Стабилизированная жидкая композиция паратиреоидного гормона, флакон с композицией и способы их получения

1 Область техники Это изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим паратиреоидный гормон. В частности, изобретение относится к терипаратиду, РТН (1-34), к стабилизированным растворам композиций. Предпосылки к созданию изобретения Паратиреоидный гормон (РТН) является секретируемым продуктом паращитовидной железы млекопитающих, состоящим из 84 аминокислот, который контролирует уровни кальция в сыворотке путем воздействия на различные ткани, включая костную. С помощью проведенных на человеке исследований определенных форм РТН было обнаружено анаболическое действие на кость, что вызвало значительный интерес к возможности применения гормона для лечения остеопороза и нарушений, связанных с костной тканью. При использовании в качестве примера Nконцевого фрагмента гормона крупного рогатого скота и человека, состоящего из 34 аминокислот, который на основании опубликованных данных рассматривают как фрагмент, биологически эквивалентный гормону с полной длиной цепи, было показано, что паратиреоидный гормон усиливает рост кости у человека, особенно при введении пульсирующим способом посредством подкожного введения. Человеческий РТН(1-38), представляющий собой незначительно отличающуюся форму РТН, проявляет подобные свойства. РТН препараты получают с использованием свежего или лиофилизированного гормона и включают различные формы носителя, наполнителя и связующего вещества. Большую часть приготовляют в основанных на воде растворителях, как например в солевом растворе или в воде, обычно подкисленной уксусной кислотой,чтобы солюбилизировать гормон. Большинство изученных композиций также включают в себя альбумин в качестве стабилизатора (см., например, Reeve at al., Br.Med.J., 1980, 280-6228;Hypertens, 1986, 2(4):360). Другие описанные композиции включают в себя наполнитель, как например маннитол, который присутствует либо с лиофилизированным гормоном, либо в восстанавливающем растворителе. Представленные в этих исследованиях композиции для человека включают в себя препарат человеческого РТН(1-34) (SEQ ID NO: 2), а также содержат маннитол, термоинактивированный сывороточный альбумин человека и капроновую кислоту (протеазный ингибитор) в качестве усилителя всасывания (см. Reeve et al., 1976, Calcif. Tissue 2 го РТН (1-38), приготовленный в солевом растворителе (см. Hodsman et al., 1991, 14(1), 6783); и препарат РТН (1-34) крупного рогатого скота в водном растворителе, рН которого регулируют уксусной кислотой, и содержащего альбумин. Также имеется международный стандартный препарат, который для человеческого РТН (1-84) (SEQ ID NO: 1) состоит из 100 нг гормона, который помещают в ампулы с 250 мг человеческого сывороточного альбумина и 1,25 мг лактозы (1981), и для РТН (1-84) крупного рогатого скота препарат состоит из 10 мкг лиофилизированного гормона в растворе 0,01 М уксусной кислоты и 0,1% маннитола по весу к объему (см. Martindale, The Extra Pharmacoepia,The Pharmaceutical Press. London, 29th Edition,1989 at p. 1338). Недавно в Европейском патенте ЕР 619119 описали результаты эксперимента по увеличению стабильности лиофилизированного препарата h-PTH (1-34) (SEQ ID NO: 2) в комбинации с сахаром и хлоридом натрия. Кроме того, в патенте США 5496801 описали лиофилизированную композицию с природным гормоном,РТН (1-84), содержащую маннитол в качестве наполнителя и цитратную систему в качестве нелетучего буферного агента. Использование паратиреоидного гормона в коммерческих целях требует усовершенствования композиции, которая окажется приемлемой с точки зрения сохранения стабильности и легкости приготовления. Поскольку гормон представляет собой белок и поэтому более лабилен,чем традиционные лекарственные средства небольшого молекулярного веса, то получение композиции паратиреоидного гормона связано со сложными проблемами, которые еще не решены фармацевтической промышленностью. Кроме того, подобно другим белкам, которые успешно используют в композициях, РТН особенно чувствителен к окислению, дезамидированию и гидролизу и для защиты его биологической активности необходимо, чтобы его Сконцевые и N-концевые последовательности оставались интактными. Целью настоящего изобретения является получение фармацевтически пригодного препарата РТН, в частности препарата, содержащего в качестве активного ингредиента терипаратид,РТН (1-34) (SEQ ID NO: 2). Краткое изложение сущности изобретения Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в виде стабилизированного раствора, содержащего паратиреоидный гормон (РТН) в терапевтически эффективном количестве. Раствор является стабильным при хранении и в стерилизованном виде может храниться в пузырьках или картриджах, приготовленных для парентерального введения больному человеку. Преимущество этого раствора заключается в том, что его необязательно лиофилизировать. 3 Соответственно, настоящее изобретение относится к раствору паратиреоидного гормона,включающему в себя(a) терапевтически эффективное количество паратиреоидного гормона;(b) эффективное количество стабилизирующего агента;(c) буферный агент в количестве, достаточном для поддержания рН композиции в диапазоне приблизительно 3-7; и(d) воду для баланса. Если желательно, этот раствор можно подвергнуть лиофилизации с образованием лиофилизированного порошка, содержащего не более 2% воды по весу. Другим аспектом настоящего изобретения является раствор паратиреоидного гормона, содержащий(a) терапевтически эффективное количество паратиреоидного гормона;(b) стабилизирующий агент в количестве приблизительно от 1 до 20% по весу;(c) буферный агент в количестве, достаточном для поддержания рН композиции в диапазоне приблизительно 3-7, и выбранный из источника ацетата или тартрата;(d) консервант, приемлемый для парентерального введения, в количестве приблизительно от 0,1 до 2% по весу; и(e) воду для баланса. Подробное описание изобретения Изобретение относится к растворам паратиреоидного гормона, которые проявляют стабильность при хранении, исходя из композиции и активности гормона. В качестве активного ингредиента композиция или раствор могут включать в себя форму паратиреоидного гормона с полной длиной цепи, состоящей из 84 аминокислот, в частности форму гормона человека, h-PTH (1-84) (SEQ IDNO: 1), полученную либо рекомбинантным методом, посредством пептидного синтеза или путем экстрагирования из человеческой жидкости. См., например, патент США 5208041,который включен в данный текст в виде ссылки. Аминокислотная последовательность для h-PTH(1-84) приведена Kimura et al., in Biochem. Biophys. Res. Comm., 114 (2):493 (SEQ ID NO: 1). В качестве активных ингредиентов композиция или раствор могут также включать в себя фрагменты или варианты фрагментов РТН человека или РТН крысы, свиньи или крупного рогатого скота, которые проявляют активность,как и РТН человека, что было показано на модели овариэктомических крыс с остеопорозомKimmel et al., Endocrinology, 1993, 32(4):1577. Желательно, чтобы фрагменты паратиреоидного гормона включали в себя по крайней мере 34 первых N-концевых остатка, как например, РТН (1-34) (SEQ ID NO: 2), РТН (1-37),РТН (1-38) и РТН (1-41). Другие варианты форм РТН включают в себя от 1 до 5 аминокислотных 4 замещений, которые улучшают стабильность РТН и период полувыведения, как например замена метионина у положений 8 и/или 18 на лейцин или другую гидрофобную аминокислоту, которая повышает устойчивость РТН к окислению, и замена аминокислот в положениях 2527 на нечувствительные к действию трипсина аминокислоты, такие как гистидин или другую аминокислоту, которая повышает устойчивость РТН к протеазе. Эти формы РТН объединяют названием паратиреоидный гормон, которое используют в данном тексте. Предпочтительным гормоном является человеческий РТН (134) (SEQ ID NO: 2), известный также как терипаратид. Гормоны можно получить с помощью известных рекомбинантных или синтетических методов, как например описанных в патенте США 4086196, который включен в данный текст в виде ссылки. Стабилизирующий агент, содержащийся в растворе или композиции, представляет собой полиол, который включает в себя сахарид, предпочтительно моносахарид или дисахарид, например глюкозу, трегалозу, рафинозу или сахарозу; производное сахара в виде спирта, как например маннитол, сорбитол или инозитол, и многоатомный спирт, такой как глицерин или пропиленгликоль или их смеси. Предпочтительным полиолом является маннитол или пропиленгликоль. Концентрация полиола может варьироваться в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 20% по весу, предпочтительно от приблизительно 3 до 10% от веса всего раствора. Буферным агентом, применяемым в растворе или композиции настоящего изобретения,может быть любая комбинация кислоты или соли, которая является фармацевтически доступной и способной поддерживать в водном растворе рН в области от 3 до 7, предпочтительно 3-6. Применяемыми буферными системами являются, например, источники ацетата, тартрата или цитрата. Предпочтительными буферными системами являются источники ацетата или тартрата, самой предпочтительной является источник ацетата. Концентрация буфера может быть в диапазоне от приблизительно 2 мМ до приблизительно 500 мМ, предпочтительно от приблизительно 2 мМ до 100 мМ. Стабилизированный раствор или композиция настоящего изобретения также может содержать приемлемый для парентерального введения консервант. Подобные консерванты включают в себя, например, крезолы, бензиловый спирт, фенол, бензалконийхлорид, бензетонийхлорид, хлорбутанол, фенилэтиловый спирт,метилпарабен, пропилпарабен, тимеросал и фенилртутьнитрат и фенилртутьацетат. Предпочтительным консервантом является м-крезол или бензиловый спирт; самым предпочтительным является м-крезол. Количество применяемого консерванта может варьироваться в диапазоне от приблизительно 0,1% до приблизительно 2% 5 по весу, предпочтительно от приблизительно 0,3% до приблизительно 1,0% от веса всего раствора. Таким образом, настоящее изобретение относится, например, к стабилизированному раствору терипаратида, содержащему маннитол,ацетат и м-крезол с установленным сроком хранения в пределах 15 месяцев при 5 С. Композиции с паратиреоидным гормоном настоящего изобретения могут быть, если желательно, в виде порошка, содержащего не более 2% воды по весу, что является результатом лиофилизации стерилизованного, водного раствора гормона, полученного при смешивании выбранного паратиреоидного гормона, буферного агента и стабилизирующего агента, которые описаны выше. В случае получения лиофилизированных порошков особенно пригодным является буферный агент - источник тартрата. Особенно пригодные стабилизирующие агенты включают в себя глицин, маннитол, сахарозу,трегалозу, рафинозу или их смеси. РТН раствор или композиция настоящего изобретения содержат РТН в эффективном для лечения количестве, причем этот термин используют в отношении количества, применяемого либо для терапии либо для диагностики. Предназначенное количество паратиреоидного гормона, включенного в препарат, может быть предварительно определено, исходя из типа выбранного РТН и исходя из целевого назначения препарата. В одном варианте препараты используют для терапевтических целей и, в частности, для лечения остеопороза. Терапия остеопороза заключается во введении полученного препарата путем инъекции,желательно путем подкожной инъекции, в стандартных лекарственных формах, которые отражают предписанный режим лечения и находятся, в качестве примера, для человеческого РТН (1-34)(SEQ ID NO: 2) в диапазоне от 25 мкг РТН/мл инъецируемого раствора до 1000 мкг/мл инъецируемого раствора на больного, причем желательно, чтобы объем инъецируемого раствора был от 0,02 до 1,3 мл. Таким образом, очищенный РТН включают желательно с буферным агентом и наполнителем с образованием водного раствора,содержащего РТН в диапазоне концентраций от 25 мкг/мл до 1000 мкг/мл, предпочтительно от 100 мкг/мл до 500 мкг/мл, который затем фильтруют в стерильных условиях и наполняют им пузырек или картридж для использования. Если препарат получен в виде водного раствора, содержащего желаемые количества и концентрации буферного агента, наполнителя и РТН, то индивидуальные пузырьки наполняют раствором до желаемого объема. Преимущество настоящего изобретения заключается в том, что вышеуказанный раствор можно приготовить на стерилизованной воде без последующей лиофилизации. В предпочтительном альтернативном аспекте изобретения препарат РТН, подвергаемый 6 лиофилизации, состоит из 25-1000 мкг/мл человеческого РТН (1-34) (SEQ ID NO: 2), из маннитола в количестве от 2 до 8% по весу и источника тартрата в количестве, способном поддержать рН препарата в диапазоне от 3,0 до 6,5 при приготовлении в стерилизованной воде. В специальных аспектах изобретения тартратный буферный агент включают в количестве, достаточном для поддержания рН от 3,5 до 5, 5. Кроме терапевтического использования настоящая композиция с РТН может быть получена и применена в целях медицинской диагностики и, в частности, для установления диагноза гипопаратиреоза у больных с гипокальцемией. За исключением дозы РТН, содержащая препарат РТН композиция будет предназначаться, как описано в данном тексте, для терапевтического использования. Стандартная лекарственная форма человеческого РТН (1-34) (SEQ ID NO: 2), вводимая внутривенным путем, которая равна 200 международным единицам активности РТН, соответствует этой диагностической цели. Диагностику проводят путем определения эффекта введения РТН или уровней цАМФ(сАМР) в моче, причем повышение уровня цАМФ указывает на состояние гипопаратиреоза скорее, чем на его псевдоформу. Следующие примеры иллюстрируют изобретение и не ограничивают его. Пример 1. 0,1 мг человеческого РТН (1-34) (SEQ IDNO: 2), 50 мг маннитола, 2,5 мг м-крезола, 0,52 мг уксусной кислоты и 0,12 мг ацетата натрия смешивают в растворе с 1 мл дистиллированной воды. Пример 2. 0,25 мг человеческого РТН (1-34) (SEQ IDNO: 2), 45,4 мг маннитола, 3 мг м-крезола, 0,41 мг уксусной кислоты и 0,1 мг ацетата натрия смешивают в растворе с 1 мл дистиллированной воды. Композиции настоящего изобретения из примеров 1 и 2 сравнивают с растворами, не содержащими стабилизатор, содержащими 0,9%NaCl, 20 мМ ацетат и 10 мМ ацетат, как основной стабилизатор. Стабильность измеряют с помощью определения количества в % человеческого РТН (1-34) (SEQ ID NO: 2), остающегося после определенного периода времени. Измерения проводят с помощью ВЭЖХ. Результаты показаны в табл. 1 и 2. Таблица 1. Действие основного стабилизатора на химическую стабильность человеческого РТН (1-34) при 50 С 0,9% 20 мМ 10 мМ Вода 7 Таблица 2. Сравнение стабильности человеческого РТН (1-34) при 30 С 20 мМ 10 мМ При- Приацетат ацетат мер 1 мер 2 Время, дни Остаточное количество, % Исходное 100 100 100 100 количество 7 96 94 100 14 94 92 96 100 21 90 93 97 30 81 96 96 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция в форме раствора, готового для парентерального введения, которая содержит паратиреоидный гормон человека, буфер для поддержания рН от более чем 3 до 7 и стабилизатор, где указанный раствор не подвергается стадии сублимации или восстановления перед использованием пациентом. 2. Фармацевтическая композиция по п.1,где указанный буфер выбирается из цитрата,тартрата или ацетата. 3. Фармацевтическая композиция по п.1,где указанный стабилизатор представляет собой полиол или сахарный спирт. 4. Фармацевтическая композиция по пп.13, где указанный паратиреоидный гормон человека выбирается из группы, состоящей из РТН(1-34), РТН(1-37), РТН(1-38), РТН(1-41) и РТН(1-84). 5. Фармацевтическая композиция по пп.14, где указанный стабилизатор представляет собой маннитол. 6. Способ изготовления фармацевтической композиции в форме раствора, готового для парентерального введения, включающий смешивание паратиреоидного гормона человека, стабилизатора и буфера для поддержания рН от более чем 3 до 7, где указанный раствор не подвергают стадии сублимации или восстановления перед использованием пациентом. 8 7. Способ по п.6, где указанный буфер выбирается из цитрата, тартрата или ацетата. 8. Способ по п.6, где указанный стабилизатор представляет собой полиол или сахарный спирт. 9. Способ по п.6, где указанный паратиреоидный гормон человека выбирается из группы, состоящей из РТН(1-34), РТН(1-37), РТН(138), РТН(1-41) и РТН(1-84). 10. Укупоренный флакон или картридж,содержащий готовую для парентерального введения фармацевтическую композицию в форме раствора, готового для введения пациенту, где указанная композиция содержитa) паратиреоидный гормон человека иb) буфер для поддержания рН от более чем 3 до 7 иc) стабилизатор. 11. Флакон или картридж по п.10, где указанный буфер выбирается из цитрата, тартрата или ацетата. 12. Флакон или картридж по п.10, где указанный стабилизатор представляет собой полиол или сахарный спирт. 13. Флакон или картридж по пп.10-12, где указанный паратиреоидный гормон человека выбирается из группы, состоящей из РТН(1-34),РТН(1-37), РТН(1-38), РТН(1-41) и РТН(1-84). 14. Флакон или картридж по п.10, где указанный паратиреоидный гормон находится в концентрации от 25 мкг/мл до 1000 мкг/мл. 15. Способ изготовления укупоренного флакона или картриджа, содержащего жидкую фармацевтическую композицию, готовую для парентерального введения, включающий а) соединение паратиреоидного гормона человека, буфера для поддержания рН от более чем 3 до 7 и стабилизатора, образующих раствор, иb) укупорку флакона или картриджа, содержащих указанный раствор, из которого может быть извлечена терапевтически эффективная доза паратиреоидного гормона для использования пациентом.