Фармацевтические комбинации 5-фторурацила и производных 1,4-дигидропиридина и их применение для лечения рака

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМБИНАЦИИ 5-ФТОРУРАЦИЛА И ПРОИЗВОДНЫХ 1,4 ДИГИДРОПИРИДИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА Новые соединения типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты, имеющие общую формулу (I) где R представляет собой низшую алкильную группу, которая является метилом или этилом, aR1 и R2 представляют собой натрийкарбоксилатметиловый эфир, причем указанные соединения обладают синергичным цитотоксическим эффектом при сочетании с 5-фторурацилом.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ГРИНДЕКС, ДЖОИНТ СТОК КАМПАНИ (LV) Область техники Настоящее изобретение относится к новым растворимым в воде соединениям типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты, имеющим общую формулу I где R представляет собой низшую алкильную группу, являющуюся метилом или этилом;R1 и R2 представляют собой натрийкарбоксилатметиловый эфир. Новые растворимые в воде соединения типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5 дикарбоновой кислоты с общей формулой I обладают синергичным цитотоксическим действием при сочетании с 5-фторурацилом. Предпосылки создания изобретения Раковые заболевания являются основной причиной смерти животных и человека. Множество попыток предпринималось и предпринимается в настоящее время для получения активных и безопасных противоопухолевых агентов для введения пациентам, страдающим от рака. Задачей настоящего изобретения является создание дополнительных соединений, которые могут быть полезными для лечения рака. 5-Фторурацил (5-FU) представляет собой фторированный пиримидиновый аналог, который широко используется в качестве антиметаболического противоопухолевого агента для лечения и паллиативной терапии различных форм рака, включая колоректальный рак, рак поджелудочной железы, рак груди и рак желудка. Его часто назначают пациентам, чьи заболевания считаются неизлечимыми. Несмотря на подтвержденную клиническую эффективность, существует целый ряд серьезных недостатков использования 5-фторурацила, включая его дозолимитирующее применение, которое требует отбора пациентов,способных переносить лечение 5-фторурацилом. В настоящее время в данной области существует серьезная необходимость разработки новых соединений, композиций и способов для лечения рака с расширенными показаниями к применению за счет потенцирования действия 5-фторурацила. Динатриевая соль карбоксилатметилового эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-карбоновой кислоты (карбатон) с антиметастатической активностью, описанная в заявке WO 80/00345 (INST. ORGANICHESKOGO CINTEZA) 06.03.1980, представляет собой соединение, наиболее похожее на соединения типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты с общей формулой I. Аналогичный карбатон описан в работе Zidermane A. et al. "Потенцирующий эффект динатриевой соли 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-бис-карбонилгидроксиуксусной кислоты на активность различных противоопухолевых агентов". Eksp. Onkol. 1987, vol. 9, no. 2, p. 50-2, где указанное соединение использовалось для уменьшения токсичности циклофосфана у мышей и потенцирования цитостатической активности циклофосфана, 5-фторурацила и арабизозил цитозина, которые применялись для лечения лейкемии Р 388, саркомы мышей 37 и карциносаркомы Уолкера. Было показано, что карбатон не обладает противоопухолевой активностью. В работе Uldrikis J., et al. "Производные 1,4-дигидропиридина для потенцирования активности противоопухолевых препаратов". LATVIJAS PSR ZINATNU AKADEMIJAS VESTIS, KIMIJAS SERIJA. 1983, vol. 1, р. 122-123 раскрывается, что динатриевая соль карбоксилатметилового эфира 2,6-диметил 1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты (карбатон) увеличивает противоопухолевую активность 5-фторурацила. Описание изобретения Целью настоящего изобретения является получение соединений, которые эффективно и синергично потенцируют цитотоксический эффект 5-FU. Указанная цель достигается путем создания новых растворимых в воде соединений типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты, имеющих общую формулу I где R представляет собой низшую алкильную группу, являющуюся метилом или этилом;R1 и R2 представляют собой натрийкарбоксилатметиловый эфир. Соединения формулы I представляют собой Соединения, имеющие общую формулу I, синергично потенцируют цитотоксический эффект 5-FU; по этой причине соединения, имеющие общую формулу I, могут использоваться в медицинских целях. Соединения, имеющие общую формулу I, могут использоваться в форме инъекционных растворов или таблеток. Целью настоящего изобретения также является создание способа получения указанных соединений,имеющих общую формулу I. Типичный способ получения соединений типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин 3,5-дикарбоновой кислоты включает конденсацию двух молекул производных сложного эфира ацетоуксусной кислоты, формальдегида и аммония. Затем происходит обработка гидроксидом натрия в этаноле. Настоящее изобретение более детально будет описано со ссылками на представленные ниже примеры, не ограничивающие объема изобретения. Предпочтительный вариант осуществления изобретения Пример 1. Получение динатриевой соли 2,4,6-триметил-1,4-дигидропиридин-3,5-бискарбонилоксиуксусной кислоты 2-Метоксикарбониловый метиловый эфир ацетоацетата (2 моль) конденсируют с ацетоальдегидом(1 моль) и аммонием (1 моль). Затем 2,4,6-триметил-3,5-бис(метоксикарбонилметоксикарбонил)-1,4 дигидропиридин обрабатывают гидроксидом натрия в этаноле. Динатриевую соль 2,4,6-триметил-1,4-дигидропиридин-3.5-бис-карбонилоксиуксусной кислоты высушивают при температуре окружающей среды. Выход 76%. Соединение имеет точку плавления 278280 С. 1 Н-ЯМР спектр (400 МГц, CDCl3) : 0,90 (3 Н, d, J=6,5 Гц, 4-СН 3); 2,19 (6 Н, s, 2.6-СН 3); 3,76 (1 Н, кв,J=6,5 Гц, 4-Н); 4,15 и 4,23 (4 Н, АВ квартет, J=16 Гц, 3,5-СООСН 2 СО); 8,56 (1 Н, pl. s, NH). Пример 2. Получение динатриевой соли 4-этил-2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-бискарбонилоксиуксусной кислоты 2-Метоксикарбонил метиловый эфир ацетоацетата (2 моль) конденсируют с пропиональдегидом (1 моль) и аммонием (1 моль). Затем 4-этил-2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-бис-карбонилуксусную кислоту обрабатывают гидроксидом натрия в этаноле. Динатриевую соль 4-этил-2,6-диметил-1,4-дигидропиридина-3,5-бис-карбонилоксиуксусной кислоты высушивают при температуре окружающей среды. Полученное соединение имеет точку плавления 65-67 С. 1 Н-ЯМР спектр (400 МГц, DMSO, TMS) : 0,90 (3 Н, d, tr, CH3); 1,23-1,24 (2 Н, m, СН 2 СН 3); 2,17 (6 Н,s, 2,6-СН 3); 3,80 (1 Н, tr, 4-СН); 4,10 (4 Н, kv, -CH2-); 8,30 (1 Н, s, N-H). Пример 3. Оценивали противоопухолевую активность новых соединений типа сложного эфира 2,6 диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты, имеющих общую формулу I, путем изучения их цитотоксического действия в отношении клеток линии MDA-MB-435s рака груди человека in vitro как отдельно, так и в сочетании с 5-фторурацилом. Клеточная культура и измерение жизнеспособности клеток Клетки линии MDA-MB-435s высевают на 96-луночные в планшеты в модифицированную Дульбекко среду Игла, содержащую 10% фетальной бычьей сыворотки и антибиотики и культивируют в течение 72 ч под воздействием различных концентраций 5-фторурацила и соединений типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-карбоновой кислоты. Жизнеспособность клеток оценивают при помощи окрашивания модифицированным кристаллическим фиолетовым (CVS), как описано в работеSegarman et al., 1985. Вкратце, клетки фиксируют 1%-ным глутаральдегидом в течение 15 мин, отмывают водой и окрашивают 0,05%-ным кристаллическим фиолетовым в течение 15 мин при комнатной температуре. После удаления остатков кристаллического фиолетового путем отмывания водой из-под крана,кристаллический фиолетовый краситель элюируют этанол натрийцитратным (1:1) буфером, а абсорбцию при 540 нм измеряют при помощи планшет-ридера. Величины IC50, соответствующие концентрациям соединений, вызывающим 50%-ное уменьшение жизнеспособности клеток, рассчитанные для каждого соединения и их комбинаций, представлены в табл. 1. Результаты IC50 комбинированной терапии соединениями типа сложного эфира 2,6-диметил-1,4 дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты, имеющими общую формулу I, и 5-FU также представлены в табл. 1.IC50 для 5-фторурацила, динатриевой соли карбоксилатметилового эфира 2,6-диметил-1,4 дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты (карбатон) и соединений типа сложного эфира 2,6-диметил 1,4-дигидропиридин-3,5-карбоновой кислоты с общей формулой I, а также их комбинаций (в молярном соотношении 10:1) в отношении жизнеспособности клеток карциномы груди человека MDA-MB-435s in Сравнительные экспериментальные результаты были получены при использовании динатриевой соли карбоксилатметилового эфира 2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты (карбатона) отдельно, так и в комбинации с 5-FU. Карбатон синергично потенцирует цитотоксический эффект 5-FU в отношении клеток карциномы груди человека MDA-MB-435s, но не настолько эффективно, как динатриевая соль 2,4,6-триметил-1,4-дигидропиридин-3,5-бис-карбонилоксиуксусной кислоты и динатриевая соль 4-этил-2,6-диметил-1,4-дигидропиридин-3,5-бис-карбонилуксусной кислоты, как показано в табл. 1. Возможная фармацевтическая композиция для перорального применения, являющаяся примером воплощения настоящего изобретения и не ограничивающая его сущности, может иметь следующий состав и выпускаться в форме таблеток. Таблица 2 Возможная фармацевтическая композиция для перорального применения, являющаяся примером воплощения настоящего изобретения и не ограничивающая его сущности, может иметь следующий состав и выпускаться в форме капсул. Возможная фармацевтическая композиция для перорального применения, являющаяся примером воплощения настоящего изобретения и не ограничивающая его сущности, может иметь следующий состав и выпускаться в форме раствора и/или сиропа. Таблица 4 где R представляет собой метил или этил;R1 и R2 представляют собой натрийкарбоксилатметиловый эфир или его гидрат. 2. Соединение по п.1, которое представляет собой динатриевую соль 2,4,6-триметил-1,4 дигидропиридин-3,5-бис-карбонилоксиуксусной кислоты и имеет формулу IV 3. Соединение по п.1, которое представляет собой динатриевую соль 4-этил-2,6-диметил-1,4 дигидропиридин-3,5-бис-карбонилоксиуксусной кислоты и имеет формулу VI 4. Применение соединения по любому из пп.1-3 для использования в качестве лекарственного средства при лечении рака. 5. Применение соединения по любому из пп.1-3 для производства лекарственного средства для лечения рака. 6. Комбинированный медицинский продукт, включающий соединение по любому из пп.1-3 и 5 фторурацил. 7. Комбинированный медицинский продукт по п.6, в котором предпочтительное соотношение активных ингредиентов соединения по любому из пп.1-3 и 5-фторурацила составляет от 1:100 до 100:1,более предпочтительно от 1:20 до 20:1, еще более предпочтительно 10:1. 8. Применение комбинированного медицинского продукта по п.6 в качестве лекарственного средства при лечении рака. 9. Применение комбинированного медицинского продукта по п.6, содержащего соединение по любому из пп.1-3 и 5-фторурацил, для производства лекарственного препарата для лечения рака. 10.Фармацевтическая композиция, включающая комбинированный медицинский продукт по п.6 вместе с фармацевтически приемлемым растворителем или носителем для лечения рака.