Препарат, снижающий выделение пролактина

1 Настоящее изобретение относится к препаратам, снижающим выделение пролактина. Экстракты из Vitex agnus-castus (agnuscastus, chaste tree) давно используют в медицине природных средств для лечения предменструального синдрома. Непосредственно перед началом менструации пациентки часто жалуются на ощущение напряжения в грудных железах,которое клинически сопровождается повышенным выделением пролактина. Экстракты из Vitex agnus-castus обладают особенностью снижать выделение пролактина,что можно подтвердить известными способами клинически и фармакологически. Неоднократно предпринимались попытки определить или даже выделить вещества, содержащиеся в Vitexagnus-castus, ответственные за ослабление предменструального синдрома. Так, диссертация Даниэля Бергера (DanielBerger) на тему: "Vitex agnus-castus: очевидная безопасность и эффективность для лечения предменструального синдрома, принципы и механизмы воздействия новой разработки экстракта", защищенная 13 января 1998 г. на факультете философии и естественных наук Базельского университета, рассматривает различные аспекты Vitex agnus-castus. В данной диссертации рассмотрен целый ряд различных компонентов, которые могут быть приняты во внимание для объяснения фармакологических свойств препарата. Так, аукубин гликозидов иридоида, агнусид и евростосид были обнаружены в препаратах, полученных как из листьев, так и из плодовVitex agnus-castus. Кроме того, из плодов можно выделить кастицин липофильных флавонолов, пендулитин, хризоспленол D и 3,6,7,4'-тетраметиловый эфир 6-гидроксикаэмферола. В данной работе указано также, что в плодах Vitex agnus-castus могут быть обнаружены прогестерон, -гидроксипрогестерон, тестостерон и эпитестостерон. Помимо этого, в плодах Vitex agnus-castus можно обнаружить 73 различных соединения,прежде всего - монотерпены, в частности пинен, сабинен, -фелландрен и 4-терпинеол, и сесквитерпены, в частности -кариофиллен,алло-аромадендрен, гермакрен В, спатуленол и-кадинол. Кроме классов веществ, указанных выше,в плодах Vitex agnus-castus можно обнаружить значительные количества жирных кислот, а,именно, предельных, мононепредельных и полинепредельных жирных кислот. Так, например,в плодах обнаружили -линоленовую кислоту,олеиновую кислоту, стеариновую кислоту,пальмитиновую кислоту, линолевую кислоту и адреновую кислоту. Дальнейшие исследования эфирного масла из плодов Vitex agnus-castus позволили обнару 004588 2 жить также присутствие дитерпенов. В указанной диссертации содержится информация о том,что из плодов Vitex agnus-castus выделили следующие дитерпены: ротундифуран, витексилактон и 6,7 диацетокси-13-гидрокси-лабда-8,14-диен,структурные формулы которых представлены ниже: 6,7-диацетокси-13-гидрокси-лабда-8,14-диен В данной работе содержится описание множество испытаний, проведенных для определения механизмов воздействия экстрактов,полученных из Vitex agnus-castus, а также для определения участия отдельных веществ или отдельного класса веществ для объяснения фармакологического воздействия всего экстракта. Так например, проведены измерения на различных опиоидных рецепторах, на бензодиацепиновом рецепторе, на сайте повторного поглощения серотонина, на гистаминовом рецепторе H1 и на допаминовом рецепторе D2. Для проверки результатов исследований связывания рецепторов на допаминовом рецепторе D2 с фракциями из Vitex agnus-castus и установления при этом подлинно активных веществ в вышеуказанной работе были проведены опыты с известными компонентами Vitex agnuscastus (чистые вещества). Эти чистые компоненты представляли собой аукубин, кастицин, гомоориентин, линолевую кислоту, лутеолин-7 глюкозид, ориентин и дитерпеновый витексин,ротундифуран, а также 6,7-диацетокси-13 гидрокси-лабда-8,14-диен. 3 Однако в диссертации на странице 154 в главе 2.3.4.5 ясно указано, что ни одно из испытанных веществ не имело достаточно низкого значения IC50, чтобы объяснить участием одного этого вещества активность и, следовательно,фармакологическое действие всего экстракта или липофильной гексановой фракции Vitexagnus-castus. По данным других литературных источников, известны следующие соединения,выделенные из Vitex agnus-castus и обладающие различными фармакологическими свойствами. Так, например, ротундифуран по данным KondoT.H., Lee S.J., Kim Y.C., Lee B.H.; склареол имеет антифунгицидную активность, по даннымMales Z., Blazevich N. Composition of the essential oil of Vitex agnus-cactus L.f. rosea fruits,Pharmazie, Bd.53, 1998, pages 728-729, лариксол ацетат используется как ароматическое вещество (WO 96/24684), 7 гидроксиманул применяют как диуретик (Ohsaki, Ayumi et al. The isolation and in vivo potent antitumor activity of clerodane diterpenoid from the oleoresin of the Brazilian medicinal plant, Copaifera langsdorfii Desfon' Bioogr. Med. Chem. Lett., 1994, 4(24), 288992 1994, ХР 000913600), (+) хардвиковая кислота эффективна в лечении язвы желудка, а также, по данным Ohsaki, Ayumi (соединение 2) имеет противоопуховую активность, и по даннымLett., 1994, 60(6), 541-5, 1994, pages 1469-1470,ХР 000913598) (соединение 3) используется в качестве антибактериального и ранозаживляющего средства, кролехиниковая кислота используется в качестве антибактериального и ранозаживляющего средства (соединение 6,) отриваиковая кислота, по данным ROJAS (Rojas, A. etal. Smooth muscle-relaxing compounds from Dodonaea viscosa, Planta Med., Bd. 62, Nr. 2, 1996,pages 154-159, XP000913597, левая колонка,предпоследний параграф, левая колонка и правая колонка, соединение 3) имеет слабое спазмолитическое действие, а также оказывает антимикробное и противовоспалительное действие и эффективна в лечении ревматизма, лихорадки, кашля, и т.п., энт-15,16,эпокси-9-Нлямбда-13(16),14-диен-3,8-диол имеет смазмолитическое действие, см. там же, Rojas с. 156,левая колонка, предпоследний параграф, левая колонка и правая колонка, соединение 4), солидагенон (Anthonsen, Т. et al. Constituents of solidago species, Tetrahedron, 1970, 26(13), 3091-7,с.3092, соединение 1) используется в качестве гомеопатического средства, повышающего иммунитет,а 6,7-диацетокси-13-гидрокси 004588Basel, c.29, фиг. 3,4) описаны в той же диссертации Berger'a. Однако в указанных источниках отсутствуют сведения об эффективности данных индивидуальных соединений в отношении предменструального синдрома. Исходя из вышесказанного, задачей настоящего изобретения является получение чистых веществ из плодов Vitex agnus-castus с тем,чтобы можно было получить лекарственный препарат для лечения предменструального синдрома в фармацевтическом составе. Эта задача решена посредством лекарственного препарата по п.1, а также с помощью новых веществ по пп.10 и 12 формулы изобретения. В рамках настоящего изобретения авторы неожиданно установили, что соединения класса бициклических дитерпенов вызывают снижение выделения пролактина в культивированных клетках гипофиза крыс. Весьма вероятно, что такой механизм можно перенести на человека. При этом имеющие активность дитерпены могут иметь скелетную структуру как лабданового, так и клероданового типа: Клеродановая структура В частности, установлено, что эффект снижения выделения пролактина в культивированных клетках гипофиза можно получить с помощью обладающих низкой цитотоксичностью соединений, описанных в п.1 формулы изобретения. Такие соединения могут быть представлены в виде препарата, снижающего выделение пролактина и содержащего по меньшей мере один бициклический дитерпен типа лабдана или клеродана в соответствии по меньшей мере с одной из общих формул (I), (II), (III) и (IV): 6 1,2, 3, 6, 7, 8, 8(17) формулы (II) и 1, 2, 3, 4(18),6, 7, 8, 8(17) формулы (IV),за исключением следующих соединений: лариксолацетат, 7-гидроксиманоол, (+)хардвиковая кислота, кролехиновая кислота, отриваиковая кислота, энт-15,16-эпокси-9 Н-лабда 13(16)14-диен-3,8-диол и метиловый эфир 15,16-эпокси-8(17),14,16-лабдатриеновой-19 кислоты. Кроме того, следующие соединения являются предпочтительными вариантами реализации настоящего изобретения: где R1=Н, С 1-С 3-алкил или С 1-С 3-ацил,при этом кольца А и/или В в случае общих формул (I) или (II) могут иметь замещения в позиции 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8 или 9 по меньшей мере одним радикалом ОХ, где Х=Н, C1-С 3-алкил илиC1-С 3-ацил,при этом кольца А и/или В в случае общих формул (III) или (IV) могут иметь замещения в позиции 1, 2, 3, 4, 6, 7 или 8 по меньшей мере одним радикалом ОХ, где Х=Н, C1-С 3-алкил илиC1-С 3-ацил,при этом по меньшей мере один атом углерода в позиции 17, 18, 19 и 20 может быть замещен радикалом ОХ, где Х=Н, C1-С 3-алкил или C1-С 3-ацил,при этом по меньшей мере одна группа СН 3 в позиции 17, 18, 19 и 20 может быть замещена группой СООН,при этом по меньшей мере одна из позиций кольца 1, 2, 3, 6 или 7 может являться кетоновой группой, и при этом по меньшей мере одна двойная связь может присутствовать в позициях кольца 1, 2, 3, 6, 7, 8, 8(17) формул (I) и (III), и при этом по меньшей мере одна двойная связь может присутствовать в позициях кольца а также клерода-Y,14-диен-13-ол, где Y-позиция кольца 1, 2, 3, 4(18), 6, 7 или 8(17), и клерода-Y,Z,14-триен-13-ол, где Y или Zпозиция кольца 1, 3 или 1, 4(18) или 1, 6 или 1, 7 или 1, 8(17) или позиция кольца 2, 4(18) или 2, 6 или 2,7 или 2,8(17) или позиция кольца 4(18), 6 или 4(18), 7, или 4(18), 8(17) или позиция кольца 6,8(17). 7 Оказалось возможным обогатить и охарактеризовать аналогичные соединения из водноэтанольного экстракта, полученного из плодовVitex agnus-castus путем фракционированной липофильной экстракции, и определить их структуры. Экстракция с высоко липофильными растворителями, в частности с углеводородами C5 С 10, имеющими цепь средней длины, например,с н-гексаном, давала особенно сильный эффект снижения содержания пролактина. Кроме того,экстракция из плодов Vitex agnus-castus со сверхкритическим диоксидом углерода позволяла получать существенное усиление принципов воздействия, которые можно было объяснить наличием соединений, соответствующих формулам I-IV. Все соединения согласно настоящему изобретению, структурные формулы которых представлены выше, препятствуют выделению пролактина в лактотропных клетках гипофиза крыс. В отдельных исследованиях по определению цитотоксичности было установлено, что все соединения, выделенные и описанные в соответствии с изобретением, проявляют низкую цитотоксичность. Этот факт делает их особенно привлекательными для получения фармацевтических составов. Кроме того, было установлено, что указанные вещества также связываются с рекомбинантным допаминовым рецептором D2 человека. Другие достоинства и отличительные признаки настоящего изобретения будут понятны из описания вариантов его реализации и прилагаемой фигуры, при этом данная фигура показывает влияние бициклических дитерпенов на выделение пролактина из культивированных клеток гипофиза крыс. Этанольный экстракт из плодов Agni casti получают способами, известными как мацерация или перколяция с органическим растворителями или смесью органических растворителей с водой или со сверхкритическим диоксидом углерода. При этом предпочтительно используют смеси этанола с водой в соотношении от 50:50 до 90:10 при температуре от 20 до 60 С. Полученный таким способом экстракт распределяют между двумя несмешивающимися фазами, имеющими различные полярности. При этом алканы, галогенированные углеводороды, кетоны и сложные эфиры используют в качестве липофильной фазы, а спирты и воду - в качестве гидрофильной фазы. Предпочтительно используют одинаковые объемы алканов С 5-С 7 и смесей этанола и воды в соотношении от 1:2 до 1:10. Липофильная фаза обеспечивает снижение активности пролактина и может быть дополнительно очищена известными способами, в частности, жидкостной хроматографией высокого 8 давления и препаративной тонкослойной хроматографией. Из 1 кг размолотых плодов Vitex Agnuscastus получили экстракт путем перколяции с 10 л смеси этанола и воды в соотношении 6/4 по объему. Полученный из этого загустевший экстракт, имеющий сухой остаток 1,75 г, распределили в делительной воронке между 375 мл 15%EtOH и 375 мл н-гексана, н-гексановую фазу удалили и снова экстрагировали водную фазу путем встряхивания с н-гексаном. После концентрирования при пониженном давлении из объединенных гексановых фаз получили осадок 300 мг. После этого осадок, полученный указанным образом, отделили посредством жидкостной хроматографии высокого давления. Для этого использовали колонку, имеющую размеры 21,4 х 300 мм, с материалом С-18, имеющим размер частиц 8 мм, в качестве стационарной фазы. Хроматографию проводили в потоке 10 мл/мин смеси ацетонитрил/вода 60/40 в качестве растворителя. После загрузки образца содержание ацетонитрила линейно увеличивалось до 100% в течение 60 мин. Все дитерпены элюировали в объеме от 350 до 450 мл. Из 300 мг гексановой фазы получили примерно 38 мг смеси дитерпенов. Дитерпены собирали соответствующим образом в форме фракций. Дальнейшую очистку смеси дитерпенов,полученной указанным образом, провели посредством препаративной тонкослойной хроматографии на слоях силикагеля толщиной 1 мм с различными добавками, повышающими текучесть, в соответствии с описанием, приведенным ниже для отдельных образцов. Определение проводили с реагентом из анисового альдегида (DAB 10, 1997). Зоны чистых детерпенов на тонкослойной пластинке элюировали с помощью смеси хлороформа и метанола и анализировали посредством масс-спектрометрии хроматографии связанного газа. Препарат 98-146 (обозначен "146" на прилагаемой фигуре): 6-ацетокси-9-гидрокси-15,16-эпокси 13(16),14-лабдадиен (ротундифуран) Добавка, повышающая текучесть: хлороформ/метанол 95/5 Величина Rf: 0,75 Характеристические фрагменты непроизводного вещества в GC-MS (газовая хроматография - масс-спектрометрия ): m/z=362 [М]+,344, 302, 287, 284, 207, 150, 135, 95, 81. 9 Препарат 98-119 (обозначен "119" на фиг. 1): Клерода -у,14,-диен-13-ол Добавка, повышающая текучесть: хлороформ/метанол 95/5 Величина Rf: 0,63 Характеристические фрагменты непроизводного вещества в GC-MS:m/z=290 [М]+, 272, 257, 243, 229, 191, 189, Препарат 98-153 (не показан на фиг. 1): х,13-дигидрокси-14-лабден Добавка, повышающая текучесть: хлороформ/метанол 95/5 Величина Rf: 0,37 Характеристические фрагменты непроизводного вещества в GC-MS: Препарат 98-152 (не показан на фиг. 1): 6,7-диацетокси-13-гидрокси-лабда-8,14 диен Добавка, повышающая текучесть: хлороформ/метанол 99/1 Длина потока 16 см, повторение 3 х Величина Rf: 0,5 Характеристические фрагменты непроизводного вещества в GC-MS: Препарат 98-166 (обозначен "166" на фиг. 1): х-гидрокси-у-кето-15,16-эпокси-13(16),14 лабдадиен Добавка, повышающая текучесть: хлороформ/н-гексан 90/10 Повторение 3 х, длина потока 16 см Величина Rf: 0,74 Характеристические фрагменты непроизводного вещества в GC-MS: Препарат 98-167 (обозначен "167" на фиг. 1): х-ацетокси-у-13-гидрокси-лабда-у,14-диен Добавка, повышающая текучесть: хлороформ/н-гексан 90/10 Повторение 3 х, длина потока 16 см Величина Rf: 0,55 Характеристические фрагменты непроизводного вещества в GC-MS: Влияние на выделение пролактина: Определение выделения пролактина из культивированных клеток гипофиза самцов крыс проведено согласно описанию Jarry et al.,Expiremental and Clinical Endocrinology, Vol. 102, (1994) 448-454. Дитерпены добавляли к клеточным культурам в растворе этанола. В качестве контрольных образцов использовали растворы с соответствующими концентрациями этанола и допамина. Среднее значение измеренной концентрации пролактина в надосадочных слоях для клеток, выращенных в среде без добавок, было принято равным 100%. Дитерпены существенно снижают выделение пролактина. Результаты представлены на фиг. 1. На фигуре видно снижение выделения пролактина из культивированных клеток гипофиза крыс, вследствие влияния бициклических дитерпенов. В качестве контрольных образцов испытывали чистую среду,среду с добавкой этанола, а также среду с добавкой 10-4 молей допамина (=DA-4 М). Концентрация указана в мг дитерпена на 1 мл среды. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Препарат, снижающий выделение пролактина и содержащий по меньшей мере один бициклический дитерпен типа лабдана или клеродана в соответствии по меньшей мере с одной из общих формул (I), (II), (III) или (IV) 12 3. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: 4. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: где R1=Н, С 1-С 3-алкил или С 1-С 3-ацил,при этом кольца А и/или В в случае общих формул (I) или (II) могут иметь замещения в позиции 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8 или 9 по меньшей мере одним радикалом OX, где Х=Н, C1-С 3-алкил илиC1-С 3-ацил,при этом кольца А и/или В в случае общих формул (III) или (IV) могут иметь замещения в позиции 1, 2, 3, 4, 6, 7 или 8 по меньшей мере одним радикалом OX, где Х=Н, C1-С 3-алкил илиC1-С 3-ацил,при этом по меньшей мере один атом углерода в позиции 17, 18, 19 и 20 может быть замещен радикалом ОХ, где Х=Н, C1-С 3-алкил или C1-С 3-ацил,при этом по меньшей мере одна группа СН 3 в позиции 17, 18, 19 и 20 может быть замещена группой СООН,при этом по меньшей мере одна из позиций кольца 1, 2, 3, 6 или 7 может являться кетоновой группой, и при этом по меньшей мере одна двойная связь может присутствовать в позициях кольца 1, 2, 3, 6, 7, 8, 8(17) формул (I) и (III), и при этом по меньшей мере одна двойная связь может присутствовать в позициях кольца 1, 2, 3, 6, 7, 8, 8(17) формулы (II) и 1, 2, 3, 4(18),6, 7, 8, 8(17) формулы (IV),за исключением следующих соединений: лариксолацетат, 7-гидрокси-маноол, (+)хардвиковая кислота, кролехиновая кислота, отриваиковая кислота, энт-15,16-эпокси-9 Н-лабда 13(16)14-диен-3,8-диол и метиловый эфир 15,16-эпокси-8(17), 14,16-лабдатриеновой-19 кислоты. 2. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: 5. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: 6. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: 7. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: 8. Препарат по п.1, снижающий выделение пролактина и отличающийся тем, что содержит соединение, имеющее следующую формулу: 9. Применение соединения, охарактеризованного в пп.1-8, для получения препарата,снижающего выделение пролактина, для лечения предменструального синдрома, мастодинии и нарушений менструального цикла, в частности олиго- и аменореи. 10. Клерода-Y,14-диен-13-ол, где Y - позиция кольца 1, 2, 3, 4(18), 6, 7 или 8(17). 11. Применение клерода-Y,14-диен-13-ола,где Y - позиция кольца 1, 2, 3, 4(18), 6, 7 или 8(17) для получения препарата, снижающего выделение пролактина, или получения медикамента для лечения предменструального синдрома, мастодинии и нарушений менструального цикла, в частности олиго- и аменореи. 12. Клерода - Y,Z,14-триен-13-ол, где Y или Z - позиция кольца 1, 3 или 1, 4(18) или 1, 6 или 1, 7 или 1, 8(17) или позиция кольца 2, 4(18) или 2, 6 или 2, 7 или 2, 8(17) или позиция кольца 4(18), 6 или 4(18), 7 или 4(18), 8(17) или позиция кольца 6, 8(17). 13. Применение клерода - Y,Z,14-тpиeн-13oлa, где Y или Z - позиция кольца 1, 3 или 1,4(18) или 1, 6 или 1, 7 или 1, 8(17) или позиция кольца 2, 4(18) или 2, 6 или 2, 7 или 2, 8(17) или позиция кольца 4(18), 6 или 4(18), 7 или 4(18),8(17) или позиция кольца 6, 8(17) для получения препарата, снижающего выделение пролактина,или для получения медикамента для лечения предменструального синдрома, мастодинии и нарушений менструального цикла, в частности олиго- и аменореи. 14. Применение соединения, выбранного из группы, включающей соединения, имеющие следующие формулы: солидагенон для получения препарата, снижающего выделение пролактина.