Новое применение таксоидных производных

1 Настоящее изобретение относится к новому применению таксоидных производных, а именно к 4-ацетокси-2-бензоилокси-5,20 эпокси-1-гидрокси-7,10-диметокси-9-оксо 11-таксен-13-ил-(2R,3S)-3-трет-бутоксикарбониламино-2-гидрокси-3-фенилпропионату формулы (Iа) для получения лекарственного средства для лечения аномальной (патологической) пролиферации клеток головного мозга млекопитающих, включая человека, путем внутривенного введения. Из патента WO 96/30355 известно, что соединение настоящего изобретения можно получить двумя способами. В соответствии с первым, многостадийным способом, если исходить из 10-деацетилбаккатина III формулы то последний селективно защищают в положениях 7 и 13, например, в форме простого силилового диэфира, а затем действуют веществом общей формулы(IV) где заместитель R представляет собой метильный радикал, а Х представляет собой реакционно-способный сложноэфирный остаток, такой как остаток эфира серной или сульфоновой кислоты, или атом галогена, с получением продукта, содержащего группу -ОСН 3 в положении 10 и силильные группы в положениях 7 и 13. Затем защитные силильные группы заменяют на атомы водорода, получают соединение, все еще содержащее группу -ОСН 3 в положении 10 и ОНгруппы в положениях 7 и 13. Последнее производное селективно превращают в простой эфир в положении 7 реакцией с производным формулы IV, получая соединение формулы (Iа), в котором в 13 положении находится группа -ОН. Конечная стадия заключается в этерификации в положении 13 способом, который сам по себе известен, производных формулы (Iа),где в положении 13 находится ОН, в присутствии -лактама, например по методике, описанной в патенте ЕР 617018, или в присутствии оксазолидина, как описано, например, в упомянутом выше патенте WO 96/30355. После сня 005135 2 тия защиты удалением защитных групп в положениях 7 и 10 получают сложный эфир формулы (Ia). Следующая стадия состоит во взаимодействии одновременно положений 7 и 10 под действием реагента, образующегося непосредственно в реакционной смеси из сульфоксида формулы (V) и уксусного ангидрида (реакция Пуммерера),R-SO-R(V),где заместитель R имеет указанное выше значение, с образованием промежуточного соединения алкилтиоалкилокси-типа в положениях 7 и 10. Конечную стадию, позволяющую получить желаемое соединение формулы (Iа), проводят с использованием полученного выше промежуточного соединения, при взаимодействии его с активированным никелем Ренея. В общем случае, обработку реагентом, образующимся непосредственно в реакционной смеси из сульфоксида общей формулы (V),предпочтительно диметилсульфоксида, и уксусного ангидрида, проводят в присутствии уксусной кислоты или производного уксусной кислоты, такого как галогенуксусная кислота, при температуре в интервале от 0 до 50 С. Обычно обработку активированным никелем Ренея в присутствии алифатического спирта или простого эфира осуществляют при температуре между -10 и 60 С. В публикации FR 97-14442 описан еще один способ. Это изобретение позволяет в одну стадию, напрямую, селективно и одновременно алкилировать две гидроксильные функциональные группы в положениях 7 и 10 10-деацетилбаккатина или его этерифицированных в положение 13 производных формулы (VI) где А, в частности, представляет собой боковую цепь формулы (IIа), представленную ниже, где G представляет собой защитную группу для гидроксильной функциональной группы. В качестве исходного соединения предпочтительно использовать 10-деацетилбаккатин,то есть продукт формулы (III), что дает заметную экономию, что касается способа, и, более того, позволяет исключить стадии введения защиты и снятия защиты с промежуточного соединения, которые необходимы в старых способах. Среди групп G для защиты гидроксильной функциональной группы в формуле (IIа) в об 3 щем случае предпочтительно выбирать все защитные группы, которые описаны в книгах,таких как Greene and Wuts, Protective Groups in(Защитные группы в органической химии),1975, Plenum Press, и которые удаляют в условиях, при которых остаток молекулы разрушается слабо или не разрушается вообще, такие как, например простые эфиры, предпочтительно такие эфиры, как метоксиметиловый эфир, 1-этоксиэтиловый эфир, бензилоксиметиловый эфир, пметоксибензилоксиметиловый эфир, бензиловые эфиры, необязательно замещенные одной или более группами, такими как метокси-, хлор,нитро-, 1-метил-1-метоксиэтиловый эфир, 2(триметилсилил)этоксиметиловый эфир, тетрагидропираниловый эфир, и силиловые эфиры,такие как триалкилсилиловые эфиры,карбонаты, такие как трихлорэтилкарбонат. Более конкретно, радикалы Ra и Rb в общей формуле (IIb) выбирают из радикалов, которые описаны в патенте WO 94/07878, и более предпочтительными производными являются производные, в которых радикал Ra представляет собой атом водорода, а радикал Rb представляет собой п-метоксифенильный радикал. Алкилирующий агент выбирают из алкилгалогенидов, предпочтительно из алкилйодидов (RI),алкилсульфатов, таких как метилсульфат,соединений оксония, таких как борные соли триалкилоксония, в частности триметилоксонийтетрафторборат (Ме 3 ОВF4). Предпочтительно использовать метилйодид. Алкилирующий агент используют в безводной среде в присутствии анионизирующих агентов, таких как одно или более сильное основание. Среди оснований, которые могут быть использованы в безводной среде, можно назвать следующие: гидриды щелочных металлов, такие как гидрид натрия или калия,алкоголяты щелочных металлов, такие как трет-бутилат калия,оксид серебра Аg2 О,1,8-бис(диметиламино)нафталин,смеси моно- или диметаллических оснований, такие как основания, описанные, например,в публикациях, таких как Р. Caubre, Chem. Rev. 1993, 93, 2317-2334, или М. Schlosser, Mod.Synth. Methods (1992), 6, 227-271; в частности предпочтительными являются сочетания алкиллитий/трет-бутилат щелочного металла или амид щелочного металла/трет.-бутилат щелочного металла. Одно из двух оснований можно получать непосредственно в реакционной смеси 4 Среди всех возможных сочетаний алкилирующих агентов и анионизирующих агентов предпочтительным является использование метилйодида в присутствии гидрида калия. Реакцию предпочтительно проводят в органической среде, являющейся инертной в условиях реакции. Предпочтительно использование следующих растворителей: простых эфиров, таких как тетрагидрофуран или диметоксиэтан,при применении оксида серебра предпочтительно использование полярных апротонных растворителей, таких как диметилформамид,или ароматических растворителей, таких как толуол,при применении 1,8-бис(диметиламино) нафталина предпочтительно использование сложных алкиловых эфиров, например этилацетата. Для лучшего осуществления изобретения предпочтительно использовать мольное соотношение между анионизирующим агентом и субстратом больше чем 2, и предпочтительно в интервале от 2 до 20. Также предпочтительно использовать мольное соотношение между алкилирующим агентом и субстратом больше 2, и предпочтительно в интервале от 2 до 40. Предпочтительной является температура от -30 до 80 С. Время реакции преимущественно находится в интервале от нескольких часов до 48 ч в зависимости от выбранных реакционных условий. После стадии алкилирования, когда последнюю проводят с 10-деацетилбаккатином,способ известным образом переходит к стадии этерификации, например в соответствии со способами, описанными в упомянутых выше патентах ЕР 617018 или WO 96/30355. Таким образом, в первом трехстадийном способе процесс начинают с диалкилирования 10-деацетилбаккатина с использованием алкилирующего агента в присутствии сильного основания, на второй стадии проводят сочетание 10-деацетилбаккатина, превращенного в диэфир в положениях 7 и 10, с защищенным подходящим образом -лактамом, в присутствии активирующего агента, выбираемого из третичных аминов и металлооснований, которые обеспечивают образование алкоксильной группы в положении 13. Затем осуществляют снятие защиты боковой цепи путем обработки неорганической или органической кислотой. Во втором трехстадийном способе процесс начинают с диалкилирования 10-деацетилбаккатина с использованием алкилирующего агента в присутствии сильного основания, на второй стадии 10-деацетилбаккатин, превращенный в простой диэфир в положениях 7 и 10,сочетают в 13 положении с оксазолидином в присутствии сочетающего агента, такого как диимиды, в присутствии активирующего агента, 5 такого как диалкиламинопиридин. Раскрытие оксазолидина достигается действием неорганической или органической кислоты. Третий способ начинается с этерификации в положении 13 баккатина с защищенными подходящим образом положениями 7 и 10, -лактамом или оксазолидином в присутствии сочетающего агента и/или активирующего агента,как показано в описанных выше двух способах. После снятия защиты в 7 и 10 положениях получают простой диэфир в положениях 7 и 10 с помощью алкилирующего агента в присутствии сильного основания. Затем снятие защиты боковой цепи достигается путем обработки неорганической или органической кислотой. 4-Ацетокси-2-бензоилокси-5,20-эпокси 1-гидрокси-7,10-диметокси-9-оксо-11-таксен 13-ил-(2R,3S)-3-трет-бутокси-карбониламино 2-гидрокси-3-фенилпропионат обладает замечательными биологическими свойствами. Оценку биологической активности in vitro проводят на тубулине, экстрагированном из свиного головного мозга методом, описаннымM.L. Shelanski et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,70, 765-768 (1973). Исследование деполимеризации микротрубочек в тубулине проводят в соответствии с методом G. Chauviere et al., C.R.Acad. Sci., 293, serie II, 501-503 (1981). Соединение настoящего изобретения подтвердило активность in vivo при проверке на мышах, привитых меланомой В 16, в дозах между 1 и 50 мг/кг (внутрибрюшинно), а также на других мягких и твердых опухолях. Соединение обладает противоопухолевыми свойствами, более конкретно активностью против опухолей, устойчивых к Taxol и Taxotere. К таким опухолям относятся, например, опухоли головного мозга, которые имеют повышенную экспрессию mdr1 гена (гена устойчивости к многочисленным лекарственным средствам). Определение устойчивость к многочисленным лекарственным средствам представляет собой обычный термин, относящийся к устойчивости опухоли к различным соединениям, имеющим различную структуру и механизм действия. Таксоиды, как общеизвестно, хорошо изучены с помощью экспериментальных опухолей, например P388/DOX, линии клеток Р 388 мышиной лейкемии, выбранной по устойчивости к доксорубицину (DOX), которая экспрессирует mdr1. Соединения в соответствии с настоящим изобретением менее изучены с помощьюP388/DOX. Более конкретно, эти соединения менее изучены, чем Taxotere, с помощью генаmdr1. 4-Ацетокси-2-бензоилокси-5,20-эпокси 1-гидрокси-7,10-диметокси-9-оксо-11-таксен 13-ил-(2R,3S)-3-трет-бутоксикарбониламино 2-гидрокси-3-фенилпропионат используется при получении лекарственного средства для лечения 6 аномальной пролиферации клеток головного мозга. Соединение, главным образом, обладает свойством проникать через гематоэнцефалический барьер. Оно активно в сравнении с другими известными таксоидами, такими как Taxol иTaxotere, при лечении рака головного мозга. Продукт формулы (Iа) может быть использован одновременно с другим терапевтическим лечением. Более предпочтительно его используют с другим терапевтическим лечением,включающим использование противоопухолевых лекарств, моноклональных антител, иммунотерапию, радиотерапию или модификаторы биологических реакций. Среди модификаторов биологических реакций предпочтительно использование лимфокинов и цитокинов, интерлейкинов, -, - или -интерферонов и факторов опухолевого некроза (TNF). Продукт формулы (Iа) вводится внутривенно. Пример 1. 1. Введение. Продукт формулы (Iа) проявил себя сильнодействующим противораковым агентом в доклинических моделях. Здесь представлены аналитические результаты, полученные при фармакокинетическом исследовании на мышах одного в/в болюса. Группам самок мышей С 3 Н/HeN вводят продукт внутривенным способом в виде болюса в дозе 40 мг/кг, эквивалентной 120 мг/м 2. Образцы крови и головного мозга получают от всех дозированных животных, которых умерщвляют в интервале до 72 ч после введения дозы лекарства. Головной мозг и соответствующие образцы плазмы анализируют на содержание продукта (Iа) с помощью LC-MS/MS-анализа(жидкостная хроматография/масс-спектрометрия). 2. Методы. Препарат: 2,25 мг/мл раствора, содержащего 5% полисорбата 80, 5% этанола и 90% 5%ного водного раствора глюкозы. Каждой из 56 самок мышей С 3 Н/HeN весом приблизительно 20 г через хвостовую вену вводят препарат продукта (II) с помощью в/в болюса при объеме инъекции 0,4 мл, чтобы ввести суммарную дозу 40 мг/кг. Отбор образцов крови и тканей Отбор образцов: крови - путем сердечной пункции; печени и головного мозга - путем вскрытия после умерщвления с помощью СO2. Время отбора образцов: через 2, 5, 15, 30,45 мин, 1, 2, 4, 6, 8, 14, 48 и 72 ч после введения дозы. Цельную кровь собирают в гепаринизированные пробирки и получают соответствующие образцы плазмы путем центрифугирования и немедленного замораживания при -20 С. Ткани просушивают с помощью промокательной бумаги, взвешивают и немедленно замораживают при -20 С. Все образцы отправляют на анализ 7 замороженными. После получения образцы хранят в ожидании анализа в замороженном виде приблизительно при -18 С. Анализ образцов головного мозга и плазмы с помощью LC-MS/MS Определение: LC-MS/MS (Sciex API IIIplus), способ турбоионного впрыскивания. Используются следующие условия массспектрометрии: Скорость вспомогательного газа 6 л/мин Скорость распыляющего газа 0,6 л/мин Турботемпература 450 С Температура экранирующего газа 300 С Скорость экранирующего газа 0,6 л/мин Время развертки 1 развертка/с Отношение деления потока элюента 1:10 Колонка: 75 х 4,6 мм Supelcosil ABZ plus (3 мкм). Подвижная фаза: Ацетонитрил/метанол/ ацетат аммония (10 мМ); 40/25/35 об./об./об. Скорость потока: 1 мл/мин. Температура: комнатная. Экстракция. Плазма: к образцу (50 мкл) добавляют 100 мкл ацетонитрила. Хорошо перемешивают, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость,добавляют 100 мкл подвижной фазы и впрыскивают 150 мкл. Головной мозг: добавляют 100 мкл ацетонитрила к гомогенизированному образцу (100 мг гомогената головного мозга с водой при соотношении 1:1 вес./вес.) и хорошо перемешивают. Добавляют 1 мл диэтилового эфира, перемешивают, центрифугируют, удаляют органический слой и сушат под N2. Восстанавливают в 200 мкл подвижной фазы и впрыскивают 150 мкл. Калибровочные стандарты. Плазма: Девять с концентрациями 5, 10,20, 50, 100, 200, 300, 400 и 500 нг/мл (продукт(Ia. Получают путем добавления соответствующих аликвот продукта (концентрации=0,1, 1 или 10 мкг/мл) в этаноле к аликвотам мышиной плазмы объемом 0,5 мл. Каждый образец после добавления лекарства хорошо перемешивают; затем отбирают аликвоту в 50 мкл для анализа. Головной мозг: Одиннадцать с концентрациями 10, 20, 30, 100, 200, 300, 400, 500, 1000,2500 и 5000 нг/г в гомогенизированном головном мозге мышей (1:1 вес./вес. головного мозга с водой). Получают путем добавления соответствующих аликвот продукта (концентрации=1,10 или 100 мкг/мл) в этаноле к 0,5, 1, 3 или 4 г гомогенизированного мышиного головного мозга. Каждый образец после добавления лекарства хорошо перемешивают, затем отбирают аликвоту в 100 мг для анализа. Время удерживания: лекарство, продукт 8 3. Результаты. 3.1. Концентрации в плазме. В следующей таблице представлены концентрации продукта (I) в плазме, наблюдаемые после внутривенного введения мышам продукта н.п. - не пригодна н.о. - не определяется ( нижнего предела обнаружения 4 нг/мл) нпко - ниже предела точного количественного определения (20 нг/мл) 3.2. Концентрации в головном мозге. В приведенной ниже таблице представлены концентрации продукта (Iа) в неповрежденном головном мозге, наблюдаемые после внутривенного введения мышам продукта (Iа) в дозе 40 мг/кг. Таблица 2 Предварительные концентрации в головном мозге продукта (Iа) после в/в введения мышам в дозе 40 мг/кг н.о. - не определяется ( нижнего предела обнаружения 92 нг/г) н.п. - не пригодна 3.3. Фармакокинетические параметры. В следующей таблице приведены предварительные фармакокинетические параметры для продукта (Iа), полученные после в/в введения мышам в дозе 40 мг/кг и рассчитанные с использованием средних значений содержания в плазме и головном мозге. 9 Таблица 3 Предварительные средние фармакокинетические данные+ рассчитано из величинн.п.о. 4 нг/млрассчитано из величиннпко 20 нг/млсоответствующая ППК 0-72 ч=549,7 чмкг/г Биэкспоненциальное уравнение удовлетворяет профилям, использующим интерактивный линейный алгоритм наименьших квадратов в качестве части пакета SIPHAR. Площадь под кривой (ППК, AUC) рассчитывают по правилу трапеции от нулевого времени и до времени как последнего значения, которое равно или больше, чем н.п.о. (нижний предел обнаружения)+(4 нг/мл) или нпко (нижний предел количественного определения)(20 нг/мл) для плазмы, так и до 72 ч после введения дозы для головного мозга, а затем экстраполируют к бесконечности. Сокращения ППК 0-: площадь под кривой зависимости концентрации в плазме или мозге от времени отt=0 (начало вливания) до бесконечности. Начальное T1/2: Начальный период полувыведения (распределение). Конечное T1/2: Конечный период полувыведения (следует рассматривать как оценку,зависящую только от частоты отбора образцов на заключительной фазе и от чувствительности анализа). Клс - суммарный клиренс плазмы.Vpacп - объем распределения при стационарном состоянии. н.п. - не пригодно 4. Выводы. Концентрации продукта (Iа) являются высокими, как и следовало ожидать, после внутривенного введения дозы 40 мг/кг, но быстро падают от максимального значения через 2 мин(среднее значение 46,9 мкг/мл) менее чем до 1 мкг/мл в пределах 4 ч (начальный период полувыведения 0,7 ч). Однако концентрации сохраняются на уровне выше предела точного количественного определения (20 нг/мл) вплоть до 14 ч после введения и стабильно выше предела обнаружения (4 нг/мл) в течение 24 ч после введения дозы. Конечный период полувыведения 6,2 ч рассчитан из концентраций в плазме, которые могут быть определены (4 нг/мл). Однако следует отметить, что в этом случае конечный период полувыведения зависит в значительной степени от чувствительности анализа, и, если вместо этих концентраций для расчета фармакокинетических параметров используют концентрации выше предела точного определения(20 нг/мл), то конечное время полувыведения падает до 2,0 ч. 10 Среднее значение суммарного клиренса плазмы, как определено, составляет 1,3 л/чкг,что представляет собой значительную часть среднего потока плазмы через печень (из расчета на средний поток крови через печень, составляющий приблизительно 5,2 л/чкг). В этих образцах после в/в введения продукт (Iа), как оказывается, легко проникает через гематоэнцефалический барьер. Высокие концентрации обнаружены при начальном времени отбора образцов (7,9 мкг/г через 2 мин),что указывает на быстрое проникновение в эти ткани. Хотя максимальные концентрации 9,1 мкг/г наблюдаются через 14 ч, высокие концентрации сохраняются вплоть до времени последнего отбора образца (5,3 мкг/г через 72 ч). Не удивительно, что продукт медленно выводится из головного мозга с периодом полувыведения 31,4 ч. Исходя из величин ППК 0- (788 чмкг/г относительно 30 чмкг/мл), концентрации продукта (Iа) в головном мозге составляют приблизительно 12-кратную концентрацию в плазме. Пример 2. Оценка противоопухолевой активности продукта (Iа) относительно интракраниально привитых глиобластом человека U251 и SF-295 на мышах NCr-nu. Проведено четыре исследования для оценки реакции глиобластом U251 и SF-295 при лечении с помощью продукта (Ia). В двух исследованиях глиобластомы U251 и SF-295 были стимулированы от интракраниально привитых клеток при объеме 106 клеток на одну мышь. Схема лечения интракраниально привитых клеток глиобластом U251 - внутривенно, 1 раз в день, каждый шестой день при трех обработках(q6d x 3), начиная с четвертого дня после прививки. Схема лечения интракраниально привитых клеток глиобластом SF-295 - внутривенно, 1 раз в день, каждый четвертый день при трех обработках (q4d x 3), начиная со второго дня после обработки. При исследовании интракраниальной прививки соединения оценивают, исходя из их способности увеличивать продолжительность жизни животных. В обеих моделях этих опухолей в качестве положительного контроля используют нитрозомочевину. Целью данного эксперимента является оценка продукта (Iа) с точки зрения противоопухолевого действия в моделях опухолевых глиобластом человека. В этих экспериментах общие методикиDCTD, NCl и методики для изучения эффективности in vivo были модифицированы для конкретного применения (In vivo Cancer Models,NIH Publication84-2635, 1984). Эти исследования проведены на усовершенствованном оборудовании (AAALAC Registration000643, AALASMembership840723001, USDA Registration64-R-001, OPPR, PHS, NIH, AWA, AssuranceA3046-01). Это оборудование имеет сертификат ISO 9001. Комиссией по надзору былTween 80, 90% D5W. Нитрозомочевину готовят в 2% этанола,98% физиологического раствора. Приготовление доз. Все дозирующие растворы приготовлены вSouthern Research Institute (SRI). Введение соединения. Продукт (Ia) вводят из расчета 0,4 мл/мышь,исходя из среднего общего веса тела. Нитрозомочевину вводят из расчета 0,1 мл/ 10 г веса тела. Стабильность соединения. Продукт (Iа) держат во льду и вводят в течение 20 мин после получения препарата. Нитрозомочевину держат во льду и вводят в течение 45 мин после получения препарата. Условия хранения. Все соединения хранят в охлажденном эксикаторе. Меры предосторожности при работе. С соединениями работают в соответствии с методиками, рекомендуемыми Комиссией по безопасности Southern Research Institute. Все специалисты, проводящие эксперимент, при введении соединений полностью одеты, работают в перчатках и защитных масках и защитных очках. Любое интракраниально привитое животное, которое, как кажется, умирает, безболезненно умерщвляют из гуманистических соображений. Так как исследование эффективности попадает в категорию базового исследования,окончание эксперимента базируется на результатах, которые, как определено, являются оптимальными. Виды. Самок атимичных мышей NCr-nu возрастом 6-8 недель используют для опытов с интракраниально привитой U251. Самцов атимичных мышей NCr-nu возрастом 6-8 недель используют для опытов с интракраниально привитой SF-295. Обоснование. Для распространения человеческих опухолевых ксенотрансплантантов, которые являются целевыми тканями для разрабатываемых соединений, необходимы мыши с иммунодефицитом. Источник.FCRDC (Animal Production Area), Frederick,MD - для изучения интракраниально привитойSF-295; Taconic Animal Farms, Germantown, NY для исследований интракраниально привитой 12 Возраст и вес. Средний вес определяют вначале каждого испытания. Средний вес мышей, привитых интракраниально глиобластомой U251, составляет от 21 до 22 г. Средний вес мышей, привитых интракраниально глиобластомой SF-295, составляет от 24 до 26 г. Идентификация животных. Стандартная маркировка на ушах. Карантин. Перед началом испытаний всех животных содержат в течение 7-дневного периода для наблюдения. Содержание и уход. Животных содержат в клетках изолятора,покрытых фильтром, по 5 животных на клетку. Клетки и подстилку меняют 2 раза в неделю. Пища и вода. Мышам дают Teklad Sterlizable 8656 MouseDiet (Harlan Teklad) по усмотрению проводящего эксперимент. Также дают фильтрованную водопроводную воду по усмотрению. Окружающие условия. Поддерживаются в соответствии со стандартными рабочими методиками SRI, одобренными Комиссией IACUC. В это исследование включено два опыта(RP-36 и RP-38). Как упоминалось ранее, этот эксперимент разработан для оценки активности продукта (Iа) в отношении интракраниально привитых глиобластом U251 и SF-295 у атимичных мышейNCr-nu. Дозы продукта (Iа) составляют 30, 20 и 13,4 мг/кг/доза. Для двух опытов с интракраниальной прививкой готовят клетки при концентрации 3,33 х 107 клеток/мл среды и вводят в объеме 0,03 мл на мышь. Клетки вводят в головной мозг справа от средней линии с помощью иглы из нержавеющей стали 25 размера, 3/8 дюйма. Для опыта с U251 (RP-36) используют культивируемые клетки. Схема лечения - q6d х 3(каждый шестой день, 3 раза), внутривенно, начиная с четвертого дня после прививки. В опыте с SF-295 (RP-36) используют опухолевый brei,приготовленный из твердой опухоли. Схема лечения - q4d x 3, внутривенно, начиная со второго дня после прививки. Для сравнения в каждом опыте используют нитрозомочевину из-за ее известной активности в отношении опухолей центральной нервной системы. Дозировка составляет 27, 18 и 12 мг/кг/доза, а схема лечения аналогична схеме лечения с помощью продукта(Iа) в каждом опыте. В первом опыте (RP-36) каждое соединение было эффективно при лечении интракраниально привитой глиобластомы U251. Лечение с помощью продукта (Iа) приводит к 5 из 10, 4 из 10 и 3 из 10 оставшихся в живых на сто двадцать второй день и к росту продолжительности жизни (РПЖ) 176, 202 и 144% соответственно для групп с дозами 30, 20 (MTD, МПД максимально переносимая доза) и 13,4 мг/кг/доза. Лечение с помощью нитрозомочевины приводит к РПЖ 205 и 51% в группах с дозами 18 и 12 мг/кг/доза соответственно. Отмечено 10 из 10 и 7 из 10 оставшихся в живых на сто двадцать второй день в группах с дозами 27(МПД) и 18 мг/кг/доза. Во втором опыте (RP-38) каждое соединение было эффективно при лечении интракраниально привитой глиобластомы SF-295. Лечение с помощью продукта (Iа) при дозах 30, 20 и 13,4(МПД) мг/кг/доза приводит к РПЖ 9, 95 и 81% соответственно. Наблюдается некоторая токсичность при уровнях доз 30 и 20 мг/кг/доза,которая проявляется в соответствующей средней потере веса в 7 г и 6 г в период лечения. Было 1 выжившее на шестьдесят восьмой день животное из 10 животных в группе с дозой 13,4 мг/кг/доза. Нитрозомочевина была токсична при самом высоком уровне доз 27 мг/кг/доза, что проявляется в средней потере веса 7 г в период проведения лечения. Лечение нитрозомочевиной в дозах 27, 18 и 12 мг/кг/доза приводит к РПЖ 50, 131 и 106% соответственно. Было 2 оставшихся в живых на шестьдесят восьмой день животных из 10 животных при уровне дозы 18 мг/кг/доза. Таким образом, изучена активность продукта (Iа) против интракраниально привитых глиооластом U251 и SF-295. Это соединение достаточно активно против этих двух линий опухоли на обоих привитых сайтах. Реакция интракраниально привитой глиобластомы U251 на лечение с помощью продукта (Iа) Глиобластома U251; источник опухоли: культура клеток; привита - 17.04.98; дата оценки: 17.08.98; атимичные мыши NCr-nu - самки Taconic Animal Farms. Контроль, 2% EtOH/физиологический раствор; объем инъекции=0,1 куб.см/10 г веса тела. Продукт I(а), серия BFC611, полученная из партии 1 в 5% EtOH/5% Tween 80/90% D5W(растворимый); объем инъекции=0,4 куб.см. Нитрозомочевина, полученная из партии 2 в 2% EtOH /физиологический раствор (растворима); объем инъекции=0,1 куб.см/10 г веса тела. Примечание: 1) Выживших на сто двадцать второй день животных при расчетах не используют. Срединный день смерти рассчитывают с использованием всех смертей. 2) У - умерщвленные умирающие животные (используются при расчетах). 14 Реакция интракраниально привитой глиобластомы SF-295 на лечение с помощью продукта (Iа)Development Center. Контроль, 2% EtOH /физиологический раствор; объем инъекции=0,1 куб.см/10 г веса тела. Продукт I(а), серия BFC611, полученная из партии SRI1 в 5% EtOH/5% Tween 80/90%LAH84, полученная из партии SRI2-4 в 2%EtOH/физиологический раствор (растворима); объем инъекции=0,1 куб.см/10 г веса тела. Примечание: 1) Выживших на шестьдесят восьмой день животных при расчетах не используют. Срединный день рассчитывают с использованием всех смертей. 2) У - умерщвленные умирающие животные (используются при расчетах). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение 4-ацетокси-2-бензоилокси 5,20-эпокси-1-гидрокси-7,10-диметокси-9 оксо-11-таксен-13-ил-(2R,3S)-3-трет-бутоксикарбониламино-2-гидрокси-3-фенилпропионата для получения лекарственного средства для лечения аномальной пролиферации клеток головного мозга путем внутривенного введения. 2. Применение соединения по п.1, где аномальная пролиферация клеток представляет собой рак головного мозга. 3. Применение соединения по п.2, где это применение осуществляется одновременно по меньшей мере с одним другим терапевтическим лечением. 4. Применение соединения по п.3, где другое терапевтическое лечение включает противоопухолевые лекарства, моноклональные антитела, иммунотерапию, радиотерапию или модификаторы биологической реакции. 5. Применение соединения по п.4, где модификаторы реакции включают лимфокины и цитокины. 6. Применение соединения по п.5, где модификаторы реакции включают интерлейкины,-, - или -интерфероны и факторы опухолевого некроза (TNF).