Применение фанхинона для лечения болезни альцгеймера

1 Область техники Данное изобретение относится к применению известного соединения для производства фармацевтической композиции для лечения или предотвращения (предупреждения) болезни Альцгеймера. Далее, изобретение относится к фармацевтической композиции для такого лечения или предупреждения. Данное изобретение относится также к способам лечения или предупреждения болезни Альцгеймера. Предпосылки изобретения Болезнь Альцгеймера (AD), которая является единственной главной причиной деменции(слабоумия) у взрослых в индустриализованных обществах, представляет собой дегенеративное расстройство головного мозга, характеризующееся клинически прогрессирующей потерей памяти, спутанностью сознания, слабоумием и,в конце концов, смертью. Гистопатологически болезнь Альцгеймера характеризуется присутствием в неокортексе, особенно в гиппокампе,двух мозговых повреждений: нейрофибриллярных клубков (NFT) спаренных спиральных филаментов (PHF) в нейронах и невритических(старческих) бляшек во внеклеточном пространстве. Образование старческих бляшек связано с появлением симптомов и признаков этого заболевания, в том числе амнезии. После образования старческой бляшки в телах (перикарионах) нейронов образуются нейрофибриллярные клубки. Образование нейрофибриллярных клубков связано с ухудшением или усугублением амнезии и других симптомов деменции. Основным компонентом старческих бляшек являются амилоидные отложения. Катаракта является заболеванием, часто встречающимся вместе с болезнью Альцгеймера. Она локализуется в глазах и также обусловлена отложениями амилоида. Таким образом, лечение пациентов,имеющих болезнь Альцгеймера, описанное в данном описании, и формуле изобретения может быть равным образом использовано для лечения катаракты. Следовательно, в том смысле, который применяется в данном описании и формуле изобретения, термин болезнь Альцгеймера включает также заболевание катаракту. Основным компонентом амилоидных отложений является полипептид, называемый здесь А (амилоид-бета). А обычно является растворимым компонентом цереброспинальной жидкости, где он обнаруживается в концентрации приблизительно 3-5 нМ. А может иметь 39-43 аминокислоты, обычно 40 аминокислот, в зрелой форме и образуется в качестве продукта протеолитического расщепления из белка клеточной поверхности, называемого белкомпредшественником амилоида (АРР) (Kang et al. 1987, Nature 325:733-736). Многие исследования показали, что А является токсичным in vitro при добавлении непосредственно к культурам нервных клетокPike CJ, Burdick D, Walencewicz AJ, Glabe CG,Cotman CW, J. Neurosci 1993, 13(4):1676-1687). Было определено, что нейротоксичность А локализована в пептидной последовательности между аминокислотными остатками 25 и 35(А(25-35. А(25-35) индуцирует смерть нервных клеток с такой же силой, что и полноразмерный А(1-40) (Yankner BA, Duffy LK,Kirschner DA, Science 1990, 250 (4978):279-282). Нормальная функция А в настоящее время не известна, но, может быть, она заключается в образовании катион-селективных каналов через клеточные мембраны (Kawahara M. et al., 1997,Biophysical Journal 73/1, 67-75). Было показано, что преципитация синтетического А вызывается несколькими факторами окружающей среды, в том числе низким рН, высокой концентрацией соли и присутствием металлов, например, цинка, меди и ртути(Bush, A.I. et al., 1995, Science 268:1921-1923). Сообщалось, что А сам специфически и с насыщением связывает цинк с высокой аффинностью связывания (КD = 107 нМ) при молярном отношении 1:1 (цинк: A) (Bush, A.I. et al., 1994,J. Biol. Chem. 269:12152-12158). Это связывание имеет место при физиологических концентрациях цинка (Bush, A.I. et al., 1994, Science 265:1464-1467). Существует довольно убедительное предположение, что удаление амилоидных отложений у пациентов, страдающих от болезни Альцгеймера, будет ослаблять симптомы болезни Альцгеймера. Поэтому было предпринято несколько попыток приготовления такого лекарственного средства, так как ведутся настоятельные поиски способов лечения болезни Альцгеймера. Международная патентная заявка, публикацияWO 93/10459, описывает способ лечения болезни Альцгеймера путем введения цинксвязывающего агента. В качестве предпочтительных соединений упомянуты фитиновая кислота, дезферриоксимин, цитрат натрия,EDTA, 1,2-диэтил-3-гидроксипиридин-4-он и 1 гидроксиэтил-3-гидрокси-2-метилпиридин-4-он. Патентная заявка ГерманииDE 3932338 описывает применение хелатора алюминия, такого как 8-гидроксихинолин, для лечения болезни Альцгеймера. Патент США 5373021 описывает применение дисульфирама и его солей и аналогов. Согласно этому патенту, описанные соединения могут использоваться для уменьшения неврологического повреждения, вызываемого болезнью Альцгеймера. Международная патентная заявка, публикацияWO 98/06403, описывает применение клиохинола для производства фармацевтиче 3 ских композиций для лечения болезни Альцгеймера. Известные до сих пор соединения, предлагаемые для лечения болезни Альцгеймера, имеют несколько недостатков, которые препятствуют их широкому применению. Большинство этих соединений неспособны проникать через гематоэнцефалический барьер и, следовательно,не могут легко достигать зон, в которых откладывается амилоид. Дисульфирам, который может проникать через гематоэнцефалический барьер, имеет тот недостаток, что при его комбинировании пациентом с этиловым спиртом он вызывает тяжелые отрицательные реакции,включающие головные боли, тошноту, рвоту,потоотделение, жажду, слабость и низкое кровяное давление. Клиохинол (5-хлор-7-иод-8 гидроксихинолин), который также может проникать через гематоэнцефалический барьер,имеет вызывающую осуждение историю, согласно которой он вызывает в качестве побочного эффекта субострую миелооптиконевропатию (SMON). Фанхинон (4,7-фенантролин-5,6-дион) использовали до настоящего времени для лечения различных расстройств, таких как амебиаз. Фанхинон продавался фирмой CIBA-GEIGY под товарным названием ENTOBEX. В противоположность клиохинолу, при использовании фанхинона в нормальном диапазоне доз не было обнаружено никаких неблагоприятных побочных реакций. В прошлом антиамебный фармацевтический препарат, содержащий как клиохинол, так и фанхинон, продавался CIBA-GEIGY под товарным названием Мексафор. Однако продажа этого препарата была прекращена, когда выяснилось, что клиохинол вызывает SMON. Описание изобретения Целью данного изобретения является обеспечение нового применения известного соединения для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера. Другой целью данного изобретения является обеспечение увеличенного эффекта лечения болезни Альцгеймера. Следующей целью данного изобретения является устранение любого вредного побочного эффекта лечения или профилактики (предотвращения или предупреждения) болезни Альцгеймера. Согласно данному изобретению обеспечено применение фанхинона для производства фармацевтических композиций для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера. Фанхинон может вводиться в любом количестве, эффективном для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера. Предпочтительно фанхинон может вводиться в количестве 5-250 мг и наиболее предпочтительно 10-50 мг, один-три раза в день. В одном варианте изобретения соединение или смесь соединений, выбранных из группы,состоящей из антиоксидантов, усилителей аце 002526 4 тилхолина, следовых количеств металлов, простетических групп и клиохинола, вводят перед введением, вместе с введением или после введения фанхинона. Данное изобретение относится также к фармацевтической композиции, включающей фанхинон и соединение или смесь соединений,выбранных из группы, состоящей из антиоксидантов, усилителей ацетилхолина, металлов в следовых количествах, простетических групп и клиохинола, при условии, что при выборе клиохинола выбирают, по меньшей мере, одно дополнительное соединение из этой группы. Антиоксидант представляет собой предпочтительно витамин С, витамин Е, Q10 или их сочетания. Усилителями ацетилхолина являются предпочтительно агонисты 1 или антихолинэстеразные ингибиторы (т.е. веществаингибиторы ацетилхолинэстеразы). Предпочтительными антихолинэстеразными ингибиторами являются такрин (товарный знак Когнекс) и донепезил (товарный знак Арицепт). Простетической группой является предпочтительно витамин B12. В предпочтительном варианте данного изобретения фанхинон и клиохинол используют для производства фармацевтической композиции для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера. Предпочтительно сочетание фанхинона, клиохинола и витамина B12 используют для получения данной фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция может быть приготовлена для перорального, парентерального или внутрикожного (интрадермального) введения. Далее, фармацевтическая готовая форма композиции может быть приготовлена в виде единой фармацевтической композиции или в виде двух или более отдельных фармацевтических форм для последовательного или в основном одновременного введения. Данное изобретение относится также к способу лечения субъекта, имеющего или подозреваемого в том, что он имеет болезнь Альцгеймера, предусматривающему введение этому субъекту количества фанхинона, эффективного для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера. Краткое описание чертежей Фиг. 1 изображает действие фанхинона на зависимость ответа от дозы А (25-35) в клетках РС 12; фиг. 2 - действие фанхинона на индуцируемую А(25-35) токсичность в клетках РС 12; фиг. 3 - действие фанхинона и клиохинола на индуцируемость Zn2+ агрегацию А; фиг. 4 - действие клиохинола и фанхинона на индуцируемую Сu2+ агрегацию А; фиг. 5 - ЯМР-спектры трех растворов. Раствор а содержал витамин B12 (гидроксикобаламин) в концентрации 2,6 мМ. Раствор b содер 5 жал смесь 2,6 мМ витамина B12 и 10 мМ глюкуронида клиохинола (молярное отношение приблизительно 1:4). Раствор с содержал 10 мМ глюкуронида клиохинола; фиг. 6 - правую половину фиг. 5, увеличенную для облегчения сравнения позиций резонансов; фиг. 7 - левую половину фиг. 5, увеличенную для облегчения сравнения позиций резонансов. Подробное описание изобретения Существует потребность в выпуске на рынок лекарственного средства, которое является эффективным при лечении или профилактике болезни Альцгеймера. Согласно данному изобретению предлагается известное лекарственное средство фанхинон. В примерах показано, что А (25-35) имеет резко выраженное действие в клетках РС 12 на окислительно-восстановительную (редокс) активность клеток. В способе, используемом в примере 2, редокс-активность клеток, подверженных действию 1 мкМ А (25-35), уменьшается до 60% от нормального уровня (см. фиг. 2,открытые кружки). Однако когда обработанные А (25-35) клетки обрабатываются 1 мгк/мл фанхинона или большей концентрацией, восстанавливается нормальная редокс-активность. Это указывает на то, что фанхинон при введении млекопитающему, такому как человек, будет облегчать вредные эффекты А. Не претендуя на ограничение изобретения каким-либо специфическим механизмом действия, авторы в настоящее время считают, что действие А на редокс-активность клеток предотвращается антиоксидантным действием фанхинона. Антиоксидантное действие фанхинона может быть усилено совместным введением дополнительного антиоксиданта (антиоксидантов), таких как витамин С, витамин Е, витаминQ10 или их комбинации. Присутствие старческих бляшек во внеклеточном пространстве может предотвращать или ингибировать трансмиссию импульсов в холинергической нервной системе. Функционирование этой нервной системы зависит от медиатора ацетилхолина. Таким образом соединения, повышающие уровень ацетилхолина, такие как соединения, предотвращающие или ингибирующие нормальный гидролиз ацетилхолина ацетилхолинэстеразой, так называемые антихолинэстеразные ингибиторы, могут вводиться вместе с фанхиноном для улучшения действия. Предпочтительными антихолинэстеразными ингибиторами являются такрин и донепезил. В исследовании, о котором сообщается в примерах, показано, что фанхинон может уменьшать агрегацию А (1-40), индуцированную Сu2+ и Zn2+. 6 Следующий предлагаемый механизм действия изобретения не предназначен для ограничения изобретения этим механизмом. В настоящее время заявитель считает, что фанхинон и А конкурентно хелатируют цинк, медь и другие тяжелые металлы. Фанхинон способен проникать через гематоэнцефалический барьер. При захвате фанхиноном ионов тяжелых металлов во внеклеточном пространстве он перемещается в кровь и выводится из организма. Когда агрегат или соль А и ион тяжелого металла находится в равновесии со свободным А и свободным ионом тяжелого металла, фанхинон может продолжать захватывать ионы свободных металлов и перемещать ион тяжелого металла в кровь до тех пор, пока присутствует агрегированный А, т.е. амилоид. Свободный А не может проникать через гематоэнцефалический барьер пассивной диффузией, скорее он будет разрушаться протеолитическими ферментами, обычно присутствующими во внеклеточном пространстве. Следовательно, свободный А или его дегенеративная часть могут потенциально повреждать нервные клетки, прежде чем они расщепляются до нетоксичного состояния. Между тем, фанхинон будет предотвращать или ингибировать потенциальный цитотоксический эффект А вследствие его способности противодействовать уменьшению редокс-активности, которое обычно вызывает А. Уменьшение агрегации, вызываемое фанхиноном, составляет 50-60% для Сu2+ и 10% дляZn2+. Далее показано, что клиохинол имеет противоположную тенденцию. Клиохинол уменьшает Zn2+-индуцируемую агрегацию А (1-40) более чем на 60%, тогда как Сu2+-индуцируемая агрегация уменьшается приблизительно на 30%. Другими словами, фанхинон является лучшим для уменьшения Сu2+-индуцируемой агрегации А (1-40), а клиохинол является лучшим для уменьшения Zn2+-индуцируемой агрегации. Так как Сu2+ и Zn2+ природно присутствуют в организме пациента, имеющего болезнь Альцгеймера, или пациента, в отношении которого имеется предположение, что он имеет болезнь Альцгеймера, может быть желательным уменьшение или повторное растворение агрегатов, индуцированных обоими ионами. Таким образом, может быть предпочтительным введение клиохинола до введения, вместе с введением или после введения фанхинона. Однако введение клиохинола является проблематичным, так как клиохинол вызывает в качестве побочного действия SMON. Прежние исследования (см. WO 98/06403) указывают на возможное влияние клиохинола на витамин B12. Известно, что клиохинол экстретируется через почки в виде глюкуронидных или сульфатных производных (Kotaki H., et al.: Enterohepatic circulation of clioquinol in the rat, J. Phar 7et al.: Metabolism of 14C-iodochlorhydroxyquinoline in the dog and the rat, J. Pharmacobiodyn. 1984 March; 7(3): 164-70), например, в виде соединения метил-(5-хлор-7-иодхинолил-2',3',4'три-O-ацетилглюкопиранозид)уроната. Для краткости данное соединение называется в дальнейшем глюкуронидом. Детоксикация гидрофобных веществ, таких как клиохинол, в организме происходит преимущественно в печени. Таким образом,считается, что клиренс клиохинола происходит следующим образом: клиохинол превращается в глюкуронид клиохинола в печени. После его образования водорастворимый глюкуронид клиохинола секретируется в желчь. Желчь входит в кишечник, где основное количество глюкуронида клиохинола удаляется в стуле. Некоторое количество глюкуронида клиохинола резорбируется (всасывается) из кишечника в кровь. Глюкуронид клиохинола фильтруется из крови в почки и появляется в образующейся в конечном счете моче. Путем обработки мышей клиохинолом и введения впоследствии содержащего радиоизотоп витамина B12 ([57 Со]-цианокобаламина) в Международной патентной заявке, публикацииWO 98/06403, показано, что концентрация витамина B12 в головном мозге и печени обработанных клиохинолом мышей остается на нормальном уровне, тогда как концентрация радиоизотопного витамина B12 уменьшается в почках таких мышей в сравнении с нормальным уровнем. Данная находка предполагает, что метаболизм витамина B12 зависит от клиохинола. Далее, данная находка предполагает, что почки являются органами-мишенями, в которых имеет место клиохинолзависимый метаболизм. Для исследования возможного взаимодействия между глюкуронидом клиохинола и витамином B12 был предусмотрен эксперимент, в котором глюкуронид клиохинола и витамин B12 смешивали в воде. Смесь анализировали по данным 1H-ЯМР. 1 Н-ЯМР-спектры, см. фиг. 5-7,показывают, что некоторые резонансы витаминаB12 (соответствующие бензимидазольной части молекулы) были смещены, и то же самое наблюдается для двух резонансов глюкуронида клиохинола (соответствующих хинолиновой части молекулы). Заявитель считает, что подобные результаты можно было бы ожидать с использованием свободного клиохинола, однако,клиохинол не может растворяться в водных растворах для ЯМР-испытания. Эти результаты указывают на гидрофобное взаимодействие между глюкуронидом клиохинола и витамином B12, возможно, между бензимидазольной частью витамина B12 и хинолиновой частью глюкуронида клиохинола. Витамин B12 в норме активно резорбируется из плазмы почек после его фильтрации. Таким путем организм извлекает большую часть 8 витамина B12, который в ином случае был бы потерян в моче. Недавно было продемонстрировано, что резорбция витамина B12 опосредована действием мембранного белка мегалина (Moestrup S.K. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 1995; 93(16): 8612-7). Показано, что мегалин имеет сильную аффинность в отношении связывания комплекса, образованного витамином B12 и транспортным белком транскобаламином. На основе того, что витамин B12 связывается с глюкуронидом клиохинола, заявитель считает, что витамин B12 не связывается с белком мегалином и/или транскобаламином, когда он уже связан с глюкуронидом клиохинола. Таким образом, резорбция витамина B12 будет отсутствовать и организм будет страдать от недостатка витамина B12 после определенного периода введения клиохинола, если он не снабжается достаточным количеством нового витаминаB12 через нормальный пищевой рацион. Единственным источником поступления витамина B12 человеку является пища, так как человек не может его синтезировать. Таким образом, диеты с низким содержанием мяса и/или микроорганизмов будут, очевидно, вызывать дефицит витамина B12. Если лица обеспечиваются диетами со слишком низким содержанием витамина B12, то введение клиохинола будет ухудшать состояние, так как резорбция витамина B12 предотвращается конкурентным связыванием клиохинола с мегалином. Тот факт, чтоSMON наблюдали только в Японии и что пищевой рацион японцев преимущественно состоит из овощей и зерновых, особенно, риса, (Kromhout D, et al.: "Food consumption pattern in the 1960s in seven countries". Am. J. Clin. Nutr. 49: 889-894, 1989) может объяснить, почему заболевание SMON ограничивалось Японией. Для противодействия побочным действиям при введении фанхинона и/или клиохинола может быть желательным совместное введение следовых количеств металлов и/или простетических групп. Предпочтительной простетической группой является витамин B12 (цианокобаламин). В качестве примера, но не ограничения,композиции, их применение и способы данного изобретения могут быть показаны для 1) пациентов с диагнозом болезни Альцгеймера в любой клинической стадии болезни, 2) предупреждения болезни Альцгеймера у пациентов с ранними или продромальными симптомами или признаками и 3) задержки появления или развития или обострения симптомов и признаков болезни Альцгеймера. Способы и композиции этого изобретения будут, например, полезны для лечения болезни Альцгеймера, улучшения или ослабления любого из симптомов и признаков болезни Альцгеймера, улучшения любых патологических или лабораторных обнаружений болезни Альцгеймера, задержки развития болезни Альцгеймера, задержки появления каких 9 либо симптомов и признаков болезни Альцгеймера, предупреждения появления болезни Альцгеймера и предотвращения появления какихлибо симптомов и признаков болезни Альцгеймера или болезни Паркинсона. Субъектом или пациентом является животное, например, млекопитающее и, предпочтительно, человек, и им может быть плод, ребенок или взрослый человек. Доза фанхинона, оптимальная in vivo для повторной солюбилизации А, может быть определена врачом путем проведения обычных экспериментов. Примером такого эксперимента является мониторинг растворимого А в цереброспинальной(CSF) (WO 93/10459, 27 мая 1993 г. Университет г. Мельбурна). Начиная с относительно низких доз (10-25 мг/день), врач может наблюдать количество солюбилизированного А в CSF пациента. Если нет какого-либо увеличения солюбилизированного А в ответ на введение фанхинона, свидетельствующего о повторной солюбилизации агрегатов Zn-A, то доза может быть повышена до тех пор, пока такое увеличение не наблюдается. Еще одним примером является мониторинг клинических признаков и симптомов этой болезни с использованием клинических, поведенческих и психометрических наблюдений и измерений. Перед введением людям эффективность предпочтительно показывают в моделях животных. Может быть использована любая модель животного для болезни Альцгеймера, известная в данной области. Фармацевтические композиции в соответствии с данным изобретением предпочтительно содержат один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и активный компонент(компоненты). Носитель (носители) должны быть "приемлемыми" в смысле их совместимости с другими ингредиентами композиции и не вредными для их реципиентов. В предпочтительном варианте фанхинон и необязательные дополнительные активные компоненты в этой фармацевтической композиции очищаются. Должно быть понятно, что количество фанхинона и необязательных дополнительных активных компонентов, требующееся для вышеупомянутых лечения или предупреждения будут меняться в соответствии с путем введения, расстройством, подлежащим лечению, состоянием, возрастом, историей болезни субъекта и прописанной готовой формой фармацевтической композиции и т.д. При лечении пациента с диагнозом болезни Альцгеймера количество фанхинона является предпочтительно эффективным для увеличения растворимости агрегатов А в цереброспинальной жидкости пациента. В общем, подходящее терапевтически эффективное количество фанхинона в фармацев 002526 10 тической композиции составляет, например, 5250 мг, предпочтительно 10-50 мг. Подходящее количество соединения или смеси соединений,выбранных из группы, состоящей из антиоксидантов, агонистов 1, антихолинэстеразных ингибиторов, металлов в следовых количествах,простетических групп и клиохинола, в фармацевтической композиции составляет, например,5 мкг-250 мг, предпочтительно 0,5-1 мг. Если выбран клиохинол и витамин B12, количество клиохинола является предпочтительно эффективным для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, а количество витамина B12 предпочтительно является эффективным для ингибирования вредного побочного действия введения клиохинола. Количество клиохинола и витамина B12 равны предпочтительно 5-250 мг,более предпочтительно 10-50 мг и 5 мкг-2 мг,наиболее предпочтительно 0,5-1 мг соответственно. Физически вводимые количества фанхинона и необязательных дополнительных активных компонентов, таких как клиохинол и витамин B12, могут быть определены лечащим врачом. Если фармацевтическая композиция, в дополнение к фанхинону, содержит дополнительные активные компоненты, они могут находиться в той же самой композиции для совместного введения в комбинации или в различных композициях для введения, по существу, одновременно, но раздельно или последовательно. Терапевтические композиции включают композиции, подходящие для парентерального(в том числе внутримышечного и внутривенного), перорального, ректального или интрадермального (внутрикожного) введения, хотя предпочтительным способом является пероральное введение. Таким образом, фармацевтические композиции могут быть приготовлены в виде таблеток, пилюль, сиропов, капсул, суппозиториев, композиций для трансдермального (чрескожного) введения, порошков, особенно лиофилизированных порошков для реконституирования с носителем для внутривенного введения,и т.д. Термин "носитель" относится к разбавителю, адъюванту, эксципиенту (наполнителю) или носителю, с которым вводят терапевтическое средство. Носители в фармацевтической композиции могут включать связующее вещество,такое как микрокристаллическая целлюлоза,поливинилпирролидон (поливидон или повидон), трагакантовую камедь, желатин, крахмал,лактозу или моногидрат лактозы; дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота,кукурузный крахмал и т.п.; смазывающее вещество или поверхностно-активное вещество, такое как стеарат магния или лаурилсульфат натрия; скользящее вещество, такое как коллоидный диоксид кремния; подслащивающий агент,такой как сахароза или сахарин; и/или улучшающий вкус и запах агент, такой как перечная 11 мята, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор. Терапевтические композиции, подходящие для перорального введения, например, таблетки и пилюли, могут быть получены прессованием или формованием (прессованием в формах),необязательно с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть приготовлены смешением компонента (компонентов) и прессованием этой смеси в подходящем устройстве в таблетки,имеющие подходящий размер. Перед смешением фанхинон может быть смешан со связующим веществом, смазочным агентом, инертным разбавителем и/или дезинтегрирующим агентом, а дополнительные необязательно присутствующие компоненты могут быть смешаны с разбавителем, смазочным агентом и/или поверхностно-активным веществом. В предпочтительном варианте легкосыпучий порошок фанхинона смешивают со связующим веществом, таким как микрокристаллическая целлюлоза, и поверхностно-активным веществом, таким как лаурилсульфат натрия, до тех пор, пока не получится гомогенная смесь. Затем еще одно связующее вещество, такое как поливидон, переносят в смесь при перемешивании. После получения однородного распределения добавляют водный раствор витамина B12 при постоянном перемешивании. Данную смесь пропускают через гранулирующие сита и сушат обезвоживанием перед прессованием в таблетки в стандартном прессующем устройстве. Согласно еще одному предпочтительному варианту легкосыпучий порошок фанхинона смешивают с поверхностно-активными веществами и/или эмульгирующими агентами, такими как Сапамин (N-(4'-стеароиламинофенил)триметиламмонийметилсерная кислота) и моногидрат лактозы, до получения однородного распределения компонентов. К смеси фанхинона при непрерывном перемешивании добавляют еще один препарат, содержащий дезинтегрирующий агент, такой как кукурузный крахмал. Такой второй препарат может быть приготовлен добавлением избытка кипящей воды к кукурузному крахмалу, суспендированному в холодной воде. Конечную смесь гранулируют и сушат, как описано выше, и смешивают с кукурузным крахмалом и стеаратом магния и, наконец, прессуют в таблетки в стандартном устройстве. Таблетка может иметь или может не иметь покрытие. Непокрытая таблетка может иметь нарезку. Покрытая таблетка может быть покрыта сахаром, шеллаком, пленкой или другими энтерическими агентами. Терапевтические готовые формы, подходящие для парентерального введения, включают стерильные растворы или суспензии активных компонентов. Может быть использован водный или маслянистый носитель. Такие фармацевти 002526 12 ческие носители могут быть стерильными жидкостями, такими как вода или масла, в том числе масла из нефти, масла животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Готовые формы композиций для парентерального введения включают также лиофилизированный порошок, включающий фанхинон и необязательно дополнительные активные компоненты, который должен реконституироваться растворением в фармацевтически приемлемом носителе, который растворяет активные компоненты, например, в водном растворе карбоксиметилцеллюлозы и лаурилсульфата. Когда фармацевтическая композиция является капсулой, она может содержать жидкий носитель, такой как жирное масло (масло с высоким содержанием жира), например, какаомасло. Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина,тальк, хлорид натрия, сухое снятое молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и т.п. Композиции могут иметь форму растворов, суспензий, эмульсии, таблеток, пилюль, капсул,порошков, препаратов для задержанного высвобождения и т.п. Композиция может быть приготовлена в виде суппозиториев с традиционными связующими веществами и носителями, такими как триглицериды. Еще в одном варианте терапевтическое соединение может доставляться в системе регулируемого высвобождения. В одном варианте может быть использован насос (см. Langer, supra;Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321: 574 (1984. В другом варианте могут быть использованы полимерные материалы (см. Medical ApplicationsLevy et al., Science 228: 190 (1985); During et al.,Ann. Neurol. 25: 351 (1989); Howard et al., J. Neurosurg. 71: 105 (1989. Еще в одном варианте система регулируемого высвобождения может быть помещена вблизи от терапевтической мишени, т.е. центральной нервной системы, что требует в результате только части системной дозы (см., например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984. Другие системы регулируемого высвобождения обсуждаются в обзоре Langer (Science 249: 1527-1533 (1984. 13 В одном варианте фармацевтической композиции в соответствии с данным изобретением,фанхинон и дополнительные активные компоненты содержатся в виде отдельных фармацевтических форм. В качестве примера, одна форма может содержать фанхинон и клиохинол, а другая форма может содержать витамин B12. Эти две формы могут вводиться одновременно или последовательно. Например, может быть введена форма, содержащая фанхинон и клиохинол, с последующим введением витамина B12 в пределах дня, недели или месяца после введения клиохинола и фанхинона. Если эти две формы вводят последовательно, форму, содержащую фанхинон и клиохинол, предпочтительно вводят в течение одной-трех недель с последующим периодом вымывания длительностью от одной до четырех недель, во время которого вводят форму, содержащую витамин B12, но не форму,содержащую клиохинол. После периода вымывания лечение может быть повторено. Данное изобретение предоставляет также фармацевтическую упаковку или набор, содержащий один или несколько контейнеров, наполненных одним или несколькими ингредиентами фармацевтической композиции изобретения. Необязательно в сочетании с такими контейнерами может присутствовать сообщение в форме, написанной государственным учреждением, регулирующим производство, применение или продажу фармацевтических или биологических продуктов, причем это сообщение уведомляет об одобрении этим учреждением производства, применения или продажи для введения человеку. Другие признаки и преимущества этого изобретения будут очевидными из нижеследующих примеров, которые в сочетании с сопутствующими рисунками иллюстрируют в качестве примера принципы изобретения. Примеры Пример 1. Действие фанхинона на зависимость ответа от дозы А (25-35) в клетках РС 12. А (25-35) поставлялся Bachem (CH) илиSigma (USA) и растворялся в забуференном фосфатом солевом растворе (ЗФР) при рН 7,4, за 2 ч до применения. Нейротоксичность А локализована в последовательности между аминокислотными остатками 25 и 35 (А (25-35, а декапептид, охватывающий данную область,индуцирует гибель нервных клеток так же сильно, как полноразмерный А (1-40) (Yankner,Duffy LK, Kirschner DA: Neurotrophic and neurotoxic effects of amyloidprotein: reversal by(4978): 279-282). Клетки феохромоцитомы РС 12 крыс выращивали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM), содержащей 1% пенициллин-стрептомицин, 5% фетальную те 002526 14 лячью сыворотку и 10% лошадиную сыворотку,в увлажненном инкубаторе с 5% СО 2. Клетки РС 12 высевали в 96-луночные микротитрационные планшеты в 100 мкл подходящей среды. Спустя 24 ч добавляли указанные концентрации пептида А (25-35) отдельно или вместе с фанхиноном в предписанных концентрациях. Инкубирование продолжали в течение 24 ч. После инкубирования измеряли уменьшение МТТ с использованием коммерчески доступного тест-набора в соответствии с инструкциями изготовителя (Boehringer Mannheim). Тест-величины, полученные только с носителем, принимали за 100%. МТТ является субстратом для внутриклеточных оксидоредуктаз и оксидоредуктаз цитоплазматических мембран, он широко использовался для измерения уменьшения редоксактивности в клетках. Было обнаружено, что уменьшение редокс-активности является ранним индикатором опосредованной А смерти клеток (Shearman MS, Ragan CI, Iverson LL: Inhibition of PC12 cell redox activity is a specific,early indicator of the mechanism of -amyloidmediated cell death, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994; 91(4): 1470-1474). Для испытания действия фанхинона на индуцируемую А (25-35) токсичность в клеткахPC12, клетки PC12 выдерживали с концентрациями пептида А(25-35) в диапазоне от 0 до 10 мкМ. В отсутствие фанхинона (т.е. с добавлением только носителя) А (25-35) давал зависимое от дозы ингибирование уменьшения МТТ (фиг. 1, сплошные кружки). Концентрации А (2535), такие низкие, как 0,01 мкМ, давали значимое уменьшение, а при концентрации А (2535) 0,1 мМ или выше уменьшение МТТ снижалось до максимального уровня приблизительно 50%. В присутствии 10 мкг фанхинона на мл токсическое действие А (25-35) практически устранялось (фиг. 1, открытые кружки). Даже при концентрациях А, таких высоких как 1 мкМ, присутствие фанхинона полностью нейтрализовало токсическое действие А. Только при наивысшей концентрации А (10 мкМ) имело место небольшое ингибирование уменьшения МТТ А. Однако это ингибирование было умеренным, только около 10%, в сравнении с приблизительно 50% в отсутствие фанхинона. Пример 2. Действие фанхинона на А (2535)-индуцированную токсичность в клетках РС 12. В этом исследовании использовали те же самые материалы и способы, что и в примере 1,за исключением того, что клетки РС 12 подвергали действию фиксированной концентрации А 1 мкМ, тогда как концентрацию фанхинона варьировали между 0 и 10 мкг/мл. В отсутствие фанхинона А (25-35) приводил к приблизительно 40% ингибированию уменьшения МТТ(фиг. 2, открытые кружки). Данное ингибирование сохранялось в присутствии вплоть до 0,1 мкг фанхинона на мл. Увеличение концентрации фанхинона свыше 0,1 мкг/мл приводило к резко уменьшенному токсическому эффекту А (25-35) полностью устранялся. Пример 3. Действие фанхинона и клиохинола на Zn2+- и Сu2+-индуцируемую агрегацию А. Исходный раствор 5 мг/мл А (1-40) (поставляемого Bachem (СН готовили заново перед каждым экспериментом растворением лиофилизированного пептида в 0,01 М НСl, с последующим последовательным разведением 1:1 0,01 М NaOH с получением нейтрального значения рН. Аликвоты А (1-40) разбавляли в ЗФР(рН 7,4) до 100 мкМ и инкубировали при общем объеме 30 мкл в течение 24 ч при комнатной температуре. Для экспериментов с коинкубированием добавляли указанные концентрации ионов металлов и/или аликвоту тест-соединений. Тест-соединения добавляли до конечной молярной концентрации 10 мкг/мл. Образование амилоида определяли количественно при помощи флуорометрического анализа с тиофлавином Т. Тиофлавин связывается специфически с амилоидом и это вводит сдвиг в его спектр испускания (эмиссионный спектр) и образуется флуоресцентный сигнал,пропорциональный количеству амилоида. После инкубирования А (1-40)-пептиды добавляли к ЗФР (рН 6,0) и 3 мкМ тиофлавина Т в конечном объеме 1 мл. Флуоресценцию подвергали мониторингу при длине волны возбуждения 454 нм и длине волны испускания 482 нм с использованием флуорометра Флуороскан II (Moleculardevices, UK). Проводили временное сканирование флуоресценции и три величины после того,как затухание достигало плато (около 5 мин),брали для расчета среднего значения после вычитания флуоресценции фона 3 мкМ тиофлавина Т. Для экспериментов с коинкубированием определяли флуоресценцию одного тестсоединения. Пробы анализировали в трех повторностях. СреднееSD (стан. откл.) для типичного эксперимента показано на фиг. 3 и 4. Фанхинон и клиохинол тестировали на их способность предотвращать агрегацию А (140) в амилоидные структуры. Клиохинол представляет собой известное соединение при лечении болезни Альцгеймера (см. Международную публикацию с номером WO 98/06403), и его первоначально тестировали в данном эксперименте для целей сравнения. Исследовали, оказывали ли эти два соединения какое-либо действие на катализируемую ионом металла агрегацию А, в частности, агрегацию, вызываемую Zn2+ и Сu2+. Результаты этих экспериментов показаны на фиг. 3 и 4. На фиг. 3 и 4 обнаруживается, что Cu2+, и 2+ цию А в амилоидные структуры относительно спонтанной агрегации. В присутствии фанхинона и клиохинола в концентрациях 10 мкг/мл индуцированная ионами металлов агрегация A была значительно пониженной. При испытанных концентрациях 10 мкг/мл фанхинон уменьшал Сu2+-индуцированную агрегацию на 50-60%, тогда как Zn2+индуцированная агрегация лишь умеренно ингибировалась приблизительно на 10%. Неожиданно клиохинол обнаружил противоположную тенденцию. Клиохинол уменьшалZn2+индуцированную агрегацию А (1-40) более чем на 60%, тогда как Сu2+-катализируемая агрегация уменьшалась приблизительно на 30%. Таким образом, фармацевтические композиции,содержащие фанхинон в сочетании с клиохинолом, имеют большую полезность, чем фармацевтические композиции, содержащие только одно из этих соединений. Пример 4. В этом примере синтезировали метаболит клиохинола. Известно, что клиохинол экскретируется через почки в виде глюкуронидных производных клиохинола (Kotaki H., et al.: "EnterohepaticMarch; 7(3): 164-70). Преобразование клиохинола в соответствующий глюкуронид предположительно происходит в печени. После образования глюкуронида клиохинола в печени он, в конце концов, переносится в почки для экскреции в мочу. Глюкуронидное производное клиохинола в форме метил-(5-хлор-7-иодхинолил-2',3',4'-триO-ацетилглюкопиранозид)уроната получают в соответствии со следующей схемой реакций:(65 мг, 0,164 ммоль), CaSO4H2O (35 мг) и пиридина (1,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Добавляли к реакционной смеси свежеприготовленный Аg2 СО 3(35 мг) и суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин в темноте. Затем продукт реакции деацетилировали 1 н. водным NaOH. Реакционную смесь разбавляли CH2Cl2 (10 мл), фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Вышеупомянутый продукт очищали флэш-хроматографией (ТСХ:CH2Cl2/MeOH 99/1, элюент: CH2Cl2/MeOH 99,5/0,5). ЯМР (400 МГц, CDCl3) 2,04 (с, 3 Н, Ас),2,09 (с, 3 Н, Ас), 2,13 (с, 3 Н, Ас), 3,68 (с, 3 Н,Me), 3,99 (д, 1 Н, 5'-Н), 5,40-5,52 (м, 3 Н, 2', -3',-4'-Н), 6,29 (д, 1 Н, 1-Н), 7,56 (м, 1H, 3 Н), 7,99 (с,1H, 6-H), 8,52 (д, 1H, 4-H), 8,93 (с, 1 Н, 2-H). Данное соединение называют в дальнейшем глюкуронидом клиохинола. Пример 5. Взаимодействие витамина B12 с глюкуронидом клиохинола, полученным в примере 4, исследовали с использованием спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР). Поскольку глюкуронид клиохинола растворим в воде, исследование проводили в забуференной воде при рН 6,5. Готовили три разных раствора и их 1H-ЯМР-спектры регистрировали в спектрометре DRX 400 МГц при 20 С. Раствор а) содержал свободный витамин B12 (гидроксикобаламин) в концентрации 2,6 мМ. Раствор b) содержал смесь 2,6 мМ витамина B12 и 10 мМ глюкуронида клиохинола (молярное отношение приблизительно 1:4). Раствор с) содержал 10 мМ глюкуронид клиохинола. На фиг. 5 представлены спектры этих трех растворов для ароматической области (5,5-9,8 м.д.). Различия являются совсем малыми, но очевидными в увеличении, показанном на фиг. 6 и 7 соответственно. Некоторые из резонансов витамина B12 (соответствующие бензимидазольной части молекулы) были смещены (см. фиг. 6), и то же самое наблюдается для двух резонансов глюкуронида клиохинола (соответствующих хинолиновой части молекулы) (см. фиг. 7). Эти результаты предполагают взаимодействие между глюкуронидом клиохинола и витамином B12, возможно, гидрофобной природы между бензимидазольной частью молекулы витамина B12 и хинолиновой частью молекулы глюкуронида клиохинола. Считается, что гидрофобное связывание витамина B12 с глюкуронидом клиохинола заставляет витамин B12 экскретироваться из организма вместе с глюкуронидом клиохинола, предотвращая таким образом резорбцию витаминаB12, что в конечном счете привело бы к недостаточности витамина B12. Поэтому считается, что недостаточность витамина B12 является, по меньшей мере, в некоторой степени, причиной,лежащей в основе SMON. Вследствие этого,когда бы ни вводился клиохинол, должна быть гарантия, что уровень витамина B12 в проходящем лечении субъекте является достаточным для избежания его дефицита. Это может достигаться совместным введением клиохинола и витамина B12. Пример 6. Получение фармацевтической композиции, содержащей фанхинон. 250 г фанхинона смешивали с 200 г сапамина (N-(4'-стеароиламинофенил)триметиламмонийметилсерной кислоты) и 1025 г моногидрата лактозы в течение периода 5 мин. Добавляли одним приемом 300 г кипящей воды к смеси 100 г кукурузного крахмала в 100 г холодной воды. Суспензию кукурузного крахмала,охлажденную до 40 С, добавляли к содержащей фанхинон порошкообразной смеси при непрерывном перемешивании. Смесь гранулировали с использованием сита 2,5 мм и обезвоживали в течение 18 ч при 40 С. Сухие гранулы смешивали с 400 г кукурузного крахмала и 20 г стеарата магния. Конечную смесь преобразовывали в таблетки, имеющие диаметр 8,0 мм и вес 200 мг. Пример 7. Получение фармацевтической композиции, содержащей фанхинон, клиохинол и витамин B12. 250 г фанхинона и 250 г клиохинола смешивали с 200 г сапамина(N-(4 стеароиламинофенил)триметиламмонийметилсерной кислоты) и 1025 г моногидрата лактозы в течение периода 5 мин. Добавляли 300 г кипящей воды в виде одной порции к смеси 100 г кукурузного крахмала в 100 г холодной воды. Суспензию кукурузного крахмала, охлажденную до 40 С, добавляли к содержащей фанхинон и клиохинол порошкообразной смеси при непрерывном перемешивании. Затем добавляли водный раствор витамина B12. Смесь гранулировали с использованием сита 2,5 мм и обезвоживали в течение 18 ч при 40 С. Сухие гранулы смешивали с 400 г кукурузного крахмала и 20 г стеарата магния. Конечную смесь преобразовывали в таблетки, имеющие диаметр 8,0 мм и вес 200 мг. Здесь цитированы различные публикации,содержание которых включено для сведения. После описания, таким образом, данного изобретения должно быть очевидно, что то же самое может варьироваться многочисленными путями. Такое варьирование не должно рассматриваться как отход от существа и объема данного изобретения, и все такие модификации,как должно быть очевидно лицу с обычной квалификацией в данной области, включены в объем следующих пунктов формулы изобретения. 19 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение фанхинона для производства фармацевтической композиции для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера. 2. Применение фанхинона и соединения или смеси соединений, выбранных из группы,включающей антиоксиданты, усилители ацетилхолина, следовые металлы, простетические группы и клиохинол, для производства фармацевтической композиции для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера. 3. Применение по п.2, при котором антиоксидантом является витамин С, витамин Е,кофермент Q10 или их сочетание. 4. Применение по п.2 или 3, при котором усилителем ацетилхолина является донепезил,или такрин. 5. Применение по пп.2, 3 или 4, при котором простетической группой является витаминB12. 6. Применение по любому из пп.2-5, при котором фанхинон используют для производства фармацевтической композиции в сочетании с клиохинолом. 7. Применение по любому из пп.2-6, при котором фанхинон используют для производства фармацевтической композиции в сочетании с клиохинолом и витамином B12. 8. Применение по любому из пп.1-7 для производства фармацевтической композиции в виде готовой формы препарата для перорального, парентерального или интрадермального введения. 9. Применение по любому из пп.1-7 для производства фармацевтической композиции в виде единичной дозированной формы. 10. Применение по любому из пп.2-7 для производства фармацевтической композиции в виде двух или более отдельных готовых фармацевтических форм для последовательного или одновременного введения. 11. Фармацевтическая композиция, включающая (а) фанхинон в количестве, эффективном для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, и (b) соединение или смесь соединений, выбранных из группы, включающей антиоксиданты, усилители ацетилхолина, следовые металлы, простетические группы и клиохинол, при условии, что, когда выбран клиохинол, по крайней мере, витамин B12 также выбран из указанной группы. 20 12. Фармацевтическая композиция по п.11,в которой антиоксидант выбран из группы,включающей витамин С, витамин Е, коферментQ10 или их сочетания. 13. Фармацевтическая композиция по п.11,в которой усилителем ацетилхолина является такрин или донепезил. 14. Фармацевтическая композиция по п.11,в которой простетической группой является витамин B12. 15. Фармацевтическая композиция, включающая (а) фанхинон в количестве, эффективном для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, и (b) смесь клиохинола и витамина B12. 16. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11 или 15, которая дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель. 17. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11, 15 или 16, в которой количество фанхинона составляет 5-250 мг, предпочтительно 10-50 мг, на единичную дозированную форму. 18. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11, 15 или 16, в которой количество клиохинола составляет 5-250 мг, предпочтительно 10-50 мг, на единичную дозированную форму. 19. Фармацевтическая композиция по п.15 или 16, в которой количество витамина B12 составляет 5 мкг-2 мг, предпочтительно 0,5-1 мг,на единичную дозированную форму. 20. Фармацевтическая композиция по пп.11, 15 или 16, приготовленная в виде формы для парентерального введения, интрадермального введения или перорального введения. 21. Фармацевтическая композиция по пп.11, 15 или 16, приготовленная в виде таблетки. 22. Фармацевтическая композиция по пп.11, 15 или 16, в которой клиохинол и витамин B12 приготовлены в виде отдельных фармацевтических форм, причем фанхинон приготовлен вместе с клиохинолом, или витамином B12,или отдельно. 23. Набор, включающий в одном или более контейнерах фанхинон и клиохинол в количестве, эффективном для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, и витамин B12 в количестве, эффективном для ингибирования вредного побочного действия клиохинола.