Модифицированные антитела и способы применения

007388 Эта заявка является продолжением заявки US 60/264,318, поданной 29.01.2001, и имеет приоритет согласно заявке US 60/331,481, поданной 16.11.2001, каждая из которых приведена во всей ее полноте в качестве ссылки. Область изобретения В широком аспекте настоящее изобретение относится к улучшенным композициям и способам,включающим модифицированные иммуноглобулины для лечения опухолевых заболеваний. Более конкретно, настоящее изобретение включает применение модифицированных иммуноглобулинов, проявляющих улучшенную локализацию в опухоли и превосходные физиологические профили для иммунотерапевтического лечения злокачественных опухолей. Описанные способы и композиции особенно полезны для лечения пациентов, больных раком, у которых возникает угроза для костного мозга из-за воздействия химиотерапевтических агентов, наружного облучения или радиоиммунотерапевтических средств. Предпосылки изобретения Пациенты, страдающие от относительно различных злокачественных опухолей, имеют успех при лечении рака в течение последних нескольких декад. К сожалению, хотя современное лечение имеет значительно повышенные скорости воздействия и увеличение времени жизни, большинство пациентов продолжают погибать от болезни. Барьеры для достижения хотя бы небольших улучшенных результатов включают резистентность раковых клеток и неприемлемую токсичность (например, токсичность для костного мозга) доступного лечения, что ограничивает оптимальную цитотоксическую дозировку и часто делает текущее лечение неприемлемым для ослабленных или пожилых пациентов, у которых возникает угроза для иммунитета. Эти ограничения являются особенно существенными при попытке защитить пациентов, которые подвергались предшествующему лечению или имеют рецидив. Следовательно, остается потребность разработки менее токсичных, но более эффективных селективных лекарственных средств. Одной попыткой повышения эффективности таких лекарственных средств является применение терапевтических антител для уменьшения нежелательной перекрестной реактивности и увеличения локализации в клетках опухоли одного или более цитотоксических агентов. Идея привлечения антител к использованию для лечения опухолевых заболеваний возникла, по меньшей мере, в 1953 году, когда было показано, что антитела могут использоваться для специфической мишени раковых клеток. Однако, это была плодотворная работа Kohler и Milstein в гибридомной технологии, которая позволила в дальнейшем предложить моноклональные антитела, которые специфически связываются с определенным антигеном. До 1979 года моноклональные антитела (МАт) использовались для лечения злокачественных заболеваний у человека. Позднее были получены три неконъюгированных моноклональных антитела: Rituxan ,Campath и Herceptin для лечения лимфомы, отличной от лимфомы Ходкина, CLL и рака груди соответственно. В настоящее время множество моноклональных антител, конъюгированных с различными цитотоксическими агентами (например, радиоизотопами или белковыми токсинами), проходят клинические испытания в отношении лечения различных злокачественных опухолей. За последнюю декаду был получен широкий ряд специфичных к опухоли антител и фрагментов антител, а также были разработаны способы конъюгирования антител с лекарственными средствами, токсинами, радионуклидами или другими агентами, для введения конъюгатов пациентам. Эти попытки выглядят многообещающими, однако,множество различных неожиданных проблем ограничивает диагностику и терапевтическую применимость некоторых реагентов, требуя дальнейшей разработки. Среди наиболее трудных проблем существует проблема, которая вызывается самой иммунной системой человека, которая может реагировать на целевой конъюгат как на чужеродный антиген. Например,пациенты, которых лечили лекарственными средствами или радионуклидами в комплексе с мышиными моноклональными антителами (которые наиболее широко используются в качестве целевых антител для человека), проявляют циркулирование человеческих антимышиных антител (НАМА) и общую немедленную реакцию гиперчувствительности III типа к группе антитела конъюгата. Более того, даже когда неблагоприятные побочные эффекты являются минимальными (например, в случае однократного введения), циркулирование НАМА снижает эффективную концентрацию целевого агента у пациента и, следовательно, ограничивает достижение диагностического или терапевтического агента сайта-мишени. Различные проблемы продолжают ограничивать клиническое применение RIT. Наиболее часто дозировка иммунотерапии радиоактивно мечеными МАт (RIT) ограничена токсичностью для костного мозга из-за того, что циркулирующий радиоактивно меченый иммуноконъюгат (IС) подвергается нормальному пребыванию гематологических клеток в красном костном мозге. Пациенты, которые ранее подвергались традиционной химиотерапии, особенно уязвимы к снижению количества красного костного мозга из-за экстенсивной предшествующей лекарственной терапии. Это ограничивает применение RIT в сочетании с цитотоксическими лекарственными средствами, большинство из которых, как известно, проявляют синергическое противоопухолевое действие на немеченые опухолевые клетки. Например, было показано, что введение 131I-меченого анти-СЕА МАт в сочетании с доксорубицином повышает терапевтическое действие индивидуальных агентов в мышиной ксенографической модели карциномы легких. Однако, комбинация являлась более токсичной, чем введение каждого компонента отдельно. Похожие-1 007388 результаты были получены при использовании RIT в сочетании с цисплатином. Другие лекарственные средства, проявляющие синергизм с RIT, включают, но не ограничиваются: метаболические ферментные ингибиторы (например, МТХ, Томудекс), включая топизомерадные ферментные ингибиторы (подохилотоксины, например, этопозид), антиметаболиты (например, фторурацил), порфирин (гадолиний - тексафирин) или ДНК интерколяторы (например, антрациклины, камптотецины и т.д.). Кроме того, пациенты, больные раком, имеющие обширный метастаз костного мозга, особенно рискуют при дополнительном облучении красного костного мозга, граничащего с клетками опухоли, с которыми связывается радиомеченный IС. Например, пациенты с лимфомой, отличной от лимфомы Ходкина (NHL), при лечении иттрий - меченым зевалином или 131I-меченым бексаром, или пациенты с хронической лимфоцитной лейкемией (CLL) при лечении Lym-1, которые имеют значительные метастазы костного мозга, наиболее вероятно развивают ограниченную дозой токсичность по сравнению с пациентами без участия костного мозга. Следовательно, далее повышается риск токсичности для костного мозга у этих пациентов при использовании в сочетании с цитотоксической лекарственной терапией. Одним из способов повышения терапевтической эффективности RIT является повышение вводимой дозы RIT, и, следовательно, повышение количества изотопа, направляющегося или связавшегося через МАт с опухолью. Предыдущие исследования используют ферментативно расщепляемые или генноинженерные МАт фрагменты, которые проявляют высокое средство связывания с целевой раковой клеткой и быстро выводятся из крови до более низкой токсичности для костного мозга. Примеры включают моновалентные (например, scFv и Fab фрагменты) и мультивалентные (например, F(ab')2, инвертированныеF(ab')2 и двойная цепь Fv фрагментов) фрагменты антител. Эти конструкции при сравнении с традиционными IС демонстрируют быстрое выведение из крови как в мышиных животных моделях, так и при клиническом лечении человека. Пониженное радиационное воздействие на красный костный мозг и пониженный уровень токсичности сопровождаются быстрым выведением из крови. К сожалению, такие конструкции так же выводятся из опухоли быстрее, чем традиционные интактные МАт, и менее эффективны по их способности доставлять изотоп к раковой популяции. Так, любое потенциальное преимущество при использовании в более быстром выведении из крови и более низкой токсичности МАт фрагментов для комбинационной терапии с противораковыми лекарственными средствами компенсируются их неспособностью эффективно доставлять изотоп к опухолевой области. Таким образом, объектом настоящего изобретения являются низкотоксичные соединения, которые могут использоваться для доставки в опухолевые клетки. Другим объектом изобретения являются соединения, которые могут эффективно использоваться для лечения пациентов, у которых возникает подавление костного мозга. Сущность изобретения Эти и другие объекты обеспечиваются настоящим изобретением, которое, в широком смысле, относится к способам, соединениям и композициям, которые могут использоваться для лечения опухолевых заболеваний. С этой стороны настоящее изобретение относится к модифицированным антителам, которые могут использоваться для лечения пациентов, страдающих от различных форм рака. В этом отношении модифицированные антитела или иммуноглобулины настоящего изобретения, как было неожиданно обнаружено, проявляют биохимические характеристики, которые делают их особенно полезными для лечения пациентов, у которых возникает подавление костного мозга. Более конкретно, неожиданно было обнаружено, что описанные здесь модифицированные антитела быстро выводятся из крови и при этом обеспечивают эффективную локализацию в опухоли. Описанные соединения как таковые могут использоваться для существенного снижения токсичности, связанной с неспецифическим распространением обычных иммуноконъюгатов, в то же время обеспечивая терапевтически эффективные уровни выбранного цитотоксина в области опухоли. Особенно это проявляется тогда, когда модифицированные антитела используются в виде радиоиммуноконъюгатов. В соответствии с этим, один важный аспект настоящего изобретения включает применение модифицированных антител в виде радиоиммуноконъюгатов для лечения опухолевых заболеваний. Так, модифицированное антитело может быть связано с терапевтическим радиоизотопом, таким как 90Y или 131I,и введено пациенту, страдающему одной из любых форм рака. Удивительные свойства описанных соединений (т.е. быстрое выведение из крови и эффективная локализация в опухоли) существенно снижают связанную с ними токсичность относительно здоровых органов (особенно костного мозга), доставляя терапевтически эффективные дозы непосредственно в опухоль. Это вызванное снижение токсичности для костного мозга делает настоящее изобретение особенно полезным для лечения пациентов, у которых возникает подавление или риск для костного мозга. Часто подавление костного мозга рассматривается как побочный эффект химиотерапевтического лечения, такого как облучение или введение токсичных агентов. Другим значительным аспектом настоящего изобретения является применение описанных соединений (с дополнительным радиоизотопом или без него) в сочетании с сопутствующей химиотерапией или облучением. Это особенно полезно для пациентов, которые имеют рецидив или уже прошли предшествующую химиотерапию, что привело к состоянию подавления костного мозга. У таких пациентов (и часто у относительно здоровых пациентов) дозой, ограничивающей токсичность радиоактивно меченых антител, является токсичность для костного-2 007388 мозга от воздействия циркулирующего радиоизотопа к нормальным клеткам костного мозга. Настоящее изобретение уменьшает это воздействие и соответствующую токсичность, таким образом обусловливая большую эффективность и более высокие вводимые дозы. Однако, в противоположность соединениям предшествующего уровня техники, модифицированные антитела настоящего изобретения также проявляют эффективную локализацию в опухоли, тем самым улучшая состояние пациента. Далее следует заметить, что эти же свойства делают соединения и композиции настоящего изобретения особенно полезными для диагностических целей, таких как радиоактивная визуализация опухолей. Таким образом, модифицированные антитела настоящего изобретения могут быть связаны с диагностическими радиоизотопами (например, 111In) и использоваться для диагностики и отражения опухолевых или других заболеваний. В этом отношении быстрое выведение несвязанных модифицированных антител и высокая и быстрая локализация в опухоли обеспечивает повышенную визуализацию, имеющую существенно лучший сигнал для обнаружения по сравнению с сигналом от обычных радиоактивных визуализирующих агентов. Конечно, специалист в данной области техники легко определит тип визуализации (например, MRI, радиоактивная визуализация, ультразвук и т.д.) и конкретный визуализирующий агент, который может эффективно использоваться с описанными здесь соединениями. Другие объекты, особенности и преимущества настоящего изобретения станут ясны специалисту в данной области техники при рассмотрении следующего подробного описания их предпочтительных примерных воплощений. Краткое описание фигур Фиг. 1 А и 1 В показывают, соответственно, аминокислотную последовательность интактной тяжелой цепи С 2 В 8 и аминокислотную последовательность конструкции производного С 2 В 8 с делетированным доменом, где СH2 домен делетирован; фиг. 2 А и 2 В показывают, соответственно, нуклеотидную последовательность интактной тяжелой цепи С 2 В 8 и нуклеотидную последовательность конструкции производного С 2 В 8 с делетированным доменом, где СH2 домен делетирован; фиг. 3 А и 3 В показывают, соответственно, нуклеотидную последовательность легкой цепи С 2 В 8 и соответствующую аминокислотную последовательность той же легкой цепи; фиг. 4 А и 4 В показывают, соответственно, аминокислотную последовательность тяжелой цепиhuCC49 с делетированным доменом, где СH2 домен делетирован, и соответствующую нуклеотидную последовательность той же тяжелой цепи; фиг. 5 А и 5 В показывают, соответственно, аминокислотную последовательность легкой цепиhuCC49 и соответствующую нуклеотидную последовательность той же легкой цепи; фиг. 6 А и 6 В показывают, соответственно, аминокислотную последовательность интактной тяжелой цепи С 5 Е 10 и аминокислотную последовательность конструкции производного С 5 Е 10 с делетированным доменом, где СH2 домен делетирован; фиг. 7 А и 7 В показывают, соответственно, нуклеотидную последовательность интактной тяжелой цепи С 5 Е 10 и нуклеотидную последовательность конструкции производного С 5 Е 10 с делетированным доменом, где Сн 2 домен делетирован; фиг. 8 А и 8 В показывают, соответственно, нуклеотидную последовательность легкой цепи С 5 Е 10 и соответствующую аминокислотную последовательность той же легкой цепи; фиг. 9 графически представляет скорости выведения из крови интактного huCC49 и huCC49.CH2,меченных различными радиоизотопами, у мыши с LS147T опухолью; фиг. 10 А, 10 В и 10 С, соответственно, графически представляют скорости выведения из крови и локализацию в опухоли радиоактивно меченых интактных С 2 В 8, C2B8.F(ab')2 и С 2 В 8.СН 2, что определено на Daudi (CD20+) опухолевых мышиных ксенографических моделях; фиг. 11 иллюстрирует синергетические свойства, обусловленные комбинацией радиоактивно меченого huCC49.CH2 и этопозида по сравнению с применением отдельно противоопухолевых агентов. Подробное описание изобретения Хотя настоящее изобретение может воплощаться в многочисленных формах, здесь описываются его конкретные показательные воплощения, которые иллюстрируют принципы изобретения. Следует подчеркнуть, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными указанными воплощениями. Настоящее изобретение, по крайней мере, частично, основано на том факте, что антитела, которые являются иммунореактивными по отношению к антигенам, связанным с клетками опухоли, могут быть модифицированы или изменены для улучшения биохимических характеристик и повышения эффективности при терапевтическом применении пациентами, у которых возникает подавление костного мозга. Предпочтительно, модифицированные антитела связываются с цитотоксическим агентом, таким как радионуклиды или противоопухолевый агент. В этом отношении было неожиданно обнаружено, что антитела, модифицированные в соответствии с настоящим изобретением, могут успешно использоваться для радиоиммунотерапии у пациентов с пониженным содержанием красного костного мозга. Более конкретно, модифицированные антитела настоящего изобретения, как оказалось, проявляют более эффективную локализацию в опухоли и более короткий период полувыведения из сыворотки по сравнению со всеми-3 007388 антителами, имеющими такую же специфичность связывания. По существу, они особенно полезны для доставки к цели цитотоксинов, таких как радионуклиды, к злокачественной клетке или опухоли, тем самым минимизируя нежелательное воздействие на здоровые клетки (например, гематологические клетки). Эта повышенная эффективность позволяет осуществлять более сильное лечение злокачественных опухолей у пациентов, у которых возникает подавление костного мозга, а также тех, кто ранее подвергался или в настоящее время подвергается химиотерапии. Использующийся здесь термин модифицированное антитело обозначает любое антитело или связывающийся фрагмент или его рекомбинанту, иммунореактивную по отношению к антигену, связанному с опухолью, в котором по крайней мере часть одного или более доменов константной области делетирована или в других случаях изменена так, что достигаются желаемые биохимические характеристики, такие как повышенная локализация в опухоли или пониженный период полувыведения из сыворотки по сравнению с цельным неизмененным антителом приблизительно такой же специфичности связывания. В предпочтительных воплощениях в модифицированных антителах настоящего изобретения делетирована по крайней мере часть одного из константных доменов. В целях упрощения обозначения такие конструкции далее называются делетированным доменом. Предпочтительно делетируется полностью один домен константной области модифицированного тела, и, более предпочтительно, делетируется полностью Сн 2 домен. Как будет описано подробнее ниже, каждый из желаемых вариантов может быть легко получен или сконструирован из цельного предшественника или родственного антитела хорошо известными способами. Среднему специалисту в данной области техники ясно, что соединения, композиции и способы настоящего изобретения пригодны для лечения любых опухолевых заболеваний, новообразований или злокачественностей, которые вызывают появление связанного с опухолью антигена. Как указано выше, модифицированные антитела настоящего изобретения иммунореактивны по отношению к одному или более антигенов, связанных с опухолью. Так, антиген-связывающая группа (то есть вариабельная область или иммунореактивный фрагмент или их рекомбинанты) описанных модифицированных антител связывается с выбранным антигеном, ассоциированным с опухолью, в области злокачественного образования. Выбирая ряд указанных антигенов, ассоциированных с опухолью, и ряд родственных антител, специалист данной области техники может предположить, что раскрытые здесь модифицированные антитела могут, следовательно, выбираться из любого ряда цельных антител. Вообще, модифицированные антитела, пригодные для настоящего изобретения, могут быть получены или произведены из любого антитела(включая антитела, ранее описанные в уровне техники), которое реагирует с антигеном, ассоциированным с опухолью. Далее, родственное антитело или предшественник антитела, или их фрагменты, использующиеся для выработки описанных модифицированных антител, может быть мышиным, человеческим,химерным, подобным антителу человека, нечеловеческого примата или подобным антителу примата. В других предпочтительных воплощениях модифицированные антитела настоящего изобретения могут включать конструкции одиночной цепи антитела, такие как конструкции, описанные в US 5 892 019,приведенном здесь в качестве ссылки, имеющие измененные константные домены, как здесь описано. Следовательно, любой из этих типов антител, модифицированных в соответствии с настоящим описанием, пригоден для данного изобретения. Как здесь используется, антигены, ассоциированные с опухолью обозначают любой антиген, который обычно ассоциирован с клетками опухоли, т.е. встречающийся в той же или в большей степени по сравнению с нормальными клетками. Вообще, антигены, ассоциированные с опухолью, включают любой антиген, который обеспечивает локализацию иммунореактивных антител в опухолевой клетке независимо от его экспрессии в незлокачественных клетках. Такие антигены могут быть относительно специфичными к опухоли и ограниченными по их экспрессии к поверхности злокачественных клеток или проявляют повышенную экспрессию к поверхности клетки злокачественной популяции по сравнению с незлокачественными тканями. Примерами являются МАв, реактивные с СЕА, MUC-1 и TAG-72. Альтернативно, такие антигены могут в основном экспрессироваться как в злокачественных, так и в незлокачественных клетках. Например, CD20 представляет собой вогнутый В антиген, который обнаружен на поверхности как злокачественных, так и незлокачественных В клеток, которые, как доказано, являются крайне эффективной мишенью для иммунотерапевтических антител при лечении лимфомы, отличной от лимфомы Ходкина. В этом отношении вогнутые Т-клеточные антигены, такие как CD2, CD3, CD5, CD6 иCD7, также включают антигены, ассоциированные с опухолью, для настоящего изобретения. Другие примеры антигенов, ассоциированных с опухолью, включают, но не ограничиваются ими: MAGE-1,MAGE-3, HPV 16, HPV Е 6 и Е 7, L6-антиген, CD19, CD22, CD37, HLA-DR, EGF рецептор и HER2 рецептор. Во многих случаях иммунореактивные антитела для каждого из этих агентов описаны в уровне техники. Специалисту в данной области техники ясно, что каждое из этих антител может служить предшественником для модифицированных антител в соответствии с настоящим изобретением. Модифицированные антитела настоящего изобретения предпочтительно ассоциируются и связываются с антигенами, ассоциированными с опухолью, как описано выше. Соответственно, что подробно будет описано ниже, модифицированные антитела настоящего изобретения могут производиться, вырабатываться или получаться из любого антитела, которое реагирует с антигенами, ассоциированными с-4 007388 опухолью. В предпочтительных воплощениях модифицированные антитела получают с помощью обычных генно-инженерных технологий, где по крайней мере часть одного или более домена константной области делетирована или изменена так, что обеспечиваются желаемые биохимические характеристики,такие как пониженный период полувыведения из сыворотки. Более конкретно, что будет показано ниже,специалист в данной области техники может легко выделить генетическую последовательность, соответствующую вариабельной и/или константным областям антитела субъекта и делетировать или изменить подходящие нуклеотиды для получения модифицированных антител настоящего изобретения. Далее будет показано, что модифицированные антитела могут экспрессироваться и производиться в клиническом или коммерческом масштабе, используя хорошо известные методики. В выбранных воплощениях модифицированные антитела, пригодные для настоящего изобретения,могут быть получены из известных антител для антигенов, ассоциированных с опухолью. Это может легко достигаться получением нуклеотида или аминокислотной последовательностью родственного антитела и осуществлением описанных здесь модификаций. Для других воплощений может требоваться только применение антиген-связывающей области (например, вариабельной области или комплементарно определенных областей) известного антитела и объединение их с модифицированной константной областью для получения желаемых модифицированных антител. Совместимые конструкции одиночной цепи могут получаться подобным образом. В любом случае предполагается, что антитела настоящего изобретения могут также разрабатываться для улучшения сродства или снижения иммуногенности, что является обычным в данной области техники. Например, модифицированные антитела настоящего изобретения могут производиться или получаться из антител, которые являются подобными антителам человека или химеризованными. Так, модифицированные антитела в соответствии с настоящим изобретением могут вырабатываться из и/или включать встречающиеся в природе мышиные антитела, антитела примата (включая человека) или другие моноклональные антитела млекопитающего, химерные антитела,антитела, подобные антителам человека, антитела, подобные антителам приматов, биспецифические антитела или конструкции одиночной цепи антитела, а также иммунореактивные фрагменты каждого типа. Как упоминалось выше, ранее известные антитела, которые реагируют с антигенами, ассоциированными с опухолью, могут быть изменены, как описано здесь, для получения модифицированных антител настоящего изобретения. Примеры антител, которые могут использоваться для получения антигенсвязывающей области для выработки или производства описанных модифицированных антител, включают, но не ограничиваются, Y2B8 и С 2 В 8 (Зевалин и Ритуксан, IDEC Pharmaceuticals Corp., СанДиего), Lym 1 и Lym 2 (Techniclone), LL2 (immunomedics Corp., Нью-Джерси), HER2 (Герцептин,Genentech Inc., Южный Сан-Франциско), Bl (Бексар, Coulter Pharm., Сан-Франциско), MB1, BH3, B4,B72.3 (Cytogen Corp.), CC49 (National Cancer Institute) и 5 Е 10 (University of Iowa). В предпочтительных воплощениях модифицированные антитела настоящего изобретения связываются с теми же антигенами,ассоциированными с опухолью, что и антитела, обозначенные непосредственно выше. В особенно предпочтительных воплощениях модифицированные антитела вырабатываются из или связываются с теми же антигенами, что и Y2B8, С 2 В 8, СС 49 и С 5 Е 10 и, еще более предпочтительно, включают антитела с делетированным доменом (например, СН 2 антитела). Как будет показано в описании и примерах ниже, такие модифицированные антитела являются особенно полезными для лечения пациентов, у которых возникает подавление костного мозга, или для применения в сочетании с химиотерапией. В первом предпочтительном воплощении модифицированное антитело связывается с тем же антигеном, ассоциированным с опухолью, что и Ритуксан. Ритуксан (также известный как Ритуксимаб,IDEC-C2B8 и С 2 В 8) был первым FDA-утвержденным моноклональным антителом для лечения Вклеточной лимфомы человека (см. US 5843439; 5776456 и 5736137; каждый из которых приведен в качестве ссылки). Y2B8 является мышиным аналогом С 2 В 8. Ритуксан является химерным анти-СD20 моноклональным антителом (МАт), которое ингибиторно к опухоли и сообщенно воспринимает определенные клеточные линии лимфомы при апоптозе химиотерапевтическими агентами in vitro. Антитело эффективно связывает систему комплемента человека, имеет высокое FcR связывание и может эффективно убивать лимфоциты человека in vitro посредством комплемент-зависимого (CDC) и антитело-зависимого(ADCC) механизма (Reff и др., Blood 83; 435-445 (1994. Специалисту в данной области техники ясно,что варианты С 2 В 8 и Y2B8, модифицированные в соответствии с данным описанием, могут использоваться в конъюгированной или неконъюгированной формах для эффективного лечения пациентов сCD20+ злокачественными образованиями. Вообще, очевидно, что описанные здесь модифицированные антитела могут использоваться в открытом или неконъюгированном состоянии, или конъюгироваться с цитотоксическим агентом для эффективного лечения одного из ряда опухолевых заболеваний. В других предпочтительных воплощениях настоящего изобретения модифицированное антитело может быть произведено или связано с таким антигеном, ассоциированным с опухолью, как СС 49. Как упоминалось ранее, СС 49 связывает антиген TAG-72, ассоциированный с опухолью, который ассоциирован с поверхностью определенных опухолевых клеток природной специфической клеточной линии опухоли LS174T человека. LS174T [American Type Culture Collection (здесь АТСС) No. CL 188] является вариантом LS180 (АТСС No. CL 187) линии аденокарциномы толстой кишки. Далее будет показано, что-5 007388 разработаны многочисленные мышиные моноклональные антитела, которые специфически связываются с TAG-72. Одно из этих моноклональных антител, обозначенное В 72.3, является мышиным IgGl, полученным из гибридомы В 72.3 (АТСС No. HB-8108). B72.3 является первым поколением моноклональных антител, полученным с помощью экстракта карциномы грудной железы человека в качестве иммуногена(см. Colcher и др., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 78:3199-3203 (1981) и US 4522918 и 4612282, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки). Другие моноклональные антитела против TAG-72 называются СС (для рака толстой кишки), как описано Schlom и др. (US 5512443, приведен здесь в качестве ссылки) СС моноклональные антитела являются семейством второго поколения мышиных моноклональных антител, которые получают с помощью TAG-72, очищенного с помощью В 72.3. Благодаря их относительно хорошему сродству связывания с TAG-72, следующие СС антитела удерживаются в АТСС, с ограниченным доступом: СС 49 (АТСС No. НВ 9459); СС 83 (АТСС No. НВ 9453); СС 46 (АТСС No. HB 9458); СС 92 (АТСС No. НВ 9454); СС 30 (АТСС No. НВ 9457); СС 11 (ATCC No. 9455) и СС 15 (АТСС No.HB 9460) . US 5512443 далее указывает, что описанные антитела могут быть превращены в их химерную форму с помощью замещения, например, доменов константных областей (FC) человека на константные области мыши с помощью технологий рекомбинантных ДНК, известных из уровня техники. Кроме описанных мышиных и химерных анти-ТАG-72 антител, Schlom и др. также предложили варианты СС 49 антитела, подобного антителу человека, как описано в PCT/US99/25552, и конструкции одиночной цепи,как описано в US 5892019, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Специалисту в данной области техники ясно, что каждое из приведенных выше антител, конструкций или рекомбинант и их вариантов могут быть модифицированы и использоваться в соответствии с настоящим изобретением. Кроме анти-ТАG-72 антител, описанных выше, различные группы также определяют конструкцию и особые характеристики домен-делетированных СС 49 и В 72.3 антител (например, Calvo и др., CancerCancer. Res. 55:5957-5967 (1995. Очевидно, что описанные конструкции обеспечивают получение модифицированных антител, которые сходны со способами и композициями настоящего изобретения. Тем не менее, хотя указанные документы показывают, что время выведения конструкции с делетированным доменом является повышенным по сравнению с другими родственными антителами, они не предполагают того, что указанные конструкции являются особенно эффективными для лечения пациентов, у которых возникает подавление костного мозга, которые подвергались или подвергаются химиотерапии, как показано в настоящем изобретении. Скорее эти документы предполагают, что быстрое выведение конструкций делает их особенно полезными для диагностических процедур, вместо того, чтобы объединить терапевтические режимы, что предполагается настоящим изобретением. Другое предпочтительное воплощение настоящего изобретения включает модифицированные антитела, которые приведены или связаны с тем же антигеном, ассоциированным с опухолью, что и С 5 Е 10. Как описано в родственной заявке US 6207805, С 5 Е 10 представляет собой антитело, которое распознается гликопротеиновой детерминантой приблизительно в 115 кДа, которая, как оказалось, является специфичной к клеточным линиям опухоли простаты (например, DU145, РС 3 или ND1) . Так, согласно настоящему изобретению, модифицированные антитела (например, антитела с делетированным СH2 доменом), которые специфически связываются с тем же антигеном, ассоциированным с опухолью, распознаваемым С 5 Е 10 антителом, могут быть получены и использоваться в конъюгированной или неконъюгированной форме для лечения опухолевых заболеваний. В особенно предпочтительных воплощениях модифицированное антитело произведено или включает всю или часть антиген-связывающей области С 5 Е 10 антитела, секретируемой клеточной линией гибридомы, обозначенной АТСС как No. РТА-865. Полученное модифицированное антитело может быть затем конъюгировано с радионуклидом, как описано ниже, и вводиться пациенту, страдающему раком простаты в соответствии с описанными здесь способами. В дополнение к антителам, описанным выше, могут быть получены модифицированные антитела,произведенные или включающие антиген-связывающие области новых антител, полученных иммунизацией согласно общим иммунологическим технологиям. Используя известные методики, антитела предпочтительно вводят млекопитающим многократными подкожными или внутрибрюшинными инъекциями релевантного антигена (например, очищенные антигены, ассоциированные с опухолью, или клетки или клеточные экстракты, включающие такие антигены) и адъюванта. Такая иммунизация обычно вызывает иммунный ответ, который включает выработку антиген-реактивных антител из активированных спленоцитов или лимфоцитов. Хотя полученные антитела могут быть выделены из сыворотки животного для осуществления поликлональных технологий, часто необходимо выделить индивидуальные лимфоциты из селезенки, лимфатических узлов или периферальной крови для гомогенного получения моноклональных антител (МАт). Предпочтительно, лимфоциты получают из селезенки. В этом хорошо известном способе (Kohler и др., Nature, 256:495 (1975 относительно молодые или мертвые лимфоциты из млекопитающего, которые инъецировались с антигеном, соединяют с бессмертной клеточной линией опухоли (например, клеточная линия миеломы), таким образом получая гибридные клетки или гибридомы, которые являются бессмертными и способны производить генетически кодируемые антитела к В-клеткам. Полученные гибриды расщепляются на одиночные генетические цепи-6 007388 с помощью селекции, разбавления и повторного выращивания каждой индивидуальной цепи, содержащей специфические гены для образования единого антитела. Они, следовательно, производят антитела,которые гомогенны против желаемого антигена и, учитывая их чистое генетическое родство, называются моноклональными. Таким образом полученные гибридомные клетки высаживают и выращивают в подходящей среде культуры, которая предпочтительно содержит одно или более веществ, которые ингибируют рост или выживаемость необработанных родственных клеток миеломы. Специалисту в данной области техники ясно, что реагенты, клеточные линии и среды для образования, селекции и роста гибридом являются коммерчески доступными из ряда источников и стандартные методики являются хорошо известными. В основном, среда культуры, в которой выращиваются клетки гибридомы, анализируется на производство моноклональных антител против желаемого антигена. Предпочтительно, специфичность связывания моноклональных антител, производимых клетками гибридомы,определяется иммуноосаждением или испытаниями in vitro, такими как радиоиммуноанализ (RIA) или фермент-связанный иммуноабсорбентный анализ (ELISA). После того, как клетки гибридомы идентифицируют на желаемую специфичность, аффинность и/или активность полученных антител, клоны могут субклонироваться путем ограничения процедур разбавления и роста стандартными методами (Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986. Далее станет понятно,что моноклональные антитела, секретируемые субклонами, могут выделяться из среды культуры, асцитной жидкости или сыворотки обычными методами очистки, такими как, например, протеин-А, гидроксилапатитная хроматография, гель-электрофорез, диализ или аффинная хроматография. В других сходных воплощениях ДНК, кодирующая требуемые моноклональные антитела, может быть легко выделена и секвенирована обычными способами (например, используя олигонуклеотидные пробы, которые способны специфично связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи мышиных антител). Выделенные и субклонированные гибридомные клетки выступают предпочтительным источником такой ДНК. Выделенная ДНК может быть помещена в векторы экспрессии, которые затем трансфецируются в прокариотические или эукариотические клетки-хозяева, такие как клетки Е.coli, COS клетки обезьяны, клетки яичников китайского хомячка (СНО) или клетки миеломы, которые иначе производят иммуноглобулины. Более конкретно, выделенная ДНК (которая может быть модифицирована как здесь описано) может использоваться для клонирования последовательностей константной и вариабельной области для производства антител, как описано Newman и др., US 5658570, приведенном здесь в качестве ссылки. По существу это вызывает экстракцию РНК из выбранных клеток, конверсию в кДНК и распространение ее с помощью PCR, используя Ig-специфичные праймеры. Как будет показано более подробно ниже, трансформированные клетки, экспрессирующие желаемое антитело, могут выращиваться в относительно больших количествах для обеспечения клинического и коммерческого получения иммуноглобулина. Специалисту в данной области техники также ясно, что ДНК-кодирующие антитела или фрагменты антител могут также производиться из фаговых библиотек антител, которые указаны здесь, например, в ЕР 368 684 В 1 и US 5969108, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Некоторые публикации (например, Marks и др. Bio/Technology 10:779-783 (1992, описывают производство высокоаффинных антител человека путем цепочечной перестановки, а также комбинированного заражения и in vitro рекомбинации как стратегии для конструирования больших фаговых библиотек. Такие процедуры обеспечивают жизнеспособные альтернативы традиционным гибридомным технологиям для выделения и последующего клонирования моноклональных антител и, как таковые, станут ясны при дальнейшем описании настоящего изобретения. Еще одно воплощение настоящего изобретения включает выработку по существу человеческих антител в трансгенных животных (например, мыши), которые не способны к эндогенному производству иммуноглобулинов (см., например, US 6075181, 5939598, 5591669 и 5589369, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки). Например, было описано, что гомозиготное удаление связывающей области тяжелой цепи антитела в химерной и зародышевой линии мутантных мышей приводит к полному ингибированию эндогенного производства антитела. Перенос ряда генов человеческого иммуноглобулина в такой зародышевой линии мутантных мышей приведет к производству человеческих антител при появлении антигена. Другое предпочтительное значение выработки человеческих антител с помощью SCID мышей описан в US 5811524, приведенном здесь в качестве ссылки. Понятно, что генетический материал, ассоциированный с этими человеческими антителами, может быть также выделен и изменен, как здесь описано. Еще одно другое высокоэффективное значение для выработанных рекомбинантных антител описано Newman, Biotechnology, 10:1455-1460 (1992). Конкретно, эта технология приводит к выработке антител, подобных антителам примата, которые содержат вариабельные домены обезьяны и константные последовательности человека. Этот документ приведен здесь в качестве ссылки во всей его полноте. Более того, эта технология также описана в US 5658570, 5693780 и 5756096, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Как ясно из настоящего описания, генетические последовательности, полезные для получения модифицированных антител настоящего изобретения, могут быть получены из ряда различных источников.-7 007388 Например, как описано выше, различные гены антител человека являются доступными в виде депозитов свободного доступа. Многие последовательности антител и кодирующих антитела генов опубликованы,и подходящие гены антител могут быть синтезированы из этих последовательностей, как описано ранее. Альтернативно, производящие антитело клеточные линии могут отбираться и выращиваться, используя методики, хорошо известные специалисту в данной области техники. Такие методики описаны в различных лабораторных практикумах и ранних публикациях. В этом отношении методики, подходящие для использования в изобретении, как описано ниже, приведены в Current Protocols in Immunology, Coligan и др., Eds., Green Publishing Associates and Wiley-Interscience, John Wiley and Sons, New York (1991), приведенном здесь в качестве ссылки во всей полноте, включая приложения. Далее станет ясно, что объем настоящего изобретения включает все аллели, варианты и мутации описанных здесь последовательностей ДНК. Хорошо известно, что РНК может быть выделена из исходных гибридомных клеток или из других трансформированных клеток стандартными методиками, такими как экстракция гуанидин изотиоцианатом и осаждением с последующим центрифугированием или хроматографией. При необходимости мРНК может быть выделена из общей РНК стандартными методиками, такими как хроматография на oлигodT целлюлозе. Методики, пригодные для этих целей, являются известными из уровня техники и описаны в предшествующих ссылках. кДНК, кодирующие легкие и тяжелые цепи антител, могут быть получены одновременно или раздельно с помощью обратной транскриптазы и ДНК полимеразы в соответствии с хорошо известными способами. Это может инициироваться согласованными праймерами константной области или более специфическими праймерами, основанными на опубликованных последовательностях тяжелой и легкой цепи ДНК и аминокислот. Как описано выше, PCR также может использоваться для выделения ДНК клонов, кодирующих легкие и тяжелые цепи антитела. В этом случае библиотеки могут быть подвержены скринингу согласованными праймерами или большими гомологичными пробами, такими как пробы константной области мыши. ДНК, обычно плазмидная ДНК, может выделяться из клеток, как здесь описано, ограниченно распределяться и секвенироваться с помощью стандартных, хорошо известных методик, описанных подробно в указанных выше документах, касающихся технологий рекомбинантной ДНК. Конечно, ДНК может быть модифицирована в соответствии с настоящим изобретением в любой момент в процессе выделения или последующего анализа. Здесь описаны предпочтительные последовательности антитела. Методики синтеза олигонуклеидов, относящиеся к этому аспекту изобретения, хорошо известны специалисту в данной области техники и могут осуществляться, используя любые коммерчески доступные автоматические синтезаторы. Кроме того, последовательности ДНК, кодирующие несколько типов тяжелых и легких цепей, приведенных здесь, могут быть получены с помощью услуг коммерческих фирм синтеза ДНК. Генетический материал,полученный любыми из вышеуказанных методов, может затем изменяться или модифицироваться для получения антител в соответствии с настоящим изобретением. Хотя множество различных типов антител может быть получено и модифицировано в соответствии с настоящим изобретением, модифицированные антитела настоящего изобретения определяют различные общие черты. С этой стороны термин иммуноглобулин обозначает тетрамер (2 тяжелых и 2 легких цепи) или его агрегат, обладает он или не обладает любой релевантной специфической иммунореактивностью. Антитела обозначают такие комплексы, которые имеют значительную известную специфическую иммунореактивную активность по отношению к антигену (например, ассоциированному с опухолью антигену), содержащие легкую и тяжелую цепи, с ковалентной связью между ними или без нее. Как описано выше, модифицированные антитела в соответствии с настоящим изобретением обозначают антитела или их иммунореактивные фрагменты или рекомбинанты, в которых, по крайней мере, часть одного или более доменов константной области делетирована или иначе изменена так, чтобы обеспечить необходимые биохимические характеристики, такие как повышение локализации в опухоли или снижение периода полувыведения из сыворотки по сравнению с цельным, неизмененным антителом приблизительно с той же иммуногенностью. В целях настоящего описания иммунореактивные конструкции антитела с одной цепью, имеющие измененные или не включающие домены константной области, могут считаться модифицированными антителами. Как описано выше, у предпочтительных модифицированных антител настоящего изобретения делетирована, по крайней мере, часть одного из константных доменов. Более предпочтительно, делетирован полностью один домен константной области модифицированного антитела и, даже более предпочтительно, делетирован полностью СH2 домен. Основные иммуноглобулиновые структуры у позвоночных относительно хорошо изучены. Как будет более подробно описано ниже, генный термин иммуноглобулин включает пять различных классов антитела, которые различаются биохимически. Хотя все пять классов подходят под объем настоящего изобретения, следующее описание будет в основном направлено на класс IgG молекул. В отношенииIgG, иммуноглобулины включают две идентичных легких полипептидных цепи с молекулярным весом приблизительно в 23000 Да и две идентичных тяжелых цепи с молекулярным весом 53000-70000. Четыре цепи связаны дисульфидными связями в Y конфигурацию, где легкие цепи соединяются с тяжелыми-8 007388 цепями в начале разветвления Y и продолжаются на протяжении вариабельной области. Более конкретно, легкие и тяжелые цепи разделены на две области, структурно и функционально гомологичные. Термины константный и вариабельный используются функционально. В этом отношении ясно, что вариабельные домены легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей определяют распознавание и специфичность антигена. С другой стороны, константные домены легкой цепи (CL) и тяжелой цепи (СH1,СH2 или СH3) определяют важные биологические свойства, такие как секреция, прохождение через плаценту, связывание с Fc-рецептором, связывание с комплементом и им подобные. Обычно нумерация доменов константной области повышается при удалении от антиген-связывающего сайта или аминоконца антитела. Так, СH3 и CL домены обычно включают карбокси-конец тяжелой и легкой цепей соответственно. Легкие цепи классифицируются как каппа или лямбда (, ). Каждый класс тяжелой цепи может быть связан с каппа- или лямбда-легкой цепью. Вообще, легкая и тяжелая цепи ковалентно связаны друг с другом, и хвостовые части двух тяжелых цепей связаны друг с другом ковалентными дисульфидными связями, когда иммуноглобулины вырабатываются гибридомами, с клетками или генетически полученными клетками-хозяевами. Однако, если нековалентное связывание цепей достигается в правильной геометрии, агрегат несвязанных дисульфидными связями цепей остается способным реагировать с антигеном. В тяжелой цепи аминокислотные последовательности начинаются от N-конца у разветвленных концов Y конфигурации до С-конца внизу каждой цепи. На N-конце расположена вариабельная область и на С-конце расположена константная область. Специалисту в данной области техники известно, что тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон (, , , , ) с несколькими подклассами в них. Природа этой цепи определяет класс антитела как IgA, IgD, IgE, IgG или IgM. Подклассы иммуноглобулина (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и т.д. охарактеризованы и известны для подтверждения функциональной специфичности. Модифицированные версии каждого из этих классов и изотипов являются легко различимыми специалистом в данной области техники ввиду раннего описания и, соответственно, составляют часть настоящего изобретения. Как показано выше, вариабельная область позволяет антителу селективно распознавать и специфически связываться с эпитопами на иммунореактивных антигенах. Так, VL домен и VH домен антитела объединены с образованием вариабельной области, которая определяет трехмерный сайт связывания антигена. Эта четвертичная структура антитела обеспечивает наличие сайта связывания антигена на конце каждого рукава Y. Более конкретно, сайт связывания антигена определяется тремя комплементарно определяемыми областями (CDR) на каждой VH и VL цепях. Шесть CDR являются короткими, несмежными последовательностями аминокислот, которые расположены специфично с образованием сайта связывания антигена, который предполагает антиген в его трехмерной конфигурации в водном окружении. Остаток тяжелых и легких вариабельных доменов проявляет меньшую межмолекулярную вариабельность аминокислотной последовательности и называется основными областями. Основные области в основном принимают -складчатую конформацию и CDR образуют петлеобразные связывания, и в некоторых случаях образуют часть -складчатой структуры. Так, эти основные области действуют с образованием скелета, который обеспечивает расположение шести CDR в правильной ориентации с помощью внутрицепочечных нековалентных взаимодействий. В любом случае, сайт связывания антигена, образованный расположением CDR, определяет поверхностную комплементарность к эпитопу на иммунореактивном антигене. Эта комплементарная поверхность вызывает нековалентное связывание антитела с эпитопом иммунореактивного антигена. В целях настоящего изобретения ясно, что раскрытые модифицированные антитела могут включать любой тип вариабельной области, который обеспечивает связывание антитела с выбранным антигеном,ассоциированным с опухолью. В этом отношении вариабельная область может включать или быть произведена из любого типа млекопитающего, которое может вызывать гуморальный ответ и вырабатывать иммуноглобулины против нужного антигена, ассоциированного с опухолью. Как таковая вариабельная область модифицированных антител может быть, например, человеческой, мышиной, нечеловекоподобного примата (например, обезьян, макак и так далее) или волчьего происхождения. В особенно предпочтительных воплощениях как вариабельная, так и константная области модифицированных иммуноглобулинов являются человеческими. В других выбранных воплощениях вариабельные области похожих антител (обычно произведенных не из человека) могут производиться или специфично приспосабливаться для улучшения свойств связывания или снижения иммуногенности молекулы. В этом отношении, вариабельные области, полезные для настоящего изобретения, могут быть подобными областям человека или иначе изменены путем включения чужеродных аминокислотных последовательностей. Под антителом, подобным антителу человека понимают антитело, произведенное не из человека,обычно мышиное антитело, которое сохраняет или в основном сохраняет антиген-связывающие свойства родственного антитела, но которое является менее иммуногенным для людей. Это может достигаться различными способами, включающими (а) трансплантацию полностью нечеловеческих вариабельных доменов в константную область человека для получения химерных антител; (b) трансплантацию, по крайней мере, части одной или более нечеловеческих комплементарно определяемых областей (CDR) в-9 007388 основные и константные области человека с или без удерживания критических основных остатков; или(с) переноса полностью нечеловеческих вариабельных доменов, но накрывание их с помощью человекоподобной секции путем замещения поверхностных остатков. Такие способы описаны Morrison и др.,Proc. Natl. Acad. Sci. 81: 6851-5 (1984); Morrison и др., Adv. Immunol. 44: 65-92 (1988); Verhoeyen и др.,Science 239: 1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun. 28: 489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun. 31: 169217 (1994) и US 5585089, 5693761 и 5693762, все приведены здесь только в качестве ссылки. Специалисту в данной области техники ясно, что методики, описанные выше в группе (а), производят классические химерные антитела. В контексте настоящей заявки термин химерные антитела обозначает любое антитело, где иммунореактивную область или сайт получают или производят из первых типов и константную область (которая может быть интактной, частичной или модифицированной в соответствии с настоящим изобретением) получают из вторых типов. В предпочтительных воплощениях антиген-связывающая область или сайт получен не из человека (например, мыши) и константная область- из человека. Хотя иммуногенная специфичность вариабельной области обычно не зависит от ее источника, константная область человека с меньшей вероятностью вызывает иммунный ответ у человека по сравнению с константной областью, полученной не из человека. Предпочтительно, вариабельные домены тяжелой и легкой цепей изменяют, по крайней мере, частичным замещением одного или более CDR, и, при необходимости, частичным замещением основной области и изменением последовательности. Хотя CDR могут быть получены из антитела того же класса или подкласса, что и антитело, из которого произведены основные области, предусматривается, что CDR производят из антитела другого класса и, предпочтительно, из антитела других типов. Следует заметить,что может потребоваться замещение всех CDR на все CDR из донорной вариабельной области для переноса антиген-связывающей способности одного вариабельного домена на другой. Скорее может быть необходим только перенос тех остатков, которые необходимы для поддержания антиген-связывающего сайта. Учитывая разъяснения, приведенные в US 5585089, 5693761 и 5693762, это возможно осуществить специалисту в данной области техники путем проведения обычных экспериментов или методом проб и ошибок с получением функционального антитела с пониженной иммуногенностью. Несмотря на изменения в вариабельной области, специалисту в данной области техники ясно, что модифицированные антитела данного изобретения могут включать антитела или их иммунореактивные фрагменты, в которых, по крайней мере, часть одного или более доменов константной области делетирована или изменена для обеспечения необходимых биохимических характеристик, таких как повышение локализации в опухоли или пониженный период полувыведения из сыворотки по сравнению с антителом приблизительно той же иммуногенности, включающим природную или неизмененную константную области. В предпочтительных воплощениях константная область модифицированных антител содержит константную область человека. Модификации константных областей, пригодных для настоящего изобретения, включают добавления, делеции или замещения одной или более аминокислот в одном или более доменах. Так, описанные здесь модифицированные антитела могут включать изменения или модификации в одном или более из трех константных доменов тяжелой цепи (СH1, СH2 или СH3) и/или константном домене легкой цепи (CL). Как будет более подробно описано ниже и показано в примерах, предпочтительные воплощения изобретения включают модифицированные константные области, в которых один или более доменов частично или полностью делетированы. В особенно предпочтительных воплощениях модифицированные антитела включают конструкции с делетированным доменом или их варианты, в которых полностью удален СH2 домен (СH2 конструкции). В других предпочтительных воплощениях пропущенный домен константной области замещен на короткий аминокислотный спейсер (например, 10 остатков), который обеспечивает некоторую молекулярную подвижность, обычно придаваемую отсутствием константной области. Как показано ранее, хорошо известны субъединичные структуры и трехмерная конфигурация константных областей различных иммуноглобулиновых классов. Например, СH2 домен IgG Fc области человека обычно простирается от 231 остатка до 340 остатка при обычной системе нумерации. СH2 домен является уникальным в том, что он не тесно связан с другим доменом. Наоборот, две N-связанных родственных углеводородных цепи расположены между двумя СH2 доменами интактной природной молекулыIgG. Хорошо известно, что СH3 домен простирается от СH2 домена до С-конца IgG молекулы и включает приблизительно 108 остатков, тогда как область петли IgG молекулы объединяет СH2 домен с СH1 доменом. Эта область петли включает в себя порядка 25 остатков и является подвижной, тем самым позволяя двум N-концам антиген-связывающих областей двигаться независимо. Помимо их конфигурации в уровне техники хорошо известно, что константная область медиирует некоторые эффекторные функции. Например, связывание С 1 компонента системы комплемента с антителами активирует систему комплемента. Активация комплемента важна для опсонизации и лизиса клеточных патогенов. Активация комплемента также стимулирует вспомогательный отклик и может также заключаться в аутоиммунной гиперчувствительности. Кроме того, антитела связываются с клетками через Fc область, с сайтом Fc рецептора на Fc области антитела, связывающимся с Fc рецептором (FcR) в клетке. Существует ряд Fc рецепторов, которые являются специфичными для различных классов антител, включая IgG (гамма-рецепторы), IgE (эта-рецепторы), IgA (альфа-рецепторы) и IgM (мю-рецепторы).- 10007388 Связывание антитела с Fc рецепторами на поверхностях клетки вызывает ряд важных и разнообразных биологических откликов, включающих поглощение и разрушение антитело-связанных частиц, выведение иммунных комплексов, лизис связанных с антителом клеток-мишеней клетками-киллерами (называемая антитело-зависимой опосредованной клетками цитотоксичностью, или ADCC), высвобождение вспомогательных медиаторов, перенос через плаценту и контроль производства иммуноглобулинов. Хотя различные Fc рецепторы и сайты рецепторов изучены до некоторой степени, остается много неизвестного относительно их местонахождения, структуры и функционирования. Не ограничивая объем настоящего изобретения, предполагается, что антитела, включающие модифицированные константные области, обеспечивают измененные функции эффектора, которые, в свою очередь, изменяют биологический профиль вводимого антитела. Например, делеция или инактивация (с помощью мутаций или другими способами) домена константной области может понижать связывание Fc рецептора циркулирующего модифицированного антитела, тем самым повышая локализацию в опухоли. В других случаях может быть так, что модификации константной области, согласно данному изобретению, усредняют связывание комплемента и, следовательно, снижают период полувыведения из сыворотки и неспецифическую ассоциацию конъюгированного цитотоксина. Еще одни модификации константной области могут использоваться для расщепления дисульфидных связей или олигосахаридных групп,что позволяет повысить локализацию благодаря повышению специфичности антигена или подвижности антитела. Вообще, специалисту в данной области техники ясно, что антитела, модифицированные, как здесь описано, могут вызывать ряд острых эффектов, которые могут оцениваться или нет. Однако, как показано на примерах ниже, полученный физиологический профиль, биодоступность и другие биохимические эффекты модификаций, такие как локализация в опухоли и период полувыведения из сыворотки,могут быть легко измерены и оценены с помощью хорошо известных иммунологических технологий без многочисленных экспериментов. Аналогично, модификации константной области в соответствии с данным изобретением могут быть легко получены хорошо известными технологиями биохимической или молекулярной инженерии, исходя из знаний специалиста в данной области техники. В этом отношении прилагающиеся здесь примеры обеспечивают различные конструкции, имеющие константные области, модифицированные в соответствии с настоящим изобретением. Более конкретно, примерные конструкции включают химерные антитела и антитела, подобные антителам человека, имеющие константные области человека с удаленным СH2 доменом. Специалисту в данной области техники ясно, что такие конструкции являются особо предпочтительными благодаря их регуляторным свойствам СH2 домена на скорость катаболизма антитела. Антитела с делетированным доменом СН 2, приведенные в примерах и фигурах, получены из химерного С 2 В 8 антитела, которое является иммуноспецифичным для CD20 вогнутого В-клеточного антигена и антитела СС 49, подобного антителам человека, которое является специфичным для TAG 72 антигена. Как описано подробно ниже, обе конструкции с делетированным доменом получены из подходящего вектора (IDEC Pharmoceuticals, Сан-Диего), кодирующего константный домен IgGl человека. По существу, вектор разработан для делетирования СH2 домена и получения модифицированного вектора экспрессии константной области IgGl с делетированным доменом. Гены, кодирующие мышиную вариабельную область С 2 В 8 антитела или вариабельную область антитела СС 49, подобного антителу человека, затем встраивают в модифицированный вектор и клонируют. При экспрессии в трансформированных клетках эти векторы обеспечивают huCC49.CH2 или С 2 В 8.СН 2 соответственно. Здесь показано, что эти конструкции проявляют ряд свойств, которые делают их особенно привлекательными кандидатами для использования пациентами с подавлением костного мозга, больными раком, или пациентами, больными раком, которые подвергались потенциально дополнительному лечению с подавлением костного мозга. Следует заметить, что приведенные ранее примерные конструкции получают для конденсации СH3 домена напрямую с областью петли соответствующих модифицированных антител. В других конструкциях может требоваться наличие пептидного спейсера между областью петли и модифицированными СH2 и/или СH3 доменами. Например, сходные конструкции могут экспрессироваться с делетированным СH2 доменом и оставшийся СH3 домен (модифицированный или немодифицированный) связан с областью петли через 5-20 аминокислотный спейсер. В этом отношении один предпочтительный спейсер имеет аминокислотную последовательность IGKTISKKAK (Seq. ID No.l). Такой спейсер может вводиться, например, для обеспечения того, чтобы регуляторные элементы константного домена оставались свободными и доступными или того, что область петли оставалась подвижной. Однако следует заметить,что аминокислотные спейсеры могут, в некоторых случаях, быть иммуногенными и вызывать нежелательный иммунный ответ против конструкции. Соответственно, предпочтительно любой спейсер, добавляемый к конструкции, является относительно неиммуногенным или, еще более предпочтительно, вообще не включен, если можно сохранить необходимые биохимические качества модифицированных антител. Кроме делеции цельных доменов константной области, ясно, что антитела настоящего изобретения могут быть получены частичной делецией или замещением нескольких или даже одной аминокислоты. Например, мутация одной аминокислоты в выбранных областях СH2 домена может быть достаточной для- 11007388 существенного снижения Fc связывания и тем самым повышения локализации в опухоли. Аналогично для простой делеции может потребоваться модулирование части одного или более доменов константной области, которые контролируют функции эффектора (например, связывание CLQ комплемента). Такие частичные делеции константной области могут улучшать выбранные характеристики антитела (период полувыведения из сыворотки), оставляя другие нужные функции, связанные с нетронутым доменом константной области субъекта. Более того, как показано выше, константные области указанных антител могут быть модифицированы мутацией или замещением одной и более аминокислот, которые повышают профиль полученной конструкции. В этом отношении возможно изменение активности с помощью сохранения сайта связывания (например, Fc связывания), по существу сохраняя конфигурацию и иммуногенный профиль модифицированного антитела. Еще одно предпочтительное воплощение может включать добавление одной или более аминокислот к константной области для повышения необходимых характеристик, таких как функция эффектора или обеспечение большего присоединения цитотоксинов или углеводородов. В этих воплощениях может потребоваться вставка или повторение конкретных последовательностей, полученных из выбранных доменов константной области. Следуя методике выделенного генетического материала для получения модифицированных антител, расположенной выше, гены обычно встраиваются в вектор экспрессии для введения в клеткихозяева, которые могут использоваться для получения необходимого количества модифицированного антитела. Термин вектор или вектор экспрессии, который здесь используется в описании и формуле изобретения, обозначает векторы, использующиеся в соответствии с настоящим изобретением, как связующее вещество для введения и экспрессии в желаемый ген в клетке. Как известно специалисту в данной области техники, такие векторы могут легко выбираться из группы, состоящей из плазмид, фагов, вирусов и ретровирусов. Вообще, векторы для данного изобретения включают маркер селекции, подходящие сайты рестрикции для облегчения клонирования нужного гена и способности проникать и/или реплицировать в эукариотических или прокариотических клетках. В целях данного изобретения могут использоваться многочисленные системы векторов экспрессии. Например, один класс векторов использует элементы ДНК, которые получены из вирусов животных,таких как бычий папиллома-вирус, полиома-вирус, аденовирус, вирус vaccinia, бакуловирус, ретровирусы (RSV, MMTV или MOMLV) или SV40 вирус. Другие включают применение полицистронных систем с внутренними сайтами связывания рибосомы. Кроме того, клетки, которые содержат ДНК в их хромосомах, могут выбираться введением одного или более маркеров, которые позволяют отобрать клеткихозяева для трансфекции. Маркер может обеспечивать прототрофность ауксотрофного хозяина, биоцидную резистентность (например, антибиотики) или резистентность к тяжелым металлам, таким как медь. Выбранный маркерный ген может либо напрямую связываться с экспрессирующимися ДНК-последовательностями, либо вводиться в ту же клетку сопутствующей трансформацией. Дополнительные элементы могут также потребоваться для оптимального синтеза мРНК. Эти элементы могут включать сдвоенные сигналы, а также промоторы транскрипции, энхансеры и терминальные сигналы. В особенно предпочтительных воплощениях клонированные гены вариабельных областей встраивают в вектор экспрессии в гены тяжелой и легкой цепи константной области (предпочтительно человека), модифицированные как описано выше. Предпочтительно, это выполняется с помощью подходящего вектора экспрессии IDEC, Inc., называющегося NEOSPLA. Этот вектор содержит цитомегаловирусный промотор/энхансер, бета-глобиновый главный промотор мыши, источник репликации SV40, полиаденилированную последовательность бычьего гормона роста, экзон 1 и экзон 2 неомизинфосфотранферазы,ген дегидрофолатредуктазы и лидерную последовательность. В примерах ниже показано, что этот вектор приводит к очень высокому уровню экспрессии антител при введении генов в вариабельную и константную область, трансфекции в СНО клетках с последующим отбором в содержащей G 418 среде и введением метотрексата. Эта система вектора по существу описана в общедоступных US 5736137 и 5658570, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Эта система обеспечивает высокие уровни экспрессии, а именно 30 пг/клетка/день. В других предпочтительных воплощениях модифицированные антитела настоящего изобретения могут экспрессироваться с помощью полицистронных конструкций, таких как описано в родственной заявке US 60/331481, поданной 16.11.2001 и приведенной здесь полностью. В этих новых системах экспрессии интересующие продукты множественных генов, таких как тяжелые и легкие цепи антител, могут быть получены из одной полицистронной конструкции. Эти системы успешно используют внешний рибосомальный входящий сайт (IRES) для обеспечения относительно высоких уровней модифицированных антител в эукариотических клетках-хозяевах. Сходные IRES последовательности описаны в US 6193980,который также приведен здесь. Специалисту в данной области техники ясно, что такие системы экспрессии могут использоваться для эффективного производства полной цепочки модифицированных антител,описанных в данном изобретении. Вообще, однажды получив один вектор или ДНК-последовательность, содержащие модифицированное антитело, вектор экспрессии может вводиться в подходящую клетку-хозяин. Так клетки-хозяева- 12007388 могут быть трансформированы. Введение плазмиды в клетку-хозяин может осуществляться различными технологиями, хорошо известными специалисту в данной области техники. Они включают, но не ограничиваются, трансфекцию (включая электрофорез и электропорацию), вливание протопласты, осаждение фосфатом кальция, клеточное слияние с непокрытой ДНК, микроинъекцию и заражение интактным вирусом. Смотри Ridgway, A. A. G. "Mammalian Expression Vectors" Chapter 24.2, pp. 470-472; Vectors, Rodriguez and Denhardt, Eds. (Butterworths, Boston, Mass. 1988). Более предпочтительно, введение плазмиды в хозяина осуществляется с помощью электропорации. Трансформированные клетки выращиваются в подходящих условиях для получения легких цепей и тяжелых цепей, и проводится синтез протеина тяжелой и/или легкой цепи. Примерные методики эксперимента включают фермент-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA), радиоиммуноисследование (RIA) или сортировочный анализ клеток, активированных флуоресценцией (FACS), иммуногистохимию и им подобные. Использующийся здесь термин трансформация применяют в широком смысле для обозначения любого введения ДНК в реципиентную клетку хозяина, которое изменяет генотип и постепенно приводит к изменению реципиентной клетки. На протяжении всего описания клетки-хозяева обозначают клетки, которые трансформированы векторами, сконструированными с помощью технологий рекомбинантных ДНК и содержащие, по крайней мере, один гетерологичный ген. Как здесь определено, антитело или его модификация, полученные с помощью клетки-хозяина, осуществляются благодаря этой трансформации. В описанных процессах для выделения антител из рекомбинантных хозяев, термины клетка и клеточная культура используются поочередно для обозначения источника антитела, если это не указано иначе. Другими словами, извлечение антитела из клеток может означать либо из потока цельных клеток, либо из клеточной культуры,содержащей среду и суспендированные клетки. Линия клеток-хозяев, использующаяся для экспрессии протеина, является, наиболее предпочтительно, линией млекопитающего; специалист в данной области техники приписывает способности предпочтительно определять конкретные линии гостевых клеток, которые наилучшим образом подходят для нужного экспрессирующегося генетического продукта. Примерные линии клеток-хозяев включают, но не ограничиваются ими, DG44 и DUXB11 (линии яичников китайских хомяков, DHFR минус), HELA(человеческая шейная карцинома), CVI (линия детенышей обезьян), COS (производное CVI с SV40 Т антигеном), R1610 (фибробласты китайских хомяков), BALBC/3T3 (мышиный фибробласт), НАК (линия почек хомяков), SP2/O (миелома мыши), Р 3.times.63-Ag3.653 (миелома мыши), BFA-1c1BPT (бычьи эндотелиальные клетки), RAJI (человеческие лимфоциты) и 293 (почки человека). СНО клетки являются особо предпочтительными. Линии клеток-хозяев обычно доступны из коммерческих источников, American Tissue Culture Collection или из опубликованной литературы.In vitro производство позволяет получить большое количество нужных антител. Методики культивации клеток млекопитающих в условиях культуры ткани известны из уровня техники и включают культуру гомогенной суспензии, например, в реакторе с воздушным мостом или в реакторе длительного перемешивания, или иммобилизованную или задерживающую клеточную культуру, например, пустые волокна, микрокапсулы, на шариках агарозы или керамических пластинках. Для выделения модифицированных антител иммуноглобулины в культуре супернатантов сначала концентрируют, например, осаждением сульфатом аммония, диализом через гигроскопичный материал, такой как PEG, фильтрацией через селективные мембраны, и им подобных. При необходимости и/или если требуется, концентрированные антитела очищают обычными хроматографическими способами, например, гельфильтрацией, ионообменной хроматографией, хроматографией на DEAE-целлюлозе или (иммуно-) аффинной хроматографией. Модифицированные гены иммуноглобулина могут также экспрессироваться клетками не млекопитающих, такими как бактерии и дрожжи. В этом отношении понятно, что различные одноклеточные микроорганизмы не млекопитающих, такие как бактерии, могут также трансформироваться; а именно,они способны выращиваться в культурах или ферментироваться. Бактерии, которые пригодны для трансформирования, включают ряд энтеробактерий, таких как штаммы Escherichia coli; Salmonella; Bacillaceae, такая как Bacillus subtilis; Pneumococcus; Streptococcus и Haemophilus influenzae. Далее будет понятно, что при экспрессии в бактериях тяжелые цепи и легкие цепи иммуноглобулина обычно становятся частью включенных тел. Цепи затем должны быть выделены, очищены и затем собраны в функциональные молекулы иммуноглобулина. Кроме прокариот могут также использоваться эукариотические микроорганизмы. Saccharomycescerevisiae, или обычные пекарские дрожжи, наиболее широко используются среди эукариотических микроорганизмов, хотя ряд других линий является общедоступным. Для экспрессии Saccharomyces обычно используется плазмида YRp7, например, (Stinchcomb и др.,Nature, 282:39 (1979); Kingsman и др., Gene, 7:141 (1979); Tschemper и др., Gene, 10:157 (1980. Эта плазмида уже содержит trpl ген, который является маркером селекции для мутированной линии дрожжей,потерявших способность расти в триптофане, например, АТСС No. 44076 или РЕР 4-1 (Jones, Genetics,85:12 (1997. Наличие trpl группы в качестве характеристики генома клетки-хозяина дрожжей обеспечивает эффективное окружение для определения трансформации при росте в отсутствии триптофана.- 13007388 Несмотря на то, какие получаются клинически полезные количества, модифицированные антитела настоящего изобретения могут получаться в любой конъюгированной (т.е. иммуноконъюгат) или неконъюгированной формах. В частности, антитела настоящего изобретения могут конъюгироваться с цитотоксинами, такими как радиоизотопы, терапевтические агенты, цитостатические агенты, биологические токсины или пролекарства. Альтернативно, модифицированные антитела данного изобретения могут получаться в неконъюгированной или открытой форме для подавления природных защитных механизмов у субъекта, включающих комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) и зависящую от антитела клеточную токсичность (ADCC) для расщепления злокачественных клеток. В особо предпочтительных воплощениях модифицированные антитела могут конъюгироваться с радиоизотопами, такими как 90Y, 125I, 131I, 123I, 111In, 105Rh, 153Sm, 67Cu, 67Ga, 166Ho, 177Lu, 186Re и 188Re, используя любой из известных хелаторов или прямых меток. В других воплощениях описанные композиции могут включать модифицированные антитела, соединенные с лекарственными средствами, пролекарствами или модификаторами биологического отклика, такими как метотрексат, адриамицин и лимфокины, такие как интерферон. Еще одно воплощение настоящего изобретения включает применение модифицированных антител,конъюгированных со специфическими биотоксинами, такими как рицин или диптерий токсин. В еще одном воплощении модифицированные антитела могут образовывать комплекс с другими иммунологически активными лигандами (например, антитела или их фрагменты), где конечная молекула связана с неопластической клеткой и клеткой-эффектором, такой как Т-клетка. Выбор того, конъюгированное или неконъюгированное модифицированное антитело использовать, зависит от типа и состояния рака, применения побочного лечения (например, химиотерапии или внешней радиации) и состояния пациента. Понятно, что специалист в данной области техники легко может сделать такой выбор на основании данного описания. Цитотоксин или цитотоксический агент обозначает любой агент, который мешает росту и пролиферации клеток и может снижать, ингибировать или разрушать злокачественные образования при воздействии. Примерные цитотоксины включают, но не ограничиваются ими, радионуклиды, биотоксины,цитостатические или цитотоксические терапевтические агенты, пролекарства, иммунологично активные лиганды и модификаторы биологического отклика, такие как цитокины. Как будет описано более подробно ниже, радионуклидные цитотоксины являются особенно предпочтительными для настоящего изобретения. Однако, любой цитотоксин, который задерживает или замедляет рост злокачественных клеток или уничтожает злокачественные клетки и может связываться с описанными здесь модифицированными антителами, подходит под объем настоящего изобретения. Из предшествующих исследований ясно, что противоопухолевые антитела, меченные изотопами,успешно использовались для разрушения клеток в твердых опухолях, а также в лимфома/лейкемии в животных моделях и, в некоторых случаях, у людей. Радионуклиды действуют путем выработки ионизирующего излучения, которое вызывает множественные витые разрывы в ядерной ДНК, приводящие к смерти клетки. Изотопы, использующиеся для получения терапевтических конъюгатов, обычно производят -, - или -частицы с высокой энергией, имеющие терапевтически эффективную длину волны. Такие радионуклиды убивают клетки, с которыми они тесно соприкасаются, например, опухолевые клетки,к которым присоединяется конъюгат или в которые он вводится. Они обычно имеют незначительное или вообще не имеют действия на нелокализованные клетки. Радионуклиды по существу являются неиммуногенными. В отношении применения радиоактивномеченых конъюгатов, согласно настоящему изобретению,модифицированные антитела могут помечаться напрямую (например, через йодирование) или могут помечаться непрямо путем применения хелатирующих агентов. Используемые здесь фразы непрямая метка и метод непрямой метки означают, что хелатирующий агент ковалентно присоединен к антителу и,по крайней мере, один радионуклид связан с хелатирующим агентом. Такие хелатирующие агенты обычно называют бифункциональными хелатирующими агентами, так как они связывают и полипептид, и радиоизотоп. Особенно предпочтительные хелатирующие агенты включают производные 1-изотиоцикматобензил-3-метилдиотелентриаминпентауксусной кислоты (MX-DTPA) и циклогексилдиэтилентриаминпентауксусной кислоты (CHX-DTPA). Другие хелатирующие агенты включают производныеP-DOTA и EDTA. Особенно предпочтительные радионуклиды для непрямой метки включают 111In и 90Y. Использующиеся здесь фразы прямая метка и метод прямой метки обозначают, что радионуклид ковалентно присоединен непосредственно к антителу (обычно через аминокислотный остаток). Более конкретно, эти методики связывания включают произвольную метку и направленную на сайт метку. В последнем случае мечение направлено на специфические сайты димера или тетрамера, таких как Nсвязанные остатки cахаров, присутствующие только в Fc части конъюгатов. Кроме того, различные методики и практикумы прямого мечения подходят для данного изобретения. Например, технеций-99m меченные антитела могут быть получены способами с обменом лиганда путем восстановления пертехната(ТсO-4) на ионный раствор олова, хелатируя восстановленный технеций в колонке с Сефадексом и используя в колонке антитело, или смешанными методиками мечения, например, инкубированием пертехната, восстанавливающего агента, такого как SnCl2, буферного раствора, такого как раствор фталата натрия и калия, и антитела. В любом случае, предпочтительные радионуклиды для прямой метки антител- 14007388 хорошо известны из уровня техники, и особенно предпочтительным радионуклидом для прямой метки является 131I, ковалентно присоединенный через тирозиновые остатки. Модифицированные антитела в соответствии с изобретением могут быть получены, например, с помощью радиоактивного иодида натрия или кальция и химического окислительного агента, такого как гипохлорит натрия, хлорамин Т или им подобные, или ферментного окислительного агента, такого как лактопироксидаза, глюкозооксидаза и глюкоза. Однако, в целях настоящего изобретения особенно предпочтительным является метод непрямой метки. Из уровня техники известны патентные документы, раскрывающие хелаторы и конъюгаты хелаторов. Например, US 4831175 Gansow описывает полизамещенные хелаты диэтилентриаминпентауксусной кислоты и белковые конъюгаты, их содержащие, а также способы их получения. US 5099069, 5246692,5286850, 5434287 и 5124471 Gansow также относятся к полизамещенным хелатам DTPA. Эти патенты приведены здесь в качестве ссылки. Другими примерами приемлемых хелаторов металлов являются этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), диэтилентриаминпентауксусная кислота (DPTA), 1,4,8,11 тетраазатетрадекан, 1,4,8,11-тетраазатетрадекан-1,4,8,11- тетрауксусная кислота, 1-окса-4,7,12,15-тетраазопентадекан- 4,7,12,15-тетрауксусная кислота или им подобные. Циклогексил-DTPA или CHX-DTPA являются особенно предпочтительными и подробно описаны ниже. Другие подходящие хелаторы, включающие уже описанные, могут легко отличаться специалистом в данной области техники и являются ясными в объеме настоящего изобретения. Подходящие хелаторы, включающие специфичный бифункциональный хелатор для облегчения хелатирования из родственных заявок 08/475,813, 08/475,815 и 08/478,967, предпочтительно выбираются для обеспечения высокого сродства с трехвалентными металлами, проявления повышенного соотношения опухоль/не опухоль и снижения захвата костью, а также большего in vivo удерживания радионуклида в сайтах мишеней, то есть в сайтах В-клеток опухоли лимфомы. Однако, другие бифункциональные хелаторы, которые обладают или не обладают этими характеристиками, известны из уровня техники и могут также успешно использоваться для терапии опухоли. Понятно, что в соответствии с приведенным здесь описанием модифицированные антитела могут конъюгироваться с различными радиоактивными метками для диагностических и терапевтических целей. С этой стороны указанные выше родственные заявки, приведенные здесь в качестве ссылок, описывают радиоактивно меченные терапевтические конъюгаты для диагностической визуализации опухолей до введения терапевтического антитела. In2 В 8 конъюгат включает мышиное моноклональное антитело, 2 В 8, специфичное к антигену CD20 человека. Он связан с 111In посредством бифункционального хелатора, а именно, MX-DTPA (диэтилентриаминпентауксусная кислота), который включает смесь 1 изотиоцианатобензил-3-метил-DТРА и 1-метил-3-изотиоцианато-бензил-DTPA в соотношении 1:1. 111In является особенно предпочтительным в качестве радионуклида из-за того, что примерно от 1 до примерно 10 мкюри могут безопасно вводиться без заметной токсичности; и данные визуализации обычно предсказываются последующим распределением 90Y-меченного антитела. Большинство исследований с визуализацией используют 5 мкюри 111In-мeченноro антитела, так как эта доза является безопасной и повышает эффективность визуализации по сравнению с более низкими дозами, с оптимальной визуализацией в период от трех до шести дней после введения антитела. См., например, Murray, J. Nuc. Med. 26: 3328 (1985) и Carraguillo и др., J. Nuc. Med. 26:67 (1985). Как указано выше, множество радионуклидов являются применимыми для настоящего изобретения,и специалист в данной области техники способен легко определить, какой радионуклид наиболее подходит в определенных случаях. Например, 131I является хорошо известным радионуклидом, использующимся для проведения иммунотерапии. Однако клиническая пригодность 131I может ограничиваться некоторыми факторами, включающими: физический период полувыведения - восемь дней; дегалогенирование иодированного антитела в крови и в сайтах опухоли и характеристики эмиссии (например, большой гамма-компонент), что является недостаточно оптимальным для накопления локализованной дозы в опухоли. С появлением превосходящих хелатирующих агентов возможность присоединения металлических хелатирующих групп к белкам повышает возможность использования других радионуклидов, таких как 111In и 90Y. 90Y обеспечивает некоторые преимущества для использования в радиоиммунотерапии: 64 часовой период полувыведения 90Y является достаточно продолжительным, позволяя накапливать антитело в опухоли и, в противоположность, например, 131I, 90Y является источником чистого бета-излучения высокой энергии без сопровождающегося гамма-облучения при его распаде, в пределах от 100 до 1000 диаметра клетки в ткани. Кроме того, минимальное количество проникающей радиации позволяет вводить амбулаторному больному 90Y-меченные антитела. Дополнительно, поглощение клеткой меченного антитела не требует уничтожения клетки, и локальная эмиссия ионизирующего излучения будет летальной для смежных клеток опухоли с недостатком антигена-мишени. Эффективные однократные дозы для лечения (т.е. терапевтически эффективное количество) 90Yмеченных модифицированных антител колеблются в области от около 5 до около 75 мКи, более предпочтительно, от около 10 до около 40 мКи. Эффективные однократные отдельные лечебные дозы, не вредные для костного мозга, для 131I-меченных антител колеблются от около 5 до около 70 мКи, более предпочтительно, от около 5 до около 40 мКи. Эффективные однократные лечебные отдельные дозы (т.е.- 15007388 может потребоваться трансплантация взятого у той же особи костного мозга) 131I-меченных антител колеблются в области от около 30 до около 600 мКи, более предпочтительно, от около 50 до менее чем 500 мКи. В сочетании с химерным антителом, благодаря более длительному периоду полувыведения при циркулировании по сравнению с мышиными антителами, эффективные однократные лечебные отдельные дозы, не вредные для костного мозга, 131I-меченных химерных антител колеблются в области от около 5 до около 40 мКи, более предпочтительно, менее чем 30 мКи. Критерий визуализации, например, для 111In метки, обычно меньше около 5 мКи. Хотя осуществлялось множество клинических испытаний с 131I и 90Y, из уровня техники известны другие радиоактивные метки, и они используются для похожих целей. Другие радиоизотопы используются для визуализации. Например, дополнительные радиоизотопы, которые подходят под объем данного изобретения, включают, но не ограничиваются ими: 123I, 125I, 32P, 57Co, 64Cu, 67Cu, 77Br, 81Rb, 81Kr, 87Sr,113At и 213Bi. В этом отношении альфа, гамма и бета-источники - все подходят для применения в данном изобретении. Кроме того, ввиду настоящего описания предполагается, что специалист в данной области техники может легко определить, какой радионуклид является приемлемым для выбранного курса лечения без проведения экспериментов. С этой стороны, дополнительные радионуклиды, которые уже используются для клинической диагностики, включают 125I, 123I, 99 Тс, 43 К, 52Fe, 67Ga, 68Ga и 111In. Антитела также помечают различными радионуклидами для возможного использования в направленной иммунотерапии, Peirersz и др., Immunol. Cell Biol. 65: 111-125 (1987). Эти радионуклиды включают 188Re и 186Re,а также 199 Аu и 67 Сu в меньшей степени. US 5460785 раскрывает дополнительные данные, относящиеся к таким радиоизотопам, и приведен здесь в качестве ссылки. Кроме радионуклидов, модифицированные антитела настоящего изобретения могут конъюгироваться или связываться с одним из ряда модификаторов биологического отклика, фармацевтическими агентами, токсинами или иммунологически активными лигандами. Специалисту в данной области техники ясно, что эти нерадиоактивные конъюгаты можно получить, используя различные методики в зависимости от выбранного цитотоксина. Например, конъюгаты с биотином получают, например, по реакции модифицированных антител с активированным эфиром биотина, таким как N-гидроксисукцинимидный эфир биотина. Аналогично, конъюгаты с флуоресцентным маркером могут получаться в присутствии связывающего агента, например, такого, как представлено выше, или по реакции с изотиоцианатом,предпочтительно, флуоресцен-изотиоцианатом. Конъюгаты химерных антител изобретения с цитостатическими/цитотоксическими соединениями и хелатами металлов получают аналогичным способом. Предпочтительными агентами для применения в настоящем изобретении являются цитотоксические лекарственные средства, особенно те, которые используются для лечения рака. Такие лекарственные средства включают, в общем, цитостатические агенты, алкилирующие агенты, антиметаболиты, антипролиферативные агенты, тубулин-связывающие агенты, гормоны и антагонисты гормонов и им подобные. Примерные цитостатики, пригодные для настоящего изобретения, включают алкилирующие вещества, такие как мехлортамин, триэтиленфосфонамид, циклофосфамид, ифосфамид, хлорамбуцил,бусульфан, мелфалан или триазикон, а также соединения нитрозомочевины, такие как кармустин, ломустин или семустин. Другие предпочтительные классы цитотоксических агентов включают, например,семейство антрациклиновых лекарственных средств, винкаиновые лекарственные средства, митомицины, блеомицины, цитотоксические нуклеозиды, семейство птеридиновых лекарственных средств, красители и подофиллотоксины. Особенно предпочтительные представители этих классов включают, например, адриамицин, карминомицин, даунорубицин (дауномицин), доксорубицин, аминоптерин, метотрексат, метоптерин, митрамицин, стрептонигрин, дихлорметотрексат, митомицин С, актиномицин D, порфиромицин, 5-фторурацил, флоксуридин, фторафур, 6-меркаптопурин, цитарабин, цитозинарабинозид,подофиллотоксин или подофиллотоксиновые производные, такие как этопозид или этопозидфосфат,мелфалан, винбластин, винкристин, леурозидин, виндезин, леурозин и им подобные. Другие цитотоксины, приемлемые в соответствии с настоящим описанием, включают таксол, таксан, цитохалазин В, грамицидин D, этидий бромид, эметин, тенопозид, колхицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропанолол и пуромицин и их аналоги или гомологи. Гормоны и антагонисты гормонов, такие как кортикостероиды, например, преднизон, прогестины, например, гидроксипрогестерон или медропрогестерон, эстрогены, например, диэтилстильбестрол, антиэстрогены, например, тамоксифен, андрогены, например, тестостерон и ингибиторы ароматазы, например, аминоглутетимид, также пригодны для настоящего изобретения. Как указано выше, специалист в данной области техники может осуществить химические модификации в желаемые соединения для того, чтобы сделать реакции этого соединения более удобными в целях получения конъюгатов изобретения. Один пример особо предпочтительных цитотоксинов включает представителей или производные энедиинового семейства противоопухолевых антибиотиков, включающих калихеамицин, эсперамицины или динемицины. Эти токсины являются крайне активными и действуют, расщепляя ядерную ДНК, приводя к гибели клетки. В противоположность белковым токсинам, которые могут расщепляться in vivo с образованием многочисленных неактивных, но иммуногенных полипептидных фрагментов, токсины,такие как калихеамицин, эсперамицины и другие энедиины являются маленькими молекулами, которые- 16007388 по существу являются неиммуногенными. Эти непептидные токсины химически связываются с димерами или тетрамерами с помощью методик, известных ранее для метки моноклональных антител и других молекул. Эти методики связывания включают сайт-специфичную связь через N-связанные остатки сахаров, присутствующие только в Fc части конъюгатов. Такие методы сайт-направленного связывания имеют преимущество в снижении возможных эффектов связи на связующие свойства конъюгата. Как указывалось ранее, приемлемые цитотоксины могут включать пролекарство. Использующийся здесь термин пролекарство относится к предшественнику или производной форме фармацевтически активного вещества, которая является менее токсичной по отношению к клеткам опухоли в сравнении с близким лекарственным средством и способна ферментативно активироваться или превращаться в более активную родственную форму. Пролекарства, пригодные для изобретения, включают, но не ограничиваются ими, фосфатсодержащие пролекарства, тиофосфат-содержащие пролекарства, сульфатсодержащие пролекарства, пептидсодержащие пролекарства, -лактамсодержащие пролекарства, необязательно замещенные феноксиацетамидсодержащие пролекарства или необязательно замещенные фенилацетамидзамещенные пролекарства, 5-фторцитозин и другие пролекарства 5-фторуридина, которые могут превращаться в более активное цитотоксическое свободное лекарственное средство. Следующие примеры цитотоксических лекарственных средств, которые могут превращаться в пролекарственную форму для применения в настоящем изобретении, включают химиотерапевтические агенты, описанные выше. Среди других цитотоксинов очевидно, что антитело также может связываться с биотоксином, таким как субъединица А рицина, абрин, диптериятоксин, ботулин, циангинозины, сакситоксин, шигатоксин,столбнячный токсин, тетродоксин, трихотецен, веррукологен или токсичный фермент. Предпочтительно,такие конструкции могут быть получены с помощью технологий генной инженерии, которые обеспечивают непосредственную экспрессию конструкции антитело-токсин. Другие модификаторы биологического отклика, которые могут связываться с модифицированными антителами настоящего изобретения,включают цитокины, такие как лимфокины и интерфероны. Кроме того, как показано выше, подобные конструкции могут также использоваться для связывания иммунологически активных лигандов (например, антител или их фрагментов) с модифицированными антителами настоящего изобретения. Предпочтительно, эти иммунологически активные лиганды направляются к антигенам на поверхности иммуноактивных клеток-эффекторов. В этих случаях конструкции могут использоваться для переноса клетокэффекторов, таких как Т-клетки или клетки NK, в непосредственную близость к опухолевым клеткам,несущим антиген, ассоциированный с опухолью, тем самым вызывая необходимый иммунный ответ. Ввиду настоящего описания предполагается, что специалист в данной области техники может легко получить такие конструкции, используя обычные методики. Другим классом пригодных цитотоксинов, которые могут использоваться в сочетании с описанными модифицированными антителами, являются радиосенсибилизирующие лекарственные средства, которые могут эффективно направляться в опухолевые клетки. Такие лекарственные средства повышают чувствительность к ионизирующему излучению, тем самым повышая эффективность радиотерапии. Конъюгат антитела внутри опухолевой клетки будет доставлять радиосенсибилизатор ближе к ядру там,где радиосенсибилизация будет максимальной. Несвязанный радиосенсибилизатор, связывающий модифицирующие антитела, выводится быстро из крови, локализуя оставшийся радиосенсибилизаторный агент в опухоли-мишени и обеспечивая минимальный захват нормальными тканями. После быстрого выведения из крови дополнительная радиотерапия проводится одним из трех способов: 1) внешний пучок излучения направлен специфично к опухоли, 2) радиоактивность, непосредственно направленная в опухоль, или 3) систематическая радиоиммунотерапия с тем же антителом-мишенью. Потенциально привлекательным вариантом данного подхода является присоединение терапевтического радиоизотопа к радиосенсибилизирующему иммуноконъюгату, тем самым обеспечивая легкость введения пациенту одиночного лекарственного средства. Независимо от того, являются ли описанные антитела конъюгированными или неконъюгированными, ясно, что главным преимуществом настоящего изобретения является возможность использовать эти антитела для пациентов с подавлением костного мозга, особенно для тех, кто подвергался или подвергается дополнительным терапиям, таким как радиотерапия или химиотерапия. Так, хороший профиль доставки (то есть относительно короткое время существования в сыворотке и повышенная локализация) модифицированных антител делает их особенно полезными для лечения пациентов, которые имеют пониженные запасы красного костного мозга и являются чувствительными к токсичности для костного мозга. В этом отношении уникальный профиль доставки модифицированных антител делает их очень эффективными для введения радиоактивно меченых конъюгатов для пациентов с подавлением костного мозга,больных раком. Как таковые модифицированные антитела являются полезными в конъюгированной или неконъюгированной форме для пациентов, которые проходили предшествующие дополнительные терапии, такие как облучение внешним пучком или химиотерапия. В других предпочтительных воплощениях модифицированные антитела (в конъюгированной и неконъюгированной форме) могут использоваться в совместных терапевтических режимах с химиотерапевтическими агентами. Специалисту в данной области техники ясно, что такие терапевтические режимы могут включать последовательное, одновременное,конкурентное или одинаково протяженное по времени введение описанных антител и одного или более- 17007388 химиотерапевтических агентов. Особенно предпочтительные воплощения данного аспекта изобретения включают введение радиоактивно меченого антитела. Хотя модифицированные антитела могут вводиться как описано выше, следует отметить, что в других воплощениях конъюгированные и неконъюгированные модифицированные антитела могут вводиться пациентам, больным только раком, в качестве терапевтического агента первой линии. В таких воплощениях модифицированные антитела могут вводиться пациентам, имеющим нормальные или средние запасы красного костного мозга, и/или пациентам, которые не подвергались и не подвергаются дополнительным терапиям, таким как облучение внешним пучком или химиотерапия. Однако, как описано выше, выбранные воплощения изобретения включают введение модифицированных антител пациентам с подавлением костного мозга в сочетании или соединении с одной или более дополнительными терапиями, такими как радиотерапия или химиотерапия (а именно, объединенные терапевтические режимы). Используемое здесь введение модифицированных антител в сочетании или в соединении с дополнительной терапией обозначает последовательное, одновременное, одинаково протяженное по времени, конкурентное, сопутствующее или объединенное введение или применение терапии и описанных антител. Специалисту в данной области техники ясно, что введение или применение различных компонентов объединенного терапевтического режима может привести к повышению общей эффективности лечения. Например, химиотерапевтические агенты могут вводиться стандартными, хорошо известными путями лечения в течение нескольких недель радиоиммуноконъюгатами настоящего изобретения. Наоборот, связанные с цитотоксином модифицированные антитела могут вводиться внутривенно с последующим облучением внешним пучком локализованной опухоли. В других воплощениях модифицированные антитела могут вводиться конкурентно с одним или более выбранными химиотерапевтическими агентами за один прием. Специалист в данной области техники (например, опытный онколог) может легко определить эффективные комбинированные терапевтические режимы без проведения экспериментов, на основании выбранной дополнительной терапии и описания настоящего изобретения. В этом отношении ясно, что объединение модифицированного антитела (без или с цитотоксином) и химиотерапевтического агента может вводиться в любом порядке и в любой промежуток времени, которые обеспечивают терапевтическую пользу пациенту. Так, химиотерапевтический агент и модифицированное антитело могут вводиться в любом порядке или конкурентно. В выбранных воплощениях модифицированные антитела настоящего изобретения вводят пациенту, который ранее подвергался химиотерапии. В других воплощениях модифицированные антитела и химиотерапевтическое лечение проводят по существу одновременно или конкурентно. Например, пациенту можно вводить модифицированное антитело, проводя курс химиотерапии. В предпочтительных воплощениях модифицированное антитело вводят в течение одного года при любом химиотерапевтическом агенте или лечении. В других предпочтительных воплощениях модифицированное антитело вводят в течение 10, 8, 6, 4 или 2 месяцев при любом химиотерапевтическом агенте или лечении. В других предпочтительных воплощениях модифицированное антитело вводят в течение 4, 3, 2 или 1 недели при любом химиотерапевтическом агенте или лечении. В еще одних предпочтительных воплощениях модифицированное антитело вводят в течение 5, 4,3, 2 или 1 дня при выбранном химиотерапевтическом агенте или лечении. Далее будет понятно, что два агента или типа лечения пациента могут проводиться в течение часов или минут (то есть по существу одновременно). Кроме того, в соответствии с настоящим изобретением пациент с подавлением костного мозга обозначает любого пациента, проявляющего пониженные компоненты крови. Специалисту в данной области техники ясно, что существуют определенные параметры компонентов крови, обычно использующиеся в качестве клинических индикаторов подавления костного мозга, и каждый может легко определить степень, в которой подавление костного мозга встречается у пациента. Примерами компонентов, использующих измерения подавления костного мозга, являются абсолютные нейтрофильные компоненты(ANC) или тромбоцитные компоненты. Такое подавление костного мозга или частичное удаление костного мозга может быть результатом различных биохимических расстройств или заболеваний или, более вероятно, результатом предшествующей химиотерапии или радиотерапии. В этом отношении специалисту в данной области техники ясно, что пациенты, которые подвергались обычной химиотерапии, обычно имеют пониженные запасы красного кровяного мозга. Как описано выше, таких субъектов часто нельзя лечить с помощью оптимальных уровней цитотоксинов (то есть радионуклидов) из-за неприемлемых побочных эффектов, таких как анемия или иммуносуппрессия, которые приводят к повышению смертности или болезненности. Более конкретно конъюгированные или неконъюгированные модифицированные антитела настоящего изобретения могут использоваться для эффективного лечения пациентов с показателем ANC менее чем около 2000/мм 3 или показателями тромбоцитов менее чем около 150000/мм 3. Более предпочтительно, модифицированные антитела настоящего изобретения могут использоваться для лечения пациентов,имеющих ANC менее чем около 1500/мм 3, менее чем около 100/мм 3 или даже более предпочтительно менее чем около 500/мм 3. Аналогично, модифицированные антитела настоящего изобретения могут использоваться для лечения пациентов, имеющих показатель тромбоцитов менее чем около 75000/мм 3, менее чем около 50000/мм 3 или даже менее чем около 10000/мм 3. В общем смысле специалист в данной- 18007388 области техники способен легко определить пациента с подавлением костного мозга, используя управляющие инструкции выполнения и процедуры. Как показано выше, многие пациенты с подавлением костного мозга подвергаются курсам лечения,включающим химиотерапию или радиотерапию внешним пучком. В последнем случае источник внешнего облучения предназначен для локального облучения злокачественности. Для способов имплантантной радиотерапии радиоактивные реагенты хирургически помещают в злокачественность, тем самым селективно облучая сайт заболевания. В любом случае, описанные модифицированные антитела могут использоваться для лечения опухолевых заболеваний у пациентов с подавлением костного мозга независимо от причины и особенно могут использоваться в сочетании с облучением внешним пучком или имплантантной радиотерапией. В этом отношении далее будет понятно, что модифицированные антитела данного изобретения могут использоваться в сочетании или в соединении с любым химиотерапевтическим агентом или агентами или режимами (например, проводя совместный терапевтический режим), которые расщепляют, понижают, ингибируют или контролируют рост опухолевых клеток in vivo. Как уже обсуждалось, такие агенты часто приводят к снижению запасов красного костного мозга. Это снижение может компенсироваться, в целом или частично, уменьшенной токсичностью для костного мозга, соединений настоящего изобретения, что преимущественно позволяет осуществлять активное лечение опухоли у таких пациентов. В других предпочтительных воплощениях описанные здесь радиоактивно меченные иммуноконъюгаты могут эффективно использоваться с радиосенсибилизаторами, которые повышают восприимчивость опухолевых клеток к радионуклидам. Например, радиосенсибилизирующие соединения могут вводиться после того, как радиоактивно меченные антитела в основном выведутся из кровяного потока, но пока сохраняются терапевтически эффективные уровни в сайте опухоли или опухолей. В соответствии с данными аспектами изобретения, примерные химиотерапевтические агенты, которые подходят для данного изобретения, включают алкилирующие агенты, винкаиновые алкалоиды (например, винкристин и винбластин), прокарбазин, метотрексат и преднизон. Четырехчленная комбинация МОРР (мехлетамин (горчичный азот), винкристин (онковин), прокарбазин и преднизон) является очень эффективной для лечения различных типов лимфомы и составляет предпочтительное воплощение настоящего изобретения. Для МОРР-резистентных пациентов могут использоваться ABVD (например, адриамицин, блеомицин, винбластин и дакарбазин), ChlVPP (хлорамбуцил, винбластин, прокарбазин и преднизон), CABSDeVita и др., (1997) и указанные здесь ссылки для стандартных доз и процедур. Эти терапии могут применяться в неизменном виде или могут быть изменены при необходимости для конкретного пациента, в сочетании с одним или более описанными здесь модифицированными антителами. Дополнительные режимы, которые подходят для настоящего изобретения, включают применение одиночных алкилирующих агентов, таких как циклофосфамид или хлорамбуцил, или комбинаций, таких как CVP (циклофосфамид, винкристин и преднизон), CHOP (CVP и доксорубицин), С-МОРР (циклофосфамид, винкристин, преднизон и прокарбазин), CAP-ВОР (CHOP плюс прокарбазин и блеомицин), mBACOD (CHOP плюс метотрексат, блеомицин и лейковорин), РrоМАСЕ-МОРР (преднизон, метотрексат,доксорубицин, циклофосфамид, этопозид и лейковорин плюс стандартный МОРР), ProMACE-CytaBOM(преднизон, доксорубицин, циклофосфамид, этопозид, цитарабин, блеомицин, винкристин, метотрексат и лейковорин) и МАСОР-В (метотрексат, доксорубицин, циклофосфамид, винкристин, фиксированная доза преднизона, блеомицин и лейковорин). Специалист в данной области техники может легко определить стандартные дозы и схемы для каждого из этих режимов. CHOP также может объединяться с блеомицином, метотрексатом, прокарбазином, горчичным азотом, цитозинарабинозидом и этопозидом. Другие пригодные химиотерапевтические агенты включают, но не ограничиваются ими, 2-хлордезоксиаденозин (2-CDA), 2'- дезоксикоформицин и флударабин. Для пациентов с промежуточной или высокой степенью NHL, которые не могут достигать облегчения или спада, используется облегчающая терапия. В облегчающих терапиях используются такие лекарственные средства как цитозин-арабинозид, цисплатин, этопозид и ифосфамид, вводимые отдельно или в комбинации. В рецидивных или агрессивных формах определенных опухолевых заболеваний часто используются следующие составы: IMVP-16 (ифосфамид, метотрексат и этопозид), MIME (метил-gag,ифосфамид, метотрексат и этопозид), DHAP (дексаметазон, высокая доза цитарабина и цисплатина),ESHAP (этопозид, метилпредизолон, HD цитарабин, цисплатин), SEPP(B) (циклофосфамид, этопозид,прокарбазин, преднизон и блеомицин) и CAMP (ломустин, митоксантрон, цитарабин и преднизон), каждый с известными скоростями дозы и схемами. Количество химиотерапевтического агента, использующегося в сочетании с модифицированными антителами данного изобретения, могут изменяться в зависимости от субъекта и могут вводиться известными из уровня техники способами. Смотри, например, Bruce A. Chabner и др., Antineoplastic Agents, вHardman и др., eds. , 9th ed. 1996). Как указывалось выше, модифицированные антитела настоящего изобретения, иммунореактивные фрагменты или их рекомбинанты могут вводиться в фармацевтически эффективном количестве для лечения злокачественностей у млекопитающего in vivo. В этом отношении ясно, что описанные антитела могут готовиться для облегчения введения и обеспечения стабильности активного агента. Предпочтительно, фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением включают фармацевтически приемлемый нетоксичный стерильный носитель, такой как физиологический соляной раствор,нетоксичные буферные растворы, консерванты и им подобные. В целях данного изобретения фармацевтически эффективное количество модифицированного антитела, иммунореактивного фрагмента или его рекомбинанты, конъюгированных или неконъюгированных с терапевтическим агентом, обозначает количество, достаточное для достижения эффективного связывания с выбранными иммунореактивными антигенами в опухолевых клетках и обеспечивая повышение гибели этих клеток. Конечно, фармацевтические композиции настоящего изобретения могут вводиться в единичной или нескольких дозах для обеспечения фармацевтически эффективного количества модифицированного антитела. Более конкретно, описанные антитела и способы могут быть полезны для уменьшения размера опухоли, ингибирования роста опухоли и/или пролонгирования времени жизни млекопитающих, больных раком. В соответствии с этим это изобретение также относится к способу лечения опухолей у человека или другого млекопитающего путем введения такому человеку или млекопитающему эффективного нетоксичного количества модифицированного антитела. Специалист в данной области способен обычными экспериментами определить эффективное нетоксичное количество модифицированного антитела, необходимое для лечения злокачественностей. Например, терапевтически активное количество модифицированного антитела может изменяться в зависимости от факторов, таких как стадия болезни (например,стадия I или стадия IV), возраст, пол, медицинские осложнения (например, состояние подавления костного мозга или заболевания) и вес субъекта и способность антитела вызывать нужный отклик у субъекта. Дозовый режим может регулироваться для обеспечения оптимального терапевтического отклика. Например, несколько отдельных доз могут вводиться ежедневно, или доза может быть пропорционально уменьшена, что определяется срочностью терапевтической ситуации. Вообще, однако, эффективная доза предполагается в области от около 0,05 до 100 мг на килограмм веса тела в день и, более предпочтительно, от около 0,5 до 10 мг на килограмм веса тела в день. Согласно объему настоящего описания, модифицированные антитела изобретения могут вводиться человеку или другому млекопитающему в соответствии с указанными выше способами лечения в количестве, достаточном для получения такого действия в терапевтической или профилактической степени. Антитела по изобретению могут вводиться такому человеку или другому млекопитающему в обычной дозированной форме, полученной при смешении антитела по изобретению с обычным фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем в соответствии с известными методиками. Специалисту в данной области техники известно, что форма и тип фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя определяется количеством активного ингредиента, с которым он объединяется, способом введения и другими хорошо известными величинами. Специалист в данной области может предположить, что смесь,содержащая один и более типов моноклональных антител в соответствии с настоящим изобретением,может оказаться особенно эффективной. Способы получения и введения конъюгатов антитела, иммунореактивных фрагментов или их рекомбинант и терапевтического агента хорошо известны или могут легко определяться специалистом в данной области. Способ введения антитела (или его фрагмента) по изобретению может быть оральным,парентеральным, ингаляционным или местным. Использующийся здесь термин парентеральный включает внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, внутримышечное, подкожное, ректальное или вагинальное введение. Внутривенная, внутриартериальная, подкожная и внутримышечная формы парентерального введения являются общепредпочтительными. Хотя все эти формы введения подходят под объем изобретения, предпочтительной формой введения является раствор для инъекции, особенно для внутривенной или внутриартериальной инъекции или клизмы. Обычно подходящая фармацевтическая композиция для инъекции может включать буфер (например, ацетатный, фосфатный или цитратный буфер), сурфактант (например, полисорбат), необязательно стабилизирующий агент (например, альбумин человека) и т.д. Однако, в других способах, подходящих под данное описание, модифицированные антитела могут быть направлены непосредственно к сайту злокачественности, тем самым повышая влияние терапевтического агента на опухолевую ткань. Препараты для парентерального введения включают стерильные водные или неводные растворы,суспензии и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные органические эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, водные растворы спиртов, эмульсии или суспензии, включающие соляную и буферную среду. В указанном изобретении фармацевтически приемлемые носители включают, но не ограничиваются ими, 0,01-0,1 М и, предпочтительно, 0,05 М фосфатного буфера или 0,8% соляного раствора. Другие общие парентеральные связующие вещества включают растворы фосфа- 20007388 та натрия, декстрозу Рингери и хлорид натрия, лактат Рингери или фиксированные масла. Внутривенные связующие вещества включают жидкие и питательные наполнители, электролитные наполнители, такие как наполнители на основе декстрозы Рингери, и им подобные. Могут также присутствовать консерванты и другие добавки, такие как, например, антимикробные, антиокислительные, хелатирующие агенты и инертные газы и им подобные. Более конкретно, фармацевтические композиции, пригодные для применения в качестве инъекций,включают стерильные водные растворы (где вещество водорастворимо) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий. В таких случаях композиция должна быть стерильной и текучей в такой степени, чтобы легко впрыскиваться. Она должна быть стабильной в условиях получения и хранения и, предпочтительно, сохраняться при вредном воздействии микроорганизмов, таких как бактерии и грибки. Носителем может быть среда растворителя или дисперсии, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и им подобные), и их подходящие смеси. Необходимая текучесть может достигаться, например, с помощью слоя, такого как лецитин, с поддержанием необходимого размера частиц в случае дисперсии и при использовании сурфактантов. Предотвращение действия микроорганизмов может достигаться с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимерозала и им подобных. Во многих случаях предпочтительно включение в композицию изотонических агентов, например, cахаров, полиспиртов, таких как манноза, сорбит, или хлорида натрия. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может достигаться путем включения в композицию агента, который замедляет абсорбцию, например, моностеарат алюминия и желатин. В любом случае стерильные инъекционные растворы могут получаться введением активного соединения (например, модифицированного антитела отдельно или в сочетании с другими активными агентами) в нужное количество в подходящем растворителе с одним компонентом или с сочетанием компонентов, перечисленных здесь, при необходимости с последующей стерилизацией с фильтрованием. Вообще, дисперсии получают введением активного соединения в стерильное связующее вещество, которое содержит основную среду для дисперсии и необходимые другие ингредиенты из тех, которые перечислены выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов, предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и метод замораживания - высушивания, что приводит к образованию порошка активного ингредиента плюс любой дополнительный нужный ингредиент из его заранее простерилизованного - отфильтрованного раствора. Составы для полученных инъекций помещают в контейнеры, такие как ампулы, баллоны, бутылочки, шприцы или запаивают в асептических условиях способами, известными из уровня техники. Кроме того, составы могут запаковываться и реализовываться в виде набора, такого как набор, описанный в US 09/259,337 и US 09/259,338,каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Такие изделия предпочтительно помечают или упаковывают с инструкцией, указывающей, что данные композиции являются полезными для лечения субъекта, страдающего от рака или предрасположенного к раку, злокачественностям или опухолевым заболеваниям. Как описывалось подробно выше, настоящее изобретение относится к соединениям, композициям,наборам и способам лечения опухолевых заболеваний у млекопитающего, нуждающегося в таком лечении. Предпочтительно, субъект является человеком. Опухолевое заболевание (например, рак и злокачественности) может включать твердые опухоли, такие как мелономы, глиомы, саркомы и карциномы, а также миелоидные или гематомные злокачественности, такие как лимфомы и лейкемии. Вообще, описанное изобретение может использоваться для профилактики или терапевтического лечения любой опухоли, включающей антигенный маркер, который позволяет осуществить доставку модифицированного антитела к раковым клеткам. Примеры рака, который можно лечить, включают, но не ограничиваются ими, рак простаты, толстой кишки, кожи, грудной железы, яичников, легких и поджелудочной железы. В предпочтительных воплощениях выбранные модифицированные антитела данного изобретения (например, СС 49.СН 2) используются для диагностики или лечения рака толстой кишки или других желудочных карцином. Более конкретно, антитела настоящего изобретения могут использоваться для лечения саркомы Капоши, неоплазм ЦНС (капиллярные гемангиобластомы, менингиомы и церебральные метастазы), меланомы, гастрокишечных и почечных сарком, рабдомиосаркомы, гиобластомы (предпочтительно мультиформа глиобластомы), леиомиосаркомы, ретинобластомы, папиллярной цистоденокарциномы яичников, опухоли Вильма или небольшой клеточной карциномы легких. Понятно, что подходящие антитела могут вырабатываться для антигенов, ассоциированных с опухолью, по отношению к каждой из указанных выше опухолей без проведения экспериментов ввиду данного описания. Примерные гематологические злокачественности, которые поддаются лечению с помощью описанного изобретения, включают лимфому Ходкина и лимфому, отличающуюся от лимфомы Ходкина, а также лейкемии, включая ALL-L3 (лейкемию типа Буркитта), хроническую лимфоцитную лейкемию(CLL) и моноцитные клеточные лейкемии. Понятно, что соединения и способы настоящего изобретения являются особенно полезными для лечения различных В-клеточных лимфом, включая фолликулярную лимфому низкой степени, отличающуюся от лимфомы Ходкина (NHL) , клеточную лимфому (FCC), кле- 21007388 точную лимфому коры головного мозга (MCL), диффузионную обширную клеточную лимфому (DLCL),небольшую лимфоцитную (SL) NHL, фолликулярную NHL средней степени, диффузионную NHL средней степени, иммунобластомную NHL сильной степени, лимфобластомную NHL сильной степени, малую нерасщепляющую клетки NHL сильной степени, массовую болезнь NHL и макроглобулинемию Вальденстрома. Специалисту в данной области должно быть ясно, что эти лимфомы и лейкемии часто имеют различные названия из-за изменяющихся систем классификации, и что пациенты с гематологическими злокачественностями, классифицированными под другими названиями, могут также лечиться объединенными терапевтическими режимами настоящего изобретения. В добавление к указанным выше опухолевым заболеваниям понятно, что раскрываемое изобретение может успешно использоваться для лечения других злокачественностей, несущих подходящие антигены, ассоциированные с опухолью. Данное описание станет более понятным при рассмотрении следующих примеров. Такие примеры,однако, демонстрируют предпочтительные способы применения настоящего изобретения и не ограничивают объем изобртения или прилагаемой здесь формулы изобретения. Пример 1. Конструкция и экспрессия С 2 В 8.СH2 иммуноглобулина. Химерное антитело С 2 В 8 (IDEC Pharmaceuticals) модифицируют для создания аналога с делетированным доменом без СH2 домена внутри гамма-1-константной области человека. С 2 В 8 и плазмиднаяN5KG1, которая является пустым вектором, кодирующим константную область каппа-легкой цепи человека, а также гамма-1-константную область человека, описаны в US 5648267 и 5736137, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Создание аналога с делетированным СH2 доменом завершают посредством перекрывания PCR мутагенеза. Гамма-1-константный домен начинается с плазмиды, кодируемой Nhel сайтом, который находится в рамке считывания трансляции с последовательностью иммуноглобулина. 5'PCR праймер конструируют,кодируя Nhe-1 сайт, и последовательность немедленно считывают по ходу транскрипции. Родственный 3'PCR праймер конструируют так, что он начинается с 3'конца области петли иммуноглобулина и кодирует в рамке первые несколько аминокислот гамма-1 СН 3 домена. Вторая PCR праймерная пара состоит из обратного комплементарного участка 3' PCR праймера от первой пары (выше) в качестве 5' праймера и 3' праймера, который начинается в локусе BsrG I сайта рестрикции с СH3 доменом. Следуя каждомуPSR размножению, полученные продукты используют в качестве образца с Nhe I и BsrG I 5' и 3' праймерами соответственно. Размноженный продукт затем клонируют обратно в N5KG1 с образованием плазмидной N5KG1CH2. Эту конструкцию помещают в немедленно считываемый против хода транскрипции интактный СН 3 домен и в рамку с интактной областью петли. Как и в пустом векторе, вариабельные домены легкой и тяжелой цепи иммуноглобулина С 2 В 8 встраивают затем в подходящие сайты клонирования. Следуя подтверждению последовательности кодирующих областей иммуноглобулина, эту конструкцию экспрессии трансфецируют в СНО DG44 клетки и отбирают по G418 резистентности (проявляемой по отношению к вектору, кодируемому фосфотрансферазным геном неомицина). Выделенные резистентные клетки затем испытывают на экспрессию НuСС 49 иммуноглобулина. Последовательность полученной конструкции представлена на фиг. 1-3. Пример 2. Конструкция и экспрессия huCC49.CH2 иммуноглобулина. Аналог СС 49 антитела, подобный антителу человека, (АТСС No. НВ 9459) получают из NationalCancer Institute. Легкая цепь кодируется в плазмиде, обозначающейся pLNCX II HuCC49 HuK. Тяжелая цепь кодируется в плазмиде, обозначающейся pLgpCX II HuCC49Gl.CH2. Легкую и тяжелую цепь вариабельных доменов выделяют только из этих плазмид с помощью PCR размножения. PCR праймеры конструируют так, чтобы включились сайты рестрикции эндонуклеазы,позволяющие последующее субклонирование в IDEC-подходящий вектор экспрессии N5KG1.CH2. Ферментами рестрикции легкой цепи являются Bgl II на 5' конце (немедленно считывают против хода транскрипции кодон, инициирующий трансляцию, для природного ведущего пептида, кодируемогоNCI плазмидой) и BsiW I на 3' конце (в трансляционной рамке считывания с вектором IDEC, кодирующем константный домен каппа-легкой цепи человека). Никакие аминокислоты в вариабельном домене легкой цепи не изменялись в NCL последовательности. Ферментами рестрикции тяжелой цепи являются Mlu I на 5'-конце (кодирующая в рамке аминокислотные остатки -5 и -4 синтетического сигнального пептида тяжелой цепи иммуноглобулина, кодируемого вектором экспрессии IDEC). PCR праймер также кодирует остатки -3, -2 и -1 относительно начала вариабельного домена тяжелой цепи. PCR праймер 3' тяжелой цепи кодируется ферментом рестрикции Nhe I, который кодирует в рамке IDEC с гамма-1 делетированным доменом константной области тяжелой цепи. Конечным результатом является экспрессия конструкции, кодирующей НuСС 49 антитело с делетированным доменом со следующими компонентами. Никакие аминокислоты в вариабельном домене тяжелой цепи не изменялись в NCI последовательности. Легкая цепь: Природная ведущая легкая цепь - NCI вариабельный домен - IDEC каппа-константный домен человека. Тяжелая цепь: IDEC синтетическая тяжелая ведущая цепь - NCI вариабельный домен - IDEC кон- 22007388 стантный домен гамма-1 тяжелой цепи с СH2 делетированным доменом. Следуя подтверждению последовательности областей, кодирующих иммуноглобулин, эту конструкцию экспрессии трансфецируют в СНО DG44 клетки и отбирают по G418 резистентности (проявляемой по отношению к вектору, кодируемому фосфотрансферазным геном неомидина). Выделенные резистентные клетки затем испытывают на экспрессию иммуноглобулина НuСС 49. Последовательность НuСС 49.СH2 тяжелых и легких цепей показана на фиг. 4 и 5. Пример 3. Конструкция и экспрессия С 5 Е 10.СН 2 иммуноглобулина. Мышиные С 5 Е 10 экспрессирующие гидридомные клетки получают из University of Iowa. РНК получают из клеток и затем кДНК с помощью олиго dT из РНК. кДНК очищают от PCR с помощью серии праймеров вариабельной области каппа и тяжелой цепи мыши. PCR продукты затем помещают на агарозный гель. Используя известные методики, применяют праймеры для выделения и идентификации легких и тяжелых цепей, которые разделяются полосами на агарозе. Полосы выделяют, разрезают с помощью ферментов рестрикции и вариабельную область легкой цепи клонируют в Neospla N5KG1 вектор,подробно описанный в примерах 1 и 2. Вариабельные области тяжелой цепи затем клонируют в Neospla СН 2 вектор (также подробно описанный в примерах 1 и 2) для получения антитела с пропущенным СH2 доменом. ДНК и аминокислотные последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепи родственного антитела и конструкцию с делетированным доменом секвенируют как показано на фиг. 68. Векторы электропорируют в СНО клетки известными методиками для получения стабильной клеточной линии. Следом за ростом СНО клеток и экспрессии продукта, модифицированные антитела очищают с помощью аффинной хроматографии. Пример 4. Получение 111In и 90Y радиоактивно меченых конструкций. Конструкции модифицированных антител из примеров 1-3 или близкие эквиваленты и подходящие контрольные образцы помечают радиоактивным индием и иттрием для изучения биораспределения и биодоступности in vivo, как описано ниже. Как обсуждалось выше, прямое введение радиоактивных металлов, таких как 111In и 90Y в белки обычно не является эффективным. Как таковые хелаторы обычно используются для связывания этих изотопов с антителом с помощью нужного радиоактивного иммуноконъюгата. Для описанных здесь исследований используют MX-DTPA хелатор для введения 111In и 90Y. МАт 2 В 8, 2B8.F(ab')2 и С 2 В 8.HН 2 диафильтруют в слабый соляной раствор, содержащий металл(LMC-соляной раствор, рН доводят до 8.6 с помощью 0,5 М борной кислоты) перед конъюгацией. МАт диафильтруют с помощью предварительно промытых фильтров Centricon 30 (дважды, в соответствии с инструкцией), МАт концентрацию измеряют при А 280 (1 мг/мл= 1.7 AU) и разбавляют LMC-соляным раствором (рН 8.6) приблизительно до 10.0 мг/мл. МАт реагируют с MX-DTPA при молярной соотношении 4:1 (хелат к МАТ) в течение 14-16 ч при комнатной температуре. После инкубирования конъюгат очищают от непрореагировавшего хелата с помощью фильтров Centricon 30 (трижды), определяют концентрацию белка при А 280 и доводят до конечной концентрации 2 мг/мл с помощью LMC соляного раствора. СС 49 и СС 49.СН 2 конъюгируют с MX-DTPA тем же способом за исключением того, что используют молярное соотношение хелатора к МАт 2:1 вместо соотношения 4:1 для анти-СD20 МАт. Концентрации антител для СС 49 и СС 49.СН 2 определяют при А 280 (1 мг/мл=1.0). Следуя конъюгации, конструкции с делетированным доменом и контрольные антитела и фрагменты радиоактивно помечают с помощью 111In и 90Y. С помощью 111In помечают белки с конкретной активностью в области от 1 до 3 мКи/мг. Хлорид индия-[111] в разбавленной HCl (Nycomed Amersham или Cyclotron Products Inc.) доводят до рН 4 с помощью 50 мМ ацетата натрия. Добавляют конъюгат иммуноглобулина, и смесь инкубируют при температуре окружающей среды. Через 30 мин смесь разбавляют до конечной концентрации антитела 0.2 мг/мл с помощью 1XPBS, рН 7.2, содержащем 7.5% сывороточного альбулина человека (HAS) и 1 мМ диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA) (состав буфера). Конструкции и контрольные образцы также помечают с помощью 90Y при конкретной активности белка в области от 10 до 19 mCi/мг. Хлорид иттрия-[90] в разбавленной HCl (Nycomed Amersham илиNEN Dupont) доводят до рН 4 с помощью 50 мМ ацетата натрия, добавляют конъюгат антитела, и смесь инкубируют при температуре окружающей среды. Через 5 мин смесь разбавляют до конечной концентрации антитела 0.2 мг/мл с помощью 1XPBS, рН 7.2, содержащем 7.5% сыворотного альбумина человека (HAS) и 1 мМ диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA) (состав буфера). Пример 5. Получение 125I радиоактивно меченых конструкций. Конструкции из примеров 1-3 и подходящие контрольные образцы также помечают радиоактивным йодом для использования в испытаниях на биораспределение и биодоступность, описанных ниже. Более конкретно, конструкции и контрольные образцы радиоактивно помечают с помощью йод-Bead (BioRadIndustries), следуя общим инструкциям производителя. 2 мКи Na125I преинкубируют одним йод-Bead в течение 5 мин в 100 мМ фосфата натрия, рН 7.0. Добавляют приблизительно 0.2 мг иммуноглобулина, и реакционную смесь инкубируют в течение 2 мин. Несвязавшийся йод удаляют обессоливанием на- 23007388 Пример 6. Скорости выведения из крови радиоактивно меченого huCC49.CH2. На фиг. 9 сравниваются скорости выведения из крови 111In, 90Y и 125I меченого huCC49 с делетированным доменом с 111In или 125I меченых родственных антител СС 49 у мышей. Конструкции с делетированным доменом или их близкие эквиваленты и цельные антитела получают по методике, описанной в примерах 1-5. Меченые СС 49 конструкции исследуют на нормальных мышах или мышах с опухольюLS174T BABL/c nu/nu. LS174T является TAG-72 положительной опухолью, полученной из карциномы толстой кишки человека. Опухолевые ксенографии вносят и распространяют в мышах подкожными инъекциями 1 х 106 промытых клеток культуры ткани. Как показано на фиг. 9, все конструкции с делетированным доменом, меченые различными изотопами, проявляют похожие скорости выведения из крови как в мышах с опухолью, так и без опухоли. Следует заметить, что 99% меченых конструкций с делетированным доменом удаляются из крови через 24 ч после введения. При использовании различных изотопов различия в скоростях выведения не наблюдались. В противоположность этому, различные уровни радиоактивно меченых цельных антител сохранились в кругообороте в течение более трех дней после введения. Как подробно описано выше, пролонгированная циркуляция и неспецифическое распределение вводимых радиоактивно меченых соединений может приводить к значительной токсичности для костного мозга и, во многих случаях, строго ограничивает количество вводимого радиоконъюгата. Быстрое выведение радиоконъюгата может сильно понизить его токсичность для костного мозга. Так, этот пример графически иллюстрирует преимущества настоящего изобретения в снижении нежелательных побочных эффектов и возможности повышения вводимой дозы лекарственного средства против опухоли. Пример 7. Сравнение скорости выведения из крови и локализации в опухоли. Мышиное антитело 2 В 8 и его химерный аналог, С 2 В 8, реагируют с CD20 антигеном человека. Фармакокинетику выведения из сыворотки и локализацию в опухоли исследуют с помощью 2 В 8,С 2 В 8.СН 2 и 2B8.F(ab')2, все меченые 111In, на мышах с опухолью.Daudi опухоли (CD20 положительные) распространяют на самках BALB/c nu/nu мышей подкожными инъекциями 1 х 106 промытых клеток культуры ткани. Радиоактивно меченые МАт или конструкции вводят внутривенно, когда размеры опухоли достигнут размера приблизительно 50-100 мм 3. Для биораспределения и расположения в опухоли различных конструкций животных умерщвляют и пускают кровь в указанное время. С этой целью опухоль удаляют из животного, полощут PBS и взвешивают. Стандартные образцы крови отбирают и хранят до анализа. Известными методиками определяют радиоактивность в опухоли и в крови с помощью гамма-счетчика и корректируют по физическому распаду. Результаты представляют собой значения трех животных во времени и графически представлены на фиг. 10. Более конкретно, фиг. 10 А показывает скорости выведения из крови и локализацию в опухоли интактных С 2 В 8, тогда как фиг. 10 В и 10 С иллюстрируют те же показатели для меченой F(ab')2 конструкции и аналога с делетированным доменом, соответственно. Кривые показывают, что очень незначительная вводимая радиоактивность сохраняется в кругообороте через 24 ч после вливания 111In меченой C2B8.F(ab')2 (фиг. 10 В) или С 2 В 8.СН 2 (фиг. 10 С) конструкции. Наоборот, относительно высокие уровни 111In-2 В 8.IgG сохраняются в сыворотке через 24 ч после вливания (фиг. 10 А). Скорости выведения из крови конструкций с делетированным доменом и F(ab')2,следовательно, являются существенно большими по сравнению с контактной молекулой IgG. Более конкретно, эффективное время жизни, рассчитанное из скоростей выведения из крови составляет 5.7 ч для С 2 В 8.СН 2 и 12.9 ч для 2B8F(ab')2 фрагмента по сравнению с 38 часами для интактной молекулы 2 В 8IgG. Существенно большая скорость выведения из крови для конструкции с делетированным доменом опять показывает способность настоящего изобретения заметно снижать дозу радиации, направленную к костному мозгу. Наоборот, модифицированные антитела настоящего изобретения являются крайне выгодными для доставки терапевтически эффективных количеств радиоактивности непосредственно к опухоли. С этой стороны локализация в опухоли 111In-меченых конструкций также представлена на фиг. 10. 111In-2B8. IgG проявляет пик локализации в опухоли через 24-48 ч после введения на фиг. 10 А. В противоположность этому, конструкции 2B8.F(ab')2 или С 2 В 8.СН 2 проявляют пик локализации через 6 ч после введения на фиг. 10 В и 10 С, соответственно. Однако в противоположность 2B8.F(ab')2, который проявляет значительное снижение в процентной вводимой дозе/гм по сравнению с другими конструкциями, С 2 В 8.СН 2 проявляют примеры локализации в опухоли, сравнимые с показателями, полученными с 111In 2 В 8 (Фиг. 10 А и 10 С). В этом примере пик локализации в опухоли, выраженный как % вводимой дозы на гм ткани(%ID/гм) через 6 ч при использовании 2B8.F(ab')2 составляет 6.2, тогда как аналог с делетированным доменом через 6 ч - 17.1%. Наоборот, через 6 ч только 4% 2 В 8.IgG локализовалось в опухоли. Наивысший пик локализации для 2 В 8.IgG наблюдается через 24 ч и составляет 19,4%. Так только модифицированные антитела настоящего изобретения проявляют желаемые характеристики высокой локализации в опухоли в сочетании с относительно быстрым выведением из крови. Вообще, оказалось, что интактные антитела обеспечивают относительно высокую локализацию в опухоли(хотя через пролонгированный период), но являются остро токсичными для костного мозга из-за их увеличенного периода полувыведения из крови. Наоборот, F(ab')2 конструкции проявляют относительно- 24007388 быстрое выведение из крови, но очень низкую локализацию в опухоли. Понятно, что эти ограничения успешно преодолены описанными здесь модифицированными антителами. Пример 8. Исследование скоростей выведения из крови и локализации в опухоли. Эффективный период полувыведения конструкций и радиации MIRD, определенный для костного мозга, рассчитывают из данных выведения из крови, и результаты представлены ниже в табл. 1. Данные локализации в опухоли иммуноконъюгатов представлены в табл. 2. Указанные дозы вводят внутривенно в BALB/c nu/nu мышей, вызывая подходящую опухоль (т.е. Daudi или LS174T из примеров 6 и 7), и кровь собирают через определенные ранее промежутки времени. Специалисту в данной области техники ясно, что доза MIRD (поглощенная радиация), определенная для костного мозга, рассчитывается из процентно-прививочной дозы на гм ткани (%ID/гм) с помощью образцов, взятых через 1-72 ч после введения, данные представлены в табл. 1. Таблица 1. Сравнение параметров, относящихся к дозе, для Y2B8 (IgG и F(ab)2) и СН 2 конструкцией с делетированным доменом в нормальной ткани (кровь и красный костный мозг) Данные в табл. 1 вновь подтверждают, что конструкции с делетированным доменом обеспечивают значительно более короткий период полувыведения и, соответственно, более низкие дозы радиации на костный мозг. Более конкретно, табл. 1 показывает, что F(ab')2 C2B8 конструкция и интактный IgG имеют период полувыведения 12,9 ч и 38 ч, соответственно. Наоборот, СС 49 конструкция с делетированным доменом имеет время жизни всего 6,5 ч при той же дозе (т.е. более чем в 5 раз меньше, чем у интактногоIgG). По существу, это короткое время жизни приводит к существенно меньшему воздействию на кровь и красный костный мозг нежелательной радиоактивной энергии. Обзор уровней MIRD (по существу,радиоактивной энергии, направляемой к костному мозгу) показывает, что интактный С 2 В 8 IgG имеет почти четырехкратную дозу, которая обеспечивается тем же количеством СС 49 с делетированным доменом (т.е. 2,2 рад/mCi против 0,61 рад/мКи). Следует отметить, что это снижение в воздействии на костный мозг приводит к значительно меньшей токсичности для костного мозга, критическому фактору для разработки терапевтических режимов для лечения рака. Как показано выше, табл. 2 иллюстрирует преимущества настоящего изобретения в достижении высокой локализации в опухоли радионуклида. Понятно, что эта повышенная локализация в сочетании с быстрым выведением из крови, что показано выше, позволяют осуществить особо эффективное введение радиоактивных или цитотоксических соединений в сайт опухолевых клеток. Таблица 2. Сравнительная дозиметрия Y2B8 [IgG и F(ab)2] с huCC49CH2 в ксенографиях лишенных шерсти мышей с опухолью (Локализация в опухоли)- 25007388 Как показано в табл. 2, 111In-2B8; l11In-huCC49.CH2 и 125I-huCC49.СН 2 проявляют схожее время нахождения в опухоли (0.95, 1.15 и 0.92 Сi-час/Сi, соответственно). Дополнительно, пик локализации 111In-huСС 49.СН 2, 125I-huCC49.СН 2 и 111In-2B8 (18.5, 16.2 и 17.8% ID/гм, соответственно) является также близким, но имеет пик через 6 часов после введения для конструкций с делетированным доменом по сравнению с 24 часами после введения для интактного 2 В 8. Более ранняя локализация конструкций с делетированным доменом (используя l11In или 125I меченые фрагменты) приводит к достижению 3 кратного увеличения дозы радиации для опухоли по сравнению с интактными родственными МАв, 2 В 8(а именно, 3637 рад/мКи против 1331 рад/мКи). Снова следует отметить, что более быстрое выведение из крови и повышенная доставка в опухоль без компромисса - либо пик локализации в опухоли, либо время удержания в опухоли проявляемые конструкциями с делетированным доменом, представляют существенное преимущество для клинических протоколов с применением комбинированной лекарственной терапии. Пример 9. Синергетические свойства модифицированных антител. 40 самок мышей с удаленной вилочковой железой инъецируют подкожно 0.2 мл 2 х 106 LS174T клеток. TAG-72+ опухоли оставляют расти до размера 150-200 мм 3. В то же время мышей разделяют на четыре группы по 10 мышей в каждой. Четыре группы обрабатывают следующим образом: 1. Отдельно этопозидом. 2. Отдельно 90Y-huCC49.СН 2 . 3. 90Y-huCC49.CH2 +этопозид. 4. Контрольный разбавитель (PBS/ДМСО). Более конкретно, хранящийся раствор этопозида получают в виде 100 мг/мл в ДМСО. Затем его разбавляют до 6,88 мг/мл в PBS. В группе (1) мышам инъецируют 1,72 мг этопозида, повторяя каждые четыре дня, до общего количества три инъекции. В группе (2) мышам инъецируют 0.05 мКи 90YhuCC49.СН 2, используя CHX-DTPA хелатор для удержания радиоизотопа. В группе (3) мышам инъецируют 0.05 мКи такого же радиоактивно меченого модифицированного антитела и 1.72 мг этопозида с последующими двумя инъекциями 1.72 мг этопозида. Контрольной группе мышей (4) инъецируютPBS/ДМСО в концентрации 6.9% ДМСО каждые четыре дня до общего количества три инъекции. Опухоли измеряют два или три раза в неделю и графически изображают, как показано на фиг. 11. Фиг. 11 иллюстрирует, что комбинация этопозида отдельно с радиоактивно меченым СС 49 антителом с делетированным доменом вызывает рост массы опухоли больше, чем отдельный агент. Этот синергетический результат является особо заметным на 25-й день, когда размер опухоли уменьшается почти наполовину благодаря применению комбинации агентов по сравнению с обработкой мышей 90YhuCC49.СН 2 или этопозидом. Специалисту в данной области техники ясно, что настоящее изобретение может воплощаться в других конкретных формах без отдаления от его объема или центральных особенностей. В данном описании настоящего изобретения описаны только его предпочтительные воплощения, понятно, что другие варианты подходят под объем настоящего изобретения. Соответственно, настоящее изобретение не ограничивается конкретными воплощениями, которые подробно описаны выше. Скорее указания следует делать на прилагаемую формулу изобретения так, как она определяет объем и содержание изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение антитела с делетированным СH2-доменом, специфически связанного с антигеномTAG-72, который характеризуется наличием раковых клеток у пациента с подавлением костного мозга,при изготовлении лекарства для лечения рака у вышеупомянутого пациента. 2. Применение по п.1, где антиген TAG-72 является антигеном TAG-72 человеческого организма, а антитело - человеческое антитело с делетированным СH2-доменом, реактивное с человеческим антигеном TAG-72. 3. Применение по п.2, где человеческое антитело с делетированным Сн 2-доменом включает комплементарно определенную область антигена TAG-72 нечеловеческого происхождения, выбранную из группы, состоящей из: СС 49 (АТСС No. НВ 9459); СС 83 (АТСС No. НВ 9453); СС 46 (АТСС No. НВ 9458); СС 92 (АТСС No. НВ 9454); СС 30 (АТСС No. НВ 9457); СС 11 (АТСС No.9455) и СС 15 (АТСС No. НВ 9460). 4. Применение по п.3, где человеческое антитело с делетированным СH2-доменом включает одну или более комплементарно определенные области аминокислотных последовательностей с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, показанные на фиг. 4 А, и одну или более комплементарно определенные области аминокислотных последовательностей с изменяемой областью легкой цепи СС 49, показанные на фиг. 5 А. 5. Применение по п.3, где антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой полипептидной цепи, показанную на фиг. 4 А, с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, и аминокислотную последовательность легкой полипептидной цепи, показанную на фиг. 5 А, с изменяемой областью легкой цепи СС 49.- 26007388 6. Применение по п.1, где тяжелая полипептидная цепь антитела с делетированным СH2-доменом дополнительно включает аминокислотный спейсер, который замещает делетированный СH2-домен. 7. Применение по п.6, где спейсер включает от 5 до 20 аминокислот в длину. 8. Применение по п.1, где антитело с делетированным СH2-доменом связано с цитотоксическим агентом. 9. Применение по п.8, где цитотоксический агент включает радиоизотоп. 10. Применение по п.9, где радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 90Y, 125I, 131I, 123I, 111In,105Rh, 153Sm, 67Cu, 67Ga, 166Ho, 177Lu, 186Re и 188Re. 11. Применение по п.10, где радиоизотопом является 90Y. 12. Применение по п.8, где цитотоксический агент выбран из группы, состоящей из цитотоксических лекарств, цитотоксических пролекарств, биотоксинов, цитотоксических иммунологически активных лигандов и цитотоксических иммуномодуляторов. 13. Применение по п.1, где рак выбран из группы, состоящей из рака простаты, толстой кишки, кожи, грудной железы, яичников, легких и поджелудочной железы. 14. Применение по п.1, где рак выбран из группы, состоящей из саркомы Капоши, капиллярных гемангиобластом, менингиом, церебральных метастаз и других неоплазм центральной нервной системы,меланомы, гастрокишечной саркомы, почечной саркомы, рабдомиосаркомы, глиобластомы, леиомиосаркомы, ретинобластомы, папиллярной цистоденокарциномы яичников, опухоли Вильма, небольшой клеточной карциномы легких, лейкемий, включающих острую лимфоцитную лейкемию-L3 (лейкемию типа Буркитта), хроническую лимфоцитную лейкемию и моноцитные клетчатые лейкемии, В-клеточных лимфом, включая лимфому Ходкина, лимфому, отличающуюся от лимфомы Ходкина (NHL), включая фолликулярную NHL лимфому низкой степени, клеточную лимфому (FCC), клеточную лимфому коры головного мозга (MCL), диффузионную обширную клеточную лимфому (DLCL), небольшую лимфоцитную (SL) NHL, фолликулярную NHL средней степени, диффузионную NHL средней степени, иммунобластомную NHL высокой степени, лимфобластомную NHL высокой степени, малую нерасщепляющую клетки NHL высокой степени, массовую болезнь NHL и макроглобулинемию Вальденстрома. 15. Применение по п.1, где лекарство предназначено для лечения рака у пациентов с подавлением костного мозга, имеющих показатель абсолютной нейтрофильной плотности (ANC) менее чем около 2000/мм 3. 16. Применение по п.15, где пациент с подавлением костного мозга имеет ANC менее чем около 1000 /мм 3. 17. Применение по п.16, где пациент с подавлением костного мозга имеет ANC менее чем около 500 /мм 3. 18. Применение по п.1, где лекарство предназначено для лечения рака у пациента с подавлением костного мозга, имеющего плотность тромбоцитов менее чем около 150000/мм 3. 19. Применение по п.18, где пациент с подавлением костного мозга имеет плотность тромбоцитов менее чем около 75000 /мм 3. 20. Применение по п.19, где пациент с подавлением костного мозга имеет плотность тромбоцитов менее чем около 50000 /мм 3. 21. Применение по п.20, где пациент с подавлением костного мозга имеет плотность тромбоцитов менее чем около 10000 /мм 3. 22. Применение по п.1, где лекарство, кроме того, включает по крайней мере один химиотерапевтический агент и находится в таком виде, чтобы антитело с делегированным СH2 доменом и по крайней мере один химиотерапевтический агент могли быть введены пациенту в любом порядке или одновременно. 23. Применение по п.22, где химиотерапевтический агент выбран из группы, состоящей из одиночного алкилирующего агента, одиночного винкаинового алкалоида, прокарбазина, метотрексата, преднизона, этопозида, 2-хлордеоксиаденозина (2-CDA), 2'-деоксикоформицина, флударабина, цитозинарабинозида, цисплатина и ифосфамида, блеомицина, горчичного азота и химиотерапевтической комбинации этих агентов. 24. Применение антитела с делетированным СH2-доменом, специфически связанного с антигеномTAG-72 и по крайней мере с одним химиотерапевтическим агентом, при производстве лекарств для лечения опухолевого заболевания, где лекарство находится в такой форме, что антитело с делетированным СH2-доменом и по крайней мере один химиотерапевтический агент могут вводиться пациенту в любом порядке или одновременно. 25. Применение по п.24, где антиген TAG-72 является человеческим антигеном TAG-72, а антитело представляет собой человеческое антитело с делетированным СН 2-доменом, реагирующее с человеческим антигеном TAG-72. 26. Применение по п.25, где человеческое антитело с делетированным СH2-доменом включает комплементарно определенные области антигена TAG-72 нечеловеческого происхождения, выбранные из группы, состоящей из: СС 92 (АТСС No. НВ 9459); СС 83 (АТСС No. НВ 9453); СС 46 (АТСС No.HB 9458); СС 92 (АТСС No. НВ 9454); СС 30 (АТСС No. НВ 9457); СС 11 (АТСС No.9455); и СС 15 (АТСС No.- 27007388 НВ 9460). 27. Применение по п.25, где человеческое антитело с делетированным СH2-доменом включает одну или более комплементарно определенные области аминокислотной последовательности с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, показанные на фиг. 4 А, и одну или более комплементарно определенные области аминокислотной последовательности с изменяемой областью легкой цепи СС 49, показанные на фиг. 5 А. 28. Применение по п.26, где антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой полипептидной цепи, показанную на фиг. 4 А, с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, и аминокислотную последовательность легкой полипептидной цепи, показанную на фиг. 5 А, с изменяемой областью легкой цепи СС 49. 29. Применение по п.24, где тяжелая полипептидная цепь антитела с делетированным СH2-доменом,кроме того, включает аминокислотный спейсер, который замещает делетированный СH2-домен. 30. Применение по п.29, где спейсер включает от 5 до 20 аминокислот в длину. 31. Применение по п.24, где антитело с делетированным СH2-доменом связано с цитотоксическим агентом. 32. Применение по п.31, где цитотоксический агент включает радиоизотоп. 33. Применение по п.32, где радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 90Y, 125I, 131I, 123I, 111In,105Rh, 153Sm, 67Cu, 67Ga, 166Ho, 177Lu, 186Re и 188Re. 34. Применение по п.33, где радиоизотопом является 90Y. 35. Применение по п.31, где цитотоксический агент выбран из группы, состоящей из цитотоксических лекарств, цитотоксических пролекарств, биотоксинов, цитотоксических иммунологически активных лигандов и цитотоксических иммуномодуляторов. 36. Применение по п.24, где опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из рака простаты, толстой кишки, кожи, грудной железы, яичников, легких и поджелудочной железы. 37. Применение по п.24, где опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из саркомы Капоши, капиллярных гемангиобластом, менингиом, церебральных метастаз и других неоплазм центральной нервной системы, меланомы, гастрокишечной саркомы, почечной саркомы, рабдомиосаркомы,глиобластомы, леиомиосаркомы, ретинобластомы, папиллярной цистоденокарциномы яичников, опухоли Вильма, небольшой клеточной карциномы легких, лейкемий, включающих острую лимфоцитную лейкемию-L3 (лейкемию типа Буркитта), хроническую лимфоцитную лейкемию и моноцитные клетчатые лейкемии, В-клеточных лимфом, включая лимфому Ходкина, лимфому, отличающуюся от лимфомы Ходкина (NHL), включая фолликулярную NHL лимфому низкой степени, клеточную лимфому (FCC),клеточную лимфому коры головного мозга (MCL), диффузионную обширную клеточную лимфомуNHL средней степени, иммунобластомную NHL высокой степени, лимфобластомную NHL высокой степени, малую нерасщепляющую клетки NHL высокой степени, массовую болезнь NHL и макроглобулинемию Вальденстрома. 38. Применение по п.24, где химиотерапевтический агент включает агент, выбранный из группы,состоящей из одиночного алкилирующего агента, одиночного винкаинового алкалоида, прокарбазина,метотрексата, преднизона, этопозида, 2-хлордеоксиаденозина (2-CDA), 2'-деоксикоформицина, флударабина, цитозинарабинозида, цисплатина и ифосфамида, блеомицина, горчичного азота и химиотерапевтической комбинации этих агентов. 39. Фармацевтическая композиция для лечения опухолевого заболевания, включающая антитело с делегированным СH2-доменом, которое специфически связывается с антигеном TAG-72 и по крайней мере одним химиотерапевтическим агентом, где вышеупомянутое антитело и вышеупомянутый химиотерапевтический агент предназначены для введения пациенту в любом порядке или одновременно. 40. Фармацевтическая композиция по п.39, где антиген TAG-72 представляет собой человеческий антиген TAG-72, а антитело представляет собой человеческое антитело с делетированным СH2-доменом,реагирующее с человеческим антигеном TAG-72. 41. Фармацевтическая композиция по п.40, где человеческое антитело с делетированным СH2 доменом включает комплементарно определенные области антигена TAG-72 нечеловеческого происхождения, выбранные из группы, состоящей из: СС 92 (АТСС No. НВ 9459); СС 83 (АТСС No. НВ 9453); СС 46 (АТСС No.HB 9458); СС 92 (АТСС No. НВ 9454); СС 30 (АТСС No. НВ 9457); СС 11 (АТССNo.9455); и СС 15 (АТСС No. НВ 9460). 42. Фармацевтическая композиция по п.41, где человеческое антитело с делетированным СH2 доменом включает одну или более комплементарно определенные области аминокислотной последовательности с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, показанные на фиг. 4 А, и одну или более комплементарно определенные области аминокислотной последовательности с изменяемой областью легкой цепи СС 49, показанные на фиг. 5 А. 43. Фармацевтическая композиция по п.41, где антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой полипептидной цепи, показанную на фиг. 4 А, с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49,и аминокислотную последовательность легкой полипептидной цепи, показанную на фиг. 5 А, с изменяе- 28007388 мой областью легкой цепи СС 49. 44. Фармацевтическая композиция по п.39, где тяжелая полипептидная цепь антитела с делетированным СH2-доменом, кроме того, включает аминокислотный спейсер, которая замещает делетированный СH2-домен. 45. Фармацевтическая композиция по п.44, где спейсер включает от 5 до 20 аминокислот в длину. 46. Фармацевтическая композиция по п.39, где антитело с делетированным СH2-доменом связано с цитотоксическим агентом. 47. Фармацевтическая композиция по п.46, где цитотоксический агент включает радиоизотоп. 48. Фармацевтическая композиция по п.47, где радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 90Y,125 131 123 111I, I, I, In, 105Rh, l53Sm, 67Cu, 67Ga, 166 Но, 177Lu, 186Re и 188Re. 49. Фармацевтическая композиция по п.48, где радиоизотопом является 90Y. 50. Фармацевтическая композиция по п.46, где цитотоксический агент выбран из группы, состоящей из цитотоксических лекарств, цитотоксических пролекарств, биотоксинов, цитотоксических иммунологически активных лигандов и цитотоксических иммуномодуляторов. 51. Фармацевтическая композиция по п.39, где опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из рака простаты, толстой кишки, кожи, грудной железы, яичников, легких и поджелудочной железы. 52. Фармацевтическая композиция по п.39, где опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из саркомы Капоши, капиллярных гемангиобластом, менингиом, церебральных метастаз и других неоплазм центральной нервной системы, меланомы, гастрокишечной саркомы, почечной саркомы,рабдомиосаркомы, глиобластомы, леиомиосаркомы, ретинобластомы, папиллярной цистоденокарциномы яичников, опухоли Вильма, небольшой клеточной карциномы легких, лейкемий, включающих острую лимфоцитную лейкемию-L3 (лейкемию типа Буркитта), хроническую лимфоцитную лейкемию и моноцитные клетчатые лейкемии, В-клеточных лимфом, включая лимфому Ходкина, лимфому, отличающуюся от лимфомы Ходкина (NHL), включая фолликулярную NHL лимфому низкой степени, клеточную лимфому (FCC), клеточную лимфому коры головного мозга (MCL), диффузионную обширную клеточную лимфому (DLCL), небольшую лимфоцитную (SL) NHL, фолликулярную NHL средней степени, диффузионную NHL средней степени, иммунобластомную NHL высокой степени, лимфобластомнуюNHL высокой степени, малую нерасщепляющую клетки NHL высокой степени, массовую болезнь NHL и макроглобулинемию Вальденстрома. 53. Фармацевтическая композиция по п.39, где химиотерапевтический агент включает агент, выбранный из группы, состоящей из одиночного алкилирующего агента, одиночного винкаинового алкалоида, прокарбазина, метотрексата, преднизона, этопозида, 2-хлордеоксиаденозина (2-CDA), 2'деоксикоформицина, флударабина, цитозинарабинозида, цисплатина и ифосфамида, блеомицина, горчичного азота и химиотерапевтической комбинации этих агентов. 54. Набор для лечения пациента, имеющего опухолевое заболевание, включающий: терапевтически эффективную дозу антитела с делетированным СH2-доменом, которое специфически связывается с антигеном TAG-72, и терапевтически эффективную дозу по крайней мере одного химиотерапевтического агента, где вышеупомянутое антитело и вышеупомянутый химиотерапевтический агент предназначены для введения пациенту в любом порядке или одновременно. 55. Набор по п.54, где антиген TAG-72 представляет собой человеческий антиген TAG-72, а антитело представляет собой человеческое антитело с делетированным СH2-доменом, реагирующее с человеческим антигеном TAG-72. 56. Набор по п.55, где человеческое антитело с делетированным СH2-доменом включает комплементарно определенные области антигена TAG-72 нечеловеческого происхождения, выбранные из группы, состоящей из: СС 92 (АТСС No. HB 9459); СС 83 (АТСС No. НВ 9453); СС 46 (АТСС No.HB 9458); СС 92 (АТСС No. НВ 9454); СС 30 (АТСС No. НВ 9457); СС 11 (АТСС No.9455); и СС 15 (АТСС No. НВ 9460). 57. Набор по п.56, где человеческое антитело включает одну или более комплементарно определенные области аминокислотной последовательности с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, показанные на фиг. 4 А, и одну или более комплементарно определенные области аминокислотной последовательности с изменяемой областью легкой цепи СС 49, показанные на фиг. 5 А. 58. Набор по п.56, где антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой полипептидной цепи, показанную на фиг. 4 А, с изменяемой областью тяжелой цепи СС 49, и аминокислотную последовательность легкой полипептидной цепи, показанную на фиг. 5 А, с изменяемой областью легкой цепи СС 49. 59. Набор по п.54, где тяжелая полипептидная цепь антитела с делетированным СH2-доменом, кроме того, включает аминокислотный спейсер, который замещает делетированный СH2-домен. 60. Набор по п.59, где спейсер включает от 5 до 20 аминокислот в длину. 61. Набор по п.54, где антитело с делетированным Сн 2-доменом связано с цитотоксическим агентом.- 29007388 62. Набор по п.61, где цитотоксический агент включает радиоизотоп. 63. Набор по п.62, где радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 90Y, 125I, 131I, 123I, 111In, 105Rh,153Sm, 67Cu, 67Ga, 166Ho, 177Lu, 186Re и 188Re. 64. Набор по п.63, где радиоизотопом является 90Y. 65. Набор по п.61, где цитотоксический агент выбран из группы, состоящей из цитотоксических лекарств, цитотоксических пролекарств, биотоксинов, цитотоксических иммунологически активных лигандов и цитотоксических иммуномодуляторов. 66. Набор по п.58 или 59, где опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из рака простаты, толстой кишки, кожи, грудной железы, яичников, легких и поджелудочной железы. 67. Набор по п.54, где опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из саркомы Капоши,капиллярных гемангиобластом, менингиом, церебральных метастаз и других неоплазм центральной нервной системы, меланомы, гастрокишечной саркомы, почечной саркомы, рабдомиосаркомы, глиобластомы, леиомиосаркомы, ретинобластомы, папиллярной цистоденокарциномы яичников, опухоли Вильма, небольшой клеточной карциномы легких, лейкемий, включающих острую лимфоцитную лейкемиюL3 (лейкемию типа Буркитта), хроническую лимфоцитную лейкемию и моноцитные клетчатые лейкемии, В-клеточных лимфом, включая лимфому Ходкина, лимфому, отличающуюся от лимфомы Ходкина(NHL), включая фолликулярную NHL лимфому низкой степени, клеточную лимфому (FCC), клеточную лимфому коры головного мозга (MCL), диффузионную обширную клеточную лимфому (DLCL), небольшую лимфоцитную (SL) NHL, фолликулярную NHL средней степени, диффузионную NHL средней степени, иммунобластомную NHL высокой степени, лимфобластомную NHL высокой степени, малую нерасщепляющую клетки NHL высокой степени, массовую болезнь NHL и макроглобулинемию Вальденстрома. 68. Набор по п.54, где химиотерапевтический агент включает агент, выбранный из группы, состоящей из одиночного алкилирующего агента, одиночного винкаинового алкалоида, прокарбазина, метотрексата, преднизона, этопозида, 2-хлордеоксиаденозина (2-CDA), 2'-деоксикоформицина, флударабина,цитозинарабинозида, цисплатина и ифосфамида, блеомицина, горчичного азота и химиотерапевтической комбинации этих агентов. 1 А Аминокислотная последовательность тяжелой цепи С 2 В 8 1 В Аминокислотная последовательность тяжелой цепи С 2 В 8 с делетированным доменом