Нацеленные синтетические наноносители с ph-чувствительным высвобождением иммуномодулирующих средств

НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ Изобретение относится к композициям и соответствующим им способам на основе синтетических наноносителей, которые целенаправленно воздействуют на сайты действия клеток, таких как антиген-презентирующие клетки (АРС), и включает иммуномодулирующие средства, которые диссоциируют от синтетических наноносителей рН-зависимым способом. Также раскрыты композиции и способы, относящиеся к синтетическим наноносителям, которые инкапсулируют лабильные иммуномодулирующие средства, которые отделяются от синтетических наноносителей рН-зависимым способом. Родственные заявки Данная заявка заявляет приоритет согласно 35 U.S.C.119 США по предварительным заявкам 61/217129, 61/217117, 61/217124 и 61/217116, каждая из которых подана 27 мая 2009 г., содержание каждой из которых включено в данный документ в качестве ссылки в полном объеме. Область изобретения Данное изобретение касается композиций и относящихся к ним способов из синтетических наноносителей, которые целенаправленно воздействуют на сайты действия клеток, таких как антигенпрезентирующие клетки (АРС), и включает иммуномодулирующие средства, которые диссоциируют от синтетических наноносителей рН-зависимым способом. Данное изобретение дополнительно относится к защите лабильных иммуномодулирующих средств посредством их инкапсуляции в синтетических наноносителях. Предпосылки Иммуномодулирующие средства применяют для получения иммунных ответов у субъектов. Стимуляция иммунной системы, которая включает стимуляцию любого из врожденного иммунитета и приобретенного иммунитета, или и первого, и второго, является сложным явлением, которое может привести либо к защитным, либо к неблагоприятным физиологическим последствиям для хозяина. В последние годы возрос интерес к механизмам, лежащим в основе врожденного иммунитета, который, как полагают,инициирует и поддерживает приобретенный иммунитет. Данный интерес отчасти вызван недавним открытием семейства высококонсервативных белков образраспознающих рецепторов, известных как Tollподобные рецепторы (TLR), которые, как полагают, вовлечены во врожденный иммунитет в качестве рецепторов для патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (РАМР). Таким образом, композиции и способы, пригодные для модулирования врожденного иммунитета,представляют огромный интерес, поскольку они могут касаться терапевтических подходов для состояний, включающих воспаление, аллергию, астму, инфекцию, рак, иммунодефицит и т.д. Время от времени предпочтительно связывать такие средства с носителями для доставки. Однако информация относительно того, как возможно контролировать высвобождение таких средств, в особенности лабильных иммуномодулирующих средств, из носителей для доставки и какой тип высвобождения предусматривает оптимальные эффекты in vivo, ограничена. Существует необходимость в новых носителях для доставки иммуномодулирующих средств, которые делают возможным оптимальное высвобождение, а также к относящимся к ним способам. Краткое описание данного изобретения Аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: IA (высв.) (4,5)24%/IA (высв.) (7,4)24%1/2, где IA (высв.) (4,5)24% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей,и где IA (высв.) (7,4)% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 7,4 в течение 24 ч, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 7,4 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 7,4 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления иммуномодулирующее средство инкапсулировано в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, такое как имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-CG-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин,имидазопиридиновый амин,6,7 конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида не включает стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций. В некоторых вариантах осуществ-1 022699 ления иммуномодулирующим средством является адъювант. В определенных вариантах осуществления адъювант включает агонист Toll-подобного рецептора (TLR), такой как агонист TLR 3, агонист TLR 7,агонист TLR 8, агонист TLR 7/8 или агонист TLR 9. В некоторых вариантах осуществления агонистом TLR является иммуностимулирующая нуклеиновая кислота, такая как иммуностимулирующая ДНК или иммуностимулирующая РНК. В определенных вариантах осуществления иммуностимулирующая нуклеиновая кислота представляет собой CpGсодержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, которая включает одну или несколько стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления адъювант включает универсальный Т-клеточный антиген. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель дополнительно включает Вклеточный антиген и/или Т-клеточный антиген. В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители дополнительно включают свойство нацеливания на антигенпрезентирующие клетки(АРС). В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько биоразлагаемых полимеров. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает поли(лактид), поли(гликолид) или сополимер(лактида и гликолида). В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В определенных вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает амидную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает сложноэфирную связь. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы. Аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: IA (4,5)24%/IA (4,5)6%1,2, где IA (4,5)24% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой invitro при рН 4,5 в течение 24 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей, и где IA(4,5)6 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение 6 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, инкапсулированное в синтетическом наноносителе. В определенных вариантах осуществления лабильное иммуномодулирующее средство включает имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-CG-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин, имидазопиридиновый амин, 6,7-конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида не включает стабилизирующие химические модификации, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций. Дальнейшие аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: 6IA (4, 5)24%/IA (4,5)61,2, где IA (4,5)24% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение 24 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей,и где IA (4,5)6 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение 6 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, инкапсулированное в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления лабильное иммуномодулирующее средство включает имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-CG-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид вклю-2 022699 чает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин, имидазопиридиновый амин, 6,7-конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида не включает стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций. В определенных вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство инкапсулировано в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующим средством является адъювант. В определенных вариантах осуществления адъювант включает агонист Toll-подобного рецептора (TLR),такой как агонист TLR 3, агонист TLR 7, агонист TLR 8, агонист TLR 7/8 или агонист TLR 9. В определенных вариантах осуществления агонистом TLR является иммуностимулирующая нуклеиновая кислота,такая как иммуностимулирующая ДНК или иммуностимулирующая РНК. В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующая нуклеиновая кислота представляет собой CpG-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, которая включает одну или несколько стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В определенных вариантах осуществления адъювант включает универсальный Тклеточный антиген. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель дополнительно включает В-клеточный антиген и/или Т-клеточный антиген. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители дополнительно включают свойство нацеливания на антигенпрезентирующие клетки (АРС). В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько биоразлагаемых полимеров. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает поли(лактид), поли(гликолид) или сополимер(лактида и гликолида). В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Д, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В определенных вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает амидную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает сложноэфирную связь. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы. В определенных вариантах осуществления композиции, связанные с данным изобретением, дополнительно включают фармацевтически приемлемый эксципиент. Дополнительные аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим вакцину,которая включает любую из композиций, связанных с данным изобретением. Дополнительные аспекты данного изобретения включают способы, которые включают введение любой из композиций, связанных с данным изобретением, субъекту. В некоторых вариантах осуществления композиции находятся в количестве, эффективном для индукции или усиления иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления у субъекта - рак, инфекционное заболевание, неаутоимунное нарушение обмена веществ, дегенеративное заболевание или привыкание. Краткое описание графических материалов Фиг. 1 демонстрирует высвобождение резиквимода (R848) из составов синтетического наноносителя при рН 7,4, 37 С; фиг. 2 демонстрирует высвобождение R848 из составов синтетического наноносителя при рН 4,5,37 С; фиг. 3 демонстрирует высвобождение R848 из составов синтетического наноносителя при рН 7,4 и рН 4,5 за 24 ч; фиг. 4 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями с CpGсодержащей иммуностимулирующей нуклеиновой кислотой (группы 2 и 3) по сравнению с уровнем индукции антител синтетическими наноносителями без CpG-содержащей иммуностимулирующей нуклеиновой кислоты (группа 1); фиг. 5 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые высвобождают сложный фосфодиэфир, CpG-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту без остатка тиокислоты или CpG-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту с остатком тиокислоты; фиг. 6 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые высвобождают R848 с различными скоростями; фиг. 7 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые транспортируют удерживаемый фосфодиэфирный (РО) CpG, обозначенных как NC-Nic/PO-CpG; фиг. 8 демонстрирует высвобождение удерживаемого PO-CpG из наноносителей при рН 4,5 по сравнению с рН 7,5. Данные демонстрируют, что лабильное иммуномодулирующее средство, такое какPO-CpG, защищено инкапсулированием в синтетическом наноносителе. Такое лабильное средство может высвобождаться в требуемом месте действия с рН 4,5 (например, в эндосоме/лизосоме), при этом низкие уровни высвобождения наблюдаются при рН 7,4 (например, обычно рН снаружи эндосомы/лизосомы). Подробное описание Прежде чем описывать данное изобретение в деталях, следует понять, что данное изобретение не ограничивается отдельно проиллюстрированными материалами или технологическими параметрами,которые, конечно, могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, использованная в настоящем документе, применена только с целью описания отдельных вариантов осуществления изобретения и не предназначена для ограничения применения альтернативной терминологии для описания данного изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые в данном документе выше или ниже,включены в данный документ в качестве ссылки во всей их полноте для любых целей. Как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки с множественным числом, если содержание четко не диктует иное. Например, ссылка на "полимер" включает смесь из двух или более таких молекул, ссылка на "растворитель" включает смесь из двух или более таких растворителей, ссылка на "адгезив" включает смеси из двух или более таких материалов и т.п. Введение. Данное изобретение является полезным в том, что оно обеспечивает способ высвобождения иммуномодулирующих средств более напрямую в местах действия представляющих интерес клеток, в частности антиген-презентирующих клеток, что в результате приведет к благоприятному иммунному ответу и/или уменьшит нецелевые эффекты и токсичность, поскольку большая часть высвобождения иммуномодулирующих средств будет на месте действия в представляющих интерес клетках. Это представляет отдельный интерес для доставки адъювантов. Свойства контролируемого высвобождения впервые предлагают контролируемый способ доставки иммуномодулирующих средств к представляющим интерес иммуноцитам, включая возможность высвобождения иммуномодулирующих средств на протяжении продолжительного периода. Все это ведет к очень настраиваемой системе с получением оптимального высвобождения иммуномодулирующего средства так, чтобы оно высвобождалось преимущественно на месте действия требуемых клеток. Авторы дополнительно узнали, что связывание лабильных иммуномодулирующих средств в синтетических наноносителях по данному изобретению посредством инкапсулирования лабильных иммуномодулирующих средств в синтетических наноносителях по данному изобретению и обеспечение контролируемого способа доставки лабильных иммуномодулирующих средств к представляющим интерес иммуноцитам, предпочтительно на протяжении продолжительного периода, даст в результате целенаправленную доставку лабильных иммуномодулирующих средств, минимизируя при этом нецелевые эффекты иммуномодулирующих средств, особенно нецелевые эффекты, связанные с систематическим введением иммуномодулирующих средств. Кроме того, данный подход может улучшить результативность лабильных иммуномодулирующих средств, имеющих короткий период полувыведения, которые в ином случае могут не иметь требуемый уровень фармакологической активности. В одном варианте осуществления данное изобретение касается определенных олигонуклеотидов. В последнее время был ряд сообщений, описывающих иммуностимулирующий эффект конкретных типов молекул нуклеиновых кислот, включая CpG-нуклеиновые кислоты, с высоким содержанием GU оцРНК(одноцепочечные РНК) и двуцепочечные РНК. Следует отметить, что недавно сообщалось о том, чтоToll-подобный рецептор 9 (TLR9) узнает бактериальную ДНК и олигонуклеотиды, содержащие CpG мотив, где цитозин неметилирован. Hemmi H. et al. (2000) Nature, 408:740-5; Bauer S. et al. (2001) Proc NatlAcad Sci USA, 98:9237-42. Эффекты CpG-содержащих олигонуклеотидов на иммунную модуляцию подробно были описаны в патентах США, таких как патенты США 6194388, 6207646, 6239116 и 6218371,и в опубликованных международных патентных заявках, таких как WO98/37919, WO98/40100,WO98/52581 и WO99/56755. Неметилированной может быть вся иммуностимулирующая нуклеиновая кислота или неметилированными могут быть части, но, по меньшей мере, должен быть неметилирован С из 5'-CG-3'. Естественные ДНК-олигонуклеотиды содержат фосфодиэфирные связи, которые быстро расщепляются нуклеазами, обнаруживаемыми во внеклеточной среде; Yu, D. et al., Potent CpG oligonucleotidesCommun, 2002, 297(1): p. 83-90 ("Yu et al."); Heeg, K., et al., Structural requirements for uptake and recognition of CpG oligonucleotides, Int J. Med. Microbiol, 2008, 298(1-2): p. 33-8 ("Heeg et al."). Такие естественные олигонуклеотиды могут считаться лабильными иммуномодулирующими средствами. Соответственно способы химической стабилизации связей путем замещения фосфодиэфирной связывающей группы фосфоротиоатной группой подробно освещены в литературе; см. патент США 6811975 "Фосфоротиоатные олигонуклеотиды с модифицированными межнуклеозидными связями". Фосфоротиоатные CpG-содержащие олигонуклеотиды систематично вводили в качестве вакцинных адъювантов; Yu et al. Однако систематичное введение стабилизированных CpG-олигонуклеотидов может привести к нецелевым иммуностимулирующим эффектам, таким как общее воспаление, неспецифическая активация лимфоцитов и гриппоподобные симптомы; Haas, Т., et al., Sequence independent interferonalpha induction by multimerized phosphodiester DNA depends on spatial regulation of Toll-like receptor-9 activation in plasmacytoid dendritic cells, Immunology, 2009, 126(2): p. 290-8 ("Haas et al."). Соответственно такие олигонуклеотиды могут быть эффективно включены в практическое осуществление настоящего изобретения, как это описано более детально ниже. Авторы неожиданно и к удивлению обнаружили, что проблемы и ограничения, отмеченные выше,могут быть преодолены применением изобретения, раскрытого в данном документе. В частности, авторы неожиданно обнаружили, что возможно обеспечение наряду со связанными с ними способами композиции, которая включает синтетические наноносители, включающие иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем; где иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: где IA (высв.) (4,5)t% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 4,5 в течение t часов, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 4,5 в течение t часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 4,5 в течение t часов, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее образцов синтетических наноносителей; и где IA (высв.) (7,4)t% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 7,4 в течение t часов, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства,высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 7,4 в течение t часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 7,4 в течение t часов,выраженный в весовом проценте и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей; и где t равно 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, отделяется от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: где где IA (высв.) (4,5)t%, IA (высв.) (7,4)t% и t являются такими, как определено выше. В других вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: где IA (высв.) (4,5)t%, IA (высв.) (7,4)t% и t являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления t равно 24 ч. Соответственно данное изобретение относится к композициям и способам, включающим синтетические наноносители, которые высвобождают иммуномодулирующие средства при значительно различающихся скоростях в нейтральном и кислом рН. При доставке иммуномодулирующих средств, для того, чтобы получить наиболее сильный эффект, желательно, чтобы большая часть иммуномодулирующего средства высвободилась внутри АРС, где они смогут оказывать требуемый эффект. При введении иммуномодулирующих средств в свободной форме, или при их высвобождении и синтетической наночастицы вне АРС, лишь небольшая часть иммуномодулирующего средства найдет путь к АРС, в то время как остаток распространится по телу, при этом иммунная стимуляция будет меньшей и может привести к вредным эффектам. Приведенные в данном документе синтетические наноносители по данному изобретению предпочтительно поглощаются АРС. После поглощения АРС синтетические наноносители считаются поглощенными посредством эндоцитоза в эндосомальный/лизосомальный компартмент, где рН становится более кислым по сравнению с нейтральным рН снаружи клеток. В этих условиях иммуномодулирующее средство проявляет рН-чувствительную диссоциацию от синтетического наноносителя (например, от связывающей иммуномодулирующее средство части) и высвобождается из синтетического наноносителя. Иммуномодулирующее средство затем имеет возможность взаимодействовать с рецепторами, связанными с эндосомой/лизосомой, и стимулировать требуемый иммунный ответ. Свойство синтетических наноносителей по данному изобретению иметь более низкое высвобождение иммуномодулирующих средств при или около нейтрального рН или в вариантах осуществления при или около значения физио-7 022699 логического рН (т.е. рН 7,4), но повышенное высвобождение при или около рН 4,5 является желаемым,поскольку оно нацеливает иммуномодулирующие средства на эндосомальный/лизосомальный компартмент АРС, на которые нацелены синтетические наноносители. Иммуномодулирующие средства могут быть связаны с синтетическими наноносителями любым способом. В целом, связывание может быть результатом связи между иммуномодулирующим средством и синтетическим наноносителем. Данная связь может в результате дать иммуномодулирующее средство,которое прикреплено к поверхности синтетического наноносителя и/или содержится (инкапсулировано) в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления, однако, иммуномодулирующее средство инкапсулируется синтетическим наноносителем скорее вследствие структуры синтетического наноносителя, чем в связи с синтетическим наноносителем. Если связывание происходит вследствие связи между иммуномодулирующим средством и синтетическим наноносителем, то связывание происходит через связывающую иммуномодулирующее средство часть. "Связывающая иммуномодулирующее средство часть" может быть любой частью, посредством которой иммуномодулирующее средство связывается с синтетическим наноносителем. Такие части включают ковалентные связи, такие как амидная связь или сложноэфирная связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или нековалентно) иммуномодулирующее средство с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать загруженный полимер, с которым электростатически связывается иммуномодулирующее средство (например, иммуностимулирующая нуклеиновая кислота). В качестве другого примера связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать полимер или его элементарное звено, с которым ковалентно связывается иммуномодулирующее средство. В некоторых вариантах осуществления полимер включает сложный полиэфир, поликарбонат, полиамид или простой полиэфир. В других вариантах осуществления полимер или его элементарное звено включают поли(этиленгликоль) (PEG), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блоксополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон или их элементарное звено. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы полимер был биоразлагаемым. Таким образом, в данных вариантах осуществления предпочтительно, что если полимер включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль) или его элементарное звено, то полимер включает блок-сополимер простого полиэфира и биоразлагаемого полимера с тем, чтобы полимер был биоразлагаемым. В других вариантах осуществления полимер сам по себе не включает простой полиэфир или его элементарное звено, такой как поли(этиленгликоль) или его элементарное звено. Связывающая иммуномодулирующее средство часть, которая приведена в данном документе, таким образом может включать один из вышеупомянутых полимеров или его элементарное звено (например, лактид или гликолид). В некоторых вариантах осуществления для применения в составе синтетического наноносителя полимер из соединений или конъюгатов, приведенных в данном документе, является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25 С является биоразлагаемым или и то и другое. В других вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25 С, но растворимым при рН 4,5 и при 25 С. В еще других вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25 С,но растворимым при рН 4,5 и при 25 С и биоразлагаемым. В других вариантах осуществления любой из приведенных в данном документе полимеров может иметь средневесовой молекулярный вес, который определяют гель-проникающей хроматографией, от приблизительно 800 до 10000 Да (например, 2000 Да). В одном варианте осуществления иммуномодулирующим средством является адъювант, такой как имидазохинолин. Имидазохинолин включает соединения, такие как имиквимод и резиквимод (также известный как R848). Такие адъюванты могут быть связанными с полимером, как приведено выше. Например, резиквимод сконъюгировали с полимером полимолочной кислоты (PLA) 2000 Да. В исследованиях высвобождения in vitro такой вариант осуществления демонстрировал повышение высвобождения R848 в 3-6 раз при падении рН от 7,4 до 4,5. Табл. 1 приводит композиции протестированных частиц. Они включали два состава, которые инкапсулировали R848, два состава с PLA, ковалентно связанной с R848 через амин R848, и четыре состава с PLA, ковалентно связанной с R848 (посредством способа с раскрытием кольца). Во всех составах высвобождение R848 значительно повышалось при более низком рН. Скорость высвобождения инкапсулированного намного выше, чем скорости высвобождения сконъюгированого, и также есть разницы в скоростях высвобождения среди способов конъюгации. Хотя вышеприведенный пример был с PLA, иммуномодулирующие средства, такие как R848, могут быть связаны с другими полимерами или их элементарными звеньями, такими как те, что приведены выше или в других частях данного документа, включая блок-сополимер сополимера полилактида и гликолида (PLGA) или его элементарное звено. Иммуномодулирующие средства, такие как R848, могут быть связаны с такими полимерами или их элементарными звеньями через амидную или сложноэфирную связь. Примеры способов осуществления такого связывания приведены в других частях документа и в примерах. Авторы также неожиданно обнаружили, что возможно обеспечение, наряду с соответствующими способами, композиции, включающей синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем; при этом иммуномодулирующее средство,предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: где IA (4,5)t1 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 4,5 в течение t1, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей; и где IA (4,5)t2 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной среды при рН 4,5 в течение t2, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей; и где t1 равно 4, 6, 8, 10,12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч; t2 равно 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28 ч и t1t2. В некоторых вариантах осуществления t1 равно 24 ч, a t2 равно 6 ч. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: где IA (4,5)t1, IA (4,5)t2, t1 и t2 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления t1 равно 24 ч, a t2 равно 6 ч. В других вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: где IA (4,5)t1, IA (4,5)t2, t1 и t2 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления t1 равно 24 ч, а t2 равно 6 ч. Синтетические наноносители по данному изобретению также, как было показано, проявляют свойство усиления гуморального иммунного ответа на специфический антиген. Такой усиленный гуморальный иммунный ответ, как было обнаружено, повышается в некоторых вариантах осуществления более быстрым высвобождением иммуномодулирующего средства. В одном варианте осуществления иммуномодулирующее средство представляет собой CpG-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, и CpG-содержащая иммуностимулирующая нуклеиновая кислота инкапсулирована в синтетическом наноносителе. При исследованиях in vitro, описанных далее ниже в примерах, было обнаружено,что оптимальное высвобождение CpG-содержащих иммуностимулирующих нуклеиновых кислот из синтетических наноносителей продуцировало повышенный гуморальный иммунный ответ на никотин, который также был связан с синтетическими наноносителями. В некоторых вариантах осуществления такое оптимальное высвобождение было обнаружено как более хорошее усиление ответа посредством антител на антиген. Оптимальным высвобождением является диссоциация иммуномодулирующего средства от синтетического наноносителя, которая дает наилучшие уровни требуемого эффекта(эффектов). В некоторых вариантах осуществления требуемым эффектом является немедленный иммунный ответ требуемого уровня (т.е. ответ, который происходит вскоре после введения синтетического наноносителя). Обычно немедленным иммунным ответом является ответ, измеряемый порядка секунд, минут или нескольких часов. В других вариантах осуществления требуемым эффектом является иммунный ответ требуемого уровня, который происходит спустя несколько часов. В еще одних других вариантах осуществления требуемым эффектом является иммунный ответ требуемого уровня, который поддерживается в течение продолжительного периода времени, например в течение 1, 2, 5, 10, 15 или более часов. В других вариантах осуществления продолжительный период времени составляет в течение 1, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30 или более суток. В следующих вариантах осуществления продолжительный период времени составляет в течение 1, 2, 5, 10 или более месяцев. В следующих вариантах осуществления продолжительный период времени составляет в течение 1, 2, 5, 10 или более лет. В некоторых вариантах осуществления композиция из синтетических наноносителей, которая обеспечивает оптимальное высвобождение, является композицией, в которой иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно одному из вышеприведенных соотношений. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, которое диссоциирует от синтетического наноносителя со средней скоростью,удовлетворяет следующему соотношению: где IA (4,5)t1, IA (4,5)t2, t1 и t2 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления t1 равно 24 ч, а t2 равно 6 ч. В другом примере резиквимод инкапсулировали в синтетическом наноносителе. При исследованияхin vitro, описанных далее ниже в примерах, было обнаружено, что резиквимод, содержащийся в синтетических наноносителях, усиливал гуморальный иммунный ответ на никотин, также связанный с синтетическими наноносителями. Также было обнаружено, что среднее высвобождение резиквимода из синтетических наноносителей было оптимальным, поскольку оно в результате приводило к более высокому уровню индукции антител, чем быстрое или медленное высвобождение резиквимода. Соответственно приведенные в данном документе синтетические наноносители могут содержать один или несколько антигенов. Антигенами могут быть В-клеточные антигены, или Т-клеточные антигены, или комбинация из того и другого. В некоторых вариантах осуществления такие антигены могут быть связаны с синтетическими наноносителями так, чтобы они присутствовали на поверхности синтетических наноносителей, были инкапсулированы в наноносителях или и то и другое. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство усиливает иммунный ответ на такой антиген. Как упомянуто выше, антиген может быть также связан с синтетическими наноносителями. В других вариантах осуществления, однако, такой антиген ковалентно не связан с синтетическими наноносителями. В некоторых их этих вариантов осуществления такой антиген может быть введен совместно субъекту. В еще других из этих вариантов осуществления такой антиген не вводят совместно субъекту. Определения."Адъювант" означает средство, которое не представляет собой конкретный антиген, но увеличивает силу и продолжительность иммунного ответа на антиген. Такие адъюванты могут включать, без ограничения, стимуляторы образраспознающих рецепторов, таких как Toll-подобные рецепторы, RIG-1 и NODподобные рецепторы (NLR), минеральные соли, такие как квасцы, квасцы, объединенные с монофосфориллипидами (MPL) А из Enterobacteria, таких как Escherihia coli, Salmonella minnesota, Salmonella typhimurium или Shigella flexneri, или, в частности, с MPL (AS04), MPL А из вышеупомянутых бактерий отдельно, сапонины, такие как QS-21,Quil-A, ISCOM, ISCOMATRIX, эмульсии, такие как MF59,Montanide ISA 51 и ISA 720, AS02 (QS21+сквален+MPL), липосомы и липосомальные составы, такие как AS01, синтезированные или специально полученные микрочастицы и микротранспортеры, такие как происходящие от бактерий везикулы из внешней мембраны (OMV) из N. gonorrheae, Chlamydia trachomatis и других, или хитозановые частицы, средства, образующие депо, такие как блок-сополимеры Pluronic, специально модифицированные или полученные пептиды, такие как мурамил-дипептид, аминоалкилглюкозаминида 4-фосфаты, такие как RC529, или белки, такие как бактериальные токсоиды или фрагменты токсинов. В вариантах осуществления адъюванты включают агонисты для образраспознающих рецепторов (PRR), включая, без ограничения, Toll-подобные рецепторы (TLR), в особенности TLR 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 и/или их комбинации. В других вариантах осуществления адъюванты включают агонисты для Toll-подобных рецепторов 3, агонисты для Toll-подобных рецепторов 7 и 8 или агонисты дляToll-подобного рецептора 9; предпочтительно упомянутые адъюванты включают имидазохинолины; такие как резиквимод (также известный как R848); адениновые производные, такие как те, которые описаны в патенте США 6329381 (Sumitomo Pharmaceutical Company); иммуностимулирующую ДНК или иммуностимулирующую РНК. В специфических вариантах осуществления синтетические наноносители включают в качестве адъювантов соединения, которые представляют собой агонисты Toll-подобных рецепторов (TLR) 7 и 8 ("агонисты TLR 7/8"). С практической стороны соединения-агонисты TLR 7/8 раскрыты в патенте США 6696076 Tomai et al., включая, без ограничения, имидазохинолинамины, имидазопиридинамины, 6,7-конденсированные циклоалкилимидазопиридинамины и 1,2-мостиковые имидазохинолинамины. Предпочтительные адъюванты включают имиквимод и резиквимод. В конкретных вариантах осуществления адъювант может быть агонистом для поверхностной молекулы CD 40 DC (денд- 11022699 ритных клеток). В определенных вариантах осуществления синтетический наноноситель включает адъювант, который способствует созреванию DC (необходимых для эффективного примирования наивных Тклеток) и продуцирования цитокинов, таких как интерфероны I типа, которые, в свою очередь, стимулируют иммунный ответ с помощью антител и цитотоксический иммунный ответ против требуемого антигена. В вариантах осуществления адъюванты также могут содержать иммуностимулирующие РНК молекулы, такие как, без ограничения, дсРНК или поли I:C (TLR3 стимулятор), и/или раскрытые у F. Heil etinfections" WO 2005097993 A2; G. Lipford et al., "Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides,compositions, and screening methods" WO 2003086280 A2. В некоторых вариантах осуществления адъювантом может быть агонист TLR-4, такой как бактериальный липополисахарид (LPS), VSV-G и/илиHMGB-1. В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут включать агонисты TLR-5, такие как флагеллин, или их части, или производные, включая, без ограничения, описанные в патентах США 6130082, 6585980 и 7192725. В специфических вариантах осуществления синтетические наноносители включают лиганд к Toll-подобному рецептору (TLR)-9, такой как иммуностимулирующий олигонуклеотидные молекулы, включающие мотивы 5'-CG-3', где С неметилирован, которые индуцируют секрецию интерферона I типа и стимулируют активацию Т- и В-клеток, приводя к повышенной продукции антител и цитотоксическим Т-клеточным ответам (Krieg et al., CpG motifs in bacterial DNA trigger direct В cell activation, Nature, 1995, 374:546-549; Chu et al. CpG oligodeoxynucleotides act as adjuvants that switch on Tet al., Bacterial DNA as immune cell activator. Trends Microbiol., 1998, 6:496-500. В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть провоспалительными стимулами, выделенными некротическими клетками (например, кристаллы уратов). В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть активированными компонентами каскада комплемента (например, CD21, CD35 и т.д.). В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть активированными компонентами иммунных комплексов. Адъюванты также включают агонисты рецептора комплемента, такие как молекула, которая связывается с CD21 или CD35. В некоторых вариантах осуществления агонист рецептора комплемента индуцирует опсонизацию эндогенного комплемента синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления адъюванты являются цитокинами, которые относятся к малым протеинам или биологическим факторам (в диапазоне 5-20 кДа), которые выделяются клетками и имеют специфические эффекты на межклеточное взаимодействие, коммуникацию и поведение других клеток. В некоторых вариантах осуществления агонист цитокинового рецептора является малой молекулой, антителом, сшитым белком или аптамером."Введение" или "ввод" означает обеспечение лекарства пациенту фармакологически пригодным способом."Признак нацеливания на АРС" означает одну или несколько частей, из которых состоят синтетические наноносители по данному изобретению, которые нацеливают синтетические наноносители на специализированные антигенпрезентирующие клетки ("АРС"), такие как, без ограничения, дендритные клетки, SCS макрофаги, фолликулярные дендритные клетки и В-клетки. В вариантах осуществления признак нацеливания на АРС может включать иммуноспецифическую поверхность(поверхности) и/или нацеливающие части, которые связывают известные мишени на АРС. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут включать один или несколько В-клеточных антигенов на поверхности синтетического наноносителя. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут также включать один или несколько размеров синтетических наночастиц, которые выбраны с тем, чтобы способствовать поглощению АРС. В вариантах осуществления нацеливающие части для известных мишеней на макрофагах ("МФ") включают любую нацеливающую часть, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), которая заметно экспрессируется и/или представлена на макрофагах (т.е. маркеры макрофагов субкапсулярного синуса). Иллюстративные маркеры СКС-МФ включают, без ограничения,и/или рецептор маннозы; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. В вариантах осуществления нацеливающие части для известных мишеней на дендритных клетках("ДК") включают любую нацеливающую часть, которая специфически связывается с любым объектом и/или представлена на ДК (т.е. маркер ДК). Иллюстративные маркеры ДК включают, без ограничения, где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. В вариантах осуществления нацеливание может быть выполнено с помощью любой нацеливающей части, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом,малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессируется и/или представлен на В-клетках (т.е. маркер В-клеток). Иллюстративные маркеры В-клеток включают, без ограничения,где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают те, которые предусмотрены в других местах данного документа. В некоторых вариантах осуществления нацеливание на В-клетки может быть выполнено с помощью любой нацеливающей части, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), которая заметно экспрессируется и/или представлена на В-клетках при активации (т.е. маркер активированных В-клеток). Иллюстративные маркеры активированных В-клеток включают, без ограничения, где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают те, которые предусмотрены в других местах данного документа."В-клеточный антиген" означает любой антиген, который встречается в природе или может быть сконструирован для того, чтобы узнаваться В-клеткой, и запускает (естественным образом или будучи сконструированным, как известно в области техники) иммунный ответ у В-клетки (например, антиген,который специфически распознается В-клеточным рецептором на В-клетке). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном, также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Вклеточные антигены включают, без ограничения, белки, пептиды, малые молекулы и углеводы. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является небелковым антигеном (т.е. не является белковым или пептидным антигеном). В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является углеводом, связанным с инфекционным агентом. В некоторых вариантах осуществления Вклеточный антиген является гликопротеином или гликопептидом, связанным с инфекционным агентом. Инфекционный агент может быть бактерией, вирусом, грибом, простейшим, паразитом или прионом. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является слабоиммуногенным антигеном. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является веществом, которым злоупотребляют, или его частью. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является вызывающим привыкание веществом или его частью. Вызывающие привыкание вещества включают, без ограничения,никотин, наркотическое средство, средство от кашля, транквилизатор и седативное средство. В некоторых вариантах осуществления В-клеточным антигеном является токсин, например токсин из химического оружия или естественных источников, или загрязняющее вещество. В-клеточный антиген также может быть средством, вредным для окружающей среды. В других вариантах осуществления В-клеточный антиген является аллоантигеном, аллергеном, контактным сенсибилизирующим веществом, антигеном дегенеративного заболевания, гаптеном, антигеном инфекционного заболевания, раковым антигеном,антигеном атопического заболевания, вызывающим привыкание веществом, ксеноантигеном или ферментом нарушения обмена веществ или продуктом данного фермента."Биоразлагаемый полимер" означает полимер, который распадается с течением времени при введении в организм субъекта. Биоразлагаемый полимер включает, без ограничения, сложные полиэфиры,поликарбонаты, поликетали или полиамиды. Такие полимеры могут включать поли(молочную кислоту),поли(гликолевую кислоту), сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. В некоторых вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер простого полиэфира,- 17022699 например поли(этиленгликоля), и сложного полиэфира, поликарбоната или полиамида или другой биоразлагаемый полимер. В вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер поли(этиленгликоля) и поли(молочной кислоты), поли(гликолевой кислоты), блок-сополимера(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактона. В некоторых вариантах осуществления, однако, биоразлагаемый полимер не включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль), или состоит только из простого полиэфира. В целом, для применения в составе синтетического наноносителя биоразлагаемый полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25 С. Биоразлагаемый полимер в вариантах осуществления имеет средневесовой молекулярный вес в диапазоне от приблизительно 800 до приблизительно 50000 Да, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В некоторых вариантах осуществления средневесовой молекулярный вес составляет от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да, предпочтительно от 800 до 10000 Да, который определяют с помощью гельпроникающей хроматографии. В других вариантах осуществления средневесовой молекулярный вес составляет от 1000 до 10000 Да, что определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В варианте осуществления биоразлагаемый полимер не включает поликеталь."Вводят совместно" означает введение двух или более лекарственных средств субъекту таким способом, который коррелирует во времени. В вариантах осуществления совместное введение может происходить путем введения двух или более лекарственных средств в одной лекарственной форме. В других вариантах осуществления совместное введение может охватывать введение двух или более лекарственных средств в различных лекарственных формах, но в определенном промежутке времени, предпочтительно в пределах 1 месяца, более предпочтительно в пределах 1 недели, еще более предпочтительно в пределах 1 суток и еще более предпочтительно в пределах 1 ч."Связывают", или "связанный", или "связывает" (и подобное) означает присоединенный к или содержащийся в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления связывание является ковалентным. В некоторых вариантах осуществления ковалентное связывание опосредовано одним или несколькими линкерами, полимерами или их элементарными звеньями. В некоторых вариантах осуществления связывание является нековалентным. В некоторых вариантах осуществления нековалентное связывание опосредовано взаимодействиями зарядов, аффинными взаимодействиями, координационной связью металлов, физической адсорбцией, взаимодействиями типа хозяин-гость, гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями ТТ укладки, взаимодействиями водородных связей, взаимодействиями Ван-дер-Ваальса, магнитными взаимодействиями, электростатическими взаимодействиями, дипольдипольными взаимодействиями и/или их комбинациями. В вариантах осуществления связывание может появляться в контексте инкапсуляции в синтетические наноносители с использованием традиционных методик. Любое из вышеупомянутых связываний может быть организовано так, чтобы быть на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению."Происходящий от" означает адаптированный или модифицированный по сравнению с исходным источником. Например, в качестве неограничивающего примера, пептидный антиген, происходящий от инфекционного штамма, может иметь несколько искусственных аминокислотных остатков, которые замещают естественные аминокислотные остатки, обнаруживаемые в исходном антигене, который обнаруживается у инфекционного штамма. Адаптации или модификации могут быть по ряду причин, включая, без ограничения, повышенную специфичность, более легкий процессинг антигена или повышенную безопасность."Лекарственная форма" означает лекарство в среде, транспортере, носителе или устройстве, пригодном для введения субъекту."Эффективное количество" композиции по данному изобретению представляет собой количество,эффективное для определенной цели. Например, если эффективное количество предназначено для терапевтической цели, то количество является эффективным для лечения, ослабления, улучшения, облегчения, замедления начала, ингибирования развития, уменьшения тяжести и/или уменьшения частоты одного или нескольких симптомов или признаков заболевания, расстройства и/или состояния, приведенных в данном документе."Инкапсулировать" означает заключать в синтетическом наноносителе, предпочтительно полностью заключать в синтетическом наноносителе. Большая часть или все вещество, которое инкапсулируется, не подвергается воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю. Инкапсуляция отличается от абсорбции, которая размещает большую часть или все вещество на поверхности синтетического наноносителя и позволяет веществу подвергаться воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю."Проявляет рН-чувствительную диссоциацию" означает, что связь между двумя частицами, такими как иммуномодулирующее средство, и синтетическим наноносителем или связывающей иммуномодулирующее средство частью значительно ослабляется или устраняется путем изменения рН среды. В вариантах осуществления соответствующие рН-чувствительные диссоциации могут удовлетворять любому из приведенных в данном документе соотношений или сочетаний."IA (высв.) (4,5)t%" определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение t часов, делен- 18022699 ный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение t часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 4,5 в течение t часов, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей). В вариантах осуществления t равно 1, 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч. В предпочтительных вариантах осуществления t равно 24 ч."IA (высв.) (7,4)t%" определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 7,4 в течение t часов, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 7,4 в течение t часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой in vitro при рН 7,4 в течение t часов, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей). В вариантах осуществления t равно 1, 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 42 или 30 ч. В предпочтительных вариантах осуществления t равно 24 ч."IA (4,5)t1" определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной средой при рН 4,5 в течение t1 часов, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей. "IA (4,5)t2" определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель in vitro водной средой при рН 4,5 в течение t2 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей. t1 равно 4, 6, 8, 10,12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч; t2 равно 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28 ч; иt1t2. В предпочтительных вариантах осуществления t1 равно 24 ч, a t2 равно 6 ч."Иммуномодулирующее средство" означает средство, которое модулирует иммунный ответ. "Модулировать", как используется в данном документе, относится к индуцированию, усилению, стимуляции или направлению иммунного ответа. Подобные средства включают адъюванты, которые стимулируют(или поддерживают) иммунный ответ на антиген, но не являются антигеном или производным антигена. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство находится на поверхности синтетического наноносителя и/или заключено в синтетический наноноситель. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем через полимер или его элементарное звено. В некоторых вариантах осуществления все иммуномодулирующие средства синтетического наноносителя идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит ряд различных типов иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит множество отдельных иммуномодулирующих средств, все из которых идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго один тип иммуномодулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго два различных типа иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит больше двух различных типов иммуномодулирующих средств."Связывающая иммуномодулирующее средство часть" представляет собой любую часть, посредством которой иммуномодулирующее средство связывается с синтетическим наноносителем. Такие части включают ковалентные связи, такие как амидная связь или сложноэфирная связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или нековалентно) иммуномодулирующее средство с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать загруженный полимер, с которым электростатически связывается иммуномодулирующее средство (например, иммуностимулирующая нуклеиновая кислота). В качестве другого примера, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать полимер или его элементарное звено, с которым ковалентно связывается иммуномодулирующее средство. В некоторых вариантах осуществления часть включает сложный полиэфир. В других вариантах осуществления часть включает поли(этиленгликоль), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блок-сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. Часть может также включать элементарное звено из любого из вышеупомянутых полимеров, такое как лактид или гликолид."Лабильное иммуномодулирующее средство(средства)" означает иммуномодулирующее средство или средства, которые являются нестабильными при физиологических условиях и распадаются до точки,где они более не являются фармакологически активными. В вариантах осуществления наблюдается, что лабильные иммуномодулирующие средства имеют период полувыведения из организма меньше 24,предпочтительно меньше 12, более предпочтительно меньше 10, еще более предпочтительно меньше 8 ч и еще более предпочтительно меньше 6 ч. В вариантах осуществления лабильные иммуномодулирующие средства включают имидазохинолины, производное аденина или олигонуклеотиды, которые включают 5'-CG-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В вариантах осуществления имидазохинолины вклю- 19022699"Максимальный размер синтетического наноносителя" означает самый большой размер наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. "Минимальный размер синтетического наноносителя" означает самый маленький размер синтетического наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. Например, для сфероидального синтетического наноносителя максимальный и минимальный размер синтетического наноносителя были бы, по существу, идентичными и являлись бы величиной его диаметра. Подобным образом, для кубического синтетического наноносителя минимальный размер синтетического наноносителя был бы наименьшим из его высоты, ширины или длины, а максимальный размер синтетического наноносителя был бы наибольшим из его высоты,ширины или длины. В варианте осуществления минимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, составляет больше 100 нм. В варианте осуществления максимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90 синтетических наноносителей в образце,основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 5 мкм. Предпочтительно минимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90 синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или больше 110, более предпочтительно равен или больше 120, более предпочтительно равен или больше 130 и все же более предпочтительно равен или больше 150 нм. Предпочтительно максимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 3 мкм, более предпочтительно равен или меньше 2, более предпочтительно равен или меньше 1 мкм, более предпочтительно равен или меньше 800, более предпочтительно равен или меньше 600 и все же более предпочтительно равен или меньше 500 нм. В предпочтительных вариантах осуществления максимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или больше 100, более предпочтительно равен или больше 120,более предпочтительно равен или больше 130, более предпочтительно равен или больше 140 и более предпочтительно также равен или больше 150 нм. Измерение размера синтетического наноносителя проводится суспендированием синтетического наноносителя в жидкой (обычно водной) среде с применением динамического светорассеяния (например, используя прибор Brookhaven ZetaPALS)."Полученный" означает взятый без адаптации или модификации из исходного источника. Например, в вариантах осуществления антигены, полученные из источника, могут включать исходные аминокислотные остатки, обнаруживаемые в таком источнике. В других вариантах осуществления, например,антигены, полученные из источника, могут включать исходные молекулярные структуры, обнаруживаемые в таком источнике."Олигонуклеотид" означает нуклеотидную молекулу, имеющую 6-100, предпочтительно 8-75, более предпочтительно 10-50, еще более предпочтительно 15-25 и еще более предпочтительно 20 нуклеотидов. В варианте осуществления по данному изобретению олигонуклеотиды включают меньше 100, предпочтительно меньше 50, более предпочтительно меньше 25 и еще более предпочтительно меньше 10 нуклеотидов. Любые цитозиновые нуклеотиды ("С"), присутствующие в последовательности 5'-CG-3', которые входят в состав олигонуклеотида, являются неметилированными, С, присутствующие в частях олигонуклеотидов, отличные от тех, что в последовательности 5'-CG-3', которые входят в состав олигонуклеотида,могут быть метилированными или могут быть неметилированными. В вариантах осуществления олигонуклеотиды по данному изобретению включают остов, который включает одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей (означающие межнуклеотидные связи, которые являются нестабильными при физиологических условиях)."Нестабилизированная межнуклеотидная связь" означает связь между двумя нуклеотидами, которые входят в состав олигонуклеотида и которые химически не модифицированы со стабилизацией остова или химически модифицированы для дестабилизации остова олигонуклеотида при физиологических условиях. Примером нестабилизированной межнуклеотидной связи является фосфодиэфирная связь. В вариантах осуществления остов олигонуклеотида по данному изобретению не включает стабилизирующие химические модификации, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В вариантах осуществления остов олигонуклеотида по данному изобретению включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций."Фармацевтически приемлемый эксципиент" означает фармакологически неактивное вещество, добавленное к композиции по данному изобретению для дальнейшего облегчения введения данной композиции. Примеры, без ограничения, фармацевтически приемлемых наполнителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные разбавители, различные сахара и типы крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли."Скорость высвобождения" означает скорость, с которой удерживаемое иммуномодулирующее средство выходит из композиции, например наноносителя, в окружающую среду в тесте высвобожденияin vitro. Сначала получают синтетический наноноситель для тестирования высвобождения посредством размещения в соответствующей среде высвобождения in vitro. Это обычно осуществляется посредством замены буфера после центрифугирования с осаждением синтетического наноносителя и ресуспендирования синтетических наноносителей в мягких условиях. Данный анализ начинают путем размещения образца при 37 С в соответствующем приборе с контролируемой температурой. В различные моменты времени забирают образец. Синтетические наноносители отделяют от среды для высвобождения путем центрифугирования с осаждением синтетических наноносителей. Среду высвобождения анализируют на предмет иммуномодулирующего средства, которое диспергировалось из синтетических наноносителей. Иммуномодулирующее средство измеряют с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства. Осадок, содержащий остаток удерживаемого иммуномодулирующего средства, растворяют в растворителях или гидролизируют основанием с освобождением удерживаемого иммуномодулирующего средства из синтетических наноносителей. Остаток, содержащий иммуномодулирующее средство, также затем измеряют с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства, которые не высвободились на данный момент времени. Равновесие масс ограничивается иммуномодулирующим средством, которое было высвобождено в среду высвобождения, и тем, что остается в синтетических наноносителях. Данные представлены в виде высвобожденной фракции или чистого высвобожденного веса, представленного как микрограммы, высвобожденные за период времени."Субъект" означает животное, включая млекопитающих, таких как человек и приматы; птиц; животных домашнего хозяйства или фермы, таких как кошки, собаки, овцы, козы, крупный рогатый скот,лошади и свиньи; лабораторных животных, таких как мыши, крысы и морские свинки, рыбы и тому подобное."Синтетический наноноситель (синтетические наноносители)" означает дискретный объект, который не встречается в природе и который обладает по меньшей мере одним размером, который меньше или равен 5 мкм. Наночастицы альбумина специально включены в качестве синтетических наноносителей. Синтетические наноносители включают полимерные наночастицы. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать одну или несколько полимерных матриц. Синтетические наноносители, однако, могут также включать прочие наноматериалы и могут быть, например,липидно-полимерными наночастицами. В некоторых вариантах осуществления полимерная матрица может быть окружена покрывающим слоем (например, липосома, липидный монослой, мицелла и т.д.). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель не является мицеллой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать ядро, содержащее полимерную матрицу, окруженную липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.). В некоторых вариантах осуществления различные элементы синтетических наноносителей могут быть связаны с полимерной матрицей. Синтетические наноносители могут содержать один или несколько липидов. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липосому. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный бислой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный монослой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать мицеллу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать неполимерное ядро (например, металлическую частицу, квантовую точку, керамическую частицу, костную частицу, вирусную частицу, белки,нуклеиновые кислоты, углеводы и т.д.), окруженное липидным слоем (например, липидный бислой, липидный монослой и т.д.). Синтетические наноносители могут включать наночастицы на основе липидов, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе петида или белка (такие как наночастицы альбумина). Синтетические наноносители могут быть рядом различных форм, включая, без ограничения, сфероидальную, кубическую, пирамидальную, вытянутую, цилиндрическую, тороидальную и тому подобное. Синтетические наноносители согласно данному изобретению имеют одну или несколько поверхностей. Примеры синтетических наноносителей, которые могут быть адаптированы для использования в практическом применении данного изобретения, включают (1) биоразлагаемые наночастицы, раскрытые в патенте США 5543158, Gref et al., (2) полимерные наночастицы из опубликованной заявки на патент США 20060002852, Saltzman et al., (3) сконструированные литографическим способом наночастицы из опубликованной заявки на патент США 20090028910, DeSimone et al., (4) раскрытие WO 2009/051837,von Andrian et al., или (5) наночастицы, раскрытые в опубликованной заявке на патент США 2008/0145441, Penades et al. Синтетические наноносители согласно данному изобретению, которые имеют минимальный раз- 21022699 мер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхности с гидроксильными группами, которые активируют комплемент, или, альтернативно, имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, не являющихся гидроксильными группами, которые активируют комплемент. В предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхность, которая, по сути, активирует комплемент, или, альтернативно, имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, которые,по сути, не активируют комплемент. В более предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхность, которая активирует комплемент, или, альтернативно, имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, которые не активируют комплемент. В вариантах осуществления синтетические наноносители могут иметь соотношение сторон более 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или более 1:10. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются сферами или сфероидами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители плоские или пластинчатые. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители кубы или кубические. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители овалы или эллипсы. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители цилиндры, конусы или пирамиды. Часто желательно применение популяции синтетических наноносителей, которая является относительно равномерной с точки зрения размера, формы и/или композиции так, чтобы каждый синтетический наноноситель имел сходные свойства. Например, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90 или по меньшей мере 95% синтетических наноносителей может иметь минимальный размер или максимальный размер, который попадает в пределы 5, 10 или 20% от среднего диаметра или среднего размера. В некоторых вариантах осуществления популяция синтетических наноносителей может быть гетерогенной по отношению к размеру, форме и/или композиции. Синтетические наноносители могут быть сплошными или полыми и могут содержать один или несколько слоев. В некоторых вариантах осуществления каждый слой имеет уникальную композицию и уникальные свойства по отношению к другому слою(другим слоям). Чтобы дать лишь один пример, синтетические наноносители могут иметь структуру ядро/оболочка, в которой ядро является одним слоем(например, полимерное ядро) и оболочка является вторым слоем (например, липидный бислой или монослой). Синтетические наноносители могут включать несколько разных слоев."Т-клеточный антиген" означает любой антиген, который распознается и инициирует иммунный ответ в Т-клетках (например, антиген, который специфически распознается Т-клеточным рецептором на Т-клетках или клетках NKT посредством презентации антигена или его части, которые связаны с молекулой класса I или класса II главного комплекса гистосовместимости (МНС) или связаны с CD1 комплексом). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном,также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Т-клеточные антигены обычно являются белками или пептидами. Т-клеточные антигены могут быть антигенами, которые стимулируют ответ CD8+ Т-клеток, ответ CD4+ Т-клеток или оба из них. Т-клеточные антигены, следовательно, в некоторых вариантах осуществления могут эффективно стимулировать оба варианта ответа. В некоторых вариантах осуществления Т-клеточный антиген является Т-хелперным антигеном, который является Т-клеточным антигеном, который может давать усиленный ответ на несвязанный Вклетками антиген благодаря стимуляции "помощи" Т-клеток. В вариантах осуществления Т-хелперный антиген может содержать один или несколько пептидов, происходящих от столбнячного токсина, вируса Эпштейна-Барр, вируса гриппа, респираторно-синцитиального вируса, вируса кори, вируса, вызывающего эпидемический паротит, вируса краснухи, цитомегаловируса, аденовируса, дифтерийного анатоксина или PADRE-пептида. В других вариантах осуществления Т-хелперный антиген может включать один или несколько липидов или гликолипидов, включая, но без ограничений: -галактозилцерамид (GalCer), гликосфинголипиды, связанные по -положению (из Sphingomonas spp.), галактозилдиацилглицеролы (из Borrelia burgdorferi), липофосфогликан (из Leishmania donovani) и фосфатидилинозитола тетраманнозид (PIM4) (из Mycobacterium leprae). Дополнительные липиды и/или гликолипиды, пригодные в качестве Т-хелперных антигенов, см. V. Cerundolo et al., "Harnessing invariant NKT cells in vaccinationstrategies", Nature Rev. Immun., 9:28-38 (2009). В вариантах осуществления CD4+ Т-клеточные антигены могут быть производными CD4+ Т-клеточных антигена, полученного из источника, например природного источника. В таких вариантах осуществления последовательности CD4+ Т-клеточных антигенов, такие как те пептиды, которые связываются с МНС II, могут быть по меньшей мере на 70, 80, 90 или 95% идентичны антигену, полученному из данного источника. В вариантах осуществления Т-клеточный антиген, предпочтительно Т-хелперный антиген, может быть связанным с или несвязанным с синтетическим наноносителем."Его элементарное звено" относится к мономерному элементарному звену полимера, при этом по- 22022699 лимер в целом составлен из ряда связанных мономеров."Вакцина" означает композицию вещества, которая усиливает иммунный ответ на конкретный патоген или заболевание. Вакцина обычно содержит факторы, которые стимулируют иммунную систему субъекта для узнавания специфического антигена как чужого и его устранения из организма субъекта. Вакцина также создает иммунологическую "память", поэтому антиген будет быстро узнаваться и на него будет быстро дан ответ, если человек подвергнется вторичному заражению. Вакцины могут быть профилактическими (например, для предупреждения будущей инфекции каким-либо патогеном) или терапевтическими (например, вакцина против опухолеспецифического антигена для лечения рака). Вакцины по данному изобретению могут включать одно или несколько из приведенных в данном документе синтетических наноносителей или композиций. Способы создания изобретенных соединений, конъюгатов или синтетических наноносителей Иммуномодулирующее средство может быть связано с синтетическим наноносителем любым способом так, чтобы диссоциация иммуномодулирующего средства от синтетического наноносителя удовлетворяла диссоциативным соотношениям, приведенным в данном документе. Способы определения того, удовлетворяют или нет иммуномодулирующие средства синтетических наноносителей приведенным в данном документе диссоциативным соотношениям, приведены выше и в примерах. Олигонуклеотиды по данному изобретению могут быть инкапсулированы в синтетические наноносители с помощью ряда способов, включая, но без ограничений, С. Astete et al., "Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles", J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, No. 3, p. 247-289 (2006); K. Avgoustakis" Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties andPossible Applications in Drug Delivery", Current Drug Delivery, 1:321-333 (2004); C. Reis et al., "Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles", Nanomedicine, 2:8- 21 (2006). Могут быть использованы другие способы, пригодные для инкапсулирования олигонуклеотидов в синтетические наноносители, включая, без ограничения, способы, раскрытые в патенте Соединенных Штатов 6632671, Unger, 14 октября 2003 г. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство ковалентно связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части (например,полимера или его элементарного звена). В целом полимер или его элементарное звено может быть ковалентно связано с иммуномодулирующим средством несколькими способами. Следующие способы или любой этап из приведенных способов приводятся в качестве примеров и могут быть осуществлены при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакция или любой этап приведенных способов могут быть осуществлены в присутствии растворителя или смеси растворителей. Неограничивающие примеры растворителей, которые могут быть пригодны для применения в данном изобретении, включают, без ограничения, р-крезол, толуол, ксилол, мезителен, диэтиловый эфир,гликоль, петролейный эфир, гексан, циклогексан, пентан, дихлорметан (или метиленхлорид), хлороформ,диоксан, тетрагидрофуран (THF), диметилсульфоксид (DMSO), диметилформамид (DMF), этилацетат(EtOAc), триэтиламин, ацетонитрил, метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ), N-метилпиррилидон (NMP),диметилацетамид (DMAC), изопропанол (IPA) их смеси или подобное. В некоторых случаях растворитель выбран из группы, состоящей из этилацетата, метиленхлорида, THF, DMF, NMP, DMAC, DMSO и толуола или их смесей. Реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при любой подходящей температуре. В некоторых случаях реакция или любой этап из приведенных способов осуществляют при приблизительно комнатной температуре (например, приблизительно 25, приблизительно 20 С, от приблизительно 20 до приблизительно 25 С и подобное). В некоторых случаях, однако, реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при температуре ниже или выше комнатной температуры, например при приблизительно -20, при приблизительно -10, при приблизительно 0,при приблизительно 10, при приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50, приблизительно 60, приблизительно 70, приблизительно 80, приблизительно 90, приблизительно 100, приблизительно 120, приблизительно 140, приблизительно 150 С или выше. В конкретных вариантах осуществления реакцию или любой этап из приведенных способов проводят при температурах от 0 до 120 С. В некоторых вариантах осуществления реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при более чем одной температуре (например, реагенты, добавляемые при первой температуре, и реакционную смесь, перемешиваемую при второй, где переход от первой температуры ко второй температуре может быть постепенным или быстрым). Реакции или любому этапу из приведенных способов может быть позволено проходить в течение любого подходящего периода времени. В некоторых случаях реакции или любому этапу из приведенных способов позволяют проходить в течение приблизительно 10, приблизительно 20, приблизительно 30,приблизительно 40, приблизительно 50 мин, приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 4,приблизительно 8, приблизительно 12, приблизительно 16, приблизительно 24 ч, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4 суток или дольше. В некоторых случаях аликвоты реакционной смеси могут быть собраны и проанализированы в промежуточное время для определения хода реакции или лю- 23022699 бого этапа из приведенных способов. В некоторых вариантах осуществления реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены в инертной атмосфере в безводных условиях (например, в атмосфере азота или аргона, в безводных растворителях и т.д.). Продукты реакции и/или промежуточные продукты могут быть выделены (например, посредством дистилляции, колоночной хроматографии, экстракции, осаждения и т.д.) и/или проанализированы (например, газожидкостной хроматографией, высокоэффективной жидкостной хроматографией, ядерной магнитно-резонансной спектроскопией и т.д.) с использованием общеизвестных методик. В некоторых случаях синтетический наноноситель может быть проанализирован для определения загрузки иммуномодулирующего средства, например, с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Полимеры могут иметь любой подходящий молекулярный вес. Например, полимеры могут иметь низкий или высокий молекулярный вес. Неограничивающие значения молекулярного веса включают 100, 200, 300, 500, 750, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000 Да или более. В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да. Молекулярный вес полимера может быть определен с помощью гельпроникающей хроматографии. Ниже в качестве примера приведены реакции, которые не подразумеваются как ограничивающие. Способ 1. Полимер (например, PLA, PLGA) или его элементарное звено по меньшей мере с одной кислотной концевой группой превращают в реакционноспособное ацилирующее средство, такое как ацилгалогенид,ацилимидазол, активный сложный эфир и т.д., с помощью активирующего реагента, обычно применяемого при синтезе амидов. В этом двухэтапном способе получаемый в результате активированный полимер или его элементарное звено (например, PLA, PLGA) выделяют и затем вводят в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, R848) в присутствии основания с получением требуемого конъюгата (например,PLA-R848), например, как показано в следующей схеме: Активирующие реагенты, которые могут быть применены для превращения полимеров или их элементарных звеньев, таких как PLA или PLGA, в активированную ацилированную форму, включают, без ограничения, циануровый фторид, N,N-тетраметилфторформамидингексафторфосфат (TFFH); ацилимидазолы, такие как карбонилдиимидазол (CDI), N,N'-карбонил-бис-(3-метилимидазол)трифлат (CBMIT); и активные сложные эфиры, такие как N-гидроксилсукцинимид (NHS или HOSu), в присутствии карбодиимида,такого как(DCC),N-этил-N'-(3-(диметиламино)пропил)карбодиимидгидрохлорид (EDC) или N,N'-диизопропилкарбодиимид (DIC); N,N'дисукцинимидилкарбонат (DSC); пентафторфенол в присутствии DCC, или EDC, или DIC; пентафторфенилтрифторацетат. Активированный полимер или его элементарное звено можно выделить (например, посредством осаждения, экстракции и т.д.) и/или хранить в подходящих условиях (например, при низкой температуре в атмосфере аргона) после активации или можно сразу использовать. Активированный полимер или его элементарное звено можно ввести в реакцию с иммуномодулирующим средством при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакцию осуществляют в присутствии основания и/или катализатора. Неограничивающие примеры оснований/катализаторов включают диизопропилэтиламин (DIPEA) и 4-диметиламинопиридин (DMAP). Способ 2. Полимер или его элементарное звено (например, PLA, PLGA, имеющие любой пригодный молекулярный вес) с кислотной концевой группой вступают в реакцию с иммуномодулирующим средством(например, R848) в присутствии активирующего или связывающего реагента, который превращает полимер или его элементарное звено (например, PLA, PLGA) с реакционноспособным ацилирующим средством in situ, с получением требуемого конъюгата (например, PLA-R848, PLGA-R848). Связующие вещества или активаторы включают, но без ограничений, активаторы, используемые в присутствии карбодиимида, такого как EDC, или DCC, или DIC, такого как 1-гидроксибензотриазол(HBTU), О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (HATU), О-(1,2 дигидро-2-оксо-1-пиридил)-1,1,3,3-тетраметил-урония тетрафторборат (TPTU); галогенурониевые и галогенфосфониевые соли, такие как бис-(тетраметилен)фторформамидиниевый гексафтофосфат (BTFFH),бром-трис-(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (BroP), бромтрипирролидинфосфония гексафторфосфат (PyBroP) и хлортрипирролидинфосфония гексафторфосфат (PyClop); производные бензотриазина, такие как О-(3,4-дигидро-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония тетрафторборат (TDBTU) и 3-(диэтилоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3 Н)-он (DEPBT). Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают DMF, DCM, толуол, этилацетат и т.д., которые описаны в данном документе. Способ 3. Иммуномодулирующие средства, такие как R848, также могут быть связаны с полимерами или их элементарными звеньями, которые заканчиваются гидроксильной группой. Такие полимеры или их элементарные звенья включают полиэтиленгликоль, полилактид, сополимер полилактида и гликолида, поликапролактон и другие подобные сложные полиэфиры или их элементарные звенья. В целом реакция протекает следующим образом, где имид с общей структурой (IV) будет вступать в реакцию с концевым гидроксилом вышеупомянутых полимеров или их элементарных звеньев при помощи катализатора, используемого в реакциях полимеризации с раскрытием лактонового кольца. Получаемый в результате продукт реакции (II) связывает амидсредства с полимером или его элементарным звеном посредством сложноэфирной связи. Соединения с формулами (IV) и (II) представляют собой следующее: где R1=H, ОН, SH, NH2 или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино; R2=H, алкил или замещенный алкил; Y=N или С; R3 отсутствует, если Y=N; или представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, или объединен с R4 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены, если Y=C; R4 представляет собой Н или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино, если не объединен с R3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами пиридинового кольца, к которому они присоединены; или объединен с R3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; R5 представляет собой полимер или его элементарное звено; X представляет собой С, N, О или S; каждый из R6 и R7 независимо представляет собой Н или замещен и каждый из R9, R10, R11 и R12 независимо представляет собой Н, галоген, ОН, тио,NH2 или замещенный или незамещенный алкил, арил, гетероциклил, алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, алкиламино или ариламино. Катализаторы включают, без ограничения, фосфазиновые основания, 1,8-диазабициклоундец-7-ен(DBU), 1,4,7-триазабициклодецен (TBD) и N-метил-1,4,7-триазабициклодецен (MTDB). В данной области техники известны и приводятся другие катализаторы, например у Kamber et al., Organocatalytic RingOpening Polymerization, Chem. Rev., 2007, 107, 58-13-5840. Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают метиленхлорид, хлороформ и THF. Конкретный пример реакции, осуществляемой по такому способу, показан ниже где R5-OH содержит две гидроксильные группы (например, диол, HO-R5-OH), каждая из которых функционализирована при помощи реакции с имидом, связанным с R848. В некоторых случаях HO-R5OH представляет собой полидиол, такой как поли(гексаметилкарбонат)диол или поликапролактондиол. В вариантах осуществления, в которых задействован полидиол, одну из групп диола можно защитить защитной группой (например, t-бутилоксикарбонил), таким образом полидиолом может быть соединение с формулой HO-R5-OP, в которой Р является защитной группой. После реакции с иммуномодулирующим средством с образованием конъюгата иммуномодулирующего средства-R5-OP, причем защитную группу можно удалить и можно ввести в реакцию вторую группу диола с любым подходящим реагентом (например, PLGA, PLA). Способ 4. Конъюгат (например, R848-PLA) можно образовать посредством проводимой в одном сосуде полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, R848) с полимером или его элементарным звеном (например, D/L-лактид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме: При одностадийной процедуре иммуномодулирующее средство и полимер или его элементарное звено можно объединить в единую реакционную смесь, содержащую катализатор. Реакция может быть объединена при подходящей температуре (например, при приблизительно 150 С), а полученный в результате конъюгат может быть выделен с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают DMAP и этилгексаноат олова. Способ 5. Конъюгат может быть образован посредством двустадийной полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, R848) с одним или несколькими полимерами или их элементарными звеньями (например, D/L-лактид или гликолид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме: Полимеры или их элементарные звенья могут быть сначала объединены и, в некоторых случаях, нагреты (например, до 135 С) с образованием раствора. В раствор, содержащий полимеры или их элементарные звенья, может быть добавлено иммуномодулирующее средство с последующим добавлением катализатора (например, этилгексаноата олова). Полученный в результате конъюгат может быть выделен с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включаютDMAP и этилгексаноат олова. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть ковалентно связанными с полимерной матрицей. В некоторых вариантах осуществления ковалентное соединение опосредовано линкером. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть нековалентно связаны с полимерной матрицей. Например, в некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть инкапсулированы внутри, окружены и/или диспергированы по полимерной матрице. Альтернативно или дополнительно, иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть связаны с полимерной матрицей гидрофобными взаимодействиями,взаимодействиями зарядов, силами Ванн-дер-Ваальса и т.д. Иммуномодулирующие средства могут быть также инкапсулированы в наноносители. Наноносители, таким образом, могут быть из любого материала, чувствительного к рН, при условии, что полученные по данному изобретению синтетические наноносители удовлетворяют приведенным в данном документе соотношениям диссоциаций. Такие синтетические наноносители хорошо известны в данной области техники и включают поликеталевые наноносители, рН-чувствительные липосомы, разбухающие под действием кислоты сшитые наночастицы, такие как в Griset et al., J. Am. Chem. Soc., 2009, 131, 2469-2471, которые в своем изначальном состоянии являются гидрофобными, но при клеточной интернализации трансформируются в гидрофильную структуру (гидрогелевая частица), и полимерные наночастицы, такие как в диссертации Griset с названием Delivery of Paclitaxel via pH-Responsive Polymeric Nanoparticlesfor Prevention of Lung Cancer and Mesothelioma Recurrence, Ohio State University, 2003. рНчувствительные наноносители также включают такие, которые включают полимеры, которые растворяются при рН ниже 6, полимеры, которые разбухают при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители состоят не из поликеталевого материала. В другом варианте осуществления синтетические наноносители не являются мицеллами. Широкое разнообразие полимеров и способов формирования полимерных матриц посредством этого общеизвестны. В основном полимерная матрица содержит один или несколько полимеров. Полимеры могут быть природными или неприродными (синтетическими) полимерами. Полимеры могут быть гомополимерами или сополимерами, содержащими два или несколько мономеров. С точки зрения последовательности, сополимеры могут быть статистическими, блок-сополимерами или состоять из комбинации статистических и блоковых последовательностей. Как правило, полимеры в соответствии с настоящим изобретением являются органическими полимерами. Примеры полимеров, подходящих для применения в данном изобретении, включают, без ограничения, полиэтилены, поликарбонаты (например, поли(1,3-диоксан-2 он, полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид, полигидроксикислоты (например, поли(-гидроксиалканоат, полипропилфумераты, поликапролактоны, полиамиды (например, поликапролактам), полиацетали, простые полиэфиры, сложные полиэфиры (например, полилактид, полигликолид), сложные полиэфиры ортокислот,полицианоакрилаты, поливиниловые спирты, полиуретаны, полифосфазены, полиакрилаты, полиметакрилаты, полимочевины, полистиролы, полиамины и полисахариды (например, хитозан). В некоторых вариантах осуществления полимеры в соответствии с данным изобретением включают полимеры, которые были одобрены к применению для людей Управлением по делам пищевых продуктов и медикаментов США (FDA), 21 C.F.R.177.2600, включая, без ограничения, сложные полиэфиры (например, полимолочной кислоты, сополимер полимолочной и полигликолевой кислот) поликапролактон,поливалеролактон, поли(1,3-диоксан-2 он; полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид; простые полиэфиры (например, полиэтиленгликоль); полиуретаны; полиметакрилаты; полиакрилаты и полицианоакрилаты. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофильными. Например, полимеры могут содержать анионные группы (например, фосфатную группу, сульфатную группу, карбоксилатную группу); катионные группы (например, четвертичную аминогруппу) или полярные группы (например, гидроксильную группу, тиоловую группу, аминогруппу). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофильную полимерную матрицу, образует гидрофильное окружение внутри синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофобными. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофобную полимерную матрицу, образует гидрофобное окружение внутри синтетического наноносителя. Выбор гидрофильности или гидрофобности полимера может оказать влияние на характер материалов, которые заключены (например, связаны) в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью одного или нескольких частей и/или функциональных групп. Различные части или функциональные группы могут быть использованы в соответствии с данным изобретением. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью PEG, углеводов и/или ациклических полиацеталей,производных полисахаридов (Papisov, 2001, ACS Symposium Series, 786:301). В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью липидных или жирно-кислотных групп. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или несколькими из масляной, капроновой, каприловой, каприновой, лауриновой, миристиновой, пальмитиновой, стеариновой, арахидиновой, бегеновой или лигноцериновой кислот. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или несколькими из пальмитолеиновой, олеиновой, вакценовой, линолевой, альфа-линоленовой, гамма-линоленовой, арахидоновой, гадолеиновой, арахидоновой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой или эруковой кислот. В некоторых вариантах осуществления полимерами могут быть сложные полиэфиры, в том числе включая сополимеры, содержащие элементарные звенья гликолевой кислоты и молочной кислоты, такие как сополимер полимолочной кислоты и полигликолевой кислоты и сополимер полилактида и полигликолида, совместно именуемые здесь "PLGA"; и гомополимерами, включающими элементарные звенья гликолевой кислоты, упомянутые в настоящем документе как "PGA", и элементарные звенья молочной кислоты, такие как поли-L-молочная кислота, поли-D-молочная кислота, поли-D,L-молочная кислота,поли-L-лактид, поли-D-лактид и поли-D,L-лактид, совместно именуемые здесь "PLA". В некоторых вариантах осуществления образцы сложных полиэфиров включают, например, полигидроксикислоты;PGA-PEG, сополимеры PLGA-PEG и их производные). В некоторых вариантах осуществления сложные полиэфиры включают, например, полиангидриды, сложный полиэфир ортокислоты, сополимеры сложного полиэфира ортокислоты-PEG, поли(капролактон), сополимеры поли(капролактон)-PEG, полилизин,сополимеры полилизин-PEG, поли(этиленимин), сополимеры поли(этиленимин)-PEG, сополимер(Lлактида и L-лизина), сложный полиэфир серина, сложный полиэфир 4-гидрокси-L-пролина, поли[-(4 аминобутил)-L-гликолевая кислота] и их производные. В некоторых вариантах осуществления полимер может быть PLGA. PLGA является биосовместимым и биоразлагаемым сополимером молочной кислоты и гликолевой кислоты, и различные формыPLGA характеризуются соотношением молочная кислота:гликолевая кислота. Молочная кислота может быть L-молочной кислотой, D-молочной кислотой или D,L-молочной кислотой. Скорость разложенияPLGA может быть регулирована путем изменения соотношения молочная кислота:гликолевая кислота. В некоторых вариантах осуществления PLGA, который будет использоваться в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется соотношением молочная кислота:гликолевая кислота приблизительно 85:15, приблизительно 75:25, приблизительно 60:40, приблизительно 50:50, приблизительно 40:60, приблизительно 25:75 или приблизительно 15:85. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть одним или несколькими акриловыми полимерами. В определенных вариантах осуществления акриловые полимеры включают, например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, этоксиэтилметакрилаты, цианоэтилметакрилат, сополимер аминоалкилметакрилата, поли(акриловую кислоту), поли(метакриловую кислоту), сополимер алкиламида метакриловой кислоты, поли(метилметакрилат), поли(метакриловой кислоты ангидрид),метилметакрилат,полиметакрилат,сополимер поли(метилметакрилата), полиакриламид, сополимер аминоалкилметакрилата, сополимеры глицидилметакрилата, полицианакрилаты и комбинации, включающие один или несколько из вышеприведенных полимеров. Акриловый полимер может включать полностью полимеризованные сополимеры сложных эфиров акриловой и метакриловой кислот с низким содержанием групп четвертичного аммония. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть катионными полимерами. В целом,катионные полимеры могут конденсировать и/или защищать отрицательно заряженные нити нуклеиновых кислот (например, ДНК, РНК или их производных). Аминосодержащие полимеры, такие как поли(лизин) (Zauner et al., 1998, Adv. Drug Del. Rev., 30:97 и Kabanov et al., 1995, Bioconjugate Chem., 6:7),поли(этиленимин) (PEI; Boussif et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1995, 92:7297) и поли(амидоамин) дендримеры (Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:4897; Tang et al., 1996, Bioconjugate Chem., 7:703 и Haensler et al., 1993, Bioconjugate Chem., 4:372), являются положительно заряженными при физиологических значениях рН, образуют ионные пары с нуклеиновыми кислотами и опосредуют трансфекцию в различных клеточных линиях. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть разлагаемыми полиэфирами, несущими катионные боковые цепи (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Barrera et al., 1993, J. Am.Chem. Soc, 115:11010; Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc,121:5633 и Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399). Примеры таких полиэфиров включают сополимер(L-лактида и лизина) (Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc, 115:11010), сложный полиэфир серина (Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399), сложный полиэфир 4-гидрокси-L-пролина (Putnam etal., 1999, Macromolecules, 32:3658 и Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc, 121:5633) и сложный полиэфир 4 гидрокси-L-пролина (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658 и Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc,121:5633). Свойства этих и других полимеров и способы их получения хорошо известны в данном уровне техники (см., например, патенты США 6123727, 5804178, 5770417, 5736372, 5716404, 6095148, 5837752,5902599, 5696175, 5514378, 5512600, 5399665, 5019379, 5010167, 4806621, 4638045 и 4946929; Wang etChem. Res., 33:94; Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7 и Uhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181). В целом различные методы синтеза определенных подходящих полимеров описаны в Concise Encyclopedia ofby Allcock et al., Prentice-Hall, 1981; Deming et al., 1997, Nature, 390:386 и в патентах США 6506577,6632922, 6686446 и 6818732. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть линейными или разветвленными полимерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть дендримерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном сшиты друг с другом. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном свободны от сшивок. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, не подвергаясь этапу сшивания. Далее следует понимать, что соединения по данному изобретению и синтетические наноносители могут включать в себя блок-сополимеры, привитые сополимеры, сочетания, смеси и/или аддукты любого из вышеуказанных и других полимеров. Специалистам в данной области техники будет понятно, что полимеры, перечисленные в данном документе, представляют собой примерный, не являющийся исчерпывающим, список полимеров, которые могут быть применены в соответствии с данным изобретением. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут включать металлические частицы, квантовые точки, керамические частицы и т.д. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут необязательно содержать один или более амфифильных объектов. В некоторых вариантах осуществления амфифильный объект может способствовать получению синтетических наноносителей с повышенной стабильностью,улучшенной однородностью или повышенной вязкостью. В некоторых вариантах осуществления амфифильные объекты могут быть присоединены к внутренней поверхности липидной мембраны (например,липидного бислоя, липидного монослоя и т.д.). Многие амфифильные объекты, известные в данном уровне техники, подходят для применения при создании синтетических наноносителей в соответствии с данным изобретением. Такие амфифильные объекты включают, без ограничения, фосфоглицериды; фосфатидилхолины; дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC); диолеилфосфатидилэтаноламин (DOPE); диолеилоксипропилтриэтиламмоний (DOTMA); диолеилфосфатидилхолин, холестерин, сложные эфиры холестерина; диацилглицерол; диацилглицеролсукцинат; дифосфатидилглицерин (DPPG); гексанодеканол, жирные спирты, такие как полиэтиленгликоль (PEG); полиоксиэтилен-9-лауриловый простой эфир,- 29