Композиция с улучшенным терапевтическим спектром действия, содержащая ингибиторы синтеза нуклеотидов

1 Сильноосновные анионообменные смолы используются в терапии в качестве гиполипидемических агентов для лечения гетерозиготной семейной гиперхолестеринемии и других, первичных гиперлипопротеинемических заболеваний с принципиальной пролиферацией LDL фракции, а также желчеобразующих диарей. Примерами подходящих активных веществ, используемых в качестве гиполипидемических агентов, могут служить полимеры N-(2-аминоэтил)-N'-[2-[(2-аминоэтил)амино]этил]-1,2-этандиамина с (хлорметил)оксираном, которые называются колестипол (Colestid) или колестирамин (CAS- 11 041-12-6), представляющий собой сополимер стирола и дивинилбензола. Производные изоксазола или кротонамида описаны в заявках на патент ЕР 484 223; ЕР 529 500; патенте США 4 061 767; ЕР 538 783 или ЕР 551 230. Следующие соединения, которые ингибируют синтез пурина или пиримидина, называемые ингибиторами синтеза нуклеотидов (Burkhardt и[1,1'-бифенил]-4-ил)-3-метил-4-хинолинкарбоновая кислота), микофенолятмофетил (2-морфолиноэтил (Е)-6-(1,3-дигидро-4-гидрокси-6-метокси 7-метил-3-оксоизобензофуран-5-ил)-4-метил-4 гексеноат), метотрексат (САS59-05-02) или мизорибин (CAS50924-49-7), абсорбируются в кишечнике пациентов после перорального введения, и, после кратковременного повышения уровня содержания в крови (пик поглощения), наблюдаются постоянно высокие уровни их содержания в крови. Упомянутые выше ингибиторы синтеза нуклеотидов вновь выделяются в кишечник через печень или желчь. Отмеченные выделенные соединения могут снова частично абсорбироваться из кишечника и секретироваться в кровь. Таким образом, указанные выше соединения подвергаются энтерогепатической циркуляции. При использовании ингибиторов синтеза нуклеотидов в целях воздействия на иммунную систему неожиданно было обнаружено, что для желаемого действия на иммунную систему требуется только кратковременное активное воздействие этих веществ. Если уровни указанных веществ в крови,обеспечивающие активное воздействие, поддерживаются в течение относительно длительного времени, то, хотя и наблюдается усиление побочных эффектов, желаемое воздействие на иммунную систему не усиливается. Путем ограничения активных воздействий коротким периодом времени переносимость лечения может быть улучшена при сохранении желательных фармакодинамических воздействий на иммунную систему (=улучшенный спектр терапевтической активности). В случае ингибиторов синтеза нуклеотидов, которые подвергаются энтерогепатической 2 циркуляции, длительность действия может быть снижена введением веществ, прерывающих энтерогепатическую циркуляцию. В результате прерывания энтерогепатической циркуляции желаемое воздействие на иммунную систему сохраняется, в то время как побочные эффекты резко снижаются. Упомянутые выше ингибиторы синтеза нуклеотидов также могут приобретать улучшенный спектр терапевтического действия, если соединения, являющиеся антагонистами действия ингибиторов синтеза нуклеотидов, вводят со смещением во времени, т.е. позже, чем ингибиторы синтеза нуклеотидов. Используемый в тексте термин спектр терапевтического действия обозначает меру толерантности фармацевтического средства и, по существу, представляет собой разность между значением низшей дозы, все еще обеспечивающей желаемые лечебные эффекты, и дозой, приводящей к проявлению побочных эффектов. Критерием достижения улучшения может служить, например, количество эритроцитов, содержание гемоглобина, гематокритное число,количество трансминазы оксалоацетата глютамата, трансаминазы пуривата глютамата, щелочной фосфатазы (из костного мозга) или амилазы, а также вес пациента в сравнении с весом контрольного пациента. Таким образом, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей 1) по крайней мере, одно соединение, которое, по существу, предотвращает энтерогепатическую циркуляцию ингибиторов синтеза нуклеотидов или является антагонистом действия ингибиторов синтеза нуклеотидов со смещением во времени, и 2) по крайней мере, один ингибитор синтеза нуклеотидов, выбранный из группы, включающей брекуинар, микофенолятмофетил (2 морфолиноэтил (Е)-6-(1,3-дигидро-4-гидрокси 6-метокси-7-метил-3-оксоизобензофуран-5-ил)4-метил-4-гексеноата), метотрексат, мизорибин и соединения формул I и II и/или необязательно стереоизомерную форму соединения формулы I или II, и/или физиологически переносимую соль соединения формулы (II), гдеb) атом азота. Могут также применяться смесь ингибиторов синтеза нуклеотидов и соединений формул I и II или соединений формулы II, а также смесь соединений, которые, по существу, предотвращают энтерогепатическую циркуляцию соединения формулы I или II. Термин соединение, которое, по существу, предотвращает энтерогепатическую циркуляцию соединения формулы I или II относится,например, к сильноосновной анионно-обменной смоле, такой как колестипол и колестирамин,или активному углероду. Термин соединение, которое является антагонистом действия ингибиторов синтеза нуклеотидов со смещением во времени относится к таким соединениям, как уридин, пурин, пуриновые нуклеотиды или пиримидиновые нуклеотиды. Предпочтительным является применение соединения формулы I и/или II и/или, необязательно, стереоизомерной формы соединения формулы I или II и/или соли соединения формулы II, в которыхR3 представляет собой атом водорода или метил, и Х представляет собой а-СН группу,вместе по крайней мере с одним соединением, выбранным из группы, включающей колестипол, колестирамин и активный углерод. Особенно предпочтительным является применение N-(4-трифторметилфенил)-5-метил 005136 4 изоксазол-4-карбоксамида, N-(4-трифторметилфенил)-2-циано-3-гидроксикротонамида, (4-цианофенил)амида 2-циано-3-циклопропил-3-гидроксиакриловой кислоты или N-(4-трифторметилфенил)2-циано-3-гидроксигепт-2-ен-6-инкарбоксамида в комбинации с колестирамином. Соединение формулы I или II получают известными способами, описанными, например,в ЕР 484 223; ЕР 529 500; патенте США 4 061 767; ЕР 538 783 или ЕР 551 230. Исходные вещества для соответствующих химических реакций являются известными соединениями или могут быть легко получены в соответствии со способами, известными из литературы. Термины алкил, алкенил и алкинил относятся к радикалам, углеродная цепь которых может иметь нормальное или разветвленное строение. Алкенильный или алкинильный радикалы могут также содержать несколько двойных связей или несколько тройных связей. Циклические алкильные радикалы представляют собой,например, 3-5-членные моноциклические системы, такие как циклопропил, циклобутил или циклопентил. Соли соединения формулы II представляют собой, например, соли натрия или лизиния, которые могут быть получены в соответствии с eвропейской патентной заявкойЕР 0769296. Композиция согласно настоящему изобретению может применяться, например, для лечения иммунологических заболеваний,воспалительных и цитотоксических процессов, связанных с генотерапевтическими воздействиями,таких карциономатозных заболеваний, как рак легких, лейкемия, рак яичников, саркома,саркома Капоши, менингиома, рак кишечника,рак лимфатических узлов, опухоли мозга, рак молочной железы, рак поджелудочной железы,рак предстательной железы или рак кожи,таких аутоиммунных заболеваний, как системная красная волчанка или рассеянный склероз,ревматических заболеваний,осложнений после трансплантаций или реакций трансплантат против хозяина или реакций типа хозяин против трансплантата,заболеваний, вызываемых сильнопролифирирующими клетками,псориаза или нетипичного дерматита, аллергии, астмы, крапивницы, ринита или увеита,диабетов типа II,муковисцидозов, колитов, фиброза или сепсиса печени,таких хронических воспалительных заболеваний, как артериосклероз, болезнь Крона,язвенные колиты. Настоящее изобретение также относится к способу получения композиции, который включает объединение в подходящую форму для введения ингибиторов синтеза нуклеотидов и соединения, по существу, предотвращающего 5 энтерогепатическую циркуляцию ингибиторов синтеза нуклеотидов или являющегося антагонистом действия ингибиторов синтеза нуклеотидов, со сдвигом во времени вместе с фармацевтически подходящим и физиологически приемлемым носителем и, если это необходимо,другими подходящими активными соединениями, добавками и эксипиентами. Композиция согласно настоящему изобретению может также включать композиции или комбинированные упаковки, составляющие части которых расположены друг за другом и поэтому могут использоваться одновременно, раздельно или последовательно в одном и том же человеческом или животном организме. Предпочтительно осуществлять последовательное введение соединения формулы I и/или II до введения соединения, по существу, предотвращающего энтерогепатическую циркуляцию соединения формулы I или II. Согласно такому вариантуN-(4-трифторметилфенил)-2-циано-3-гидроксикротонамид (далее в тексте обозначаемый, как соединение 1) вводят первым. Колестирамин, по существу, препятствующий энтерогепатической циркуляции соединения 1, вводят со смещением во времени, например через 2 или 4 ч после введения соединения 1. Благодаря такому смещенному во времени введению соединения 1 и колестирамина соединение 1 первоначально и беспрепятственно абсорбируется из пищеварительного тракта. После введения колестирамина, который не абсорбируется систематически,соединение 1, выделяемое через кишечник, связывается с колестирамином и поэтому не может быть вновь повторно абсорбировано; в результате, происходит прерывание энтерогепатической циркуляции. Благодаря такой мере длительность действия и уровень соединения 1 в крови резко уменьшаются. Несмотря на такое резкое снижение содержания в крови, активность на патологической животной модели, например модели адъювантного артрита, не снижается при введении колестирамина при низкой, но все еще активной дозе соединения 1,составляющей примерно 2,5 мг/кг/день. При применении на той же животной модели высоких доз соединения 1, порядка 25 мг/кг/день,которые уже приводят к проявлению разнообразных побочных эффектов, при введении колестирамина наблюдается очевидное уменьшение побочных эффектов при сохранении желаемых воздействий на иммунную систему. Композиция согласно настоящему изобретению может быть в виде единичной дозы в такой фармацевтической форме, как капсулы(включая микрокапсулы, которые, как правило,не содержат фармацевтического наполнителя),таблетки, включая таблетки с покрытием и пилюли, или свечи, причем при использовании капсул возможно, чтобы материал капсул выполнял функцию наполнителя, а активные ингредиенты присутствовали в препарате в виде 6 порошка, геля, раствора, эмульсии или дисперсии. Однако особенно важно и просто готовить препаративные формы для орального или перорального введения, которые содержат рассчитанные количества активных соединений совместно с любыми желаемыми фармацевтическими наполнителями при использовании двух указанных выше активных компонентов 1) (например,колестирамина) и 2) (соединения формулы I и/или II). Могут также использоваться соответствующие препаративные формы (свечи) для ректального лечения. Аналогичным образом возможно трансдермальное введение в виде мазей или кремов, парентеральные (внутрибрюшинные, подкожные, внутримышечные) инъекции или пероральное введение растворов, содержащих комбинации настоящего изобретения. Кроме активного соединения, мази, пасты,кремы и порошки могут содержать традиционные наполнители, например животные и растительные жиры, воска, парафины, крахмал, трагант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, кремниевую кислоту, гидроксид алюминия, тальк, оксид цинка, лактозу,бентониты, силикат кальция и полиамидный порошок, или смеси указанных соединений. Таблетки, пилюли или гранулы могут производиться с помощью таких процессов, как прессование, декапирование, или процессов в псевдоожиженном слое, или барабанным покрытием, и они содержат наполнители и другие, традиционные эксипиенты, такие как желатин, агароз,крахмал (например, картофельный, кукурузный или пшеничный), целлюлозы, например этилцеллюлоза, оксид кремния, карбонат магния,различные сахара, такие как лактоза и/или фосфаты кальция. Покрывающий раствор обычно включает сахарный и/или крахмальный сироп и часто дополнительно содержит желатин, сложные эфиры синтетической целлюлозы, аравийскую камедь, поливинилпирролидон, пигменты,поверхностно-активные вещества, пластификаторы и аналогичные добавки, известные из уровня техники. Для производства различных форм композиции могут использоваться любые традиционные регуляторы текучести, смазывающие агенты глиданты, такие как стеарат магния, а также агенты выделения. Предпочтительно, такие композиции имеют форму таблеток с сердцевиной и покрытием или многослойных таблеток, причем активный компонент 2 может присутствовать в покрытии, ядре или в одном из слоев, тогда как активный компонент 1 может находиться в ядре, в покрытии или в другом слое. Активные компоненты могут также присутствовать в форме с замедленным выделением, или быть абсорбированы на материале с пролонгированным выделением, или быть включены в материал с пролонгированным действием (например, материал на основе целлюлозы или полистирольных смол, например гидроксиэтилцеллюлозы). Замедленное выделение ак 7 тивных соединений может также достигаться с помощью слоя или части с традиционным энтеросолюбильным покрытием. Предпочтительным является замедленное выделение соединения, которое, по существу,предотвращает энтерогепатическую циркуляцию соединения формулы I или II. Применяемая доза зависит от таких факторов, как субъект,которого лечат (т.е. человек или животное), возраст, вес, общее состояние здоровья, степень тяжести симптомов заболевания, вид заболевания, которое лечат, возможные сопутствующие заболевания (если они есть), природа сопутствующего лечения другими фармацевтическими агентами или частота лечения. Дозы, как правило, вводят несколько раз в день, и предпочтительно 1-3 раза в день. Количества используемого индивидуального активного соединения основываются на рекомендуемой дневной дозе соответствующего индивидуального активного соединения, и в комбинированной композиции они, как правило, должны, в общем, составлять от 10 до 300% от рекомендуемой дневной дозировки, предпочтительно 50-150%, особенно 80%. Таким образом, подходящее лечение лекарственными композициями настоящего изобретения состоит, например, во введении 1, 2 или 3 индивидуальных доз композиции, состоящей из N-(4-трифторметилфенил)-5-метилизоксазол-4-карбоксамида или N-(4-трифторметилфенил)-2-циано-3-гидроксикротонамида в количестве от 25 до 250 мг, предпочтительно 5-150 мг, как правило, 10-50 мг, особенно предпочтительно 10-20 мг, и колестирамина в количестве 250-6000 мг, как правило, 1500-3000 мг. Композиции настоящего изобретения могут также применяться совместно с другими подходящими активными соединениями, например антиурикопатиками, анальгетиками,противовоспалительными средствами стероидного и нестероидного происхождения, ингибиторами агрегации тромбоцитов, цитокинами,агонистами цитокинов, антагонистами цитокинов или иммуносупрессорами, такими как циклоспорин A, FK 506 или рапамицин. Пример 1. Модификация адъювант-индуцированного артрита по Ререr (Proc. Soc. exp.Biol. Med. 137, 506 (1971. В качестве экспериментальных животных использовали самцов крыс штамма Льюиса(Moellegard, Denmark) весом 160-210 г. В 1-ый день эксперимента в основание хвоста животных делали подкожную инъекцию полного адъюванта Фрейнда, содержащего суспензию микобактериального бутирикума в тяжелом парафиновом масле (Difco; 6 мг/кг в парафиновом масле; Merck). Готовили суспензию N-(4-трифторметилфенил)-2-циано-3-гидроксикротонамида и колестирамина в карбоксиметилцеллюлозе (1% раствор в воде) и полученную смесь применяли перорально. Указанные соединения вводили ежедневно 1 раз в день с 1-го по 17-ый день 8 эксперимента; и затем на 18-ый день измеряли объем лап и артритный индекс. Тяжесть заболевания определяли измерением объема двух задних лап. Измерения проводили методом вытеснения воды с использованием монитора 2060 Plethys (Rhema-Labortechnic,Hofheim, Germany). На 18-ый день после инъекции дополнительно определяли артритный индекс. Определение артритного индекса 0,5 балла на каждое ухо, если имеются покраснение и узелковые образования 1 бал при набухании соединительной 2Hoc ткани 1 бал при проявлении узелковых 3. Хвост образований По 0,5 бала в расчете на каждую лапу Передние в случае, по крайней мере, одного вос 4. лапы паления суставов 1 бал в случае легкого воспаления(припухлость) Задние 2 бала в случае воспаления средней 5. лапы тяжести 3 бала в случае массивной воспалительной реакции 1. В первый день эксперимента в основание хвоста животных контрольной артритной группы делали подкожную инъекцию полного адъюванта Фрейнда и при этом вводили только растворитель (1% карбоксиметилцеллюлозы в воде). В каждом случае 6 животных контрольной группы получали дозу лекарственного препарата. Необработанных животных использовали в качестве дополнительной контрольной группы здорового контроля. Критерием активности препарата служило снижение увеличения объема лап и уменьшение артритного индекса по сравнению с контрольной группой,не подвергнутой обработке, а также вес животных,в каждом случае выраженный в процентах в расчете на вес животных артритной контрольной группы. В следующей ниже таблице в качестве соединения 1 указывается N-(4-трифторметилфенил)-2-циано-3-гидроксикротонамид. Через 4 ч после введения соединения 1 вводили колестирамин. Полученные результаты представлены в табл. 1. Таблица 1 Активное в-во, мг/кг живого веса Здоровая контрольная группа Артритная контрольная группа Колестирамин Соединение 1 Соединение 1 + колестирамин Соединение 1 Соединение 1 + колестирамин Соединение 1 Соединение 1 + колестирамин Величины, приведенные в таблице со знаком -, обозначают уменьшение; все другие значения обозначают увеличение в сравнении с соответствующим значением в начале эксперимента. У животных, обработанных композицией изобретения, наблюдали увеличение веса, которое, в случае введения соединения 1 в количествах 2,4 и 7,5, были очень близки к соответствующим значениям, полученным в здоровой контрольной группе, и значительно превышали результаты от применения только соединения 1,при полном сохранении его активности. 10 Пример 2. Условия проведения эксперимента были аналогичны описанным в примере 1. В этом эксперименте определяли действие соединения 1 и колестирамина на число эритроцитов (RBC),содержание гемоглобина (HGB), гематокритное число (НСТ), количество трансаминазы оксалацетата глютамата (GOT) и трансаминазы пуривата глютамата (GPT). Колестирамин применяли через 4 ч после введения соединения 1. Полученные результаты представлены в табл. 2. Активное в-во, Объем Артритный GOT,мг/кг живого веса лапы, % индекс, % U/I Здоровая контрольная группа Артритная контрольная группа Колестирамин Соединение 1 Соединение 1 + колестирамин Значения, представленные в таблице со знаком -, обозначают уменьшение; все другие значения обозначают увеличение в сравнении с соответствующим значением в начале эксперимента. У животных, обработанных препаратом настоящего изобретения, наблюдали нормализацию числа эритроцитов (RBC), содержания гемоглобина (HGB), гематокритного числа(НСТ), количества трансаминазы оксалацетата глютамата (GOT) и трансаминазы пуривата глютамата (GPT), причем полученные значения были очень близки соответствующим величи нам в здоровой контрольной группе и значительно лучше значений, полученных при использовании только соединения 1 при полном сохранении его активности. Пример 3. Использовали экспериментальные условия, аналогичные приведенным в примере 1. Определяли действие соединения 1 и колестирамина на количество щелочной фосфатазы(АР) и амилазы. Колестирамин вводили через 4 ч после введения соединения 1. Полученные результаты представлены в табл. 3. Артритный индекс, % Активное в-во,мг/кг живого веса Здоровая контрольная группа Артритная контрольная группа Колестирамин Соединение 1 Соединение 1 + колестирамин Значения, приведенные в таблице со знаком -, обозначают уменьшение; все другие значения обозначают увеличение в сравнении с соответствующим значением в начале эксперимента. У животных, обработанных композицией согласно изобретению, наблюдали нормализацию количества щелочной фосфатазы, которое было очень близким соответствующему значе нию для здоровой контрольной группы и значительно лучше значений, полученных при использовании только соединения 1, причем активность соединения 1 сохранялась полностью. Пример 4. Композиция согласно изобретению представляла собой мелкие твердые желатиновые капсулы, содержащие 400 мг колестирамина и более крупные твердые желатиновые капсулы, 11 содержащие 20 мг N-(трифторметилфенил)-5 метилизоксазол-4-карбоксамида. Более мелкая твердая желатиновая капсула полностью заключена в более крупную капсулу. Материал, заполняющий пространство между двумя такими капсулами, представлял собой глюкозу. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Композиция, включающая 1) по крайней мере одно соединение, выбранное из группы, включающей колестипол,колестирамин и активный углерод, которое в значительной мере препятствует энтерогепатической циркуляции ингибиторов синтеза нуклеотидов, или соединение, выбранное из группы, влючающей уридин, пурин, нуклеотиды пурина или нуклеотиды пиримидина, которое является антагонистом действия ингибиторов синтеза нуклеотидов со смещением во времени, и 2) по крайней мере один ингибитор синтеза нуклеотидов, выбранный из группы, включающей 2-морфолиноэтил (Е)-6-(1,3-дигидро-4-гидрокси 6-метокси-7-метил-3-оксоизобензофуран-5-ил)4-метил-4-гексеноат, мизорибин и соединения формул I и II и/или необязательно стереоизомерную форму соединения формулы I или II, и/или физиологически переносимую соль соединения формулы II, где R1 представляет собойb) атом азота. 2. Композиция по п.1, где используют соединение формулы I и/или II и/или необязательную стереоизомерную форму соединения формулы I или II и/или соль соединения формулыR3 представляет собой атом водорода или метил; и Х представляет собой а-СН группу. 3. Композиция по п.1 или 2, где N-(4-трифторметилфенил)-5-метилизоксазол-4-карбоксамид используют в качестве соединения формулы I или N-(4-трифторметилфенил)-2-циано-3-гидроксикротонамид, (4-цианофенил)амидa 2-циано-3 циклопропил-3-гидроксиакриловой кислоты илиN-(4-трифторметил-фенил)-2-циано-3-гидроксигепт-2-ен-6-инкарбоксамид используют в качестве соединения формулы II. 4. Композиция по одному или более пп.13, которая включает дополнительные активные соединения, выбранные из группы, включающей антиурикопатики, анальгетики, стероидные или нестероидные противовоспалительные агенты, цитокины, агонисты цитокина, ингибиторы агрегации тромбоцитов, антагонисты цитокина или иммунодепрессанты, такие как циклоспорин A, FK 506 или рапамицин. 5. Композиция по одному или более пп.14, состоящая из композиции или комбинированных упаковок, в которых составляющие части расположены одна за другой и поэтому используются одновременно, раздельно или последовательно в одном и том же человеческом или животном организме. 6. Композиция по п.5, где введение соединения формулы I и/или II осуществляют за определенное время до введения соединения, которое, по существу, препятствует энтерогепатической циркуляции соединения формулы I или II. 7. Применение композиции по одному или более пп.1-6 для производства фармацевтического агента для лечения иммунологических заболеваний,воспалительных и цитотоксических процессов, связанных с генотерапевтическими воздействиями,карциноматозных заболеваний, таких как рак легких, лейкемия, рак яичников, саркома,саркома Капоши, менингиома, рак кишечника,рак лимфатических узлов, опухоли мозга, рак молочной железы, рак поджелудочной железы,рак предстательной железы или рак кожи, 13 аутоимммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка или рассеянный склероз,ревматических заболеваний,осложнений после трансплантаций или реакций трансплантат против хозяина или хозяин против трансплантата,нарушений, вызванных сильнопролифирирующими клетками,псориаза или атипичного дерматита,аллергии, астмы, уртикарии, ринита или увеита,диабета типа II,кистозного фиброза, колита, фиброза или сепсиса печени,хронических воспалительных заболеваний,таких как артериосклероз, болезнь Крона и язвенный колит. 8. Способ получения композиции по пп.16, который включает объединение в подходя 14 щую форму для введения по крайней мере одного ингибитора синтеза нуклеотидов, выбранного из группы, включающей 2-морфолиноэтил(Е)-6-(1,3-дигидро-4-гидрокси-6-метокси-7-метил 3-оксоизобензофуран-5-ил)-4-метил-4-гексеноат,мизорибин и соединения формулы I и II, и соединения, выбранного из группы, включающей колестипол, колестирамин и активный углерод,которые, по существу, препятствуют энтерогепатической циркуляции ингибиторов синтеза нуклеотидов, или соединения, выбранного из группы, включающей уридин, пурин, нуклеотиды пурина или нуклеотиды пиримидина, которые являются антагонистами действия ингибиторов синтеза нуклеотидов со смещением во времени, вместе с фармацевтически пригодным и физиологически приемлемым наполнителем и,если необходимо, дополнительными подходящими активными соединениями, добавками или эксипиентами.