиксировали в формалине для гистологического исследования. В случае левой почки лигировали сегментарные артерии, которые снабжают верхний и нижний полюс почки. Благодаря этому вызывают инфаркт соответствующих областей почки и функциональной сохраняется только средняя треть почки. Крысы получали один раз в неделю аранесп (0,1 мкг/кг массы тела) илиNaCl путем подкожной инъекции. Обработанные с помощью аналога эритропоэтина аранеспа животные проявляют значительное преимущество в отношении выживаемости по сравнению с обработанными с помощью хлорида натрия животными (р=0,027; Log Rank-тест). На фиг. 8-15 показаны наблюдаемые под микроскопом срезы почки спустя 6 недель после индукции хронической почечной недостаточности в случае двух испытуемых групп, которых обрабатывали либо с помощью аранеспа, либо с помощью NaCl, и относящиеся к ним кривые выживаемости по Каплан-Майеру представлены на фиг. 7. На фиг. 8 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после соответственно однократной еженедельной обработки с помощью NaCl,начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки.-8 013966 На фигуре представлена средней величины прегломерулярная артерия с характерной типа луковой шелухи пролиферацией стенки сосуда при тяжелом гипертензивном повреждении, так называемом злокачественном нефросклерозе с переходом в эндартериит. На фиг. 9 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощью NaCl,начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре представлен флоридный фокально-сегментальный гломерулосклероз в качестве так называемого пролиферативного FSGS (клубочек справа). Другой клубочек (слева) показывает ишемический коллапс лигатурной конволюты. В нижней части представленной картины можно видеть маленький сосуд с тяжелыми повреждениями эндотелия. Наблюдаемые гистологические изменения соответствуют гипертензивным повреждениям органа, соответственно, изменениям в рамках перегрузочной нефропатии после 5/6 нефрэктомии. На фиг. 10 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощьюNaCl, начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре представлен почти полный склероз, соответственно, деструкция компенсирующе увеличенного клубочка с выраженным гиалинозом, соответственно, фибриноидным некрозом относящейся к этому афферентной артериолы. На фиг. 11 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощьюNaCl, начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре показана маленькая прегломерулярная артерия с характерной, в виде луковой шелухи,пролиферацией стенки сосуда и некрозом стенки при тяжелом гипертензивном повреждении, так называемым злокачественным нефросклерозом (сравнимое изображение справа). Слева можно видеть подлинную, (еще) неповрежденную артериолу. На фиг. 12 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощью аранеспа (эритропоэтина) (0,1 мкг/кг аранеспа), начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре представлен подлинный клубочек с тонким афферентным сосудом. В тубулоинтерстиции нельзя констатировать никакой патологии. На фиг. 13 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощью аранеспа (эритропоэтина) (0,1 мкг/кг аранеспа), начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре представлен подлинный клубочек с тонким афферентным сосудом (630-кратное увеличение). В тубулоинтерстиции нельзя констатировать никакой патологии. На фиг. 14 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощью аранеспа (эритропоэтина) (0,1 мкг/кг аранеспа), начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре представлен подлинный клубочек с тонким афферентным сосудом. В тубулоинтерстиции нельзя констатировать никакой патологии. На фиг. 15 представлены гистологические изменения у крысы Spraque-Dawley с хронической почечной недостаточностью после, соответственно, однократной еженедельной обработки с помощью аранеспа (эритропоэтина) (0,1 мкг/кг аранеспа), начинающейся непосредственно после индукции хронической почечной недостаточности, в течение периода времени 6 недель. Хроническая почечная недостаточность возникает за счет отнятия правой почки и лигирования сегментарных артерий, которые снабжают верхний и нижний полюс почки, левой почки. На фигуре представлен подлинный клубочек с тонким афферентным сосудом (630-кратное увеличение). В тубулоинтерстиции нельзя констатировать никакой патологии.-9 013966 Пример 1. Действие эритропоэтина в случае пациентов с ренальной анемией. Исследовали действие эритропоэтина в случае пациентов с ренальной анемией (Hb10,5 г/дл) как следствие болезни почек в конечной стадии (претерминальная почечная недостаточность; клиренс креатинина 35 мл/мин). 11 пациентов в течение периода времени по меньшей мере 8 недель обрабатывали эритропоэтином в еженедельных дозах в среднем 5000 Ед. rhEPO (рекомбинантный человеческий эритропоэтин) внутривенно, соответственно подкожно. После обработки эритропоэтином исследовали в течение 20 недель эндотелиальные клетки-предшественники в крови пациентов, причем спустя 0, 2, 4, 6 и 8 недель эндотелиальные клетки-предшественники анализировали относительно их количества, а также их дифференцировочного статуса, посредством проточной цитометрии и теста на культивирование. В случае циркулирующих периферических стволовых клеток крови (CPBSC) речь идет о маленькой популяции клеток, которые экспрессируют как антиген CD34, так и антиген CD45. На основе рекомендаций ISHAGE разработан тест для определения количества CPBSC посредством проточной цитометрии(Sutherland и др., J. Hematother., 5, 213-226 (1996. При использовании этого теста определяли как этот образец экспрессии клеток CD34 и CD45, так и морфологию стволовых клеток. Таким образом, определяли как абсолютное количество CPBSC на мкл, так и процентную долю CPBSC в общем количестве лейкоцитов. На фиг. 1 представлены результаты анализа при использовании клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (FACS-анализ) циркулирующих стволовых клеток CD34+ на основе рекомендацийISHAGE. На фиг. 2 показано количество определенных посредством FACS-анализа стволовых клеток CD34+ в течение периода времени 8 недель. Тест в отношении клеточной культуры. Мононуклеарные периферические клетки крови (РВМС) выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности в фиколле из человеческих проб крови по способу, описанному Asahara, Science, 275,964-967 (1997). Клетки помещали на культуральные планшеты с фибронектином и сохраняли в базальной среде ЕС. Базальная среда ЕС состоит из квот базальной среды ЕВМ-2 (фирма Clonetics) и EGM-2(hEGF; GA-1000 (гентамицин, амфотерицин-В) FBS, VEGF, hFGF-B (w/гепарин), R3-IGF-1, аскорбиновая кислота, гепарин). После культивирования в течение 4 дней неадгезивные клетки удаляли путем промывки планшетов. Остающиеся адгезивные клетки обрабатывали трипсином и снова высевали. Затем их культивировали в течение следующих трех дней. Клетки с эндотелиальным фенотипом в день 7 после выделения идентифицировали путем положительного окрашивания относительно двух различных эндотелиальных маркеров. При этом речь идет о маркированном DiI ацетилированном липопротеине низкой плотности (acLDL-DiI) и аглютинине-1 Ulex europaeus (UEA-1). Результаты этого исследования представлены на фиг. 3. Результаты показывают, что эритропоэтин может мобилизировать эндотелиальные клеткипредшественники и повышать количество циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников. При этом могут компенсироваться функциональные дефициты, которые возникают при определенных патологических состояниях, таких как ренальная анемия. Эти результаты представлены на фиг. 4. Посредством проточной цитометрии определено, что у пациентов с почечной недостаточностью в конечной стадии количество циркулирующих стволовых клеток CD34+ соответствует количеству циркулирующих стволовых клеток CD34+ в крови здоровых испытуемых. После начала обработки эритропоэтином значительно повышается количество стволовых клеток CD34+ в системе кровообращения на более чем 50%. При использовании теста в отношении клеточной культуры определено, что после обработки эритропоэтином резко увеличивается количество клеток, которые относятся к эндотелиальному фенотипу. В случае функционального теста в отношении клеточной культуры очень ухудшенная способность эндотелиальных клеток-предшественников увеличивается более чем в три раза. Пример 2. Улучшенное заживление раны за счет систематического использования рекомбинантного человеческого эритропоэтина (rhEPO). Мышей FVB/N наркотизировали путем ингаляционной анестезии с помощью изофлорана. Волосяной покров обеих задних ног удаляли с помощью лосьона для депиляции и дезинфицировали с помощью 70%-ного спирта. С помощью стерильного четырехмиллиметрового одноразового перфоратора для биопсийной ткани в каждом случае наносили кожную рану на правый бок мышей. Противоположная сторона служила в качестве внутреннего контроля. Однократно осуществляли послеоперационную антибиотическую защиту с помощью пенициллина G (20000 единиц/кг). В течение всего периода исследования осуществляли один раз в неделю подкожные инъекции аналога рекомбинантного человеческого эритропоэтина аранеспа (0,1 мкг/кг массы тела). Обработку начинали за семь дней до взятия перфоратором ткани. Результаты представлены на фиг. 5. Они показывают, что введение эртропоэтина значительно ускоряет процесс заживления раны.- 10013966 Пример 3. Уменьшение прогрессирования хронической почечной недостаточности за счет терапии эритропоэтином. Крыс Spraque-Dawley в возрасте восьми недель наркотизировали с помощью кетамина (120 мг/кг) и ромпуна (10 мг/кг). В день 0 у крыс отнимали правую почку, которую тотчас после отнятия фиксировали в формалине для гистологического исследования. В случае левой почки лигировали сегментарные артерии, которые снабжают верхний и нижний полюс почки. Благодаря этому вызывают инфаркт соответствующих областей почки, причем функциональной сохраняется только средняя треть почки. Крысы получали один раз еженедельно аналог эритропоэтина аранесп в дозе 0,1 мкг/кг массы тела или для контроляNaCl, подкожно (s.c). На фиг. 7 представлена кривая выживаемости по Каплану-Майеру обеих испытуемых групп. Обработанные с помощью аранеспа животные имеют отчетливо повышенную выживаемость по сравнению с обработанными с помощью хлорида натрия контрольными животными. На фиг. 12-15 показано, что после обработки эритропоэтином почечная ткань не показывает никаких патологических изменений, в то время как после обработки с помощью NaCl видны тяжелые патологические изменения (сравниваемые фиг. 8-11). Дальнейшие гистологические исследования показали, что в случае обработанных аранеспом животных можно наблюдать отчетливо более высокую плотность сосудов (CD31), чем у обработанных с помощью хлорида натрия животных (данные не представлены). Пример 4. Уменьшение прогрессирования острой почечной недостаточности. Для этого исследования использовали крыс Spraque-Dawley с массой тела 250-300 г. Перед индукцией острой почечной недостаточности подопытные животные получали один раз в сутки аранесп в дозе 0,1 мкг/кг массы тела. Крыс наркотизировали с помощью кетамина (120 мг/кг массы тела) и ромпуна(10 мг/кг). В качестве сравнения служила группа подопытных животных, которым, соответственно, в то же самое время вводили путем подкожной инъекции раствор хлорида натрия. Кровоток в почке прерывали на 45 мин тем, что помещали артериальный зажим на правую почечную артерию. В это время с левой стороны осуществляли нефрэктомию. Псевдооперацию проводили в случае другой, контрольной группы. При этом вскрывали брюшную полость, препарировали левую почечную артерию, но кровоснабжение не прерывали, и отнимали контралатеральную правую почку. Всех животных наркотизировали на период времени 60 мин и спустя 24 ч после операции умерщвляли. Ишемия в течение 45 мин с последующей реперфузией оставшейся правой почки в случае обработанных хлоридом натрия животных приводила к очень большой потере почечной функции. Это нашло свое выражение в повышенном в 7 раз количестве креатинина в сыворотке (р 0,05). В противоположность этому, у обработанных аналогом эритропоэтина аранеспом животных обнаружили только четырехкратное увеличение содержания креатинина в сыворотке спустя сутки после индукции повреждения за счет ишемии-реперфузии. У левосторонне нефрэктомированных животных с псевдооперированной правой почкой не произошло никакого увеличения значений ретенции. Результаты представлены на фиг. 6. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение эритропоэтина (ЕРО) для получения фармацевтической композиции, содержащей субполицитемическую дозу ЕРО, соответствующую еженедельной дозе 1-90 Международных единиц(ME) ЕРО/кг массы тела, для терапии сахарного диабета и его осложнений. 2. Применение по п.1, где эта фармацевтическая композиция пригодна для парентерального, в частности внутривенного, внутримышечного, внутрикожного или подкожного введения. 3. Применение по п.2, где эта фармацевтическая композиция находится в форме для инъекции или инфузии. 4. Применение по любому из пп.1-3, где эта фармацевтическая композиция пригодна для легочного введения. 5. Применение по п.4, где эта фармацевтическая композиция находится в форме водного раствора,неводного раствора или порошка. 6. Применение по п.4 или 5, где эта фармацевтическая композиция находится в форме аэрозольного продукта. 7. Применение по п.1, где эта фармацевтическая композиция пригодна для перорального введения. 8. Применение по п.7, где эта фармацевтическая композиция находится в форме раствора, суспензии, эмульсии или таблетки. 9. Применение по пп.1-8, где эта фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере один дополнительный активный ингредиент для стимуляции эндотелиальных клеток-предшественников. 10. Применение по п.9, где этим дополнительным активным ингредиентом является VEGF, PIGF,GM-CSF, ингибитор HMG-CoA-редуктазы и/или донор NO, в частности L-аргинин. 11. Применение по п.10, где ингибитором HMG-CoA-редуктазы является статин, такой как симвастатин, мевастатин или аторвастатин.- 11013966 12. Применение по любому из пп.1-11, где эритропоэтином является эритропоэтин человека или животного. 13. Применение по п.12, где эритропоэтином является производное, аналог, модификация или мутеин эритропоэтина. 14. Применение по п.12 или 13, где эритропоэтин выделен из мочи человека, мочи или плазмы пациентов, страдающих от апластической анемии, культур ткани клеток рака почки человека, лимфобластных клеток человека, способных продуцировать эритропоэтин человека, или гибридомной культуры,полученной слиянием клеток клеточной линии человека. 15. Применение по п.12 или 13, где эритропоэтином является эритропоэтин, полученный способами рекомбинантных ДНК.