Иммуноцитокины для лечения рака в сочетании с химиотерапевтическими агентами

ИММУНОЦИТОКИНЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА В СОЧЕТАНИИ С ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМИ АГЕНТАМИ Изобретение относится к лечению рака с применением противоопухолевых агентов, таких как доксорубицин или паклитаксел, в сочетании с конъюгатами антитело-интерлейкин 2 (IL2), которые нацелены на тенасцин-С. Изобретение относится к лечению рака с помощью комбинации химиотерапевтических агентов и иммуноцитокинов. Тенасцин-С представляет собой большой гексамерный гликопротеин внеклеточного матрикса, который модулирует клеточную адгезию. Он участвует в таких процессах, как клеточная пролиферация и клеточная миграция, и связан с изменениями в строении ткани, которые происходят в процессе морфогенеза и эмбриогенеза, а также при онкогенезе или ангиогенезе. О существенной сверхэкспрессии большой изоформы тенасцина-С сообщали для ряда опухолей[Borsi 1992, выше], а моноклональные антитела, специфичные к доменам А 1 и D соответственно, были широко описаны во врачебной практике [Riva P. и др. Int J. Cancer 1992; 51:7-13, Riva P. и др. Cancer Res 1995; 55:5952s-5956s, Paganelli G. и др. Eur J. Nucl Med 1994; 21:314-321, Reardon D.A. и др. J. Clin Oncol 2002; 20:1389-1397, Bigner D.D. и др. J. Clin Oncol 1998; 16:2202-2212. Фрагменты моноклональных антител человека, специфичные к тенасцину-С, описаны вWO 2006/050834, и показано, что они предпочтительно связываются с опухолевой тканью по сравнению с нормальной тканью. Эти антитела применимы, например, для доставки токсинов, таких как цитокины,в частности, к опухолевым клеткам. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что конъюгаты антитело-цитокин, которые нацелены на тенасцин-С, имеют неожиданный синергизм с противоопухолевыми соединениями, такими как доксорубицин и паклитаксел, при лечении рака. В одном аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ лечения рака, включающий введение противоопухолевого соединения и конъютата антитело-интерлейкин 2 (IL2) индивидууму, нуждающемуся в этом, при этом конъюгат антитело-IL2 включает интерлейкин 2 (IL2), конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С. В других аспектах настоящего изобретения предусмотрено противоопухолевое соединение для применения в способе лечения рака, включающем введение противоопухолевого соединения в сочетании с конъюгатом антитело-IL2, включающим IL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С, индивидууму, нуждающемуся в этом, и применение противоопухолевого соединения в производстве лекарственного средства для применения в способе лечения рака, включающем введение противоопухолевого соединения в сочетании с конъюгатом антитело-IL2 индивидууму, нуждающемуся в этом, указанный конъюгат антитело-IL2 включает IL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С. В других аспектах настоящего изобретения предусмотрен конъюгат антитело-IL2, включающийIL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С для применения в способе лечения рака, включающем введение конъюгата антитело-IL2 в сочетании с противоопухолевым соединением индивидууму, нуждающемуся в этом, и применение конъюгата антитело-IL2, включающегоIL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С в производстве лекарственного средства для применения в способе лечения рака, включающем введение конъюгата антитело-IL2 в сочетании с указанным противоопухолевым соединением индивидууму, нуждающемуся в этом. В других аспектах настоящего изобретения предусмотрена комбинация противоопухолевого соединения и конъюгата антитело-IL2, включающего IL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С, для применения в способе лечения рака, включающем введение конъюгата антитело-IL2 и указанного противоопухолевого соединения индивидууму, нуждающемуся в этом, и применение комбинации противоопухолевого соединения и конъюгата антитело-IL2, включающего IL2,конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С, в производстве лекарственного средства для применения в способе лечения рака, включающем введение конъюгата антителоIL2 и противоопухолевого соединения индивидууму, нуждающемуся в этом. Способ лечения, описанный в данном изобретении, подходит для лечения опухолевого заболевания,включающего любой тип солидного или несолидного рака или злокачественную лимфому и, в частности,лейкемию, саркомы, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак груди, рак матки, рак яичников, рак предстательной железы, рак легких, колоректальный рак, рак шейки матки, рак печени, рак головы и шеи, рак пищевода, рак поджелудочной железы, рак почки, рак желудка и рак мозга. Рак может быть наследственным или спорадическим. В некоторых предпочтительных вариантах реализации рак может представлять собой рак груди. Противоопухолевые соединения представляют собой цитотоксические соединения, которые ингибируют рост, деление и/или пролиферацию раковых клеток. Противоопухолевые соединения в некоторых случаях могут оказывать влияние на нормальные неопухолевые клетки у пациента. Противоопухолевое соединение, например, может ингибировать клеточный цикл или активировать апоптоз. Подходящие противоопухолевые соединения, которые ингибируют клеточный цикл, включают агенты, повреждающие ДНК, и антимитотические агенты, включая ингибиторы сборки митотического веретена. Повреждающий ДНК агент представляет собой химиотерапевтическое соединение, которое индуцирует двунитевые разрывы клеточной ДНК (DNA DSBs), тем самым ингибируя или прекращая репликацию ДНК. Многие подходящие соединения известны в данной области техники для применения при лечении рака, включая, например, блеомицин, гидроксимочевину, митомицин и актиномицин и ингибиторы активности топоизомеразы I и II, включая антрациклины, такие как даунорубицин, доксорубицин,эпирубицин, идарубицин, митоксантрон и валрубицин, этопозид и тенипозид, и члены семейства теканов, например иринотекан, топотекан, рубитекан. Агенты, повреждающие ДНК, можно применять, как описано в данном изобретении, в любой удобной форме или составе. Например, можно использовать любой подходящий изомер, соль, сольват, химически защищенную форму или пролекарство конкретного повреждающего ДНК агента. В некоторых предпочтительных вариантах реализации указанный повреждающий ДНК агент представляет собой доксорубицин 8S,10S)-10-(4-амино-5-гидрокси-6-метилтетрагидро-2 Н-пиран-2-илокси)6,8,11-тригидрокси-8-(2-гидроксиацетил)-1-метокси-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион). Доксорубицин представляет собой антрациклиновый интеркалирующий агент, который широко применяется для лечения рака под торговыми наименованиями, такими как Адриамицин и Рубеке. Противоопухолевые соединения, которые ингибируют сборку митотического веретена, например,могут связываться с микротрубочками и изменять полимеризацию или стабильность микротрубочек, что приводит к ингибированию развития клеточного цикла и, в конечном счете, к апоптозу. Примеры ингибиторов сборки митотического веретена включают таксаны, например паклитаксел (таксол: (бензоиламино)гидрокси-6,12b-бис-(ацетилокси)-12-(бензоилокси)-2 а,3,4,4 а,5,6,9,10,11,12,12 а,12bдодекагидро-4,11-дигидрокси-4 а,8,13,13-тетраметил-5-оксо-7,11-метано-1H-циклодека(3,4)бенз(1,2b)оксет-9-иловый эфир (2aR-(2 а-,4-р,4 а-,6-,9-(-R,-S),11-,12-,12 а-,2b-бензолпропановая кислота) и его аналоги или производные. Таксаны представляют собой сложные эфиры, состоящие из 15-членной таксановой кольцевой системы, связанной с 4-членным окситановым кольцом. Предпочтительные таксаны представляют собой такие, которые имеют составляющие, которые, как известно в данной области техники, требуются для усиления образования микротрубочек, например паклитаксел и доцетаксел. Структуры паклитаксела и доцетаксела отличаются по заменам в положении С-10 таксанового кольца и по эфирной боковой цепи,присоединенной в положении С-13. Доцетаксел включает трет-бутоксикарбонил вместо бензоила на аминогруппе фрагмента (2R,3S)-фенилизосерина в положении С-13 и гидроксильную группу вместо ацетоксильной группы в положении С-10. Структуры паклитаксела и доцетаксела хорошо известны в данной области техники. Другие таксаны, подходящие для применения, описанного в данном изобретении, представляют собой производные паклитаксела, имеющие структурные изменения в той части молекулы паклитаксела,которая включает атомы углерода 6-12, с функциональными группами, содержащими кислород, в положениях С-7, С-9 и С-10. Многие такие производные известны в данной области техники, и известно, что такие производные проявляют биологическую активность, которая сравнима с биоактивностью паклитаксела. Например, ацилирование гидроксильной группы С-7, или ее замещение на водород, значительно не снижает активность паклитаксела. Дополнительно, замещение 10-ацетоксильной группы на водород вызывает лишь незначительное снижение активности. Восстановление карбонильной группы С-9 до -OH группы, как известно, вызывает небольшое повышение активности сборки тубулина. Дополнительно, известно, что продукт перегруппировки с циклопропановым кольцом, связывающим седьмое и восьмое положения, практически так же цитотоксичен,как и паклитаксел. Также сообщали, что производные бензоила с заместителями в мета-положении более активны, чем их аналоги, содержащие заместители в пара-положении, и часто более активны, чем сам паклитаксел. Другой аналог паклитаксела, подходящий для применения, описанного в данном изобретении,представляет собой А-норпаклитаксел. Этот аналог обладает активностью в отношении сборки тубулина,которая лишь в три раза меньше, чем у паклитаксела. А-норпаклитаксел и паклитаксел имеют очень схожие молекулярные структуры, которые могут объяснить их похожие активности по отношению к сборке тубулина. Другими подходящими таксанами являются таксазм, 7-эпипаклитаксел, трет-ацетилпаклитаксел,10-дезацетилпаклитаксел, 10-дезацетил-7-эпипаклитаксел, 7-ксилозилпаклитаксел, 10-дезацетил-7 глутарилпаклитаксел, 7-N,N-диметилглицилпаклитаксел, 7-L-аланилпаклитаксел и их смеси. В некоторых предпочтительных вариантах реализации указанное противоопухолевое соединение представляет собой паклитаксел. Конъюгат антитело-IL2 для применения, описанного в данном изобретении, может включать IL2,конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С.IL2 представляет собой секретируемый цитокин, который участвует в иммунорегуляции и пролиферации Т и В лимфоцитов. Было показано, что IL2 оказывает цитотоксическое действие на опухолевые клетки, и рекомбинантный IL2 человека (альдеслейкин: ProleukinR) получил одобрение Управления по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами FDA для лечения метастатического рака почки и метастатической меланомы. Последовательность IL2 человека приведена в SEQ ID NO: 11 и общедоступна по ссылке в базе данных последовательностей NP000577.2 GI: 28178861. В некоторых предпочтительных вариантах реализации фрагмент IL2 конъюгата антитело-IL2 включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности последовательностей, по меньшей мере 95% идентичности последовательностей или по меньшей мере 98% идентичности последовательностей со зрелой последовательностью IL2 человека, приведенной в SEQ ID NO: 11. Идентичность последовательностей обычно определяют со ссылкой на алгоритм GAP (пакет Wisconsin GCG, Accelerys Inc, Сан-Диего, США). В GAP используется алгоритм Needleman и Wunsch для выравнивания двух целых последовательностей, которое позволяет максимизировать количество совпадений и минимизировать количество гэпов. Как правило, используют параметры по умолчанию, со штрафом за открытие гэпа = 12 и штрафом за продолжение гэпа = 4. Применение GAP может быть предпочтительным, но можно применять и другие алгоритмы, например BLAST (в котором используется способ Altschul и др. (1990), J. Mol. Biol. 215: 405-410), FASTA (в котором используется способ Pearson иMol. Biol. 147: 195-197), или программу TBLASTN от Altschul и др. (1990), выше, как правило, используя параметры по умолчанию. В частности, можно применять алгоритм psi-Blast (Nucl. Acids Res. (1997), 25 3389-3402). В некоторых особенно предпочтительных вариантах реализации молекула IL2 конъюгата антителоIL2 включает последовательность зрелого IL2 человека, приведенную в SEQ ID NO: 11. Фрагмент IL2 может быть слит в обратном направлении (по N-концу) или в прямом направлении(по С-концу) с антителом или его полипептидным компонентом. Фрагмент IL2 может быть связан или присоединен к фрагменту антитела в конъюгате антитело-IL2 с помощью любых подходящих ковалентных или нековалентных средств. В предпочтительных вариантах реализации конъюгат антитело-IL2 может представлять собой слитый белок, включающий IL2 и антитело против тенасцина-С или его полипептидный компонент, например, тяжелую цепь или легкую цепь антитела или многоцепочечный фрагмент антитела, такой как Fab. Таким образом, например, фрагмент IL2 может быть слит с VH доменом или VL доменом указанного антитела. Обычно, антитело или его компонент и фрагмент IL2 соединены с помощью пептидного линкера, например пептида, состоящего из приблизительно 5-25 остатков, например 10-20 остатков, предпочтительно приблизительно 15 остатков. Подходящие примеры пептидных линкеров хорошо известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации линкер может иметь последовательность аминокислот, приведенную в SEQID NO: 12. Как правило, линкер имеет последовательность аминокислот, включающую один или более тандемных повторов мотива. Обычно указанный мотив представляет собой последовательность из пяти остатков, и предпочтительно по меньшей мере 4 из этих остатков представляют собой Gly или Ser. Когда четыре из пяти остатков представляют собой Gly или Ser, другой остаток может быть Ala. Более предпочтительно, каждый из пяти остатков представляет собой Gly или Ser. Предпочтительными мотивами являются GGGGS, SSSSG, GSGSA и GGSGG. Предпочтительно мотивы являются смежными в последовательности, без дополнительных нуклеотидов между повторами. Линкерная последовательность может включать или состоять из одного до пяти, предпочтительно трех или четырех повторов этого мотива. Например, линкер с тремя тандемными повторами может иметь одну из следующих последовательностей аминокислот:GGSGGGGSGGGGSGG - SEQ ID NO: 16. В предпочтительных вариантах реализации фрагмент антитела конъюгата антитело-IL2 специфично связывается с большой изоформой тенасцина-С. Например, антитело может связываться предпочтительно с большой изоформой тенасцина-С по сравнению с малой изоформой тенасцина-С. Наиболее предпочтительно антитело связывается с доменом А 1 большой изоформы тенасцина-С. Предпочтительные антитела являются опухолеспецифичными и связываются предпочтительно с опухолевой тканью по сравнению с нормальной тканью. Антитела, например, могут связываться со стромой и/или нео- и периваскулярными структурами опухолевой ткани, предпочтительно по сравнению с нормальной тканью. Примеры подходящих антител для применения в конъюгатах антитело-IL2 описаны в WO 2006/050834. В некоторых вариантах реализации, фрагмент антитела конъюгата антитело-IL2, описанного в данном изобретении, конкурирует за связывание с тенасцином-С с антителом, включающим домен 4A1-F16SEQ ID NO: 4. Конкурирование между антителами можно легко протестировать in vitro, например, применяяELISA, и/или путем мечения специфичной репортерной молекулой одного антитела, которое можно обнаружить в присутствии другого немеченого антитела (антител), для обеспечения идентификации антител, которые связывают такой же эпитоп или перекрывающийся эпитоп. Подходящее антитело для применения в конъюгате антитело-IL2, описанном в данном изобретении,-3 018746 может включать сайт связывания антиген-антитело, включающий домен VH и домен VL,домен VH, включающий CDR1 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6, и CDR3 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7; и домен VL, включающий CDR1 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8, CDR2 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9, и CDR3 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых предпочтительных вариантах реализации антитело может включать сайт связывания антиген-антитело, включающий домен 4A1-F16 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2, и домен 4A1-F16 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 4. Варианты этих доменов VH и VL и гипервариабельных участков (CDRs) также можно использовать в антителах для применения в конъюгатах антитело-IL2, описанных в данном изобретении. Подходящие варианты можно получить с помощью способов изменения последовательности или мутации и скрининга. Конкретные варианты для применения, описанного в данном изобретении, могут включать одно или более изменений последовательности аминокислот (присоединение, делецию, замену и/или вставку аминокислотного остатка), возможно, менее чем приблизительно 20 изменений, менее чем приблизительно 15 изменений, менее чем приблизительно 10 изменений или менее чем приблизительно 5 изменений, 4, 3, 2 или 1 изменение. Изменения можно внести в одном или более каркасных участках и/или одном или более гипервариабельных участках. В частности, изменения можно внести в CDR1 VH, CDR2VH и/или CDR3 VH, особенно в CDR3 VH. Введение противоопухолевого соединения, конъюгата антитело-IL2 и композиции, включающей одну или обе эти молекулы, осуществляют предпочтительно в "терапевтически эффективном количестве", которого достаточно, чтобы принести пользу пациенту. Такой пользой может быть, по меньшей мере, снижение выраженности по меньшей мере одного симптома. Фактически вводимое количество, режим и курс введения будут зависеть от природы и тяжести заболевания, от которого лечат. Назначение лекарства, например выбор дозировки и т.д., находится в компетенции практикующих врачей и других врачей. Точная доза будет зависеть от ряда факторов, размера и расположения области, нуждающейся в лечении, конкретной природы конъюгата антитело-IL2 (например, целое антитело, фрагмент или димерное антитело). Обычная доза конъюгата антитело-IL2 будет лежать в диапазоне от 0,5 мг до 100 г для системного применения и от 10 мкг до 1 мг для местного применения. Обычно фрагмент антитела в конъюгате представляет собой целое антитело, предпочтительно, IgG1 или IgG4 изотипа. Это представляет собой дозу для однократного лечения взрослого пациента, которую можно пропорционально изменить для детей и младенцев и также изменить для других форматов антител пропорционально молекулярной массе. Подходящие дозы и схемы лечения для противоопухолевых соединений хорошо известны в данной области техники. Лечение можно повторять ежедневно, два раза в неделю, еженедельно или ежемесячно, по усмотрению лечащего врача. Конъюгат антитело-IL2 и указанное противоопухолевое соединение можно вводить последовательно или одновременно в соответствии с любой подходящей схемой лечения. Конъюгат антитело-IL2 и указанное противоопухолевое соединение, как правило, вводят индивидууму в виде фармацевтической композиции, которая может включать по меньшей мере один компонент, дополнительно к активному соединению. Подходящие компоненты включают фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель, буфер, стабилизатор или другие материалы, хорошо известные специалистам в данной области техники Такие материалы должны быть нетоксичны и не должны препятствовать эффективности действующего ингредиента. Конкретная природа носителя или другого материала будет зависеть от пути введения, который может быть пероральным, или с помощью инъекции, например внутривенным. Конъюгат антитело-IL2 и указанное противоопухолевое соединение могут входить в состав раздельных фармацевтических композиций или, когда это целесообразно, в той же фармацевтической композиции. Другой аспект настоящего изобретения обеспечивает фармацевтическую композицию для применения при лечении рака, включающую противоопухолевое соединение и конъюгат антитело-IL2, включающий IL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С. Другой аспект настоящего изобретения обеспечивает способ получения фармацевтической композиции для применения при лечении рака, включающий составление лекарственной формы противоопухолевого соединения и конъюгата антитело-IL2, включающего IL2, конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в форме таблетки, капсулы,порошка или в жидкой форме. Таблетка может включать твердый носитель, такой как желатин или адъювант. Жидкие фармацевтические композиции, как правило, включают жидкий носитель, такой как вода,нефтепродукты, животные или растительные масла, минеральное масло или синтетическое масло. Могут быть также включены физиологический солевой раствор, декстроза или раствор другого сахарида, или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Для внутривенной инъекции или инъекции в участок повреждения действующий ингредиент должен быть в виде приемлемого для парентерального применения водного раствора, который апирогенен и имеет подходящие pH, изотоничность и стабильность. Рядовые специалисты в данной области техники смогут легко приготовить подходящие растворы, применяя, например, изотонические среды, такие как инъекция хлорида натрия, инъекция Рингера, инъекция Рингера с лактатом. Консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки можно включить при необходимости. Другой аспект настоящего изобретения обеспечивает терапевтический набор для применения для лечения рака, включающий противоопухолевое соединение и конъюгат антитело-IL2, включающий IL2,конъюгированный с антителом, которое специфично связывается с тенасцином-С. Компоненты набора (т.е. противоопухолевое соединение и конъюгат антитело-IL2) стерильны и находятся в запечатанных ампулах или других контейнерах. Набор может дополнительно включать инструкции для применения компонентов в способе, описанном в данном изобретении. Компоненты указанного набора могут быть включены или упакованы в контейнер, например в пакет, коробку, банку, жестяной сосуд или блистерную упаковку. Терминология. Антитело. Этот термин описывает иммуноглобулин либо природный, либо частично или полностью полученный синтетическим путем. Термин также включает любой полипептид или белок, включающий домен связывания, который является, или по существу является, гомологичным домену связывания антитела. Примерами антител являются изотипы иммуноглобулинов и их изотипические подклассы; фрагменты,которые включают антиген-связывающий домен, такой как Fab, scFv, Fv, dAb, Fd; и димерные антитела. Можно получить моноклональные и другие антитела и использовать методики технологии рекомбинантной ДНК для получения других антител или химерных молекул, которые сохраняют специфичность исходного антитела. Такие методики могут включать внедрение ДНК, кодирующей вариабельный участок иммуноглобулина, или гипервариабельные участки (CDR), антитела и их слияние с константными областями, или константными областями с каркасными участками различного иммуноглобулина. См.,например, ЕР-А-184187, GB 2188638A или ЕР-А-239400. Гибридому или другую клетку, продуцирующую антитело, можно подвергнуть генетической мутации или другим изменениям, которые могут изменять или не изменять специфичность связывания продуцируемых антител. Так как антитела можно модифицировать множеством способов, термин "антитело" должен включать любой специфичный связывающий элемент или вещество, включающее домен связывания, с требуемой специфичностью. Таким образом, этот термин включает фрагменты антител, производные,функциональные эквиваленты и гомологи антител, включая любой полипептид, включающий домен связывания иммуноглобулина, либо природный, либо полностью или частично синтетический. Химерные молекулы, включающие домен связывания иммуноглобулина, или эквивалент, слитый с другим полипептидом, следовательно, являются включенными. Клонирование и экспрессия химерных антител описаны в ЕР-А-0120694 и ЕР-А-0125023. Было показано, что фрагменты целого антитела могут выполнять функцию связывания антигенов. Примерами связывающих фрагментов являются (i) Fab-фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и СН 1; (ii) Fd-фрагмент, состоящий из VH и доменов СН 1; (iii) Fv-фрагмент, состоящий из доменов VL иVH одного антитела; (iv) dAb-фрагмент (Ward, E.S. и др., Nature 341, 544-546 (1989, который состоит из домена VH; (v) изолированные гипервариабельные участки; (vi) F(ab')2-фрагменты, двухвалентный фрагмент, включающий два связанных Fab фрагмента, (vii) одноцепочечные молекулы Fv (scFv), в которых домен VH и домен VL связаны посредством пептидного линкера, который позволяет двум доменам взаимодействовать с образованием сайта связывания антигена (Bird и др., Science, 242, 423-426, 1988;Huston и др., PNAS USA, 85, 5879-5883, 1988); (viii) биспецифичные одноцепочечные димеры Fv(PCT/US92/09965) и (ix) "димерные антитела", мультивалентные или мультиспецифичные фрагменты,созданные путем слияния генов (WO 94/13804; P. Holliger и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 6444-6448,1993). Молекулы Fv, scFv или димерное антитело можно стабилизировать путем введения дисульфидных мостиков, связывающих домены VH и VL (Y. Reiter и др. Nature Biotech 14, 1239-1245, 1996). Также можно получить мини-антитела, включающие scFv, соединенный с СН 3 доменом (S. Hu и др., CancerRes. 56, 3055-3061, 1996). Димерные антитела представляют собой мультимеры полипептидов, каждый полипептид включает первый домен, включающий участок связывания легкой цепи иммуноглобулина, и второй домен, включающий участок связывания тяжелой цепи иммуноглобулина, указанные два домена связаны (например,с помощью пептидного линкера), но не могут взаимодействовать друг с другом с образованием сайта связывания антигена: сайты связывания антигена образуются путем взаимодействия первого домена одного полипептида в мультимере со вторым доменом другого полипептида в мультимере (WO 94/13804). Антигенсвязывающий домен. Этот термин описывает часть антитела, которая включает область, которая специфично связывается и комплементарна части или всему антигену. Если антиген большой, антитело может связываться лишь с конкретной частью этого антигена, эта часть называется эпитопом. Антигенсвязывающий домен может обеспечить один или более вариабельных доменов антитела (например, так называемый Fd-фрагмент антитела, состоящий из домена VH). Предпочтительно антигенсвязывающий домен включает вариабельный участок легкой цепи антитела (VL) и вариабельный участок тяжелой цепи антитела (VH). Специфичный. Этот термин можно применять по отношению к случаю, когда один партнер из специфично связывающейся пары не будет проявлять какое-либо значительное связывание с молекулами, отличными от его специфично связывающего партнера(ов). Например, антитело, специфичное к тенасцину-С, может проявлять небольшое или не проявлять связывания с другими компонентами внеклеточного матрикса,такими как фибронектин. Аналогично, антитело, специфичное к большой изоформе тенасцина-С, может проявлять небольшое или не проявлять связывания с малой изоформой тенасцина-С. Термин также применим, когда, например, антигенсвязывающий домен специфичен к конкретному эпитопу, который несет множество антигенов, в этом случае, специфично связывающийся партнер, несущий антигенсвязывающий домен, будет способен связываться с различными антигенами, несущими указанный эпитоп. Включать. Этот термин, как правило, используют в смысле "содержит", иначе говоря, допускает присутствие одного или более признаков или компонентов. Под "по существу описанный" подразумевают, что рассматриваемый гипервариабельный участок или домен VH или VL согласно настоящему изобретению будут либо идентичными, либо очень схожими с конкретными участками, последовательность которых описана в данном изобретении. Под "очень схожие" подразумевают, что можно произвести от 1 до 5, предпочтительно от 1 до 4, как, например, от 1 до 3, или 1 или 2, или 3 или 4 замены в гипервариабельном участке и/или домене VH или VL. Структура, несущая гипервариабельный участок согласно настоящему изобретению, будет, как правило, иметь последовательность тяжелой или легкой цепи антитела или существенной ее части, в которой гипервариабельный участок расположен в положении, соответствующем гипервариабельному участку встречающихся в природе вариабельных доменов VH и VL антитела, кодируемых перестроенными генами иммуноглобулинов. Структуры и положения вариабельных доменов и гипервариабельных участков иммуноглобулина можно найти в литературе (Kabat, Е.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 4-e издание. Министерство здравоохранения и социального обеспечения США. 1987, и его исправленных и дополненных изданиях, доступных в сети Интернет (http://immuno.bme.nwu.edu. Различные дополнительные аспекты и варианты реализации настоящего изобретения должны быть очевидны для специалистов в данной области техники в духе настоящего описания изобретения. Все документы и данные, приводимые в базах данных, указанные в настоящем описании, полностью включены в данное изобретение посредством ссылки."И/или" в данном изобретении должно пониматься, как конкретное описание каждого из двух установленных признаков или компонентов, в присутствии или без другого. Например "А и/или В" должно пониматься, как конкретное описание каждого из (i) A, (ii) В и (iii) А и В, точно так же, как если бы каждый был отдельно описан в данном изобретении. Если из контекста не очевидно иное, описания и определения признаков, описанных выше, не ограничены любым конкретным аспектом или вариантом реализации настоящего изобретения и применимы в равной степени ко всем аспектам и вариантам реализации, которые описаны. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения далее проиллюстрированы с помощью примеров со ссылками на фигуры и таблицы. На фиг. 1-4 показано биораспределение меченого F16-IL2, который вводили после предварительной инъекции доксорубицина. На фиг. 5 показано действие доксорубицина, F16-IL2 и рекомбинантного IL2 на опухоли рака груди человека MDA-MB231, имплантированные в "голых" мышей. На фиг. 6 показано действие паклитаксела (таксола) и F16-IL2 на опухоли рака груди человекаMDA-MB231, имплантированные в "голых" мышей. На фиг. 7 показано схематическое изображение малой (А) и большой (В) изоформ тенасцина-С. Некоторые фибронектин типа III-подобные домены подвергаются альтернативному сплайсингу, либо включаясь (В), либо не включаясь (А) в молекулу. Последовательность аминокислот и кодирующая последовательность нуклеотидов тенасцина-С общедоступны по ссылкам в базе данных последовательностей Эксперименты. Биораспределение. Эффективность нацеливания in vivo оценивали с помощью анализа биораспределения. Мышей, несущих опухоль, получали путем подкожного инъецирования 107 клеток рака груди человека MDA-MB231 самкам "голых" мышей Balb/c 10-12-недельного возраста (Charles River Laboratories). Мышей распределяли по группам (n5), когда опухоли были отчетливо пальпируемы, и инъецировали внутривенно в боковую хвостовую вену 10 мг/кг доксорубицина за 8 дней, 24 ч или 2 ч до анализа биораспределения. Контрольную группу освобождали от введения доксорубицина. Очищенные F16-IL2 метили радиоактивным йодом и инъецировали в боковую хвостовую вену всех мышей. Мышей умерщвляли через 24 ч после инъекции (12,5 мкг, 3,3 мкКи на мышь). Органы взвешивали и радиоактивность подсчитывали с помощью счетчика гамма-излучения Packard Cobra. Содержание радиоактивности типичных органов выражали в виде процента от инъецированной дозы на грамм ткани (%ИД/г). Результаты этих экспериментов показали, что предварительная инъекция доксорубицина не нарушала нацеливание иммуноцитокина на опухоль (фиг. 1-4). Терапия. Мышей, несущих опухоль, получали путем подкожного инъецирования 2107 клеток рака груди человека MDA-MB-231 самкам "голых" мышей Balb/c 10-12-недельного возраста (Charles River Laboratones). Мышей распределяли по группам (n=5) через 9 дней после имплантации опухолевых клеток, когда опухоли были отчетливо пальпируемы, и инъецировали внутривенно в боковую хвостовую вену солевой раствор, 20 мкг F16-IL2 (что соответствовало 6,6 мкг IL2), 6,6 мкг рекомбинантного IL2 (Proleukin), и 4 или 1 мг/кг доксорубицина в максимальном объеме, равном 250 мкл. За мышами наблюдали ежедневно и рост опухоли измеряли три раза еженедельно с помощью штангенциркуля, используя следующую формулу: объем=длинаширина 20.5. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема 2000 мм 3 или когда опухоли становились некротическими, согласно швейцарским нормативным требованиям и согласно лицензии проекта, предоставленной Veterinramt des Kantons Zurich (198/2005). Размеры опухоли выражали в виде среднегосреднеквадратическая ошибка. Синергичное действие наблюдали между F16-IL2 и доксорубицином в модели рака груди человекаMDA-MB231, имплантированного "голым" мышам (фиг. 5). Также наблюдали, что более высокие дозы доксорубицина были еще более эффективны, чем низкие дозы. Мышам, несущим опухоли, полученным тем же способом, инъецировали внутривенно в боковую хвостовую вену солевой раствор, 20 мкг F16-IL2 (что соответствует 6,6 мкг IL2), и 1 или 5 мг/кг таксола в максимальном объеме, равном 250 мкл. За мышами наблюдали и рост опухоли измеряли, как описано выше. Синергичное действие наблюдали между F16-IL2 и таксолом в модели рака груди человека MDAMB231, имплантированного "голым" мышам (фиг. 6). Последовательности.SEQ ID NO: 1. Последовательность нуклеотидов домена 4A1-F16 VHSEQ ID NO: 2. Последовательность аминокислот домена 4A1-F16 VH Последовательность нуклеотидов домена 4A1-F16 VLSEQ ID NO: 4. Последовательность аминокислот домена 4A1-F16 VLSEQ ID NO: 12. Последовательность аминокислот пептидного линкераSEQ ID NO: 13. Последовательность аминокислот пептидного линкераSEQ ID NO: 14. Последовательность аминокислот пептидного линкераSEQ ID NO: 15. Последовательность аминокислот пептидного линкераSEQ ID NO: 16. Последовательность аминокислот пептидного линкера Перечень последовательностей нуклеотидов 165-32 ЕА Перечень последовательностей ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ лечения рака у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение комбинации противоопухолевого соединения и антитела, которое специфично связывается с тенасцином-С, конъюгированного с интерлейкином 2 (IL2). 2. Способ согласно п.1, отличающийся тем, что указанное антитело специфично связывается с большой изоформой тенасцина-С. 3. Способ согласно п.2, отличающийся тем, что указанное антитело специфично связывается с доменом А 1 большой изоформы тенасцина-С. 4. Способ согласно п.3, отличающийся тем, что указанное антитело конкурирует за связывание с большой изоформой тенасцина-С с антителом, включающим домен 4A1-F16 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2, и домен 4A1-F16 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 4. 5. Способ согласно п.4, отличающийся тем, что указанное антитело включает антигенсвязывающий сайт, содержащий домен VH и домен VL, причем указанный домен VH включает CDR1 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 VH,имеющий последовательность SEQ ID NO: 6, и CDR3 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7; и указанный домен VL включает CDR1 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8, CDR2 VL,имеющий последовательность SEQ ID NO: 9, и CDR3 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 10. 6. Способ согласно п.5, отличающийся тем, что указанное антитело включает антигенсвязывающий сайт, содержащий домен 4A1-F16 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2, и домен 4A1-F16VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 4. 7. Способ согласно любому из пп.1-6, отличающийся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой агент, повреждающий ДНК. 8. Способ согласно п.7, отличающийся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой доксорубицин. 9. Способ согласно любому из пп.1-6, отличающийся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой ингибитор сборки митотического веретена. 10. Способ согласно п.9, отличающийся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой паклитаксел. 11. Способ согласно любому из пп.1-10, отличающийся тем, что рак представляет собой рак груди. 12. Применение комбинации противоопухолевого соединения и антитела, которое специфично связывается с тенасцином-С, конъюгированного с IL2 в производстве лекарственного средства для лечения рака. 13. Применение согласно п.12, отличающееся тем, что указанное антитело специфично связывается с большой изоформой тенасцина-С. 14. Применение согласно п.13, отличающееся тем, что указанное антитело специфично связывается с А 1 доменом большой изоформы тенасцина-С. 15. Применение согласно п.14, отличающееся тем, что указанное антитело конкурирует за связывание с большой изоформой тенасцина-С с антителом, включающим домен 4A1-F16 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2, и домен 4A1-F16 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 4. 16. Применение согласно п.15, отличающееся тем, что указанное антитело включает антигенсвязывающий сайт, содержащий домен VH и домен VL, причем домен VH включает CDR1 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6, и CDR3 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7; и домен VL включает CDR1 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8, CDR2 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9, и CDR3 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 10. 17. Применение согласно п.16, отличающееся тем, что указанное антитело включает антигенсвязывающий сайт, содержащий домен 4A1-F16 VH, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2, и домен 4A1-F16 VL, имеющий последовательность SEQ ID NO: 4. 18. Применение согласно любому из пп.12-17, отличающееся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой агент, повреждающий ДНК. 19. Применение согласно п.18, отличающееся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой доксорубицин. 20. Применение согласно любому из пп.12-17, отличающееся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой ингибитор сборки митотического веретена. 21. Применение согласно п.20, отличающееся тем, что указанное противоопухолевое соединение представляет собой паклитаксел. 22. Применение согласно любому из пп.12-21, отличающееся тем, что указанный рак представляет собой рак груди. 23. Набор для лечения рака в соответствии со способом по любому из пп.1-11, включающий противоопухолевое соединение и антитело, которое специфично связывается с тенасцином-С, конъюгированное с IL2.