Кристаллическая форма хинолинон-карбоксамидного соединения

012115 Область техники, к которой относится изобретение Изобретение направлено на кристаллические солевые формы хинолинон-карбоксамидного соединения, полезные в качестве агонистов рецепторов 5-HT4. Изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие такие кристаллические соединения, на способы применения таких соединений при лечении медицинских состояний, опосредованных активностью рецепторов 5-HT4, и на способы получения таких соединений. Уровень техники Предварительная патентная заявка США 60/560076 от 7 апреля 2004 года и патентная заявка США 11/100113 от 6 апреля 2005 года раскрывают новые хинолинон-карбоксамидные соединения,предположительно, полезные при лечении заболеваний, сопровождающихся снижением подвижности желудочно-кишечного тракта. В частности, в этих заявках раскрыто такое соединение, как (1S,3R,5R)-8[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламид 1-изопропил 2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, демонстрирующее активность агониста рецепторов 5-HT4. Химическая структура (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты представлена формулой I Для того, чтобы эффективно использовать это соединение в качестве терапевтического средства,было бы желательно иметь его в твердой солевой форме, обладающей приемлемой химической и физической стабильностью, которую можно производить в промышленных масштабах. Например, было бы очень желательно иметь солевую форму, которая термостабильна, в частности, при температурах выше примерно 200 С, а также является негигроскопичной и не расплывается под действием влаги из воздуха,что облегчало бы обработку и хранение этого вещества. Твердым кристаллическим веществам обычно отдают предпочтение перед аморфными формами из-за большей чистоты и стабильности продукта, выпускаемого в промышленных масштабах. До сих пор в литературе не были описаны кристаллические солевые формы соединения, соответствующего формуле I. Поэтому существует потребность в стабильной кристаллической солевой форме соединения, описанного формулой I, которая является негигроскопичной, и не расплывается под действием влаги из воздуха, и обладает приемлемой термостабильностью. Сущность изобретения Представленное изобретение предлагает кристаллический гидрохлорид (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2 дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты или сольват этой соли. В одном из аспектов изобретения упомянутая кристаллическая солевая форма представляет собой кристаллический гидрохлорид соединения,описанного формулой I. В другом аспекте изобретения упомянутая кристаллическая солевая форма представляет собой кристаллический гидрат гидрохлорида соединения, описанного формулой I. Неожиданно было обнаружено, что кристаллический гидрохлорид, предлагаемый изобретением,обладает термостабильностью при температурах выше примерно 200 С, а также увеличивает свою массу менее чем примерно на 0,2% при контакте с окружающей средой, имеющей относительную влажность в диапазоне примерно от 2 до 90% при комнатной температуре. Более того, ни кристаллический гидрохлорид, предлагаемый изобретением, ни гидрат этой соли не расплываются под действием влаги из воздуха при относительной влажности до 90% при комнатной температуре. Среди всех прочих вариантов реализации изобретения предполагается, что упомянутые кристаллические солевые формы полезны для изготовления фармацевтических композиций, которые можно использовать для лечения заболеваний, сопровождающихся снижением подвижности желудочно-кишечного тракта. В соответствии с этим в одном из аспектов композиции данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, включающую фармацевтически приемлемый носитель и кристаллический гидрохлорид (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1] окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты или сольват этой соли. Изобретение также предлагает способ лечения заболевания или состояния, связанного с активностью рецепторов 5-HT4, то есть заболевания, сопровождающегося снижением подвижности желудочно-кишечного тракта, причем упомянутый способ заключается во введении млекопитающему терапевтически эффективного количества кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонил-1 012115 метиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты или сольвата этой соли. В другом аспекте способа изобретение предлагает способ получения упомянутого кристаллического гидрохлорида, включающий приведение в контакт (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-ил]амида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты с соляной кислотой с образованием реакционной смеси и последующим выделением из этой смеси кристаллического гидрохлорида. Изобретение также предлагает кристаллический гидрохлорид, описанный в этом документе, для его применения в терапии или в качестве лекарственного средства, а также для применения упомянутого кристаллического гидрохлорида в производстве лекарственного средства, особенно в производстве лекарственного средства для лечения заболевания, сопровождающегося снижением подвижности желудочно-кишечного тракта у млекопитающих. Краткое описание чертежей Различные аспекты представленного изобретения иллюстрируются ссылками на сопровождающие чертежи. Фиг. 1 показывает порошковую рентгенограмму (PXRD) кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил 2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, предлагаемого изобретением. Фиг. 2 показывает кривую, полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии(TGA) (верхняя кривая, левосторонняя вертикальная ось) кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)-8[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил 2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, предлагаемого изобретением. Фиг. 3 показывает кривую, полученную методом динамического влагопоглощения (DMS) при анализе кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты,предлагаемого изобретением. Фиг. 4 показывает порошковую рентгенограмму (PXRD) кристаллического гидрата гидрохлорида(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, предлагаемого изобретением. Фиг. 5 показывает кривую, полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, предлагаемого изобретением. Фиг. 6 показывает кривую, полученную методом динамического влагопоглощения (DMS) при анализе кристаллического гидрата гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, предлагаемого изобретением. Подробное описание изобретения Представленное изобретение предлагает кристаллический гидрохлорид (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2 дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты и сольват этой соли. Определения При описании соединений, композиций и способов, предлагаемых изобретением, перечисленные ниже термины имеют следующие смысловые значения, если не указано иное. Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество, которое достаточно для создания лечебного эффекта при введении пациенту, нуждающемуся в лечении. Термин "лечение" при использовании в этом документе означает лечение заболевания, расстройства или медицинского состояния у пациента, в частности млекопитающего (особенно человека), которое включает:(a) предупреждение развития заболевания, расстройства или медицинского состояния, т.е. профилактическое лечение пациента;(b) улучшение заболевания, расстройства или медицинского состояния, т.е. элиминацию или стимуляцию обратного развития заболевания, расстройства или медицинского состояния у пациента;(c) подавление заболевания, расстройства или медицинского состояния, т.е. замедление или приостановку развития заболевания, расстройства или медицинского состояния у пациента; или(d) облегчение симптомов заболевания, расстройства или медицинского состояния у пациента. Термин "сольват" означает комплекс или агрегат, образованный одной или более молекулой(ами) растворенного вещества, то есть соединения, предлагаемого изобретением, или его фармацевтически приемлемой солью и одной или более молекулой(ами) растворителя. Такие сольваты представляют собой типичные кристаллические твердые вещества, имеющие, по существу, фиксированное молярное со-2 012115 отношение растворимого вещества и растворителя. Типичные растворители включают в качестве примеров воду, метанол, этанол, изопропанол, уксусную кислоту и т.п. Если растворителем служит вода, образуемый сольват имеет специфическое название, гидрат. Термин "кристаллический гидрохлорид", используемый в этом документе, означает твердое кристаллическое вещество, не включающее, по существу, фиксированную молярную фракцию молекул растворителя в структуре кристаллической решетки, то есть вещество, которое не является сольватом. Сольваты, особенно гидраты, предлагаемые изобретением, определяются отдельно. Необходимо отметить, что в описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа могут включать ссылки на множественное число, если содержание текста не будет четко указывать на иное. Термин "аминозащитная группа" означает защитную группу, используемую для предупреждения нежелательных реакций азота в составе аминогруппы. Типичные аминозащитные группы включают, но не ограничиваясь ими, формильные и ацильные группы, например алканоильные группы, в частности ацетил, алкоксикарбонильные группы, в частности трет-бутоксикарбонил (Boc), арилметоксикарбонильные группы, в частности бензилоксикарбонил (Cbz) и 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), арилметильные группы, в частности бензил (Bn), тритил (Tr) и 1,1-ди(4'-метоксифенил)метил, силильные группы, в частности триметилсилил (TMS) и трет-бутилдиметилсилил (TBDMS), а также подобные им вещества. Активный агент При использовании имеющегося в продаже пакета прикладных программ AutoNom (MDL InformationSystems, GmbH, Франкфурт, Германия) активный агент в представленных солевых формах, т.е. соединение, описанное формулой I, обозначается как (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламид 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты. Обозначение (1S,3R,5R) описывает относительную ориентацию химических связей, ассоциированных с бициклической кольцевой системой. Альтернативно это соединение обозначается как N-[(3-эндо)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-ил]-1-(1-метилэтил)-2-оксо-1,2-дигидро-3-хинолинкарбоксамид. Солевые формы, предлагаемые изобретением В одном из аспектов изобретение предлагает кристаллический гидрохлорид (1S,3R,5R)-8-[(R)-2 гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо 1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты. Кристаллический гидрохлорид, предлагаемый изобретением, в типичном случае содержит примерно от 0,8 до 1,2 мол.экв. соляной кислоты на 1 мол.экв. соединения, описанного формулой I, включая вариант с содержанием примерно от 0,9 до 1,1 мол.экв. соляной кислоты на 1 мол.экв. соединения, описанного формулой I. Молярное отношение соляной кислоты к активному агенту легко можно определить способами, известными и доступными специалистам, компетентным в данной области знаний. Например, такие молярные соотношения легко определяются при титровании со стандартным раствором нитрата серебра. Для определения молярного соотношения в качестве альтернативных вариантов можно использовать методы элементного анализа, 1H-ЯМР (ядерного магнитного резонанса) и хроматографии. В одном из аспектов кристаллический гидрохлорид, предлагаемый данным изобретением, характеризуется порошковой рентгенограммой (PXRD) с двумя или более пиками дифракции, имеющими значение 2, выбранное из 4,410,2, 8,820,2, 9,080,2, 11,210,2, 14,400,2, 16,420,2, 17,350,2, 17,610,2,18,14+0,2, 19,040,2, 19,95+0,2, 20,200,2, 21,230,2, 22,130,2, 22,480,2, 22,830,2, 24,160,2, 25,370,2,25,560,2, 26,220,2, 27,330,2, 29,080,2 и 29,610,2. Особенностью этого аспекта является то обстоятельство, что кристаллическая форма характеризуется порошковой рентгенограммой (PXRD) с двумя или более пиками дифракции, имеющими значение 2, выбранное из 14,400,2, 17,350,2, 17,610,2,19,040,2, 21,230,2 и 22,130,2. Как хорошо известно в области порошковой рентгеновской дифракции, расположение пиков в спектре PXRD относительно менее чувствительно к условиям эксперимента, в частности к деталям подготовки образца и геометрии инструмента, чем высота пиков. Так, в одном из аспектов изобретения кристаллический гидрохлорид соединения, описанного формулой I, характеризуется такой рентгенограммой, в которой расположение пиков, по существу, соответствует рисунку, показанному на фиг. 1. Кристаллический гидрохлорид, предлагаемый данным изобретением, также характеризуется термостабильностью при воздействии высоких температур, о чем свидетельствует кривая дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), на которой представлен пик эндотермического теплового потока в диапазоне примерно от 230 до 260 С, что проиллюстрировано на фиг. 2. Кроме того, кривая термического гравиметрического анализа (TGA) не показывает существенных тепловых явлений на уровне ниже примерно 225C. Еще в одном аспекте изобретения кристаллический гидрохлорид характеризуется таким спектром инфракрасного поглощения, который демонстрирует выраженные полосы поглощения на уровне примерно 758, 783, 795, 802, 949, 981, 1149, 1158, 1217, 1332, 1377, 1453, 1467, 1487, 1525, 1566, 1575, 1615,-3 012115 1672 и 3197 см-1. Было продемонстрировано, что кристаллический гидрохлорид соединения, описанного формулой I,имеет обратимый профиль сорбции/десорбции с исключительно низким уровнем гигроскопичности(увеличение массы менее чем на 0,2% при изменении относительной влажности воздуха в диапазоне от 2 до 90% при комнатной температуре), как показано на фиг. 3. В дополнение к этому, было обнаружено, что кристаллический гидрохлорид соединения, описанного формулой I, сохраняет стабильность при длительном воздействии повышенной температуры и влажности. Например, после хранения в течение 24 недель при температуре 40C и относительной влажности 75% анализ методом ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии) не показал признаков химического распада и не выявил каких-либо изменений в результатах DSC, TGA или PXRD. Еще в одном аспекте изобретение предлагает кристаллический гидрат гидрохлорида соединения,описанного формулой I. В одном из аспектов кристаллический гидрат гидрохлорида, предлагаемого данным изобретением,характеризуется порошковой рентгенограммой (PXRD) с двумя или более пиками дифракции, имеющими значение 2, выбранное из 5,300,2, 7,430,2, 8,720,2, 10,520,2, 13,85+0,2, 14,110,2, 15,800,2,15,990,2, 17,260,2, 19,530,2, 20,080,2, 21,060,2, 21,480,2, 21,920,2, 22,850,2, 23,910,2, 25,280,2,26,060,2, 27,340,2, 27,510,2 и 29,670,2. Особенностью этого аспекта является то обстоятельство, что кристаллическая форма характеризуется порошковой рентгенограммой (PXRD) с двумя или более пиками дифракции, имеющими значение 2, выбранное из 10,520,2, 13,850,2, 15,800,2, 17,260,2 и 21,060,2. Еще в одном аспекте изобретения кристаллический гидрат гидрохлорида соединения, описанного формулой I, характеризуется такой картиной рентгеновской дифракции, в которой расположение пиков,по существу, соответствует рисунку, показанному на фиг. 4. Кристаллический гидрат гидрохлорида, предлагаемого данным изобретением, также характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), на которой представлен пик эндотермического теплового потока, идентифицированный по плавлению кристалла в диапазоне примерно от 225 до 250 С с обширными или слабыми эндотермами при менее высоких температурах, что проиллюстрировано на фиг. 5. Кроме того, кривая термического гравиметрического анализа (TGA) показывает, что температура распада превышает примерно 250 С. Было продемонстрировано, что кристаллический гидрат гидрохлорида соединения, описанного формулой I, имеет обратимый профиль сорбции/десорбции при комнатной температуре и изменении относительной влажности во всем диапазоне от 2 до 90%, как это проиллюстрировано на фиг. 6. Кристаллический гидрат демонстрирует увеличение массы менее чем на 0,25% при изменении относительной влажности в диапазоне примерно от 40 до 75%. Эти свойства солевых форм, предлагаемых данным изобретением, дополнительно иллюстрируются в приведенных ниже примерах. Синтетические методы Активный агент, (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламид 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, можно приготовить из легкодоступных исходных веществ, используя процедуры, описанные в приведенных ниже примерах или в патентных заявках США, которые перечислены в разделе "Уровень техники". Для приготовления кристаллического гидрохлорида, предлагаемого изобретением, типичным способом (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-ил амид 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты приводят в контакт приблизительно с 1-1,5 мол.экв. соляной кислоты, включая вариант контакта приблизительно с 1-1,2 мол.экв. соляной кислоты. Обычно такую реакцию проводят в инертном разбавителе при температуре в диапазоне приблизительно от 20 до 80C. Подходящие инертные разбавители для этой реакции включают, но не ограничиваясь ими, этанол, метанол, изопропанол, этилацетат, ацетонитрил, толуол, тетрагидрофуран и их комбинации. После окончания реакции кристаллическую соль по изобретению выделяют из реакционной смеси любым подходящим способом, в частности осаждением, концентрированием, центрифугированием и т.п. Кристаллический гидрат можно получить, растворяя гидрохлорид (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты в воде в концентрации более примерно 50 мг/мл, что создает суспензию, из которой традиционными способами можно выделить образовавшийся кристаллический гидрат. Фармацевтические композиции Кристаллические формы гидрохлорида, предлагаемые изобретением, обычно вводят пациентам в составе фармацевтических композиций. Такие фармацевтические композиции можно вводить пациентам любым приемлемым способом, включая, но не ограничиваясь ими, пероральный, ректальный, вагинальный,назальный, ингаляционный, топический (включая чрескожный) и парентеральный способы введения. В соответствии с этим в одном из аспектов композиций данное изобретение направлено на фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель и те-4 012115 рапевтически эффективное количество кристаллического гидрохлорида соединения, описанного формулой I. Необязательно, такие фармацевтические композиции могут содержать другие терапевтические и/или формообразующие средства, если желательно. Фармацевтические композиции, предлагаемые изобретением, в типичном случае содержат терапевтически эффективное количество упомянутой кристаллической соли. Обычно такие фармацевтические композиции содержат примерно от 0,1 до 95 мас.% активного агента, включая варианты с содержанием активного агента примерно от 1 до 70% или примерно от 5 до 60 мас.%. В фармацевтических композициях, предлагаемых изобретением, можно использовать любые традиционные носители или наполнители. Выбор конкретного носителя или наполнителя либо комбинации носителей и наполнителей зависит от способа введения фармацевтической композиции пациенту, нуждающемуся в лечении, а также от типа медицинского состояния или статуса заболевания, подлежащего лечению. В этом отношении приготовление подходящей фармацевтической композиции для конкретного способа введения известно и доступно специалистам в области фармакологии. Кроме того, ингредиенты для таких композиций можно приобрести, например, в компании Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178. Дополнительные иллюстрации традиционных способов приготовления фармацевтических композиций описаны в источниках Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott WilliamsWhite, Baltimore, Maryland (2000) и H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,7th Edition, Lippincott WilliamsWhite, Baltimore, Maryland (1999). Типичные примеры материалов, которые можно использовать в качестве фармацевтически приемлемых наполнителей, включают, но не ограничиваясь ими, следующие вещества: (1) сахара, в частности лактозу, глюкозу и сахарозу, (2) крахмалы, в частности кукурузный и картофельный, (3) целлюлозу, в частности микрокристаллическую целлюлозу и ее производные, в частности карбоксиметилцеллюлозу натрия, этилцеллюлозу и ацетилцеллюлозу, (4) порошковый трагакант, (5) солод, (6) желатин, (7) тальк,(8) наполнители, в частности масло какао и воски для суппозиториев, (9) масла, в частности арахисовое,хлопковое, сафлоровое, кунжутное, оливковое, кукурузное и соевое, (10) гликоли, в частности пропиленгликоль, (11) высокомолекулярные спирты, в частности глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль,(12) эфиры, в частности этилолеат и этиллаурат, (13) агар, (14) буферные агенты, в частности гидроксид магния и гидроксид алюминия, (15) альгиновую кислоту, (16) апирогенную воду, (17) изотонический раствор, (18) раствор Рингера, (19) этиловый спирт, (20) фосфатные буферные растворы и (21) прочие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических композициях. Фармацевтические композиции, предлагаемые изобретением, в типичном варианте готовят путем тщательного и тесного перемешивания или купажирования соединения, предлагаемого изобретением, с фармацевтически приемлемым наполнителем и одним или более дополнительных ингредиентов по выбору. Если необходимо или желательно, полученную в результате перемешивания компонентов однородную смесь формуют или вводят в таблетки, капсулы, пилюли и т.п., используя для этого общепринятые процедуры и оборудование. Фармацевтические композиции, предлагаемые изобретением, преимущественно выпускают в виде упаковок стандартной лекарственной формы. Термин "стандартная лекарственная форма" обозначает физически дискретный элемент, пригодный для введения дозы лекарства пациенту, то есть каждый элемент такой лекарственной формы содержит заранее определенное количество активного агента, выбранное с таким расчетом, чтобы вызвать у пациента желательный лечебный эффект, самостоятельно или в комбинации с одним и более дополнительных элементов. Например, такими стандартными лекарственными формами могут быть капсулы, таблетки, пилюли и т.п. В предпочтительном варианте реализации изобретения упомянутые фармацевтические композиции пригодны для перорального введения. Фармацевтические композиции, пригодные для перорального введения, могут выпускаться в виде капсул, таблеток, пилюль, лепешек, крахмальных облаток, драже, порошков, гранул, либо в виде растворов или суспензий в водной или неводной жидкости, либо в виде жидких эмульсий типа масло-в-воде или вода-в-масле, либо в виде эликсиров или сиропов и т.п., причем каждая из этих форм содержит в качестве активного ингредиента заранее определенное количество соединения, предлагаемого данным изобретением. В виде твердых лекарственных форм для перорального введения (то есть капсул, таблеток, пилюль и т.п.) фармацевтические композиции, предлагаемые изобретением, как правило, содержат в качестве активного ингредиента упомянутое соединение в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемых носителей, например цитратом натрия или дикальцийфосфатом. По выбору или в альтернативных вариантах такие твердые дозированные формы могут также содержать: (1) присадки или заполнители, в частности крахмалы, микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, сахарозу, глюкозу, маннит и/или кремниевую кислоту, (2) связующие вещества, в частности карбоксиметилцеллюлозу, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахарозу и/или гуммиарабик, (3) смачивающие средства, в частности глицерин, (4) разрушающиеся агенты, в частности агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновую кислоту, некоторые силикаты и/или карбонат натрия, (5) агенты, замедляющие растворение, в частности парафин, (6) ускорителя всасывания, в частности четвертичные соединения аммония, (7) поверхностно-активные вещества, в частности цетиловый спирт и/или глицеролмоностеа-5 012115 рат, (8) абсорбенты, в частности каолин и/или бентонитовую глину, (9) смазывающие вещества, в частности тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и/или их смеси, (10) красители и (11) буферные агенты. В составе фармацевтических композиций, предлагаемых изобретением, могут также присутствовать разделительные средства, смачивающие средства, средства для покрытия, вкусовые и ароматизирующие добавки, консерванты и антиоксиданты. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, в частности аскорбиновую кислоту, цистеин гидрохлорид, бисульфат натрия, метабисульфат натрия, сульфит натрия и т.п., (2) маслорастворимые антиоксиданты, в частности аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и т.п., а также (3) средства, образующие хелаты металлов, в частности лимонную кислоту, этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA),сорбит, винную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Средства для покрытия таблеток, капсул, пилюль и т.п. включают вещества, используемые для энтеросолюбильных (растворимых в кишечнике) покрытий, в частности ацетатфталат целлюлозы (CAP), поливинилацетатфталат (PVAP), гидроксипропилфталат метилцеллюлозы, сополимеры метакриловой кислоты и эфиров метакриловой кислоты, триметилловый ацетат целлюлозы (CAT), карбоксиметилэтилцеллюлозу (CMEC), сукцинат уксуснокислой гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMCAS) и т.п. По желанию, фармацевтические композиции, предлагаемые данным изобретением, могут составляться таким образом, чтобы обеспечить замедленное или регулируемое высвобождение активного ингредиента, для чего в них используют, например, гидрокисипропилметилцеллюлозу в разных пропорциях, другие полимерные матрицы, липосомы и/или микросферы. Кроме того, фармацевтические композиции, предлагаемые данным изобретением, могут необязательно содержать опалесцирующие (контрастные) компоненты и составляться таким образом, чтобы обеспечить высвобождение активного ингредиента, исключительно или предпочтительно, в определенном отделе желудочно-кишечного тракта, причем, по желанию пользователя, замедленным образом. Примеры встраиваемых композиций, которые можно эффективно использовать, включают полимерные вещества и воски. Можно также использовать активный ингредиент в микроинкапсулированной форме и, если это уместно, добавлять в такие микрокапсулы один или более упомянутых наполнителей. Пригодные жидкие лекарственные формы для перорального введения включают в качестве иллюстрации фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Такие жидкие лекарственные формы, как правило, включают активный ингредиент и инертный разбавитель, которым может быть, в частности, вода или другие растворители, солюбилизаторы и эмульгаторы, в частности этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (особенно хлопковое, арахисовое,кукурузное, из зародышей злаков, оливковое, касторовое и кунжутное), глицерин, тетрагидрофулировый спирт, полиэтиленгликоли, эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси. В дополнение к активному ингредиенту, суспензии могут содержать суспендирующие агенты, в частности этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленовые эфиры сорбита и сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар, трагакант и их смеси. В альтернативном варианте фармацевтические композиции, предлагаемые изобретением, предназначены для введения в организм посредством ингаляции. Пригодные для ингаляционного введения фармацевтические композиции, как правило, существуют в виде аэрозолей или порошков. Такие композиции обычно вводят при помощи хорошо известных приспособлений, в частности ингаляторов с мерной дозой, сухих порошковых ингаляторов, небулайзеров или аналогичных устройств доставки лекарств. При ингаляционном введении из контейнера, находящегося под давлением, предлагаемые изобретением фармацевтические композиции, как правило, включают активный ингредиент и подходящий пропеллент, в частности дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, углекислый газ или другие подходящие газы. Помимо упомянутого, фармацевтические композиции могут существовать в форме капсул или картриджей (изготовленных, например, из желатина) и содержащих предлагаемое изобретением соединение в комбинации с порошком, пригодным для использования в качестве носителя в порошковом ингаляторе. Подходящие порошковые основы включают в качестве примера лактозу или крахмал. Соединения, предлагаемые изобретением, можно также вводить трансдермально, используя известные системы трансдермальной доставки и подходящие наполнители. Например, к соединению, предлагаемому изобретением, можно примешивать агенты, усиливающие проникновение, в частности пропиленгликоль, полиэтиленгликольмонолаурат, азациклоалкан-2-оны и т.п., включая полученную смесь в пластырь или другую систему доставки. В таких трансдермальных композициях, по желанию, можно использовать добавочные наполнители, включая желирующие агенты, эмульгаторы и буферы. Приведенные ниже примеры рецептур иллюстрируют типичные фармацевтические композиции,предлагаемые данным изобретением. Пример состава А. Твердые желатиновые капсулы для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают, после чего загружают в твердую желатиновую капсулу (260 мг композиции на 1 капсулу). Пример состава В. Твердые желатиновые капсулы для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают, после чего пропускают через сито 45(США) и загружают в твердую желатиновую капсулу (200 мг композиции на 1 капсулу). Пример состава С. Капсулы для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают, после чего загружают в желатиновую капсулу (310 мг композиции на 1 капсулу). Пример состава D. Таблетки для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито 45 (США) и тщательно перемешивают. Образовавшийся порошок смешивают с раствором поливинилпирролидона, а затем эту смесь пропускают через сито 14 (США). Полученные таким образом гранулы высушивают при 50-60C и пропускают через сито 18 (США) . Затем к гранулам добавляют карбоксиметилкрахмал натрия,стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито 60 (США). После перемешивания всех компонентов смесь формуют прессованием в таблетировочной машине, получая таблетки массой по 100 мг. Пример состава E. Таблетки для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают, после чего формуют прессованием в таблетки (440 мг композиции на 1 таблетку).-7 012115 Пример состава F. Таблетки с одной риской для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают и формуют прессованием в таблетки с одной риской (215 мг композиции на 1 таблетку). Пример состава G. Суспензию для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты перемешивают, чтобы образовалась суспензия, содержащая 10 мг активного ингредиента на 10 мл суспензии. Пример состава H. Сухой порошок для ингаляционного введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: активный ингредиент тонко измельчают, после чего смешивают с лактозой. Затем полученную порошковую смесь загружают в желатиновый картридж для ингаляции. Содержимое картриджа вводят в дыхательные пути при помощи порошкового ингалятора. Пример состава I. Сухой порошок для ингаляционного введения мерным дозовым ингалятором изготавливают следующим образом: Типовая процедура: суспензию, содержащую 5 мас.% соли, предлагаемой изобретением, и 0,1 мас.% лецитина, готовят, диспергируя 10 г активного соединения в виде тонкоизмельченных частиц со средним размером менее 10 мкм в растворе, образовавшемся при растворении 0,2 г лецитина в деминерализованной воде. Полученную суспензию высушивают распылением, а полученный материал тонко измельчают,получая частицы со средним диаметром менее 1,5 мкм. Эти частицы загружают в картриджи, создавая в них повышенное давление 1,1,1, 2-тетрафторэтаном. Пример состава J. Инъекционный лекарственный состав изготавливают следующим образом. Типовая процедура: упомянутые ингредиенты перемешивают и доводят рН смеси до 40,5 при помощи 0,5 н. HCl или 0,5 н. NaOH. Пример состава K. Капсулы для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают, после чего загружают в желатиновую капсулу (размера 1, белую, непрозрачную) (264 мг композиции на 1 капсулу). Пример состава L. Капсулы для перорального введения изготавливают следующим образом. Типовая процедура: ингредиенты тщательно перемешивают, после чего загружают в желатиновую капсулу (размера 1, белую, непрозрачную) (148 мг композиции на 1 капсулу). Применение Соединение, описанное формулой I, (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино) пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламид 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, представляет собой агонист рецепторов 5-HT4, в связи с чем можно ожидать, что кристаллические солевые формы соединения, описанного формулой I, будут полезны при лечении медицинских состояний, опосредованных рецепторами 5-HT4 или ассоциированных с активностью рецепторов 5-HT4, то есть таких медицинских состояний, которые улучшаются при лечении агонистом рецепторов 5-HT4. Такие медицинские состояния включают, но не ограничиваясь ими, синдром раздраженного кишечника (IBS),хронические запоры, функциональную диспепсию, задержанное освобождение желудка, болезнь желудочно-пищеводного рефлюкса (GERD), идиопатический парез желудка, диабетическую и идиопатическую гастропатию, послеоперационную непроходимость кишечника (илеус), псевдонепроходимость кишечника и задержку прохождения пищи, индуцированную лекарствами. В дополнение к этому, было высказано предположение, что некоторые соединения, обладающие свойствами агонистов рецепторов 5HT4, можно использовать при лечении расстройств центральной нервной системы, включая когнитивные расстройства, расстройства поведения, расстройства настроения и нарушения функционального контроля автономной нервной системы. Особенностью солевых форм, предлагаемых изобретением, является их способность усиливать перистальтическую подвижность желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), в связи с чем можно ожидать, что такие вещества будут полезными при лечении таких заболеваний и расстройств у млекопитающих, включая человека, которые обусловлены снижением подвижности ЖКТ. Такие расстройства подвижности ЖКТ включают, в качестве иллюстрации, хронические запоры, синдром раздраженного кишечника с преобладанием запоров (C-IBS), диабетический и идиопатический парез желудка, а также функциональную диспепсию. Следовательно, в одном из аспектов изобретение предлагает способ увеличения подвижности желудочно-кишечного тракта у млекопитающих, который заключается во введении млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель и кристаллическую соль, предлагаемую изобретением. При лечении расстройств, связанных со сниженной подвижностью ЖКТ, или других состояний,опосредованных рецепторами 5-HT4, солевые формы, предлагаемые изобретением, обычно вводят в организм пациента перорально в виде разовой суточной дозы или нескольких доз в день, хотя для введения таких лекарств могут быть использованы и другие фармацевтические формы. Количество активного агента, вводимое в разовой дозе, или его суммарное количество, вводимое за целый день, как правило,-9 012115 определяет врач, исходя из оценки таких важных обстоятельств, как заболевание (состояние), подлежащее лечению, выбранный способ введения, конкретное выводимое соединение и его относительная активность, возраст, масса тела и реакция на проводимое лечение конкретного пациента, тяжесть симптомов у пациента и т.п. Ожидается, что подходящие дозы для лечения состояний, сопровождающихся снижением перистальтической подвижности ЖКТ, или других расстройств, опосредованных рецепторами 5-HT4, варьируются в диапазоне приблизительно от 0,0007 до 20 мг/кг активного агента в сутки, включая вариант с диапазоном доз приблизительно от 0,0007 до 1 мг/кг активного агента в сутки. Для человека со средней массой 70 кг это означает введение приблизительно от 0,05 до 70 мг активного агента в сутки. В одном из аспектов изобретения предлагаемые солевые формы используются для лечения хронических запоров. При лечении хронических запоров предлагаемые изобретением солевые формы обычно вводят пероральным способом в разовой суточной дозе или в нескольких дозах в течение дня. Ожидается, что доза активного агента для лечения хронических запоров варьируется приблизительно от 0,05 до 70 мг в сутки. В другом аспекте изобретения предлагаемые солевые формы используются для лечения синдрома раздраженного кишечника. При лечении синдрома раздраженного кишечника с преобладанием хронических запоров предлагаемые изобретением солевые формы обычно вводят пероральным способом в разовой суточной дозе или в нескольких дозах в течение дня. Ожидается, что доза активного агента для лечения синдрома раздраженного кишечника с преобладанием хронических запоров варьируется приблизительно от 0,05 до 70 мг в сутки. Еще в одном аспекте изобретения предлагаемые солевые формы используются для лечения диабетических и идиопатических гастропатий. При лечении диабетических и идиопатических гастропатий предлагаемые изобретением солевые формы обычно вводят пероральным способом в разовой суточной дозе или в нескольких дозах в течение дня. Ожидается, что доза для лечения диабетических гастропатий варьируется в диапазоне приблизительно от 0,05 до 70 мг в сутки. Еще в одном аспекте изобретения предлагаемые солевые формы используются для лечения функциональной диспепсии. При лечении функциональной диспепсии предлагаемые изобретением солевые формы обычно вводят пероральным способом в разовой суточной дозе или в нескольких дозах в течение дня. Ожидается, что доза для лечения функциональной диспепсии варьируется в диапазоне приблизительно от 0,05 до 70 мг в сутки. Изобретение также предлагает способ лечения млекопитающих, пораженных заболеванием или состоянием, которое ассоциировано с активностью рецепторов 5-HT4, причем упомянутый способ заключается во введении млекопитающему терапевтически эффективного количества солевой формы, предлагаемой изобретением, или фармацевтической композиции, содержащей упомянутую солевую форму. Как упоминалось выше, предлагаемые данным изобретением солевые формы являются агонистами рецепторов 5-HT4. Следовательно, данное изобретение дополнительно предлагает способ агонистической стимуляции рецепторов 5-HT4 у млекопитающих, причем упомянутый способ заключается во введении млекопитающему солевой формы, предлагаемой изобретением. Такие свойства, а также полезность гидрохлоридов, предлагаемых изобретением, могут быть продемонстрированы при помощи различных анализов in vitro и in vivo, которые хорошо известны специалистам, компетентным в данной области знаний. Типичные анализы более подробно описаны в приведенных ниже примерах. Примеры Следующие синтетические и биологические примеры приведены для иллюстрации изобретения и ни в коем случае не должны быть истолкованы как ограничивающие изобретение. В приведенных ниже примерах используются следующие сокращения, которые имеют следующие значения, если специально не указано иное. Сокращения, не вошедшие в этот список, имеют общепринятое значение. Реактивы (включая вторичные амины) и растворители были закуплены у коммерческих поставщиков (Aldrich, Fluka, Sigma и др.) и использованы без дополнительной очистки. Все реакции проводили в атмосфере азота, если специально не указано иное. Протекание химических реакций в реакционных смесях отслеживали методами тонкослойной хроматографии (TCX), аналитической жидкостной высокоэффективной хроматографии (ан. ВЭЖХ) и масс-спектрометрии, подробное описание которых приведено ниже, и по отдельности в конкретных образцах реакций. Реакционные смеси готовили и обрабатывали специально для каждой реакции, как это описано в тексте, обычно их очищали экстракцией и другими методами очистки, в частности температурной и зависимой от растворителя кристаллизацией, а также осаждением. В дополнение к этому, реакционные смеси в плановом порядке очищали методом препаративной ВЭЖХ. Определение характеристик продуктов реакции регулярно проводили, пользуясь методами 1H-ЯМР и масс-спектрометрии. Для измерения ЯМР образцы растворяли в дейтерированном растворителе (CD3OD, CDCl3 или DMSO-d6) , a спектры 1H-ЯМР записывали на приборе Varian Gemini 2000(300 МГц) при стандартных условиях наблюдения. Масс-спектрометрическую идентификацию соединений проводили методом электрораспылительной ионизации (ESMS) на приборе Applied Biosystems (Фостер Сити, штат Калифорния) модели API 150 EX или Agilent (Пало-Альто, штат Калифорния) модели 1100LC/MSD. Содержание воды определяли титрованием по Карлу Фишеру, используя кулонометр MetrohmKarl Fischer модели 813 производства компании Brinkmann (Уэстбери, штат Нью-Йорк). Получение 1. трет-Бутиловый эфир (1S,3R,5R)-3-амино-8-азабицикло[3,2,1]октан-8-карбоновой кислоты. а. Получение 8-бензил-8-азабицикло[3,2,1]октан-3-она. Концентрированную соляную кислоту (30 мл) добавляли к неоднородному раствору 2,5-диметокситетрагидрофурана (82,2 г, 0,622 моль) в воде (170 мл) при перемешивании. В отдельной колбе, охлажденной до 0C (на ледяной бане), концентрированную соляную кислоту (92 мл) медленно добавляли к раствору бензиламина (100 г, 0,933 моль) в воде (350 мл). Раствор 2,5-диметокситетрагидрофурана перемешивали примерно в течение 20 мин, разбавляли водой (250 мл), затем добавляли раствор бензиламина с последующим добавлением раствора 1,3-ацетондикарбоновой кислоты (100 г, 0,684 моль) в воде (400 мл),а затем - раствора гидрофосфата натрия (44 г, 0,31 моль) в воде (200 мл). Показатель рН смеси устанавливали в пределах от 1 до 4,5 при помощи 40% NaOH. Полученный в результате мутный бледножелтый раствор перемешивали в течение ночи. Затем раствор подкисляли, снижая рН от 7,5 до 3 при помощи 50% соляной кислоты, нагретой до 85C, и перемешивали еще 2 ч. Раствор охлаждали до комнатной температуры, подщелачивали до рН 12 при помощи 40% NaOH и экстрагировали дихлорметаном(3500 мл). Объединенные органические слои промывали концентрированным солевым раствором, высушивали (MgSO4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении для получения неочищенного промежуточного продукта в виде вязкого коричневого масла. К раствору неочищенного промежуточного продукта в метаноле (1000 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (74,6 г, 0,342 моль) при 0 С. После этого раствору давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали его в течение ночи. Метанол удаляли при пониженном давлении, а полученное в результате масло растворяли в дихлорметане (1000 мл). Промежуточный продукт экстрагировали в 1MH3PO4 (1000 мл) и промывали дихлорметаном (3250 мл). Водный слой подщелачивали до рН 12 при помощи водного раствора NaOH и экстрагировали дихлорметаном (3500 мл). Объединенные органические слои высушивали (MgSO4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении для получения основного промежуточного продукта в виде вязкого светло-коричневого масла. 1H-ЯМР (CDCl3)b. Получение трет-бутилового эфира 3-оксо-8-азабицикло[3,2,1]октан-8-карбоновой кислоты. К раствору 8-бензил-8-азабицикло[3,2,1]октан-3-она (75 г, 0,348 моль) в EtOAc (300 мл) добавляли раствор ди-трет-бутилдикарбоната (83,6 г, 0,383 моль, 1,1 экв.) в EtOAc (300 мл). Полученный раствор и промывную жидкость (100 мл EtOAc) добавляли в 1 л аппарат Парра для гидрогенизации, содержащий 23 г гидроксида палладия (20 мас.% палладия, сухая масса, на угле, увлажнение водой 50%, например катализатор Перлмана) в потоке азота. Затем реакционный сосуд дегазировали (пятикратная смена вакуума и N2) и нагнетали в него газообразный H2 до давления 60 фунт/кв.дюйм. Реакционный раствор пе- 11012115 ремешивали в течение 2 дней и повторно нагнетали в него H2 для поддержания давления на уровне 60 фунт/кв.дюйм вплоть до завершения реакции, которое определяли методом тонкослойной хроматографии на силикагеле. Затем черный раствор фильтровали через слой целита и концентрировали при пониженном давлении, чтобы получить названный промежуточный продукт с количественным выходом в виде вязкого масла от желтого до оранжевого цвета. Этот продукт был использован на следующей стадии без дополнительной обработки. 1H ЯМР (CDCl3)(м.д.) 4,5 (ушир., 2 Н, CH-NBoc), 2,7 (ушир., 2 Н, CH2CO),2,4-2,3 (дд, 2 Н, CH2CH2), 2,1 (ушир.м, 2 Н, CH2CO), 1,7-1,6 (дд, 2 Н, CH2CH2), 1,5 (с, 9 Н, (CH3)3COCON).c. Получение трет-бутилового эфира (1S,3R,5R)-3-амино-8-азабицикло[3,2,1]октан-8-карбоновой кислоты. К раствору продукта предыдущей стадии (75,4 г, 0,335 моль) в метаноле (1 л) добавляли формиат аммония (422,5 г, 6,7 моль), воду (115 мл) и 65 г палладия на активированном угле (10% на сухой основе,50% увлажнение водой, тип Degussa E101NE/W) в потоке N2 при перемешивании механической мешалкой. 2 раза, через 24 и 48 ч, добавляли дополнительные порции формиата аммония (132 г, 2,1 моль). После того как протекание реакции заканчивалось, что отслеживалось при помощи ан. ВЭЖХ, к реакционной смеси добавляли целит (500 г), а образовавшуюся густую суспензию фильтровали, собирая твердую фракцию и промывая ее метанолом (500 мл). Фильтраты объединяли и концентрировали при пониженном давлении до полного удаления метанола. Полученный в результате мутный двухфазный раствор разбавляли 1M фосфорной кислотой до конечного объема приблизительно от 1,5 до 2,0 л при рН 2 и промывали дихлорметаном (3700 мл). Водный слой подщелачивали до рН 12 при помощи 40% водного раствора NaOH и экстрагировали дихлорметаном (3700 мл). Объединенные органические слои высушивали при помощи MgSO4, фильтровали и концентрировали ротационным выпариванием, а затем высоким вакуумом с получением 52 г (70%) основного промежуточного продукта, обычно N-Boc-эндо-3-аминотропана, в виде белого или бледно-желтого твердого вещества. Соотношение между эндо- и экзо-изомерами в продукте составляло более 99, по данным анализа 1H ЯМР (чистота 96%, по данным аналитической ВЭЖХ). 1H ЯМР (CDCl3)(м.д.) 4,2-4,0 (ушир.д, 2 Н, CHNBoc), 3,25 (т, 1H, CHNH2), 2,1-2,05 (м,4H), 1,9 (м, 2H), 1,4 (с, 9 Н, (CH3)3OCON), 1,2-1,1 (ушир., 2H). (m/z): [М+Н]+ рассчитано для C12H22N2O2 227,18; найдено 227,2. Аналитическая ВЭЖХ (изократический метод от 2:98 (А:В) до 90:10 (А:В) в течение 5 мин): время удерживания=2,14 мин. Получение 2. 1-Изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновая кислота. Сначала ацетон (228,2 мл, 3,11 моль) добавляли к перемешиваемой суспензии 2-аминофенилметанола (255,2 г, 2,07 моль) и уксусной кислоты (3,56 мл, 62 ммоль) в воде (2 л) при комнатной температуре. Через 4 ч суспензию охлаждали до 0C и перемешивали еще 2,5 ч, после чего фильтровали. Твердое вещество собирали, промывали водой, после чего влажное твердое вещество охлаждали и высушивали лиофилизацией для получения 2,2,-диметил-1,4-дигидро-2 Н-бензо[1,3]оксазина (332,2 г, 98%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. 1H ЯМР (CDCl3; 300 МГц): 1,48 (с, 6 Н, C(CH3)2), 4,00 (ушир.с,1H, NH), 4,86 (с, 2 Н, CH2), 6,66 (д, 1H, ArH), 6,81 (т, 1H, ArH), 6,96 (д, 1H, ArH), 7,10 (т, 1H, ArH). Раствор 2,2,-диметил-1,4-дигидро-2 Н-бензо[1,3]оксазина (125 г, 0,77 моль) в ТГФ (1 л) фильтровали через сцинтилляционную воронку, а затем добавляли по каплям через капельную воронку в течение 2,5 ч к перемешиваемому раствору 1,0M LiAlH4 в ТГФ (800 мл) при 0C. Реакцию гасили медленным порционным добавлением Na2SO410H2O (110 г) в течение 1,5 ч при 0 С. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, фильтровали, а твердые соли тщательно промывали, используя ТГФ. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для получения 2-изопропиламинофенилметанола (120 г, 95%) в виде желтого масла. 1H ЯМР (CDCl3; 300 МГц): 1,24 (д, 6 Н, СН(СН 3)2), 3,15 (ушир.с, 1H, ОН), 3,61 (септ, 1H,СН(СН 3)2), 4,57 (с, 2 Н, CH2), 6,59 (т, 1H, ArH), 6,65 (д, 1H, ArH), 6,99 (д, 1H, ArH), 7, 15 (т, 1H, ArH). Двуокись марганца (85% 182,6 г, 1,79 моль) добавляли к перемешиваемому раствору 2-изопропиламинофенилметанола (118 г, 0,71 моль) в толуоле (800 мл), после чего реакционную смесь нагревали до 117 С в течение 4 ч. Затем реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры в течение ночи, после чего ее фильтровали через слой целита, который промывали толуолом. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для получения 2-изопропиламинобензальдегида (105 г, 90%) в виде оранжевого масла. 1H ЯМР (CDCl3; 300 МГц): 1,28 (д, 6 Н, СН(СН 3)2), 3,76 (септ., 1H, СН(СН 3)2), 6,65 (т,1H, ArH), 6,69 (д, 1H, ArH), 7,37 (д, 1H, ArH), 7,44 (т, 1H, ArH), 9,79 (с, 1H, CHO). 2,2-Диметил-[1,3]диоксан-4,6-дион, обычно называемый кислотой Мельдрума (166,9 г, 1,16 моль),добавляли к перемешиваемому раствору 2-изопропиламинобензальдегида (105 г, 0,64 моль), уксусной кислоты (73,6 мл, 1,29 моль) и этилендиамина (43,0 мл, 0,64 моль) в метаноле (1 л) при 0C. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0C, а затем охлаждали до комнатной температуры в течение ночи. Полученную суспензию фильтровали, а твердое вещество промывали метанолом и собирали для получения промежуточного продукта, 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты(146 г, 98%), в виде твердого вещества не совсем белого цвета. 1H ЯМР (CDCl3; 300 МГц): 1,72 (д, 6 Н,СН(СН 3)2), 5,50 (ушир.с, 1H, CH(CH3)2), 7,44 (т, 1H, ArH), 7,75-7,77 (м, 2 Н, ArH), 7,82 (д, 1H, ArH), 8,39- 12012115 а. Получение трет-бутилового эфира (1S,3R,5R)-3-[1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбонил)амино]-8-азабицикло[3,2,1]октан-8-карбоновой кислоты. В колбе емкостью 3 л 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновую кислоту (112,4 г,0,486 моль, 1,1 экв.) суспендировали в толуоле (1 л). Смесь нагревали до 85 С и по каплям добавляли к ней тионилхлорид (86,74 г, 0,729 моль) в течение 70 мин. Смесь нагревали до 95 С в течение 1,5 ч при перемешивании, а затем давали ей остыть до комнатной температуры. В отдельной 12-литровой колбе трет-бутиловый эфир (1S,3R,5R)-3-амино-8-азабицикло[3,2,1]октан 8-карбоновой кислоты (100,0 г, 0,442 моль, 1 экв.) суспендировали в толуоле (1 л) и добавляли 3 М NaOH(4 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, а затем охлаждали примерно до 5C. Раствор ангидрида кислоты добавляли медленно при постоянном перемешивании в течение 40 мин,поддерживая внутреннюю температуру смеси ниже 10C. После этого смесь перемешивали еще 30 мин при 3-5C и давали ей расслоиться в течение ночи. Слой толуола (2,5 л) собирали, концентрировали примерно до половины объема (1,2 л) роторным выпариванием и непосредственно использовали на следующей стадии.b. Получение (1S,3R,5R)-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты. К раствору толуола, приготовленному на предыдущей стадии (1,2 л), добавляли трифторуксусную кислоту (200 мл) в течение 20 мин при 20C при помешивании. Смесь продолжали перемешивать 2 ч при 20 С. Затем к смеси добавляли воду (1,55 л) и продолжали перемешивание 30 мин при 20C. После 30 мин отстаивания смесь разделялась на три слоя. Нижний слой (350 мл), вязкое коричневое масло, содержал неочищенный промежуточный продукт. В 12-литровую колбу с MTBE (2,8 л) добавляли неочищенное коричневое масло в течение 1 ч при температуре 1-2C и при перемешивании компонентов. Полученную суспензию продолжали перемешивать еще 1 ч при той же температуре, а затем фильтровали. Фильтрат промывали с помощью MTBE(2300 мл) и высушивали в вакууме при комнатной температуре в течение 4 дней для получения трифторуксусной соли основного промежуточного продукта (163,3 г) в виде бледно-желтого порошка.c. Получение N-метил-N-[(S)-2-оксиран-2-илметил]метансульфонамида. В 12-литровую колбу с водой (1 л) добавляли NaOH (50% водный раствор, 146,81 г, 1,835 моль). Мензурку, из которой наливали NaOH, ополаскивали водой (2500 мл) и смывы добавляли в ту же колбу. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, а затем охлаждали примерно до 8 С. Затем в течение 5 мин добавляли раствор (N-метил)метансульфонамида (200,2 г, 1,835 моль) в воде(500 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при 4 С, после чего добавляли к ней (S)-2-хлорметилоксиран (339,6 г, 3,67 моль). Эту смесь продолжали перемешивать 20 ч при 3-4 С. Затем к смеси добавляли дихлорметан (2 л) и перемешивали еще 30 мин при 5-10C. После перемешивания смеси давали отстояться в течение 10 мин для расслаивания и собирали нужную фракцию. Органический слой (2,5 л) возвращали в 12-литровую колбу и промывали 1M H3PO4 (800 мл) и насыщенным солевым раствором (800 мл). Дихлорметан удаляли роторным выпариванием. К неочищенному продукту добавляли толуол (400 мл) и проводили его роторное выпаривание. После трех дополнительных циклов обработки толуолом получали основной промежуточный продукт (228,2 г), который использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.d. Синтез (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1] окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1, 2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты. В колбе емкостью 3 л трифторацетат (1S,3R,5R)-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил 2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (105,0 г, 0,232 мл) суспендировали в абсолютном этаноле (400 мл). К этой суспензии при комнатной температуре добавляли NaOH (50% водный раствор,0,243 моль, 1,05 экв.), разбавленный в абсолютном этаноле (100 мл). Мензурку, из которой наливалиNaOH, ополаскивали этанолом (250 мл), а смывы добавляли в реакционную смесь. После 30 мин перемешивания добавляли раствор N-метил-N-[(S)-2-оксиран-2-илметил]метансульфонамида (62,0 г, 1,5 экв.) в абсолютном этаноле (100 мл). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры и добавляли в нее затравочные кристаллы основного соединения. После примерно 5-минутного перемешивания образовывалось твердое вещество белого цвета. Смесь продолжали перемешивать 2 ч, охладив ее до 3-5 С. Белое твердое вещество фильтровали и промывали холодным абсолютным этанолом (350 мл). Твердое вещество высушивали в вакууме при 30C в течение 60 ч, чтобы получить целевое соединение (93,8 г, содержание воды по методу Карла Фишера 2,03%). 1H ЯМР(CDCl3)м.д. 10,52 (д, 1H), 8,83 (с, 1H), 7,75 (д, 2H), 7,64-7,60 (м, 2H), 7,28-7,26 (м, 1H), 4,33-4,26 (м,2H), 3,78-3,75 (м, 1H), 3,27-3,20 (м, 4H), 3,01 (с, 3H), 2,88 (с, 3H), 2,58-2,53 (м, 1H), 2,30-1,81 (м, 11H),1,68 (д, 6H). Затравочные кристаллы получали из ранее полученного целевого соединения, приготовленного способом, описанным в этом примере, но в небольшом масштабе, когда кристаллизация наступала спонтанно. Пример 2. Синтез кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3- 13012115 карбоновой кислоты. В 1-литровой колбе 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновую кислоту (1S,3R,5R)-8-[(R)2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламид (34,7 г, 0,069 моль) суспендировали в абсолютном этаноле (210 мл). Затем добавляли концентрированную соляную кислоту(1,1 экв.) при комнатной температуре и непрерывном перемешивании суспензии. Смесь продолжали перемешивать при кипячении с обратным холодильником в течение 30 мин, после чего ее охлаждали до комнатной температуры и перемешивали еще 2 ч. Твердое вещество высушивали в вакууме при 30C в течение 48 ч, чтобы получить целевое соединение (34,5 г, выход 93,7%, содержание воды по методу Карла Фишера 0,13%).- 14012115 Пример 3. Синтез кристаллического гидрата (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты. Гидрохлорид (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1] окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (139 мг, 0,28 моль) растворяли в стерильной воде для инъекций (2 мл). Через несколько часов раствор превращался в мутную суспензию. Эту суспензию перемешивали и давали ей отстояться в течение ночи при комнатной температуре, что приводило к выпадению белого осадка. Твердое вещество отделяли от жидкой части фильтрованием и высушивали его в течение 2 мин при обычных условиях окружающей среды (относительная влажность приблизительно 40-50%) для получения целевого соединения (130 мг, выход 91%). Примеры 4-9. Свойства солевых форм, предлагаемых изобретением. Образцы кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (соединения, описанного формулой I), приготовленные в соответствии с примером 2, и кристаллический гидрат гидрохлорида соединения, описанного формулой I, приготовленный в соответствии с примером 3, анализировали методами порошковой рентгенограммы (PXRD), дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), термогравиметрического анализа (TGA), инфракрасной спектроскопии(IR) и элементного анализа. Пример 4. Порошковая рентгенограмма. Порошковые рентгенограммы получали при помощи рентгеновского дифрактометра Thermo ARL модели X'TRA (Thermo ARL SA, Швейцария), используя облучение Cu K с длиной волны 1,542(45 кВ,40 мА) и твердотельный детектор Si(Li). Обычно анализ проводили с частотой сканирования 2 в минуту и размером шага 0,03 на точку в диапазоне от 2 до 35 парного угла сближения меридианов. Образцы,или полученные в виде тонкого порошка, или измельченные в тонкий порошок, осторожно упаковывали в специально изготовленный вкладыш небольшого объема, который был сконструирован таким образом,чтобы точно соответствовать загрузочной чашечке для образцов в верхней части прибора. Калибровку инструмента в пределах 0,02 парного угла сближения меридианов верифицировали еженедельно путем сравнения со стандартом металлического кремния. Типичные рентгенограммы PXRD, полученные при исследовании образцов кристаллического гидрохлорида и гидрата гидрохлорида, предлагаемых изобретением, показаны на фиг. 1 и 4, соответственно. Пример 5. Термический анализ. Анализ методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) проводили, используя модульные приборы ТА модели Q-100. Сбор и анализ данных проводили с использованием пакета прикладных программ ТА Instruments Thermal Advantage for Q Series. Образец в количестве приблизительно 1-10 мг точно отвешивали в алюминиевый лоток с крышкой. Оценку образца проводили при помощи линейной нагревающей платформы с приростом температуры 10 С/мин обычно в диапазоне от 5 до 265 С. Типичные кривые DSC для образцов кристаллического гидрохлорида и гидрата гидрохлорида соединения, описанного формулой I, показаны на фиг. 2 и 5, соответственно. Термогравиметрический анализ (TGA) проводили, используя модульные инструменты ТА моделиQ-500. Сбор и анализ данных проводили с использованием пакета программ ТА Instruments ThermalAdvantage for Q Series. Образцы массой примерно 1-5 мг помещали в алюминиевый лоток на платиновой опоре и сканировали при температуре от окружающей до 300 С с линейной скоростью нагревания 10 С/мин. Во время использования компенсационную и топочную камеры продували азотом. Типичные кривые TGA для образцов кристаллического гидрохлорида и гидрата гидрохлорида соединения, описанного формулой I, также показаны на фиг. 2 и 5, соответственно. Кривая DSC на фиг. 2 демонстрирует, что гидрохлорид, предлагаемый данным изобретением, обладает блестящей термостабильностью с максимумом эндотермического теплового потока в диапазоне примерно от 230 до 260 С, а также без существенных термических явлений при температурах ниже 225 С. Сравнение кривых DSC и TGA указывает на то, что гидрохлорид, предлагаемый данным изобретением, подвержен одновременному плавлению и распаду при температуре выше 230 С. Кривая DSC на фиг. 5 для гидратной формы проявляет существенный пик эндотермического теплового потока, идентифицированный при плавлении кристаллов в диапазоне температур примерно от 225 до 250C, а также широкие или слабые эндотермы при менее высоких температурах. Сравнение кривыхDSC и TGA свидетельствует о том, что при температуре плавления распад гидратной кристаллической формы незначителен. Пример 6. Оценка динамического влагопоглощения. Оценку динамического влагопоглощения (DMS) проводили при 25C, используя атмосферные микровесы VTI системы SGA-100 (VTI Corp., г.Хайалиа, штат Флорида 33016). В этом анализе использовали образцы размером приблизительно 5-10 мг, устанавливая начальный показатель на уровне влажности окружающей среды. Типичный анализ DMS состоял из трех этапов сканирования: от уровня окружающей среды до относительной влажности (RH) 2%, от RH 2% до RH 90%, от RH 90% до RH 5% с пошаго- 15012115 вым приростом RH при сканировании 5%. Массу образца измеряли каждые 2 мин, а величину RH изменяли на один шаг (5% RH), если измеряемая масса оставалась стабильной (отклонение в пределах 0,02%) в пяти последовательных точках временного контроля. Типичные кривые DMS для образцов кристаллического гидрохлорида и кристаллического гидрата гидрохлорида соединения, описанного формулой I, показаны на фиг. 3 и 6, соответственно. Гидрохлорид демонстрирует обратимый профиль сорбции/десорбции с изменением массы менее 0,2% во всем диапазоне RH от 2 до 90%. Гидратная форма также обладает обратимым профилем сорбции/десорбции, причем при высушивании образца от RH окружающей среды до RH 2% потеря массы образца составляла примерно 2,3%, а при последующем повышении RH до 40% начальная масса образца восстанавливалась. При изменении RH в диапазоне от 40 до 75% прибавка массы образца составляла менее 0,25%. Пример 7. Инфракрасный анализ. Спектр инфракрасного (IR) поглощения определяли в диапазоне частот от 4000 до 675 см-1 при помощи спектрометра Avatar 360 FT-IR, оснащенного держателем образцов с затухающим общим отражением (ATR) марки Nicolet. Типичный спектр IR поглощения при анализе образца гидрохлорида, предлагаемого изобретением, демонстрировал выраженные полосы поглощения при длине волны 7581, 7831,7951, 8021, 9491, 9811, 11491, 11581, 12171, 13321, 13771, 14531, 14671, 14871, 15251,1566+1, 15751, 16151, 16721 и 31971 см-1. Пример 8. Оценка стабильности в твердом состоянии. Образцы гидрохлорида, предлагаемого изобретением, хранили в многочисленных открытых стеклянных флаконах при температуре 40C и RH 75%. С определенными интервалами содержимое одного из флаконов извлекали и анализировали на химическую чистоту методами DSC, TGA, PXRD и ВЭЖХ. Через 24 недели хранения продукта ни на термограммах DSC или TGA, ни на рисунках PXRD не было выявлено никаких изменений. Химическая чистота образца при длительном хранении составляла 99,6%. Пример 9. Определение противоионного молярного соотношения. Противоионное молярное соотношение между соляной кислотой (НА) и (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламидом 1-изопропил-2-оксо 1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (соединение, описанное формулой I) было рассчитано по следующей формуле: противоионное соотношение=(WHA/MWHA)/(WI/MWI) где WHA - это массовый процент HCl в образце, MWHA - это молекулярная масса HCl, MWI - это молекулярная масса соединения, описанного формулой I (504,6 атомных единиц массы), и WI - это массовый процент соединения, описанного формулой I, в образце, который, в свою очередь, рассчитывали по формулеWI=100-WHX-WH2O-WRS где WH2O - это массовый процент содержания воды, WRS - это массовый процент остаточного растворителя при том допущении, что соединение, описанное формулой I, не имеет примесей. Расчетное молярное соотношение между соляной кислотой и соединением I в образце кристаллического гидрохлорида, предлагаемого изобретением, составило 0,94:1 и было основано на массовом проценте HCl (WHA) 6,3%, а также величинах WH2O=0,26% и WRS=0,47%. Содержание HCl определяли титрованием со стандартным раствором азотнокислого серебра, содержание воды (WH2O) определяли колориметрическим титрованием по Карлу Фишеру, а остаточное содержание растворителя (WRS) определяли методом газовой хроматографии. Сравнительный пример 1. Синтез цитрата (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты.(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-Гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-ил амид 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (0,1 г, 0,2 ммоль) суспендировали в этаноле (1 мл). К этой суспензии добавляли 1M раствор лимонной кислоты в этаноле (0,072 мл,0,072 ммоль, 0,33 экв.). Смесь обрабатывали ультразвуком до появления прозрачности, накрывали крышкой и оставляли отстаиваться на ночь. Затем крышку снимали, а смеси давали испаряться в условиях окружающей среды до тех пор, пока в ней визуально не обнаруживались частицы твердого вещества. После этого смесь опять накрывали крышкой и давали ей отстояться 72 ч. Образовавшееся твердое вещество фильтровали и промывали холодным этанолом для получения целевого продукта в виде твердого вещества (74,3 мг). Сравнительный пример 2. Синтез солей (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты с различными кислотами. В соответствии с процедурой, описанной в сравнительном примере 1, были приготовлены следующие соли (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт 3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты с кислотами в твердой фор- 16012115 ме, с использованием указанных эквивалентов кислот (масса продукта приведена во вторых скобках): адипиновой кислоты (0,5 экв.) (48,5 мг), фосфорной кислоты (0,5 экв.) (86,6 мг), серной кислоты (0,5 экв.)(27,0 мг), винной кислоты (0,5 экв.) (66,3 мг), яблочной кислоты (0,5 экв.) (25,3 мг) и бромистоводородной кислоты (1 экв.) (62,9 мг). Сравнительный пример 3. Синтез метансульфоната (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин 3-карбоновой кислоты. К раствору (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1] окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (0,1 г, 0,2 ммоль) в 50% смеси ацетонитрил/вода (1 мл) добавляли 1M раствор метансульфокислоты в этаноле (0,2 мл, 0,2 ммоль,1 экв.). Затем смесь замораживали и лиофилизировали до сухости в течение ночи. Полученное твердое вещество растворяли в изопропаноле (1 мл) при осторожном нагревании и давали раствору остыть. Полученное твердое вещество собирали фильтрацией и промывали холодным изопропанолом для получения целевого продукта в виде твердого вещества (90 мг). Сравнительный пример 4. Синтез солей (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты с различными кислотами. В соответствии с процедурой, описанной в сравнительном примере 3, были приготовлены следующие соли (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт 3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты с кислотами в твердой форме,с использованием указанных эквивалентов кислот (вес продукта приведен во вторых скобках): фумаровой кислоты (1 экв.) (107,2 мг), бензойной кислоты (1 экв.) (105,2 мг) и (R)-миндальной кислоты (1 экв.)(96,1 мг). Сравнительный пример 5. Свойства соединений, описанных в сравнительных примерах 1-4. Кристаллические кислые соли соединения, описанного формулой I, которые приведены в сравнительных примерах 1-4, анализировали методами PXRD, DSC и TGA. Во всех случаях при анализе методом TGA наблюдалась потеря массы при температурах ниже 100C, что, наиболее вероятно, объясняется потерями растворителя. Температуры, при которых анализ по методу DSC выявлял эндотермический тепловой поток, за исключением низкотемпературных эффектов, связанных с потерями растворителя, а также подтверждение кристалличности методом PXRD приведены в таблице ниже, где стехиометрия указана количеством эквивалентов кислоты, использованных при изготовлении кислой соли. Сравнение солей Начало плавления и распада. Анализ 1. Анализ связывания радиоактивно-меченого лиганда с рецепторами человека 5-НТ 4(С). а. Приготовление мембран 5-HT4(С). Клетки линии HEK-293 (из эмбриональной почки человека), стабильно трансфицированные кДНК рецепторов человека 5-НТ 4(С) (Bmax 6,0 пмоль/мг протеина при определении с помощью аналитической методики мембранного связывания радиоактивно-меченого лиганда [3H]-GR113808), выращивали во флаконах Т-225 на среде Игла в модификации Дульбекко (DMEM), содержащей 4500 мг/л D-глюкозы и- 17012115 пиридоксина гидрохлорид (GIBCO-Invitrogen Corp., г.Карлсбад, штат Калифорния:по каталогу 11965) с добавками 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 10437),2 мМ L-глутамина и 100 ед. пенициллина-100 мкг стрептомицина/мл (GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 15140) в увлажненном инкубаторе при 37C в атмосфере с содержанием 5% CO2. Клетки выращивали при постоянном давлении отбора, добавляя к питательной среде 800 мкг/мл генетицина (GIBCOInvitrogen Corp.:по каталогу 10131). Клетки выращивали приблизительно до слияния на 60-80% (менее 35 пассажей субкультуры). За 20-22 ч до сбора материала клетки дважды промывали и подпитывали средой DMEM без сыворотки. Все стадии приготовления мембран проводили на льду. Монослой клеток осторожно поднимали легким механическим возбуждением и гомогенизировали при помощи пипетки объемом 25 мл. Клетки собирали центрифугированием на скорости 1000 об./мин (в течение 5 мин). Для приготовления мембран клеточный осадок ресуспендировали в охлажденной на льду 50 мМ 4(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоте (HEPES), рН 7,4 (буфер для приготовления мембран) (40 мл/общий выход клеток из 30-40 флаконов Т 225) и гомогенизировали при помощи политронного дезинтегратора (настройка 19,210 с) на льду. Полученные в результате этих манипуляций гомогенаты центрифугировали с ускорением 1200 g в течение 5 мин при 4C. Осадок выбрасывали, а надосадочную жидкость центрифугировали еще 20 мин с ускорением 40000 g. Осадок однократно промывали,ресуспендируя его в буфере для приготовления мембран и повторно центрифугируя 20 мин с ускорением 40000 g. Конечный осадок ресуспендировали в 50 мМ HEPES, рН 7,4 (аналитический буфер) (эквивалент 1 флакона Т 225/1 мл). Содержание протеина в мембранной суспензии определяли по методике Брэдфорда (Bradford, 1976). Мембраны хранили замороженными аликвотными партиями при -80 С.b. Анализ связывания радиоактивно-меченого лиганда. Анализ связывания радиоактивно-меченого лиганда проводили в аналитических планшетах из полипропилена с 96 глубокими лунками объемом 1,1 мл (Axygen) с общим объемом анализируемого образца 400 мкл, содержащего 2 мкг мембранного протеина в 50 мМ HEPES (рН 7,4) с добавкой 0,025% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Исследования насыщающего связывания для определения величинKd меченого лиганда проводили с использованием [3H]-GR113808 (Amersham Inc., Бакс, Великобритания:по каталогу TRK944, специфическая активность 82 Ки/ммоль) при 8-12 различных концентрациях в диапазоне от 0,001 до 5,0 нМ. Анализ смещения для определения величин pKi соединений проводили с[3H]-GR113808 при 0,15 нМ и с использованием 11 разных концентраций соединения в диапазоне от 10 пМ до 100 мкМ. Испытуемые соединения получали в виде 10 мМ маточных растворов в DMSO и разбавляли до 400 мкМ в 50 мМ HEPES (рН 7,4) при 25 С, с добавкой 0,1% BSA, после чего готовили серийные разведения (1:5) в том же самом буфере. Неспецифическое связывание определяли по присутствию 1 мкМ немеченогоGR113808. Анализируемый материал инкубировали 60 мин при комнатной температуре, после чего реакции связывания обрывали быстрым фильтрованием в 96-луночных фильтровальных планшетах GF/B из стекловолокна (Packard BioScience Co., г.Мериден, штат Коннектикут), предварительно замоченных в 0,3% полиэтиленимине. Фильтровальные планшеты 3 раза промывали фильтровальным буфером (охлажденной на льду 50 мМ HEPES с рН 7,4) для удаления несвязанной радиоактивности. Планшеты высушивали, в каждую лунку добавляли 35 мкл сцинтилляционной жидкости Microscint-20 (Packard BioScienceCo., г.Мериден, штат Коннектикут), а подсчет радиоактивности проводили в жидкостном сцинтилляционном счетчике Packard Topcount (Packard BioScience Co., г.Мериден, штат Коннектикут). Данные по связыванию анализировали статистическим методом нелинейной регрессии с использованием пакета прикладных программ GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., г.Сан-Диего, штат Калифорния) по модели трех параметров с конкуренцией за один сайт связывания. Показатель BOTTOM (минимум кривой) фиксировали по величине неспецифического связывания, которую определяли при наличии 1 мкМ GR113808. Величины Ki для испытуемых соединений рассчитывали с использованием программы Prism по величинам IC50, дающим оптимальное приближение, а величину Kd для радиоактивномеченого лиганда - по уравнению Cheng-Prusoff (Cheng and Prusoff, Biochemical Pharmacology, 1973, 22,3099-108): Ki=IC50/(1+[L]/Kd), где [L]=концентрация [3H]-GR113808. Результаты выражали в виде отрицательного десятичного логарифма величин Ki, т.е. pKi. Испытуемые соединения, демонстрирующие более высокие показатели pKi по результатам этого анализа, имели более высокое сродство связывания с рецепторами 5-HT4. Соединение, описанное формулой I, в этом анализе демонстрировало величину pKi более 7,5. Анализ 2. Анализ связывания радиоактивно-меченого лиганда с рецепторами человека 5-HT3A: определение избирательности по подтипам рецепторов. а. Приготовление мембран 5-НТ 3 А. Клетки линии HEK-293 (из эмбриональной почки человека), стабильно трансфицированные кДНК рецепторов человека 5-НТ 3 А, были получены от доктора Михаэля Бруэсса из Боннского университета,Германия (Bmax 9,0 пмоль/мг протеина при определении с помощью аналитической методики мембранного связывания радиоактивно-меченого лиганда [3H]-GR65630). Клетки выращивали во флаконах- 18012115 Т-225 или на клеточных фабриках на среде Игла в модификации Дульбекко (DMEM) (GIBCO-InvitrogenCorp., г.Карлсбад, штат Калифорния:по каталогу 11965) и 50% F12 Хэма (GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 117 65) с добавками 10% термически инактивированной фетальной бычьей сыворотки (FBS)(Hyclone, г.Логан, штат Юта:по каталогу SH30070.03), а также 50 ед. пенициллина и 50 мкг стрептомицина на миллилитр (GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 15140) в увлажненном инкубаторе с температурой 37 С и содержанием 5% CO2 в атмосфере. Клетки выращивали приблизительно до слияния на 70-80% (менее 35 пассажей субкультуры). Все стадии приготовления мембран проводили на льду. Для сбора клеток среду аспирировали, а клетки промывали фосфатным буферным солевым раствором Дульбекко без Ca2+ и Mg2+ (dPBS). Монослой клеток поднимали осторожным механическим возбуждением. Клетки собирали центрифугированием на скорости 1000 об./мин (5 мин). Последовательность стадий приготовления мембран в соответствии с протоколом описана выше для мембран, экспрессирующих рецепторы 5-НТ 4(с).b. Анализ связывания радиоактивно-меченого лиганда. Анализ связывания радиоактивно-меченого лиганда проводили в аналитических планшетах из полипропилена с 96 лунками при общем объеме анализируемого образца 200 мкл, содержащего 1,5-2 мкг мембранного протеина в 50 мМ HEPES (рН 7,4) с добавкой аналитического буфера 0,025% BSA. Исследования насыщающего связывания для определения величин Kd меченого лиганда проводили с использованием [3H]-GR65630 (PerkinElmer Life Sciences Inc., Бостон, штат Массачусетс:по каталогуNET1011, специфическая активность 85 Ки/ммоль) при 12 различных концентрациях в диапазоне от 0,005 до 20 нМ. Анализ смещения для определения величин pKi соединений проводили с [3H]-GR65630 при 0,50 нМ и с использованием 11 разных концентраций соединения в диапазоне от 10 пМ до 100 мкМ. Соединения получали в виде 10 мМ маточных растворов в DMSO (см. раздел 3.1), разбавляли до 400 мкМ в 50 мМ HEPES (рН 7,4) при 25 С с добавкой 0,1% BSA, после чего готовили серийные разведения (1:5) в том же самом буфере. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 10 мкМ немеченого MDL72222. Анализируемый материал инкубировали 60 мин при комнатной температуре, после чего реакции связывания обрывали быстрым фильтрованием в 96-луночных фильтровальных планшетахGF/B из стекловолокна (Packard BioScience Co., г.Мериден, штат Коннектикут), предварительно замоченных в 0,3% полиэтиленимине. Фильтровальные планшеты 3 раза промывали фильтровальным буфером (охлажденной на льду 50 мМ HEPES с рН 7,4) для удаления несвязанной радиоактивности. Планшеты высушивали, в каждую лунку добавляли 35 мкл сцинтилляционной жидкости Microscint-20 (PackardBioScience Co., г.Мериден, штат Коннектикут), а подсчет радиоактивности проводили в жидкостном сцинтилляционном счетчике Packard Topcount (Packard BioScience Co., г.Мериден, штат Коннектикут). Данные по связыванию анализировали статистическим методом нелинейной регрессии с использованием описанной выше процедуры по определению величин Ki. Показатель BOTTOM (минимум кривой) фиксировали по величине неспецифического связывания, которую определяли в присутствии 10 мкМMDL72222. Величину [L] в уравнении Cheng-Prusoff определяли по концентрации [3H]-GR65630. Избирательность для подтипа рецепторов 5-HT4 в отношении подтипа рецепторов 5-HT3 вычисляли как соотношение Ki (5-НТ 3 А)/Ki (5-HT4(C. Соединение, описанное формулой I, в этом анализе демонстрировало избирательность по подтипам рецепторов 5-НТ 4/5-НТ 3 более 1000. Анализ 3. Анализ по методике Flashplate для оценки накопления цАМФ целостными клеткамиHEK-293, экспрессирующими рецепторы человека 5-НТ 4(С). В этом анализе функциональную мощность испытуемого соединения определяли, измеряя количество циклического АМФ, который вырабатывался в то время, когда клетки HEK-293, экспрессирующие рецепторы 5-HT4, контактировали с разными концентрациями испытуемого соединения. а. Культура клеток. Клетки линии HEK-293 (из эмбриональной почки человека), стабильно трансфицированные клонированной кДНК рецепторов человека 5-НТ 4(С), готовили таким образом, чтобы они экспрессировали рецептор с двумя разными уровнями плотности: (1) с плотностью протеина приблизительно 0,5-0,6 пмоль/мг,определяемой в анализе по мембранному связыванию радиоактивно-меченого лиганда [3H]-GR113808, и(2) с плотностью протеина приблизительно 6,0 пмоль/мг. Клетки выращивали во флаконах T-225 на среде Игла в модификации Дульбекко (DMEM), содержащей 4500 мг/л D-глюкозы (GIBCO-Invitrogen Corp:по каталогу 11965) с добавками 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 10437), а также 100 ед. пенициллина и 100 мкг стрептомицина на миллилитр (GIBCOInvitrogen Corp.:по каталогу 15140) в увлажненном инкубаторе с температурой 37C и содержанием 5% CO2 в атмосфере. Клетки выращивали при постоянном давлении отбора за счет добавления в питательную среду генетицина (800 мкг/мл: GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 10131).b. Приготовление клеток. Клетки зыращивали приблизительно до слияния на 60-80%. За 20-22 ч до анализа клетки дважды промывали и подпитывали средой DMEM без сыворотки, содержащей 4,500 мг/л D-глюкозы (GIBCOInvitrogen Corp:по каталогу 11965). Для сбора клеток среду аспирировали и в каждый флакон Т-225 добавляли 10 мл Versene (GIBCO-Invitrogen Corp.:по каталогу 15040). Клетки инкубировали 5 мин при комнатной температуре, после чего удаляли из флаконов посредством механического возбуждения.- 19012115 Клеточную суспензию переносили в центрифужную пробирку, содержащую равный объем предварительно нагретого (37 С) dPBS, и центрифугировали 5 мин на скорости 1000 об./мин. Надосадочную жидкость сбрасывали, а клеточный осадок ресуспендировали в предварительно нагретом (37 С) стимулирующем буфере (10 мл-эквивалент на 2-3 флакона Т-225). Отмечали время и обозначали его как нулевую точку. Подсчет клеток проводили в счетчике Каултера (при количестве более 8 мкм выход клеток составлял 1-2107 на один флакон). Клетки ресуспендировали при концентрации 5105 на миллилитр в предварительно нагретом (37 С) стимулирующем буфере (содержащемся в наборе flashplate) и преинкубировали при 37 С в течение 10 мин. Содержание цАМФ определяли методом радиоиммуноанализа с использованием аналитической системы активации аденилилциклазы Flashplate с меткой 125I-цАМФ (SMP004B, PerkinElmer Life SciencesInc., Бостон, штат Массачусетс) в соответствии с инструкциями производителя. Клетки выращивали и препарировали, как это было описано выше. Конечная концентрация клеток в анализе составляла 25103 на одну лунку, а конечный объем анализируемого материала - 100 мкл. Испытуемые соединения получали в виде 10 мМ маточных растворов в DMSO, разбавляли до 400 мкМ в 50 мМHEPES (рН 7,4) при 25 С с добавкой 0,1% BSA, после чего готовили серийные разведения (1:5) в таком же буфере. Анализ накопления циклического АМФ проводили с использованием 11 разных концентраций соединения в диапазоне от 10 пМ до 100 мкМ (конечные аналитические концентрации). В анализ данных по каждому планшету включали кривую зависимого от концентрации ответа 5-НТ (в диапазоне от 10 пМ до 100 мкМ). Клетки инкубировали со встряхиванием при 37C в течение 15 мин, после чего реакцию обрывали, добавляя в каждую лунку 100 мкл охлажденного на льду выявляющего буфера (содержащегося в наборе flashplate). Планшеты герметично закрывали и инкубировали при 4C в течение ночи. Связанную радиоактивность определяли количественно методом приближенной сцинтилляционной спектроскопии с использованием прибора Topcount (Packard BioScience Co., Мериден, штат Коннектикут). Количество цАМФ, выработанного на миллилитр реакции, экстраполировали, исходя из стандартной кривой цАМФ, в соответствии с инструкциями, приведенными в руководстве производителя для пользователей. Статистический анализ данных проводили методом нелинейной регрессии с использованием пакета прикладных программ на сигмоидальной модели дозовой зависимости ответа с тремя параметрами (наклон привязан к единице). Данные по мощности представлены как величины рЕС 50 в виде отрицательного десятичного логарифма ЕС 50, где EC50 - это эффективная концентрация для 50% максимального ответа. Соединения, демонстрирующие в этом анализе более высокую величину рЕС 50, имеют большую мощность агонистического взаимодействия с рецепторами 5-HT4. Соединение, описанное формулой I,которое было протестировано в этом анализе с клеточной линией (1), имеющей плотность протеина около 0,5-0,6 пмоль/мг, демонстрировало величину pEC50 более 7,5. Анализ 4. Анализ с фиксацией напряжения in vitro по подавлению тока ионов калия в целостных клетках, экспрессирующих сердечный канал калия hERG. Клетки CHO-K1, стабильно трансфицированные кДНК hERG, были получены от Гейла Робертсона из Висконсинского университета. До использования клетки хранили в криогенных условиях. Клетки выращивали пассажами в модифицированной по Дульбекко среде Игла/F12 с добавками 10% фетальной бычьей сыворотки и 200 мкг/мл генетицина. Клетки высевали на покровные стекла, покрытые поли-Dлизином (100 мкг/мл) в чашках площадью 35 мм 2 (содержащих 2 мл среды) с такой плотностью, которая позволяла отбирать изолированные клетки для исследований целостных клеток с фиксацией напряжения. Чашки поддерживали в увлажненной среде с 5% CO2 при температуре 37C. Внеклеточный раствор готовили по меньшей мере каждые 7 дней и до использования хранили при 4 С. Внеклеточный раствор содержал (в мМ): NaCl (137), KCl (4), CaCl2 (1,8), MgCl2 (1), глюкозу (10), 4(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфокислоту (HEPES) (10), рН 7,4 с NaOH. Внеклеточный раствор,как при отсутствии, так и в присутствии испытуемого соединения, хранили в резервуарах, из которых его наливали в регистрирующую камеру со скоростью приблизительно 0,5 мл/мин. Внутриклеточный раствор готовили, делили на аликвотные порции и хранили при -20C до дня использования. Внутриклеточный раствор содержал (в мМ): KCl (130), MgCl2 (1), этиленгликоль-бис(бета-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'тетраацетат (EGTA) (5), MgATP (5), 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфокислоту (HEPES) (10),рН 7,2 с KOH. Все эксперименты проводили при комнатной температуре (20-22C). Покровные стекла, на которые были высеяны клетки, переносили в регистрирующую камеру и непрерывно орошали жидкостью. Между клетками и коммутационным электродом возникали гигаомные изолирующие прослойки. После достижения устойчивой коммутации начиналась запись в режиме фиксации напряжения с начальным потенциалом на уровне -80 мВ. После достижения устойчивого тока из целостных клеток эти клетки подвергали контакту с испытуемым соединением. Стандартный протокол изменений напряжения был таков: скачок от начального потенциала -80 до +20 мВ в течение 4,8 с, реполяризация до -50 мВ в течение 5 с, а затем возврат к начальному потенциалу (-80 мВ). Этот протокол изменений напряжения вступал в действие по 1 разу каждые 15 с (частота 0,067 Гц). Амплитуды пикового тока в фазе реполяризации определяли с использованием программного обеспечения pClamp. Испы- 20012115 туемые соединения в концентрации 3 мкМ разбрызгивали над клетками в течение 5 мин с последующим 5-минутным периодом отмывания при отсутствии соединения. Наконец, к перфузионной жидкости добавляли позитивный контроль (цизаприд, 20 нМ) для проверки функции клеток. Скачок от -80 до +20 мВ активирует канал hERG, приводя к исходящему току. Обратный скачок до -50 мВ приводит к исходящему хвостовому току, поскольку канал восстанавливается от инактивации и деактивируется. Амплитуды пикового тока в фазе реполяризации определяли с использованием программного обеспечения pCLAMP. Данные по контрольным и испытуемым объектам экспортировали в программуOrigin (OriginLab Corp., Нортгемптон, штат Массачусетс), где индивидуальные амплитуды тока были нормализованы по начальной амплитуде тока в отсутствие соединения. Рассчитывали нормализованные средние величины тока и стандартные ошибки для каждого состояния и наносили их на график с учетом зависимости от времени (продолжительности) эксперимента. Проводили сравнение между наблюдаемыми величинами подавления потока ионов K+ после 5-минутного контакта или с испытуемым веществом, или с контрольным носителем (обычно 0,3% DMSO). Статистические сравнения между экспериментальными группами проводили на основе двухпопуляционного независимого t-критерия (Microcal Origin v. 6.0). Различия считали значимыми при величине р 0,05. Чем меньше был процентный показатель подавления потока ионов калия в этом анализе, тем меньшим потенциалом обладали испытуемые соединения в изменении характера сердечной реполяризации,если они использовались как терапевтические средства. Соединение, описанное формулой I, было протестировано в этом анализе с концентрацией 3 мкМ и проявляло подавление потока ионов калия на уровне менее 15%. Анализ 5. Модель биологической доступности in vitro при пероральном поступлении в организм: анализ проницаемости на клетках Сасо-2. Анализ проницаемости на клетках Сасо-2 проводили для моделирования способности испытуемых соединений проходить через стенку кишечника и попадать в кровоток после перорального поступления в организм. В этом анализе определяли скорость, с которой испытуемые соединения в виде растворов проникают через монослой клеток, имитирующий плотное слияние монослоев клеток в тонком кишечнике человека. Клетки Сасо-2 (клеточная линия из аденокарциномы толстой кишки человека) были получены изATCC (коллекции культур американского типа, Роквилл, штат Мэриленд). Для исследования проницаемости клетки высевали с плотностью 63000 клеток/см 2 на предварительно увлажненные поликарбонатные фильтры Transwells (Costar, Кембридж, штат Массачусетс). Монослой клеток в культуре образовывался через 21 день. После культивирования клеток на планшете Transwell мембраны, содержащие монослои клеток, отделяли от планшета Transwell и вставляли в диффузионную камеру (Costar, Кембридж,штат Массачусетс). Диффузионную камеру вставляли в нагревательный блок, оснащенный внешней циркуляцией термостатически отрегулированной воды (37 С) для контроля температуры. Воздушный коллектор доставлял смесь (95% O2/5% CO2) в каждую половину диффузионной камеры и создавал над поверхностью монослоя клеток ламинарный поток, который эффективно ограничивал невозмущенный пограничный слой. Исследование проницаемости проводили с испытуемым соединением в концентрации 100 мкМ и с 14 С-маннитом для мониторинга целостности монослоя. Все эксперименты были проведены при 37C в течение 60 мин. Образцы анализировали методом ВЭЖХ или жидким сцинтилляционным подсчетом,определяя концентрации испытуемого соединения и маннита. Рассчитывали коэффициент проникновения (Kp) в см/с. В этом анализе величина Kp более 1010-6 см/с считается показателем предпочтительной биологической доступности. Соединение, описанное формулой I, было протестировано в этом анализе и продемонстрировало величину Kp более 2010-6 см/с. Анализ 6. Фармакокинетическое исследование на крысах. Водные растворы составов на основе испытуемых соединений готовили в 0,1% молочной кислоте с рН в диапазоне приблизительно от 5 до 6. Самцы крыс Sprague-Dawley (линия CD, Charles River Laboratories,Уилмингтон, штат Массачусетс) получали дозы испытуемых соединений посредством внутривенного введения (BB) из расчета 2,5 мг/кг или перорально (ПО) через зонд из расчета 5 мг/кг. Дозовый объем составлял 1 мл/кг при BB и 2 мл/кг при ПО введении. Серийные образцы крови у животных собирали перед введением дозы, а также через 2 мин (только BB), 5, 15 и 30 мин, а также 1, 2, 4, 8 и 24 ч после введения дозы. Концентрации испытуемых соединений в плазме крови определяли анализом по методу жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC-MS/MS) (MDS SCIEX, API 4000, Applied Biosystems,Фостер Сити, штат Калифорния) с минимальным порогом определения 1 нг/мл. Стандартные фармакокинетические параметры оценивали некомпартментным анализом (модель 201 для BB и модель 200 для ПО введения), используя программу WinNonlin (версия 4.0.1, Pharsight,Маунтин Вью, штат Калифорния). Максимум на кривой концентрации испытуемого соединения в плазме крови по времени обозначен как Cmax. Площадь под кривой концентрации по времени, начиная с момента- 21012115 введения дозы и кончая последней временной точкой анализа (AUC(0-t, рассчитывали по линейной формуле трапеции. Биологическую доступность при пероральном введении (F(%, т.е. нормализованное по дозе отношение AUC(0-t) для ПО введения к AUC(0-t) для BB введения, рассчитывали по формулеF(%)=AUCПО/AUCBBдозаВВ/дозаПО 100% Ожидается, что испытуемые соединения, демонстрирующие в этом анализе большие величины параметров Cmax, AUC(0-t) и F(%), обладают большей биологической доступностью при пероральном введении. Соединение, описанное формулой, демонстрировало величину Cmax 0,16 мкг/мл, величину AUC(0-t) 0,46 мкгч/мл и биологическую доступность (F(% при пероральном введении на крысиной модели около 19%. Хотя представленное здесь изобретение было описано со ссылками на специфические варианты его реализации, специалисты, компетентные в данной области знаний, должны понимать, что возможны различные изменения, которые можно использовать вполне равноценно, нисколько не отклоняясь от истинного духа и сферы действия этого изобретения. Кроме того, можно осуществить много модификаций,направленных на адаптацию к конкретной ситуации, материалу, смеси веществ, процессу, стадии или стадиям процесса, цели, духу и сферы применения представленного здесь изобретения. Все модификации такого рода должны восприниматься в рамках представленной ниже формулы изобретения. Кроме того, все публикации, патенты и патентные документы, процитированные выше, включены для ссылки во всей своей полноте с некоторыми индивидуальными исключениями, ограниченными только ссылкой,как таковой. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Кристаллическая солевая форма, представляющая собой кристаллический гидрохлорид(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты или сольват этой соли. 2. Кристаллическая солевая форма по п.1, которая представляет собой кристаллический гидрохлорид. 3. Кристаллическая солевая форма по п.2, которая характеризуется порошковой рентгенограммой с двумя или более пиками дифракции, имеющими значения 2, выбранные из 4,410,2, 8,820,2, 9,080,2,11,210,2, 14,400,2, 16,420,2, 17,350,2, 17,610,2, 18,140,2, 19,040,2, 19,950,2, 20,200,2, 21,230,2,22,130,2, 22,480,2, 22,830,2, 24,160,2, 25,370,2, 25,560,2, 26,220,2, 27,330,2, 29,080,2 и 29,610,2. 4. Кристаллическая солевая форма по п.3, где порошковая рентгенограмма имеет два или более пика дифракции, имеющие значения 2, выбранные из 14,400,2, 17,350,2, 17,610,2, 19,040,2, 21,230,2 и 22,130,2. 5. Кристаллическая солевая форма по п.2, которая характеризуется порошковой рентгенограммой,на которой расположение пиков, по существу, соответствует рентгенограмме, показанной на фиг. 1. 6. Кристаллическая солевая форма по п.2, которая характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, демонстрирующей максимум эндотермического теплового потока при температуре выше примерно 230 С. 7. Кристаллическая солевая форма по п.2, которая характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, демонстрирующей максимум эндотермического теплового потока, по существу, совпадающей с кривой, показанной на фиг. 2. 8. Кристаллическая солевая форма по п.1, которая представляет собой гидрат. 9. Кристаллическая солевая форма по п.8, которая характеризуется порошковой рентгенограммой с двумя или более пиками дифракции, имеющими значения 2, выбранные из 5,30+0,2, 7,430,2, 8,720,2,10,520,2, 13,850,2, 14,11+0,2, 15,800,2, 15,990,2, 17,260,2, 19,530,2, 20,080,2, 21,060,2, 21,480,2,21,92+0,2, 22,850,2, 23,910,2, 25,280,2, 26,06+0,2, 27,340,2, 27,51+0,2 и 29,67+0,2. 10. Кристаллическая солевая форма по п.9, которая характеризуется порошковой рентгенограммой с двумя или более пиками дифракции, имеющими значения 2, выбранные из 10,520,2, 13,85+0,2,15,800,2, 17,260,2 и 21,060,2. 11. Кристаллическая солевая форма по п.8, которая характеризуется порошковой рентгенограммой,на которой расположение пиков, по существу, соответствует рентгенограмме, показанной на фиг. 4. 12. Кристаллическая солевая форма по п.8, которая характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу, совпадающей с кривой, показанной на фиг. 5. 13. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и кристаллическую солевую форму по любому из пп.1-12. 14. Способ лечения расстройства, связанного со снижением подвижности желудочно-кишечного тракта млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и кристаллическую солевую форму по любому из пп.1-12. 15. Способ по п.14, где расстройство со снижением подвижности выбирают из хронических запоров, синдрома раздраженного кишечника с преобладанием запоров, диабетического и идиопатического- 22012115 пареза желудка, а также функциональной диспепсии. 16. Применение кристаллической солевой формы по любому из пп.1-12 для производства лекарственного средства. 17. Применение по п.16, где лекарственное средство предназначено для лечения медицинского состояния, ассоциированного с активностью рецепторов 5-HT4, у млекопитающего. 18. Применение по п.17, где медицинское состояние представляет собой расстройство, обусловленное снижением подвижности желудочно-кишечного тракта. 19. Применение по п.17, где медицинское состояние выбирают из хронических запоров, синдрома раздраженного кишечника с преобладанием запоров, диабетического и идиопатического пареза желудка,а также функциональной диспепсии. 20. Способ получения кристаллического гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин 3-карбоновой кислоты, включающий:(a) приведение в контакт (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8 азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты с соляной кислотой с образованием реакционной смеси и(b) выделение кристаллического гидрохлорида из реакционной смеси. 21. Способ получения кристаллического гидрата гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, включающий:(a) растворение гидрохлорида (1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонилметиламино)пропил]-8-азабицикло[3,2,1]окт-3-иламида 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты в воде с концентрацией более примерно 50 мг на 1 мл с образованием суспензии и(b) выделение кристаллического гидрата из суспензии.