Применение антипрогестинов для индукции апоптоза клетки

010593 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к применению антипрогестинов для индукции апоптоза клетки. В частности, изобретение относится к применению антипрогестина, т.е. 11-(4-ацетилфенил)-17 гидрокси-17-(1,1,2,2,2-пентафторэтил)эстра-4,9-диен-3-она, либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для индукции апоптоза в клетке. Настоящее изобретение относится к применению антипрогестинов для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения определенного типа рака, такого как рак молочной железы, индикатором высокого риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток на S-фазе клеточного цикла. Предпосылки создания изобретения Антипрогестины представляют собой относительно новый и перспективный класс терапевтических агентов, которые могут иметь большое значение для лечения зависящих от гормонов опухолей и других заболеваний. Хотя антипрогестины первоначально были разработаны для медицинского нехирургического прекращения беременности, оказалось, что некоторые антипрогестины имеют большое значение,например, для эндокринной терапии таких типов рака молочной железы, которые отличаются тем, что опухолевые клетки имеют рецепторы прогестерона (Т. Maudelonde et al., в J.G.M. Klijn et al., HormonalYork, 1987, p. 55-59). Эта новая стратегия эндокринной терапии основана на данных о том, что антипрогестины обладают противоопухолевой активностью in vitro в отношении имеющих рецептор прогестерона линий клеток опухоли молочной железы и in vivo в отношении некоторых типов зависящих от гормонов опухолей молочной железы мышей и крыс. В частности, механизм противоопухолевой активности таких антипрогестинов, как онапристон и мифепристон (RU 486), уже был изучен с использованием модели зависящей от гормонов опухоли молочной железы мыши МХТ, а также на моделях опухоли молочной железы, индуцированной канцерогеном ДМБА (7,12-диметилбенз[а]антрацен) и НММ (нитрозометилмочевина) у крыс (М.R. Schneider et al., Eur. J. Cancer Clin. Oncol., т. 25,4, p. 691-701, 1989; H. Michna et al., BreastCancer Research and Treatment 14:275-288, 1989; H. Michna, J. Steroid. Biochem. v. 34,1-6, p. 447-453,1989). Однако вследствие низкой активности и побочных воздействий, например, мифепристона это соединение нельзя рекомендовать в качестве индивидуального агента для лечения рака молочной железы(D. Perrault et al., J. Clin. Oncol. 1996 Oct, 14(10), p. 2709-2712). Кроме того, мифепристон обладает выраженными антиглюкокортикоидными побочными действиями (см. L.M. Kettel et al., Fertil. Steril. 1991 Sep,56(3), p. 402-407; X. Bertagna, Psychoneuroendocrinology 1997; 22 прил. 1, p. 51-55). Процент опухолевых клеток, находящихся на соответствующих фазах клеточного цикла, можно оценивать путем определения ДНК с помощью эффективного метода проточной цитометрии (см.G.M. Clark et al., N. Engl. J. Med. 320, 1989, March, p. 627-633; L.G. Dressier et al., Cancer 61(3), 1988,p. 420-427 и цитированную в этих работах литературу). Было установлено, что стадии клеточного цикла опухолевых клеток и прежде всего количество опухолевых клеток, находящихся на определенных стадиях цикла, могут служить важным источником информации для клинического предсказания развития болезни и успеха терапии. В этом отношении наиболее важно количество клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла. В EP 0495825 B1 описано применение антипрогестинов (конкурентных антагонистов прогестерона) для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения карцином молочной железы,отличающихся повышенным содержанием опухолевых клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла,что рассматривается как высокий фактор риска. Это основано на данных о том, что антипрогестины обладают способностью блокировать развитие опухолевых клеток, находящихся на G0G1-фазе клеточного цикла, что приводит к существенному уменьшению количества опухолевых клеток, находящихся наS-фазе. Однако такое воздействие не было выявлено при стандартной терапии рака молочной железы с использованием тамоксифена, эстрогена или при овариэктомии. Антипрогестины, протестированные вEP 0495825 B1, представляли собой 11-[4-N,N-диметиламино)фенил]-17-гидрокси-17-(3 гидроксипропил)-13-метил-4,9(10)-гонадиен-3-он и 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(проп-1 инил)-4,9(10)эстрадиен-3-он. 17-Фторалкилстероиды, обладающие выраженной антипрогестинной активностью, а также методы их получения описаны в заявке WO 98/34947. В WO 98/34947 не приведены обсуждение или результаты исследования роли, которую описанные в этой заявке 17-фторалкилстероиды могут играть в апоптозе клеток или прекращении клеточного цикла. Учитывая потенциальное значение агентов, которые индуцируют апоптоз клеток, например в случае опухолевых клеток путем блокады их развития на G0G1-фазе, представляется целесообразным выявлять и другие агенты, например антипрогестины, обладающие таким специфическим механизмом действия. Такие агенты можно применять при лечении и предупреждении определенных типов рака, например рака молочной железы, индикатором высокой степени риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла.-1 010593 Задача изобретения Таким образом, в основу настоящего изобретения была положена задача дальнейшего исследования механизма действия антипрогестинов, приводящего к ингибированию зависимых от гормонов заболеваний, таких как рак молочной железы, и разработка способа направленной индукции апоптоза клеток. При создании изобретения неожиданно было установлено, что антипрогестин 11-(4-ацетилфенил)17-гидрокси-17-(1,1,2,2,2-пентафторэтил)эстра-4,9-диен-3-он (либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог) можно применять для индукции апоптоза клетки. Краткое изложение сущности изобретения При создании изобретения неожиданно было установлено, что антипрогестин 11-(4-ацетилфенил)17-гидрокси-17-(1,1,2,2,2-пентафторэтил)эстра-4,9-диен-3-он (ниже в настоящем описании обозначен как "антипрогестин (I)") индуцирует апоптоз и гибель опухолевых клеток в опытах с использованием стандартных моделей опухолей рака молочной железы. Было установлено, что антипрогестин (I) обладает способностью индуцировать апоптоз клеток путем инициации терминальной дифференцировки. Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является применение антипрогестина(I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для приготовления лекарственного средства, предназначенного для индукции апоптоза клетки. Предпочтительно индукцию апоптоза вызывают путем инициации терминальной дифференцировки. Клетка предпочтительно представляет собой клетку млекопитающего, более предпочтительно клетку человека и наиболее предпочтительно опухолевую клетку, причем опухоль предпочтительно представляет собой рак молочной железы. Следующим объектом настоящего изобретения является применение антипрогестина (I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для приготовления лекарственного средства,предназначенного для лечения различных типов рака, индикатором высокой степени риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла. Еще одним объектом настоящего изобретения является применение антипрогестина (I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для индукции апоптоза клетки in vitro. Клетка предпочтительно представляет собой клетку млекопитающего, более предпочтительно клетку человека и наиболее предпочтительно опухолевую клетку, причем опухоль предпочтительно представляет собой рак молочной железы. Следующим объектом настоящего изобретения является способ индукции апоптоза клетки путем введения в клетку эффективного количества антипрогестина (I). Этот способ можно применять in vitro или in vivo. Клетка предпочтительно представляет собой клетку млекопитающего, более предпочтительно клетку человека и наиболее предпочтительно опухолевую клетку, причем опухоль предпочтительно представляет собой рак молочной железы. Благодаря способности индуцировать апоптоз клетки антипрогестин (I) либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог можно применять для лечения определенных типов рака, например рака молочной железы, индикатором высокой степени риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла. Другие типы рака или зависящие от гормонов заболевания, на которые можно воздействовать и которые можно лечить с помощью антипрогестина (I) благодаря его способности индуцировать клеточный апоптоз, могут включать,например, рак молочной железы, рак яичника, рак эндометрия, миелому, ановуляторное бесплодие, менингому, т.е. заболевания, которые в основном обусловлены или на которые оказывает влияние наличие рецепторов гормонов и/или зависящих от гормонов путей метаболизма. Краткое описание чертежей На чертежах представлено: на фиг. 1 - сравнение данных об ингибирующем рост опухоли действии, обусловленном индукцией апоптоза антипрогестином (I), которые получены при изучении зависимости реакции от дозы в опытах с использованием индуцируемой ДМБА карциномы молочной железы крысы, с данными, полученными в контрольных опытах с использованием антипрогестина онапристона, а также с данными, полученными после овариэктомии. Опыт проводили с использованием вводимых подкожно (s.c.) суточных доз антипрогестина (I), составляющих 0,5, 2,0, 5,0 и 10,0 мг/кг; на фиг. 2 - сравнение данных об ингибирующем рост опухоли действии, обусловленном индукцией апоптоза антипрогестином (I), которые получены в опытах с использованием индуцированной НММ карциномы молочной железы крыс, с данными, полученными в контрольных опытах, и с данными, полученными после овариэктомии. Опыт проводили с использованием вводимых подкожно (s.c.) суточных доз антипрогестина (I), составляющих 0,5 и 1,0 мг/кг; на фиг. 3 - сравнение данных об индукции апоптоза и обусловленном им ингибирующем рост опухоли действии антипрогестина (I), применяемого в дозе 10 мг/кг s.c, полученных в опытах на бестимусных мышах, которым вводили ксенотрансплантаты человеческих опухолей линии T47D, с данными, полученными в контрольных опытах, и после овариэктомии; на фиг. 4 - сравнение данных об индукции апоптоза и обусловленном им ингибирующем рост опу-2 010593 холи действии антипрогестина (I), применяемого в дозе 10 мг/кг s.c, полученных в опытах на бестимусных мышах на модели рака молочной железы человека (клетки линии MCF-7), с данными, полученными в контрольных опытах, и после овариэктомии; на фиг. 5 А-5 Е - данные гистологического анализа, касающиеся индукции апоптоза в опытах на крысах с использованием модели рака молочной железы, индуцированного НММ (см. пример 5). В частности, на фиг. 5 А видно, что в опухолях, обработанных антипрогестином (I), в отличие от контроля присутствуют образования в виде протоков и гроздевидные образования, как правило, заполненные секреторным продуктом (фиг. 5 Б). Для сравнения на фиг. 5 В представлено изображение необработанной ткани индуцированного НММ рака молочной железы, которая обладает высокой иммунореактивностью в отношении ЯАПК (ядерный антиген пролиферирующих клеток), а на фиг. 5 Г - изображение ткани индуцированной НММ опухоли, обработанной антипрогестином (I), которая обладает низкой иммунореактивностью в отношении ЯАПК. На фиг. 5 Д представлено изображение ткани индуцированного НММ опухоли молочной железы, обработанной антипрогестином (I), а на фиг 5 Е - изображение, полученное для контроля; на фиг. 6 - сравнение данных об ингибирующем рост опухоли действии антипрогестина (I) на клетки опухоли молочной железы линии T47D (стимулированной эстрадиолом) при использовании эффективной пороговой концентрации 10-9-10-8 моль/л, с действием антипрогестина онапристона и чистого антиэстрогена 11-фтор-7-5-[N-метил-N-3-(4,4,5,5,5-пентафторпентилтио)пропиламино]пентилэстра 1,3,5(10)-триен-3,17-диола (WO 98/07740). Подробное описание изобретения Антипрогестин (I), т.е. 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(1,1,2,2,2-пентафторэтил)эстра-4,9 диен-3-он, представлен ниже формулой (I) Антипрогестин (I) (либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог) представляет собой имеющий большое значение фармацевтический агент, обладающий выраженной антипрогестиновой активностью. Антипрогестин (I) можно применять согласно настоящему изобретению для индукции апоптоза клеток. В контексте настоящего изобретения понятие "антипрогестин" относится прежде всего ко всем соединениям, обладающим способностью конкурентно ингибировать рецепторы прогестерона. Однако оно включает также соединения, обладающие способностью ингибировать биосинтез прогестинов. В контексте настоящего описания фармацевтически приемлемые производные или аналоги антипрогестина (I) могут включать, например, любое из соединений, заявленных в WO 98/34947. Исследования, выполненные при создании настоящего изобретения, свидетельствуют о том, что антипрогестин (I) обладает выраженной активностью в отношении ингибирования опухоли, что продемонстрировано на различных моделях зависящих от гормонов опухолей (см. примеры 1-6). Кроме того, установлено, что активность антипрогестина (I) в отношении ингибирования опухоли вследствие индукции апоптоза превышает соответствующую активность обычных противоопухолевых агентов, таких как антиэстроген тамоксифен. Эффективность лечения рака молочной железы с использованием антипрогестина (I) по настоящему изобретению превосходит даже эффективность овариэктомии. Как продемонстрировано ниже в примерах с использованием различных моделей опухолей, применение антипрогестина (I) приводит к увеличению количества опухолевых клеток, находящихся в фазеG0G1 клеточного цикла, сопровождающемуся существенным и имеющим биологическое значение уменьшением количества клеток, находящихся в фазах S и G2M клеточного цикла. Эти данные свидетельствуют об индукции дифференцировки. Ранее уже предлагалось использование прекращения специфической для фазы G1 дифференцировки для других систем стволовых клеток (см. J.J. Wille Jr., CancerRes. 1982, 42(12):5139-46; R.E. Scott, J. Cell. Biol. 1982, 94(2):400-405). Экспериментальные данные, полученные с использованием различных моделей опухоли, свидетельствуют о том, что лечение с помощью антипрогестина (I), по-видимому, инициирует дифференцировку обладающих митотической активностью полигональных опухолевых клеток, приводящую к образованию гландулярных структур и гроздей, сопровождающемуся интенсивным уменьшением продуктов секреции, а также к образованию веретенообразных некробиотических (некрозных) субпопуляций (см. пример 5 и, в частности, фиг. 5 А и 5 Б). В то время как размер опухоли, митотический индекс и уровень развития злокачественной опухоли заметно уменьшаются, объемная доля гландулярных структур в опухолях, а также симптомы апоптоза увеличиваются в 3 раза по сравнению с контролями (см. пример 5,фиг. 5 Д и 5 Е).-3 010593 Не ограничиваясь какой-либо отдельной теорией, можно считать, что эти результаты свидетельствуют о том, что основной механизм противоопухолевого действия антипрогестина (I) в изученных моделях заключается в непосредственном антипролиферативном действии, опосредуемом рецептором прогестерона, на количество опухолевых клеток, которое заключается в индукции терминальной дифференцировки, сопровождающейся терминальной гибелью клеток. Таким образом, антипрогестин (I), повидимому, обладает способностью элиминировать имеющую важное значение блокировку терминальной дифференцировки, присущую клеткам злокачественных опухолей, имеющим рецепторы прогестерона. Такое антипролиферативное действие антипрогестина (I), по-видимому, обусловлено антигормональной(антипрогестинной) активностью антипрогестина (I). Такие агенты, как антипрогестин (I), которые индуцируют апоптоз клеток, например в случае опухолевых клеток путем блокировки их развития в G0G1-фазе, можно применять для лечения и предупреждения различных состояний. Такие агенты, включая антипрогестин (I), можно применять для лечения тех типов рака, например рака молочной железы, индикатором высокой степени риска возникновения которых является повышенное количество опухолевых клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла. Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является применение антипрогестина(I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для приготовления лекарственного средства, предназначенного для индукции апоптоза клетки. В предпочтительном варианте осуществления антипрогестин (I) либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог применяют в качестве лекарственного средства для индукции апоптоза опухолевых клеток, предпочтительно клеток рака молочной железы человека. Такое лекарственное средство можно применять для лечения зависящих от гормонов заболеваний, таких как рак молочной железы, индикатором высокой степени риска возникновения которых является повышенное количество опухолевых клеток, находящихся на S-фазе клеточного цикла. Приготовление лекарственных средств можно осуществлять с помощью методов, известных в данной области. Можно применять широко известные и общепринятые вспомогательные вещества, а также приемлемые носители и разбавители. В качестве приемлемых носителей и вспомогательных веществ можно использовать соединения, рекомендованные для применения в фармацевтике, косметике и родственных областях, которые описаны в Ullmann's Encyclopedia of Technical Chemistry, v. 4, (1953), p. 1-39;Hilfsstoffe fr Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete, изд-во Cantor KG, Aulendorf in Wurttemberg,1971. Антипрогестины, которые можно применять для целей настоящего изобретения, предпочтительно антипрогестин (I) либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог, можно включать в состав фармацевтических композиций с помощью известных методов приготовления галеновых форм для перорального или парентерального, например внутрибрюшинного, внутримышечного, подкожного или чрескожного, введения. Их можно также имплантировать в ткань. Имплантаты могут представлять собой инертные материалы, например биоразложимые полимеры и синтетические силиконы, такие, например, как силиконовый каучук. Их можно вводить в форме таблеток, пилюль, драже, желатиновых капсул, гранул, суппозиториев,имплантатов, инъецируемых стерильных водных или масляных растворов, суспензий или эмульсий, мазей, кремов, гелей или интравагинальных (например, вагинальных колец) или внутриматочных систем(например, диафрагм, петель). Для приготовления лекарственного средства, предназначенного для перорального введения, описанные выше антипрогестины, пригодные для применения согласно настоящему изобретению, можно смешивать с широко известными и общепринятыми вспомогательными веществами и носителями, такими, например, как гуммиарабик, тальк, крахмал, сахара, такие, например, как маннит, метилцеллюлоза,лактоза, желатин, поверхностно-активными веществами, стеаратом магния, водными или неводными эксципиентами, производными парафина, сшивающими агентами, разрыхлителями, эмульгаторами, замасливателями, консервантами и корригентами (например, эфирными маслами). В фармацевтической композиции антипрогестин может находиться в диспергированном состоянии в виде микрочастиц, например в виде наночастиц. Для дополнительного повышения биологической доступности действующего вещества описанные выше антипрогестины, пригодные для применения согласно настоящему изобретению, можно включать также в виде циклодекстриновых клатратов в состав препаративной формы, подвергая их взаимодействию с -, - или -циклодекстринами или их производными согласно методу, описанному вPCT/EP95/02656. Для парентерального введения описанные выше антипрогестины, пригодные для применения согласно настоящему изобретению, можно растворять или суспендировать в физиологически приемлемом разбавителе, таком, например, как масла вместе с солюбилизаторами, поверхностно-активными агентами, диспергирующими агентами или эмульгаторами или без них. Примерами масел, которые можно применять (но не ограничиваясь ими), являются оливковое, арахисовое, хлопковое, соевое, касторовое и-4 010593 кунжутное масло. Предназначенное для введения количество (т.е. фармацевтически эффективное количество) варьируется в широких пределах и зависит от состояния, подлежащего лечению, и пути введения. Оно может представлять собой любое количество, являющееся эффективным для осуществления требуемого лечения. Определение фармацевтически эффективного количества находится в компетенции специалиста в данной области. Одна стандартная доза может содержать приблизительно от 0,1 до 100 мг действующих(его) веществ(а). Для введения человеку суточная доза действующих(его) веществ(а) составляет приблизительно от 0,1 до 400 мг, предпочтительно от 10 до 100 мг, наиболее предпочтительно 50 мг. Лекарственные средства можно вводить также путем инъекции депо или имплантата, необязательно обеспечивающего замедленное высвобождение действующих(его) веществ(а). Предпочтительным путем введения является пероральное введение. Антипрогестины, пригодные для применения согласно изобретению, в частности антипрогестин (I), наиболее предпочтительно вводят пероральным путем. Согласно всем объектам настоящего изобретения по меньшей мере один из описанных выше антипрогестинов, в частности антипрогестин (I) либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог, можно применять в сочетании по меньшей мере с одним антиэстрогеном, поскольку для многих зависящих от гормона заболеваний, в частности для рака молочной железы, характерно наличие не только рецепторов прогестерона, но также и рецепторов эстрогена. Антиэстроген можно вводить как одновременно, так и последовательно с антипрогестином и, в частности, с антипрогестином (I) либо его фармацевтически приемлемым производным или аналогом. Количество антипрогестина и антиэстрогена может быть одинаковым или один из компонентов может присутствовать в большем количестве, чем другой,например соотношение антипрогестин:антиэстроген может составлять от 1:50 до 50:1, предпочтительно от 1:30 до 30:1 и наиболее предпочтительно от 1:15 до 15:1. Примерами антиэстрогенов, которые можно применять согласно изобретению, являются нестероидные антиэстрогены, такие как тамоксифен и нафоксифен, а также ралоксифен, фаслодекс и ЕМ 800. Примерами стероидных антиэстрогенов являются соединения, описанные в EP 0348341 А, и соединения,описанные в WO 98/07740, в частности 11-фтор-7-5-[N-метил-N-3-(4,4,5,5,5-пентафторпентилтиопропиламино]пентилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17-диол, или соединения, описанные в WO 99/33855, в частности 11-фтор-7-5-[метил-(7,7,8,8,9,9,10,10,10-нонафтордецил)амино]пентилэстра-1,3,5(10)триен-3,17-диол, или их фармацевтически приемлемые производные или аналоги. В качестве антиэстрогенов можно применять также ингибиторы ароматазы, обладающие антиэстрогенной активностью,такие, например, которые описаны в ЕР 0495825 В 1, с. 7, 8 Еще одним объектом настоящего изобретения является применение антипрогестина (I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для приготовления лекарственного средства,предназначенного для лечения рака такого типа, индикатором высокого риска возникновения которого является повышение количества опухолевых клеток в S-фазе клеточного цикла. Количество опухолевых клеток, находящихся в S-фазе, можно оценивать путем определения ДНК с помощью метода проточной цитометрии, описанного у Dressier et al., "DNA Flow Cytometry and Prognostic Factors in 1331 FrozenBreast Cancer Specimens," Cancer, v. 61(3), 1988, p. 420-427; см. также McGuire и Dressier, "Emerging Impact of Flow Cytometry in Predicting Recurrence and Survival in Breast Cancer Patients," JNCI, v. 75(3), 1985,p. 405-409. Обусловливающее высокий риск заболевания количество опухолевых клеток, находящихся вS-фазе, представляет собой наиболее предпочтительную мишень для применения соединений по изобретению. В случае антипрогестина (I) преимущество его применения обусловлено как сильным противоопухолевым действием, что продемонстрировано на стандартных моделях с использованием животных(см. примеры 1-4), так и механизмом действия этого агента, связанного с индукцией апоптоза (см., в частности, пример 5) и прекращением клеточного цикла. Другим объектом настоящего изобретения является способ индукции апоптоза клетки. Клетка предпочтительно представляет собой клетку млекопитающего и наиболее предпочтительно клетку человека,причем способ можно осуществлять как in vitro, так и in vivo. Предпочтительно апоптоз индуцируют с помощью механизма инициации терминальной дифференцировки, например, путем введения антипрогестина (I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога. Согласно данному способу рассматриваемую клетку подвергают воздействию эффективного количества антипрогестина (I) либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога. Например, у клеток рака молочной железы линии T47D, рост которых стимулировали путем введения эстрадиола, антипрогестин (I) индуцировал полное ингибирование роста клеток при использовании эффективной пороговой концентрации от 10-9 до 10-8 моль (см. пример 6 и фиг. 6). Это является наиболее неожиданным, поскольку известный антипрогестин онапристон не оказывал воздействия, вызывающего уменьшение роста клеток при исследовании на данной модели опухоли. Таким образом, антипрогестин (I) является более предпочтительным с точки зрения силы действия и эффективности по сравнению с другими антипрогестинами, такими как онапристон, и антиэстрогенами, такими как тамоксифен, и даже с чистыми антиэстрогенами, такими как-5 010593 11-фтор-7-5-[N-метил-N-3-(4,4,5,5,5-пентафторпентилтио)пропиламино]пентилэстра-1,3,5(10)триен-3,17-диол (WO 98/07740). Тот факт, что антипрогестин (I) обладает способностью индуцировать апоптоз клетки, свидетельствует о том, что указанный антипрогестин (либо его фармацевтически приемлемое производное или аналог) можно применять для лечения многочисленных состояний, прежде всего зависящих от гормонов состояний, при которых наиболее желательно индуцировать апоптоз. Конкретно его можно применять для лечения таких заболеваний, как рак молочной железы, рак яичника, рак эндометрия, миелома, ановуляторное бесплодие, менингома, т.е. заболеваний, которые в основном обусловлены или на которые оказывает влияние наличие рецепторов гормона и/или зависящих от гормонов путей метаболизма. Кроме того, антипрогестины, такие как антипрогестин (I), можно применять для приготовления лекарственных средств, которые индуцируют апоптоз или гибель клеток, предназначенных для лечения уже описанных выше зависящих от гормонов заболеваний. Ниже изобретение проиллюстрировано на примерах. Следует иметь в виду, что приведенные ниже примеры не ограничивают объем изобретения. Примеры Пример 1. Исследование зависимости реакции от дозы на модели опухоли, индуцированной ДМБА. Материалы и методы. Данное исследование проводили на неполовозрелых самках крыс линии Sprague-Dawley (возрастом 49-51 день; 10 животных/группу). Опухоли молочной железы индуцировали путем однократного перорального введения 10 мг 7,12-диметилбенз[а]антрацена (ДМБА, фирма Serva, Гейдельберг). Крыс, у которых была выявлена по меньшей мере одна опухоль, имеющая размер, превышающий 150 мм 2, в течение 4 недель подвергали следующим обработкам: 1) вводили растворитель (контроль); 2) подвергали овариэктомии перед началом опыта, вводили ежедневно 3) антипрогестин (I),0,5 мг/кг s.c., 4) антипрогестин (I), 2 мг/кг s.c., 5) антипрогестин (I), 5 мг/кг s.c., 6) антипрогестин (I),10 мг/кг s.c. и 7) онапристон, 5 мг/кг, s.c. В качестве параметра для оценки ингибирования роста использовали изменение площади опухоли(в % по отношению к исходному размеру опухоли), которую оценивали путем еженедельного измерения с помощью циркуля. Для статистического анализа различий средних значений между группами использовали критерий Крускала-Уоллиса. Более подробное описание и оценка модели, предназначенной для изучения предотвращения развития индуцированной ДМБА опухоли, приведены у R.G. Metha, EuropeanJournal of Cancer 36 (2000), p. 1275-1282. Результаты. У интактных контрольных животных наблюдался прогрессивный рост опухоли, в то время как у 90% подвергнутых овариэктомии животных наблюдался существенный регресс опухоли. Лечение антипрогестином (I) в дозах, равных или превышающих 2 мг/кг, вызывало выраженную индукцию апоптоза,что приводило к ингибированию роста опухоли по сравнению с контролем (см. фиг. 2). В этом случае наблюдалась выраженная зависимость реакции от дозы. В то время как лечение с использованием 0,5 мг/кг антипрогестина (I) не приводило к существенному ингибированию роста опухоли, при использовании дозы 2 мг/кг наблюдались максимальная индукция апоптоза и обусловленное этим ингибирование роста. В этой группе у 50% крыс был выявлен полный регресс опухоли. Воздействие максимальной изученной в данном эксперименте дозы антипрогестина (I) (10 мг/кг), оказалось сравнимым с воздействием дозы 2 мг/кг. Онапристон (5 мг/кг, s.c.) оказался существенно менее эффективным, чем антипрогестин (I), при применении в сопоставимых дозах. Выводы. В опытах на модели индуцируемой ДМБА опухоли молочной железы у крыс установлено, что антипрогестин (I) сильно индуцировал апоптоз клеток опухоли и в результате этого полностью подавлял рост опухоли у интактных животных. Установлено, что доза 2 мг/кг антипрогестина (I) оказывала максимальное апоптозное действие на опухолевые клетки. Антипрогестин (I) обладал существенно большей эффективностью в отношении ингибирования роста опухоли, чем онапристон. Пример 2. Изучение ингибирования роста опухоли на модели индуцированного НММ рака молочной железы у крыс. Материалы и методы. Опухоли индуцировали путем однократной внутривенной инъекции НММ (нитрозометилмочевина,50 мг/кг) самкам крыс линии Sprague-Dawley (полученных от фирмы Tierzucht Schnwalde, возраст 50-55 дней). Через 10 дней крыс, у которых была выявлена по меньшей мере одна опухоль, подвергали в течение 4 недель следующим обработкам: 1) вводили растворитель (контроль); 2) подвергали овариэктомии перед началом опыта, вводили ежедневно 3) антипрогестин (I),1,0 мг/кг/день, 4) антипрогестин (I), 0,5 мг/кг/день и 5) онапристон, 5 мг/кг/день.-6 010593 В качестве параметра для оценки ингибирования роста использовали изменение площади опухоли(в % по отношению к исходному размеру опухоли), которую оценивали путем еженедельного измерения с помощью циркуля. Для статистического анализа различий средних значений между группами использовали критерий Крускала-Уоллиса. Результаты. У интактных животных наблюдался прогрессивный рост опухоли, в то время как овариэктомия приводила к полному ингибированию роста опухоли. Введение антипрогестина (I) в дозах 0,5 или 1,0 мг/кг приводило к существенному ингибированию роста опухоли, обусловленному индукцией апоптоза, по сравнению с контролем (см. фиг. 2). Онапристон (5 мг/кг) оказался заметно менее эффективным,чем антипрогестин (I), вводимый в существенно меньшей дозе 0,5 мг/кг. Выводы. В опытах на модели индуцированной НММ опухоли молочной железы у крыс установлено, что антипрогестин (I) благодаря его выраженной способности индуцировать апоптоз опухолевых клеток полностью подавлял рост опухоли у интактных животных. Обе дозы (1,0 мг/кг, также как и 0,5 мг/кг) антипрогестина (I) вызывали существенное апоптозное действие на опухолевые клетки. Пример 3. Ксенотрансплантат опухоли линии T47D молочной железы человека, имплантированный бестимусным мышам. Материалы и методы. Самкам бестимусных мышей линии Fox Chase (фирма MB) вводили пеллеты эстрадиола (фирмаInnovative Research of America). Клетки линии T47D рака молочной железы, полученные из клеточной культуры и суспендированные в матригеле, имплантировали s.c. в паховую область мышей. Обработку начинали после того, как опухоли достигали размера приблизительно 25 мм 2. Обработку продолжали до тех пор, пока продолжалось развитие опухоли. В эксперименте использовали следующие группы животных: 1) контрольная группа (обработанная носителем); 2) группа, подвергнутая овариэктомии; 3) группа, обрабатываемая антипрогестином (I), 10 мг/кг s.c. Площадь опухоли определяли с помощью циркуля. Для статистического анализа различий средних значений между группами использовали критерий Крускала-Уоллиса. Результаты. В опытах с использованием модели рака молочной железы T47D овариэктомия приводила к существенному ингибированию роста опухоли по сравнению с быстрым ростом в контроле. Данные, приведенные на фиг. 3, убедительно свидетельствуют о том, что введение антипрогестина (I) в дозе 10 мг/кгs.c. индуцировало апоптоз опухолевых клеток. Действие антипрогестина (I) практически сравнимо с действием обычной терапии, предназначенной для депривации эстрогена (овариэктомии). Выводы. Действие антипрогестина (I) в отношении индукции апоптоза и обусловленного им ингибирования роста клеток T47D рака молочной железы человека, ксенотрансплантированных бестимусным мышам линии Fox Chas, оказалось сопоставимым с действием обычной терапии, предназначенной для депривации эстрогена (овариэктомии), которая в настоящее время считается обладающим максимальной эффективностью методом ингибирования роста опухоли молочной железы при использовании данной модели. Пример 4. Ксенотрансплантат опухоли линии MCF-7 молочной железы человека, имплантированный бестимусным мышам. Материалы и методы. Самкам бестимусных мышей линии Fox Chase (фирма MB) вводили пеллеты эстрадиола (фирмаInnovative Research of America). Клетки линии MCF7 рака молочной железы, полученные из клеточной культуры и суспендированные в матригеле, имплантировали s.c. в паховую область мышей. Обработку начинали после того, как опухоли достигали размера приблизительно 25 мм 2. Обработку продолжали до тех пор, пока продолжалось развитие опухоли. В эксперименте использовали следующие группы животных: 1) контрольная группа (обрабатываемая носителем); 2) группа, подвергнутая овариэктомии; 3) группа, обрабатываемая антипрогестином (I), 10 мг/кг s.c. Площадь опухоли определяли с помощью циркуля. Для статистического анализа различий средних значений между группами использовали критерий Крускала-Уоллиса. Результаты. В опытах с использованием модели рака молочной железы линии MCF7 овариэктомия приводила к существенному ингибированию роста опухоли по сравнению с быстрым ростом в контроле. Данные,приведенные на фиг. 4, убедительно свидетельствуют о том, что введение антипрогестина (I) s.c. в дозе 10 мг/кг индуцировало апоптоз опухолевых клеток. Действие антипрогестина (I) практически сравнимо с действием обычной терапии, предназначенной для депривации эстрогена (овариэктомии).-7 010593 Выводы. Действие антипрогестина (I) в отношении индукции апоптоза и обусловленного им ингибирования роста клеток линии MCF7 рака молочной железы человека, ксенотрансплантированных бестимусным мышам линии Fox Chas, оказалось сопоставимым с действием обычной терапии, предназначенной для депривации эстрогена (овариэктомии). Пример 5. Изучение индуцированного НММ рака молочной железы у крыс (гистология, индекс пролиферации и TUNEL-анализ). Материалы и методы. Опухоли индуцировали путем внутривенной инъекции НММ (нитрозометилмочевина, 50 мг/мл) самкам крыс линии Sprague-Dawley (полученным от фирмы Tierzucht Schnwalde, возрастом 50-55 дней). Крыс, у которых была выявлена по меньшей мере одна опухоль размером более 150 мм 2, подвергали в течение 7 дней следующим видам обработки: 1) вводили растворитель (контроль); 2) осуществляли овариэктомию перед началом опыта; 3) вводили антипрогестин (I), 3 мг/кг s.c. ежедневно. После завершения обработки опухоли вырезали, фиксировали в формалине и погружали в парафин. На этих выделенных опухолях проводили гистологический анализ, оценку индекса пролиферации и анализ индукции апоптоза. Гистология. Для осуществления гистологического анализа срезы ткани окрашивали гематоксилином и исследовали с помощью микроскопа. Индекс пролиферации. Для определения индекса пролиферации оценивали экспрессию ЯАПК(ядерный антиген пролиферирующих клеток). Ядерный антиген пролиферирующих клеток представляет собой ядерный протеин, имеющий молекулярную массу 36 кДа, который участвует в клеточном цикле. Было установлено, что ЯАПК обладает иммунореактивностью в характеризующемся пролиферацией компартменте здоровых тканей. Для изучения его распределения в ткани использовали моноклональное антитело, распознающее эпитоп, устойчивый в отношении фиксации и процессинга.TUNEL (Тест для оценки апоптоза). Биохимическим критерием апоптоза является деградация геномной ДНК, что представляет собой необратимый процесс, приводящий к гибели клеток. Он характеризуется фрагментацией ДНК, происходящей вследствие активации ядерных эндонуклеаз, которые избирательно расщепляют ДНК в сайтах, расположенных между нуклеосомными звеньями. Такие разрывы цепи ДНК обнаруживали с помощью ферментного мечения 3'-OH-концов с помощью флуоресцин-дУТФ с использованием терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TUNEL, Terminal DeoxynucleotidylTransferase-Mediated dUTP Nick End Labeling, см. у Gavrieli et al., J. Cell. Biol. 119, 493, 1992). Включенный флуоресцин выявляли с помощью конъюгата антитела к флуоресцину и щелочной фосфатазы и последующего взаимодействия с субстратом щелочной фосфатазы. Результаты. Гистология. На срезах ткани индуцированных НММ опухолей, обработанных антипрогестином (I),видны диспластические образования в виде протоков и гроздевидные образования, как правило, заполненные секреторным продуктом (фиг. 5 А). Кроме того, наблюдается увеличение объемной доли гранулярных структур по сравнению с контролями (фиг. 5 Б). Кроме того, в опухолях молочной железы животных, обработанных антипрогестином (I), видны морфологические признаки дифференцировки. Индекс пролиферации. Иммунореактивность в отношении ЯАПК оказалась наиболее высокой в необработанной ткани рака молочной железы, индуцированного НММ (фиг. 5 В: необработанный контроль). Количество клеток, обладающих иммунореактивностью в отношении ЯАПК, уменьшалось в результате индукции дифференцировки в ткани рака молочной железы крысы, индуцированного НММ,при обработке антипрогестином (I) (фиг. 5 Г). Эти данные свидетельствуют о том, что в случае рака молочной железы обработка антипрогестином уменьшала индекс пролиферации вследствие индукции дифференцировки.TUNEL (Апоптоз). На фиг. 5 Д продемонстрировано, что в отличие от необработанного контроля в ткани рака молочной железы, индуцированного НММ, обработка антипрогестином (I) вызывала апоптоз(фиг. 5 Е). Совершенно очевидно, что введение только одного антипрогестина (I) индуцировало апоптоз в тканях рака молочной железы, индуцированного НММ и, тем самым, ингибировало рост этих опухолей. Пример 6. Антипролиферативная активность антипрогестина (I) in vitro в клетках линии T47D. Материалы и методы. Клетки линии T47D выращивали в обработанной активированным углем сыворотке, дополненной 0,1 нМ Е 2 (эстрадиол) и антипрогестином (I), в течение 6 дней, на протяжении которых один раз осуществляли замену среды. После осуществления фиксации и последующего окрашивания кристаллическим фиолетовым измеряли абсорбцию и полученные значения стандартизовали по отношению к уровню абсорбции необработанных контролей согласно методу, описанному R.B. Lichtner, J. SteroidBiochem. Mol.Biol. 1999, 71; 181-189. TUNEL-анализ проводили аналогично методу, описанному выше в примере 5 с единственной разницей, заключающейся в том, что для анализа вместо срезов ткани использовали клетки, которые культивировали на предметных стеклах для микроскопического анализа.-8 010593 Результаты. В этом опыте in vitro на клетках линии T47D установлено, что антипрогестин (I) обладал выраженной ингибирующей рост опухоли активностью при использовании эффективных пороговых концентраций от 10-9 до 10 моль/л, в то время как антипрогестин онапристон не оказывал какого-либо заметного ингибирующего действия. Даже применение чистого антиэстрогена 11-фтор 5-[N-метил-N-3(4,4,5,5,5-пентафторпентилтио)пропиламино]пентилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17-диола (WO 98/07740) оказалось существенно менее эффективным, чем антипрогестина (I) (см. фиг. 6). Выводы. Антипрогестин (I) по настоящему изобретению индуцировал полное ингибирование стимулированного эстрадиолом роста клеток линии T47D при его применении в очень малых концентрациях и поэтому существенно превосходил в отношении силы действия и эффективности другие исследованные антипрогестины, такие как онапристон и чистый антиэстроген 11-фтор 5-[N-метил-N-3-(4,4,5,5,5 пентафторпентилтио)пропиламино]пентилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17-диол. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение антипрогестина 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(1,1,2,2,2 пентафторэтил)эстра-4,9-диен-3-она либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для индукции апоптоза клетки, которая представляет собой опухолевую клетку рака молочной железы,индикатором риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток на Sфазе клеточного цикла. 2. Применение по п.1, где индукцию апоптоза вызывают путем инициации терминальной дифференцировки. 3. Применение по любому из предыдущих пунктов, где клетка представляет собой клетку млекопитающего. 4. Применение по п.3, где клетка млекопитающего представляет собой клетку человека. 5. Применение по любому из предыдущих пунктов, где лекарственное средство дополнительно содержит антиэстроген. 6. Применение антипрогестина 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(1,1,2,2,2 пентафторэтил)эстра-4,9-диен-3-она либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения рака молочной железы, индикатором высокого риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток на S-фазе клеточного цикла. 7. Способ индукции апоптоза клетки, предусматривающий введение эффективного количества антипрогестина 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(1,1,2,2,2-пентафторэтил)эстра-4,9-диен-3-она либо его фармацевтически приемлемого производного или аналога в клетку, которая представляет собой опухолевую клетку рака молочной железы, индикатором риска возникновения которого является повышенное количество опухолевых клеток на S-фазе клеточного цикла. 8. Способ по п.7, где клетка представляет собой опухолевую клетку млекопитающего.