Применение бактерицидных пиримидинов для профилактики передачи вич половым путём и фармацевтические композиции на их основе

011298 Настоящее изобретение относится к бактерицидному действию некоторых пиримидинов или триазинов, содержащих ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTIs), в частности настоящее изобретение касается применения производных пиримидинов или триазинов при получении лекарственного средства для профилактики передачи ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека) или инфицирования человека, в частности передачи половым путем. Изобретение также касается фармацевтических композиций, приспособленных для нанесения в то место, где происходит половая связь или относящийся к ней интимный контакт. По всему миру гетеросексуальный путь является преобладающим видом передачи СПИДа. Следовательно, возникла потребность в мероприятиях, препятствующих распространению ВИЧ инфекции половым путем. Поскольку не существует эффективного лечения или вакцины против СПИДа, профилактические мероприятия являются только инструментами, которые в настоящее время могут уменьшить передачу вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Постоянное и правильное использование презервативов является эффективным препятствием, предотвращающим передачу ВИЧ. Однако снижение инфицирования может быть значительно снижено, только если презервативы используются почти для всех половых контактов; результат, который не может быть достигнут, несмотря на интенсивные профилактические программы для расширения использования презервативов. Разработка бактерицидов для местного применения может представлять эффективную альтернативу презервативам. Бактерицид представляет собой любой агент, который убивает или дезактивирует микроорганизмы, вызывающие заболевание. Согласно Международной ассоциации врачей по наблюдению за СПИДом (International Association of Physicians in AIDS CARE) (IAPAC), определение бактерицидов также включает в себя воздействие, которое может препятствовать или предотвращать инфицирование, а также усиливать естественные защитные силы организма для предотвращения инфицирования посредством половых актов. В идеале, бактерицидные средства должны иметь незначительные побочные действия или не иметь их в эффективной бактерицидной концентрации. Одним аспектом в этом отношении является то, что лекарственное средство, используемое в качестве бактерицидного средства, должно обладать незначительной иммуносупрессивной активностью или не обладать ею в эффективной бактерицидной концентрации. Кроме того, идеальное бактерицидное средство должно адекватно выдерживать различные температуры и подходящим образом действовать в пределах различных диапазонов рН (диапазонах щелочных и кислотных значений во влагалище). Далее, бактерицидное средство не должно устранять естественные полезные лактобактерии, которые постоянно находятся во влагалище и регулируют общее состояние влагалища. Исследования показали, что передача ВИЧ посредством прямых биологических механизмов облегчается у субъекта, уже инфицированного заболеванием, передающимся половым путем (ЗППП) (Fleminget al. Sexually Transmitted Infections (1999 Feb), 75(1), 3-17). Язвы, повреждения и воспаления, вызванные ЗППП, подрывают некоторые физические препятствия заболеванию. По этим причинам, принятие мер для профилактики передачи ЗППП является важной стратегией в борьбе с ВИЧ инфекцией. Некоторые бактерицидные средства в клинических испытаниях на людях содержат компоненты типа детергентов, которые могут вызвать повреждения эпителия влагалища и шейки матки. Спермицидные продукты, содержащие биологические детергенты, могут инактивировать ВИЧ in vitro. Однако, было показано, что такие биодетергенты могут обострять язвы половых органов и облегчать передачу ВИЧ при исследовании in vivo. Помимо сурфактантов, которые действуют непосредственно на вирусную частицу, лекарственные средства, которые блокируют ранние стадии размножения ВИЧ, такие как лекарственные средства против ретровирусов, проходят доклиническую оценку. Различные лекарственные средства против ретровирусов, содержащие ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTIs) были протестированы in vitro с различными результатами. До настоящего времени не было опубликовано данных в отношении in vivo эффективности NNRTI в качестве бактерицидных агентов. В настоящее время было обнаружено, что пиримидиновые и триазиновые соединения по настоящему изобретению проявляют бактерицидную активность по той причине, что эти соединения обладают способностью предупреждать ВИЧ инфицирование. Кроме того, пиримидиновые и триазиновые соединения по настоящему изобретению также проявляют бактерицидную активность против патогенов ЗППП, таких как Haemophilus ducreyi, поддерживая совместимость с лактобактериями и нормальной флорой влагалища. Произведенный лечебный эффект соединений по настоящему изобретению на венерические язвы, вызванные Haemophilus ducreyi, вносит существенный вклад в профилактику системной ВИЧ инфекции. В EP 1002795, WO 99/50250, WO 99/50256 и WO 00/27828 описаны соединения, ингибирующие репликацию ВИЧ в Т-4 клетках человека через взаимодействие с ферментом ВИЧ обратная транскриптаза. Описание изобретения Настоящее изобретение относится к применению 4-4-[(2,4,6-триметилфенил)амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрила или его фармацевтически приемлемой аддитивной соли для получения лекарственного микробицидного средства местного применения для профилактики (предотвращения) пре-1 011298 дачи или заражения ВИЧ, где указанные передача или заражение происходит через половую связь или связанный с ней интимный контакт между партнерами. Предпочтительно, применение относится к случаю, когда передача или заражение происходит через влагалище. В частном варианте применение представляет собой случай, когда лекарственное средство является биоадгезивным к месту нанесения. В предпочтительном варианте осуществления изобретения лекарственное средство имеет форму геля, желе, крема, пасты, эмульсии, дисперсии, мази, пленки, губки, пены, аэрозоля, порошка, интравагинального кольца, цервикального колпачка, имплантата, пластыря, суппозитория, пессария. Наиболее предпочтительный вариант применения 4-4-[(2,4,6-триметилфенил)амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрила или его фармацевтически приемлемой аддитивной соли, относится к случаю где лекарственное средство представляет собой гель, содержащий указанное соединение, микробицидного действия, в количестве, эффективном для профилактики передачи и заражения, гель-образующее соединение, буфер, фармацевтически приемлемый разбавитель, необязательно увлажнитель, и, необязательно, консервант. Кроме того, в частном варианте лекарственное средство содержит 4-4-[(2,4,6-триметилфенил) амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрил, гидроксиэтилцеллюлозу, глицерин, метилпарабен, пропилпарабен, молочную кислоту, гидроксид натрия и воду. Более того, применяемое лекарственное средство может содержать одно или несколько дополнительных противоретровирусных соединений. В предпочтительном варианте изобретение относится к применению лекарственного средства, содержащего один или несколько компонентов, выбранных из антитела, детергента или суфрактанта, покрытия для патогена, покрытия для участка передачи, топический пептид или регулятор рН. В наиболее предпочтительном варианте изобретение относится к применению лекарственного средства, содержащего дополнительно спермицидное соединение. Настоящее изобретение также касается фармацевтической композиции в форме интравагинального кольца или цервикального колпачка, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и в качестве активного компонента 4-4-[(2,4,6-триметилфенил)амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрила или его фармацевтически приемлемую аддитивную соль в количестве, эффективном для микробицидного действия, для профилактики (предотвращения) передачи или заражения ВИЧ. В предпочтительном варианте воплощения изобретение относится к фармацевтической композиции в форме геля, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель, включающий гель-образующее соединение, буфер для поддержания рН ниже 5, фармацевтически приемлемый разбавитель, необязательно увлажнитель, и, необязательно, консервант и, в качестве активного компонента 4-4-[(2,4,6 триметилфенил)амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрил или его фармацевтически приемлемую аддитивную соль в количестве, эффективном для микробицидного действия и профилактики (предотвращения) предачи или заражения ВИЧ. В наиболее предпочтительном варианте фармацевтическая композиция содержит буфер, который поддеривает рН в диапазоне от 3,2 до 4,5. Соединения по настоящему изобретению обладают бактерицидной активностью и обладают способностью не допускать передачу ВИЧ. В частности, они могут предотвращать половую или вагинальную передачу ВИЧ путем предотвращения, либо образования контагиозных вирусных частиц, либо заражения неинфицированных клеток. Если инфицированные клетки в сперме смогут достичь слизистой,соединения по настоящему изобретению могут предотвратить заражение клеток хозяина ВИЧ, таких как макрофаги, лимфоциты, клетки Лангерганса и M клетки. Следовательно, соединения по настоящему изобретению не допускают системного заражения человека ВИЧ, демонстрируя профилактическое действие против ВИЧ. Доказательство бактерицидного действия приведено в экспериментальной части и основано на in vivo активности соединения В на модели животного с SCID человека (тяжелый комбинированный иммунодефицит) (Di Fabio et al., AIDS 2001, 15, 2231-2238) и на in vitro активности соединения В в модели, основанной на незрелых дендритных клетках моноцитарного ряда. Кроме того, было обнаружено, что соединение по данному изобретению обладают губительным действием на бактерии Haemophilus ducreyi. По существу, соединения по данному изобретению могут быть использованы для профилактики и лечения шанкроидов, венерического заболевания, вызванного этими бактериями. Эти дополнительные эффекты могут даже улучшать эффективность соединения по настоящему изобретению при предотвращении заражения ВИЧ. Соединения по данному изобретению могут быть составлены в фармацевтические композиции, которые могут быть использованы для применения бактерицидов для эффективной профилактики передачи патогенов через слизистую и/или кожу, более конкретно, для профилактики передачи ВИЧ половым путем или вагинально. Следовательно, данные композиции находятся в формах, адаптированных для нанесения в область, где имеет место половая связь или связанный с ней интимный контакт, как, например,гениталии, влагалище, вульва, шейка, прямая кишка, рот, руки, нижняя часть живота, верхняя часть бедер, главным образом, влагалище, вульва, шейка и анально-ректальная слизистая.-2 011298 Соединения по настоящему изобретению могут быть составлены в фармацевтические композиции,предназначенные для немедленно высвобождения или замедленного или медленного высвобождения. В качестве подходящих композиций для местного применения здесь можно привести, например,гели, желе, кремы, пасты, эмульсии, дисперсии, мази, пленки, губки, пены, аэрозоли, порошки, интравагинальные кольца или другие системы для интравагинальной доставки лекарственных средств, цервикальные колпачки, имплантаты, пластыри, суппозитории или пессарии для прямой кишки или вагинальная аппликацая, вагинальные или ректальные или буккальные таблетки, полоскание для полости рта. Для получения фармацевтических композиций по данному изобретению, эффективное количество конкретного соединения, необязательно в форме аддитивной соли, в качестве активного компонента можно комбинировать в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, который может иметь широкое разнообразие форм, в зависимости от пути введения. Например, при получении композиций для местного перорального применения, может быть использована любая обычная фармацевтическая среда, такая как, например, вода, гликоли, масла, спирты и подобное, которая подходит для пероральных жидких препаратов, таких как полоскания для полости рта в виде суспензий, эмульсий и растворов. Твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, разбавители, смазывающие вещества,связующие, разрыхляющие агенты и тому подобное будут пригодны в случае таблеток. Также включены препараты в твердой форме, которые предназначены для преобразования, незадолго до использования, в препараты жидкой форме. В композициях, подходящих для местного нанесения на кожу, носитель необязательно содержит подходящий увлажняющий агент, необязательно объединенный с подходящими добавками любого происхождения в незначительных соотношениях, которые не оказывают значительного вредного действия на кожу. Указанные добавки могут облегчать нанесение на кожу и/или могут быть использованы для приготовления желаемых композиций. Эти композиции могут быть нанесены различными путями, например, в виде крема или геля. Активный компонент может присутствовать в фармацевтических составах в виде свободного агента или, альтернативно, инкапсулированного в лекарственные носители, такие как липосомы, наночастицы или циклодекстрины, данное инкапсулирование в результате приводит к повышенной концентрации соединений в пределах микробного сайта-мишени. Активный компонент также может находиться в виде наночастиц. Липосомы, которые могут находиться в лекарственной форме, включают в себя, среди прочих, дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), дистеароилфосфатидилглицерин (DSPG), дистеароилфосфатидилэтиноламин-полиэтиленгликоль (DSPE-PEG), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), дицетилфосфат (DP),холестерин (CHOL), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG) и их комбинации, такие как дистеароилфосфатидилхолин (DSPC) : дистеароилфосфатидилглицерин (DSPG); в которые заключен активный компонент. Подходящими циклодекстинами являются -, -, -циклодекстрины или их эфиры и смешанные эфиры, где одна или несколько из гидроксигрупп ангидроглюкозных единиц циклодекстрина замещены С 1-6 алкилом, главным образом метилом, этилом или изопропилом, например, случайным образом метилированный -CD; гидроксиС 1-6 алкил, главным образом, гидроксиэтил, гидроксипропил или гидроксибутил; карбоксиС 1-6 алкил, главным образом, карбоксиметил или карбоксиэтил; C1-6 алкилкарбонил, главным образом, ацетил. Особенно заслуживающими внимания в качестве комплексантов и/или солюбилизаторов являются -CD, -CD, метилированный случайным образом, 2,6-диметил- -CD, 2-гидроксиэтил- -CD, 2 гидроксиэтил- -CD, 2-гидроксипропил- -CD и (2-карбоксиметокси)пропил- -CD, и, в частности, 2 гидроксипропил- -CD (2-HP- -CD). Циклодекстрины используют дополнительно для усиления растворимости компонентов. Термин смешанный эфир обозначает производные циклодекстринов, где по меньшей мере две гидроксигруппы циклодекстрина этерифицированы различными группами, такими как, например, гидроксипропил и гидроксиэтил. В частности, соединения по настоящему изобретению могут быть составлены в лекарственную форму в виде геля, содержащую: эффективное количество соединения по настоящему изобретению для местного применения; гель-образующее соединение; буфер; фармацевтически приемлемый разбавитель, предпочтительно воду; необязательно, увлажнитель; и необязательно, консервант. Типичные лекарственные формы в виде геля могут быть получены с использованием природных или синтетических полимеров в качестве желирующих агентов, и гидрофобных или гидрофильных жидкостей. Примеры гель-образующих веществ, обычно используемых лекарственных форм в виде геля,включают в себя полисахариды, включая производные целлюлозы, глюкозаминогликаны, камеди, крахмал (-амилозу или амилопектин), и хитозан; карбоксивиниловые производные, винильные полимеры, такие как полиэтилены, полиэтиленглико-3 011298 ли, например полиэтиленгликоль 4500, Plastibase (Пластифицированный углеводородный гель), полиакриловая кислота, (Carbopols семейство, например, Carbopol 940), полиметакриловая кислота, поливинилпирролидон и поливиниловый спирт; полиакриламид или полиметакриламидные полимеры, включающие в себя глины, такие как бентонит, Veegum (R.T Vanderbilt) и Laponite (Laporte Industries); полиоксиэтилен-полидиоксипропилен или сополимеры оксидов полиэтилена, такие как полоксамеры, например полоксамер 407, полоксамины; белки, коллоидный кремнезем, мыла, силиконы, такие как диметилполисилоксаны или диметикон, углеводородные основы (смесь парафина и вазелинов). Используемые производные целлюлозы включают в себя метилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу. Используемые гликозаминогликаны включают в себя гиалуроновую кислоту, хондроитин, хондроитин-4-сульфат, гепарансульфат и гепарин. Используемые камеди включают в себя природные и искусственно полученные камеди, трагакант, каррагенан, пектин, агар, альгиновую кислоту, декстраны. Гликозаминогликаны могут быть использованы для усиления заживления ран в комбинации с любым другим гель-образующим полимером, таким как, например, коллаген, желатин, фибронектин. Предпочтительным гелеобразующим агентом является гидроксиэтилцеллюлоза, которая дополнительно обладает биоадгезивными свойствами. Концентрации гель-образующих соединений могут изменяться, в зависимости от условий, таких как температура перехода жидкость/гель, искомые физические свойства геля и рН, используемый при изготовлении лекарственной формы. Гель-образующие соединения, используемые в настоящем изобретении, обычно представляют собой водорастворимые полимеры, способные образовывать вязкий водный раствор, или водонерастворимые полимеры, способные разбухать в воде (например, коллаген), которые также могут образовывать вязкий раствор и гель при контакте с кожей. Желирующие агенты, подходящие для использования в настоящем изобретении должны быть стабильными в широком диапазоне рН, особенно выше нормальных кислотных значений рН влагалища. Буферные агенты используют в гелевых лекарственных формах настоящего изобретения для поддержания рН влагалища в пределах нормального уровня кислотности (т.е. рН примерно менее 5 и, предпочтительно, в ряду примерно от 3,2 до 4,5), даже в присутствии нормальных количеств эякулята. Нормальный уровень кислотности во влагалищной среде и окружении способствует уменьшению активности некоторых микроорганизмов, вызывающих STD, в том числе вирус ВИЧ. Поддержание нормальной среды влагалища также способствует поддержанию природных защитных сил организма против некоторых микроорганизмов, вызывающих STD. Примеры буферных агентов вкючают в себя, без ограничения, молочную кислоту, фосфорную кислоту, цитрат натрия, гидроксид натрия, фосфат натрия, двухосновный безводный фосфат натрия, винную кислоту, триэтаноламин, лимонную кислоту, калийную кислую соль винной кислоты, бензойную кислоту, альгиновую кислоту, сорбиновую кислоту, фумаровую кислоту,аскорбиновую кислоту, стеариновую кислоту, олеиновую кислоту, эдетовую кислоту, этилендиаминтетрауксусную кислоту, уксусную кислоту, яблочную кислоту и тому подобное, предпочтительно, гидроксид натрия и молочную кислоту, последняя дополнительно является консервантом и обладает некоторой антимикробной активностью. Кислоты могут быть добавлены как свободные кислоты, гидраты или фармацевтически приемлемые соли. Свободные кислоты могут преобразовываться в соответствующие соли in situ (т.е. во влагалище). В основном предпочтительно, чтобы в гель по настоящему изобретению было включено несколько буферных агентов для обеспечения повышенной буферной емкости. Еще более предпочтительно, чтобы буферные агенты содержали комбинацию кислоты и вещества-акцептора водорода, естественно находящегося в организме женщины, которое при нанесении на поверхность влагалища поддерживает уровень рН приблизительно на уровне рН влагалища здорового организма. Указанная кислота (кислоты) может быть выбрана из группы, состоящей из уксусной кислоты, молочной кислоты, фосфорной кислоты и серной кислоты и их комбинации. Одной из характеристик, общей для каждого указанного представителя в указанной группе, является то, что каждая кислота естественно находится в организме женщины. Другой общей чертой является то, что каждая легко способствует образованию буферной системы, путем временной передачи иона водорода и акцепции катиона с образованием соли. Указанное водород-акцептирующее вещество может быть выбрано из группы, состоящей из гидроксида калия, гидроксида натрия, гидроксида кальция, карбоната калия, карбоната натрия и карбоната кальция, и их комбинации. Одной из характеристик, общих для каждого указанного представителя в указанной группе, является то, что каждое вещество естественно находится в организме женщины. Другой общей чертой является то, что каждое вещество легко способствует образованию буферной системы,путем временной акцепции иона водорода и передачи катиона с образованием соли. Такие соли могут быть выбраны из группы, состоящей из ацетата, лактата, фосфата и сульфата, в комбинации с указанным катионом образуют указанное водород-акцептирующее вещество. Гели по данному изобретению также могут включать в себя и предпочтительно включают увлажнители. Подходящие увлажнители включают в себя, например, глицерин, полиэтиленгликоли, пропиленг-4 011298 ликоли, сорбит, триацетин и подобные. Глицерин, который является предпочтительным увлажнителем,представляет собой буферактивирующий компонент благодаря его способности абсорбировать воду или другую жидкость из окружающей среды влагалища в гель. Считается, что такое поглощение жидкости не допускает образования сухой пленки на геле при нахождении во влагалище, предоставляя дополнительное растворяющее вещество для улучшения нанесения гелевой лекарственной формы или для иного улучшения его функционального действия. Гели по данному изобретению также могут включать в себя, и предпочтительно включают, консервант, который среди прочих свойств продлевает срок годности гелевых лекарственных форм. Подходящие консерванты включают в себя, например, бензойную кислоту, бензоат натрия, метилпарабен, этилпарабен, бутилпарабен, пропилпарабен, хлорид безилалкония, нитрат фенилртути, хлоргексидин, бензиловый спирт, фенетиловый спирт, пропиленгликоль и тому подобное. Предпочтительными консервантами являются метилпарабен и пропилпарабен, которые также оба способствуют противомикробной способности геля. Гели по данному изобретению готовят, используя обычные методики для получения гелей. Желательно, однако, удостовериться, что буферные агенты растворены в конечном продукте, и что удалось избежать захвата воздуха в гель или, по меньшей мере, оно сведено к минимуму. Для уменьшения захвата воздуха в гель обычно предпочтительно, чтобы добавляемое небольшое количество гидрофильных агентов было слегка завышено. Альтернативно, гели по данному изобретению также могут быть получены в легко диспергируемых твердых формах (например, порошки, таблетки и подобное), которые могут быть преобразованы в желаемую консистенцию геля под действием жидкостей на водной основе, вне или во влагалище, по желанию. Специалистам в данной области будет понятно, что способы для получения гелей по данному изобретению могут быть модифицированы в соответствии с объемом выпуска,полунепрерывным или непрерывным процессом, при условии, что полученные в результате гели обладают описанными здесь желаемыми и полезными свойствами. Гелевые лекарственные формы можно комбинировать с другими активными компонентами, такими как бактерицидные, антимикробные, химиотерапевтические агенты, противовоспалительные агенты,спермициды или другие подходящие лекарственные средства. Более того, бактерицидные или спермицидные вещества, или и те и другие, можно комбинировать с липосомами (или другими лекарственными носителями) для профилактики каких-либо заболеваний слизистой и/или кожи. Кроме того, гель или липосома или другие формы лекарственных носителей также могут быть использованы в качестве носителей вакцин против инфекций, вызванных патогенами или какими-либо заболеваниями. По желанию, в гель могут быть включены вкусовые добавки, духи, ароматические вещества, красители, при условии,что они не мешают защитному действию геля. Фактически, включение таких вкусовых добавок, духов,ароматических веществ и красителей в композиции по данному изобретению может обеспечить дополнительную защиту, повышая вероятность, что гель будет использован во время сексуальной активности. В одном варианте осуществления гелевая лекарственная форма содержит соединение В, гидроксиэтилцеллюлозу (НЕС), глицерин, метилпарабен, пропилпарабен, молочную кислоту, гидроксид натрия(для достижения рН около 4,5) и воду. В другом варианте осуществления изобретения гелевая лекарственная форма содержит соединение В, НЕС в концентрации примерно от 0,5 до 5% (мас./мас.), глицерин в концентрации примерно от 1 до 15% (мас./мас.), метилпарабен в концентрации примерно от 0,02 до 0,5% (мас./мас.), пропилпарабен в концентрации примерно от 0,005 до 0,2% (мас./мас.), молочную кислоту в концентрации примерно от 0,005 до 0,5% (мас./мас.), гидроксид натрия в количестве, достаточном для достижения рН 4,5, и воду. В другом варианте осуществления гелевая лекарственная форма содержит соединение В, НЕС в концентрации примерно от 1 до 3% (мас./мас.), глицерин в концентрации примерно от 3 до 7%(мас./мас.), метилпарабен в концентрации примерно от 0,1 до 0,3% (мас./мас.), пропилпарабен в концентрации примерно от 0,01 до 0,03% (мас./мас.), молочную кислоту в концентрации примерно от 0,03 до 0,07% (мас./мас.), гидроксид натрия в количестве, достаточном для достижения рН 4,5, и воду. В другом варианте осуществления любые вышеуказанные гелевые лекарственные формы содержат соединение А в качестве бактерицидного вещества. Лекарственные составы по настоящему изобретению для местного применения, такие как гелевые лекарственные составы, описанные здесь, используют для покрытия различных типов слизитых, например наружных женских половых органов, влагалища, шейки, анально-ректальной слизистой, слизистой полости рта, или кожи для предотвращения проникновения патогенов, таких как вирусы, бактерии, грибы, паразиты, эктопаразиты и микоплазмы. Лекарственные формы по настоящему изобретению для местного применения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, могли быть введены, например, во влагалище руками, с помощью суппозиториев или обычного тампона или шприца. Способ введения или доставки геля во влагалища не является важным, при условии, что во влагалище доставляется эффективное количество геля. Лекарственные формы по настоящему изобретению для местного применения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, также могут быть использованы для защиты во время анального сношения и могут использоваться с использованием сходных методик.-5 011298 Для вагинальных гетеросексуальных сношений лекарственные формы по настоящему изобретению для местного примерения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, могут быть введены во влагалище до сношения. При анальном сношении (гетеросексуальном или гомосексуальном) лекарственные формы по настоящему изобретению для местного применения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, могут быть введены в прямую кишку до сношения. Или при вагинальном или анальном сношении лекарственные составы по настоящему изобретению для местного применения,такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, также могут действовать как смазывающие вещества. Для дополнительной защиты в основном предпочтительно, чтобы лекарственные составы по настоящему изобретению для местного применения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, наносились до сношения или другого вида сексуальной активности и чтобы, если целесообразно,использовался презерватив. Еще для дополнительной защиты лекарственные составы по настоящему изобретению для местного применения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, можно наносить как можно быстрее после завершения сексуальных действий. Хотя нанесение только после сексуальных действий менее рекомендуется, это все же было бы желательно впоследствии, если нанесение не проводили до сексуального действия по каким-либо причинам (например в случае изнасилования). Лекарственные составы по настоящему изобретению для местного применения, такие как описанные здесь гелевые лекарственные формы, очень подходят для защиты женщин (а также и их партнеров) с необходимостью или без необходимости оповещать партнера об использовании этих гелей. Кроме того,уверенность в заявлении партнера об отсутствии у него STD, конкретно об отсутствии HIV, не являлось бы необходимостью и соглашение об использовании презервативов или других барьерных устройств для защиты. Гелевые лекарственные формы по настоящему изобретению имеют дополнительные преимущества,поскольку они существенно не влияют или не ингибируют ростовые характеристики нормальной флоры влагалища или иным образом заметно не раздражают ткань влагалища при использовании в ингибирующих, нецитотоксических или клинических концентрациях. Значительное подавление или видоизменения вагинальной флоры или другие раздражения могут приводить к повышенному риску инфицирования(как STD, так и не STD типов), зачастую опосредованного изъязвлениями влагалища, необычными выделениями, общим дискомфортом и подобным. Интравагинальные кольца (IVR) также являются подходящими системами для доставки лекарственного средства для вагинального введения соединений по настоящему изобретению. IVR содержат соединение (соединения), диспергированное по биосовместимой эластомерной системе, которая образует устройство для доставки, которое предпочтительно принимает форму кольца. Такие эластомеры предпочтительно включают в себя гидрофобное вещество, такое как силиконы (органополисилоксаны, в том числе диметилполисилоксаны), полиэтилен-сополи(винилацетат), стиролбутадиенстирол блоксополимеры, полифосфазены, поли(изопрен), поли(изобутилен), полибутадиены, полиуретаны, нитрильные каучуки, неопреновые каучуки или их смеси. Указанные IVR могут быть изготовлены как бактерицидные средства замедленного высвобождения, приводя в результате к продолжительному и стабильному времени контактирования между соединением и патогенами-мишенями и клетками. Лекарственные формы в виде IVR уже были описаны в литературе, WO 02076426 - все включены здесь в качестве ссылки. Для увеличения срока пребывания фармацевтической композиции для местного использования в месте введения, может быть полезным включать биоадгезивное вещества в различные системы доставки лекарственного средства, в частности биоадгезивный полимер. Биоадгезивное вещество может быть определено как вещество, которое прилипает к биологической поверхности живого организма, как например слизистой оболочке или ткани кожи. Термин биоадгезивное вещество хорошо известен специалистам в данной области. Следовательно, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и в качестве активного компонента соединение по настоящему изобретению в количестве, эффективном для бактерицидного действия, характеризующейся тем, что данная фармацевтическая композиция является биоадгезивной в месте нанесения. Предпочтительно местом нанесения является влагалище, вульва, шейка, прямая кишка, ротовая полость или кожа, наиболее предпочтительным является влагалище и вульва. Примеры биоадгезивных веществ, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, включают в себя производные полиакриловой кислоты, такие как,например, карбопол или поликарбофил, например карбопол 934 Р, карбопол 940, поликарбофил AA1; производные эфиров целлюлозы, такие как, например, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, хитозан; природные полимеры, такие как, например, альгинаты, трагаканты, инулин; прежелатинизированный крахмал; полисахаридные камеди, такие как ксантановая камедь, и подобные. Альтернативно, лекарственные составы по настоящему изобретению могут быть в форме имплантатов, пластырей, мягких прокладок, инъекций или других лекарственных препаратов для достижения чрескожной или подкожной доставки соединений к тканям шейки, влагалища и прямой кишки. Как уже указывалось в описаниях гелей, соединения по настоящему изобретению могут быть ис-6 011298 пользованы во всех подходящих лекарственных формах, сами по себе или в комбинации с другими активными компонентами, такими как противовирусные средства, антибиотики, иммуномодуляторы или вакцины. Также они могут быть использованы сами по себе или в комбинации с профилактическими агентами для предупреждения вирусных инфекций. Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы в вакцинах и способах для защиты индивидуумов от вирусных инфекций в течение продолжительного периода времени. Данные соединения могут быть использованы в таких вакцинах либо сами по себе, либо вместе с другими соединениями по данному изобретению, либо с другими противовирусными агентами способом, согласующимся с обычным использованием ингибиторов обратной транскриптазы в вакцинах. Следовательно, соединения по настоящему изобретению могут быть скомбинированы с фармацевтически приемлемыми адъювантами, обычно используемыми в вакцинах и вводимые в количествах, эффективных для профилактики, для защиты индивидуумов в течение длительного периода времени от ВИЧ инфекции. Противовирусные соединения, которые могут быть использованы в комбинации с соединениями по данному изобретению, могут быть известными противоретровирусными соединениями, такими как сурамин, пентамидин, тимопентин, кастаноспермин, декстран (сульфат декстрана), фоскарнет-натрий (тринатрий фосфиноформиат); нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, например зидовудин (3'азидо-3'-дезокситимидин, AZT), диданозин (2',3'-дидезоксиинозин; ddl), заицитабин (дидезоксицитидин,ddC) или ламивудин (2'-3'-дидезокси-3'-тиацитидин, 3 ТС), ставудин (2',3'-дидегидро-3'-дезокситимидин,d4T), абакавир и подобные; ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, такие как невирапин(11-циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-6H-дипиридо-[3,2-b:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он), эфавиренз, делавирдин, и подобные; фосфонатные ингибиторы обратной транскриптазы, например тенофовир и подобные; соединения TIBO (тетрагидро-имидазо[4,5,1-jk][1,4]-бензодиазепин-2(1 Н)-он и тион)-типа, например (S)-8-хлор-4,5,6,7-тетрагидро-5-метил-6-(3-метил-2-бутенил)имидазо-[4,5,1-jk][1,4]бензодиазепин 2(1H)-тион; соединения -АРА (-анилинофенилацетамид) типа, например -[(2-нитрофенил)амино]2,6-дихлорбензолацетамид и подобные; ингибиторы транс-активирующих белков, такие как ТАТингибиторы, например, RO-5-3335, или REV ингибиторы, и подобные; ингибиторы протеаз, например,индинавир, ритонавир, саквинар, лопинавир (АВТ-378), нелфинавир, ампренавир, ТМС-126, BMS232632, VX-175 и подобные; ингибиторы слияния, например, Т-20, T-1249 и подобные; антагонистыCXCR4 рецепторов, например, AMD-3100 и подобные; ингибиторы вирусной интегразы; ингибиторы рибонуклеотид редуктазы, например гидроксимочевина и подобные. Комбинации также могут оказывать синергическое действие на ингибирование репликации ВИЧ, в том случае, когда компоненты комбинации действуют на различные или те же сайты репликации ВИЧ,предпочтительно на различные сайты. Использование таких комбинаций может уменьшить дозировку обычно назначаемого антиретровирусного агента, которая бы требовалась для желаемого профилактического эффекта по сравнению с тем, когда агент вводят как единственный активный компонент. Эти комбинации снижают возможную резистентность к одному агенту, сводя к минимуму любую связанную с этим токсичность. Эти комбинации также могут повышать эффективность обычно используемого агента без усиления ассоциированной токсичности. Таким образом, соединения по настоящему изобретению также могут быть введены в комбинации с бактерицидными средствами, известными в данной области, в результате усиливая профилактический эффект. Они могут блокировать инфицирование путем создания барьера между патогеном, в случае вируса иммунодефицита человека, и участком, где имеет место трансмиссия, например вульва, влагалище; они могут оказывать губительное действие или иммобилизовать патоген; они могут не допускать репликацию вируса уже инфицировавшего клетки, выстилающие место трансмиссии, т.е. клетки, выстилающие стенку влагалища. Примерами бактерицидных средств являются: Антибактериальные пептиды: небольшие белковые молекулы, которые образуют часть первой линии защитных сил организма против инфекции. Эти пептиды выстилают все поверхности тела-глаза,кожу, легкие, язык и пищеварительный тракт и оказывают губительное действие на бактерии в течение нескольких минут контакта. Следовательно, при нанесении на участок возможного заражения ВИЧ, пептиды могут оказывать губительное действие на патогены до того, как они вызывают инфицирование. Антитела: изолированные антитела, которые противодействуют ВИЧ, сведения о них доступны из литературы. Они могут быть скомбинированы соответствующим образом с соединениями по настоящему изобретению для профилактики ВИЧ инфекции. Регуляторы рН, особенно для влагалища. Естественная окружающая среда влагалища является слишком кислой для выживания ВИЧ, но сперма понижает его кислотность, давая ВИЧ возможность выжить. Регуляторы рН регулируют естественную кислотность влагалища, делая ее непригодной для ВИЧ. Указанные регуляторы охватывают использование Lactobacillus бактерий, которые продуцируют перекись водорода и тем самым помогают сохранять окружающую среду влагалища в здоровом состоянии и кислотной. Кислый полимер BufferGel (ReProtect, LLC) является другим примером регулятора рН,который дополнительно обладает спермицидной активностью. Детергенты и сурфактанты: эти соединения обладают способностью разрушать наружную капсулу-7 011298 вирусов и, следовательно, используются в качестве бактерицидного средства, и они могут быть скомбинированы с соединениями для профилактики ВИЧ инфекции. Примерами таких детергентов и сурфактантов являются ноноксинол-9 и октоксинол-9, но все детергенты и сурфактанты, которые обычно используются в шампунях, зубных пастах и чистящих растворах, растворах для контактных линз могут подходить в равной степени. Покрытия для патогенов, такие как Pro-2000 Gel, который содержит синтетический полимер, связывающийся с ВИЧ, разрушая связывание вируса с клеткой-мишенью. Покрытия для участка трансмисии, такие как, например, гели. Эти продукты могут не допускать внедрение ВИЧ в клетки путем покрытия участка трансмиссии, например эпителия влагалища и вульвы. Примеры, в том числе гелевые препараты, описанные выше, охватывают сульфатированные и сульфонатированные полимеры, такие как РС-515 (каррагенан), декстрин 2 сульфат, ингибитор секреторной лейкоцитарной протеазы (SLPI), которые связываются с клетками-мишенями, так что они не доступны для вируса, циановирин-N, который также связывается с клеткой, препятствуя слиянию с ВИЧ. В композициях по настоящему изобретению одно или более, или все вышеперечисленные бактерицидные вещества могут быть скомбинированы с соединением по данному изобретению. Таким образом,настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению и дополнительно содержащей один или несколько компонентов, где данные компоненты выбраны из антибактериальных пептидов, антител регуляторов рН, детергентов или сурфактантов, покрытий для патогена, покрытий для места введения. Частным примером комбинации бактерицидных средств является комбинация соединений по данному изобретению с ацетатфталатом целлюлозы (CAP) и/или фталатом гидроксипропилметилцеллюлозы(HPMCP). CAP и его производные представляют собой эксципиенты, которые демонстрируют дополнительный бактерицидный эффект. CAP составы уже были описаны в литературе, EP 1030547, US 6165493,Neurath et al., все они включены здесь в качестве ссылок. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, описанной выше, содержащей дополнительно спермицидное соединение. Указанные композиции обладают способностью одновременно предупреждать зачатие и ВИЧ инфицирование. Подходящими спермицидами являются,например, ноноксинол-9, октоксинол-9, менфегол, хлорид бензалкония, N-доказанол. Специалисты в области профилактики ВИЧ инфекции могли бы определить эффективное бактерицидное количество по результатам теста, представленных здесь, и оно находится в интервале примерно от 1 нг до 10 мг, в частности примерно от 10 нг до 1 мг, более конкретно примерно от 100 нг до 100 мкг,и предпочтительно примерно от 500 нг до 50 мкг активного ингредиента на аппликацию или единичную дозу, в частности аппликацию или единичную дозу лекарственной формы немедленного высвобождения. Может быть целесообразно применять необходимую дозу в виде единичных дозированных форм. Объем единичной дозы, в частности единичной дозы лекарственной формы немедленного высвобождения, в форме единичной дозы или нет, может колебаться в случае состава для местного применения примерно от 10 мкл вплоть до 25 мл состава для местного применения и, в частности, примерно от 1 мл вплоть до 10 мл состава для местного применения. В случае геля или крема, например, подходящая единичная доза могла колебаться в пределах примерно от 1 мл до 5 мл. Например, в случае составов для местного применения, в частности составы для местного применения немедленного высвобождения, упомянутые здесь, например гель, крем и подобное, активный компонент может присутствовать в концентрации, колеблющейся примерно от 1 нМ до 10 мМ, предпочтительно примерно от 10 мкМ до 1 мМ, более конкретно примерно от 100 нМ до 100 мкМ и предпочтительно примерно от 1 мкМ до 100 мкМ. Доказано, что указанное эффективное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от конкретно используемого соединения, реакции субъекта, получающего лекарственное средство и/или в зависимости от оценки лечащего врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Примеры Следующие примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения. Пример 1. In Vitro оценка ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы соединения В в качестве ВИЧ бактерицидного средства. Бесклеточные и ассоциированные с клетками штаммы ВИЧ Для экспериментов с СЕМ T клетками мы использовали лимфотропный S1/X4 штамм ВИЧ HTLVIIIB, полученный от R. С. Gallo и M. Popovic (NIH, Bethesda, MD). Для экспериментов с дендритными клетками моноцитарного ряда (МО-DC) использовали монотропный NSI/R5 штамм ВИЧ Ba-L, любезно предоставленный NIH AIDS Research and Reference Reagent Program (Rockville, MD). Ba-L маточные растворы выращивали и титровали на PHA/IL-2-стимулированных мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC) в полной среде, содержащей RPMI-1640 (Bio-Whittaker, Verviers, Belgium) и 10% сыворотку теленка (Hyclone, Utah, US) (Peden K. Virological and Molecular Genetic Techniques for Studiesof Established HIV Isolates. 1995, 21-45). Супернатант этих культур использовали непосредственно как бесклеточный вирус для инфицирования MO-DC. Для получения ассоциированного с клетками ВИЧ BaL, нестимулированные PBMC (2106 клеток/мл) инкубировали в течение ночи с 10-2 MOI (= множест-8 011298 венность заражения) ВИЧ Ba-L в полной среде. Впоследствии клетки хорошо промывали, замораживали в жидком азоте и размораживали в день инфицирования. Выявление антигена ВИЧ после первичного культивирования и подсчет значения ЕС 50 Антиген ВИЧ выявляли с помощью ELISA анализа собственной разработки, характеристики которого уже были описаны (Beirnaert E., Willems В., Peeters M., Bouckaert A., Heyndrickx L., Zhong P. et al.Virol Methods 1998, 73: 65-70). Нижний предел определения составляет примерно 200 пг/мл, а высший предел составляет примерно 25000 пг/мл, определенные с использованием стандартной кривой разведений маточного раствора Ba-L с известным содержанием р 24. 50% Эффективную концентрацию (ЕС 50) подсчитывали путем нанесения на график концентрации ВИЧ Ar в зависимости концентрации лекарственного средства, с последующим регрессивным анализом линейной части кривой. Измерение 50% эффективной и 50% цитотоксической концентрации на СЕМ T клетках В качестве рефренс-системы использовали СЕМ T клетки (полученные из Американской коллекции типовых культур в Rockville, MD) в предварительно стандартизованных условиях (Balzarini J, et al. AIDSRes Hum Retroviruses 10-4-2000, 16: 517-528). Вкратце, клетки суспендировали при 250000 клеток/мл вRPMI-1640, дополненной 10% фетальной сывороткой теленка, 2 мМ L-глутамина и 0,075% NaHCO3 и их инфицировали HTLV-IIIB при 20 TCID50. 100 мкл серии 5-кратных разведений лекарственных средств сразу же добавляли к 100 мкл инфицированных клеток в планшеты с 200-мкл лунками. Через 4-5 дней инкубации при 37C, культуры проверяли на образование синцития. ЕС 50 представляет собой концентрацию, необходимую для ингибирования образования синцития на 50%. Оценивали цитотоксичность и представляли как значения CC50, которые представляли собой концентрацию, при которой жизнеспособность СЕМ клеток уменьшается на 50%. Генерирование дендритных клеток интерстициального типа моноцитарного ряда (МО-DC) и T клеток Моноциты и лимфоциты отделяли из лейкоцитарной пленки PBMC с помощью элютриации встречным потоком, как описано ранее (Van Herrewege et al. AIDS Res Hum Retroviruses 10-10-2002, 18: 1091 -1102). Моноциты в дальнейшем дифференцировали в MO-DC путем культивирования при 37C и 5% СО 2 в течение 7 дней в полной среде, дополненной 20 нг/мл GM-CSF и IL-4 (Immunosource, Zoersel,Belgium) (Sallusto et al. J Exp Med 1-4-1994, 179: 1109-1118. Romani et al. J Exp Med 1-7-1994, 180:83-93.Geissmann F., et al. Exp Med 16-3-1998, 187: 961-966). Лимфоцитарную фракцию замораживали в жидком азоте и размораживали в день инфицирования. CD4 (+) T клетки очищали путем позитивной селекции,используя набор для выделения CD4(+) (Dynal, Oslo, Norway), как описано (Vanham et al. AIDS 20-102000, 14: 2299-2311. Vanham et al. AIDS 18-8-2000, 14:1874-1876). Предварительная обработка ВИЧ лекарственными средствами с непрерывной обработкой или без нее сокультур MO-DC/CD4(+) T клеток после заражения Бесклеточный ВИЧ Ba-L предварительно инкубировали с серийными разведениями лекарственного средства в интервале от 10000 до 0,1 нМ (конечная концентрация), в течение 1 ч при 37C. MO-DC инфицировали ВИЧ, обработанным лекарственным средством, с множественностью заражения (MOI) 10-3. Через 2 ч (при 37 С), MO-DC промывали (6 х) и суспендировали при 4105 клеток/мл. 50 мкл MO-DC распределяли в 96-луночном планшете, вместе с 50 мкл аутологичных CD4(+) T клеток (2106 клеток/мл) и 100 мкл полной среды или 100 мкл лекарственного средства (в той же концентрации, как для преинкубации). Половину культуральной среды обновляли дважды в неделю полной средой, с лекарственным средством или без него. Через 2 недели первичного культивирования, супернатанты анализировали с помощью ELISA и клетки использовали для вторичных культур для проверки спасения от вируса. Для экспериментов с ВИЧ, ассоциированного с клетками, использовали сходную систему, за исключением того, что предварительно инкубированный, ассоциированный с клетками вирус промывали до добавления MO-DC/CD4(+) T клеток и оставляли во время совместного культивирования MO-DC/CD4(+) T клеток. 24-часовая обработка сокультур MO-DC/CD4(+) T клеток лекарственным средством во время заражения ВИЧ Для оценки эффекта 24-часовой обработки, MO-DC и аутологичные CD4(+) T клетки суспендировали в полной среде при 4105, соотв. 2106 клеток/мл. Пятьдесят мкл MO-DC и 50 мкл CD4(+) T клеток распределяли в 96-луночном планшете вместе с 50 мкл ассоциированного с клетками или бесклеточного вируса (10-3 MOI) и 50 мкл полной среды или 50 мкл серийного разведения лекарственного средства. Через 24 ч (37 С, 5% СО 2), клетки промывали (3 х) и инкубировали в течение 2 недель. Половину культуральной среды обновляли дважды в неделю полной средой (без лекарственного средства). Через 2 недели первичного культивирования супернатанты анализировали с помощью ELISA и клетки использовали для вторичных культур для проверки освобождения от вируса. Определение освобождения от вируса: вторичная культура и ПЦР анализPBMC выделяли из светлых слоев сгустков крови доноров и культивировали в течение 2 дней в полной среде, дополненной 5 нг/мл IL-2 (Immunosource, Zoersel, Belgium) и 0,5 мкг/мл PHA (Murex, Dartford, England). Через 2 недели первичного культивирования, сокультуры MO-DC/CD4(+) T клетки про-9 011298 мывали (3 х) и вторичные культуры устанавливали добавлением 1 х 10 PHA/IL-2 активированных PBMC на чашку. Половину культуральной среды заменяли каждые 3-4 дня на среду, содержащую IL-2 (без лекарственного средства) и супернатанты, а так же и клетки собирали еще через 2 недели. Супернатанты тестировали на ВИЧ-Аг в ELISA. Клетки обрабатывали для определения ДНК ВИЧ, используя набор для количественного определения провирусной ДНК ВИЧ, основанный на ПЦР, разработанный из AmplicorHIV-1 Monitor Test, версия 1.5 (Roche Molecular Systems, Branchburg, USA), модификации которого уже были описаны (Christopherson et al, J Clin Microbiol 2000, 38: 630-634). Нижний порог 10 копий ВИЧ на 106 клеток подтверждали с использованием 8E5/LAV клеток, содержащих 1 копию провирусной ДНК на клетку (любезно предоставленных Centralized Facility for AIDS Reagents, Potters Bar, UK) Оценка иммуносупрессивной активности и клеточной цитотоксичности соединения В в сокультурах MO-DC/CD4 (+) T клеток Иммуносупрессивную активность соединения В определяли в смешанной культуре лиейкоцитов(MLC), с MO-DC в качестве стимуляторов и аллогенных CD4 ( + ) T клеток в качестве респондеров. Культуры 3103 MO-DC и 100103 T клеток помещали в 6-fold в 96-луночный планшет, в присутствии или отсутствии серий разведений соединения В. В первой части экспериментов соединение В удаляли через 24 ч промыванием и клетки культивировали еще в течение 4 дней. Во второй части экспериментов соединение В оставалось в течение 5-дневного периода культивирования. В обеих системах, 1 Ci [метил-3 Н] тимидина (TRA.120 из Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, U.K.) добавляли к каждой лунке на пятый день культивирования. Планшеты собирали через 7 ч и измеряли включение [метил-3 Н] тимидина на сцинтилляционном счетчике (Top Count, Canberra-Packard, Zeilik, Belgium) и выражали как импульсы в минуту (CPM). Концентрация иммуносупрессии (ISC50) определяется как концентрация лекарственного средства, при которой происходит ингибирование пролиферации лимфоцитов на 50%. Клеточную цитотоксичность оценивали микроскопически с помощью окрашивания эозином сокультур MO-DC и аллогенных CD4(+) T клеток, культивированных в течение 5 дней в присутствии серий разведений лекарственного средства. Часть собранных клеток также использовали для проточного цитометрического анализа образования бластных лимфоцитов и апоптоза, основанного на встречном и боковом рассеянии. Контрольные данные по антивирусной активности и клеточной цитотоксичности соединения ВCEM T клеточную линию использовали в качестве контроля для определения противовирусной активности соединения В. Как показано в табл. 1, соединение В было активно в наномолярном диапазоне и показало низкую цитотоксичность. После противовирусной активности в СЕМ T клетках, определяли ингибирование активности обратной транскриптазы ВИЧ-1 в бесклеточном анализе, в котором показана 50% ингибирующая концентрация (IC50) указанного соединения (фиг. 1). Система СЕМ, используя лабораторную T клеточную линия и S1/Х 4 лабораторный штамм HTLV-IIIb, не являлась непосредственно релевантной передачей половым путем, в которую вовлечены первичные T клетки, дендритные клетки иNS1/R5 вирусы. Следовательно, мы сфокусировались на предупреждении NS1/R5 ВИЧ инфекции в сокультурах MO-DC/CD4(+) T клеток. Таблица 1. Противовирусная активность, цитотоксичность и способность соединения В ингибироватьEC50: 50% Эффективная концентрация, концентрация, необходимая для ингибирования образования синцития СЕМ T клеток, инфицированных HTLV-IIIb, на 50%.CC50: 50% Цитотоксическая концентрация, концентрация, при которой жизнеспособность СЕМ T клеток снижается на 50%. сIC50: 50% Ингибирующая концентрация, концентрация, которая ингибирует активность обратной транскриптазы ВИЧ -1 на 50%. Лекарственная обработка сокультур MO-DC/CD4 (+) T клеток не допускала интеграцию ВИЧ. В предварительных экспериментах ВИЧ Ba-L вирус предварительно обрабатывали в течение 1 ч соединением В в концентрации до 10000 нМ. Лекарственное средство оставляли в течение 2 ч инкубации вируса с MO-DC, но его тщательно отмывали перед добавлением аутологичных CD4(+) T клеток. Для изучения максимального эффекта лекарственного средства предварительную обработку вируса и обработку клеток во время инфицирования комбинировали с дополнительной обработкой в течение всего первичного 2 недельного периода культивирования. Пример ингибирующего действия соединения В на инфицирование вирусом, ассоциированным с клетками, показан в табл. 2. Соединение В препятствовало заражению в первичных культурах уже при 10 нМ, но добавлениеPHA/IL-2 бластов показало, что для полного блокирования инфекции и предупреждения провирусной интеграции необходимо 100 нМ. При использовании для инфицирования бесклеточного вируса, непрерывной обработки 10 нМ соединения В было достаточно для полного блокирования ВИЧ инфекции, также во время вторичного культивирования (табл. 3). Далее было исследовано, достаточно ли лекарствен- 10011298 ной обрабоки первичной культуры в течение первых 24 ч для предупреждения вирусной инфекции и интеграции, по определению с помощью ELISA и ПЦР, соответственно. По сравнению с непрерывной обработкой соединение В показало, что блокирует инфекцию в 1 log более высоких концентрациях, используемых для непрерывной обработки (табл. 3). Таблица 2. Ингибирование инфицирования сокультур MO-DC/CD4(+) T клеток ассоциированным с клетками ВИЧ Ba-L Ассоциированный с клетками ВИЧ Ba-L предварительно инкубировали с лекарственным средством, промывали и добавляли к сокультурам MO-DC и аутологичных CD4+ T клеткам. Клетки культивировали в течение 2 недель, при постоянном присутствии лекарственного средства (первичная (1) Культура).b После первичного культивирования клетки промывали и добавляли PBMC, активированные действием PHA/IL-2 и подращивали в среде, содержащей IL-2 в течение вторичного 2 недельного культивирования (2) (в отсутствие лекарственного средства). с Культуральный супернатант тестировали на ВИЧ антиген с помощью ELISA. Представлено количество антиген-положительных микрокультур (из 6).d После вторичного культивирования клетки анализировали в ПЦР на наличие провирусной ДНК,результаты выражены как Log (число копий ДНК/106 клеток). Таблица 3. Условия для предупреждения ВИЧ инфицирования в сокультурах MO-DC/CD4(+) T клетокCo-культуры MO-DC/CD4(+) T клеток инкубировали с бесклеточным или ассоциированным с клетками ВИЧ и одновременно обработанным лекарственным средством в течение 24 ч или непрерывно в течение 1 культивирования. После 1 культивирования клетки промывали и использовали для 2 культивирований (без лекарственного средства). Показаны концентрации лекарственного средства, которые предупреждают репликативное ВИЧ инфицирование, измеренные с помощью ELISA культуральных супернатантов и ПЦР клеток после 2 культивирования.b Концентрацию 10000 нМ не использовали в этой части эксперимента. Соединение В обладало низкой цитотоксичностью в СЕМ T клетках и благоприятным терапевтическим индексом в сокультурах MO-DC/CD4(+) T клеток. Клеточная цитотоксичность (значение СС 50) в отношении СЕМ T клеток составила 1367 нМ для соединения В (табл. 1). Иммуносупрессивную активность соединения В оценивали в смешанных культурах лейкоцитов сMO-DC в качестве стимуляторов и аллогенными CD4(+) T клетками в качестве контроля. В том случае,если лекарственное средство присутствовало в течение всего периода культивирования, 50% иммуносупрессивная концентрация (ISC50) составляла примерно 1500 нМ. В том случае, когда лекарственное средство присутствовало только в первые 24 ч, ISC50 увеличивалась почти до 25000 нМ (табл. 4). Следовательно, иммуносупрессивная активность соединения В была явно менее супрессивной при 24 ч обработке по сравнению с непрерывной обработкой. Для полной оценки соотношения противовирусной и иммуносупрессивной активности, подсчитывали значения 50% противовирусной активности(или ЕС 50) в обработанных лекарственным средством первичных культурах инфицированных ВИЧ аутологичных сокультурах MO-DC/CD4(+) T клеток и определяли терапевтические индексы (TI). Данные Таблицы 4 показывают, что соединение В имеет благоприятный TI, определенный в этой модели первичных клеток-мишеней передачи половым путем.- 11011298 Таблица 4. Обзор противовирусной и иммуносупрессивной активности соединения В в сокультурах MO-DC/CD4(+) T клетокTI: Терапевтический индекс: ISC50/EC50 Были проведены дополнительные эксперименты для оценки, соответствовало ли ингибирование синтеза ДНК повышенной смертности T клеток или только пониженному образованию бластов. При концентрации 3916 нМ наблюдали пятидесяти процентное ингибирование образования бластов. 50% смертность T клеток подсчитывали при 54222 нМ. В заключение, профилактика ВИЧ инфекции была возможна в отношении и бесклеточного, и ассоциированного с клетками NS1/R5 вируса и 24 ч обработки было достаточно. Соединение В показало высокий терапевтический индекс, на основании его сравнительно слабой иммуносупрессирующей и сильной противовирусной активности. Эти результаты подтвердили применение соединения В в качестве бактерицидного средства. Пример 2. SCID человека в модели на животных. Для имитации предачи in vivo, которая имеет место у людей, была использована hu-SCID животная модель вагинальной передачи ВИЧ, чтобы оценить вагинальные бактерицидные средства (Di Fabio et al.,AIDS 2001, 15, 2231-2238). Гели, изготовленные из карбопола 940 или гидроксиэтилцеллюлозы (НЕС),двух водорастворимых полимеров, готовили с содержанием соединения В в различных концентрациях(0,225 мМ; 0,0225 мМ или 0,00225 мМ). Животным однократно интравагинально наносили 25 мкл геля,содержащего соединение В, за 15-20 мин до неинвазивного вагинального инфицирования лимфоцитами периферической крови человека 2106 PBL (hu-PBL), предварительно инфицированных in vitro штаммами ВИЧ-1 (SF162 и 1/ВХ 08) без синцития (NSI). Передачу от клетки к клетке определяли по продукции р 24 и с помощью количественной ПЦР. В результате этого исследования с соединением В было успешно ингибировано системное инфицирование. Пример 3. In vitro модель, основанная на Jurkat-tat клетках (PM-1) T клеточного происхождения. Прямая противовирусная активность была продемонстрирована в модели с использованием Jurkattat клеток. ВИЧ-1RF (103TCID50) иммобилизованные в адсорбированных 96-луночных планшетах обрабатывали тестируемым соединением В в течение 1 ч при 37C, соединение впоследствии удаляли промыванием 4 объемами PBS перед совместным культивированием с индикаторными клетками в течение 8 дней. Защита от ифекции обеспечивалась при концентрации 100 нМ. Кроме того, защита от инфекции была продемонстрирована при 10 нМ в параллельной системе, где вирус предварительно обрабатывали до добавления к клеткам и без удаления данного соединения. Пример 4. Модель цервикального эксплантата. Соединение В, в концентрации 10 нМ могло блокировать инфицирование ткани и при концентрации 100 нМ данное соединение могло предупреждать перенос инфекционного вируса от мигрирующих дендритных клеток к совместно культивированным T клеткам. Соединение продемонстрировало хорошую эффективность против первичных штаммов ВИЧ (Х 4,CCR5 и X4/R5) в релевантных клеточных линиях для вагинального/ректального критерия бактерицидности. В цервикальных эпителиальных клетках (МЕ 180), подвергаемых действию данного соединения в течение либо 1 ч, 24 ч либо 5 дней, после чего лекарственное средство удаляли промыванием, жизнеспособность клеток определяли с помощью MTT анализа. Данные показали отсутствие токсичности при концентрации 50 мкМ и некоторое снижение жизнеспособности при 100 мкМ. Пример 5. Биохимическая характеристика взаимодействия соединения В и обратной транскриптазой ВИЧ-1. Для исследования природы взаимодействия между соединением В и обратной транскриптазой ВИЧ-1 (HIV-1 RT), исследовали ингибирование РНК-зависимой реакции ДНК полимеризации в установленных условиях. В первом эксперименте скорость взаимодействия определяли в присутствии различных концентраций соединения В и различных концентраций дГТФ, тогда как концентрация p(rC)p(dG) комплекса была постоянной. Результат показал, что связывание соединения В с HIV-1 RT является неконкурентным по сравнению с дГТФ со значением Км 2,51 мкМ и Ki 0,033 мкМ. Во втором эксперименте скорость реакции определяли в присутствии различных концентраций со- 12011298 единения В и различных концентраций p(rC)p(dG), тогда как концентрация субстрата была постоянной. Результат показал, что связывание соединения В с HIV-1 RT также является неконкурентным по сравнению с p(rC)p(dG) со значением Км 10,3 мкМ и Ki 0,028 мкМ. Взятое вместе это означает, что связывание соединения В на HIV-1 RT не зависит от связывания нуклеотида и не зависит от связывания праймер/матрица. Пример 6. Совместимость с лактобактериями и нормальной вагинальной флорой. Совместимость с лактобактериями и нормальной вагинальной флорой является важным требованием для вагинального бактерицидного средства. Действие на патогены заболеваний, передающихся половым путем, является дополнительным преимуществом. В тестах in vitro в отношении антибактериальной активности соединения В была обнаружена следующая чувствительность: было изучено 33 различных видов Lactobacillus, выделенных из ректо-вагинальных культур беременных женщин. Результаты показали минимальную ингибирующую концентрацию (MIC50) 32 мг/л;Hemophilus ducreyi был ингибирован данным соединением при MIC50 1 мг/л и MIC90 2 мг/л; Некоторые штаммы Neisseria gonorrhoea были ингибированы при клинически подходящих концентрациях. Пример 7. Тест вагинального раздражения у кроликов. Для исключения какого-либо раздражения использовали несколько лекарственных форм данного соединения в тесте вагинального раздражения у кроликов. Через 24 ч после нанесения 1 мл геля/крема в различных концентрациях (0,1 M, 0,9 мМ, 0,45 мМ и 0,225 мМ), внимательно проверяли эпителий влагалища макроскопически и микроскопически. Микроскопические срезы парафинизированных образцов различных частей шейки-влагалища окрашивали и анализировали гистологически. Полученные макроскопические и микроскопические признаки указывали на то, что тестируемые лекарственные формы хорошо переносились. Пример 8. Изучение токсичности и вагинального раздражения у белых кроликов. Гелевые лекарственные формы соединения В в различных концентрациях использовали, чтобы изучить исключение какого-либо раздражения в тесте вагинального раздражения у кроликов. Через 10 дней после нанесения гелевых лекарственных форм в 6 различных группах кроликов, патолог внимательно обследовал вагинальный и цервикальный эпителий макроскопически и гистологически. Были определены следующие признаки. Таблица 5. Обследование влагалища Потеря эпителия и атрофия сопровождались минимальной или слабой воспалительной клеточной инфильтрацией эпителия, видимой только у всех крольчих, получающих Ноноксинол - 9,4% а-р 0,05 (точный двухсторонний критерий вероятности Фишера);b-р 0,01 (точный двухсторонний критерий вероятности Фишера). Таблица 6. Цервикальное обследование Потеря и атрофия эпителия и воспалительные клетки в просвете и клеточный дебрис были видны только у самок, получавших Ноноксинол - 9,4% а-р 0,05 (точный двухсторонний критерий вероятности Фишера)- 13011298 Пример 9. Бактерицидные гели. Этот пример иллюстрирует различные гели с различными дозировками активных элементов, которые можно приготовить и использовать в качестве бактерицидных средств для профилактики ВИЧ инфекции для местного применения. Различные модификации и вариации настоящего изобретения могут быть приняты во внимание на основании анализа данного описания. Эти изменения и дополнения входят в объем и сущность данного изобретения, определенных нижеследующей формулой изобретения.- 14011298 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение 4-4-[(2,4,6-триметилфенил)амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрила или его фармацевтически приемлемой аддитивной соли для получения лекарственного микробицидного средства местного применения для профилактики (предотвращения) предачи или заражения ВИЧ, где указанные передача или заражение происходит через половую связь или связанный с ней интимный контакт между партнерами. 2. Применение по п.1, где передача или заражение происходит через влагалище. 3. Применение по п.1, где лекарственное средство является биоадгезивным к месту нанесения. 4. Применение по п.1, где лекарственное средство имеет форму геля, желе, крема, пасты, эмульсии,дисперсии, мази, пленки, губки, пены, аэрозоля, порошка, интравагинального кольца, цервикального колпачка, имплантата, пластыря, суппозитория, пессария. 5. Применение по п.1, где лекарственное средство представляет собой гель, содержащий соединение, охарактеризованное в п.1, микробицидного действия, в количестве, эффективном для профилактики передачи и заражения, гельобразующее соединение, буфер, фармацевтически приемлемый разбавитель,необязательно, увлажнитель и, необязательно, консервант. 6. Применение по п.1, где лекарственное средство содержит 4-4-[(2,4,6-триметилфенил)амино]-2 пиримидинил]амино]бензонитрил, гидроксиэтилцеллюлозу, глицерин, метилпарабен, пропилпарабен,молочную кислоту, гидроксид натрия и воду. 7. Применение по п.1, где лекарственное средство содержит одно или несколько дополнительных противоретровирусных соединений. 8. Применение по п.1, где лекарственное средство содержит один или несколько компонентов, выбранных из антитела, детергента или суфрактанта, покрытия для патогена, покрытия для участка передачи, топический пептид или регулятор рН. 9. Применение по п.1, где лекарственное средство дополнительно содержит спермицидное соединение. 10. Фармацевтическая композиция в форме интравагинального кольца или цервикального колпачка,содержащая фармацевтически приемлемый носитель и в качестве активного компонента соединение,охарактеризованное в п.1, в количестве, эффективном для микробицидного действия, для профилактики(предотвращения) передачи или заражения ВИЧ. 11. Фармацевтическая композиция в форме геля, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, включающий гельобразующее соединение, буфер для поддержания рН ниже 5, фармацевтически приемлемый разбавитель, необязательно, увлажнитель и, необязательно, консервант и в качестве активного компонента соединение, охарактеризованное в п.1, в количестве, эффективном для микробицидного действия и профилактики (предотвращения) предачи или заражения ВИЧ. 12. Фармацевтическая композиция по п.11, где буфер поддерживает рН в диапазоне от 3,2 до 4,5.