Способ проведения клеточной терапии для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита

СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ХРОНИЧЕСКОГО ОРХОЭПИДИДИМИТА Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к урологии, и предназначено для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых, разработки новых методов лечения и профилактики этого заболевания у людей. Способ проведения клеточной терапии для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита включает проведение антибактериальной терапии экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение 3 суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см 3,отделяют и отмывают клетки костного мозга, отмытые аутологичные мононуклеарные клетки выращивают в питательной среде Mesencult, полученные мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки в объеме 1 мл вводят в вену ушной раковины экспериментального животного."НАУЧНЫЙ ЦЕНТР УРОЛОГИИ ИМЕНИ АКАДЕМИКА Б.У. ДЖАРБУСЫНОВА" (KZ) Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к урологии и предназначено для лечения экспериментальной хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых и разработка новых методов лечения и профилактики этого заболевания у людей. Острое воспаление яичка и придатка (орхоэпидидимит) является одним из наиболее частых урологических заболеваний. Более 27% мужчин на протяжении жизни переносят эпидидимоорхит. Статистические данные о частоте заболевания свидетельствуют об актуальности его изучения с различных точек зрения: патогенетической, диагностической, лечебной, профилактической. Переход острого орхоэпидидимита в хронический чреват многими последствиям, среди которых наиболее серьзны нарушение проходимости придатка яичка, развитие склеротического и дистрофического процессов в яичке, что приводит к нарушению репродуктивной функции этих органов на стороне поражения. Тактика лечения острого и хронического орхоэпидидимита у пациентов строго дифференцирована,в некоторых случаях при остром орхоэпидидимите выполняют эпидидимотомию, ведущую к декомпрессии органа и уменьшению остроты воспаления, а также проведение консервативного лечения путем антибиотикотерапии и физиотерапии (Чиненный В.Л. Острый эпидидимит в урологической практике автореферат на соиск. ученой степени канд. мед наук. -1991. -Москва, с. 10-15). В доступных патентно-информационных источниках информации прототипа способу проведения клеточной терапии для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита не найдено. Задача изобретения - разработка способа проведения клеточной терапии для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита, позволяющего эффективно и доступно провести лечение. Способ проведения клеточной терапии для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита включает проведение антибактериальной терапии экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение трех суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см 3, отделяют и отмывают клетки костного мозга,отмытые аутологичные мононуклеарные клетки выращивают в питательной среде Mesencult, полученные мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки в объеме 1 мл вводят в организм экспериментальных животных внутривенно в вену уха. Способ осуществляют следующим образом. В качестве объекта эксперимента используют беспородных кроликов, самцов, весом 3-4 кг, которым ранее осуществляют модель экспериментального хронического орхоэпидидимита путем введения в половые органы экспериментального животного бактериальной культуры. Введение осуществляют в паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл, в качестве бактериальной культуры используют смешанные культуры стафиллокок+стрептококк в титре 106 микробных тел. Клиническую картину экспериментального хронического орхоэпидидимита у экспериментального животного (кролик) определяют на 30 сутки, при проведении патоморфологических и ультразвуковых исследований экспериментальных животных. На 30 сутки от начала введения в половые органы экспериментального животного бактериальной культуры и при постановки диагноза экспериментального хронического орхоэпидидимита на основе патоморфологических и ультразвуковых исследований подопытным животным проводят антибактериальную терапию цефазолином в дозе 10 мг/кг. Затем выполняют забор костного мозга из крыла подвздошной кости в объеме 5 см 3 с гепаринизированным раствором Хенкса. После сепарации и отмывания ядросодержащих клеток от эритроцитов осадок ресуспендируют в питательной среде Mesencult, специальной среде для культивирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК). Клетки высевают в матрасики Т-25. По достижению монослоя клетки от стекла снимают диспергирующим раствором, отмывают раствором Хенкса. После центрифугирования осадок клеток ресуспендируют в физиологическом растворе. Концентрация клеток - 1 млн клеток/см 3. Взвесь клеток в объеме 1 мл вводят в организм экспериментальных животных внутривенно в вену уха. Пример выполнения способа. Использовано животное - кролик самец, весом 3,5 кг. В паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл, в качестве бактериальной культуры были введены смешанные культуры стафиллокок+стрептококк в титре 106 микробных тел. Клиническую картину экспериментального хронического орхоэпидидимита у данного экспериментального животного определили на 30 сутки, при проведении ультразвуковых исследований. После этого животному провели антибактериальную терапию цефазолином в дозе 10 мг/кг. Затем выполнили забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см 3, отделили и отмыли клетки костного мозга После сепарации и отмывания ядросодержащих клеток от эритроцитов осадок ресуспендировали в питательной среде Mesencult, специальной среде для культивирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК). Клетки высеяли в матрасики Т-25. По достижению монослоя клетки сняли со стекла диспергирующим раствором, отмыли раствором Хенкса. После центрифугирования осадок клеток ресуспендировали в физиологическом растворе. Концентрация клеток - 1 млн.клеток/см 3. Взвесь клеток в объеме 1 мл ввели в организм эксперименталь-1 024138 ных животных внутривенно в вену уха. Результаты гистоморфологического исследования после трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в ушную вену лабораторных животных. В материале ткань (паренхима) яичка с нормальной фиброзной стромой без признаков настоящего или прошлого воспаления или его организации. Сперматогенез выражен отлично во всех извитых канальцах - фиг. 1. В материале исследования ткань яичка, нормального гистологического строения. Строма яичка нежноволокнистая, хорошо васкуляризирована, без признаков воспаления или его организации. Во всех канальцах хорошо выражен сперматогенез (слегка "запустевшие" канальцы единичны: около 5%) - фиг. 2. В исследуемом материале ткань яичка нормального гистологического строения. Строма нежноволокнистая, без признаков воспаления или его организации. Сперматогенез в извитых канальцах выражен хорошо: признаки "запустения" выражены очень слабо (около 10%) - фиг. 3. В исследуемом материале нормальная ткань яичка. Признаков воспаления или его организации в строме и в паренхиме не обнаружено. Сперматогенез выражен хорошо (полупустых канальцев около 5%) - фиг. 4. В материале ткань яичка без признаков бывшего или настоящего воспаления в строме и паренхиме яичка, а также в прилежащих тканях. Сперматогенез отличный - фиг. 5. В исследуемом материале ткань яичка нормального гистологического строения, без признаков воспаления или его организации в строме и в паренхиме. Сперматогенез отличный: "полупустых" канальцев менее 5% - фиг. 6. Результаты гистоморфологии после трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток внутривенно в вену уха показывают, что при этом наблюдается положительный эффект, выражающийся в следующем: нормализация фиброзной стромы; удовлетворительная/хорошая васкуляризация стромы; уменьшение "запустевших" канальцев. Таким образом, статистически доказано, что трансплантация мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток внутривенно в вену уха приводят к уменьшению и исчезновению признаков воспаления и, главным образом, улучшает сперматогенез. Экспериментальным путем установлены нормальные показатели размеров яичек, показателей скорости кровотока, индекса резистентности и пульсационного индекса у лабораторных кроликов после проведенного лечения. Разработанный способ выделения и введения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток внутривенно в вену уха лабораторных животных с целью изучения и внедрения новых методов лечения инфертильности и может быть использования для экспериментального лечения этих заболеваний. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ проведения клеточной терапии для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита включает проведение антибактериальной терапии экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение трех суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см 3, отделяют и отмывают клетки костного мозга,отмытые аутологичные мононуклеарные клетки выращивают в питательной среде Mesencult, полученные мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки в объеме 1 мл вводят в вену ушной раковины экспериментального животного.