Применение сульфизоксазола для лечения болезни альцгеймера

ПРИМЕНЕНИЕ СУЛЬФИЗОКСАЗОЛА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА Настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей сульфизоксазол, или его соль, или состав с пролонгированным высвобождением, для лечения болезни Альцгеймера, а также для защиты нейронов от интоксикации пептидом Абета у нуждающегося в этом субъекта.DE-A1-102005032625 Мартынов А.И. и др. Улучшение когнитивных функций у пожилых больных с мягкой и умеренной эссенциальной артериальной гипертензией на фоне монотерапии амлодипином. Рос. кардиол. ж., 2000,5, с. 33-35, реферат,[он-лайн] (найдено 2011-05-18]. Найдено из базы данных ВИНИТИ Шейдер Р. Психиатрия. Москва, Практика,1998, с. 50-55 Данное изобретение относится к композициям и способам для лечения болезни Альцгеймера (AD).AD представляет собой прототипическую кортикальную деменцию, характеризующуюся нарушением памяти совместно с дисфазией (нарушение речи, при котором происходит нарушение речепроизводства и понимания речи), диспраксией (неспособность координировать и выполнять определенные целенаправленные движения и жесты в отсутствие моторных или сенсорных нарушений) и агнозией(способность распознавать объекты, индивидуумов, звуки, формы или запахи), относящимися к вовлечению кортикальных ассоциативных зон. Также могут присутствовать особые симптомы, такие как спастический парапарез (слабость, поражающая нижние конечности) (1-4). Заболеваемость болезнью Альцгеймера значительно возрастает с возрастом. AD в настоящее время представляет собой наиболее частую причину деменции. Она клинически характеризуется общим снижением когнитивной функции, которое медленно прогрессирует и делает пациентов на конечной стадии прикованными к кровати, страдающими недержанием и зависимыми от попечения. Смерть наступает в среднем через 9 лет после постановки диагноза (5). Показатель заболеваемости AD значительно возрастает с возрастом. По демографическим прогнозам в США рассчитано, что количество людей старше 80 лет будет достигать на 2050 г. 370 млн. В настоящее время рассчитано, что AD поражено 50% людей старше 85 лет. Таким образом, за 50 лет деменцией будут поражены более 100 млн человек во всем мире. Большое количество людей, требующих постоянной заботы и другого обслуживания, будут значительным образом влиять на медицинские, денежные и человеческие ресурсы (6). Ранним признаком заболевания является нарушение памяти и в него вовлечена эпизодическая память (память на повседневные события). Семантическая память (память на вербальный и зрительный смысл) вовлечена на более поздних стадиях заболевания. В отличие от этого кратковременная память(краткосрочная память, включающая структуры и процессы, используемые для временного хранения информации и управления ею) и процедурная память (подсознательная память, т.е. долговременная память навыков и порядка действия) сохраняются до поздних стадий. По мере прогресса заболевания появляются дополнительные признаки ухудшения речи, зрительного восприятия и пространственной недостаточности, агнозий и апраксий. Классическая картина болезни Альцгеймера достаточно охарактеризована, чтобы позволить ее идентификацию приблизительно в 80% случаев (7). Однако существует клиническая гетерогенность, и это важно не только для клинического ведения, но обеспечивает применение дополнительных видов специфического медикаментозного лечения для функционально различных форм (8). Патологические признаки AD включают амилоидные бляшки, содержащие -амилоид (А), нейрофибриллярные клубки (NFT), содержащие -белок, и дисфункцию и потерю нейронов и синапсов (9-11). За последнее десятилетие предложено две основных гипотезы причин AD: "гипотеза амилоидного каскада", в которой утверждается, что процесс нейродегенерации представляет собой ряд событий, запускаемых аномальным процессингом белка-предшественника амилоида (АРР) (12), и "гипотеза дегенерации цитоскелета нейронов" (13), в которой утверждается, что запускающими событиями являются изменения цитоскелета. Наиболее широко признанной теорией, объясняющей прогрессирование AD, остается гипотеза амилоидного каскада (14-16), и исследователи AD в основном сосредоточены на определении механизмов, лежащих в основе токсичности, ассоциированной с белками А. В противоположность этому белок получил намного меньше внимания фармацевтической индустрии, чем амилоид, вследствие фундаментальных и практических проблем. Кроме того, изменение плотности синапсов представляет собой патологическое нарушение, которое лучше всего коррелирует с когнитивным нарушением, чем остальные два факта. Исследования выявили, что, по-видимому, патология амилоида прогрессирует специфичным для нейромедиатора образом, где, по-видимому, наиболее уязвимыми являются холинэргические окончания, с последующими глутаматэргическими окончаниями и, наконец, ГАМК-эргическими окончаниями (11). Сущность изобретения Задачей настоящего изобретения является предоставление новых терапевтических подходов для лечения AD. Авторы изобретения идентифицировали молекулярный путь, вовлеченный в возникновение AD, и предложили новые мишени для разработки новых способов лечения для облегчения AD и связанных нарушений, в частности для разработки способов комбинированного лечения с использованием новых или существующих молекул, ранее используемых для других показаний. Таким образом, изобретение относится к новым композициям и способам лечения AD. Более конкретно, изобретение относится к применению композиции, содержащей сульфизоксазол,или его соль, или состав с пролонгированным высвобождением, в лечении болезни Альцгеймера. Композиция может дополнительно содержать по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы акампросата, амлодипина, цилостазола, лефлуномида, метимазола, фенформина, прилокаина, тадалафила,тербинафина, зонизамида и рифабутина, их солей или составов с пролонгированным высвобождением,для одновременного, раздельного или последовательного введения с сульфизоксазолом. Композиция может дополнительно содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, ингибирующее реакцию клеток на стресс, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. Более того, указанная композиция может дополнительно содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, модулирующее функцию синапсов, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. В дополнение указанная композиция может содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, модулирующее клеточный ангиогенез, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. Предпочтительно композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и может быть повторно введена индивидууму. Изобретение также относится к применению композиции, содержащей сульфизоксазол, или его соль, или состав с пролонгированным высвобождением для производства лекарственного средства для защиты нейронов от интоксикации пептидом А у нуждающегося в этом субъекта. Как описано в настоящей заявке, указанные выше лекарственные средства и способы комбинированного лечения предоставляют новые и эффективные подходы для лечения AD у человеческих индивидуумов. Краткое описание чертежей Фиг. 1. Эффект выбранных лекарственных средств на жизнеспособность дифференцированных под действием NGF PC 12 после вызванной -амилоидом интоксикации. р 0,00001: значимо отличается от носителя; : р 0,01; : р 0,0001: значимо отличается от А 25-35. Двусторонний критерий Стьюдента. 10 мкМ А 25-35 обеспечивает значительную интоксикацию, более 25%, по сравнению с обработанными носителем нейронами (фиг. 1 А и В, красным). Эту интоксикацию значимо предотвращает прилокаин (фиг. 1 А) или амлодипин (фиг. 1 В). Фиг. 2. Эффект выбранных лекарственных средств на высвобождение LDH в интоксицированной р 0,000001: значимо отличается амилоидом первичной культуре кортикальных нейронов крыс. от носителя; : р 0,05; : р 0,01; : р 0,001 : р 0,00001: значимо отличается от А 25-35. Двусторонний критерий Стьюдента 20 мкМ А 25-35 обеспечивает значимую интоксикацию, более 25%, по сравнению с обработанными носителем нейронами (фиг. 2 А и В, красным). Эту интоксикацию эффективно предотвращает BDNF при 10 нг/мл, который рассматривают в качестве положительного контроля для нейропротекции. Эту интоксикацию также значимо предотвращают лекарственные средства: зонизамид(фиг. 2 А), или сульфизоксазол (фиг. 2 В), или лефлуномид (фиг. 2 С). Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к новым терапевтическим подходам для лечения AD. Изобретение относится к новому применению лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств,которые обеспечивают эффективную коррекцию этого заболевания и которые можно использовать для лечения пациента. Термин "связанное с AD нарушение" означает болезнь Альцгеймера (AD), сенильную деменциюAD-типа (SDAT), болезнь Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, сосудистую деменцию, умеренное когнитивное нарушение (MCI), ассоциированное с возрастом нарушение памяти (AAMI) и проблемы,ассоциированные со старением, постэнцефалический паркинсонизм, ALS и синдром Дауна. Как применяют в настоящем документе, "лечение" нарушения включает лечение, предотвращение,профилактику, задержку или уменьшение симптомов, вызываемых нарушением. Термин "лечение", в частности, включает контроль прогрессирования заболевания и ассоциированных симптомов. Термин "ингибирует" так, как он относится к реакции клеток на стресс (CSR), включает любое снижение CSR по сравнению с существующей активностью у индивидуума. Такое снижение может включать частичное снижение, например 5-20%, которого достаточно для улучшения состояния пациента, а также более значительные снижения, например 20-50% или более полное ингибирование, например более 50%. Ингибирование можно оценивать или подтверждать с использованием известных биологических тестов, таких как описаны в экспериментальном разделе. Также подразумевают, что указание конкретных соединений в рамках данного изобретения включает не только конкретно указанные молекулы, но также любые их фармацевтически приемлемые соли,гидраты, сложные эфиры, простые эфиры, изомеры, рацематы, конъюгаты или пролекарственные средства. Термин "комбинация" означает лечение, где для получения биологического эффекта индивидууму совместно вводят по меньшей мере два или более лекарственных средств. При комбинированной терапии по данному изобретению по меньшей мере два лекарственных средства можно вводить совместно или раздельно, в одно и то же время или последовательно. Также по меньшей мере два лекарственных средства можно вводить посредством различных маршрутов и протоколов. Таким образом, хотя их можно формулировать совместно, лекарственные средства комбинации также можно формулировать раздельно. Как указано выше, изобретение относится к композициям и способам лечения болезни Альцгеймера или связанного нарушения у нуждающегося в этом индивидуума с применением лекарственного средства или комбинации лекарственных средств, которые ингибируют реакцию клеток на стресс. При всесторонней интеграции экспериментальных данных, охватывающих результаты цитобиологических исследований, экспериментов по определению профилей экспрессии и исследований генетических ассоциаций, описывающих различные аспекты болезни Альцгеймера и связи, существующие в клеточной передаче сигнала и функциональных путях, авторы изобретения обнаружили, что реакция клеток на стресс представляет собой важный механизм, который изменяется у индивидуумов с AD. Гены, локализованные в указанной функциональной сети и вовлеченные в болезнь Альцгеймера, отбирали по следующим критериям:(1) - непосредственное взаимодействие с генами, этиологически ответственными за семейные случаи болезни Альцгеймера (АРР, АроЕ, пресенилины, -белок),(2) - функциональные партнеры генов, выбранных по критерию (1),(3) - ближайшие функциональные партнеры генов, выбранных по критерию (2). При помощи этого процесса авторы изобретения смогли установить, что сеть, ответственная за реакцию клеток на стресс, представляет собой большую функциональную сеть, пораженную при болезни Альцгеймера. Авторы изобретения более конкретно установили, что реакция клеток на стресс представляет собой функционально связанный признак болезни Альцгеймера. Как описано ниже, авторы изобретения в пределах сети реакции клеток на стресс идентифицировали три семейства белков, которые функционально связаны с возникновением и контролем болезни Альцгеймера и представляют собой важные мишени для(комбинационной) терапии. Более конкретно - эти группы белков представляют собой белки, принимающие участие в гомеостазе кальция, в сворачивании белков и в осуществлении апоптоза. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение более конкретно относится к композициям и способам применения лекарственного средства или комбинации лекарственных средств, модулирующих активность белка, вовлеченного в гомеостаз кальция. Кальций, один из наиболее важных внутриклеточных мессенджеров, опосредует плейотропию клеточных процессов в нейронах и эндотелиальных клетках, включая синаптическую пластичность, ангиогенез и апоптоз. Мутации, аномальное сворачивание или гиперфосфорилирование пресенилина, АРР и белки влияют на гомеостаз кальция. Соответственно, нарушение внутриклеточной передачи сигнала посредством кальция усиливает характеристические нарушения при болезни Альцгеймера, приводя к ускоренному накоплению агрегатов -амилоида и гиперфосфорилированию -белка, что указывает на существование регуляторной обратной связи между гомеостазом кальция и специфической для AD клеточной патологии. Уровень внутриклеточного кальция точно регулируется совместным действием ряда проницаемых для кальция каналов, кальциевых насосов и кальциевых обменников в плазматической мембране и эндоплазматическом ретикулуме. Например, кальций динамически хранится в эндоплазматическом ретикулуме (ER), который способен накапливать очень высокие уровни Са 2+ вследствие активности Са 2+ SERCA насосов, достигая миллимолярных концентраций (17). Высвобождение Са 2+ из эндоплазматического ретикулума контролируется двумя типами каналов высвобождения Са 2+, а именно рецепторы рианодина(RYR) и рецепторы IP3 (ITPR). Их могут непосредственно активировать многие сигнальные мессенджеры, включая локальные колебания концентраций Са 2+ или IP3 в цитоплазме, и их функционально модулируют несколько регуляторных белков, таких как PKA, PRKG1, mTOR, кальциневрин, FKBP, фосфоламбан и т.д. (18). SERCA насосы регулируются концентрациями Са 2+ в ER, где снижение содержания кальция в ER повышает активность SERCA. На уровне плазматической мембраны гомеостаз кальция в основном регулируется управляемыми внутриклеточным депо и потенциалозависимыми кальциевыми каналами, ответственными за вход Са 2+, выталкивающими кальций АТФазными насосами, обменникамиNa+/Ca2+ и потенциалозависимыми Na+-каналами. Авторы изобретения идентифицировали генную сеть, вовлеченную в путь гомеостаза кальция,функцию которого можно модифицировать мутантными пресенилиновыми белками или токсическим амилоидом. Среди них особый интерес представляют рецепторы IP3R (ITPR1) и RYR3, АТР 2 А 3(SERCA3 Са 2+ АТФаза), регулирующие гомеостаз кальция на уровне ER, АТФаза АТР 2 В 1 плазматической мембраны, выталкивающей ионы кальция из эукариотических клеток против градиентов концентрации, и потенциалозависимые Na+-каналы. Показано, что АРР, A42 и мутантный PS1 способны модулировать активность рецепторов рианодина и SERCA насосов. A42 и вариант FADPS1 увеличивают экспрессию и активность RYR3 (19-21), приводя к повышенной уязвимости нейронов к эксайтотоксическому повреждению глутаматом (22). Кроме того, ингибирование обратного захвата кальция посредством SERCA насоса коррелирует со снижением высвобождения А, тогда как стимуляция активностиSERCA увеличивает продукцию А (23). Кроме того, на уровне плазматической мембраны, в процессинге -субъединиц потенциалозависимых натриевых каналов, которые модулируют и могут, при патологических состояниях, обращать активность обменников Na+/Ca2+, вызывая избыточное внутриклеточное накопление кальция, участвуют пресенилин и ВАСЕ-1 (24). В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение более конкретно относится к композициям и способам с применением лекарственного средства или комбинации лекарственных средств, которые модулируют активность белков, вовлеченных в сворачивание или агрегацию белков. Агрегация белков представляет собой центральный цитопатологический процесс при AD. Два основных клеточных признака болезни Альцгеймера проявляются в развитии нейрофибриллярных клубков(NFT) и отложении амилоидных бляшек, состоящих из агрегированного гиперфосфорилированного белка и фрагментов А белка АРР соответственно. Другой белок, чувствительный к агрегации -синуклеин, общепризнанный скорее как специфический признак болезни Паркинсона, тем не менее можно выявить в амилоидных бляшках в большинстве случаев спорадической и семейной форм болезни Альцгеймера (25-26). Авторы изобретения идентифицировали каскад из нескольких генов, вовлеченных в модуляцию сворачивания, посттрансляционной модификации и процессинга каждого основного составляющего ассоциированных с болезнью Альцгеймера белковых агрегатов. Это открытие подчеркивает важность комбинационного патологического действия неправильно уложенных белков , А и синуклеина для развития болезни Альцгеймера. Например, авторы изобретения идентифицировали разрушающий инсулин фермент IDE, который также вовлечен в протеолиз А, (27) и белки АРВА 1 и АРВА 2 ВР, взаимодействующие с АРР и регулирующие его стабильность и функции (28-29). Также анализ данных в качестве факторов риска развития болезни Альцгеймера выявил -синуклеин (SNCA), его партнера по взаимодействию синфилина (SNCAIP) и PARK2, лигазу белка убиквитина, вовлеченную в выведение SNCA и защиту нейронов от токсичности -синуклеина (30). Дисбаланс активности киназ, таких как GSK3, CDK5 и MARK (31-32) и фосфатаз, регулирующих уровень фосфорилирования -белка, может участвовать в агрегации -белка и интенсифицировать ее. Учитывая, что зависимое от GSK-3 фосфорилирование также функционально регулирует пресенилин,киназа GSK-3 может играть особенно важную роль в патогенезе болезни Альцгеймера. Это заключение подкрепляется тем открытием авторов изобретения, что несколько сигнальных элементов, регулирующих активность киназы GSK-3 или ее прямое взаимодействие с -белком - WWOX (33), гиалуроновая кислота CD44 рецептор, Wnt рецепторы Fz2/ROR2 и инсулин рецептор/PTPRG phosphatase complex (34) могут быть ассоциированы с возникновением болезни Альцгеймера. В дополнительном конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к композициям и способам с использованием лекарственного средства или комбинации лекарственных средств,ингибирующих апоптоз. Апоптоз, признанный основным клеточным механизмом, ответственным за потерю клеток при болезни Альцгеймера, может быть эффективно вызван повреждающими факторами клеток, как правило,ассоциированными с развитием болезни Альцгеймера - нарушенный гомеостаз кальция и увеличенная продукция активных форм кислорода (ROS), стимулированных токсическими агрегатами -амилоидного пептида (А). Как определено посредством анализа авторов изобретения, апоптоз в случае болезни Альцгеймера наиболее вероятно осуществляется по каноническим зависимым от р 53 путям. р 53 представляет собой ДНК-связывающий белок и действует в качестве фактора транскрипции, контролирующего экспрессию генов-мишеней, ингибирующих рост и инвазию опухолевых клеток. Таким образом, р 53 общепризнан как белок-опухолевый супрессор, и он играет важную роль в регуляции прохождения клеточного цикла,в частности в переходе от G0 к G1 и к точке контроля повреждений ДНК G2/M и в индукции апоптоза. Последнее, по-видимому, опосредуется или стимуляцией экспрессии проапоптотических белков, таких как Вах, или посредством репрессии экспрессии антиапоптотических белков, таких как Bcl-2. Белок р 53 может регулироваться посттрансляционными модификациями и взаимодействием с позитивными и негативными регуляторными факторами. Авторы изобретения идентифицировали несколько регуляторных белков - WWOX, MDM1, HIPK2 и PML - подтверждающих представление об основной роли белка р 53 в осуществлении гибели клеток при болезни Альцгеймера. Взаимодействующая с р 53,содержащая WW-домен оксидоредуктаза (WOXW) представляет собой важный медиатор цитотоксичности TNF и опосредует апоптоз синергично с р 53 (35). Взаимодействующая с гомеодоменом ядерная серин/треониновая протеинкиназа-2 (HIPK2) фосфорилирует р 53 по Ser 46 и взаимодействует с р 53 при активации р 53-зависимой транскрипции и апоптотических путей (36). Наконец, PML белок является антагонистом действия белка MDM2, стимулирующего разрушение р 53 протеасомой, и активирует р 53,привлекая его в мультибелковые комплексы, называемые ядерными тельцами PML (37). Среди рецепторных систем, которые могут непосредственно и специфически участвовать в индукции апоптоза при болезни Альцгеймера, особый интерес представляют нетриновые рецепторы UNC5C(гомолог С Unc-5) и DCC (делетированный при колоректальной карциноме), вовлеченные в направление аксонов и ангиогенез. Эти рецепторы называют предполагаемыми условными опухолевыми супрессорами, так как они ведут себя как нетринзависимые рецепторы, индуцируя апоптоз в отсутствие их лиганда(38). Связывание нетрина-1 с этими рецепторами ингибирует зависимый от опухолевого супрессора р 53 апоптоз, а р 53 непосредственно вовлечен в регуляцию транскрипции нетрина-1 и его рецепторов (39). Кроме того, рецептор DCC процессируется пресенилином с образованием внутриклеточного рецепторного домена, обладающего транскрипционной активностью (40). Таким образом, анализ данных авторов изобретения позволил предположить, что опосредованный нетриновыми рецепторами и зависимый от р 53 апоптоз может представлять собой один из специфических проапоптотических путей, участвующих в патологической потере клеток при болезни Альцгеймера, в дополнение к относительно неспецифическим проапоптотическим программам, стимулируемым нарушенным гомеостазом кальция и избыточной продукцией ROS. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение более конкретно относится к композициям и способам с использованием комбинации лекарственных средств, ингибирующей активность по меньшей мере двух определенных белков, вовлеченных в гомеостаз кальция, в свертывание белка и в осуществление апоптоза. В настоящем изобретении авторы изобретения предлагают новые композиции, которые можно использовать для ингибирования реакции клеток на стресс, индуцируемый при болезни Альцгеймера, и других нейродегенеративных нарушений. В конкретном варианте осуществления в композициях и способах по данному изобретению используют лекарственные средства, ингибирующие реакцию клеток на стресс посредством их взаимодействия с геном или белком, как перечислено выше, или их модулирования. Более конкретно, композиции по данному изобретению содержат лекарственное средство или лекарственные средства, ингибирующие реакцию клеток на стресс, посредством связывания или модулирования активности белка, кодируемого геном, выбранным из ACCN1, ADRA1A, ADRB2, AFADIN,AKT, ALDH2, ALOX12, AMPK, АРВА 1, АРВА 2 ВР, APG1, APG12, APOER2, ATG5, ATG7, ATM,АТР 1 А 1, АТР 2 А 3, АТР 2 В 1, ATP6V1C1, ATR, BACE1, BAD, BAX, BCAR1, BCL2, BECLIN1, гена BK каналов (KCNMA1, KCNMB1), BRCA1, CACNA1C, гена кальциневрина (CALCINEURIN), CD36, CD44,CDH1, CDH2, CDK5, CDKN1A, CHK1, CHRM1, CHRM2, CHRM3, CHRM4, CHRM5, CK1, CTNNA2,CTNNB1, CULLIN1, гена циклина (CYCLINE), DCC, DGKB, DGKH, DNAJB9, DOCK3, DRD2, EDNRA,ELAVL2, ERK1, ERK2, EZRIN, FAS, FKBP12, FKBP12,6, FOXO3A, FZ2, GADD45, GNPTAB, GPC5,GRK2, GRK5, GRP170, GRIN2B, GRIN3A, GSK3B, HAS1, HAS2, HAS3, HIPK2, HSPAS, HSP90B1,HSPA5, HTR1A, IDE, IMPDH1, IMPDH2, INS, INSR, IRF1, ITB1, ITGA1, ITGB1, ITPR1, JNK1, LAMA1,MAD1L1, МАО, МСС 1, MDM1, MME, гена моэзина (MOESIN), MTOR, гена NADPH-оксидазы (NADPHOXIDASE), NEDD9, NETRIN1, NFKB1, NHERF, NOS1, NOS2A, NOS3, PAELR, PAK1, PARK2, PCAF,PDE11A, PDE3A, PDE4D, PDE5, PDE6D, PI3K, PIK3C3, PKCA, PLCB1, PLD2, PLN, PML, POP2, PRDX5,PRDX6, PRKG1, PTPRG, PTPRM, PVRL1, RAC1, RACK1, гена радиксина (RADIXIN), RHOA, ROR2,RTN1, RYR3, SAPK3, SCN1A, SCN1B, SCNN1D, SCNN1G, SH3BP5, SIL1, SLC8A1, SLC8A2, SLC8A3,SLN, SNCA, SNCAIP, S0RBS2, S0RCS2, SRC, SYN1, THBS2, TP53, TP63, TRPC3, TRPC4, TRPC5,UNC5C, VPS15, WNT1A, WNT5A, WWOX, гена ксантиноксидазы (XANTHINE OXIDASE) и YES1. Последовательности всех перечисленных выше генов и белков доступны в генных библиотеках, и их можно выделять известными в данной области способами. Кроме того, активность этих генов и белков можно оценивать известными в данной области способами, как описано в экспериментальном разделе. Изобретение дополнительно относится к лекарственным средствам, которые можно использовать для модулирования этих генов-мишеней и белков-мишеней. Изобретение относится к идентификации и активности конкретных лекарственных средств, которые отдельно, но предпочтительно в комбинации(ях), модулируют указанный выше путь и которые можно использовать для лечения указанных заболеваний. В частности, авторы идентифицировали низкомолекулярные соединения, которые уже описаны в литературе, но использовались для лечения других заболеваний у людей. В связи с этим, в наиболее предпочтительном варианте осуществления композиции по данному изобретению содержат, по меньшей мере, модулятор AMPK (предпочтительно выбранный из фенформина и видарабина), ингибитор АТР 1 А 1 (предпочтительно омепразол), ингибитор CACNA1C (предпочтительно амлодипин), антагонист рецептора эндотелина EDNRA (предпочтительно сульфизоксазол), модулятор ГАМК-эргических и глутаматергических рецепторов GRIN2B и GRIN3A (предпочтительно акампросат), ингибитор активности GSK3B (предпочтительно выбранный из альбутерола и метараминола),модулятор синтетаз гиалуроновой кислоты HAS1-3 (предпочтительно лефлуномид), ингибитор IMPDH1 и IMPDH2 (предпочтительно тиогуанин), ингибитор MTOR (предпочтительно рапамицин), ингибитор фосфодиэстераз PDE11A, PDE4A и PDE5A (предпочтительно тадалафил), ингибитор PDE3A (предпочтительно цилостазол), ингибитор PDE4D (предпочтительно милринон), модулятор PRDX5 и PRDX6(предпочтительно метимазол), активатор PRKG1 (предпочтительно выбранный из нитропруссида, тадалафила и цилостазола), модулятор RHOA (предпочтительно выбранный из алендроната и тербинафина),модулятор RYR3 (предпочтительно прилокаин), ингибитор SCN1A и активатор BK каналов (предпочтительно зонизамид), ингибитор SCN1A/B (предпочтительно выбранный из зонизамида и фосфенитоина),ингибитор YES1 и SRC (предпочтительно дазатиниб), активатор аутофагии (предпочтительно трегалоза) и/или химические шапероны (предпочтительно выбранные из фенилбутирата натрия, рифабутина, арабита и маннита). Как указано выше, изобретение конкретно относится к разработке способов комбинированного лечения, направленного на механизмы AD и связанных нарушений. В связи с этим ниже описаны примеры наиболее предпочтительной мишени и комбинаций лекарственных средств. Более предпочтительно композиция содержит по меньшей мере одну из следующих комбинаций лекарственных средств для комбинированного, раздельного или последовательного введения: модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и ингибитор натриевых каналов SCN1A и активатор BK каналов (предпочтительно зонизамид), модулятор ГАМК-эргических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно акампросат) и модулятор RHOA (предпочтительно тербинафин), ингибитор натриевых каналов SCN1A и активатор BK каналов (предпочтительно зонизамид) и модулятор рецепторов рианодина RYR3 (предпочтительно прилокаин),модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и модулятор рецепторов рианодина RYR3 (предпочтительно прилокаин),модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и модулятор RHOA (предпочтительно тербинафин),ингибитор натриевых каналов SCN1A и активатор BK каналов (предпочтительно зонизамид) и модулятор RHOA (предпочтительно тербинафин), модулятор рецептора рианодина RYR3 (предпочтительно прилокаин) и модулятор RHOA (предпочтительно тербинафин),модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и химический шаперон (предпочтительно рифабутин),ингибитор натриевых каналов SCN1A и активатор BK каналов (предпочтительно зонизамид) и химический шаперон (предпочтительно рифабутин), модулятор рецепторов рианодина RYR3 (предпочтительно прилокаин) и химический шаперон (предпочтительно рифабутин),модулятор RHOA (предпочтительно тербинафин) и химический шаперон (предпочтительно рифабутин), или модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и ингибитор фосфодиэстераз PDE11A и PDE4A,PDE5A (предпочтительно тадалафил). Наиболее предпочтительные примеры композиций по данному изобретению включают соединения,выбранные из акампросата, альбутерола, аледроната, амлодипина, арабита, цилостазола, дазатиниба,фосфенитоина, лефлуномида, маннита, метараминола, метимазола, милринона, нитропруссида, омепразола, фенформина, фенилбутирата натрия, прилокаина, рапамицина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина, тиогуанина, трегалозы, видарабина и зонизамида или их комбинации. В другом предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению содержат по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из акампросата, цилостазола, метимазола, фенформина, прилокаина, тадалафила, тербинафина, зонизамида и рифабутина или их солей или пролекарственных средств или производных или составов с пролонгированным высвобождением, для одновременного, раздельного или последовательного введения. В более предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению содержат комбинацию по меньшей мере двух соединений, выбранных из группы, состоящей из акампросата, цилостазола, метимазола, фенформина, прилокаина, тадалафила, тербинафина, зонизамида и рифабутина или их солей или пролекарственных средств или производных или составов с пролонгированным высвобождением, для одновременного, раздельного или последовательного введения. В другом варианте осуществления композиции по изобретению содержат комбинацию по меньшей мере из двух соединений, выбранных из группы, состоящей из акампросата, цилостазола, метимазола,фенформина, прилокаина, тадалафила, тербинафина, зонизамида и рифабутина, или их солей, или пролекарственных средств, или производных, или составов с пролонгированным высвобождением, где указанная композиция ингибирует реакцию клеток на стресс, индуцированную при нейродегенеративных нарушениях, выбранных из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (AD), болезни Паркинсона (PD),бокового амиотрофического склероза (ALS) и рассеянного склероза (MS). В другом предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению содержат комбинацию по меньшей мере из двух соединений, выбранных из группы, состоящей из акампросата, цилостазола, метимазола, фенформина, прилокаина, тадалафила, тербинафина, зонизамида и рифабутина, или их солей, или пролекарственных средств, или производных, или составов с пролонгированным высвобождением, для лечения болезни Альцгеймера (AD). Предпочтительно композиции для лечения болезни Альцгеймера или связанного нарушения у нуждающегося в этом индивидуума, содержат по меньшей мере одно из следующих комбинаций лекарственных средств для комбинированного, раздельного или последовательного введения: В наиболее предпочтительном варианте осуществления композиция по изобретению содержит, по меньшей мере, амлодипин и прилокаин, или их соли, или пролекарственные средства, или производные или составы с пролонгированным высвобождением для одновременного, раздельного или последовательного введения. В другом предпочтительном варианте осуществления композиция по изобретению содержит, по меньшей мере, амлодипин и/или прилокаин, или их соли, или пролекарственные средства, или производные, или составы с пролонгированным высвобождением для лечения болезни Альцгеймера или связанного нарушения. В другом конкретном варианте осуществления композиция по изобретению дополнительно содержит по меньшей мере одно лекарственное средство, ингибирующее реакцию клеток на стресс, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. Предпочтительно эти дополнительные лекарственные средства, ингибирующие реакцию клеток на стресс, выбирают из модулятора АМРК (предпочтительно видарабина), ингибитора АТР 1 А 1 (предпочтительно омепразола), ингибитора активности GSK3B (предпочтительно выбранного из альбутерола и метараминола), ингибитора IMPDH1 и IMPDH2 (предпочтительно тиогуанина), ингибитора MTOR (предпочтительно рапамицина), ингибитора PDE4D (предпочтительно милринона), активатора PRKG1 (предпочтительно цилостазола), модулятора RHOA (предпочтительно алендроната), ингибитора SCN1A/B(предпочтительно фосфенитоина), ингибитора YES1 и SRC (предпочтительно дазатиниба), активатора аутофагии (предпочтительно трегалозы) и/или химических шаперонов (предпочтительно выбранных из фенилбутирата натрия, арабита и маннита). В других конкретных вариантах осуществления эти дополнительные лекарственные средства, ингибирующие реакцию клеток на стресс, выбирают из лекарственного средства или лекарственных средств, связывающихся с белком, кодируемым геном, выбранным из ACCN1, ADRA1A, ADRB2, AFADIN, AKT, ALDH2, ALOX12, AMPK, АРВА 1, АРВА 2 ВР, APG1, APG12, APOER2, ATG5, ATG7, ATM,АТР 1 А 1, АТР 2 А 3, АТР 2 В 1, ATP6V1C1, ATR, BACE1, BAD, BAX, BCAR1, BCL2, BECLIN1, гена BK каналов (KCNMA1, KCNMB1), BRCA1, CACNA1C, гена кальциневрина (CALCINEURIN), CD36, CD44,CDH1, CDH2, CDK5, CDKN1A, CHK1, CHRM1, CHRM2, CHRM3, CHRM4, CHRM5, CK1, CTNNA2,CTNNB1, CULLIN1, гена циклина (CYCLINE), DCC, DGKB, DGKH, DNAJB9, DOCK3, DRD2, EDNRA,ELAVL2, ERK1, ERK2, EZRIN, FAS, FKBP12, FKBP12,6, FOXO3A, FZ2, GADD45, GNPTAB, GPC5,GRK2, GRK5, GRP170, GRIN2B, GRIN3A, GSK3B, HAS1, HAS2, HAS3, HIPK2, HSPAS, HSP90B1,HSPA5, HTR1A, IDE, IMPDH1, IMPDH2, INS, INSR, IRF1, ITB1, ITGA1, ITGB1, ITPR1, JNK1, LAMA1,MAD1L1, МАО, МСС 1, MDM1, MME, гена моэзина (MOESIN), MTOR, гена NADPH-оксидазы (NADPHOXIDASE), NEDD9, NETRIN1, NFKB1, NHERF, NOS1, NOS2A, NOS3, PAELR, PAK1, PARK2, PCAF,PDE11A, PDE3A, PDE4D, PDE5, PDE6D, PI3K, PIK3C3, PKCA, PLCB1, PLD2, PLN, PML, POP2, PRDX5,PRDX6, PRKG1, PTPRG, PTPRM, PVRL1, RAC1, RACK1, гена радиксина (RADIXIN), RHOA, ROR2,RTN1, RYR3, SAPK3, SCN1A, SCN1B, SCNN1D, SCNN1G, SH3BP5, SIL1, SLC8A1, SLC8A2, SLC8A3,SLN, SNCA, SNCAIP, SORBS2, SORCS2, SRC, SYN1, THBS2, TP53, TP63, TRPC3, TRPC4, TRPC5,UNC5C, VPS15, WNT1A, WNT5A, WWOX, гена ксантиноксидазы (XANTHINE OXIDASE) и YES1, или модулирующих активность белков, кодируемых этими генами. Авторы изобретения установили, что указанные выше лекарственные средства и комбинации лекарственных средств обеспечивают улучшенное и синергическое биологическое действие, приводящее к эффективной коррекции или нормализации функциональной дисрегуляции, приводящей к AD и связанным нарушениям. Указанные выше соединения перечислены в приведенной ниже таблице вместе с их номером CAS. Как обсуждалось ранее, следует понимать, что данное изобретение относится к использованию указанных выше соединений, а также их любых фармацевтически приемлемых соли, гидрата, сложного эфира,-7 019571 простого эфира, изомеров, рацематов, конъюгатов или пролекарственных средств. Пролекарственные средства можно получать (например, связывая лекарственное средство с подходящим носителем) для осуществления лучшего контроля за фармакокинетическими параметрами лечения. Таблица 1 Примеры фармацевтически приемлемых солей включают фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот, фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований, фармацевтически приемлемые соли металлов, аммонийные и алкилированные аммонийные соли. Соли присоединения кислот включают соли неорганических кислот, а также органических кислот. Характерные примеры подходящих неорганических кислот включают соляную, бромисто-водородную, йодисто-водородную, фосфорную, серную, азотную кислоты и т.п. Характерные примеры подходящих органических кислот включают муравьиную, уксусную, трихлоруксусную, трифторуксусную, пропионовую, бензойную, коричную,лимонную, фумаровую, гликолевую, молочную, малеиновую, яблочную, малоновую, миндальную, щавелевую, пикриновую, пировиноградную, салициловую, янтарную, метансульфоновую, этансульфоновую, винную, аскорбиновую, памовую, бисметиленсалициловую, этандисульфоновую, глюконовую,цитраконовую, аспарагиновую, стеариновую, пальмитиновую, ЭДТА, гликолевую, п-аминобензойную,глутаминовую, бензолсульфоновую, п-толуолсульфоновую кислоты, сульфаты, нитраты, фосфаты, перхлораты, бораты, ацетаты, бензоаты, гидроксинафтоаты, глицерофосфаты, кетоглутараты и т.п. Дополнительные примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения неорганических или органических кислот перечислены, например, в J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, включенной в настоящий документ в качестве ссылки. Примеры солей металлов включают соли лития, натрия, калия, магния и т.п. Примеры аммонийных и алкилированных аммонийных солей включают аммонийные, метиламмонийные, диметиламмонийные, триметиламмонийные, этиламмонийные, гидроксиэтиламмонийные, диэтиламмонийные,бутиламмонийные, тетраметиламмонийные соли и т.п. Примеры органических оснований включают лизин, аргинин, гуанидин, диэтаноламин, холин и т.п. Терапию по изобретению можно проводить отдельно или в виде комбинации лекарственных средств и/или в комбинации с любой другой терапией, направленной на тот же путь или обладающей другими способами действия. Ее проводят и можно проводить в домашних условиях, в кабинете врача,клинике, амбулаторном отделении при больнице или в больнице так, чтобы врач мог наблюдать эффект терапии и проводить любые поправки, которые необходимы. В конкретном варианте осуществления композиции по данному изобретению дополнительно содержат по меньшей мере одно лекарственное средство, модулирующее ангиогенез, предпочтительно увеличивающее ангиогенез, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. Более предпочтительно лекарственные средства,модулирующие ангиогенез, выбраны из группы, состоящей из амбрисентана, аминокапроновой кислоты,аргатробана, балсалазида, бекаплермина, каберголина, клопидогреля, дезирудина, дигидроэрготамина,эплеренона, фенолдопама, флудрокортизона, гемфиброзила, гесперетина, лефлуномида, L-гистидина,лиотиронина, маримастата, мелоксикама, мепакрина, метазоламида, монтелукаста, нетилмицина, нитроглицерина, пириметамина, сульфизоксазола, сунитиниба, тиэтилперазина, тирофибана, топотекана и варфарина (см. табл. 2 ниже). Таблица 2 Альтернативно или в дополнение к предшествующему варианту осуществления композиции по данному изобретению могут дополнительно содержать по меньшей мере одно лекарственное средство,модулирующее функцию синапсов, предпочтительно улучшающее функцию синапсов, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. Более предпочтительные лекарственные средства, модулирующие функцию синапсов, выбраны из альфентанила, амилорида, амлодипина, азтреонама,баклофена, буклизина, буметанида, бупренорфина, лидокаина, хлорзоксазона, цинакальцета, дифиллина,элетриптана, эрготамина, флунитразепама, иматиниба, кетотифена, пегаптаниба, пентазоцина, фенобарбитала, прегабалина, пропилтиоурацила, темазепама, тиагабина, топирамата, триамтерена и вигабатрина В конкретном варианте осуществления изобретение относится к композиции, содержащей лекарственное средство, ингибирующее реакцию клеток на стресс, лекарственное средство, усиливающее ангиогенез, и лекарственное средство, улучшающее функцию синапсов, для одновременного, раздельного или последовательного введения. В другом конкретном варианте осуществления в изобретении применяют лекарственное средство,которое ингибирует по меньшей мере два из перечисленных выше видов активности. Кроме того, лекарственные средства, ингибирующие реакцию клеток на стресс, а также увеличивающие ангиогенез или улучшающие функцию синапсов, представляют собой особенно предпочтительные варианты осуществления данного изобретения. Композиции по изобретению, как правило, содержат один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов. Длительность терапии зависит от стадии подлежащего лечению заболевания, применяемой комбинации, возраста и состояния пациента и того, как пациент реагирует на лечение. Дозировку, частоту и способ введения каждого компонента комбинации можно контролировать независимо. Например, одно из лекарственных средств можно вводить перорально, тогда как второе лекар- 10019571 ственное средство можно вводить внутримышечно. Комбинированное лечение можно проводить периодическими циклами, включающими перерывы так, чтобы организм пациента имел шанс восстановиться от каких-либо пока еще непредвиденных побочных эффектов. Лекарственные средства также можно формулировать совместно так, чтобы посредством одного введения доставлять все лекарственные средства. Введение каждого лекарственного средства комбинации можно проводить любыми подходящими способами, которые приводят к концентрации лекарственного средства, которая, в комбинации с другим компонентом, способна к коррекции функционирования путей, вовлеченных в AD. Хотя возможно вводить активные ингредиенты комбинации в виде чистых химических веществ,предпочтительно предоставлять их в виде фармацевтической композиции, также означающей в данном контексте фармацевтический состав. Возможные композиции включают композиции, подходящие для перорального, ректального, топического (включая трансдермальное, буккальное и сублингвальное) или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и интрадермальное) введения. Более часто эти фармацевтические составы предписывают пациенту в "упаковках для пациентов",содержащих ряд единиц дозирования или другие средства для введения отмеренных стандартных доз для применения в течение конкретного периода лечения в одной упаковке, как правило, в блистерной упаковке. Упаковки для пациентов обладают преимуществом над традиционными рецептами, где фармацевт отделяет необходимое пациенту количество фармацевтического препарата из общего количества, тем,что пациенту всегда доступен вкладыш в упаковку, содержащийся в упаковке для пациента, обычно отсутствующий в традиционных рецептах. Показано, что включение вкладыша в упаковку улучшает соблюдение пациентом схемы лечения по инструкциям врача. Таким образом, изобретение дополнительно относится к фармацевтическому составу, как описано в настоящем документе ранее, в комбинации с упаковочным материалом, подходящим для указанных составов. В такой упаковке для пациента назначаемое применение состава для комбинаторного лечения можно узнать из инструкций, условий, указаний, согласований и/или других средств, помогающих использованию состава наиболее подходящим для лечения образом. Такие меры делают упаковку для пациента особенно подходящей и адаптированной для использования для лечения комбинацией по настоящему изобретению. Лекарственное средство может содержаться в подходящем количестве в любом подходящем веществе-носителе, и оно может присутствовать в количестве 1-99 мас.% от общей массы композиции. Композицию можно предоставлять в лекарственной форме, подходящей для перорального, парентерального(например, внутривенно, внутримышечно), ректального, кожного, назального, вагинального, ингаляционного, кожного (пластырь) или глазного способа введения. Таким образом, композиция может находиться в форме, например, таблеток, капсул, пилюль, порошков, гранулированных композиций, суспензий, эмульсий, растворов, гелей, включая гидрогели, паст, мазей, кремов, пластырей, пропиток, устройств с осмотической доставкой, суппозиториев, клизм, препаратов для инъекций, имплантатов, спреев или аэрозолей. Фармацевтические композиции можно формулировать в соответствии с традиционной фармацевтической практикой (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A.R.and J.C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York). Фармацевтические композиции по изобретению можно формулировать для высвобождения активного лекарственного средства, по существу, непосредственно после введения или в любой предопределенный момент или период времени после введения. Составы с контролируемым высвобождением включают: (i) составы, создающие, по существу, постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение длительного периода времени;(ii) составы, которые после предопределенного периода задержки создают, по существу, постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение длительного периода времени; (iii) составы, которые замедляют действие лекарственного средства в течение предопределенного периода времени, поддерживая относительно постоянный эффективный уровень лекарственного средства в организме с одновременным минимизированием нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с колебаниями уровня вещества активного лекарственного средства в плазме; (iv) составы, локализующие действие лекарственного средства, например, посредством пространственного помещения композиции с контролируемым высвобождением рядом с пораженной тканью или органом или непосредственно в них; и (v) составы, направляющие действие лекарственного средства с применением носителей или химических производных для доставки лекарственного средства к конкретному намеченному типу клеток. Введение лекарственных средств в форме состава с контролируемым высвобождением особенно предпочтительно в тех случаях, когда лекарственное средство, отдельно или в комбинации, имеет (i) узкий терапевтический индекс (т.е. различие между плазматической концентрацией, приводящей к опасным побочным эффектам или токсическим реакциям, и плазматической концентрацией, приводящей к терапевтическому эффекту, является небольшим; в основном, терапевтический индекс, TI, определяют как отношение средней летальной дозы (LD50) к средней эффективной дозе (ED50; (ii) узкое окно всасывания в желудочно-кишечном тракте или (iii) очень короткое биологическое время полужизни так, что для поддержания уровня в плазме на терапевтическом уровне необходимо частое дозирование в течение суток. Для достижения контролируемого высвобождения, при котором скорость высвобождения превосходит скорость метаболизма рассматриваемого лекарственного средства, можно осуществлять любой ряд стратегий. Контролируемого высвобождения можно достигать соответствующим выбором различных параметров и ингредиентов состава, включая, например, различные типы композиций и покрытий с контролируемым высвобождением. Таким образом, лекарственное средство формулируют с соответствующими эксципиентами в фармацевтическую композицию, которая после введения высвобождает лекарственное средство контролируемым образом (одно- или многодозовые таблетированные или капсулированные композиции, масляные растворы, суспензии, эмульсии, микрокапсулы, микросферы, наночастицы, пластыри и липосомы). Твердые лекарственные формы для перорального применения Составы для перорального применения включают таблетки, содержащие активный ингредиент(ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Эти эксципиенты могут представлять собой, например, инертные разбавители или наполнители (например, сахарозу, микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия,фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия); гранулирующие и дезинтегрирующие средства(например, производные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, кроскармеллозу натрия, альгинаты или альгиновую кислоту); связывающие средства (например, гуммиарабик, альгиновая кислота, альгинат натрия, желатин, крахмал, пептизированный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрий, метилцеллюлоза,гидроксипропилметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль) и смазки, способствующие скольжению средства и антиадгезивные средства (например, стеариновая кислота, диоксиды кремния или тальк). Другие фармацевтически приемлемые эксципиенты могут представлять собой красители, ароматизаторы, пластификаторы, увлажнители, буферные средства и т.п. Таблетки могут быть непокрытыми или их можно покрывать известными способами, необязательно, для задержки дезинтеграции и всасывания в желудочно-кишечном тракте и, таким образом, обеспечения пролонгированного действия в течение длительного периода. Покрытие можно подобрать для высвобождения вещества активного лекарственного средства с предопределенным профилем (например,для получения состава с контролируемым высвобождением), или его можно подобрать так, чтобы не происходило высвобождения вещества активного лекарственного средства до прохождения желудка(растворяющееся в кишечнике покрытие). Покрытие может представлять собой сахарную глазурь, пленочное покрытие (например, на основе гидроксипропилметилцеллюлозы, метилцеллюлозы, метилгидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, акрилатные сополимеры,полиэтиленгликоли и/или поливинилпирролидон) или растворяющееся в кишечнике покрытие (например, на основе сополимера метакриловой кислоты, ацетофталата целлюлозы, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетосукцината гидроксипропилметилцеллюлозы, фталата поливинилацетата, шеллака и/или этилцеллюлозы). Можно применять осуществляющее временную задержку вещество, например,такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Композиции твердых таблеток могут включать покрытия, адаптированные для защиты композиции от нежелательных химических изменений (например, химическое разрушение до высвобождения вещества активного лекарственного средства). Покрытие можно применять для твердой лекарственной формы способом, подобным тому, что описан в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology. Несколько лекарственных средств можно смешивать в таблетке вместе или их можно разделять. Например, первое лекарственное средство содержится внутри таблетки, а второе лекарственное средство находится снаружи таблетки так, что значительная часть второго лекарственного средства высвобождается до высвобождения первого лекарственного средства. Составы для перорального применения также можно предоставлять в форме жевательных таблеток или в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с твердым инертным разбавителем (например, картофельный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, карбонат кальция, фосфат кальция или каолин), или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, например парафиновым маслом или оливковым маслом. Порошки и гранулированные вещества можно получать с использованием ингредиентов, указанных выше для таблеток и капсул, общепринятым способом. Композиции с контролируемым высвобождением для перорального применения можно получать,например, для высвобождения активного лекарственного средства посредством регулирования растворения и/или диффузии вещества активного лекарственного средства. Контролируемого высвобождения путем растворения или диффузии можно добиться посредством соответствующего покрытия таблетки, капсулы, драже или гранулированного состава лекарственных средств или помещая лекарственное средство в соответствующий матрикс. Покрытие для контролируемого высвобождения может включать одно или несколько из покрывающих веществ, указанных выше,и/или, например, шеллак, пчелиный воск, гликовакс (glycowax), гидрированное касторовое масло, карна- 12019571 убский воск, стеариловый спирт, глицерилмоностеарат, глицерилдистеарат, пальмитостеарат глицерина,этилцеллюлозу, акриловые смолы, dl-полимолочную кислоту, ацетобутират целлюлозы, поливинилхлорид, поливинилацетат, винилпирролидон, полиэтилен, полиметакрилат, метилметакрилат, 2 гидроксиметакрилат, метакрилатные гидрогели, 1,3-бутиленгликоль, этиленгликольметакрилат и/или полиэтиленгликоли. В составе матрикса для контролируемого высвобождения вещество матрикса также может включать, например, гидратированную метилцеллюлозу, карнаубский воск и стеариловый спирт,карбопол 934, силикон, глицерилтристеарат, метилакрилат-метилметакрилат, поливинилхлорид, полиэтилен и/или галогенированный фторуглерод. Композиция с контролируемым высвобождением, содержащая одно или несколько лекарственных средств заявленных комбинаций, также может находиться в форме плавающей таблетки или капсулы(т.е. таблетки или капсулы, которые после перорального введения плавают сверху содержимого желудка в течение определенного периода времени). Состав плавающей таблетки лекарственных(ого) средств(а) можно получать, гранулируя смесь лекарственных(ого) средств(а) с эксципиентами и 20-75% мас./мас. гидроколоидов, таких как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Затем полученные гранулы можно прессовать в таблетки. При контакте с желудочным соком таблетка, по существу, формирует около своей поверхности барьер из водонепроницаемого геля. Этот барьер из геля участвует в поддержании плотности менее чем у желудочного сока, позволяя, таким образом, таблетке оставаться плавать на его поверхности. Жидкости для перорального введения Удобными лекарственными формами для перорального введения являются порошки, диспергируемые порошки или гранулы, подходящие для получения водной суспензии посредством добавления воды. Состав в виде суспензии предоставляет активный ингредиент в смеси с диспергирующим средством или увлажнителем, суспендирующим средством и одним или несколькими консервантами. Подходящие суспендирующие средства представляют собой, например, карбоксиметилцеллюлозу натрия, метилцеллюлозу, альгинат натрия и т.п. Парентеральные композиции Фармацевтическую композицию также можно вводить парентерально посредством инъекции, инфузии или имплантации (внутривенно, внутримышечно, подкожно или т.п.) в лекарственных формах,составах или посредством подходящих средств доставки или имплантатов, содержащих традиционные,нетоксические фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные средства. Состав и получение препаратов таких композиций хорошо известны специалистам в области фармацевтических составов. Композиции для парентерального применения можно предоставлять в стандартных лекарственных формах (например, в ампулах с однократной дозой) или во флаконах, содержащих несколько доз, в которые можно добавлять подходящий консервант (см. ниже). Композиция может находиться в форме раствора, суспензии, эмульсии, инфузионного устройства или средства доставки для имплантации или ее можно предоставлять в виде сухого порошка для восстановления водой или другим подходящим носителем до использования. Кроме активных лекарственных средств (а), композиция может включать подходящие, приемлемые для парентерального применения носители и/или эксципиенты. Активное лекарственное средство(а) можно помещать в микросферы, микрокапсулы, наночастицы, липосомы или т.п. для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, солюбилизирующие,стабилизирующие, регулирующие рН средства и/или диспергирующие средства. Фармацевтические композиции по изобретению могут находиться в форме, подходящей для стерильной инъекции. Для получения такой композиции подходящее активное лекарственное средство(а) растворяют или суспендируют в приемлемом для парентерального применения жидком носителе. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно применять, находятся вода, вода с доведенным до подходящего рН добавлением подходящего количества соляной кислоты, гидроксида натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиол, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Водный состав также может содержать один или несколько консервантов (например, метил, этил или н-пропил пгидроксибензоат). В тех случаях, когда одно из лекарственных средств умеренно или слаборастворимо в воде, можно добавлять увеличивающее растворение средство или солюбилизатор, или растворитель может включать 10-60% мас./мас. пропиленгликоля или т.п. Парентеральные композиции с контролируемым высвобождением могут находиться в форме водных суспензий, микросфер, микрокапсул, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий или эмульсий. Альтернативно активное лекарственное средство(а) можно помещать в биологически совместимые носители, липосомы, наночастицы, имплантаты или инфузионные устройства. Вещества для применения в получении микросфер и/или микрокапсул представляют собой, например, биоразрушаемые/биоэродируемые полимеры, такие как полигалактин, поли(изобутилцианоакрилат), поли(2 гидроксиэтил-L-глутамин). Биологически совместимые носители, которые можно использовать при формулировании парентерального состава с контролируемым высвобождением, представляют собой углеводы(например, декстраны), белки (например, альбумин), липопротеины или антитела. Вещества для применения в имплантатах могут не являться биоразрушаемыми (например, полидиметилсилоксан) или биоэродируемыми (например, поли(капролактон), поли(гликолевая кислота) или поли(сложные ортоэфиры. Ректальные композиции Для ректального применения подходящие лекарственные формы для композиции включают суппозитории (эмульсионного или суспензионного типа) и ректальные желатиновые капсулы (растворы или суспензии). В типичном составе суппозитория активное лекарственное средство(а) комбинируют с соответствующей фармацевтически приемлемой основой суппозитория, такой как масло какао, этерифицированные жирные кислоты, глицеринированный желатин и различные водорастворимые или диспергируемые основания, такие как полиэтиленгликоли. Можно добавлять различные добавки, усилители или поверхностно-активные вещества. Вводимые через кожу и топические композиции Фармацевтические композиции также можно вводить топически на кожу для чрескожного всасывания в лекарственных формах или составах, содержащих традиционные нетоксические фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, включая микросферы и липосомы. Составы включают кремы, мази, лосьоны, линименты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, карандаши, спреи, пасты, пластыри и другие разновидности систем трансдермальной доставки лекарственных средств. Фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты могут включать эмульгаторы, антиоксиданты, буферные средства,консерванты, увлажнители, усилители впитывания, хелатирующие средства, формирующие гель средства, мазевые основы, отдушки и средства защиты кожи. Эмульгаторы могут представлять собой природные камеди (например, гуммиарабик или трагакантовую камедь). Консерванты, увлажнители, усилители впитывания могут представлять собой парабены, такие как метил- или пропил-п-гидроксибензоат и хлорид бензалкония, глицерин, пропиленгликоль, мочевина и т.д. Фармацевтические композиции, описанные выше для топического введения на кожу, также можно использовать применительно к топическому введению на часть организма, подлежащую лечению, или рядом с ней. Композиции можно адаптировать для непосредственного применения или для применения посредством специальных средств доставки лекарственных средств, таких как повязки или, альтернативно, пластыри, прокладки, губки, полоски или другие формы подходящего эластичного материала. Дозировки и длительность лечения Следует понимать, что лекарственные средства комбинации можно вводить одновременно, в одном или различных фармацевтических составах или последовательно. Если производится последовательное введение, задержка введения второго (или дополнительного) активного ингредиента не должна быть такой, чтобы пропало преимущество эффективного действия комбинации активных ингредиентов. Минимальное требование для комбинации по данному описанию состоит в том, что комбинация должна быть предназначена для комбинированного применения с преимуществом эффективного действия комбинации активных ингредиентов. Назначаемое применение комбинации можно узнать из условий, указаний,согласований и/или других средств, помогающих использованию комбинации по изобретению. Хотя активные лекарственные средства по настоящему изобретению можно вводить дробными дозами, например два или три раза в сутки, предпочтительной является одна суточная доза каждого лекарственного средства в комбинации, где наиболее предпочтительной является одна суточная доза всех лекарственных средств в одной фармацевтической композиции (стандартная лекарственная форма). Термин "стандартная лекарственная форма" относится к физически дискретным единицам (таким как капсулы, таблетки или наполняемый цилиндр шприца), подходящим в качестве однократных доз для людей, где каждая единица содержит предопределенное количество активного вещества или веществ,рассчитанных для оказания желаемого терапевтического эффекта, совместно с необходимым фармацевтическим носителем. Введение можно проводить от одного до нескольких раз в сутки в течение от нескольких суток до нескольких лет, и оно может продолжаться даже в течение всей жизни пациента. В большинстве случаев показано постоянное или, по меньшей мере, периодически повторяющееся долговременное введение. Кроме того, на применяемые дозы может влиять фармакогеномная (влияние генотипа на фармакокинетический, фармакодинамический профили или профиль эффективности лечения) информация о конкретном пациенте. За исключением того, когда в ответ на особенно поражающие случаи болезни AD могут требоваться более высокие дозы, предпочтительная доза каждого лекарственного средства в комбинации, как правило, лежит в диапазоне доз, не превышающих доз, как правило, прописываемых для долговременного поддерживающего лечения, или доз, для которых доказана безопасность в крупномасштабных клинических исследованиях 3 фазы. Например, наиболее предпочтительная доза соответствует количествам от 1 до 10% количеств, как правило, прописываемых для долговременного поддерживающего лечения: фенформин перорально приблизительно от 0,5 до 5 мг в сутки и рифабутин перорально приблизительно от 6 до 60 мг в сутки; фенформин перорально приблизительно от 0,5 до 5 мг в сутки и арабит перорально приблизительно от 50 до 500 мг в сутки; тадалафил перорально приблизительно от 0,05 до 0,5 мг в сутки и омепразол перорально приблизительно от 0,4 до 4 мг в сутки; цилостазол перорально приблизительно от 1 до 10 мг в сутки и омепразол перорально приблизительно от 0,4 до 4 мг в сутки; фенформин перорально приблизительно от 0,5 до 5 мг в сутки и дазатиниб перорально приблизительно от 1 до 10 мг в сутки; дазатиниб перорально приблизительно от 1 до 10 мг в сутки и акампросат перорально приблизительно от 7 до 70 мг трижды в сутки; дазатиниб перорально приблизительно от 1 до 10 мг в сутки и тербинафин перорально приблизительно от 2,5 до 25 мг однократно или дважды в сутки. Следует понимать, что фактически вводимое количество лекарственного средства определяет лечащий врач в зависимости от соответствующих обстоятельств, включающих состояние или состояния,подлежащие лечению, точной композиции для введения, возраст, массу и ответ индивидуального пациента, тяжесть симптомов пациента и выбранный способ введения. Таким образом, указанные выше диапазоны доз предназначены для предоставления общего руководства и помощи для указаний по настоящему документу, но не предназначены для ограничения объема изобретения. Следующие примеры приведены с целью иллюстрации, а не в порядке ограничения. Примеры Тестирование лекарственных средств с использованием анализов in vitro Анализы in vitro представляют собой эффективный способ для улучшения лекарственных средств и их комбинаций, действующих на пути, вовлеченные в AD. Лекарственные средства по настоящему изобретению и их комбинации оптимизируют по действию в специфичных анализах in vitro, адаптированных в соответствии с сетью AD, идентифицированной в настоящем изобретении. Затем эти молекулы или их комбинации тестируют в модели AD in vivo. Эти тесты in vitro начинаются с изучения уровня экспрессии гена АРР с последующими анализами нейропротективного потенциала лекарственных средств для клеток, подвергаемых токсическому действию белка А. Лекарственные средства для вовлеченных путей тестируют индивидуально с последующими анализами их комбинаторного действия. На последующем этапе наиболее эффективные комбинации, действующие на мишени в отдельных путях, комбинируют и тестируют в тестах нейропротективности. Регуляция экспрессии АРР представляет собой важную точку для лечения AD, так как она расположена до образования конкретных токсических фрагментов и их действия на множество систем головного мозга, в конечном счете, приводя к разрушению когнитивных функций. При AD белок формирует агрегаты нерастворимых -складчатых слоев фибриллярного белка А (амилоида). По-видимому, конформационные изменения из растворимой в фибриллярную форму являются самопроизвольным событием, частота которого увеличивается с увеличением концентраций А так, что любая продукция увеличенных количеств А по сравнению с нормальными (или продукция более крупных, менее растворимых форм А) приводит к усилению формирования бляшек. После начала формирования бляшки другие молекулы могут взаимодействовать с образующейся бляшкой с получением, в конечном счете, зрелой бляшки с ассоциированными с нею областями гибели нервных клеток. Учитывая это, авторы изобретения отдали приоритет тестированию действия лекарственных средств на жизнеспособность клеток, подвергаемых действию -амилоидного белка. Культура клеток PC 12 Клетки PC 12 (феохромоцитома крыс, номер АТСС: CRL-1721) из АТСС (АТСС CRL-1721) быстро размораживали в воде с температурой 37 С. Супернатант сразу же помещали в 9 мл "среды для пролиферации РС 12", содержащей модифицированную Дульбекко среду Игла DMEM-F12 (номер Pan Biotech:P04-41450) с 15% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки (номер Invitrogen: 16050-130),2,5% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS; номер Invitrogen: 16000-036), 1% пенициллина 10000 Ед/мл и стрептомицина 10 мг/мл (PS; номер Pan Biotech: P06-07100) и 1% L-глутамина 200 мМ (номерPan Biotech: P04-80100). Клетки центрифугировали (800 об./мин, 4 С в течение 5 мин) и добавляли в 5 мл "среды для пролиферации РС 12", жизнеспособные клетки подсчитывали с применением счетной камеры Малассе с применением теста исключения нейтрального красного (Sigma). Затем клетки сеяли при 3104 клеток на 1 см 2 в "среде для пролиферации РС 12" в 75 см 2 пластиковые флаконы (Greiner Ref: 658175), предварительно покрытые поли-L-лизином (10 мкг/мл, номер Sigma:P2636). Среду меняли через сутки. Через 3 суток культивирования, когда клетки достигали 80% конфлюентности, их отмывали в HBSS без кальция и магния (номер Pan Biotech: P06-33500) и инкубировали в ЭДТА с трипсином (0,05%, номер Pan Biotech: Р 10-023100). Ферментативную реакцию останавливали средой для пролиферации РС 12 с добавлением 0,5 мг/мл ДНКазы 1 степени 2 (номер Pan Biotech: T6037780100). Затем РС 12 центрифугировали (800 об//мин при 4 С в течение 10 мин) и клетки высевали при плотности 2,9104 на 1 см 2 в 175 см 2 флакон для культивирования (номер Greiner: 661195), предварительно покрытый поли-L-лизином. Интоксикация и анализ жизнеспособности с МТТ Клетки РС 12 (пассаж 2) высевают, исходя из 3300 клеток на 1 см 2 в 96-луночные планшеты (номер Greiner: 655180), предварительно покрытые нейробазальной средой (Invitrogen, номер: 21103049) с поли-L-лизином (Sigma), содержащей В 27 (2%, Invitrogen, номер: 21103049), пенициллин (50 Ед/мл),стрептомицин (50 мкг/мл) и глутамин (1%) и 50 нг/мл NGF (Sigma номер: N1408). NGF позволяет РС 12 дифференцироваться в клетки, подобные симпатическим нейронам. Через 5 суток культивирования среду заменяют нейробазальной средой с добавлением NGF (50 нг/мл), В 27 без антиоксиданта, глутамина и антибиотиков. Через 24 ч клетки инкубируют в течение 1 ч с лекарственными средствами при 5 концентрациях, по 6 лунок на условие. Через 1 ч предварительной инкубации клетки интоксицируют 10 мкМ -амилоида (25-35; Sigma) вместе с добавлением лекарственных средств в среде для культивирования клеток. Через 24 ч клетки однократно отмывают PBS (Pan Biotech, номер: Р 04-36100) и жизнеспособность клеток РС 12 оценивают посредством теста жизнеспособности с МТТ (3-[4,5-диметилтиазолил-2-ил]-2,5-дифенилтетразолийбромид). Клеточная культура кортикальных нейронов Первичные кортикальные нейроны крысы культивируют, как описано в Singer et al., 1999. В кратком изложении беременных самок крыс на 15 сутки беременности умерщвляют посредством смещения шейных позвонков (крысы Wistar; Janvier) и из матки выделяют эмбрионы. Выделяют кору и помещают в охлаждаемую на ледяной бане среду Лейбовица (LI5; Invitrogen), содержащую 1% пенициллинастрептомицина (PS; Invitrogen) и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA; Sigma). Кору подвергают диссоциации посредством трипсинизации в течение 20 мин при 37 С (трипсин-ЭДТА IX; Invitrogen, разбавленный в PBS без кальция и магния). Реакцию останавливают добавлением модифицированной Дульбекко среды Игла (DMEM; Invitrogen), содержащей ДНКазу I степени II (0,1 мг/мл; Roche Diagnostic) и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS; Invitrogen). Затем клетки механически диссоциируют посредством 3 пассажей через 10 мл пипетку. Затем клетки центрифугируют при 180g в течение 10 мин при 10 С. Супернатант удаляют и клетки осадка ресуспендируют в среде определенного состава для культивирования, состоящей из Neurobasal (Invitrogen), дополненной В 27 (2%; Invitrogen), L-глутамином(0,2 мМ; Invitrogen), 1% раствором PS и 10 нг/мл нейротрофического фактора головного мозга (BDNF,Pan Biotech). Жизнеспособные клетки подсчитывают в цитометре Нейбауэра с применением теста исключения трипанового синего. Клетки высевают при плотности 30000 клетки/лунку в 96-луночные планшеты (лунки предварительно покрыты поли-L-лизином (10 мкг/мл; Sigma и культивируют при 37 С во влажной атмосфере воздуха (95%)/СО 2 (5%). Через 6 суток культивирования клетки инкубируют с лекарственными средствами (5 концентраций). Через 1 ч клетки подвергают интоксикации 20 мкМ -амилоида (25-35; Sigma) в среде определенного состава без BDNF, но с лекарственными средствами. Кортикальные нейроны подвергают интоксикации в течение 2 суток. BDNF (10 нг/мл) используют в качестве положительного (нейропротективного) контроля. Анализ активности лактатдегидрогеназы (LDH) Через 2 суток культивирования супернатант собирают и анализируют с применением набора Cytotoxicity Detection Kit (LDH, Roche Applied Sciences). Данный колориметрический анализ для количественного анализа гибели клеток основан на измерении активности лактатдегидрогеназы (LDH), высвобождаемой из цитозоля погибших клеток в супернатант. Оптическую плотность (DO) определяют на спектрофотометре при длине волны 492 нм на мультисканирующем устройстве (Thermo, Ref Ascent). Результаты выражают в виде процента жизнеспособных клеток по сравнению с отрицательным контролем (носителем). Результаты Результаты, представленные на фиг. 1 и 2, получены на двух независимых культурах, 6 лунок на условие. Все значения выражены в виде среднегостандартная ошибка среднего. На исходных данных проводили анализ по двустороннему критерию Стьюдента. Результаты выражают в виде процента длины нейритов по сравнению с контролем (носителем). За один час перед интоксикацией 10 мкМ А 25-35, которая длится 24 ч, дифференцированные под действием NGF клетки РС 12 инкубируют с лекарственными средствами. Через сутки после этой инкубации количественно определяют жизнеспособность дифференцированных под действием NGF PC 12 с использованием анализа с МТТ. Авторы изобретения наблюдали,что 2 лекарственных средства оказывали явное нейропротективное действие в отношении этой интоксикации А 25-35 (фиг. 1). За час перед интоксикацией 20 мкМ А 25-35, которая длится 2 суток, первичные кортикальные нейроны крыс инкубируют с лекарственными средствами. Через двое суток после этой инкубации количественно определяют высвобождение LDH в среду, отражающее уровень гибели клеток. Авторы изобретения наблюдали, что 3 лекарственных средства оказывали явное протективное действие в отношении этой интоксикации А 25-35 (фиг. 2). Тесты in vivo Соединения и их комбинации, активные в тестах in vitro, тестировали в модель болезни Альцгеймера in vivo. Наиболее надежным средством стимуляции отложения А в головном мозге трансгенных мышей, которое служило в качестве моделей болезни AD в многочисленных исследованиях, служила сверхэкспрессия трансгенов сцепленного с болезнью Альцгеймера мутантного предшественника белка амилоида(АРР) человека. По мере взросления у этих мутантных по АРР мышей развивается сильная патология амилоида и другие AD-подобные признаки, включая сниженную плотность синапсов, реактивный глиоз и некоторые когнитивные расстройства. Во многих моделях на мутантных по АРР мышах подтверждено мало доказательств явной потери нейронов и патологии нейрофибриллярных клубков(NFT). Мыши, гемизиготные по этому трансгену BRI-A42, жизнеспособны и фертильны с нормальной продолжительностью жизни. мРНК трансгенного BRI-А 42 экспрессируется с профилем, характерным для промотора прионного белка мыши; наибольшие уровни экспрессии трансгена выявляют в мозжечковых гранулоцитах и гиппокампе, за которыми следуют кора, варолиев мост, таламус и средний мозг. В трансгенном слитном белке А 1-42 слит с С-концом белка BRI по фуриноподобному участку расщепления так, что расщепление приводит к эффективной секреции А 1-42 в просвет сосуда или внеклеточное пространство. Таким образом, эти мыши специфично экспрессируют изоформу А 1-42. У гемизиготных поBRI-А 42 мышей с возрастом накапливается не растворимый в детергенте амилоид- и в мозжечке развиваются бляшки с ядром уже в возрасте 3 месяцев. Развитие патологии переднего мозга происходит позже, внеклеточные бляшки А не присутствуют постоянно в гиппокампе и энторинальной/пириформной коре до возраста 12 месяцев. Отложения амилоида(бляшки с ядром) можно наблюдать уже в 3 месяца в молекулярном слое мозжечка трансгенных мышей, и они с возрастом становятся более четко выраженными; эпизодические внеклеточные бляшки наблюдают в энторинальной/пириформной коре и гиппокампе в возрасте 6 месяцев, но систематически их не наблюдают до возраста 12 месяцев. Мыши с очень большим возрастом демонстрируют обширную патологию с бляшками с ядром и с диффузными бляшками в мозжечке, коре и гиппокампе и в обонятельной луковице. Во внеклеточных амилоидных бляшках наблюдают плотные амилоидные ядра с исходящими из центра фибриллами; на периферии этих бляшек наблюдают множество пучков дистрофичных нейритов. С бляшками ассоциирован реактивный глиоз. Терапия лекарственными средствами Трансгенных по Tg (Prnp-ITM2B/APP69542) A12E мышей mc (43) получали из лаборатории Jackson Laboratory (http://jaxmice.jax.org/strain/007002.html). Мышей-основателей с наивысшими уровнями А 42 в плазме, линию BRI-А 42 А (12 е), поддерживали на основе скрещивания с В 6 С 3. Взрослые самцы трансгенных мышей имели свободный доступ к пище и воде. В соответствии с одобренным InstitutionalAnimal Care and Use Committee протоколом мышей взвешивали и им однократно в сутки в течение от 10 до 20 последовательных недель и/п вводили или принудительно скармливали контрольный раствор (плацебо) или лекарственные средства РХТ, полученные в различных дозах. Анализ выживаемости Коэффициент выживаемости анализировали с использованием способов Каплана-Мейера. Для всех тестов попарного множественного сравнения использовали способы Холма-Сидака (апостериорные). Все случаи гибели от посторонних причин исключали. Все сравнения проводили между потомством одного помета для ограничения любых потенциально смещающих эффектов вследствие различий фоновой линии. Поведенческие тесты Поведенческие тесты разрабатывали и проводили в соответствии со способами, опубликованными различными авторами (44-47). Пространственное обучение и память в водном лабиринте Морриса (MWM) Этот эксперимент проводят в круглом бассейне диаметром 90 см, сделанном из белого пластика и заполненном окрашенной в молочно-белый цвет водой. На 0,5 см ниже уровня воды затопляли платформу для выхода диаметром 8 см, сделанную из прозрачного пластика. Зрительные ориентиры обеспечивают посредством различных геометрических форм, напечатанных на листах формата А 4 и размещенных на четырех окружающих стенах (дистанция от бассейна составляла от 50 до 70 см). Каждой мыши давали четыре попытки ежедневно (интервал между попытками составлял от 5 до 7 мин, всего 16 попыток) в течение 4 суток. Каждую попытку проводили с одной из четырех различных стартовых точек. За движением мышей наблюдали с применением программного обеспечения Videotrack Software (View Point). Определяли время, затраченное на нахождение платформы для выхода (задержка выхода до 60 с). После нахождения платформы мыши позволяли сидеть на ней в течение 15 с. Мышей, которые не смогли найти платформу в течение 60 с, направляли к ней и позволяли оставаться на ней в течение 15 с. В таком случае в запись помещали задержку в 60 с. Для статистического анализа все четыре попытки в сутки усредняли,за исключением первой попытки на сутки 1. На сутки 9 (через 5 суток после последней тренировки) мышам предоставляли 60-секундную пробную попытку, в которой платформу убирали и мышам позволяли ее искать. Время, которое каждое животное затрачивало в каждом квадранте, записывали (время поиска в квадранте). Использовали несколько групп самцов мышей на 3, 7, 10 и 12 месяцах. Некоторое небольшое количество мышей продемонстрировало замирание (например, неподвижное нахождение в воде и отказ плавать), что сильно препятствовало тесту, этих животных исключали из анализа. Все поведенческие тесты проводили в тихих условиях с уменьшенной интенсивностью света. Тест кратковременной памяти в водном лабиринте с радиальными лучами Эту основанную на когнитивных способностях сенситивную меру кратковременной памяти получали с помощью устройства, состоящего из заполненного водой бассейна диаметром 100 см (также используемого для водного лабиринта Морриса и задач распознавания платформы), оборудованного алюминиевой вставкой с получением шести радиально располагающихся плавательных дорожек. Тестирование состоит из пяти попыток длительностью 1 мин за ежедневный сеанс в течение 9-12 последовательных суток. В начале каждого сеанса в конце одной из плавательных дорожек (случайно выбираемой,ежедневно изменяемой) помещали прозрачную затопленную платформу. Для каждой из первых четырех попыток обнаружения животное помещали на одну из дорожек, не содержащих платформы (в случайной последовательности), и позволяли ему искать платформу. В течение 60 с попытки каждый раз, когда животное попадало на дорожку, не содержащую платформы, ее осторожно возвращали в ее исходное положение и ошибку записывали. Через четыре попытки животному позволяли отдохнуть в течение 30 мин с последующей пятой (ретенция) попыткой, которую начинали в последней плавательной дорожке, не содержащей платформы. Для каждой попытки записывают количество ошибок (некорректный выбор дорожки) и задержку выхода (время достижения платформы, максимально 60 с). Узнавание и запоминание пространственных ориентиров в тесте на круговой платформе Этот тест с задачей на основе когнитивных способностей проводили с помощью устройства, состоящего из круговой платформы диаметром 69 см с 16 отверстиями для "бегства", эквидистантно расположенными по окружности. Под одним из отверстий располагают укрытие для бегства и платформу окружают черной занавеской, на которой располагаются различные визуальные ориентиры. Животное вначале одной 5 мин попытки помещают в центр платформы и предъявляют негативные стимулы (яркий свет, поток воздуха из вентилятора). Записывают общее количество ошибок (засовывание головы в отверстия без укрытия) и задержку выхода (время до достижения отверстия с укрытием). Способность к распознаванию в тесте распознавания платформы Задача поиска на основе когнитивных способностей оценивает способность к идентификации и распознаванию объектов. Объект-мишень состоит из круговой платформы диаметром 9 см, с нанесенным черным знаком 1040 см, расположенную на 0,8 см выше поверхности воды в круговом бассейне диаметром 100 см. Тестирование состоит из четырех 60 с попыток в сутки в каждые из четырех последовательных суток. В каждые сутки объект-мишень помещают в различные квадранты бассейна для каждой попытки, и животное выпускают в том же расположении окружности бассейна для всех четырех попыток. Для каждой попытки записывают общую задержку (максимум 60 с). Модифицированный тест Ирвина Для определения того, демонстрирует ли какая-либо из мышей физиологическую, поведенческую или сенсомоторную недостаточность, связанную с ее генотипом, использовали комплексный скрининг,модифицированный на основе теста Иривина. Для исследования двигательных навыков, координации и мышечной силы мышей помещали на проволоку, которую натягивали между двумя столбиками высотой 30 см и оценивали их способность балансировать на проволоке. Кроме того, определяют их способность хвататься и висеть на проволоке всеми четырьмя лапами в течение по меньшей мере 5 с и забираться на проволоку. Количественное определение накопления амилоида в сосудах Для количественного определения церебральной амилоидной ангиопатии (САА) проводили иммуноокрашивание погруженных в парафин срезов толщиной 5 мкм через мягкую и паутинную оболочки теменной коры или коры мозжечка с интервалами 30 мкм биотинилированным антителом Ab9 (антитело к AJ31-16, 1:500) в течение ночи при 4 С (n=5-7 мышей на генотип в каждой возрастной группе, n=6 срезов на мышь). Положительно окрашенные кровеносные сосуды оценивали визуально с использованием модифицированной системы оценки Вонсаттеля (48). Показатель тяжести САА рассчитывают, умножая количество сосудов с САА на степень тяжести САА. Гистология: иммуногистохимия и иммунофлуоресценция Мышей Tg и WT в возрасте от 3 до 12 месяцев анестезируют и транскардиально последовательно перфузируют 0,9% NaCl и 4% параформальдегидом в 0,1 моль/л фосфатно-солевом буфере (PBS) (рН 7,4) или 10% формалином и 4% параформальдегидом в 0,1 моль/л PBS (рН 7,4). Головной и спинной мозг выделяли и хранили в 4% параформальдегиде. Некоторые образцы помещали в парафин и нарезали на скользящем микротоме с толщиной 10 мкм. В криостате нарезали криосрезы (14 мкм) и помещали на покрытые хромовыми квасцами предметные стекла. Эндогенную пероксидазу гасят обработкой среза метанолом, содержащим 0,3% Н 2 О 2, в течение 30 мин. Срезы блокируют в 10% лошадиной сыворотке. Используют первичные антитела и инкубируют в течение ночи при 4 С в присутствии 1% лошадиной сыворотки. Все вторичные биотинилированные или конъюгированные с флуоресцеином-, техасским красным и АМСА антитела, флуорохромы, набор ABC и 3,3'-диаминобензидин в качестве хромогена для выявления активности пероксидазы получены из Vector Laboratories. Инкубацию с вторичным антителом проводят при комнатной температуре в течение 1 ч. Все этапы отмывки (3-10 мин) и разбавления антител проводят с применением фосфатно-солевого буфера (0,1 моль/л PBS, рН 7,4) или забуференного Tris физиологического раствора (0,01 моль/л Tris, 0,15 моль/л NaCl, рН 7,4). Инкубацию с комплексом ABC и детекцию 3,3'-диаминобензидином проводят по инструкции производителя. Контрастное окрашивание гематоксилином проводят стандартными способами. Для каждого определения используют минимум три мыши на генотип, возраст и пол (49). Получение экстрактов головного мозга Головной мозг быстро извлекали на льду между 90 и 120 мин после последней инъекции и замораживали до -80 С. После замораживания правую полусферу головного мозга каждой мыши взвешивали. Анализ массы полусферы посредством среднего абсолютного отклонения позволил авторам изобретения исключить образцы за пределами 4 средних абсолютных отклонений от остального набора. Полусферы головного мозга гомогенизировали и по инструкциям производителя получали содержащие общий белок клеточные лизаты для наборов ферментативного анализа (RD Systems, Inc.). В кратком изложении, кору головного мозга гомогенизируют в 800 мкл низкосолевого раствора, содержащего 1 буфер для экстракции (RD kit), и инкубируют на льду в течение 10 мин. Затем гомогенаты центрифугируют при 13000 хд в течение 15 мин при 4 С. Концентрацию белка в каждом образце оценивают в соответствии с биуретовым анализом (Pierce). Уровни АРР, А 40 и А 42 измеряют посредством способов вестерниммуноблоттинга и сэндвич-ELISA, соответственно, как описано (41). Кроме того, в тех же экстрактах можно измерять активность -, - и -секретаз. Анализ уровней общего АРР в экстрактах коры головного мозга мыши В каждый гель помещали экстракты головного мозга с равным количеством белка, 30 мкг на дорожку на образец. Каждый гель содержал восемь видов обработки: контроль; лекарственное средство 1 в дозе 7,5 мг/кг и лекарственное средство 2 в нескольких дозах. Для минимизации различий между гелями каждый гель содержал три набора всех групп обработки. Каждый блот метят антителом 22 С 11. Каждый блот также метят антителом к -актину для нормализации эффективности переноса. Интенсивность сигнала полосы АРР нормализуют на сигнал -актина. В каждый гель/блот помещают два образца "контроля" для тестирования на различия от блота к блоту. Анализ блотов проводят двумя способами: по блотам(n=3) для тестирования различий от геля к гелю; и с объединением блотов (n=9 или 10), как описано (5051). Анализ по блотам с n=3 показал ту же тенденцию, что и конечный анализ с n=9 или 10. Представлены результаты комбинированного анализа. Сэндвич-ELISA А При ELISA A головного мозга уровни А переднего мозга и заднего мозга определяют независимо, а обонятельную луковицу исключают из анализа. Для анализа A плазмы собирают кровь в покрытые ЭДТА пробирки после пункции сердца. Образцы крови центрифугируют при 3000 об./мин в течение 10 мин при 4 С, и плазму разделяют на аликвоты и хранят при -80 С до использования. Уровни А определяют посредством специфичного к концам сэндвич-ELISA с использованием Ab9 (Ab к А 1-16) в качестве иммобилизующего Ab для А 40, 13.1.1-HRP (А к А 35-40) в качестве детектирующего Ab для А 40, 2.1.3 (А к А 35-42) в качестве иммобилизующего Ab для А 42 и Ab9-HRP в качестве детектирующего Ab для А 42 (n=5-7 мышей на генотип в каждой возрастной группе). Уровни A нормализуют относительно предыдущих результатов с использованием тех же групп мышей в качестве внутренних контролей для минимизации возможной вариабельности ELISA, как описано (41). Вестерн-блоттинг Быстрозамороженные образцы переднего мозга гомогенизируют в буфере для радиоиммунопреципитационного анализа (RIPA) (Boston BioProducts, Worcester, MA) с 1% смесью ингибиторов протеаз(Roche). Гомогенат центрифугируют при 100000 g в течение 1 ч при 4 С. Концентрацию белка в супернатантах определяют с использованием анализа белка ВСА (Pierce). Образцы белка (20 мкг) разделяют в гелях Bis-Tris 12% XT или Bis-Tris 4-12% XT (Bio-Rad, Hercules, CA) и переносят на 0,2 мкм нитроцеллюлозные мембраны. Блоты дважды подвергают микроволновой обработке в течение 2 мин в 0,1 М PBS и метят Ab 82 Е 1 (антитело к AJ31-16, 1:1000; IBL, Gunma, Japan) и антителом к С-концевым 20 аминокислотам АРР (1:1000), как описано (41). Блоты отмывают и повторно метят антителом к -актину(1:1000; Sigma) в качестве контроля загрузки. Относительную интенсивность полос измеряют с применением программного обеспечения ImageJ. Количественное определение отложения паренхимального амилоида Полушария фиксируют погружением в 10% формалин и обрабатывают для заливки в парафин. Тканевые срезы головного мозга (5 мкм) подвергали иммуноокрашиванию антителом (Ab) к общему A. Срезы контрастно окрашивали гематоксилином. Для количественного определения использовали шесть срезов на мозг через гиппокамп, пириформную кору (брегма, от -1,70 до -2,80 мм) или мозжечок (околоклочок, петлевидная ножка и простые дольки; брегма, от -5,40 - -6,36 мм) (n=5-7 на генотип в каждой возрастной группе). Массу бляшек А определяют с применением программного обеспечения Meta- 19019571Morph (Molecular Devices, Palo Alto, CA). Для количественного анализа бляшек с ядром ряд их серийных срезов, анализируемых на массу A, окрашивают тиофлавином S (ThioS) и подсчитывают количество положительных по ThioS бляшек в гиппокампе, энторинальной/пириформной коре или мозжечке. Все указанные выше анализы проводят "слепым" способом. Статистический анализ данных in vivo Результаты всех экспериментов анализировали с применением STATISTICA 8.0 (Statsoft). УровниA, массу амилоидных бляшек и тяжесть САА анализировали с использованием дисперсионного анализа с тестом апостериорного множественного сравнения Холма-Сидака или двусторонним критерием Стьюдента. Если набор данных не удовлетворяет гипотезам параметрических тестов, применяли или критерий Крускала-Уоллиса с последующим апостериорным множественным сравнением Данна, или критерий суммы рангов Манна-Уитни. Для тестирования того, согласуются ли уровни А у битрансгенных мышей с аддитивной суммой уровней А в потомстве одного помета с одним трансгеном, используют множественную линейную регрессию без теста пересечения. Все сравнения проводят между потомством одного помета. Моделирование ответа на лекарственные средства проводят, исключая контрольные образцы (0 мг/кг). ED50 соответствует дозе (мг/кг), необходимой для индукции 50%, от индуцированного лекарственным средством в экспериментах максимального ответа. Его рассчитывают с использованием модели уравнения Хилла для log ED50. Библиография 1. Crook R., Verkkoniemi A., et al. (1998). A variant of Alzheimer's disease with spastic paraparesis andpeptides in the murine cerebral cortex. Journal of Pineal Research 36:224-231. 51. Basha M.R., et al. (2005) The fetal basis of amyloidogenesis: exposure to lead and latent overexpression of amyloid precursor protein and beta-amyloid in the aging brain. Journal of Neuroscince 25:823-829. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение композиции, содержащей сульфизоксазол или его соль или состав с пролонгированным высвобождением, в лечении болезни Альцгеймера. 2. Применение по п.1, где композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно соединение,выбранное из группы акампросата, амлодипина, цилостазола, лефлуномида, метимазола, фенформина,прилокаина, тадалафила, тербинафина, зонизамида и рифабутина, их солей или составов с пролонгированным высвобождением, для одновременного, раздельного или последовательного введения с сульфизоксазолом. 3. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно лекарственное средство, ингибирующее реакцию клеток на стресс, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. 4. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно лекарственное средство, модулирующее функцию синапсов, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. 5. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно лекарственное средство, модулирующее клеточный ангиогенез, для комбинированного, раздельного или последовательного применения. 6. Применение по любому из предшествующих пунктов, где композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. 7. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанную композицию вводят индивидууму повторно. 8. Применение композиции, содержащей сульфизоксазол или его соль или состав с пролонгированным высвобождением, для производства лекарственного средства для защиты нейронов от интоксикации пептидом А у нуждающегося в этом субъекта.