Моноклональные антитела против angptl3

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ ANGPTL3 Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, которые специфически связываются с ANGPTL3. Настоящее изобретение также относится к моноклональным антителам,нейтрализующим по меньшей мере одну активность ANGPTL3. Настоящее изобретение также относится к способам лечения расстройства, ассоциированного с нарушением метаболизма липидов, с использованием нейтрализующих моноклональных антител. В настоящей заявке испрашивается преимущество предварительной заявки на патент США 60/873834, поданной 8 декабря 2006 г., которая вводится в настоящее описание в различных целях посредством ссылки. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, которые специфически связываются с ангиопоэтин-подобным белком 3 (ANGPTL3). Настоящее изобретение относится к способам применения моноклональных антител, которые специфически связываются с ангиопоэтин-подобным белком 3 (ANGPTL3). Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим моноклональные антитела, которые специфически связываются с ангиопоэтин-подобным белком 3(ANGPTL3). Введение Ангиопоэтин-подобный белок 3 (ANGPTL3) является консервативным белком у млекопитающих нескольких видов. Li С. (2006) Curr. Opin. Lipidol. 17 (2): 152-156. ANGPTL3 содержит N-концевой суперспирализованный домен и С-концевой фибриноген-подобный домен. Conklin D. et al. (1999) Genomics 62:477-482. N-концевой суперспирализованный домен опосредует олигомеризацию ANGPTL3. Ge, H. etal. (2005) J. Lipid Res. 46(7):1484-1490. Олигомеризованный ANGPTL3 подвергается протеолитическому процессингу in vivo, что приводит к отщеплению фибриноген-подобного домена. Ono M. et al. (2003) J.ANGPTL3 экспрессируется преимущественно в печени. Koishi R. et al. (2002) Nat. Genet. 30 (2):151157. ANGPTL3, очевидно, ингибирует липопротеин-липазную (ЛПЛ) активность и способствует замедлению клиренса липопротеина очень низкой плотности (ЛОНП). Shimizugawa Т. et al. (2002) J. Biol.Chem. 277 (37): 33742-33748. У мышей со спонтанными KK/San-мутациями имеется инсерция в экзоне 6 гена Angptl3, и у таких мышей обнаруживается заметная сывороточная гиполипидемия. Koishi et al.(2002) Nat. Genet., 30 (2): 151-157. Опосредованная аденовирусом экспрессия ANGPTL3 или непосредственное введение ANGPTL3 приводит к устранению гиполипидемии у KK/San-мышей. Koishi et al. (2002)Nat. Genet. 30 (2): 151-157. Было обнаружено, что у Angptl3-дефицитных мышей, а именно у самцов мышей, которые получали корм, и у самок мышей, которые либо получали корм, либо содержались в условиях голодания, наблюдались пониженные уровни триглицеридов. Koster A. et al., (2005) Endocrinol. 146:4943-4950. Было также обнаружено, что у этих мышей, а именно у самцов и у самок мышей, которые получали корм и содержались в условиях голодания, наблюдаются пониженные уровни холестерина.Koster A. et al., (2005) Endocrinol. 146:4943-4950. Было обнаружено, что у мышей, страдающих диабетом,индуцированным стрептозотоцином, а именно у db/db-мышей и у ob/ob-мышей, наблюдается повышенный уровень экспрессии Angptl3. Inukai K. et al., (2004) Biochem. Biophys. Res. Comm. 317(4): 1075-1079;Shimamura, M. et al. (2004) Biochem. Biophys. Res. Comm. 322 (3): 1080-1085. Описание сущности изобретения В некоторых своих вариантах осуществления настоящее изобретение относится к моноклональному антителу, которое связывается с ANGPTL3 и нейтрализует по меньшей мере одну активность ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является мышиное моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является гуманизированное моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления указанным моноклональным антителом является человеческое моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления указанное моноклональное антитело снижает уровень по меньшей мере одного липида в сыворотке in vivo. В некоторых вариантах осуществления указанное моноклональное антитело связывается с эпитопом ANGPTL3, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело связывается с эпитопом ANGPTL3, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело связывается с эпитопом ANGPTL3, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления указанное моноклональное антитело связывается с эпитопомANGPTL3, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, и вариабельную область легкой цепи,содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66,-1 019661 и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, с которым связывается антитело 4.7.1. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, с которым связывается антитело 4.8.3. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, с которым связывается антитело 4.9.1. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, с которым связывается антитело 1.315.1. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, с которым связывается антитело 5.35. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, с которым связывается антитело 5.50. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является фрагмент антитела. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является scFv-фрагмент. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является Fab-фрагмент. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является F(ab')2-фрагмент. В некоторых вариантах осуществления моноклональным антителом является Fab'-фрагмент. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу,которое специфически связывается с ANGPTL3 и содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает: а) аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из SEQID NO: 19-26 и 63-66; b) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную вSEQ ID NO: 35, 36 и 37; с) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 38, 39 и 40; d) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 41, 42 или 43; е) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 53, 54 и 55; f) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 71, 72 и 73; или g) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 74, 75 и 76; где указанное антитело нейтрализует по меньшей мере одну активность ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь аантитела содержит CDR1, представленную в SEQ ID NO: 35, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 36, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержитCDR1, представленную в SEQ ID NO: 38, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 39, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 40. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержит CDR1,представленную в SEQ ID NO: 41, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 42, и CDR3, представленную вSEQ ID NO: 43. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержит CDR1, представленную в SEQ ID NO: 53, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 54, и CDR3, представленную в SEQID NO: 55. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержит CDR1, представленную в SEQ ID NO: 71, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 72, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержит CDR1, представленную вSEQ ID NO: 74, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 75, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 76. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к выделенному антителу,которое специфически связывается с ANGPTL3 и включает тяжелую цепь и легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит: а) аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из SEQID NO: 19-26 и 63-66; b) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную вSEQ ID NO: 35, 36 и 37; с) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 38, 39 и 40; d) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 41, 42, или 43; е) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 53, 54 и 55; f) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 71, 72 и 73; или g) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NOs: 74, 75 и 76; где указанное антитело нейтрализует по меньшей мере одну активность ANGPTL3; и где указанная легкая цепь включает: а) аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из SEQ ID NO: 27-34 и 67-70; b) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 44, 45 и 46; с) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 47, 48 и 49; d) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 50, 51 или 52; е) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 56, 57 и 58; f) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 77, 78 и 79; или д) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 80, 81 и 82. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQID NO: 35, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 36, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 37; а легкая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 44, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 45, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 46. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержит CDR1, представленную в SEQ ID NO: 38, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 39, иCDR3, представленную в SEQ ID NO: 40; а легкая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ торых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 41, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 42, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 43; а легкая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 50, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 51, иCDR3, представленную в SEQ ID NO: 52. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 53, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 54, и CDR3,представленную в SEQ ID NO: 55; а легкая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ IDNO: 56, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 57, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 71,CDR2, представленную в SEQ ID NO: 72, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 73; а легкая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 77, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 78, иCDR3, представленную в SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 74, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 75, и CDR3,представленную в SEQ ID NO: 76; а легкая цепь антитела включает CDR1, представленную в SEQ IDNO: 80, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 81, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу,которое специфически связывается с ANGPTL3 и содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где указанная легкая цепь включает: а) аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из SEQID NO: 27-34 и 67-70; b) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную вSEQ ID NO: 44, 45 и 46; с) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 47, 48 и 49; d) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 50, 51 или 52; е) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 56, 57 и 58; f) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 77, 78 и 79; или g) по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 80, 81 и 82; где указанное антитело нейтрализует по меньшей мере одну активность ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела включаетCDR1, представленную в SEQ ID NO: 44, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 45, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 46. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела включает CDR1,представленную в SEQ ID NO: 47, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 48, и CDR3, представленную вSEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает CDR1, представленную вSEQ ID NO: 50, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 51, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 52. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 56,CDR2, представленную в SEQ ID NO: 57, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 77, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 78, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает CDR1, представленную в SEQ ID NO: 80, CDR2, представленную в SEQ IDNO: 81, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к моноклональному антителу, которое связывается с ANGPTL3 и нейтрализует по меньшей мере одну активность ANGPTL3, где аффинность указанного антитела по отношению к пептиду, имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, по меньшей мере в 3 раза превышает аффинность антитела по отношению к пептиду, имеющему аминокислотную последовательность любой одной из SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85,SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления аффинность указанного антитела по отношению к пептиду, имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, по меньшей мере в 3 раза превышает аффинность антитела по отношению к каждой из последовательностей SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88 и SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к моноклональному антителу, которое связывается с ANGPTL3 и нейтрализует по меньшей мере одну активностьANGPTL3, где указанное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 с KD менее 50 нМ. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 с KD менее 30 нМ. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 с KD менее 10 нМ. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 9 с KD менее 5 нМ. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное выше. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения расстройства, ассоциирующегося с нарушением метаболизма липидов, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу снижения уровня одного или нескольких липидов в сыворотке, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения гипертриглицеридемии, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения гиперхолестеринемии,где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения ожирения, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения диабета, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения ишемической болезни сердца, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к способу лечения синдрома нарушения метаболизма, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции. Краткое описание фигур На фиг. 1 показаны уровни триглицеридов в сыворотке у мышей, которые получали корм, и у мышей, содержащихся в условиях голодания, через 4 дня после инъекции этим мышам антител 1.315.1,4.7.1, 4.8.3, 4.9.1 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примере J. На фиг. 2 показаны уровни холестерина в сыворотке у мышей, которые получали корм, и у мышей,содержащихся в условиях голодания, через 4 дня после инъекции этим мышам антител 1.315.1, 4.7.1,4.8.3, 4.9.1 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примере J. На фиг. 3 показаны уровни триглицеридов в сыворотке у мышей, которые получали корм, и у мышей, содержащихся в условиях голодания, через 4 дня после инъекции этим мышам анти-ANGPTL3 антитела 4.8.3, анти-ANGPTL4 антитела 14D12 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примереJ. На фиг. 4 показаны уровни холестерина в сыворотке у мышей, которые получали корм, и у мышей,содержащихся в условиях голодания, через 4 дня после инъекции этим мышам анти-ANGPTL3 антитела 4.8.3, анти-ANGPTL4 антитела 14D12 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примере J. На фиг. 5 показаны уровни триглицеридов в сыворотке у мышей, которые получали корм, и у мышей, содержащихся в условиях голодания, через 4 дня после инъекции этим мышам анти-ANGPTL3 антител 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, анти-ANGPTL4 антитела 14D12 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примере J. На фиг. 6 показаны уровни холестерина в сыворотке у мышей, которые получали корм, и у мышей,содержащихся в условиях голодания, через 4 дня после инъекции этим мышам анти-ANGPTL3 антител 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, анти-ANGPTL4 антитела 14D12 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примере J. На фиг. 7 показаны уровни триглицеридов в сыворотке у мышей через 4 дня (верхняя панель) и через 8 дней (нижняя панель) после инъекции этим мышам антител 1.125.1, 1.132.1, 1.173.2, 1.315.1,1.424.1, 1.431.1 и контрольного анти-KLH антитела, как описано в примере J. На фиг. 8 показаны уровни триглицеридов в сыворотке у мышей после инъекции различных доз вируса Ad5-hAngptI3T или 2109 вирусных бляшек контрольного вируса, как описано в примере В. На фиг. 9 показано связывание антител 4.1.1, 4.4.1, 4.6.3, 4.7.1, 4.8.1, 4.8.2, 4.8.3 и 4.9.1 сANGPTL3SP1, ANGPTL3T и контрольным белком BTS324, как описано в примере Н. На фиг. 10 показано сопоставление путем выравнивания последовательностей вариабельных областей тяжелой цепи антител 4.7.1 (SEQ ID NO: 19), 4.8.3 (SEQ ID NO: 21) и 4.9.1 (SEQ ID NO: 23). Кроме того, показана консенсусная последовательность тяжелой цепи (SEQ ID NO: 25), а также области последовательностей тяжелой цепи, соответствующих сигнальному пептиду (SP), каркасной области 1(FWR1), гипервариабельной области (комплементарность-определяющей) области 1 (CDR1), каркасной области 2 (FWR2), гипервариабельной области 2 (CDR2), каркасной области 3 (FWR3), гипервариабельной области 3 (CDR3) и каркасной области 4 (FWR4). На фиг. 11 показано сопоставление путем выравнивания вариабельных областей легкой цепи антител 4.7.1 (SEQ ID NO: 27), 4.8.3 (SEQ ID NO: 29) и 4.9.1 (SEQ ID NO: 31). Кроме того, представлена консенсусная последовательность легкой цепи (SEQ ID NO: 33), а также области последовательностей легкой цепи, соответствующих сигнальному пептиду (SP), каркасной области 1 (FWR1), гипервариабельной области 1 (CDR1), каркасной области 2 (FWR2), гипервариабельной области 2 (CDR2), каркасной области 3 (FWR3), гипервариабельной области 3 (CDR3) и каркасной области 4 (FWR4). На фиг. 12 показана ЛПЛ-активность in vitro после обработки мышей моноклональными антиANGPTL3 антителами 4.9.1, 4.8.3, 1.315.1, 4.7.1 и 1.173.2, как описано в примере L. На фиг. 13 проиллюстрирована in vivo фармакокинетика некоторых мышиных моноклональных анти-ANGPTL3 антител, как описано в примере N. На фиг. 14 проиллюстрировано связывание антител 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, 5.35 и 5.50 с аланинсканирующими мутантами пептида SP1, как описано в примере Н. На фиг. 15 показаны уровни триглицеридов в сыворотке у мышей через 4 дня (верхняя панель) и 7 дней (нижняя панель) после инъекции антител 5.35 или 5.50, как описано в примере J. На фиг. 16 показаны уровни холестерина в сыворотке у мышей через 4 дня (верхняя панель) и 7 дней (нижняя панель) после инъекции антител 5.35 или 5.50, как описано в примере J. На фиг. 17 проиллюстрирована in vivo фармакокинетика антител 5.35 и 5.50, как описано в примере N. На фиг. 18 проиллюстрирована in vivo фармакокинетика антител 4.7.1, 4.9.1, 5.35 и 5.50, как описано в примере N. На фиг. 19 проиллюстрировано снижение уровней триглицеридов и холестерина в сыворотке у АроЕ-мышей, которым инъецировали антитела 5.35 и 5.50 и контрольное анти-KLH антитело. Подробное описание различных вариантов изобретения В данной заявке при употреблении какого-либо существительного в единственном числе также подразумевается, что оно может иметь значение существительного во множественном числе, если это не оговорено особо. В данной заявке употребление единственного числа означает "по меньшей мере один",если это не оговорено особо. В настоящей заявке союз "или" означает "и/или", если это не оговорено особо. Кроме того, термин "включающий", а также другие формы, такие как "включает" и "включенный", имеют неограничивающее значение. Кроме того, такие термины как "элемент" или "компонент" охватывают элементы или компоненты, включающие одну единицу, и элементы или компоненты, включающие более чем одну единицу, если это не оговорено особо. Заголовки приведенных здесь разделов приводятся лишь в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничение описанной здесь сущности изобретения. Все документы или части документов, цитируемых в данной заявке, включая, но не ограничиваясь ими, патенты, патентные заявки,статьи, справочную литературу и монографии, точно и во всей своей полноте вводятся в описание настоящей заявки посредством ссылки и могут быть использованы в любых целях. В том случае, если в одной или в нескольких включенных в описание данной заявки ссылках на литературу и аналогичные материалы приводится определение термина, которое противоречит определению термина в данной заявке, то такие противоречия могут быть урегулированы в соответствии с описанием настоящей заявки. А. Некоторые определения Используемые здесь термины "полипептид", "пептид" и "белок" являются взаимозаменяемыми и означают полимер из аминокислотных остатков. Эти термины также означают аминокислотные полимеры, содержащие природные аминокислоты, а также аминокислотные полимеры, в которых один или несколько аминокислотных остатков представляют собой искусственный химический аналог соответствующей природной аминокислоты. Аминокислотные полимеры могут иметь любую длину. Используемый здесь термин "антитело" означает интактное антитело или фрагмент антитела, которые конкурируют с интактным антителом за связывание с антигеном. Фрагментами антител являются, но не ограничиваются ими, Fab-, Fab'-, F(ab')2-, Fv-, scFv- и Fd-фрагменты, димерные антитела и другие фрагменты антител, которые сохраняют по меньшей мере часть вариабельной области интактного антитела (cм., например, Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134). В некоторых вариантах осуществления фрагменты антител получают путем ферментативного или химического расщепления интактных антител. В некоторых вариантах осуществления фрагменты антител получают с применением техники рекомбинантных ДНК. Термин "нативный полипептид" означает природный полипептид. Термин "нативное антитело" означает природное антитело. Термин "моноклональное антитело" означает антитело, происходящее, в основном, из гомогенной популяции антител, которые специфически связываются с одним и тем же эпитопом. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело секретируется гибридомой. В некоторых таких вариантах гибридому получают с применением некоторых методов, известных специалистам (cм., например,KohlerMilstein (1975) Nature 256:495-499). В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело получают методами рекомбинантных ДНК (см., например, патент США 4816567). В некоторых вариантах осуществления термин "моноклональное антитело" означает фрагмент антитела, выделенный из библиотеки фагового представления (cм., например, Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628,и Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597). Описание способов получения различных других моноклональных антител (см., например, руководство Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY. Термин "химерное антитело" означает антитело, состоящее из компонентов, происходящих по меньшей мере от двух различных источников. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело включает часть антитела, происходящего от первой молекулы, присоединенной ко второй молекуле, например, часть антитела, происходящего от второй молекулы. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело включает часть антитела, происходящего от не человеческого антитела, присоединенного к части антитела, происходящего от человеческого антитела. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело включает всю вариабельную область или часть вариабельной области антитела, происходящего от животного, не являющегося человеком, и присоединенного к константной области антитела, происходящего от человека. Термин "гуманизированное антитело" означает не человеческое антитело, которое было модифицировано так, чтобы оно имело более близкое сходство (в аминокислотной последовательности) с челове-5 019661 ческим антителом. Таким образом, гуманизированное антитело представляет собой тип химерного антитела. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные остатки, находящиеся за пределами антигенсвязывающих остатков вариабельной области не человеческого антитела, являются модифицированными. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело конструируют путем замены всей гипервариабельной области (CDR) человеческого антитела или ее части на всю CDR другого антитела или ее часть, такого как не человеческое антитело, обладающее нужной специфичностью связывания с антигеном. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело включает вариабельные области, в которых все или в основном все CDR соответствуют CDR не человеческого антитела,и все или в основном все каркасные области (FR) соответствуют FR человеческого антитела. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело также включает константную область (Fc) человеческого антитела. Термин "человеческое антитело" означает моноклональное антитело, которое содержит последовательности человеческого антитела и не содержит последовательностей антитела, происходящего от животного, не являющегося человеком. В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело может содержать синтетические последовательности, не обнаруженные в нативных антителах. Этот термин не ограничивается каким-либо конкретным методом получения антител. Так, например, в различных вариантах осуществления человеческое антитело может быть получено методом с применением трансгенных мышей, методом фагового представления, с использованием человеческих В-лимфоцитов или рекомбинантными методами. Термин "нейтрализующее антитело" или "антитело, которое нейтрализует" означает антитело, снижающее по меньшей мере одну активность полипептида, содержащего эпитоп, с которым специфически связывается данное антитело. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело снижает активность in vitro и/или in vivo. Термин "антигенсвязывающий сайт" означает часть антитела, способную специфически связываться с антигеном. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий сайт доставляется одной или несколькими вариабельными областями антитела. Термин "эпитоп" означает любую полипептидную детерминанту, способную специфически связываться с иммуноглобулином или с Т-клеточным рецептором. В некоторых вариантах осуществления эпитоп представляет собой область антигена, которая специфически связывается с антителом. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может включать химически активные поверхностные группы молекул,такие как аминокислоты, сахарные боковые цепи, фосфорильные или сульфонильные группы. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может обладать специфическими трехмерными структурными свойствами (например, "конформационный" эпитоп) и/или иметь конкретный заряд. Указание на то, что данный эпитоп является "таким же", как и другой эпитоп, означает, что конкретное антитело специфически связывается с обоими эпитопами. В некоторых вариантах осуществления полипептиды, имеющие различные первичные аминокислотные последовательности, могут содержать эпитопы, которые являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления эпитопы, которые являются одинаковыми, могут иметь различные первичные аминокислотные последовательности. Считается, что различные антитела связываются с одним и тем же эпитопом, если они конкурируют за специфическое связывание с этим эпитопом. Антитело "специфически связывается" с антигеном, если оно преимущественно распознает антиген в сложной смеси белков и/или макромолекул. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит антигенсвязывающий сайт, который специфически связывается с конкретным эпитопом. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело обладает способностью связываться с различными антигенами, при условии, что такие различные антигены содержат этот конкретный эпитоп. В некоторых случаях, например, гомологичные белки от различных видов могут содержать один и тот же эпитоп. В некоторых вариантах осуществления считается, что антитело специфически связывается с антигеном, если константа диссоциации (KD) составляет 1 мкМ, в некоторых вариантах осуществления - если константа диссоциации составляет 100 нМ, а в некоторых вариантах осуществления - если константа диссоциации составляет 10 нМ. Термин "ANGPTL3 означает ангиопоэтин-подобный белок 3, имеющий аминокислотную последовательность, происходящую от любого позвоночного или млекопитающего, включая, но не ограничиваясь ими, человека, коров, кур, грызунов, мышей, крыс, свиней, овец, приматов, обезьян и морских свинок, если это не оговорено особо. Этот термин также означает фрагменты и варианты нативногоANGPTL3, которые сохраняют по меньшей мере одну in vivo или in vitro активность нативногоANGPTL3. Этот термин охватывает полноразмерные непроцессированные формы предшественникаANGPTL3, а также зрелые формы, образующиеся в результате посттрансляционного отщепления сигнального пептида, и формы, образующиеся в результате протеолитического процессинга фибриногенового домена. В некоторых вариантах осуществления полноразмерный непроцессированный мышиныйNP038941). В некоторых вариантах осуществления полноразмерный непроцессированный человеческийNP055310). Термин "Angptl3" означает нуклеиновую кислоту, кодирующую ANGPTL3. Термин "ЛПЛ" означает липопротеин-липазу, имеющую аминокислотную последовательность,происходящую от любого позвоночного или млекопитающего, включая, но не ограничиваясь ими, человека, коров, кур, грызунов, мышей, крыс, свиней, овец, приматов, обезьян и морских свинок. В некоторых вариантах осуществления липопротеин-липаза катализирует гидролиз триацилглицерина в хиломикронах и липопротеинов очень низкой плотности (ЛОНП) с образованием диацилглицерина и аниона свободной жирной кислоты. В некоторых вариантах осуществления липопротеин-липаза также обладает способностью гидролизовать диацилглицерин. Термин "агент" означает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, полученный из биологических материалов. Термин "антагонист ANGPTL3" означает агент, снижающий активность ANGPTL3. Термин "агонист ANGPTL3" означает агент, повышающий активность ANGPTL3. Термин "пациент" включает человека и животных. В некоторых вариантах осуществления пациентом является млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек. Термин "фрагмент" эталонного полипептида означает непрерывную последовательность аминокислот любой части эталонного полипептида. Фрагмент может иметь любую длину, но меньшую чем длина эталонного полипептида. Термин "вариант" эталонного полипептида означает полипептид, имеющий одну или несколько аминокислотных замен, делеций или инсерций по сравнению с эталонным полипептидом. Термин "консервативная" аминокислотная замена означает замену аминокислот полипептида другой аминокислотой, имеющей аналогичные свойства, такие как размер или заряд. В некоторых вариантах осуществления полипептид, содержащий консервативную аминокислотную замену, сохраняет по меньшей мере одну активность полипептида, не содержащего таких замен. Консервативная аминокислотная замена может включать неприродные аминокислотные остатки, которые обычно вводятся в результате химического пептидного синтеза, а не синтеза в биологических системах. Результатами таких замен являются, но не ограничиваются ими, пептидомиметики и другие реверсивные или инвертированные формы аминокислотных молекул. Природные остатки могут быть подразделены на классы на основе общих свойств боковых цепей: 1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile; 2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) кислотные: Asp, Glu; 4) основные: His, Lys, Arg; 5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro; и 6) ароматические: Trp, Tyr, Phe. Так, например, неконсервативные замены могут включать замену аминокислоты одного из этих классов на аминокислоту другого класса. Такие замененные остатки могут быть введены в области человеческого антитела, гомологичные областям не человеческих антител, или в не гомологичные области молекулы. В соответствии с некоторыми вариантами изобретения такие замены могут быть введены с учетом гидропатического индекса аминокислот. Каждая аминокислота имеет свой гидропатический индекс, что обусловлено их гидрофобностью и зарядом. Такими индексами являются изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин(+3,8); фенилаланин (+2,8); цистеин/цистин (+2,5); метионин (+1,9); аланин (+1,8); глицин (-0,4); треонин (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамин (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин (-3,9) и аргинин (-4,5). Специалистам известно, что в некоторых случаях, гидропатический индекс аминокислот играет важную роль в сообщении белку интерактивной биологической функции. Kyte et al., J. Mol. Biol.,157:105-131 (1982). Известно, что в некоторых случаях некоторые аминокислоты могут быть заменены другими аминокислотами, имеющими аналогичный гидропатический индекс или аналогичное гидропатическое число, и при этом, их биологическая активность сохраняется. В некоторых вариантах осуществления при введении модификаций с учетом гидропатического индекса могут быть сделаны замены аминокислот с гидропатическим индексом в пределах 2. В некоторых вариантах осуществления этот гидропатический индекс находится в пределах 1, а в некоторых вариантах осуществления 0,5. Также очевидно, что замена аминокислот на подобные аминокислоты может быть эффективно осуществлена с учетом гидрофильности, а в частности, если биологически функциональный белок или полипептид предназначен для его применения в иммунологии, например, в соответствии с настоящим изобретением. В некоторых вариантах осуществления самая высокая локальная усредненная гидрофильность белка, регулируемая гидрофильностью смежных аминокислот такого белка, коррелирует с его иммунногенностью и антигенностью, то есть с биологическими свойствами белка. Такие аминокислотные остатки могут приобретать нижеследующие величины гидрофильности: ар-7 019661(-1,3); валин (-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5) и триптофан (-3,4). В некоторых вариантах осуществления при осуществлении модификаций на основе аналогичных величин гидрофильности могут быть введены замены аминокислот с величинами гидрофильности в пределах 2, в некоторых вариантах осуществления в пределах 1, а в некоторых вариантах осуществления в пределах 0,5. На основе гидрофильности можно также идентифицировать эпитопы от первичных аминокислотных последовательностей. Эти области также называются "эпитопными коровыми областями". Репрезентативные аминокислотные замены представлены в табл. 1. Таблица 1. Аминокислотные замены Специалист в данной области может самостоятельно определить подходящие варианты описанных здесь полипептидов с применением хорошо известных методов. В некоторых вариантах осуществления специалист в данной области может самостоятельно идентифицировать подходящие области молекулы,которые могут быть заменены без нарушения активности путем доставки областей, которые, как очевидно, не играют важной роли в сообщении такой активности. В некоторых вариантах осуществления можно идентифицировать остатки и части молекул, которые являются консервативными среди аналогичных полипептидов. В некоторых вариантах осуществления даже в те области, которые могут играть важную роль в сообщении биологической активности или образовании структуры, могут быть введены консервативные аминокислотные замены, не нарушающие биологической активности или не оказывающие негативного влияния на полипептидную структуру. Кроме того, в соответствии с некоторыми осуществлениями изобретения могут быть проведены исследования структуры-функции, позволяющие идентифицировать остатки в аналогичных полипептидах,которые играют важную роль в сообщении активности или образовании структуры. В некоторых вариантах осуществления, исходя из такого сравнения, могут быть предсказаны аминокислотные остатки в белке, которые соответствуют аминокислотным остаткам, играющим важную роль в сообщении активности аналогичным белкам или образовании структуры этих белков. В соответствии с некоторыми осуществлениями изобретения специалист в данной области может выбрать химически аналогичные аминокислотные замены для каждого предсказанного и играющего важную роль аминокислотного остатка. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения специалист в данной области может также проанализировать трехмерную структуру и аминокислотную последовательность в аналогичных полипептидах. В некоторых вариантах осуществления, исходя из такой информации, специалист в данной области может предсказать трехмерную структуру аминокислотных остатков антитела путем выравнивания аминокислотных остатков антитела. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения специалист в данной области не может внести радикальные модификации в предска-8 019661 занные аминокислотные остатки на поверхности белка, поскольку такие остатки могут участвовать в играющих важную роль взаимодействиях с другими молекулами. Кроме того, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, специалист в данной области может получить тестируемые варианты, содержащие одну аминокислотную замену в каждом нужном аминокислотном остатке. В некоторых вариантах осуществления указанные варианты могут быть затем скринированы с помощью известных анализов на активность. В некоторых вариантах осуществления, указанные варианты могут быть использованы для сбора информации о подходящих вариантах. Так, например, в некоторых вариантах осуществления, в том случае, если обнаруживается, что модификация конкретного аминокислотного остатка приводит к нарушению активности, к нежелательному снижению или к какому-либо другому нежелательному изменению активности, то варианты с такими модификациями являются нежелательными. Другими словами, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, исходя из информации, полученной при проведении таких рутинных экспериментов, специалист в данной области может легко определить, в какие именно положения аминокислот не следует вводить дополнительные замены как отдельно, так и в их комбинациях с другими мутациями. Ряд научных публикаций посвящен предсказаниям вторичной структуры. См., например, Moult J.,Curr. Opin. Biotechnol. (1996) 7(4): 422-427; Chou et al., (1974) Biochemistry. 13(2): 222-245; Chou et al.Chou et al. (1976) Ann. Rev. Biochem. 47:251-276; и Chou et al. (1979) Biophys. J. 26: 367-384. Кроме того, в настоящее время имеются компьютерные программы, облегчающие предсказание вторичной структуры. Один из методов предсказания вторичной структуры основан на моделировании гомологии. Так, например, два полипептида или белка, которые имеют идентичность последовательностей более чем на 30% или сходство более чем на 40%, часто имеют сходные структурные топологии. Все большее пополнение базы данных структур белка (PDB) значительно облегчает предсказание вторичной структуры, включая предсказание потенциального числа складок в структуре полипептида. См., например, Holm et al. (1999)Nucl. Acid. Res. 27 (1): 244-247. Было высказано предположение (Brenner et al., (1997) Curr. Op. Struct.Biol. 7 (3): 369-376), что в данном полипептиде или белке существует ограниченное число складок, и что после разрешения значительного числа структур, предсказание структуры может быть гораздо более точным. Дополнительными методами предсказания вторичной структуры являются "потоковая обработка сообщений" (см., например, Jones, D. (1997) Curr. Opin. Struct. Biol. 7(3):377-387; Sippl et al. (1996) Structure 4(1):15-19), "анализ профилей" (см., например, Bowie et al., (1991) Science 253:164-170; Gribskov etBrenner et al. (1997) Curr. Op. Struct. Biol. 7(3): 369-376 (1997. В некоторых осуществлениях изобретения вариант эталонного антитела включает вариант гликозилирования, в котором число и/или тип сайтов гликозилирования были изменены по сравнению с сайтами гликозилирования аминокислотной последовательности эталонного антитела. В некоторых осуществлениях изобретения вариант полипептида содержит большее или меньшее число сайтов N-связанного гликозилирования по сравнению с нативным полипептидом. Сайт N-связанного гликозилирования отличается тем, что он имеет следующую последовательность: Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где аминокислотный остаток, определенный как X, может представлять собой любой аминокислотный остаток за исключением пролина. Замена аминокислотных остатков с получением такой последовательности приводит к созданию потенциально нового сайта для присоединения цепи N-связанного углевода. Альтернативно замены, которые приводят к элиминации этой последовательности, позволяют удалять существующую цепьN-связанного углевода. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к перегруппировке цепей N-связанного углевода, где один или несколько сайтов N-связанного гликозилирования (обычно сайтов, которые являются природными) элиминируются, а вместо них образуются один или несколько новых N-связанных сайтов. Репрезентативными вариантами антител являются цистеиновые варианты, где по сравнению с аминокислотной последовательностью эталонного антитела один или несколько цистеиновых остатков делетированы или заменены другой аминокислотой (например, серином). В некоторых вариантах осуществления цистеиновые варианты могут быть использованы в том случае,если антитела должны быть подвергнуты рефолдингу с образованием биологически активной конформации, например, после выделения нерастворимых телец включения. В некоторых вариантах осуществления цистеиновые варианты имеют меньшее число цистеиновых остатков, чем нативный полипептид. В некоторых вариантах осуществления цистеиновые варианты имеют четное число цистеиновых остатков,что позволяет минимизировать взаимодействия, вызываемые неспаренными цистеинами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения аминокислотными заменами являются замены, которые (1) приводят к снижению чувствительности к протеолизу, (2) приводят к снижению чувствительности к окислению, (3) приводят к изменению аффинности связывания с образованием белковых комплексов, (4) приводят к изменению аффинности связывания и/или (4) сообщают таким полипептидам другие физико-химические или функциональные свойства либо приводят к изменению этих свойств. В соответствии с некоторыми вариантами изобретения в природную последовательность (в некоторых вариантах осуществления в часть полипептида, находящегося за пределами домена(ов), образующего(их) межмолекулярные контакты) могут быть внесены одна или множество аминокислотных замен (в некоторых вариантах осуществления консервативных аминокислотных замен). В некоторых вариантах осуществления консервативная аминокислотная замена обычно не оказывает какого-либо значительного влияния на структурные свойства исходной последовательности (например, в некоторых вариантах осуществления замена аминокислоты не должна разрушать спираль, которая присутствует в исходной последовательности, либо она не должна нарушать вторичную структуру других типов, которая характеризует данную исходную последовательность). Примеры некоторых известных вторичных и третичных структур полипептидов описаны, например, в публикациях Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984; Introduction to Protein Structure (C.Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991; и Thornton J. M. et al. (1991) Nature 354:105-106. Термин "процент идентичности" или "% идентичности", если он употребляется по отношению к последовательностям нуклеиновой кислоты, означает процент идентичных нуклеотидов по меньшей мере между двумя полинуклеотидными последовательностями, которые были подвергнуты выравниванию с помощью поисковой программы выравнивания локальных оснований BLAST (Basic Local AlignmentSearch Tool). См. Tatusova et al. (1999) FEMS Microbiol. Lett. 174:247-250. Программа BLAST (версия 2.2.10) имеется в общедоступной базе данных Национального центра биотехнологической информации(NCBI), Bethesda, MD. Для выравнивания двух полинуклеотидных последовательностей используется пакет инструментальных программ "Blast 2 Sequences", в который входит программа "blastn" с установленными параметрами по умолчанию, такими как: Термин "процент идентичности" или "% идентичности", если он употребляется по отношению к последовательностям нуклеиновой кислоты, означает процент идентичных аминокислот по меньшей мере между двумя полипептидными последовательностями, которые были подвергнуты выравниванию с помощью поисковой программы выравнивания локальных оснований BLAST (Basic Local Alignment SearchTool). См. Tatusova et al. (1999) FEMS Microbiol. Lett. 174:247-250. Программа BLAST (версия 2.2.10) имеется в общедоступной базе данных Национального центра биотехнологической информации (NCBI),Bethesda, MD. Для выравнивания двух полипептидных последовательностей используется пакет инструментальных программ "Blast 2 Sequences", в который входит программа "blastp" с установленными параметрами по умолчанию, такими как: Термин "эффективная доза" или "эффективное количество" означает количество агента, например,нейтрализующего антитело, которое ослабляет симптомы у пациента или дает нужный биологический эффект. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза или эффективное количество являются достаточными для снижения по меньшей мере одной активности ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу или эффективное количество определяют, как описано ниже, в частиV.G. Термин "лечение" охватывает терапевтические и профилактические/превентивные меры, если это не оговорено особо. Индивидуумами, нуждающимися в лечении, являются, но не ограничиваются ими,индивидуумы, уже страдающие конкретным состоянием или расстройством, а также индивидуумы, которые подвержены риску развития у них конкретного состояния или расстройства (например, индивидуумы, нуждающиеся в профилактическом/превентивном лечении). Термин "лечение" означает введение пациенту агента в терапевтических и/или профилактических/превентивных целях. Термин "терапевтическое средство" означает средство, которое может быть введено in vivo для достижения терапевтического и/или профилактического/превентивного эффекта. Термин "терапевтическое антитело" означает антитело, которое может быть введено in vivo для достижения терапевтического и/или профилактического/превентивного эффекта. Термины "выделенная нуклеиновая кислота" и "выделенный полинуклеотид" являются взаимозаменяемыми. Репрезентативными выделенными полинуклеотидами являются, но не ограничивается ими,геномная ДНК, РНК, кДНК, синтетическая ДНК или РНК или некоторые их комбинации. "Выделенный полинуклеотид" (1) не ассоциируется со всеми полинуклеотидами или с их частью, в которой "выделенный полинуклеотид" встречается в природе, (2) связан с полинуклеотидом, с которым он не ассоциируется в природе, или (3) не присутствует в природе как часть более крупной последовательности. В. Структура нативных антител и некоторых фрагментов антител Нативное антитело обычно имеет тетрамерную структуру. Тетрамер обычно включает две идентичные пары полипептидных цепей, каждая из которых имеет одну легкую цепь (в некоторых вариантах осуществления примерно 25 кДа) и одну тяжелую цепь (в некоторых вариантах осуществления примерно 50-70 кДа). В нативном антителе тяжелая цепь содержит вариабельную область, VH, и три константных области, CH1, CH2 и CH3. Домен VH находится у аминоконца тяжелой цепи, а домен CH3 находится у карбоксиконца. В нативном антителе легкая цепь содержит вариабельную область VL и константную область CL. Вариабельная область легкой цепи находится у аминоконца легкой цепи. В нативном антителе вариабельные области каждой пары легкая/тяжелая цепь обычно образуют антигенсвязывающий сайт. Константные области обычно ответственны за эффекторную функцию. Нативные человеческие легкие цепи обычно классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда. Нативные человеческие тяжелые цепи обычно классифицируются как цепи мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела, а именно IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. IgG имеет подклассы, включая, но не ограничиваясь ими, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. IgM имеет подклассы, включая,но не ограничиваясь ими, IgM1 и IgM2. IgA имеет подклассы, включая, но не ограничивается ими, IgA1 иIgA2. В нативных человеческих легких и тяжелых цепях, вариабельные и константные области обычно связаны с областью "J", состоящей примерно из 12 или более аминокислот, при этом тяжелая цепь также включает область "D", состоящую примерно из 10 или более аминокислот. См., например, FundamentalImmunology (1989) Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y.). В нативном антителе вариабельные области обычно имеют одинаковую общую структуру, в которой относительно консервативные каркасные области (FR) связаны друг с другом тремя гипервариабельными областями, также называемыми комплементарность-определяющими областями (CDR). CDR, происходящие от двух цепей каждой пары, обычно расположены на одной цепи с каркасными областями,что позволяет им связываться с конкретным эпитопом. Вариабельные области легкой и тяжелой цепи, отN-конца до С-конца, обычно содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. CDR на тяжелой цепи обозначаются H1, H2 и Н 3, a CDR на легкой цепи обозначаются L1, L2 и L3. Обычно CDR3 представляет собой наибольший источник молекулярной вариабельности в антигенсвязывающем сайте. В некоторых случаях, например, в случае Н 3, эта область может состоять по меньшей мере из двух аминокислотных остатков или более чем из 26 остатков. Присвоение аминокислот каждому домену обычно осуществляют в соответствии с определениями по Кабату и др. (Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins(1989. В настоящей заявке термин "CDR" означает CDR, происходящую от легкой цепи или тяжелой цепи, если это не оговорено особо."Fab"-фрагмент включает одну легкую цепь и CH1 и вариабельную область одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовывать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи. "Fab'"-фрагмент содержит одну легкую цепь и одну тяжелую цепь, которая включает дополнительную константную область, простирающуюся между доменами CH1 и CH2. Межцепочечная дисульфидная связь может образовываться между двумя тяжелыми цепями Fab'-фрагмента с образованием молекулы"Fv"-фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей, но не содержит константных областей. Одноцепочечный Fv (scFv)-фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей, соединенные друг с другом гибким линкером с образованием одной полипептидной цепи, содержащей антигенсвязывающую область. Примеры одноцепочечных антител подробно обсуждаются в WO 88/01649 и в патентах США 4946778 и 5260203. В некоторых случаях одна вариабельная область (то есть вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область легкой цепи) может обладать способностью распознавать антиген и связываться с этим антигеном. Используемый здесь термин "тяжелая цепь" означает полипептид, содержащий последовательность вариабельной области тяжелой цепи, взятую отдельно или в комбинации с легкой цепью и достаточную для сообщения этому полипептиду специфичности к данному антигену. Используемый здесь термин "легкая цепь" означает полипептид, содержащий последовательность вариабельной области легкой цепи, взятую отдельно или в комбинации с тяжелой цепью и достаточную для сообщения этому полипептиду специфичности к данному антигену. С. Некоторые антитела В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, которые специфически связываются с ANGPTL3. В некоторых таких вариантах моноклональными антителами являются нейтрализующие моноклональные антитела, снижающие по меньшей мере одну активность ANGPTL3 in vivo и/или in vitro. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело противANGPTL3 вызывает снижение уровня по меньшей мере одного липида в сыворотке in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровня триглицеридов в сыворотке in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело вызывает снижение уровней общего холестерина in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровней свободных жирных кислот (FFA) in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение по меньшей мере двух из этих уровней in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 снижение по меньшей мере трех из этих уровней in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело противANGPTL3 вызывает снижение уровней триглицеридов в сыворотке LDLr-дефицитных мышей in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровней общего холестерина у LDLr-дефицитных мышей in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровней триглицеридов в сыворотке АроЕ-дефицитных мышей in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровней общего холестерина у АроЕ-дефицитных мышей in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровней триглицеридов в сыворотке у db/db-мышей in vivo. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 вызывает снижение уровней уровни общего холестерина у db/db-мышей invivo. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые специфически связываются с мышиным ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам,которые специфически связываются с человеческим ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые специфически связываются с тем же самым эпитопом в ANGPTL3 от других видов (то есть к антителам, которые обнаруживают перекрестную реактивность). В некоторых вариантах осуществления антитела специфически связываются с мышиным ANGPTL3 и человеческим ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые специфически связываются с эпитопом в N-концевом суперспирализованном домене ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые специфически связываются с эпитопом в Nконцевом суперспирализованном домене мышиного ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области мышиногоANGPTL3, расположенной от остатка 17 до остатка 240 SEQ ID NO: 1 (SEQ ID NO: 59). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с областью SP1 мышиного ANGPTL3, расположенной от остатка 32 до остатка 57 SEQ ID NO: I (SEQ ID NO: 9). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37 и 40 SEQ ID NO: 1 (аминокислоты 3-6 и 9 SEQ ID NO: 9). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиногоANGPTL3, которая включает аминокислоты 33-37 и 40 SEQ ID NO: 1 (аминокислоты 2-6 и 9 SEQ ID NO: 9). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37, 40 и 42 SEQ ID NO: 1 (аминокислоты 3-6, 9 и 11 SEQ ID NO: 9). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37 и 40-42 SEQ ID NO: 1 (аминокислоты 3-6 и 911 SEQ ID NO: 9). В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые специфически связываются с эпитопом в N-концевом суперспирализованном домене человеческого ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области человеческого ANGPTL3, расположенной от остатка 20 до остатка 143 SEQ ID NO: 3 (SEQ ID NO: 60). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с областью SP1 челове- 12019661 ческого ANGPTL3, расположенной от остатка 32 до остатка 57 SEQ ID NO: 3 (SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37 и 40 SEQ ID NO: 3(аминокислоты 3-6 и 9 SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3, которая включает аминокислоты 33-37 и 40 SEQ ID NO: 3 (аминокислоты 2-6 и 9 SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37, 40 и 42 SEQ IDNO: 3 (аминокислоты 3-6, 9 и 11 SEQ ID NO:10). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующие моноклональные антитела специфически связываются с эпитопом в области SP1 мышиногоANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37 и 40-42 SEQ ID NO: 3 (аминокислоты 3-6 и 9-11 SEQID NO: 10). В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, с аффинностью, которая по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 7 раз или по меньшей мере в 10 раз превышает аффинность связывания нейтрализующего моноклонального антитела с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность любой одной из SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90 и SEQID NO: 92. В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, с аффинностью, которая по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз,по меньшей мере в 7 раз или по меньшей мере в 10 раз превышает аффинность связывания нейтрализующего моноклонального антитела с каждой из последовательностей SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85,SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления аффинность определяют, как описано в примере H(2). В некоторых вариантах осуществления нейтрализующими моноклональными антителами являются не человеческие моноклональные антитела. В некоторых таких вариантах нейтрализующими моноклональными антителами являются моноклональные антитела грызунов. В некоторых таких вариантах нейтрализующими моноклональными антителами являются мышиные моноклональные антитела. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующими моноклональными антителами являются химерные моноклональные антитела. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующими моноклональными антителами являются гуманизированные моноклональные антитела. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующими моноклональными антителами являются человеческие моноклональные антитела. В некоторых вариантах осуществления химерные, гуманизированные и/или человеческие моноклональные антитела могут быть использованы в качестве терапевтических антител для лечения человека. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующими моноклональными антителами являются фрагменты антител. Репрезентативными фрагментами антител являются, но не ограничиваются ими, Fab-,Fab'-, F(ab')2-, Fv-, scFv- и Fd-фрагменты, димерные антитела и другие фрагменты антител. В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело связывается с человеческим ANGPTL3 с KD менее 1 мкМ, менее 500 нМ, менее 300 нМ, менее 200 нМ, менее 100 нМ,менее 75 нМ, менее 50 нМ, менее 30 нМ, менее 25 нМ, менее 20 нМ, менее 15 нМ, менее 10 нМ, менее 5 нМ, менее 4 нМ, менее 3 нМ или менее 2 нМ. В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело связывается с человеческим пептидом SP1 с KD менее 1 мкМ, менее 500 нМ,менее 300 нМ, менее 200 нМ, менее 100 нМ, менее 75 нМ, менее 50 нМ, менее 30 нМ, менее 25 нМ, менее 20 нМ, менее 15 нМ, менее 10 нМ, менее 5 нМ, менее 4 нМ, менее 3 нМ или менее 2 нМ. В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, с KD менее 1 мкМ, менее 500 нМ, менее 300 нМ, менее 200 нМ, менее 100 нМ, менее 75 нМ, менее 50 нМ, менее 30 нМ, менее 25 нМ, менее 20 нМ,менее 15 нМ, менее 10 нМ, менее 5 нМ, менее 4 нМ, менее 3 нМ или менее 2 нМ. В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, с KD менее 1 мкМ, менее 500 нМ, менее 300 нМ, менее 200 нМ, менее 100 нМ, менее 75 нМ, менее 50 нМ, менее 30 нМ, менее 25 нМ, менее 20 нМ, менее 15 нМ, менее 10 нМ, менее 5 нМ, менее 4 нМ, менее 3 нМ или менее 2 нМ. В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело противANGPTL3 связывается с мышиным ANGPTL3 (SEQ ID NO: 1) с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере в 25 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз или по меньшей мере в 200 раз превышает аффинность связывания с мышиным ANGPTL4 (SEQ ID NO: 107). В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 связывается с человеческим ANGPTL3 (SEQ ID NO: 3) с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз,по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере в 25 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз или по меньшей ме- 13019661 ре в 200 раз превышает аффинность связывания с человеческим ANGPTL4 (SEQ ID NO: 108). В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность области SP1 мышиного ANGPTL3 (SEQ IDNO: 9), с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере в 25 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз или по меньшей мере в 200 раз превышает аффинность связывания с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность области SP1 мышиного ANGPTL4 (SEQ IDNO: 109). В различных вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело противANGPTL3 связывается с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность области SP1 человеческого ANGPTL3 (SEQ ID NO: 10), с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере в 25 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз или по меньшей мере в 200 раз превышает аффинность связывания с пептидом, имеющим аминокислотную последовательность области SP1 человеческого ANGPTL4 (SEQ ID NO: 110). Настоящее изобретение относится к репрезентативным нейтрализующим моноклональным антителам, обозначенным 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, 1.315.1, 5.35 и 5.50. Антитела 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, 5.35 и 5.50 связываются с эпитопом в положениях остатков 32-57 мышиного ANGPTL3 или человеческого ANGPTL3 (SEQID NO: 9 и 10). В некоторых вариантах осуществления антитела 4.7.1 и 4.9.1 связываются с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3 или человеческого ANGPTL3, которая включает аминокислоты 33-37 и 40 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 (аминокислоты 2-6 и 9 SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления антитела 5.35 и 5.50 связываются с эпитопом в области SP1 мышиногоANGPTL3 или человеческого ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37 и 40-42 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 (аминокислоты 3-6 и 9-11 SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления антитело 4.8.3 связывается с эпитопом в области SP1 мышиного ANGPTL3 или человеческого ANGPTL3, которая включает аминокислоты 34-37, 40 и 42 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 (аминокислоты 3-6, 9 и 11 SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10). Антитело 1.315.1 связывается с эпитопом в положениях остатков 42-116 мышиного ANGPTL3 (SEQ ID NO: 61). Антитела 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, 1.315.1, 5.35 и 5.50 нейтрализуют по меньшей мере одну активностьANGPTL3. Таким образом, предполагается, что антитела, которые связываются с эпитопом, связанным по меньшей мере с одним из антител 4.7.1, 4.8.3, 4.9.1, 1.315.1, 5.35 и 5.50 (например, в человеческом или мышином ANGPTL3), также должны обладать нейтрализующей активностью. Некоторые нейтрализующие моноклональные антитела против ANGPTL3 связываются с одним или несколькими пептидами, выбранными из SEQ ID NO: 9, 10, 12, 13 и 61. Некоторые нейтрализующие моноклональные антитела против ANGPTL3 связываются с одним или несколькими пептидами, выбранными из SEQ ID NO: 9 и 10. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 связывается с пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 61. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее моноклональное антитело против ANGPTL3 связывается с пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 12, и пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые связываются с тем же эпитопом, с которым связывается моноклональное антитело 4.7.1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые связываются с тем же эпитопом, с которым связывается моноклональное антитело 4.8.3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые связываются с тем же эпитопом, с которым связывается моноклональное антитело 4.9.1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые связываются с тем же эпитопом, с которым связывается моноклональное антитело 5.35. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые связываются с тем же эпитопом, с которым связывается моноклональное антитело 5.50. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим моноклональным антителам, которые связываются с тем же эпитопом, с которым связывается моноклональное антитело 1.315.1. Некоторые нейтрализующие антитела включают тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:20. Некоторые нейтрализующие антитела включают тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:22. Некоторые нейтрализующие антитела включают тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24. Некоторые нейтрализующие антитела включают легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 28. Некоторые нейтрализующие антитела включают легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 30. Некоторые нейтрализующие антитела включают легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 32. Некоторые нейтрализующие антитела включают тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, и легкую цепь, содержащую аминокислотную по- 14019661 следовательность, представленную в SEQ ID NO: 28. Некоторые нейтрализующие антитела включают тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 30. Некоторые нейтрализующие антитела включают тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 32. 1. Химерные и гуманизированные моноклональные антитела В некоторых вариантах осуществления не человеческие антитела являются химерными. В некоторых вариантах осуществления мышиные моноклональные антитела, которые специфически связываются с человеческим ANGPTL3, являются химерными. Некоторые репрезентативные методы получения химерных антител описаны, например, в публикации Morrison et al. (1984) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 81:6851-6855; Neuberger et al. (1984) Nature 312:604-608; Takeda et al. (1985) Nature 314:452-454 и в патентах США 6075181 и 5877397. В некоторых вариантах осуществления не человеческие антитела являются "гуманизированными". В некоторых вариантах осуществления мышиные моноклональные антитела, которые специфически связываются с человеческим ANGPTL3, являются гуманизированными. В некоторых вариантах осуществления мышиные моноклональные антитела, которые направлены против мышиного ANGPTL3, но которые специфически связываются (то есть перекрестно реагируют) с человеческим ANGPTL3, являются гуманизированными. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела сохраняют специфичность связывания и обладают пониженной иммуногенностью (например, они индуцируют пониженный ответ, заключающийся в продуцировании человеческого антимышиного антитела (НАМА при их введении человеку. В некоторых вариантах осуществления гуманизация может быть достигнута с применением определенных методов, включая, но не ограничиваясь ими, присоединение CDR и конструирование человеческих последовательностей, как более подробно описано ниже. В некоторых вариантах гуманизированных антител одну или несколько гипервариабельных областей (CDR), происходящих от вариабельных областей легкой и тяжелой цепи антитела с нужной специфичностью связывания ("донорного" антитела), присоединяют к человеческим каркасным областям (FR)"акцепторного" антитела. Репрезентативные методы присоединения CDR описаны, например, в патентах США 6180370,5693762, 5693761, 5585089 и 5530101; Queen et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько CDR от вариабельных областей тяжелой и легкой цепей присоединяют к консенсусным человеческим FR акцепторного антитела. В некоторых вариантах осуществления для создания консенсусных человеческих FR, FR, происходящие от нескольких аминокислотных последовательностей человеческой тяжелой цепи или легкой цепи, сопоставляют путем выравнивания для идентификации консенсусной аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления некоторые аминокислоты FR в акцепторном антителе заменяют аминокислотами FR донорного антитела. В некоторых таких вариантах аминокислотами FR донорного антитела являются аминокислоты, которые участвуют в сообщении аффинности связывания донорного антитела с антигеном-мишенью. См., например, патенты США 6180370, 5693762, 5693761,5585089 и 5530101; Queen et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033. В некоторых вариантах осуществления в целях моделирования донорных и/или акцепторных антител для идентификации остатков, которые вероятно участвуют в связывании с антигеном и/или в образовании структуры антигенсвязывающего сайта, используют компьютерные программы, облегчающие отбор остатков, таких как остатки FR, которые должны быть заменены в донорном антителе. В некоторых вариантах осуществления CDR донорного антитела присоединяют к акцепторному антителу, содержащему человеческую константную область. В некоторых таких вариантах FR также присоединяют к акцептору. В некоторых вариантах осуществления CDR донорного антитела происходят от одноцепочечного Fv-антитела. В некоторых вариантах осуществления FR донорного антитела происходят от одноцепочечного Fv-антитела. В некоторых вариантах осуществления присоединенные CDR в гуманизированном антителе дополнительно модифицируют (например, путем введения аминокислотных замен, делеций или инсерций) для повышения аффинности связывания гуманизированного антитела с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления присоединенные FR в гуманизированном антителе дополнительно модифицируют (например, путем введения аминокислотных замен, делеций или инсерций) для повышения аффинности связывания гуманизированного антитела с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления не человеческие антитела могут быть гуманизированы методом "конструирования человеческих последовательностей". См., например, патенты США 5766886 и 5869619. В некоторых вариантах конструирования человеческих последовательностей, информация о структуре вариабельных доменов антитела (например, информация, полученная в результате моделирования кристаллических структур и/или молекул) может быть использована для оценки вероятности того, что данный аминокислотный остаток в вариабельной области (а) будет участвовать в связывании с антигеном, (b) будет находиться на поверхности антитела (то есть будет доступным для растворителя), или (с) будет скрыт в вариабельной области антитела (то есть будет участвовать в сохранении структуры вариабельной области). Кроме того, в некоторых вариантах осуществления получают консенсусные последовательности человеческой вариабельной области для идентификации остатков, которые являются консервативными среди человеческих вариабельных областей. В некоторых вариантах осуществления такая информация позволяет определить, следует ли осуществлять замену аминокислотного остатка в вариабельной области не человеческого антитела. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 4.7.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую CDR1,CDR2 и CDR3 антитела 4.8.3. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 4.9.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь,включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 5.35. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 5.50. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 1.315.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 4.7.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 4.8.3. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 4.9.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 5.35. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь,включающую по меньшей мере одну CDR антитела 5.50. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 1.315.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 4.7.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 4.8.3. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере двеCDR антитела 4.9.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 5.35. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь,включающую по меньшей мере две CDR антитела 5.50. Некоторые нейтрализующие антитела содержат тяжелую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 1.315.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 4.7.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 4.8.3. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающуюCDR1, CDR2 и CDR3 антитела 4.9.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую CDRl, CDR2 и CDR3 антитела 5.35. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую CDR1, CDR2 и CDR3 антитела 5.50. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую CDRl, CDR2 и CDR3 антитела 1.315.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 4.7.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 4.8.3. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 4.9.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 5.35. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере одну CDR антитела 5.50. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь,включающую по меньшей мере одну CDR антитела 1.315.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 4.7.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 4.8.3. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 4.9.1. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере двеCDR антитела 5.35. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь, включающую по меньшей мере две CDR антитела 5.50. Некоторые нейтрализующие антитела содержат легкую цепь,включающую по меньшей мере две CDR антитела 1.315.1. 2. Изотипы антител В некоторых вариантах осуществления антитело против ANGPTL3 принадлежит к любому изотипу,выбранному из IgM, IgD, IgG, IgA и IgE. В некоторых вариантах осуществления антитело противANGPTL3 принадлежит к изотипу IgG. В некоторых таких вариантах антитело принадлежит к подклассуIgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело против ANGPTL3 принадлежит к изотипу IgM. В некоторых таких вариантах осуществления антитело принадлежит к подклассуIgM1 или IgM2. В некоторых вариантах осуществления антитело против ANGPTL3 принадлежит к изотипу IgA. В некоторых таких вариантах антитело принадлежит к подклассу IgA1 или IgA2. В некоторых вариантах осуществления антитело против ANGPTL3 содержит человеческую легкую цепь каппа и человеческую тяжелую цепь IgG1 или IgG2. В некоторых вариантах осуществления антитело противANGPTL3 содержит мышиную легкую цепь каппа и мышиную тяжелую цепь IgG1 или IgG2. 3. Модифицированные антитела В различных вариантах осуществления антитело модифицируют для изменения одного или нескольких его свойств. В некоторых вариантах осуществления модифицированное антитело по сравнению с немодифицированным антителом может обладать определенными преимуществами, такими как повы- 16019661 шенная стабильность, более длительное пребывание в кровотоке или пониженная иммуногенность (см.,например, патент США 4179337). В некоторых вариантах осуществления антитело модифицируют путем его присоединения к не белковой молекуле. В некоторых вариантах осуществления антитело модифицируют путем изменения статуса гликозилирования антитела, например, путем изменения числа,типа, связи и/или положения присоединения углеводных цепей к данному антителу. В некоторых вариантах осуществления антитело модифицируют так, чтобы оно не было гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления одна или несколько химических молекул связаны с аминокислотным остовом и/или с углеводными остатками антитела. Некоторые репрезентативные методы присоединения химических молекул к антителу известны специалистам. Такими методами являются, но не ограничиваются ими, реакции ацилирования или реакции алкилирования. См., например, ЕР 0401384;by Mediscript, Mountain Court, Friern Barnet Lane, London N20 OLD, UK; EP 0154316; EP 0401384; WO 92/16221; WO 95/34326; WO 95/13312; WO 96/11953; WO 96/19459 и WO 96/19459. В некоторых вариантах осуществления любые из этих реакций осуществляют в целях генерирования антитела, которое является химически модифицированным у своего аминоконца. В некоторых вариантах осуществления антитело связано с детектируемой меткой, такой как ферментативная, флуоресцентная, изотопная или аффинная метка. В некоторых вариантах осуществления антитело модифицируют путем его присоединения к одному или нескольким полимерам. В некоторых вариантах осуществления антитело присоединено к одному или нескольким водорастворимым полимерам. В некоторых таких вариантах присоединение к водорастворимому полимеру способствует уменьшению вероятности осаждения данного антитела в водной среде, такой как физиологическая среда. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое антитело присоединено к водорастворимому полимеру. В соответствии с некоторыми осуществлениями изобретения специалист в данной области может выбрать подходящий водорастворимый полимер в зависимости от конкретных факторов,включая, но не ограничиваясь ими, такой фактор, как применение конъюгата "полимер/антитело" для лечения данного пациента, и если он применяется, то при выборе учитывается фармакологический профиль антитела (например, время полужизни, доза, активность, антигенность и/или другие факторы). Некоторыми репрезентативными клинически приемлемыми водорастворимыми полимерами являются, но не ограничивается ими, полиэтиленгликоль (ПЭГ); пропиональдегид полиэтиленгликоля; сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля; монометоксиполиэтиленгликоль; карбоксиметилцеллюлоза; декстран; поливиниловый спирт (ПВС); поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан; поли-1,3,6 триоксан; сополимер этилена/ангидрида малеиновой кислоты; полиаминокислоты (гомополимеры или статистические сополимеры); поли(н-винилпирролидон)полиэтиленгликоль; гомополимеры полипропиленгликоля (ППГ) и другие полиалкиленоксиды; сополимеры полипропиленоксида/этиленоксида; полиоксиэтилированные полиолы (ПОП) (например, глицерин) и другие полиоксиэтилированные полиолы; полиоксиэтилированный сорбит, полиоксиэтилированная глюкоза, колоновые кислоты или другие углеводные полимеры; и фиколл, декстран или их смеси. Некоторыми репрезентативными ПЭГ являются, но не ограничиваются ими, некоторые формы, которые используются специалистами в данной области для модификации антител, такие как моно-(C1-С 10)алкокси- или арилокси-ПЭГ. В некоторых вариантах осуществления для такой модификации предпочтение может быть отдано ПЭГ-пропиональдегиду из-за его стабильности в воде. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер может иметь любую молекулярную массу. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер является разветвленным или неразветвленным. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер имеет среднюю молекулярную массу примерно 2-100 кДа, включая все значения между граничными значениями данного интервала. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер имеет среднюю молекулярную массу примерно 5-40 кДа. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер имеет среднюю молекулярную массу примерно 10-35 кДа. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер имеет среднюю молекулярную массу примерно 15-30 кДа. В некоторых вариантах осуществления антитело присоединено к ПЭГ (то есть данное антитело является "ПЭГилированным"). В различных вариантах осуществления ПЭГ обладает низкой токсичностью по отношению к млекопитающим. См., например, Carpenter et al. (1971) Toxicol. Appl. Pharmacol. 18:3540. Следует отметить, что ПЭГ-аддукт аденозин-дезаминазы был разрешен в Соединенных Штатах для введения человеку в целях лечения тяжелого комбинированного синдрома иммунодефицита. В различных вариантах осуществления ПЭГ может способствовать снижению иммуногенности антител. Так, например, в некоторых вариантах осуществления присоединение ПЭГ к антителу, имеющему не человеческие последовательности, может приводить к снижению антитенности такого антитела при его введении человеку. В некоторых вариантах осуществления полимер присоединяют к одному или нескольким реакционноспособным аминокислотным остаткам антитела. Некоторыми репрезентативными реакционноспособными аминокислотными остатками являются, но не ограничиваются ими, альфа-аминогруппа аминоконцевой аминокислоты, эпсилон-аминогруппы лизиновых боковых цепей, сульфгидрильные группы цистеиновых боковых цепей, карбоксильные группы аспартильных и глутамильных боковых цепей, альфа-карбоксильная группа карбоксиконцевой аминокислоты, тирозиновые боковые цепи и активированные гликозильные цепи, связанные с некоторыми аспарагиновыми, сериновыми или треониновыми остатками. Некоторые репрезентативные активированные формы ПЭГ ("реагенты ПЭГ"), подходящие для непосредственного взаимодействия с белками, известны специалистам в данной области. Так, например,в некоторых вариантах осуществления, реагентами ПЭГ, подходящими для связывания с аминогруппами, являются, но не ограничиваются ими, активные сложные эфиры карбоновых кислот или карбонатные производные ПЭГ, например производные, в которых уходящими группами являются Nгидроксисукцинимид, п-нитрофенол, имидазол или 1-гидрокси-2-нитробензол-4-сульфонат. В некоторых вариантах осуществления реагенты ПЭГ, содержащие малеимидо- или галогенацетильные группы, используются для модификации сульфгидрильных групп. В некоторых вариантах осуществления реагенты ПЭГ, содержащие аминогруппы, гидразиновые группы и/или гидразидные группы, могут быть использованы в реакциях взаимодействия с альдегидами, образованными в результате окисления углеводных групп в белке периодатом. В некоторых вариантах осуществления водорастворимый полимер имеет по меньшей мере одну реакционноспособную группу. В некоторых вариантах осуществления активированное производное водорастворимого полимера, такого как ПЭГ, получают посредством реакции взаимодействия водорастворимого полимера с активирующей группой. В некоторых вариантах осуществления активирующая группа может быть монофункциональной, бифункциональной или многофункциональной. Некоторыми репрезентативными активирующими группами, которые могут быть использованы для связывания водорастворимого полимера с двумя или более антителами, являются, но не ограничиваются ими, следующие группы: сульфон (например, хлорсульфон, винилсульфон и дивинилсульфон), малеимид, сульфгидрил,тиол, трифторметансульфонат, трезилат, азиридин, оксиран и 5-пиридил. В некоторых вариантах осуществления производное ПЭГ обычно является резистентным к гидролизу в течение длительного периода времени в водных средах при рН примерно 11 или менее. В некоторых вариантах осуществления производное ПЭГ, связанное с другой молекулой, такой как антитело, сообщает этой молекуле резистентность к гидролизу. Некоторыми репрезентативными гомобифункциональными производными ПЭГ являются,но не ограничиваются ими, ПЭГ-бис-хлорсульфон и ПЭГ-бис-винилсульфон (см. WO 95/13312).D. Некоторые методы получения моноклональных антител 1. Некоторые методы получения гибридом В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела получают стандартными методами. В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела получают гибридомными методами. Некоторые такие методы известны специалистам. См., например, Kohler et al. (1975) Nature 256:495497; Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual Ch. 6 (Cold Spring Harbor Laboratory, ColdSpring Harbor, NY). В некоторых таких вариантах подходящих животных, таких как мыши, крысы, хомячки, обезьяны или другие млекопитающие, иммунизуют иммуногеном для продуцирования антителосекретирующих клеток. В некоторых вариантах осуществления антитело-секретирующими клетками являются В-клетки, такие как лимфоциты или спленоциты. В некоторых вариантах осуществления лимфоциты (например, человеческие лимфоциты) иммунизуют in vivo для продуцирования антителосекретирующих клеток. См., например, Borreback et al. (1988) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 85:3995-3999. В некоторых вариантах осуществления антитело-секретирующие клетки подвергают слиянию с"иммортализованной" клеточной линией, такой как клеточная линия миелоидного типа, в результате чего получают гибридомные клетки. В некоторых вариантах осуществления гибридомные клетки, продуцирующие нужные антитела, идентифицируют, например, с помощью ELISA. В некоторых вариантах осуществления такие клетки могут быть затем субклонированы и культивированы стандартными методами. В некоторых вариантах осуществления такие клетки могут быть также культивированы in vivo в качестве асцитных опухолей в подходящем животном-хозяине. В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела выделяют из среды для культивирования гибридом, из сыворотки или из асцитной жидкости стандартными методами разделения, такими как аффинная хроматография. Руководство по продуцированию гибридом и очистке моноклональных антител в соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения приводится, например, в публикации HarlowLane (1988) Antibodies: ALaboratory Manual Ch. 8 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). В некоторых вариантах осуществления мышиные моноклональные антитела получают путем иммунизации генетически модифицированных мышей иммуногеном. В некоторых таких вариантах мышами являются ANGPTL3-дефицитные мыши, у которых функция ANGPTL3 частично или полностью отсутствует. В некоторых таких вариантах указанными мышами являются "дефицитные по гену" мыши, у которых отсутствует весь ген, кодирующий ANGPTL3, или его часть. В некоторых вариантах осуществления таких дефицитных по гену мышей иммунизуют мышиным ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления таких дефицитных по гену мышей иммунизуют человеческим ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления человеческие моноклональные антитела вырабатываются у трансгенных животных (например, у мышей), способных продуцировать человеческие антитела. См.,например, патенты США 6075181 А и 6114598 А и WO 98/24893 А 2. Так, например, в некоторых вариантах осуществления человеческие гены иммуноглобулина вводят (например, с использованием дрожжевых искусственных хромосом и человеческих хромосомных фрагментов или путем интеграции в зародышевую линию) мышам, у которых эндогенные гены Ig являются инактивированными. См., например, Jakobovits et al. (1993) Nature 362:255-258; Tomizuka et al. (2000) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 97:722727; и Mendez et al. (1997) Nat. Genet. 15:146-156 (описание линии трансгенных мышей XenoMouse II). В некоторых вариантах осуществления таких трансгенных мышей иммунизуют иммуногеном. В некоторых таких вариантах получают лимфатические клетки (такие как В-клетки) у мышей, экспрессирующих антитела. В некоторых таких вариантах выделенные таким образом клетки подвергают слиянию с "иммортализованной" клеточной линией, такой как клеточная линия миелоидного типа, в результате чего получают гибридомные клетки. В некоторых таких вариантах гибридомные клетки скринируют и отбирают для идентификации клеток, которые продуцируют антитела против представляющего интерес антигена. Некоторые репрезентативные методы и трансгенные мыши, подходящие для продуцирования человеческих моноклональных антител, описаны, например, в публикациях Jakobovits et al. (1993) Nature 362:255-258; Jakobovits (1995) Curr. Opin. Biotechnol. 6:561-566; Lonberg et al. (1995) Int'l Rev. Immunol. 13:65-93; Fishwild et al. (1996) Nat. Biotechnol. 14:845-851; Mendez et al. (1997) Nat. Genet. 15:146-156;Green (1999) iL Immunol. Methods 231:11-23; Tomizuka et al. (2000) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 97:722-727; и рассматриваются в публикации Little et al. (2000) Immunol. Today 21:364-370; и в заявке WO 98/24893. В некоторых вариантах осуществления человеческие моноклональные антитела против ANGPTL3 являются подходящими для их использования в качестве терапевтических антител. См., например, ниже,часть V.G. 2. Некоторые методы представления В некоторых вариантах осуществления человеческие моноклональные антитела продуцируют методом представления, таким как, например, любой из методов, описанных ниже. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело продуцируют методами фагового представления. Некоторые репрезентативные методы фагового представления антител известны специалистам и описаны, например, в публикации Hoogenboom, Overview of Antibody Phaqe-Display Technology(2002) 178:1-37 (O'Brien and Aitken, eds., Human Press, Totowa, NJ). Так, например, в некоторых вариантах осуществления библиотеку антител представляют на поверхности нитчатого фага, такого как нелитический нитчатый фаг fd или М 13. В некоторых вариантах осуществления такими антителами являются фрагменты антител, такие как scFv, Fab, Fv, имеющие сконструированные межмолекулярные дисульфидные связи для стабилизации пары VH-VL, и димерные антитела. В некоторых вариантах осуществления могут быть затем выбраны антитела с нужной специфичностью связывания. Некоторые репрезентативные варианты методов фагового представления антител более подробно описаны ниже. В некоторых вариантах осуществления библиотека фагового представления антител может быть получена некоторыми методами, известными специалистам. См., например, Hoogenboom, Overview ofDisplay: Methods and Protocols (2002) 178:1-37 (O'Brien and Aitken, eds., Human Press, Totowa, NJ). В некоторых вариантах осуществления набор вариабельных генов получают с помощью ПЦР-амплификации геномной ДНК и кДНК, происходящих от мРНК антитело-секретирующих клеток. Так, например, в некоторых вариантах осуществления кДНК получают из мРНК В-клеток. В некоторых вариантах осуществления кДНК, кодирующую вариабельные области тяжелой и легкой цепей, амплифицируют, например,с помощью ПЦР. В некоторых вариантах осуществления кДНК тяжелой цепи и кДНК легкой цепи клонируют в подходящий вектор. В некоторых вариантах осуществления кДНК тяжелой цепи и кДНК легкой цепи произвольно объединяют в процессе клонирования, в результате чего получают библиотеку кДНК, кодирующую различные scFv или Fab. В некоторых вариантах осуществления кДНК тяжелой цепи и кДНК легкой цепи лигируют, а затем клонируют в подходящий вектор. В некоторых вариантах осуществления кДНК тяжелой цепи и кДНК легкой цепи лигируют путем постадийного клонирования в подходящий вектор. В некоторых вариантах осуществления кДНК клонируют в вектор фагового представления, такой как фагмидный вектор. Некоторые репрезентативные фагмидные векторы, такие как pCES1, известны специалистам. В некоторых вариантах осуществления кДНК, кодирующие тяжелую и легкую цепи, присутствуют на одном и том же векторе. Так, например, в некоторых вариантах осуществления кДНК, кодирующую scFv, клонируют в полноразмерный ген III или его часть с сохранением рамки считывания,где указанный ген кодирует минорный белок оболочки фага pIII. В некоторых таких вариантах фагмида направляет экспрессию гибрида scFv-pIII на поверхность фага. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, кДНК, кодирующую тяжелую цепь (или легкую цепь), клонируют в полноразмерный генIII или его часть с сохранением рамки считывания, а кДНК, кодирующую легкую цепь (или тяжелую цепь), клонируют в тот же самый вектор ниже сигнальной последовательности. Сигнальная последовательность направляет экспрессию легкой цепи (или тяжелой цепи) в периплазму клетки-хозяина, где тяжелая и легкая цепи подвергаются сборке с образованием Fab-фрагментов. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, кДНК, кодирующая тяжелую цепь, и кДНК,кодирующая легкую цепь, присутствуют на отдельных векторах. В некоторых таких вариантах кДНК тяжелой цепи и легкой цепи клонируют по отдельности, одну в фагмиду, а другую в фаговый вектор, где указанные кДНК содержат сигналы для in vivo рекомбинации в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантную фагмиду или фаговые векторы вводят в подходящего бактериального хозяина, такого как E.coli. В некоторых вариантах осуществления, осуществляемых с использованием фагмиды, хозяина инфицируют хелперным фагом для доставки структурных белков фага, что позволяет экспрессировать фаговые частицы, несущие гибридный белок "антителоpIII" на поверхности фага. В некоторых вариантах осуществления "синтезированные" библиотеки антител конструируют с использованием наборов вариабельных генов, которые подвергают реаранжировке in vitro. Так, например,в некоторых вариантах осуществления отдельные сегменты генов, кодирующих тяжелую или легкую цепи (V-D-J или V-J, соответственно), произвольно объединяют с помощью ПЦР. В некоторых таких вариантах в CDR и, возможно, в FR, может быть внесено дополнительное разнообразие последовательностей, например, с помощью ПЦР с вероятностью ошибки. В некоторых таких вариантах дополнительное разнообразие последовательностей может быть внесено в CDR3, например, в Н 3 тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления библиотеки представления на "неиммунизованном" или"универсальном" фаге конструируют, как описано выше, с использованием нуклеиновой кислоты, происходящей от неиммунизованного животного. В некоторых вариантах осуществления неиммунизованным животным является человек. В некоторых вариантах осуществления библиотеки представления на"иммунизованном" фаге конструируют, как описано выше, с использованием нуклеиновой кислоты, происходящей от иммунизованного животного. В некоторых вариантах осуществления иммунизованными животными являются человек, крысы, мыши, хомячки или обезьяны. В некоторых вариантах осуществления животных иммунизуют любыми иммуногенами, описанными ниже. Некоторые репрезентативные универсальные библиотеки фагового представления человеческих антител получают из коммерчески доступных источников. Некоторыми репрезентативными библиотеками являются, но не ограничиваются ими, серии библиотек HuCAL от MorphoSys AG (Martinstreid/Munich,Germany); библиотеки от Crucell (Leiden, the Netherlands), полученные методами MAbstractf; библиотека Fab-фрагментов n-CoDeR от Biolnvent (Lund, Sweden); и библиотеки, поставляемые компаниейCambridge Antibody Technology (Cambridge, UK). В некоторых вариантах осуществления отбор антител, обладающих нужной специфичностью связывания, из библиотеки фагового представления осуществляют путем проведения последовательных стадий "пэннинга. В некоторых вариантах такого "пэннинга" препараты фаговых библиотек обрабатывают антигеном. В некоторых вариантах осуществления комплексы "фаг-антиген" промывают, а несвязанный фаг удаляют. В некоторых вариантах осуществления связанный фаг выделяют, а затем амплифицируют путем инфицирования бактерией E.coli. В некоторых вариантах осуществления фаг, продуцирующий моноклональное антитело, может быть клонирован путем сбора одиночных бляшек. В некоторых вариантах осуществления вышеописанную процедуру повторяют. В некоторых вариантах осуществления антигеном, используемым в пэннинге, является любой из иммуногенов, описанных ниже. В некоторых вариантах осуществления антиген иммобилизуют на твердом носителе для облегчения очистки антигенсвязывающего фага с помощью аффинной хроматографии. В некоторых вариантах осуществления антиген подвергают биотинилированию, что позволяет отделять связанный фаг от несвязанного фага с использованием магнитных сфер, покрытых стрептавидином. В некоторых вариантах осуществления антиген может быть иммобилизован на клетках (для прямого пэннинга), в криосрезах тканей или на мембранах (например, на найлоновых или нитроцеллюлозных мембранах). Другие варианты некоторых процедур пэннинга могут быть проведены рутинными методами,известными специалистам. В некоторых вариантах осуществления для продуцирования моноклональных антител используют дрожжевую систему представления. В некоторых таких системах антитело экспрессируется в виде гибридного белка с полноразмерным дрожжевым белком AGA2 или его частью, которые становятся представленными на поверхности стенки дрожжевой клетки. В некоторых вариантах осуществления дрожжевые клетки, зкспрессирующие антитела с нужной специфичностью связывания, могут быть затем идентифицированы путем обработки этих клеток флуоресцентно меченым антигеном. В некоторых вариантах осуществления дрожжевые клетки, связывающиеся с антигеном, могут быть затем выделены с помощью проточной цитометрии. См., например, Boder et al. (1997) Nat. Biotechnol. 15:553-557. 3. Некоторые методы осуществления аффинного созревания В некоторых вариантах осуществления аффинность антитела по отношению к конкретному антигену повышают путем обеспечения условий аффинного созревания антитела (или "прямой эволюции") invitro. In vivo нативные антитела подвергаются аффинному созреванию посредством соматической гипермутации с последующим отбором. Некоторые in vitro способы имитируют такой in vivo процесс, что позволяет продуцировать антитела, аффинность которых аналогична аффинности нативных антител или превышает такую аффинность. В некоторых вариантах аффинного созревания в последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вариабельную область антитела, обладающего нужной специфичностью связывания, вводят мутации. См., например, Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134; Brekke et al. (2002) Nat. Reviews 2: 5262. В некоторых вариантах осуществления мутации вводят в вариабельную область тяжелой цепи, легкой цепи или обеих этих цепей. В некоторых вариантах осуществления мутации вводят в одну или несколькоCDR. В некоторых вариантах осуществления мутации вводят в Н 3, L3 или в обе эти цепи. В некоторых вариантах осуществления мутации вводят в одну или несколько FR. В некоторых вариантах осуществления библиотеку мутаций создают, например, в виде библиотеки фагового, рибосомного или дрожжевого представления, так, чтобы антитела с повышенной аффинностью могли быть идентифицированы стантартными методами скрининга. См., например, Boder et al. (2000) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 97:1070110705; Foote et al. (2000) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 97: 10679-10681; Hoogenboom, Overview of Antibody(1998) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:14130-14135. В некоторых вариантах осуществления мутации вводят посредством сайт-специфического мутагенеза, исходя из информации о структуре антитела, например, антигенсвязывающего сайта. В некоторых вариантах осуществления мутации вводят посредством комбинаторного мутагенеза CDR. В некоторых вариантах осуществления всю последовательность, кодирующую вариабельную область или ее часть,подвергают неспецифическому мутагенезу, например, с использованием клеток-мутаторов E.coli., посредством реаранжировки гомологичных генов или с помощью ПЦР с вероятностью ошибки. В некоторых вариантах осуществления, мутацию вводят методом "перестановки ДНК". См., например, Crameri etal. (1996) Nat. Med. 2:100-102; Fermer et al. (2004) Tumor Biol. 25:7-13. В некоторых вариантах осуществления для продуцирования антител с повышенной аффинностью используют "перестановку цепей". В некоторых вариантах перестановки цепей одну из цепей, например легкую цепь, заменяют набором легких цепей, а другую цепь, например, тяжелую цепь, оставляют неизмененной для обеспечения специфичности. В некоторых таких вариантах создают библиотеку антител с перестановленными цепями, где неизмененная тяжелая цепь экспрессируется в комбинации с каждой легкой цепью, происходящей от набора легких цепей. В некоторых вариантах осуществления такие библиотеки могут быть затем скринированы на антитела с повышенной аффинностью. В некоторых вариантах осуществления тяжелые и легкие цепи последовательно заменяют. В некоторых вариантах осуществления заменяют только вариабельные области тяжелой и/или легкой цепей. В некоторых вариантах осуществления заменяют только часть вариабельных областей, например, CDR тяжелой и/или легкой цепей. См, например, Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9: 129-134; Brekke et al. (2002) Nat. Reviews 2: 52-62; Kang etal. (1991) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 88: 11120-11123; Marks et al. (1992) Biotechnol. 10: 779-83. В некоторых вариантах осуществления мышиные моноклональные антитела, которые специфически связываются с человеческим ANGPTL3 (включая, но не ограничиваясь ими, мышиные моноклональные антитела, которые продуцируются против мышиного ANGPTL3, но которые специфически связываются (то есть перекрестно реагируют) с человеческим ANGPTL3), подвергают последовательной перестановке цепи. В некоторых вариантах осуществления, например, тяжелую цепь данного мышиного моноклонального антитела объединяют с новым набором человеческих легких цепей и отбирают антитела с нужной аффинностью. В некоторых таких вариантах легкие цепи выбранных антител затем объединяют с новым набором человеческих тяжелых цепей, и отбирают антитела с нужной аффинностью. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления отбирают человеческие антитела, обладающие нужной специфичностью и аффинностью связывания с антигеном. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, тяжелую цепь данного мышиного моноклонального антитела объединяют с новым набором человеческих легких цепей, и в первом раунде перестановки отбирают антитела с нужной аффинностью. В некоторых вариантах осуществления легкую цепь исходного мышиного моноклонального антитела объединяют с новым набором человеческих тяжелых цепей, и во втором раунде перестановки отбирают антитела с нужной аффинностью. В некоторых вариантах осуществления человеческие легкие цепи, происходящие от антител, отобранных в первом раунде перестановки, объединяют с человеческими тяжелыми цепями антител, отобранных во втором раунде перестановки. Так, например, в некоторых вариантах осуществления отбирают человеческие антитела,обладающие нужной специфичностью и аффинностью связывания с антигеном. В некоторых вариантах осуществления применяют метод "рибосомного представления", который является альтернативой отбору антител с созреванием аффинности. В некоторых вариантах метода рибосомного представления нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, амплифицируют с помощью ОТПЦР, проводимой между стадиями отбора. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления для введения мутаций в нуклеиновую кислоту могут быть использованы полимеразы, участвующие в ПЦР с вероятностью ошибки. Неограничивающий пример такого метода подробно описан в публикации Hanes 4. Некоторые рекомбинантные методы В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело получают рекомбинантными методами. См., например, патент США 4816567. В некоторых таких вариантах нуклеиновую кислоту,кодирующую цепи моноклональных антител, клонируют и экспрессируют в подходящую клеткухозяина. Так, например, в некоторых вариантах осуществления РНК может быть получена из клеток,экспрессирующих нужное антитело, таких как зрелые В-клетки или гибридомные клетки, стандартными методами. В некоторых вариантах осуществления РНК может быть затем использована для получения кДНК стандартными методами. В некоторых вариантах осуществления кДНК, кодирующую полипептид тяжелой или легкой цепи, амплифицируют, например, с помощью ПЦР с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. В некоторых вариантах осуществления кДНК клонируют в подходящий экспрессионный вектор. В некоторых вариантах осуществления экспрессионный вектор затем трансформируют или трансфицируют в подходящую клетку-хозяина, такую как клетка-хозяин, которая эндогенно не продуцирует данное антитело. Некоторыми репрезентативными клетками-хозяевами являются, но не ограничиваются ими, E.coli, клетки COS, клетки яичника китайского хомячка (СНО) и миеломные клетки. В некоторых вариантах осуществления, в которых тяжелая и легкая цепи коэкспрессируются в одном и том же хозяине, может быть выделено реконструированное антитело. В некоторых вариантах осуществления кДНК, кодирующая тяжелую или легкую цепь, может быть модифицирована. Так, например, в некоторых вариантах осуществления константная область мышиной тяжелой или легкой цепи может быть заменена константной областью человеческой тяжелой или легкой цепи. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления может быть получено химерное антитело,которое имеет константные области человеческого антитела, но при этом сохраняют специфичность связывания мышиного антитела. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные антитела могут быть экспрессированы в некоторых клеточных линиях. В некоторых вариантах осуществления последовательности, кодирующие конкретные антитела, могут быть использованы для трансформации подходящей клетки-хозяина млекопитающего. В соответствии с некоторыми вариантами изобретения такая трансформация может представлять собой любой известный метод введения полинуклеотидов в клетку-хозяина. Некоторыми репрезентативными методами являются, но не ограничиваются ими, упаковка полинуклеотида в вирус (или в вирусный вектор) и трансдукция клетки-хозяина вирусом (или вектором), а также осуществление некоторых процедур трансфекции, известных специалистам и описанных в патентах США 4399216,4912040, 4740461 и 4959455. В некоторых вариантах осуществления используемая процедура трансформации может зависеть от способности данного хозяина к трансформации. Некоторые репрезентативные методы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих известны специалистам, и такими методами являются, но не ограничиваются ими, опосредуемая декстраном трансфекция, преципитация фосфатом кальция, опосредуемая полибреном трансфекция, слияние протопластов, электропорация, инкапсуляции полинуклеотида(ов) в липосомы и прямая микроинжекция ДНК в ядро. Некоторые репрезентативные клеточные линии млекопитающих, которые могут быть использованы в качестве экспрессирующих хозяев, известны специалистам, и такими клеточными линиями являются,но не ограничиваются ими, многие иммортализованные клеточные линии, имеющиеся в Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая, но не ограничиваясь ими, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки HeLa, клетки почек детеныша хомячка (ВНК), клетки почек обезьян (COS), человеческие клетки гепатоцеллюлярной карциномы (например, Hep G2) и ряд других клеточных линий. В некоторых вариантах осуществления клеточные линии могут быть отобраны путем определения клеток,которые продуцируют высокие уровни антител, специфически связывающихся с ANGPTL3. Е. Некоторые полипептидные иммуногены В некоторых вариантах осуществления, для продуцирования антител, животных иммунизируют иммуногеном. В некоторых вариантах осуществления таким иммуногеном является полипептид, содержащий ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления иммуногеном является полипептид, содержащий фрагмент ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления таким иммуногеном является полипептид, содержащий N-концевой суперсприрализованный домен ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления таким иммуногеном является полипептид, содержащий область SP1 ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает мышиный ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает человеческий ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает мышиный ANGPTL3, содержащий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает человеческий ANGPTL3,содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает фрагмент мышиного ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает фрагмент SEQ ID NO: 1 от остатка 17 до остатка 240. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит SEQ ID NO: 1 от остатка 32 до остатка 57. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит фрагмент человеческого ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит фрагмент SEQ ID NO: 3 от остатка 20 до остатка 243. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит фрагмент SEQ ID NO: 1 от остатка 32 до остатка 57. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит любой пептид, состоящий примерно из 10-20 смежных аминокислот от остатка 17 до остатка 240 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит любой пептид, состоящий примерно из 10-20 смежных аминокислот от остатка 20 до остатка 243 SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит один или несколько пептидов, выбранных из SEQ ID NO: 9, 10, 12, 13, 59, 60 и 61. В некоторых вариантах осуществления иммуноген содержит пептид, выбранный из SEQ ID NO: 9 и 10. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает пептид, содержащий одну или несколько аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 59 и 60. В некоторых вариантах осуществления иммуноген включает пептид, содержащий SEQ ID NO: 12, 13 и 61. В некоторых вариантах осуществления выбирают пептид, который, вероятно, является иммуногенным. В некоторых таких вариантах выбранный пептид, вероятно, является гидрофильным и/или находится на поверхности нативного ANGPTL3 и имеет определенную укладку. Репрезентативный метод отбора подходящих иммуногенных пептидов описан,например, в руководстве Ausubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology Ch. 11.14 (John WileySons, NY); и Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual Ch. 5 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). Для того чтобы определить, является ли пептидный сегмент белка гидрофильным, а поэтому он находится на поверхности белка, существуют определенные репрезентативные алгоритмы, известные специалистам в данной области. В некоторых таких алгоритмах для достижения указанных предсказаний используется информация о первичной последовательности белка. Некоторые такие алгоритмы разработаны на основе метода, описанного, например, НоррWoods (1981) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 78:38243828, или KyteDoolittle (1982) J. Mol. Biol. 157: 105-132. Для предсказания вторичной структуры белка на основе информации о первичной аминокислотной последовательности белка существуют некоторые репрезентативные алгоритмы, известные специалистам. См., например, Corrigan et al. (1982) Comput.Programs Biomed. 3: 163-168. Некоторые такие алгоритмы разработаны на основе метода, описанного,например, ChouFasman (1978) Ann. Rev. Biochem. 47: 25-276. В некоторых вариантах осуществления пептидные сегменты, которые, как было предсказано, образуют -витки, а поэтому они могут находиться на поверхности белка, могут быть выбраны в качестве иммуногенов. В некоторых вариантах осуществления животное иммунизуют иммуногеном и одним или несколькими адъювантами. В некоторых вариантах осуществления адъювант используют для повышения иммунного ответа в зависимости от вида хозяина. Некоторыми репрезентативными адъювантами являются,но не ограничиваются ими, адъювант Фрейнда (полный и неполный), минеральные соли, такие как гидроксид алюминия или фосфат алюминия, поверхностно-активные вещества, хитозан, лизолецитин, полиолы плюроники, полианионы, пептиды, масляные эмульсии и человеческие адъюванты, которые могут быть использованы, такие как BCG (бацилла Кальметта-Герена) и Corynebacterium parvum. В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ на иммуноген, например пептидный иммуноген, может быть увеличен посредством присоединения иммуногена к другой иммуногенной молекуле или "белкуносителю". Некоторыми репрезентативными белками-носителями являются, но не ограничиваются ими,гемоцианин лимфы улитки (KLH), столбнячный токсоид, дифтерийный токсоид, овальбумин, холерный токсоид и их иммуногенные фрагменты. Репрезентативный метод присоединения пептидных иммуногенов к белкам-носителям описан, например, в руководстве Ausubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology Ch. 11.15 (John WileySons, NY) и HarlowLane (1988) Antibodies: A Laboratory ManualCh. 5 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). В некоторых вариантах осуществления любой из вышеописанных иммуногенов может быть получен стандартными рекомбинантными методами. Так, например, в некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий мышиный или человеческий ANGPTL3, или фрагмент этого полинуклеотида, могут быть клонированы в подходящий экспрессионный вектор. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 5 или SEQ IDNO: 6. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вектор затем вводят в подходящую клетку-хозяина. В некоторых вариантах осуществления полипептид затем выделяют из клетки-хозяина стандартными методами. Некоторые репрезентативные методы экспрессии рекомбинантных белков описаны,например, в руководстве Ausubel et al. (1991) Current Protocols in Molecular Biology Ch. 16 (John WileyF. Некоторые анализы 1. Некоторые анализы на связывание В некоторых вариантах осуществления антитела подвергают скринингу на связывание с ANGPTL3 с применением некоторых рутинных методов детектирования связывания антитела с антигеном. Так,- 23019661 например, в некоторых вариантах осуществления способность моноклонального антитела связываться сANGPTL3 анализируют стандартными методами иммуноблоттинга, такими как Вестерн-блот-анализ. См., например, Ausubel et al. (1992) Current Protocols in Molecular Biology Ch. 10.8 (John WileySons,NY); Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold SpringHarbor, NY). В некоторых вариантах осуществления ANGPTL3, используемый в таких анализах, может быть либо изолированным, либо он может присутствовать в сложной смеси белков и/или макромолекул. В некоторых вариантах осуществления способность моноклонального антитела связываться сANGPTL3 анализируют с помощью анализа на конкурентное связывание, который позволяет оценивать способность антитела-кандидата конкурировать с известным анти-ANGPTL3 антителом за связывание сANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления известным анти-ANGPTL3 антителом является любое из моноклональных антител, описанных ниже в части VI.J. В некоторых вариантах осуществления анализ на конкурентное связывание осуществляют с помощью ELISA. См., например, HarlowLane (1988)Antibodies: A Laboratory Manual Ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). В некоторых вариантах осуществления анализ на связывание проводят для количественной оценки кинетики связывания (например, константы скорости) или аффинности связывания (например, константы ассоциации или диссоциации) антитела против ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления кинетику или аффинность связывания определяют в "твердой фазе" с использованием иммобилизующего антигена (например, ANGPTL3) на твердом носителе. Иммобилизованный антиген "захватывает" антитело из раствора. В некоторых вариантах осуществления кинетику или аффинность связывания определяют в "твердой фазе" с использованием иммобилизующего антитела (например, антитела противANGPTL3) на твердом носителе. Иммобилизованное антитело "захватывает" антиген из раствора. В некоторых вариантах осуществления кинетику связывания или аффинность связывания определяют методами на основе ELISA. В некоторых вариантах осуществления кинетику связывания или аффинность связывания определяют биосенсорным методом, таким как метод поверхностного плазмонного резонанса Biacore (Biacore, Piscataway, NJ). Некоторые такие методы известны специалистам в данной области. См., например, McCafferty et al. (eds.) (1996) Antibody Engineering: A Practical Approach (IRL,Oxford, UK); Goldberg et al. (1993) Curr. Opin. Immunol. 5:278-281; Karlsson et al. (1991) J. Immunol. Methods 145:229-240; Malmqvist (1993) Curr. Opin. Immunol. 5:282-286, а обзорное описание см. в публикацииHoogenboom, Overview of Antibody Phage-Display Technology and Its Applications, from Methods in Molecular Biology: Antibody Phage Display: Methods and Protocols (2002) 178:1-37 at 19 (O'Brien and Aitken, eds.,Human Press, Totowa, NJ). В некоторых вариантах осуществления определяют кинетику связывания или аффинность связывания Fab-фрагмента, который специфически связывается с ANGPTL3. В некоторых случаях Fabфрагменты не обладают способностью к мультимеризации. Однако, в некоторых случаях, мультимеризация может затруднять определение кинетики связывания и аффинности связывания в "твердофазных" методах. См., например, Hoogenboom, Overview of Antibody Phage-Display Technology and Its Applications, from Methods in Molecular Biology: Antibody Phage Display: Methods and Protocols (2002) 178:1-37 at 19 (O'Brien and Aitken, eds., Human Press, Totowa, NJ). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления Fab-фрагмент, который специфически связывается с ANGPTL3, может быть использован в анализе на связывание, в котором антиген иммобилизован на твердом носителе, таком как, например, анализELISA или Biacore. В некоторых вариантах осуществления Fab-фрагменты получают из интактного антитела, которое специфически связывается с ANGPTL3, с применением ферментативных методов. В некоторых вариантах осуществления Fab-фрагменты получают путем экспрессии нуклеиновых кислот, кодирующих Fab-фрагменты, в системе рекомбинантной экспрессии, такой как система, описанная выше в части V.D.3. В некоторых вариантах осуществления кинетику связывания или аффинность связывания антитела против ANGPTL3 определяют методами с использованием жидкой фазы. В таких методах кинетику или аффинность связывания определяют для комплекса "антитело-антиген" в растворе. Некоторые такие методы известны специалистам в данной области. Неограничивающим примером такого метода является:27677-27685; Drake et al. (2004) Anal. Biochem. 328:35-43 (сравнение "твердофазного" метода Biacore и метода с использованием жидкой фазы KinExA). В некоторых вариантах осуществления оборудование для проведения KinExA поставляется компанией Sapidyne Instruments, Inc. (Boise, ID). В некоторых вариантах осуществления кинетику связывания или аффинность связывания поливалентного антитела или антитела, которое подвергается мультимеризации, определяют методом с использованием жидкой фазы. В некоторых случаях кинетику связывания или аффинность связывания поливалентного антитела или антитела, которое подвергается мультимеризации, определяют с помощью анализа в жидкой фазе. В некоторых вариантах осуществления аффинность связывания анти-ANGPTL3 антитела, измеренная по его KD, составляет 10-6 М или менее. В некоторых вариантах осуществления аффинность связывания анти-ANGPTL3 антитела составляет примерно 10-7 М, примерно 10-8 М или примерно 10-9 М или менее. В некоторых вариантах осуществления анти-ANGPTL3 антитело может быть использовано в ка- 24019661 честве терапевтического антитела. См., например, Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9: 129-134. В некоторых вариантах осуществления аффинность связывания, составляющая менее чем 10-9 М (например, аффинность связывания в пределах от примерно 500 до примерно 0,5 пМ, включая, но не ограничиваясь ими,аффинность связывания от примерно 100 до примерно 5 пМ), может быть достигнута, например, с применением методов аффинного созревания. См., например, Boder et al. (2000) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 97: 10701-10705. В некоторых вариантах осуществления аффинность связывания анти-ANGPTL3 антитела составляет менее чем примерно 510-8 М. В некоторых вариантах осуществления моноклинальное антитело против мышиного ANGPTL3 подвергают скринингу на специфическое связывание с человеческим ANGPTL3 с применением некоторых рутинных методов детектирования, например, методов, описанных в настоящей заявке. Способность моноклонального антитела связываться (то есть "перекрестно реагировать") с мышиным и человеческимANGPTL3 указывает на присутствие одного и того же эпитопа в мышином и человеческом ANGPTL3. В некоторых вариантах методов детектирования, которые проводят в денатурирующих условиях (например, в вестерн-блот-анализе), способность перекрестно реагировать означает, что мышиное моноклональное антитело связывается с одним и тем же самым "линейным" эпитопом в мышином и человеческом ANGPTL3. В некоторых вариантах методов детектирования, которые проводят в не денатурирующих условиях, способность перекрестно реагировать означает, что мышиное моноклональное антитело связывается с одним и тем же самым эпитопом (например, с линейным эпитопом или с конформационным эпитопом) в мышином и человеческом ANGPTL3. 2. Некоторые методы картирования эпитопов В различных вариантах осуществления эпитоп, с которым связывается моноклональное антитело,идентифицируют с помощью любого из различных анализов. Некоторые репрезентативные анализы описаны, например, в публикации Morris, Methods in Molecular Biology, vol. 66: Epitope Mapping Protocols(1996) (Humana Press, Totowa, NJ). Так, например, картирование эпитопов может быть достигнуто с помощью анализов на экспрессию генных фрагментов или анализов с использованием пептидов. В некоторых вариантах анализов на экспрессию генных фрагментов, например, нуклеиновые кислоты, кодирующие фрагменты ANGPTL3, экспрессируют в прокариотических клетках и выделяют. В некоторых вариантах осуществления способность моноклонального антитела связываться с этими фрагментами затем оценивают, например, посредством иммунопреципитации или иммуноблоттинга. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, кодирующие фрагменты ANGPTL3, транскрибируют и транслируют in vitro в присутствии радиоактивных аминокислот. Затем радиоактивно меченые фрагментыANGPTL3 тестируют на связывание с моноклональным антителом. В некоторых вариантах осуществления фрагменты ANGPTL3 получают путем протеолитической фрагментации. В некоторых вариантах осуществления эпитоп идентифицируют с использованием библиотек рандомизированных пептидов,представленных на поверхности фага или дрожжей. В некоторых вариантах осуществления эпитоп идентифицируют путем тестирования библиотеки перекрывающихся синтетических пептидных фрагментовANGPTL3 на связывание с моноклональным антителом. В некоторых вариантах осуществления эпитоп идентифицируют с помощью анализа на конкурентное связывание, такого как анализ, описанный ниже. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть затем определен методом аланинсканирующего мутагенеза, например, как описано ниже. 3. Некоторые анализы на конкурентное связывание В некоторых вариантах осуществления идентифицируют моноклональные антитела, которые связываются с тем же самым эпитопом ANGPTL3, с которым связывается представляющее интерес моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления такие моноклональные антитела идентифицируют путем картирования эпитопа, например, как описано выше. В некоторых вариантах осуществления такие моноклональные антитела идентифицируют с помощью рутинных анализов на конкурентное связывание. См., например, HarlowLane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch. 14 (Cold SpringHarbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). В неограничивающем репрезентативном анализе на конкурентное связывание ANGPTL3 или его фрагмент иммобилизуют на лунках многолуночного планшета. В некоторых вариантах осуществления представляющее интерес моноклональное антитело метят флуоресцентной меткой (в некоторых вариантах флуоресцеинизотиоцианатом) с применением стандартных методов. В некоторых вариантах осуществления в лунки добавляют смеси представляющего интерес меченого моноклонального антитела и немеченого тестируемого моноклонального антитела. В некоторых вариантах осуществления флуоресценцию в каждой лунке количественно оценивают для определения уровня блокирования связывания представляющего интерес меченого моноклонального антитела немеченым тестируемым моноклональным антителом. В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела, предположительно, имеют общий эпитоп, если каждое антитело блокирует связывание другого антитела на 50% или более. Репрезентативные анализы на конкурентное связывание также описаны, например, в публикации Morris, Methods in Molecular Biology Vol.66: Epitope Mapping Protocols(1996) (Humana Press, Totowa, NJ). Неограничивающий репрезентативный анализ на конкурентное связывание описан ниже в части VI.О. 4. Некоторые анализы на идентификацию нейтрализующих антител В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела скринируют на антитела, которые являются нейтрализующими, то есть снижают активность ANGPTL3 in vivo и/или in vitro. В некоторых вариантах осуществления активностью ANGPTL3 является способность ANGPTL3 ингибировать ЛПЛ. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело идентифицируют по его способности повышать ЛПЛ-активность в присутствии ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело, по сравнению с контрольным антителом, повышает ЛПЛ-активность по меньшей мере примерно на 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 95%. Некоторые репрезентативные анализы на определение ЛПЛ-активности in vivo и in vitro известны специалистам. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело, которое снижает активностьANGPTL3 in vivo, идентифицируют по его способности снижать уровень по меньшей мере одного липида в сыворотке. Некоторыми репрезентативными сывороточными липидами являются, но не ограничиваются ими, триглицериды, холестерин и свободные жирные кислоты. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело по сравнению с контрольным антителом снижает уровень по меньшей мере одного липида в сыворотке по меньшей мере примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 95%. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело, которое снижает активностьANGPTL3 in vivo, идентифицируют по его способности нейтрализовать некоторые побочные эффекты,обусловленные приемом пищи, содержащей жир, или сообщать толерантность к таким побочным эффектам. Некоторыми репрезентативными побочными эффектами являются, но не ограничиваются ими, увеличение массы тела, ожирение, непереносимость глюкозы (гипергликемия), инсулинорезистентностьG. Некоторые фармацевтические композиции и способы лечения с использованием нейтрализующих моноклональных антител В некоторых вариантах осуществления нейтрализующее антитело может быть использовано в качестве терапевтического антитела. Некоторыми репрезентативными нейтрализующими антителами, используемыми в качестве терапевтических антител, являются, но не ограничиваются ими, химерные антитела, гуманизированные антитела и человеческие антитела. Применение некоторых антител в качестве терапевтических средств известно специалистам в данной области. Так, например, с середины 1980-х гг. Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств(FDA) было разрешено к применению свыше двенадцати антител в качестве терапевтических средств. См., например, Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9: 129-134; Gura (2002) Nature 417: 584-586; Brekke et al.(2002) Nat. Reviews 2: 52-62. Некоторыми антителами, применение которых было разрешено FDA, являются антитела, которые могут быть использованы для лечения различных раковых заболеваний, воспалений и вирусных инфекций, а также для предупреждения отторжения трансплантата. См., например,Gura (2002) Nature 417: 584-586; Brekke et al. (2002) Nat. Reviews 2: 52-62. Кроме того, в настоящее время,клинические испытания проходят свыше двенадцати антител. См., например, Brekke et al. (2002) Nat.Reviews 2: 52-62. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения расстройства, ассоциированного с нарушением метаболизма липидов, где указанный способ включает введение эффективного количества нейтрализующего антитела против ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения острого заболевания, ассоциированного с нарушением метаболизма липидов, где указанный способ включает введение эффективного количества нейтрализующего антитела против ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения хронического заболевания, ассоциированного с нарушением метаболизма липидов, где указанный способ включает введение эффективного количества нейтрализующего антитела против ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления способ лечения расстройства, ассоциированного с нарушением метаболизма липидов, также включает введение эффективного количества нейтрализующего антитела против ANGPTL4. См., например, публикацию РСТWO 2006/074228. Используемый здесь термин "нарушение метаболизма липидов" включает, но не ограничивается ими, расстройства, которые могут приводить к развитию вторичной гиперлипидемии (включая гипертриглицеридемию и гиперхолестеринемию). Некоторыми репрезентативными расстройствами, ассоциированными с нарушением метаболизма липидов, являются, но не ограничиваются ими, атеросклероз,дислипидемия, гипертриглицеридемия (включая гипертриглицеридемию, индуцированную лекарственными средствами, гипертриглицеридемию, индуцированную диуретиками, гипертриглицеридемию, индуцированную употреблением алкоголя, гипертриглицеридемию, индуцированную действием агента,блокирующего -адренергические рецепторы, гипертриглицеридемию, индуцированную эстрогеном,гипертриглицеридемию, индуцированную глюкокортикоидами, гипертриглицеридемию, индуцированную ретиноидами, гипертриглицеридемию, индуцированную циметидином, и наследственную гипертриглицеридемию), острый панкреатит, ассоциированный с гипертриглицеридемией, хиломикронный синдром, хиломикронемия, заболевание, ассоциированное с дефицитом Аро-Е, заболевание, ассоциированное с дефицитом или с недостаточной активностью ЛПЛ; гиперлипидемия (включая наследственную комбинированную гиперлипидемию), гиперхолестеринемия, подагра, ассоциированная с гиперхолестеринемией, ксантоматоз (подкожные отложения холестерина), заболевание коронарной артерии (также называемое ишемической болезнью сердца), воспаление, ассоциированное с заболеванием коронарной артерии; рестеноз, заболевания периферических сосудов и инсульт. Некоторыми репрезентативными нарушениями метаболизма липидов являются, но не ограничиваются ими, расстройства, ассоциированные с изменением массы тела, такие как ожирение, метаболический синдром, включая независимые компоненты метаболического синдрома (например, центральное ожирение, заболевание, ассоциированное с изменением содержания сахара в крови натощак/преддиабет/диабет, гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия и гипертензия), гипотиреоидит, уремия и другие состояния, ассоциированные с увеличением массы тела (включая быстрое увеличение массы тела), потерей массы тела, длительной потерей массы тела или с риском увеличения массы тела после ее потери. Некоторыми репрезентативными расстройствами, ассоциированными с нарушением метаболизма липидов, являются, но не ограничиваются ими,родственные расстройства, ассоциированные с нарушением уровня сахара в крови, такие как диабет, гипертензия и синдром поликистоза яичника, ассоциированный с инсулинорезистентностью. Некоторыми репрезентативными расстройствами, ассоциированными с нарушением метаболизма липидов, являются,но не ограничиваются ими, заболевание, ассоциированное с трансплантацией почек, нефротический синдром, синдром Кушинга, акромегалия, системная красная волчанка, дисглобулинемия, липодистрофия,гликогеноз типа I и болезнь Аддисона. Расстройствами, ассоциированными с нарушением метаболизма липидов, являются, но не ограничиваются ими, вторичная гипертриглицеринемия (ГТГ, включая, но не ограничиваясь ею, ГТГ типа I, V иIV), включая, но не ограничиваясь ими, ГТГ, ассоциированная с нарушением питания (включая, но не ограничиваясь ими, заболевание, ассоциированное с чрезмерным употреблением алкоголя) и приемом лекарственных средств (включая, но не ограничиваясь ими, экзогенный эстроген, тамоксифен, ретиноиды, тиазиды, хлорталидон, бета-блокаторы, ингибиторы протеазы (включая, но не ограничиваясь ими,ритонавир), а также вливанием пропофола и парентеральными вливаниями липидов, расстройства, ассоциированные с нарушением метаболизма (включая, но не ограничиваясь ими, диабет, осложнения при беременности, хроническая почечная недостаточность, гипотиреоидит, наследственная гиперлипидемия и панкреатит). Расстройствами, ассоциированными с нарушением метаболизма липидов, являются, но не ограничиваются ими, нарушения липидного обмена, ассоциированные с нарушением функции сосудов; нарушения липидного обмена, ассоциированные с пролиферативными заболеваниями, включая, но не ограничиваясь ими, новообразования (включая, но не ограничиваясь ими, рак предстательной железы, почек,печени, молочной железы, яичника, легких и поджелудочной железы); расстройства, возникающие в результате воспаления, включая, но не ограничиваясь ими, расстройства, ассоциированные, например, с инфекционными заболеваниями; заболевания, ассоциированные с заживлением ран; синдромы иммунодефицита (СПИД и другие синдромы, включая, но не ограничиваясь ими, синдромы, ассоциированные с нарушением развития организма), образование рубцов, атеросклероз, рестеноз и отторжение трансплантата, аутоиммунные расстройства и хронические воспалительные заболевания и расстройства, которыми являются, но не ограничиваются ими, заболевания, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, и расстройства, включая, но не ограничиваясь ими, болезнь Крона,колит, воспалительное заболевание кишечника, острый артрит, включая болезнь Лайма, инсулинзависимый диабет, специфические аутоиммунные заболевания органов, рассеянный склероз, тиреоидит Хашимото и болезнь Грейвса; синдром Сьегрена, контактный дерматит, псориаз, склеродермия, реакция"трансплантат против хозяина", саркоидоз, малярия, сепсис, панкреатит, атопические состояния, включая, но не ограничиваясь ими, астму и аллергию, включая, но не ограничиваясь ими, аллергический ринит, аллергии желудочно-кишечного тракта, включая, но не ограничиваясь ими, пищевые аллергии, эозинофилию, конъюнктивит и гломерулонефрит; расстройства, ассоциированные с нарушением свертывания крови, эндотоксический шок и другие опосредуемые воспалением расстройства, такие как апноэ во сне и бессонница. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения расстройства, ассоциированного с нарушением метаболизма липидов, где указанный способ включает введение эффективного количества антитела против ANGPTL3 и по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство вводят в эффективном количестве. В некоторых вариантах осуществления дополнительным терапевтическим средством является другое антитело против ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления дополнительным терапевтическим средством является нейтрализующее антитело противANGPTL4. См., например, публикацию РСТWO 2006/074228. В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой средство, не являющееся антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительным терапевтическим средством является средство,которое снижает уровень одного или нескольких липидов в сыворотке. Некоторыми дополнительными репрезентативными терапевтическими средствами являются, но не ограничиваются ими, ингибиторы синтеза холестерина (статины), такие как ингибиторы HMG-CoA-редуктазы (например, ловастатин, сим- 27019661 вастатин, правастатин и флувастатин); секвестранты желчных кислот, такие как холестирамин и другие смолы; ингибиторы секреции липопротеинов очень низкой плотности (ЛОНП), такие как ниацин; липофильные антиоксиданты, такие как пробукол; ингибиторы ацил-СоА-холестерин-ацилтрансферазы; антагонисты фарнезоидного рецептора X; активаторы белка, активирующего расщепление регуляторного белка, связывающегося со стиролом (SCAP); ингибиторы белка-переносчика микросомных триглицеридов (МТР) и АроЕ-родственный пептид. В некоторых вариантах осуществления дополнительным терапевтическим средством является средство, повышающее уровень липопротеинов высокой плотности(ЛВП). Неограничивающими примерами таких средств являются, но не ограничиваются ими, ингибиторы белка-переносчика холестерилового эфира (СЕТР). В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей эффективное количество антитела против ANGPTL3 и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель, солюбилизатор, эмульгатор, консервант и/или адъювант. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество антитела против ANGPTL3 и эффективное количество по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства в комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, солюбилизатором, эмульгатором, консервантом и/или адъювантом. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство выбирают из описанных выше средств. В некоторых вариантах осуществления вещества, применяемые для приготовления фармацевтических композиций, являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция включает вещества, которые могут быть использованы для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмомолярности, вязкости, чистоты, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости диссоциации или высвобождения, адсорбции или пенетрации данной композиции. В некоторых вариантах осуществления веществами, подходящими для приготовления такой композиции, являются, но не ограничиваются ими, аминокислоты (например, глицин, глутамин, аспарагин, аргинин и лизин); противомикробные средства; антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, сульфит натрия и бисульфит натрия); буферы(например, борат, бикарбонат, трис-HCl, цитраты, фосфаты и другие органические кислоты); агенты,придающие объем (например, маннит и глицин); хелатообразующие агенты (например, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA; агенты, образующие комплексы (например, кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин и гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды, дисахариды и другие углеводы (например, глюкоза, манноза и декстрины); белки (например, сывороточный альбумин, желатин и иммуноглобулины); красители, ароматизаторы и разбавители; эмульгаторы; гидрофильные полимеры (например, поливинилпирролидон); низкомолекулярные полипептиды; солеобразующие противоионы (например, натрия); консерванты (например, хлорид бензалкония, бензойная кислота, салициловая кислота, тимерозал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота и пероксид водорода); растворители (например, глицерин, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль); спирты ряда сахаров (например, маннит и сорбит); суспендирующие агенты; поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты (например, плюроники, ПЭГ, сложные эфиры сорбитана, полисорбаты (например, полисорбат 20 и полисорбат 80), тритон, трометамин, лецитин, холестерин и тилоксапал); агенты, повышающие стабильность (например, сахароза и сорбит); агенты, повышающие тоничность (например, галогениды щелочных металлов (например, хлорид натрия или калия),маннит и сорбит); носители для доставки; разбавители; наполнители; и фармацевтические адъюванты.(Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1990). В некоторых вариантах осуществления антитело против ANGPTL3 или другая терапевтическая молекула связаны с носителем, увеличивающим время полужизни таких молекул. Некоторые репрезентативные носители, увеличивающие время полужизни таких молекул, известны специалистам. Некоторыми такими носителями являются, но не ограничиваются ими, Fc-домен, полиэтиленгликоль и декстран. Некоторые такие носители описаны, например, в опубликованной заявке РСТWO 99/25044. В некоторых вариантах осуществления оптимальная фармацевтическая композиция может быть получена самим специалистом в данной области в зависимости, например, от нужного способа введения,формы доставки и желаемой дозы. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, см. выше. В некоторых вариантах осуществления такие композиции могут оказывать влияние на физическое состояние,стабильность, скорость in vivo высвобождения или скорость in vivo клиренса нейтрализующего антитела. В некоторых вариантах осуществления основной наполнитель или носитель в фармацевтической композиции, по своей природе, может быть водным или безводным. Так, например, в некоторых вариантах осуществления подходящими наполнителями или носителями могут быть вода для инъекции, физиологический раствор или искусственная цереброспинальная жидкость, в которые могут быть добавлены другие вещества, обычно используемые в композициях для парентерального введения. Некоторыми репрезентативными носителями являются, но не ограничиваются ими, нейтрально забуференный физиологический раствор и физиологический раствор, смешанный с сывороточным альбумином. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат трис-буфер с рН примерно 7,0-8,5 или ацетатный буфер с рН примерно 4,0-5,5, которые могут также включать сорбит или его подходящий заменитель. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая антитело противANGPTL3, в присутствии или в отсутствие по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, может быть получена для хранения путем смешивания выбранной композиции, имеющей нужную степень чистоты, с необязательными технологическими добавками (Remington's Pharmaceutical Sciences, см. выше), в форме лиофилизованного осадка или водного раствора. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая антитело против ANGPTL3, в присутствии или в отсутствие по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, может быть приготовлена в виде лиофилизата с использованием соответствующих наполнителей, таких как сахароза. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию выбирают для парентерального введения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию выбирают для ингаляции или для доставки через пищеварительный тракт, например, для перорального введения. Некоторые репрезентативные методы получения фармацевтически приемлемых композиций известны специалистам в данной области. В некоторых вариантах осуществления компоненты композиции присутствуют в концентрациях,которые являются подходящими для данного участка введения. В некоторых вариантах осуществления для поддержания композиции при физиологическом рН или при несколько более низких рН, обычно при рН в пределах примерно от 5 до 8, используются буферы. В некоторых вариантах осуществления, в которых рассматривается парентеральное введение, фармацевтическая композиция может быть получена в форме апирогенного парентерально приемлемого водного раствора, содержащего нужное антитело против ANGPTL3, в присутствии или в отсутствие дополнительных терапевтических средств, в фармацевтически приемлемом носителе. В некоторых вариантах осуществления носителем для парентерального введения является стерильная дистиллированная вода, в которой антитело против ANGPTL3, в присутствии или в отсутствие по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, получают в виде соответствующим образом консервированного стерильного изотонического раствора. В некоторых вариантах осуществления препарат может включать композицию нужной молекулы с агентом, таким как микросферы для инъекций, биологически разлагаемые частицы, полимерные соединения (такие как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), сферы или липосомы, которые могут быть приготовлены для регулируемого или пролонгированного высвобождения продукта, который затем может быть доставлен с помощью депо-инъекции. В некоторых вариантах осуществления может быть также использована гиалуроновая кислота, которая может увеличивать время пребывания препарата в кровотоке. В некоторых вариантах осуществления для введения нужной молекулы могут быть использованы имплантируемые устройства, содержащие лекарственное средство для доставки. В некоторых вариантах осуществления может быть приготовлена фармацевтическая композиция,предназначенная для введения путем ингаляции. В некоторых вариантах осуществления антитело противANGPTL3, в присутствии или в отсутствие по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, может быть приготовлено в виде сухого порошка для ингаляции. В некоторых вариантах осуществления раствор для ингаляции, содержащий антитело против ANGPTL3, в присутствии или в отсутствие по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, может быть приготовлен вместе с пропеллентом для доставки в виде аэрозоля. В некоторых вариантах осуществления растворы могут быть введены путем распыления. В некоторых вариантах осуществления лекарственный препарат может быть введен перорально. В некоторых вариантах осуществления антитело ANGPTL3, в присутствии или в отсутствие по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, подходящего для введения таким способом,может быть приготовлено в виде смеси с носителями, либо в отсутствие носителей, обычно используемых для приготовления твердых лекарственных форм, таких как таблетки и капсулы. В некоторых вариантах осуществления капсулы могут быть предназначены для высвобождения активной части композиции в область желудочно-кишечного тракта в условиях максимизации ее биологической доступности и минимизации пресистемной деградации. В некоторых вариантах осуществления, для облегчения абсорбции антитела против ANGPTL3 в присутствии или в отсутствие дополнительных терапевтических средств, может быть включено по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления могут быть также использованы разбавители, ароматизаторы, низкоплавкие воски, растительные масла, замасливатели, суспендирующие агенты, дезинтеграторы для таблеток и/или связующие агенты. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция включает эффективное количество антитела против ANGPTL3, в сочетании по меньшей мере с одним терапевтическим средством,или в его отсутствие, а также в смеси с нетоксичными носителями, подходящими для изготовления таблеток. В некоторых вариантах осуществления растворы в виде унифицированной лекарственной формы могут быть приготовлены путем растворения таблеток в стерильной воде или в другом подходящем носителе. Некоторыми репрезентативными примерами наполнителей являются, но не ограничиваются ими,инертные разбавители (например, карбонат кальция, карбонат натрия, бикарбонат натрия, лактоза и фос- 29