Человеческие моноклональные антитела против лиганда-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1) и их применения

ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ ЛИГАНДА-1 ЗАПРОГРАММИРОВАННОЙ ГИБЕЛИ КЛЕТОК (PD-L1) И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам, в частности к человеческим моноклональным антителам, которые специфически связываются с PD-L1 с высокой аффинностью. Настоящее изобретение относится также к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим антитела согласно изобретению, к экспрессирующим векторам, к клеткамхозяевам и к способам экспрессии антител согласно изобретению. Настоящее изобретение относится также к иммуноконъюгатам, биспецифическим молекулам и к фармацевтическим композициям, содержащим антитела согласно изобретению. Настоящее изобретение относится также к способам детектирования PD-L1, а также к способам лечения различных заболеваний,включая злокачественные и инфекционные заболевания, с использованием анти-PD-L1-антител. Перекрестная ссылка на родственные заявки В заявке на настоящий патент испрашивается преимущество предварительной заявки на патент США 60/696426, поданной 1 июля 2005 г., которая во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Предшествующий уровень техники Лиганд-1 запрограммированной гибели клеток (PD-1) представляет собой член семейства CD28 рецепторов, которое включает в себя CD28, CTLA-4, ICOS, PD-1 и BTLA. Первые члены этого семейства,CD28 и ICOS, были обнаружены по их функциональному действию, направленному на повышение уровня пролиферации Т-клеток после добавления моноклональных антител (Hutloff et al. (1999), Nature 397:263-266; Hansen et al. (1980), Immunogenics 10:247-260). Были идентифицированы два поверхностных гликопротеиновых лиганда для PD-1, а именно PD-L1 и PD-L2, и было показано, что эти лиганды ингибируют активацию Т-клеток и секрецию цитокинов после связывания с PD-1 (Freeman et al. (2000), J.Exp. Med. 192:1027-34; Latchman et al. (2001), Nat. Immunol. 2:261-8; Carter et al. (2002), Eur. J. Immunol. 32:634-43; Ohigashi et al. (2005), Clin. Cancer Res. 11:2947-53). Оба лиганда PD-L1 (B7-H1) и PD-L2 (B7DC) являются гомологами В 7, которые связываются с PD-1, но не связываются с другими членами семейства CD28 (Blank et al. (2004. Было также показано, что экспрессия PD-L1 на клеточной поверхности активируется посредством стимуляции IFN-. Экспрессия PD-L1 была обнаружена при некоторых раковых заболеваниях мыши и человека, включая человеческие карциномы легких, яичника и толстой кишки и различные миеломы (Iwai et al. (2002),PNAS 99:12293-7; Ohigashi et al. (2005), Clin. Cancer Res. 11:2947-53). Было высказано предположение,что PD-L1 играет определенную роль в выработке противоопухолевого иммунного ответа путем повышения уровня апоптоза антигенспецифических Т-клеточных клонов (Dong et al. (2002), Nat. Med. 8:793800). Было также высказано предположение, что PD-L1 может участвовать в развитии воспаления слизистой тонкой кишки, а ингибирование PD-L1 приводит к подавлению кахексии, ассоциированной с колитом (Kanai et al. (2003), J. Immunol. 171:4156-63). Краткое описание сущности изобретения Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам, в частности к человеческим моноклональным антителам, которые связываются с PD-L1 и обладают различными желательными свойствам. Таким свойством является высокая аффинность связывания с человеческим PD-L1. Кроме того, было показано, что антитела согласно изобретению способствуют усилению пролиферации Т-клеток, секреции IFN- и секреции IL-2 в реакции смешанной культуры лимфоцитов. В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, где указанное антитело обладает по меньшей мере одним из следующих свойств:(b) способностью повышать уровень пролиферации Т-клеток в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов (РСКЛ);(c) способностью повышать уровень продуцирования интерферона- в анализе РСКЛ;(d) способностью повышать уровень секреции IL-2 в анализе РСКЛ;(e) способностью стимулировать гуморальный ответ или(f) способностью блокировать действие регуляторных Т-клеток на эффекторные Т-клетки и/или дендритные клетки. Предпочтительным антителом является человеческое антитело, хотя в альтернативных вариантах осуществления изобретения может быть использовано, например, мышиное антитело, химерное антитело или гуманизованное антитело. В конкретных вариантах изобретения указанное антитело связывается с человеческим PD-L1 с KD,составляющей 510-8 М или менее, с KD, составляющей 110-8 M или менее, с KD, составляющей 510-9 М или менее, с KD, составляющей 110-9 M или менее, или с KD, составляющей от 510-8 до 110-8 и 110-10 M. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, где указанное антитело конкурирует за перекрестное связывание с PD-L1 с известным антителом, содержащим:(a) вариабельную область человеческой тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;(b) вариабельную область человеческой легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20. В различных вариантах изобретения указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:12; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:13; или указанное известное антитело содержит:(а) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:14; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:15; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:16; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:17; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:18; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:19; или указанное известное антитело содержит:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:20. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область тяжелой цепи,которая является продуктом человеческого гена VH 1-18 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 1-69 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 1-3 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 3-9 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается сPD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK L6 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклонально-2 019344 му антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK L15 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK A27 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VKL18 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В своем конкретном предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, кодируемую человеческим геном VH 1-18;(b) вариабельную область легкой цепи, кодируемую человеческим геном VK L6; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, кодируемую человеческим геном VH 1-69;(b) вариабельную область легкой цепи, кодируемую человеческим геном VK L6; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающей в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, кодируемую человеческим геном VH 1-3;(b) вариабельную область легкой цепи, кодируемую человеческим геном VK L15; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, кодируемую человеческим геном VH 1-69;(b) вариабельную область легкой цепи, кодируемую человеческим геном VK A27; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, кодируемую человеческим геном VH 3-9;(b) вариабельную область легкой цепи, кодируемую человеческим геном VK L15; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, кодируемую человеческим геном VH 3-9;(b) вариабельную область легкой цепи, кодируемую человеческим геном VK L18; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область тяжелой цепи,включающую в себя последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи,включающую в себя последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где:(a) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50 и их консервативных модификаций;(b) CDR3 вариабельной области легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80 и их консервативных модификаций;(c) указанное антитело специфически связывается с человеческим PD-L1. Предпочтительно CDR2 вариабельной области тяжелой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40 и их консервативных модификаций; a CDR2 вариабельной области легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67,68, 69 и 70 и их консервативных модификаций. Предпочтительно CDR1 вариабельной области тяжелой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDNO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30 и их консервативных модификаций; a CDR1 вариабельной области легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60 и их консервативных модификаций. В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, содержащим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где:(a) вариабельная область тяжелой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% гомологичная аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;(b) вариабельная область легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% гомологичная аминокислотной последовательности, выбранной из группы,состоящей из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20;(c) указанное антитело связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 110-7 M или менее. В предпочтительном варианте изобретения указанное антитело обладает по меньшей мере одним из нижеследующих свойств:(a) указанное антитело усиливает пролиферацию Т-клеток в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов (РСКЛ);(b) указанное антитело повышает уровень продуцирования интерферона- в анализе РСКЛ или(c) указанное антитело повышает уровень секреции IL-2 в анализе РСКЛ. В своих предпочтительных вариантах настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, содержащим:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Предпочтительная комбинация последовательностей указанного антитела включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:21;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:31;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:41;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:51;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:61;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:71. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:22;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:32;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:42;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:52;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:62;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:72. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:23;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:33;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:43;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:53;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:63;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:73. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:24;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:34;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:44;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:54;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:64;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:74. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:25;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:35;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:45;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:55;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:65;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:75. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:26;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:36;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:46;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:56;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:66;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:76. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:27;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:37;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:47;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:57;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:67;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:77. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:28;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:38;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:48;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:58;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:68;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:78. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:29;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:39;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:49;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:59;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:69;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:79. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:30;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:40;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:50;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:60;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:70;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO:80. Другие предпочтительные антитела согласно изобретению или их антигенсвязывающие части содержат:(a) вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;(b) вариабельную область легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. Предпочтительная комбинация последовательностей указанного антитела включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:11. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:12. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:13. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:14. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:15. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:16. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:17. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:18. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:19. Другая предпочтительная комбинация включает в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:20. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к антителам или к их антигенсвязывающим частям, которые конкурируют с любым из вышеуказанных антител за связывание с PD-L1. Антитела согласно изобретению могут быть, например, полноразмерными антителами, например антителами изотипа IgG1 или IgG4. Альтернативно, указанные антитела могут представлять собой фрагменты антител, такие как Fab- или F(ab')2-фрагменты, или одноцепочечные антитела. Настоящее изобретение относится также к иммуноконъюгату, включающему в себя антитело согласно изобретению или его антигенсвязывающую часть, присоединенные к терапевтическому средству,такому как цитотоксин или радиоактивный изотоп. Настоящее изобретение относится также к биспецифической молекуле, включающей в себя антитело согласно изобретению или его антигенсвязывающую часть, присоединенные ко второй функциональной молекуле или к ее антигенсвязывающей части, обладающим специфичностью связывания, отличающейся от специфичности связывания указанного антитела. Настоящее изобретение относится также к композициям, включающим в себя антитело или его антигенсвязывающую часть, или иммуноконъюгат или биспецифическую молекулу и фармацевтически приемлемый носитель. Кроме того, настоящее изобретение охватывает молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела или их антигенсвязывающие части, а также экспрессирующие векторы, включающие в себя такие нуклеиновые кислоты, и клетки-хозяева, содержащие такие экспрессирующие векторы. Кроме того, настоящее изобретение относится к трансгенным мышам, имеющим трансгены, кодирующие тяжелую и легкую цепи человеческого иммуноглобулина, где у указанной мыши экспрессируется антитело согласно изобретению; а также к гибридомам, полученным от такой мыши, где указанная гибридома продуцирует антитело согласно изобретению. В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способу модуляции иммунного ответа у индивида, включающему в себя введение указанному индивиду антитела согласно изобретению или его антигенсвязывающей части в целях модуляции иммунного ответа у данного индивида. Предпочтительно указанное антитело усиливает или стимулирует указанный иммунный ответ либо повышает уровень его продуцирования у индивида. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток у индивида, включающему в себя введение указанному индивиду терапевтически эффективного количества анти-PD-L1-антитела согласно изобретению или его антигенсвязывающей части. Анти-6 019344 телами, предпочтительными для использования в указанном способе, являются антитела согласно изобретению, хотя вместо анти-PD-L1-антител согласно изобретению (или в комбинации с такими антителами) могут быть использованы и другие анти-PD-L1-антитела. Так, например, в способе ингибирования роста опухоли может быть использовано химерное, гуманизованное или полностью человеческое антиPD-L1-антитело. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения инфекционного заболевания у индивида, включающему в себя введение указанному индивиду терапевтически эффективного количества анти-PD-L1-антитела или его антигенсвязывающей части. Антителами, предпочтительными для использования в указанном способе, являются антитела согласно изобретению, хотя вместо анти-PDL1-антител согласно изобретению (или в комбинации с указанными антителами) могут быть использованы и другие анти-PD-L1-антитела. Так, например, в способе лечения инфекционного заболевания может быть использовано химерное, гуманизованное или полностью человеческое анти-PD-L1-антитело. В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способу усиления иммунного ответа индивида на антиген, где указанный способ включает в себя введение указанному индивиду: (i) антигена и (ii) анти-PD-L1-антитела или его антигенсвязывающей части, в целях усиления иммунного ответа у указанного индивида на антиген. Таким антигеном может быть, например, опухолевый антиген, вирусный антиген, бактериальный антиген или антиген, происходящий от патогена. Антителами, предпочтительными для использования в указанном способе, являются антитела согласно изобретению, хотя вместо анти-PD-L1-антител согласно изобретению (или в комбинации с такими антителами) могут быть использованы и другие анти-PD-L1-антитела. Так, например, в способе усиления иммунного ответа индивида на антиген может быть использовано химерное, гуманизованное или полностью человеческое антиPD-L1-антитело. Настоящее изобретение относится также к способу создания анти-PD-L1-антител "второй генерации" на основе последовательностей описанных здесь анти-PD-L1-антител. Так, например, настоящее изобретение относится к способу создания анти-PD-L1-антитела, включающему в себя:(a) получение антитела, имеющего (i) последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела, включающую в себя последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDSEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40; и последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50; или (ii) последовательность вариабельной области легкой цепи антитела, включающую в себя последовательность CDR1, выбранную из группы,состоящей из SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70, и последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80;(b) модификацию по меньшей мере одного аминокислотного остатка по меньшей мере в одной последовательности вариабельной области антитела, где указанная последовательность выбрана из группы,состоящей из последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела и последовательности вариабельной области легкой цепи антитела, где указанную модификацию вводят в целях создания по меньшей мере одной модифицированной последовательности антитела;(c) экспрессию указанной модифицированной последовательности антитела в виде белка. Другие отличительные признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из нижеследующего подробного описания изобретения и примеров, которые не должны рассматриваться как ограничение изобретения. Содержание всех публикаций, баз данных Genbank, патентов и опубликованных патентных заявок, цитируемых в настоящем изобретении, во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Краткое описание графического материала На фиг. 1 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:81) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:1) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 3G10. Области CDR1 (SEQ ID NO:21), CDR2 (SEQ ID NO:31) и CDR3 (SEQ ID NO:41) подчеркнуты, а также указаны V-, D- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 1 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:91) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:11) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 3G10. Области CDR1 (SEQ ID NO:51), CDR2 (SEQ ID NO:61) и CDR3 (SEQ ID NO:71) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 2 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:82) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:2) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 12 А 4. Области CDR1 (SEQ ID NO:22), CDR2 (SEQ ID NO:32) и CDR3 (SEQ ID NO:42) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 2 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:92) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:12) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 12 А 4. Области CDR1 (SEQ ID NO:52), CDR2 (SEQ ID NO:62) и CDR3 (SEQ ID NO:72) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 3 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:83) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:3) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 10 А 5. Области CDR1 (SEQ ID NO:23), CDR2 (SEQ ID NO:33) и CDR3 (SEQ ID NO:43) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 3 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:93) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:13) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 10 А 5. Области CDR1 (SEQ ID NO:53), CDR2 (SEQ ID NO:63) и CDR3 (SEQ ID NO:73) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 4 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:84) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:4) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8. Области CDR1 (SEQ ID NO:24), CDR2 (SEQ ID NO:34) и CDR3 (SEQ ID NO:44) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 4 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:94) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:14) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8. Области CDR1 (SEQ ID NO:54), CDR2 (SEQ ID NO:64) и CDR3 (SEQ ID NO:74) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 5 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:85) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:5) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 10 Н 10. Области CDR1 (SEQ ID NO:25), CDR2 (SEQ ID NO:35) и CDR3 (SEQ ID NO:45) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 5 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:95) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:15) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 10 Н 10. Области CDR1 (SEQ ID NO:55), CDR2 (SEQ ID NO:65) и CDR3 (SEQ ID NO:75) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 6 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:86) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:6) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 1 В 12. Области CDR1 (SEQ ID NO:26), CDR2 (SEQ ID NO:36) и CDR3 (SEQ ID NO:46) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 6 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:96) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:16) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 1 В 12. Области CDR1 (SEQ ID NO:56), CDR2 (SEQ ID NO:66) и CDR3 (SEQ ID NO:76) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 7 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:87) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:7) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 7 Н 1. Области CDR1 (SEQ ID NO:27), CDR2 (SEQ ID NO:37) и CDR3 (SEQ ID NO:47) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 7 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:97) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:17) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 7 Н 1. Области CDR1 (SEQ ID NO:57), CDR2 (SEQ ID NO:67) и CDR3 (SEQ ID NO:77) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 8 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:88) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:8) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 11 Е 6. Области CDR1 (SEQ ID NO:28), CDR2 (SEQ ID NO:38) и CDR3 (SEQ ID NO:48) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 8 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:98) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:18) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 11 Е 6. Области CDR1 (SEQ ID NO:58), CDR2 (SEQ ID NO:68) и CDR3 (SEQ ID NO:78) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 9 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:89) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:9) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 12 В 7. Области CDR1 (SEQ ID NO:29), CDR2 (SEQ ID NO:39) и CDR3 (SEQ ID NO:49) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 9 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:99) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:19) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 12 В 7. Области CDR1 (SEQ ID NO:59), CDR2 (SEQ ID NO:69) и CDR3 (SEQ ID NO:79) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 10 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:90) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:10) вариабельной области тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 13G4. Области CDR1 (SEQ ID NO:30), CDR2 (SEQ ID NO:40) и CDR3 (SEQ ID NO:50) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 10 В представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:100) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:20) вариабельной области легкой цепи человеческого моноклонального антитела 13G4. Области CDR1 (SEQ ID NO:60), CDR2 (SEQ ID NO:70) и CDR3 (SEQ ID NO:80) подчеркнуты, а также указаны V- и J-сегменты производных последовательностей зародышевой линии. На фиг. 11 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 3G10 с аминокислотной последовательностьюVH 1-18 (SEQ ID NO:101) человеческой зародышевой линии. На фиг. 12 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 12 А 4 с аминокислотной последовательностьюVH 1-69 (SEQ ID NO:102) человеческой зародышевой линии. На фиг. 13 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 10 А 5 с аминокислотной последовательностьюVH 1-3 (SEQ ID NO:103) человеческой зародышевой линии. На фиг. 14 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 5F8 с аминокислотной последовательностью VH 1-69 (SEQ ID NO:102) человеческой зародышевой линии. На фиг. 15 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 10 Н 10 с аминокислотной последовательностьюVH 3-9 (SEQ ID NO:104) человеческой зародышевой линии. На фиг. 16 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 1 В 12 с аминокислотной последовательностьюVH 1-69 (SEQ ID NO:102) человеческой зародышевой линии. На фиг. 17 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 7 Н 1 с аминокислотной последовательностью VH 1-69 (SEQ ID NO:102) человеческой зародышевой линии. На фиг. 18 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 11 Е 6 с аминокислотной последовательностьюVH 1-69 (SEQ ID NO:102) человеческой зародышевой линии. На фиг. 19 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 12 В 7 с аминокислотной последовательностьюVH 1-69 (SEQ ID NO:102) человеческой зародышевой линии. На фиг. 20 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 13G4 с аминокислотной последовательностьюVH 3-9 (SEQ ID NO:104) человеческой зародышевой линии. На фиг. 21 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 3G10 с аминокислотной последовательностью VKL6 (SEQ ID NO:105) человеческой зародышевой линии. На фиг. 22 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 12 А 4 с аминокислотной последовательностью VKL6 (SEQ ID NO:105) человеческой зародышевой линии. На фиг. 23 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 10 А 5 с аминокислотной последовательностью VKL15 (SEQ ID NO:106) человеческой зародышевой линии. На фиг. 24 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 5F8 с аминокислотной последовательностью VKA27 (SEQ ID NO:107) человеческой зародышевой линии. На фиг. 25 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 10 Н 10 с аминокислотной последовательностьюVK L15 (SEQ ID NO:106) человеческой зародышевой линии. На фиг. 26 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 1 В 12 с аминокислотной последовательностью VKL6 (SEQ ID NO:105) человеческой зародышевой линии. На фиг. 27 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 7 Н 1 с аминокислотной последовательностью VKL6 (SEQ ID NO:105) человеческой зародышевой линии. На фиг. 28 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 11 Е 6 с аминокислотной последовательностью VKA27 (SEQ ID NO:107) человеческой зародышевой линии. На фиг. 29 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 11 Е 6 а (SEQ ID NO:109) с аминокислотной последовательностью VK A27 (SEQ ID NO:107) человеческой зародышевой линии. На фиг. 30 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 12 В 7 с аминокислотной последовательностью VK На фиг. 31 проиллюстрировано сопоставление путем выравнивания аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 13G4 с аминокислотной последовательностью VKL18 (SEQ ID NO:108) человеческой зародышевой линии. На фиг. 32 А-С представлены результаты экспериментов, проведенных с помощью проточной цитометрии и продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела 3G10, 10 А 5 и 12 А 4, направленные против человеческого PD-L1, связываются с клеточной поверхностью клеток СНО, трансфецированных полноразмерным человеческим PD-L1. График, построенный по данным проточного цитометрического анализа: (А) для 3G10, (В) для 10 А 5 и (С) для 12 А 4. На фиг. 33 представлены результаты экспериментов, проведенных с помощью проточной цитометрии и продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела 3G10, 10 А 5 и 12 А 4, направленные против человеческого PD-L1, связываются с клеточной поверхностью клеток СНО, трансфецированных полноразмерным человеческим PD-L1, в зависимости от концентрации. На фиг. 34 представлены результаты экспериментов, проведенных с помощью ELISA и продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела 3G10, 10 А 5 и 12 А 4, направленные против человеческого PD-L1, связываются с гибридным белком PD-L1-Fc. На фиг. 35 представлены результаты экспериментов, иллюстрирующих титрование HuMab на стимулированных человеческих CD4+-Т-клетках. На фиг. 36 представлены результаты экспериментов, иллюстрирующих титрование HuMab на стимулированных МКПК собакоподобных обезьян. На фиг. 37 А-С представлены результаты экспериментов, проведенных с помощью проточной цитометрии и продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела 3G10, 10 А 5 и 12 А 4, направленные против человеческого PD-L1, связываются с PD-L1 на клеточной поверхности активированных Т-клеток. График, построенный по данным проточного цитометрического анализа: (А) для 3G10, (В) для 10 А 5 и (С) для 12 А 4. На фиг. 38 продемонстрировано связывание HuMab с клетками ES-2. На фиг. 39A-D представлены результаты экспериментов, продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела против человеческого PD-L1 стимулируют пролиферацию Т-клеток, секрециюIFN- и секрецию IL-2 в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов. На фиг. 39 А представлена гистограмма, иллюстрирующая пролиферацию Т-клеток в зависимости от концентрации HuMAb 10A5; на фиг. 39 В представлена гистограмма, иллюстрирующая секрецию IFN- в зависимости от концентрации HuMAb 10A5; на фиг. 39 С представлена гистограмма, иллюстрирующая секрецию IFN-, опосредуемую HuMAb 3G10 и 12 А 4; на фиг. 39D представлена гистограмма, иллюстрирующая секрецию IL-2 в зависимости от концентрации HuMAb 10A5. На фиг. 40 продемонстрировано влияние человеческого анти-PD-L1-антитела на пролиферацию клеток и секрецию IFN- в реакции смешанной культуры лимфоцитов (РСКЛ) с использованием аллогенных дендритных клеток и Т-клеток (эффекторных CD4+-T-клеток). На фиг. 41 А-В представлены результаты экспериментов, продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела против человеческого PD-L1 стимулируют пролиферацию Т-клеток и секрецию IFN- в реакции смешанной культуры лимфоцитов (РСКЛ), содержащей регуляторные Т-клетки. На фиг. 41 А представлена гистограмма, иллюстрирующая пролиферацию Т-клеток в зависимости от концентрации HuMAb 10A5; на фиг. 41 В представлена гистограмма, иллюстрирующая секрецию IFN- в зависимости от концентрации HuMAb 10A5. На фиг. 42 продемонстрированы результаты анализа на воздействие анти-PD-L1-антител на пролиферацию клеток в реакции смешанной культуры лимфоцитов в присутствии регуляторных Т-клеток. На фиг. 43 продемонстрированы результаты анализа на воздействие анти-PD-L1-антител на продуцирование цитокинов в реакции смешанной культуры лимфоцитов в присутствии регуляторных Тклеток. На фиг. 44 продемонстрированы результаты анализа на воздействие анти-PD-L1-антител на секрецию IFN- человеческими МКПК, стимулированными CMV-лизатом. На фиг. 45 представлены результаты экспериментов, проведенных с помощью проточной цитометрии и продемонстрировавших, что человеческие моноклональные антитела против человеческого PD-L1 блокируют связывание PD-L1 с трансфецированными клетками СНО, экспрессирующими PD-1. На фиг. 46 показано, что анти-PD-L1-антитела блокируют связывание PD-1 с IFNобработанными клетками ES-2. На фиг. 47 показано влияние анти-PD-L1-антител на рост опухоли in vivo. Подробное описание изобретения В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам, в частности к человеческим моноклональным антителам, которые специфически связываются сPD-L1. В некоторых вариантах изобретения антитела согласно изобретению обладают одним или несколькими желательными функциональными свойствами, такими как высокая аффинность связывания сPD-L1, способность усиливать пролиферацию Т-клеток, секрецию IFN- и/или IL-2 в реакциях смешанной культуры лимфоцитов, способность ингибировать связывание PD-L1 с рецептором PD-1, способность стимулировать гуморальные ответы и/или способность блокировать супрессорную функцию регуляторных Т-клеток. Дополнительно или альтернативно, антитела согласно изобретению происходят от конкретных последовательностей тяжелой и легкой цепей зародышевой линии и/или имеют конкретные структурные признаки, такие как CDR-области, содержащие конкретные аминокислотные последовательности. Настоящее изобретение относится, например, к выделенным антителам, к способам получения таких антител, к иммуноконъюгатам и к биспецифическим молекулам, содержащим такие антитела, а также к фармацевтическим композициям, содержащим антитела, иммуноконъюгаты или биспецифические молекулы согласно изобретению. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам ингибирования роста опухолевых клеток у индивида с использованием анти-PD-L1-антител. Настоящее изобретение относится также к способам применения антител для модификации иммунного ответа, а также для лечения заболеваний, таких как рак или инфекционное заболевание, или к способам стимуляции протективного аутоиммунного ответа или антигенспецифических иммунных ответов (например, путем совместного введения анти-PD-L1-антитела и представляющего интерес антигена). Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приводится определение некоторых терминов. Дополнительные определения приводятся в подробном описании изобретения. Термин "иммунный ответ" означает действие, например, лимфоцитов, антиген-презентирующих клеток, фагоцитарных клеток, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых вышеописанными клетками или клетками печени (включая антитела, цитокины и комплемент), которое приводит к селективному разрушению или деструкции в человеческом организме или элиминации из человеческого организма инвазивных патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, раковых клеток или, в случае аутоиммунного ответа или патологического воспаления, нормальных человеческих клеток или тканей. Термин "путь передачи сигнала" означает биохимическую взаимосвязь между различными молекулами передачи сигнала, которые играют определенную роль в передаче сигнала от одной части клетки в другую часть клетки. Используемый здесь термин "рецептор клеточной поверхности" включает в себя,например, молекулы и комплексы молекул, способных принимать сигнал и передавать этот сигнал через плазматическую клеточную мембрану. Примером "рецептора клеточной поверхности" согласно изобретению является рецептор PD-L1. Используемый здесь термин "антитело" означает интактные антитела и их любой антигенсвязывающий фрагмент (т.е. "антигенсвязывающую часть") или их отдельные цепи. Термин "антитело" означает гликопротеин, содержащий по меньшей мере две тяжелые цепи (Н) и две легкие цепи (L), соединенных между собой дисульфидными связями, или их антигенсвязывающую часть. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращенно обозначаемой здесь VH) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоят из трех доменов, СН 1, СН 2 и СН 3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (сокращенно обозначаемой здесь VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена CL. VH- и VLобласти могут быть также подразделены на гипервариабельные области, называемые комплементарность-определяющими областями (CDR) и чередующиеся с областями, которые являются более консервативными и называются каркасными областями (FR). Каждая VH- и VL-область состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2,CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен,который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (CIq) классической системы комплемента. Используемый здесь термин "антигенсвязывающая часть" антитела (или просто "часть антитела") означает один или несколько фрагментов антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, с PD-L1). Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может осуществляться фрагментами полноразмерного антитела. Примерами связывающих фрагментов,которые входят в определение термина "антигенсвязывающая часть" антитела, являются (i) Fabфрагмент, т.е. одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (ii) F(ab')2-фрагмент, т.е. двухвалентный фрагмент, состоящий из двух Fab-фрагментов, связанных в шарнирной области дисульфидным мостиком; (iii) Fd-фрагмент, состоящий из VH- и СН 1-доменов; (iv) Fv-фрагмент, состоящий из рый состоит из VH-домена; и (vi) изолированная гипервариабельная область (CDR). Кроме того, хотя указанные два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируются отдельными генами, однако, они могут быть присоединены друг к другу рекомбинантными методами посредством синтетического линкера, что позволяет получить эти фрагменты в виде одной белковой цепи, в которой пара VL- и VH-областей образует одновалентные молекулы (известные как одноцепочечный Fv (scFv); см., например, Bird et al. (1988),Science 242:423-426; и Huston et al. (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883). Такие одноцепочечные антитела также входят в определение термина "антигенсвязывающая часть" антитела. Указанные фрагменты антител получают стандартными методами, известными специалистам, и такие фрагменты скринируют на эффективность способом, аналогичным способу скрининга интактных антител. Используемый здесь термин "выделенное антитело" означает антитело, которое, по существу, не содержит других антител, обладающих другой антигенной специфичностью (например, выделенное антитело, специфически связывающееся с PD-L1, по существу, не содержит антител, которые специфически связываются с антигенами, отличающимися от PD-L1). Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с PD-L1, может обладать перекрестной реактивностью с другими антигенами,такими как молекулы PD-L1, происходящие от других видов. Кроме того, выделенное антитело может,по существу, не содержать другие клеточные вещества и/или химические вещества. Используемые здесь термины "моноклональное антитело" или "композиция моноклональных антител" означают препарат молекул антитела, имеющих один и тот же молекулярный состав. Композиция моноклональных антител имеет одну специфичность связывания и аффинность к конкретному эпитопу. Используемый здесь термин "человеческое антитело" означает антитела, имеющие вариабельные области, в которых каркасная и CDR-области происходят от последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Кроме того, если данное антитело содержит константную область, то такая константная область также происходит от последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Человеческие антитела согласно изобретению могут включать аминокислотные остатки, которые не кодируются последовательностями иммуноглобулина человеческой зародышевой линии (например, мутации, внесенные посредством неспецифического или сайт-специфического мутагенеза in vitro, или посредством соматической мутации in vivo). Однако используемый здесь термин "человеческое антитело" не включает в себя антитела, у которых в человеческие каркасные последовательности были введены последовательности CDR, происходящие от молекул зародышевой линии млекопитающих других видов, таких как мышь. Термин "человеческое моноклональное антитело" означает антитела, которые обладают одной специфичностью связывания и имеют вариабельные области, в которых каркасная область и CDR-области происходят от последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. В одном из вариантов изобретения указанные человеческие моноклональные антитела продуцируются гибридомами,которыми являются В-клетки, полученные от трансгенного животного, не являющегося человеком, например, от трансгенной мыши, имеющей геном, содержащей человеческий трансген тяжелой цепи и трансген легкой цепи, встроенный в иммортализованную клетку. Используемый здесь термин "рекомбинантное человеческое антитело" включает в себя все человеческие антитела, которые были получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными методами, такие как (а) антитела, выделенные у животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным по генам человеческого иммуноглобулина; или гибридомы, полученные от этих животных (подробно описанные ниже), (b) антитела, выделенные из клеток-хозяев, трансформированных так, чтобы они экспрессировали человеческое антитело, например, из клеток трансфектомы,(с) антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител, и (d) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими методами,включающими в себя сплайсинг последовательностей генов человеческого иммуноглобулина с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные области, в которых каркасная область и CDR-области происходят от последовательностей иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии. Однако в некоторых вариантах изобретения такие рекомбинантные человеческие антитела могут быть подвергнуты мутагенезу in vitro (или, в случае использования животного, трансгенного по последовательностям человеческих Ig, соматического мутагенеза in vivo), а поэтому, аминокислотные последовательности VH- и VL-областей рекомбинантных антител, несмотря на то,что они происходят от VH- и VL-последовательностей человеческой зародышевой линии и являются родственными таким последовательностям, могут отсутствовать в репертуаре антител человеческой зародышевой линии in vivo. Используемый здесь термин "изотип" означает класс антитела (например, IgM или IgG1), которое кодируется генами константной области тяжелой цепи. Используемые здесь термины "антитело, распознающее антиген" и "антитело, специфичное к антигену" являются синонимами термина "антитело, которое специфически связывается с антигеном". Термин "производные человеческого антитела" означает любую модифицированную форму человеческого антитела, например, конъюгат антитела с другим агентом или антителом. Термин "гуманизованное антитело" означает антитела, в которых последовательности CDR, проис- 12019344 ходящие от зародышевой линии млекопитающих других видов, таких как мышь, были введены в человеческие каркасные последовательности. В указанные человеческие каркасные последовательности могут быть внесены дополнительные модификации. Термин "химерное антитело" означает антитела, в которых последовательности вариабельной области происходят от животного одного вида, а последовательности константной области происходят от животных других видов, например, такие антитела, в которых последовательности вариабельной области происходят от мышиного антитела, а последовательности константной области происходят от человеческого антитела. Используемый здесь термин "антитело, которое специфически связывается с человеческим PD-L1" означает антитело, которое связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 110-7 M или менее,более предпочтительно 510-8 М или менее, еще более предпочтительно 110-8 M или менее, еще более предпочтительно 510-9 М или менее, а наиболее предпочтительно 110-8-110-10 М или менее. Используемый здесь термин "Kacc" или "Ka" означает скорость ассоциации конкретного взаимодействия "антитело-антиген", а используемый здесь термин "K дис" или "Kd" означает скорость диссоциации конкретного взаимодействия "антитело-антиген". Используемый здесь термин "KD" означает константу диссоциации, которую вычисляют исходя из отношения Kd к Ka (i.e., Kd/Ka) и выражают в виде молярной концентрации (М). Величины KD для антител могут быть определены методами, хорошо известными специалистам. Предпочтительным методом определения KD антитела является поверхностный плазменный резонанс, а предпочтительно метод с использованием биосенсорной системы, такой как системаBiacore. Используемый здесь термин "высокая аффинность" антитела IgG означает, что данное антитело связывается с антигеном-мишенью с KD, составляющей 10-8 М или менее, более предпочтительно 10-9 М или менее, а наиболее предпочтительно 10-10 М или менее. Однако "высокая аффинность" связывания для антител других изотипов может варьироваться. Так, например, "высокая аффинность" связывания антитела изотипа IgM означает связывание антитела с KD, составляющей 10-7 М или менее, более предпочтительно 10-8 М или менее, а наиболее предпочтительно 10-9 М или менее. Используемый здесь термин "индивид" включает в себя человека или любое животное, не являющееся человеком. Термин "животное, не являющееся человеком" включает в себя всех позвоночных, например, млекопитающих и немлекопитающих, таких как приматы, не являющиеся человеком, овцы, собаки, кошки, лошади, коровы, куры, амфибии, рептилии и т.п. Различные аспекты настоящего изобретения более подробно описаны в нижеследующих разделах. Анти-PD-L1-антитела. Антитела согласно изобретению отличаются по своим конкретным функциональным признакам или свойствам. Так, например, указанные антитела могут специфически связываться с человеческим PDL1. Предпочтительно антитело согласно изобретению связывается с PD-L1 с высокой аффинностью, например с KD, составляющей 110-7 M или менее. Анти-PD-L1-антитела согласно изобретению обладают по меньшей мере одним или несколькими свойствами, выбранными из следующих свойств:(b) способностью повышать уровень пролиферации Т-клеток в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов (РСКЛ);(c) способностью повышать уровень продуцирования интерферона- в анализе РСКЛ;(d) способностью повышать уровень секреции IL-2 в анализе РСКЛ;(e) способностью стимулировать гуморальный ответ; или(f) способностью блокировать действие регуляторных Т-клеток на эффекторные Т-клетки и/или дендритные клетки. Предпочтительно указанное антитело связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 510-8 М или менее, с KD, составляющей 110-8 М или менее, с KD, составляющей 510-9 М или менее, с KD,составляющей 410-9 М или менее, с KD, составляющей 210-9 М или менее или с KD, составляющей 110-9-110-10 M или менее. Стандартные анализы для оценки способности антител связываться с PD-L1 известны специалистам, включая, например, ELISA, вестерн-блот-анализ и РИА. Подходящие анализы подробно описаны в примерах. Кинетика связывания (например, аффинность связывания) антител может быть также оценена с помощью стандартных анализов, известных специалистам, таких как анализ Biacore. Моноклональные антитела 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4. Предпочтительными антителами согласно изобретению являются человеческие моноклональные антитела 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4, выделенные и структурно охарактеризованные, как описано в примерах 1 и 2. Аминокислотные последовательности VH антител 3G10,12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 соответственно. Аминокислотные последовательности VL антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10,1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20 соответственно. Принимая во внимание то, что каждое из этих антител может связываться с PD-L1, следует отметить, что последовательности VH и VL могут быть "смешаны и соответствующим образом подобраны" для создания других PD-L1-связывающих молекул антител согласно изобретению. Такие "смешанные и соответствующим образом подобранные" антитела, связывающиеся с PD-L1, могут быть протестированы с помощью анализов на связывание, описанных выше и в примерах (например, ELISA). При смешивании и подборе VH и VL-цепей предпочтительно, чтобы последовательность VH в конкретной паре VH/VL, была заменена структурно сходной последовательностью VH. Аналогичным образом, предпочтительно, чтобы последовательность VL в конкретной паре VH/VL была заменена структурно сходной последовательностью VL. В соответствии с этим в одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя:(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1, предпочтительно с человеческим PDL1. Предпочтительные комбинации тяжелой и легкой цепей включают в себя:(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO:20. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к антителам, содержащим CDR1, CDR2 иCDR3 тяжелой и легкой цепей антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 или их комбинации. Аминокислотные последовательности CDR1 VH антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10,1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30 соответст- 14019344 венно. Аминокислотные последовательности CDR2 VH антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12,7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR3 VH антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6,12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR1 VK антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR2 VK антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR3 VK антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4 представлены в SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80 соответственно. CDR-области пронумерованы по системе Кэбата (Kabat, E.A., et al. (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No 91-3242). Принимая во внимание тот факт, что каждое из указанных антител может связываться с PD-L1 и что специфичность связывания с антигеном обеспечивается, главным образом, областями CDR1, CDR2 иCDR3, то следует отметить, что последовательности областей CDR1, CDR2 и CDR3 VH и последовательности областей CDR1, CDR2 и CDR3 VK могут быть "смешаны и соответствующим образом подобраны"(т.е. CDR от различных антител могут быть смешаны и соответствующим образом подобраны, хотя каждое антитело должно содержать CDR1, CDR2 и CDR3 VH и CDR1, CDR2 и CDR3 VK) с получением других молекул антител, связывающихся с PD-L1, согласно изобретению. Связывание такие "смешанных и соответствующим образом подобранных" антител с PD-L1 может быть протестировано с помощью анализов на связывание, описанных выше и в примерах (например, анализов ELISA и Biacore). При смешивании и подборе последовательностей CDR VH предпочтительно, чтобы последовательности CDR1,CDR2 и/или CDR3 VH в конкретной последовательности VH были заменены структурно сходной(ыми) последовательностью(ями) CDR. Аналогичным образом, при смешивании и подборе последовательностей CDR VK, предпочтительно, чтобы последовательности CDR1, CDR2 и/или CDR3 VK в конкретной последовательности VK были заменены структурно сходной(ыми) последовательностью(ями) CDR. Среднему специалисту в данной области очевидно, что новые последовательности VH и VL могут быть получены путем замены одной или нескольких последовательностей области CDR VH и/или VL структурно сходными последовательностями, происходящими от последовательностей CDR, описанных в настоящей заявке для моноклональных антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 и 13G4. В соответствии с этим в другом своем аспекте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающей части, содержащим:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30;(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40;(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50;(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60;(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70;(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80; где указанное антитело специфически связывается с PD-L1, а предпочтительно с человеческим PDL1. В предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ IDNO:71. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательностьNO:72. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательностьNO:73. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательностьNO:74. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательностьNO:75. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательностьNO:76. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ IDNO:77. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ IDNO:78. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ IDNO:79. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело содержит:(a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ ID(f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающую в себя последовательность SEQ IDNO:80. Хорошо известно, что один домен CDR3, независимо от домена(ов) CDR1 и/или CDR2, может определять специфичность связывания антитела с когнатным антигеном, и что, как предполагается, на основе известной последовательности CDR3 может быть генерировано множество антител, обладающих одной и той же специфичностью связывания. См., например, публикацию Kliraka et al., British J. of Cancer 83 (2):252-260 (2000) (где описано продуцирование гуманизованного анти-CD30-антитела с использованием только CDR3 вариабельного домена тяжелой цепи мышиного анти-CD30-антитела Ki-4); публикацию Beiboer et al., J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000) (где описано продуцирование рекомбинантных антител против эпителиального гликопротеина-2 (EGP-2) с использованием только последовательностиCDR3 тяжелой цепи родительского мышиного анти-EGP-2-антитела МОС-31); публикацию Rader et al.,- 17019344Proc. Natl. Acad. Sci USA 95:8910-8915 (1998) (где описано продуцирование панели гуманизованных антител против интегрина v3 с использованием CDR3 вариабельного домена тяжелой и легкой цепей мышиного антитела против интегрина v3 LM609, где каждое из указанных антител содержит отличающуюся последовательность, находящуюся за пределами домена CDR3 и способную связываться с тем же эпитопом, с которым связывается родительское мышиное антитело, и с такой же аффинностью,как и родительское мышиное антитело, или с более высокой аффинностью); публикацию Barbas et al., J.Am. Chem. Soc. 116:2161-2162 (1994) (где описано, что домен CDR3 играет главную роль в связывании с антигеном); публикацию Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:2529-2533 (1995) (где описано встраивание последовательностей CDR3 тяжелой цепи трех Fab-фрагментов антитела (SI-1, SI-40 и SI-32) против ДНК человеческой плаценты в тяжелую цепь Fab-фрагмента против столбнячного токсоида, где указанное введение приводит к замене CDR3, присутствующего в тяжелой цепи, и указывает на то, что специфичность связывания определяется лишь одним доменом CDR3); и публикацию Ditzel et al., J. Immunol. 157:739-749 (1996) (где описаны исследования по встраиванию, которые показали, что перенос только одного домена CDR3 тяжелой цепи Fab родительского полиспецифического антитела LNA3 в тяжелую цепь Fab моноспецифического антитела IgG p313 против столбнячного токсоида был достаточным для сохранения специфичности связывания родительского Fab). Каждая из этих публикаций во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. В соответствии с этим, в некоторых своих аспектах, настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, содержащим один или несколько доменов CDR3 тяжелой и/или легкой цепей, происходящих от не-человеческого антитела, такого как мышиное или крысиное антитело, где указанное моноклональное антитело обладает способностью специфически связываться с PD-L1. В некоторых вариантах изобретения, такие антитела согласно изобретению, содержащие один или несколько доменовCDR3 тяжелой и/или легкой цепей, происходящих от не-человеческого антитела, (а) обладают способностью конкурировать за связывание с соответствующим родительским не-человеческим антителом; (b) сохраняют функциональные свойства указанного родительского антитела; (с) связываются с таким же эпитопом и/или (d) обладают такой же аффинностью связывания, как и соответствующее родительское не-человеческое антитело. В других своих аспектах настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, содержащим один или несколько доменов CDR3 тяжелой и/или легкой цепей, происходящих от первого человеческого антитела, такого как, например, человеческое антитело, выделенное у животного, не являющееся человеком, где указанное первое человеческое антитело обладает способностью специфически связываться с PD-L1, и где указанный домен CDR3 первого человеческого антитела заменяет доменCDR3 в человеческом антителе, которое не обладает способностью специфически связываться с PD-L1, в результате чего образуется второе человеческое антитело, обладающее способностью специфически связываться с PD-L1. В некоторых вариантах изобретения антитела согласно изобретению, содержащие один или несколько доменов CDR3 тяжелой и/или легкой цепей, происходящих от первого человеческого антитела, (а) обладают способностью конкурировать за связывание с соответствующим родительским первым человеческим антителом; (b) сохраняют функциональные свойства указанного родительского антитела; (с) связываются с таким же эпитопом и/или (d) обладают такой же аффинностью связывания,как и соответствующее родительское первое человеческое антитело. Антитела, имеющие конкретные последовательности зародышевой линии. В некоторых вариантах изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, происходящую от конкретного гена иммуноглобулина тяжелой цепи зародышевой линии и/или вариабельную область легкой цепи, происходящую от конкретного гена иммуноглобулина легкой цепи зародышевой линии. Так, например, в своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 1-18 или производным этого генного продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 1-69 или производным этого генного продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части,включающим в себя вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 1-3 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PDL1. В другом своем предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом человеческого гена VH 3-9 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK L6 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK L15 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK A27 или происходит от этого продукта,где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится также к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, включающим в себя вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом человеческого гена VK L18 или происходит от этого продукта, где указанное антитело специфически связывается с PD-L1. В еще одном своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, где указанное антитело:(a) содержит вариабельную область тяжелой цепи, которая является продуктом или происходит от продукта человеческого гена VH 1-18, 1-69, 1-3 или 3-9 (которые кодируют аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:101, 102, 103 и 104 соответственно);(b) содержит вариабельную область легкой цепи, которая является продуктом или происходит от продукта человеческого гена VK L6, L15, А 27 или L18 (которые кодируют аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:105, 106, 107 и 108 соответственно);VH и VK, кодируемых генами VH 3-9 и VK L18 соответственно, является 13G4. Используемое здесь человеческое антитело содержит вариабельные области тяжелой или легкой цепей, которые являются "продуктом" или "происходят от" конкретной последовательности зародышевой линии, если вариабельные области указанного антитела были получены из системы, в которой используются гены иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Такие системы включают иммунизацию трансгенной мыши, несущей гены человеческого иммуноглобулина, представляющим интерес антигеном, или скрининг библиотеки генов человеческого иммуноглобулина, представленных на фаге, с использованием представляющего интерес антигена. Человеческое антитело, которое является "продуктом" последовательности или "происходит от" последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, может быть идентифицировано путем сравнения аминокислотной последовательности человеческого антитела с аминокислотными последовательностями иммуноглобулиной человеческой зародышевой линии и отбора последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии,которая является наиболее сходной (т.е. имеет наибольший % идентичности) с последовательностью человеческого антитела. Человеческое антитело, которое является "продуктом" конкретной последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии или "происходит от" такой последовательности, может содержать аминокислоты, отличающиеся от аминокислот сравниваемой последовательности зародышевой линии, что обусловлено, например, природными соматическими мутациями или искусственным введением сайт-направленной мутации. Однако аминокислотная последовательность выбранного человеческого антитела обычно по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, и содержит аминокислотные остатки, которые позволяют идентифицировать данное антитело как человеческое антитело при его сравнении с аминокислотными последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии других видов (например, с последовательностями мышиной зародышевой линии). В некоторых случаях аминокислотная последовательность человеческого антитела может быть по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% идентичной аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии. В некоторых вариантах изобретения человеческое антитело, происходящее от конкретной последовательности человеческой зародышевой линии, имеет не более чем 10 аминокислот, отличающихся от аминокислот последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. В некоторых других вариантах изобретения, указанное человеческое антитело может иметь не более чем 5 или даже не более чем 4, 3, 2 или 1 аминокислоту, отличающихся от аминокислот последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Гомологичные антитела. В другом варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей, включающие в себя аминокислотные последовательности, гомологичные аминокислотным последовательностям описанных здесь предпочтительных антител, где указанные антитела сохраняют нужные функциональные свойства анти-PD-L1-антител согласно изобретению. Так, например, настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, содержащим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где:(a) указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,которая по меньшей мере на 80% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;(b) указанная вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность,которая по меньшей мере на 80% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20;(c) указанное антитело связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 110-7 M или менее;(d) указанное антитело повышает уровень пролиферации Т-клеток в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов (РСКЛ);(e) указанное антитело повышает уровень продуцирования интерферона- в анализе РСКЛ;(f) указанное антитело повышает уровень секреции IL-2 в анализе РСКЛ;(g) указанное антитело стимулирует вырабатывание гуморальных ответов;(h) указанное антитело блокирует действие регуляторных Т-клеток на эффекторные Т-клетки и/или на дендритные клетки. В других вариантах изобретения аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% гомологичны вышеуказанным последовательностям. Антитело, имеющее области VH и VL, являющиеся в высокой степени (т.е. на 80% или более) гомологичными областям VH иVL вышеуказанных последовательностей, могут быть получены путем мутагенеза (например, сайтнаправленного или ПЦР-опосредуемого мутагенеза) молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих последовательности SEQ ID NO:25, 26, 27, 28, 29 и 30, с последующим тестированием кодируемого модифицированного антитела на сохранение его функций (т.е. функций, указанных выше в пунктах (с)-(h с помощью описанных здесь функциональных анализов. Используемый здесь термин "процент гомологии двух аминокислотных последовательностей" эквивалентен термину "процент идентичности двух последовательностей". Процент идентичности двух последовательностей зависит от числа положений идентичных аминокислот у этих двух последовательностей (т.е. % гомологии =идентичных аминокислот в данных положениях/общее число положений 100) с учетом числа пробелов и длины каждого пробела, которые необходимо ввести для оптимального сопоставления двух последовательностей путем выравнивания. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности двух последовательностей может быть осуществлено с помощью математического алгоритма, описанного ниже в неограничивающих примерах. Процент идентичности двух аминокислотных последовательностей может быть определен с помощью алгоритма Е. Meyers и W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988, который был введен в программу ALIGN (version 2.0), с использованием таблицы "весов" остатков РАМ 120, штрафа на пробелудлинение =12, и штрафа на пробел-пропуск = 4. Кроме того, процент идентичности двух аминокислотных последовательностей может быть определен с помощью алгоритма Needleman и Wunsch (J. Mol.Biol. 48:444-453 (1970, который был введен в программу GAP, входящую в пакет программ GCG (доступных на сайте www.gcg.com), с использованием либо матрицы Blossum 62, либо матрицы РАМ 250 и"весов" пробелов-пропусков, составляющих 16, 14, 12, 10, 8, 6, или 4 и "весов" длин (участков), составляющих 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В некоторых случаях последовательности белка согласно изобретению могут быть также использованы в качестве "запрашиваемой последовательности" в целях поиска в общедоступных базах данных,например, для идентификации родственных последовательностей. Такой поиск может быть проведен с помощью программы XBLAST (version 2.0) Altschul, et al. (1990), J. Mol. Biol. 215:403-10. Поиск белковBLAST может быть осуществлен с помощью программы XBLAST, где при "весовом коэффициенте" = 50 и длине "слова" = 3, могут быть получены аминокислотные последовательности, гомологичные последовательностям молекул антител согласно изобретению. Для осуществления выравнивания с пробелами в целях сопоставления последовательностей может быть использована программа Gapped BLAST, описанная Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402. При работе с программами BLAST иGapped BLAST могут быть использованы параметры по умолчанию, установленные в соответствующих программах (например, XBLAST и NBLAST). См. www.ncbi.nlm.nih.gov. Антитела с консервативными модификациями. В некоторых вариантах изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, включающую в себя последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где один или несколько указанных последовательностей CDR имеют конкретные аминокислотные последовательности,полученные на основе последовательностей описанных здесь предпочтительных антител (например,3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4) или их консервативные модификации, и где указанные антитела сохраняют нужные функциональные свойства анти-PD-L1-антител согласно изобретению. В соответствии с этим настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя последовательность CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, включающую в себя последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где:(a) последовательность CDR3 вариабельной области тяжелое цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей(b) последовательность CDR3 вариабельной области легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID(c) указанное антитело связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 1107 M или менее;(d) указанное антитело повышает уровень пролиферации Т-клеток в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов (РСКЛ);(e) указанное антитело повышает уровень продуцирования интерферона- в анализе РСКЛ;(f) указанное антитело повышает уровень секреции IL-2 в анализе РСКЛ;(g) указанное антитело стимулирует вырабатывание гуморальных ответов;(h) указанное антитело блокирует действие регуляторных Т-клеток на эффекторные Т-клетки и/или дендритные клетки. В предпочтительном варианте изобретения указанная последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40 и их консервативных модификаций; а последовательность CDR2 вариабельной области легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70 и их консервативных модификаций. В другом предпочтительном варианте изобретения, указанная последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30 и их консервативных модификаций; а последовательность CDR1 вариабельной области легкой цепи включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60 и их консервативных модификаций. Используемый здесь термин "консервативные модификации последовательности" означает аминокислотные модификации, которые не оказывают значительного воздействия или влияния на связывающие свойства антитела, содержащего аминокислотную последовательность. Такими консервативными модификациями являются аминокислотные замены, добавления и делеции. Модификации могут быть введены в антитело согласно изобретению стандартными методами, известными специалистам, такими как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредуемый мутагенез. Консервативными аминокислотными заменами являются замены, в которых данный аминокислотный остаток заменен аминокислотным остатком, имеющим аналогичную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков, имеющих аналогичные боковые цепи, известны специалистам. Такие семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), аминокислоты с кислотными боковыми цепями(например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота); аминокислоты с незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан); аминокислоты с неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин,пролин, фенилаланин, метионин); аминокислоты с бета-разветвленными боковыми цепями (например,треонин, валин, изолейцин) и аминокислоты с ароматическими боковыми цепями (например, тирозин,фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или несколько аминокислотных остатков в областях CDR антитела согласно изобретению могут быть заменены другими аминокислотными остатками, принадлежащими к семейству аминокислотных остатков, имеющих аналогичные боковые цепи, и такое модифицированное антитело может быть протестировано на сохранение его функций (т.е. функций, указанных выше в пунктах (с)-(h с помощью описанных здесь функциональных анализов. Антитела, которые связываются с таким же эпитопом, как и анти-PD-L1-антитела согласно изобретению. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к антителам, которые связываются с та- 21019344 ким же эпитопом на человеческом PD-L1, как и анти-PD-L1-антитела согласно изобретению (т.е. антитела, которые обладают способностью конкурировать с любым из моноклональных антител согласно изобретению за перекрестное связывание с PD-L1). В предпочтительных вариантах изобретения эталонным антителом, используемым в исследованиях на конкуренцию за перекрестное связывание, может быть моноклональное антитело 3G10 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:1 и 11 соответственно), или моноклональное антитело 12 А 4 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:2 и 12 соответственно), или моноклональное антитело 10 А 5 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:3 и 13 соответственно), или моноклональное антитело 5F8 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:4 и 14, соответственно),или моноклональное антитело 10 Н 10 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ IDNO:5 и 15 соответственно), или моноклональное антитело 1 В 12 (имеющее последовательности VH и VL,представленные в SEQ ID NO:6 и 16 соответственно), или моноклональное антитело 7 Н 1 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:7 и 17 соответственно), или моноклональное антитело 11 Е 6 (имеющее последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:8 и 18 соответственно), или моноклональное антитело 12 В 7 (имеющее последовательности VH и VL, представленные вSEQ ID NO:9 и 19 соответственно) или моноклональное антитело 13G4 (имеющее последовательностиVH и VL, представленные в SEQ ID NO:10 и 20 соответственно). Такие конкурирующие за перекрестное связывание антитела могут быть идентифицированы по их способности конкурировать за перекрестное связывание с 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4 в стандартных анализах на связывание с PD-L1. Так, например, анализ BIAcore, анализ ELISA или проточный цитометрический анализ могут быть использованы для иллюстрации конкуренции за перекрестное связывание с антителами согласно изобретению. Способность тестируемого антитела ингибировать связывание, например,3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4 с человеческим PD-L1 продемонстрировала, что тестируемое антитело может конкурировать с антителами 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12,7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4 за связывание с человеческим PD-L1, а поэтому оно связывается с тем же эпитопом на человеческом PD-L1, с которым связываются антитела 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12,7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4. В предпочтительном варианте изобретения антитело, которое связывается с тем же эпитопом на человеческом PD-L1, с которым связываются антитела 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8,10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4, представляет собой человеческое моноклональное антитело. Такие человеческие моноклональные антитела могут быть получены и выделены, как описано в примерах. Сконструированные и модифицированные антитела. Антитело согласно изобретению может быть также получено с использованием антитела, имеющего одну или несколько описанных здесь последовательностей VH и/или VL в качестве исходного материала для конструирования модифицированного антитела, где указанное модифицированное антитело может обладать свойствами, отличающимися от свойств исходного антитела. Антитело может быть сконструировано путем модификации одного или нескольких остатков в одной или обеих вариабельных областях (т.е. VH и/или VL), например, в одной или нескольких областях CDR и/или в одной или нескольких каркасных областях. Дополнительно или альтернативно, антитело может быть сконструировано путем модификации остатков в константной(ых) области(ях), например, в целях изменения эффекторной(ых) функции(й) указанного антитела. Одним из подходящих методов конструирования вариабельных областей является присоединениеCDR. Антитела взаимодействуют с антигеном-мишенью преимущественно посредством аминокислотных остатков, которые локализованы в шести гипервариабельных областях (CDR) тяжелой и легкой цепей. По этой причине аминокислотные последовательности CDR в отдельных антителах имеют большие отличия, чем последовательности, расположенные за пределами этих CDR. Поскольку последовательности CDR являются ответственными за большинство взаимодействий антитело-антиген, то могут быть экспрессированы рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства конкретных природных антител, путем конструирования экспрессирующих векторов, включающих в себя последовательности CDR,происходящие от специфических природных антител, присоединенных к каркасным последовательностям другого антитела с другими свойствами (см., например, Riechmann, L. et al. (1998), Nature 332:323327; Jones, P. et al. (1986), Nature 321:522-525; Queen, С. et al. (1989), Proc. Natl. Acad. See. USA 86:1002910033; патент США 5225539, Winter и патенты США 5530101, 5585089, 5693762 и 6180370, Queen etal.). В соответствии с этим в другом своем варианте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающей части, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, включающую в себя последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30, SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40 и SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50 соответственно, и вариабельную область легкой цепи, включающую в себя последовательности CDR1,CDR2 и CDR3, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей изNO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80 соответственно. Таким образом, указанные антитела содержат последовательности CDR VH и VL моноклональных антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1,11 Е 6, 12 В 7 или 13G4, а также они могут содержать различные каркасные последовательности этих антител. Такие каркасные последовательности могут быть получены из общедоступных баз данных ДНК или известных последовательностей, которые включают последовательности генов антител зародышевой линии. Так, например, последовательности ДНК зародышевой линии, включающие в себя гены вариабельной области человеческой тяжелой и легкой цепей, можно найти в базе данных последовательностей человеческой зародышевой линии "VBase" (доступной в Интернете на сайте www.mrccpe.cam.ас.uk/vbase), а также в публикациях Kabat, E.A., et al. (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health и Human Services, NIH Publication No 91-3242;Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage". Eur. J. Immunol. 24:827836; содержание которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Белковые последовательности антитела сравнивали с последовательностями белков, имеющихся в компилированной базе данных, с применением методов поиска сходства последовательностей, называемых Gapped BLAST (Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Research 25:3389-3402), которые хорошо известны специалистам. BLAST представляет собой эвристический алгоритм, в котором при статистически значимом сопоставлении путем выравнивания последовательности антитела с последовательностью базы данных, выравниваемые "слова", вероятно, содержат пары сегментов с высокими "весовыми коэффициентами" (HSP). Пары сегментов, "весовые коэффициенты" которых не могут быть улучшены путем удлинения или усечения, называются "наилучшими совпадениями". Вкратце, нуклеотидные последовательности в начале последовательности VBASE (vbase.mrc-cpe.cam.ас.uk/vbasel/list2.php) были транслированы, а область между каркасными областями FR1-FR3, включительно, сохранялась. Последовательности базы данных имеют среднюю длину в 98 остатков. Дубликаты последовательностей, которые имеют точные соответстветствия всей длине белка, были удалены. Поиск белков в BLAST, проводимый с использованием blastp со стандартными параметрами по умолчанию, за исключением "фильтра" для последовательностей низкой сложности, который был "отключен", и матрицы замен BLOSUM62, выявил 5 наилучших совпадений с получением пар сходных последовательностей. Эти нуклеотидные последовательности транслировали во всех шести рамках считывания, и рамка считывания без стоп-кодонов в сегменте соответствующей последовательности базы данных рассматривалась как последовательность,имеющая, по всей вероятности, наилучшее совпадение. Это, в свою очередь, было подтверждено с помощью программы tblastx, входящей в пакет BLAST. Эта программа позволяет транслировать последовательности антитела во всех шести рамках считывания и сравнивать эти транслированные последовательности с нуклеотидными последовательностями VBASE, динамически транслируемыми во всех шести рамках считывания. Идентичность представляет собой точные соответствия между последовательностью антитела и последовательностью белка в базе данных на протяжении всей длины данной последовательности. Положительные "веса" (идентичность + соответствие замен) означают лишь идентичности аминокислотных замен, присваиваемых матрицей замен BLOSUM62. Если последовательность антитела соответствует двум последовательностям в базе данных с той же степенью идентичности, то совпадение с наибольшим положительным "весом" должно рассматриваться как наилучшее совпадение последовательностей. Предпочтительными каркасными последовательностями, которые могут быть использованы в антителах согласно изобретению, являются последовательности, которые имеют структурное сходство с каркасными последовательностями, используемыми в выбранных антителах согласно изобретению, например, имеет сходство с каркасными последовательностями VH 1-18 (SEQ ID NO:101), и/или каркасными последовательностями VH 1-69 (SEQ ID NO:102), и/или каркасными последовательностями VH 1-3 (SEQNO:106), и/или каркасными последовательностями VK A27 (SEQ ID NO:107), и/или каркасными последовательностями VK L18 (SEQ ID NO:107), используемым в предпочтительных моноклональных антителах согласно изобретению. Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH и последовательности CDR1,CDR2 и CDR3 VK могут быть присоединены к каркасным областям, идентичным последовательностям,обнаруженным в гене иммуноглобулина зародышевой линии, от которого происходит данная каркасная последовательность, либо последовательности CDR могут быть присоединены к каркасным областям,содержащим одну или несколько мутаций по сравнению с последовательностями зародышевой линии. Так, например, было обнаружено, что в некоторых случаях может оказаться предпочтительным введение мутаций в положения остатков в каркасных областях в целях сохранения или усиления антигенсвязывающей способности антитела (см., например, патенты США 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370,Queen et al.). Модификация вариабельной области другого типа представляет собой мутацию аминокислотных остатков в областях CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH и/или VK, которую вводят в целях улучшения одного или нескольких связывающих свойств (например, аффинности) представляющего интерес антитела. Сайт-направленный мутагенез или ПЦР-опосредованный мутагенез может быть проведен для введения мутации(й), и их влияние на связывание антитела или другое представляющее интерес функциональное свойство может быть оценено в in vitro или in vivo анализах, описанных выше и в примерах. Предпочтительными являются консервативные модификации (обсуждаемые выше). Такими мутациями могут быть аминокислотные замены, добавления или делеции, однако предпочтительными являются замены. Кроме того, обычно в область CDR вводят не более чем одну, две, три, четыре или пять модификаций остатков. В соответствии с этим в другом своем варианте настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам против PD-L1 или к их антигенсвязывающим частям, включающим в себя вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (а) область CDR1 VH, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27,28, 29 и 30, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO:21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и 30; (b) область CDR2 VH, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40; (с) область CDR3 VH, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45,46, 47, 48, 49 и 50, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48,49 и 50; (d) область CDR1 VK, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60; (е) область CDR2 VK, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65,66, 67, 68, 69 и 70, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68,69 и 70; и (f) область CDR3 VK, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO:71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 и 80. Сконструированными антителами согласно изобретению являются антитела, у которых в VH и/или в VK были сделаны модификации каркасных остатков в целях улучшения свойств данного антитела. Обычно, такие модификации в каркасных областях вводят в целях снижения иммуногенности антитела. Так, например, одним из методов является введение "обратной мутации" одного или нескольких каркасных остатков в соответствующую последовательность зародышевой линии. Более конкретно, антитело,которое было подвергнуто соматической мутации, может содержать каркасные остатки, отличающиеся от остатков последовательности зародышевой линии, от которой происходит данное антитело. Такие остатки могут быть идентифицированы путем сравнения каркасных последовательностей антитела с последовательностями зародышевой линии, от которых происходит данное антитело. Так, например, как описано ниже, в каркасные области анти-PD-L1-антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6,12 В 7 и 13G4 был введен ряд аминокислотных замен, а поэтому последовательности этих областей отличаются от последовательностей родительской зародышевой линии. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, соматические мутации могут быть подвергнуты "обратной мутации" с получением последовательности зародышевой линии, например, посредством сайт-направленного мутагенеза или ПЦР-опосредуемого мутагенеза. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 3G10 с последовательностью VH 1-18 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 11. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 12 А 4 с последовательностью VH 1-69 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 12. Сопоставление путем выравнивания последовательностиVH-области антитела 10 А 5 с последовательностью VH 1-3 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 13. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 5F8 с последовательностью VH 1-69 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 14. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 10 Н 10 с последовательностью VH 3-9 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 15. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 1 В 12 с последовательностью VH 1-69 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 16. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 7 Н 1 с последовательностью VH 1-69 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 17. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 11 Е 6 с последовательностью VH 1-69 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 18. Сопоставление путем выравнивания последовательности VH-области антитела 12 В 7 с последовательностью VH 1-69 родительской за- 24019344 родышевой линии представлено на фиг. 19. Сопоставление путем выравнивания последовательности VHобласти антитела 13G4 с последовательностью VH-9 родительской зародышевой линии представлено на фиг. 20. Так, например, в 3G10, аминокислотным остатком 79 (в FR3) VH является валин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-18 зародышевой линии является аланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, соматические мутации могут быть подвергнуты "обратной мутации" с получением последовательности зародышевой линии, например, посредством сайт-направленного мутагенеза или ПЦРопосредуемого мутагенеза (например, остаток 79 (остаток 13 в FR3) в VH антитела 3G10 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены валина на аланин). В другом примере, для 12 А 4, аминокислотным остатком 24 (в FR1) VH является треонин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является аланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 24 в VH антитела 12 А 4 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены треонина на аланин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 12 А 4, аминокислотным остатком 27 (в FR1) VH является аспарагиновая кислота, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является глицин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 27 в VH антитела 12 А 4 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены аспарагиновой кислоты на глицин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 12 А 4, аминокислотным остатком 95 (в FR3) VH является фенилаланин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является тирозин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 95 (остаток 29 в FR3) в VH антитела 12 А 4 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены фенилаланина на тирозин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 5F8, аминокислотным остатком 24 (в FR1) является валин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является аланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 24 в VH антитела 5F8 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены валина на аланин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 5F8, аминокислотным остатком 28 (в FR1) является изолейцин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является треонин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 28 в VH антитела 5F8 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены изолейцина на треонин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 10 Н 10, аминокислотным остатком 24 (в FR1) является валин, а соответствующим остатком в последовательности VH 3-9 зародышевой линии является аланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 24 в VH антитела 10 Н 10 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены валина на аланин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 10 Н 10, аминокислота может быть введена за аминокислотным остатком 97(в FR3). Такой аминокислотой является валин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, аминокислота, введенная за остатком 97 в VH антитела 10 Н 10, может быть подвергнута "обратной мутации" с удалением валина. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 1 В 12, аминокислотным остатком 24 (в FR1) является треонин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является аланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 24 в VH антитела 1 В 12 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены треонина на аланин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 1 В 12, аминокислотным остатком 27 (в FR1) является аспарагиновая кислота, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является глицин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 27 в VH антитела 1 В 12 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены аспарагиновой кислоты на глицин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 1 В 12, аминокислотным остатком 95 (в FR3) является фенилаланин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является тирозин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 95 (остаток 29 в FR3) в VH антитела 1 В 12 может быть подвергнут"обратной мутации" путем замены фенилаланина на тирозин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 7 Н 1, аминокислотным остатком 24 (в FR1) является треонин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является аланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 24 в VH антитела 7 Н 1 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены треонина на аланин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 7 Н 1, аминокислотным остатком 77 (в FR3) является треонин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является серин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 72 (остаток 11 в FR3) в VH антитела 7 Н 1 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены треонина на серин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 11 Е 6, аминокислотным остатком 78 (в FR3) является аланин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является треонин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 78 (остаток 12 в FR3) в VH антитела 11 Е 6 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены аланина на треонин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 12 В 7, аминокислотным остатком 13 (в FR1) является глутаминовая кислота, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является лизин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 13 в VH антитела 12 В 7 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены глутаминовой кислоты на лизин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 12 В 7, аминокислотным остатком 30 (в FR1) является аспарагин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является серин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 30 в VH антитела 12 В 7 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены аспарагина на серин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 12 В 7, аминокислотным остатком 77 (в FR3) является аспарагин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является серин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 377 (остаток 11 в FR3) в VH антитела 12 В 7 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены аспарагина на серин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 12 В 7, аминокислотным остатком 82 (в FR3) является аспарагиновая кислота, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является глутаминовая кислота. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 82 (остаток 16 в FR3) в VH антитела 12 В 7 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены аспарагиновой кислоты на глутаминовую кислоту. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. В другом примере, для 13G4, аминокислотным остатком 27 (в FR1) является изолейцин, а соответствующим остатком в последовательности VH 1-69 зародышевой линии является фенилаланин. Для возвращения последовательностям каркасной области конфигураций, которые они имели в исходной зародышевой линии, например, остаток 27 в VH антитела 13G4 может быть подвергнут "обратной мутации" путем замены изолейцина на фенилаланин. Такие антитела с "обратными мутациями" также входят в объем настоящего изобретения. Модификация каркасной области другого типа включает в себя мутацию одного или нескольких остатков в каркасной области или даже в одной или нескольких областях CDR, вводимую в целях удаления Т-клеточных эпитопов для снижения потенциальной иммуногенности антитела. Этот метод также называется "деиммунизацией" и подробно описан в публикации заявки на патент США 2003/0153043, Carret al. Помимо модификаций или в качестве альтернативы модификациям, вводимым в каркасные области или в области CDR, антитела согласно изобретению могут быть сконструированы так, чтобы они имели модификации в Fc-области, которые обычно приводят к изменению одного или нескольких функциональных свойств данного антитела, таких как время полужизни в сыворотке, фиксация комплемента, связывание с Fc-рецептором и/или антиген-зависимая клеточная цитотоксичность. Кроме того, антитело согласно изобретению может быть химически модифицировано (например, к такому антителу могут быть присоединены одна или несколько химических групп) или оно может быть модифицировано для изменения уровней его гликозилирования, которое также осуществляют в целях изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела. Каждый из этих вариантов изобртения более подробно описан ниже. Остатки в Fc-области пронумерованы в соответствии с Европейской нумерацией по Кэбату. В одном из вариантов изобретения шарнирную область СН 1 модифицируют с изменением числа цистеиновых остатков в этой области, например, для их увеличения или снижения. Этот метод подробно описан в патенте США 5677425, Bodmer et al. Число цистеиновых остатков в шарнирной области СН 1 изменяют, например, для облегчения сборки легкой и тяжелой цепей или для повышения или снижения стабильности антитела. В другом варианте изобретения шарнирную область Fc антитела подвергают мутации для уменьшения биологического времени полужизни данного антитела. Более конкретно, одну или несколько аминокислотных мутаций вводят в область стыка доменов СН 2-СН 3 шарнирного Fc-фрагмента, для того,чтобы данное антитело обладало нарушенной способностью связываться со стафиллококковым белком A(SpA) по сравнению со способностью к связыванию нативной шарнирной области Fc-фрагмента с SpA. Этот метод подробно описан в патенте США 6165745, Ward et al. В другом варианте изобретения указанное антитело модифицируют в целях увеличения его биологического времени полужизни. Для этого могут быть применены различные методы. Так, например, могут быть введены одна или несколько из нижеследующих мутаций: T252L, T254S, T256F, как описано в патенте США 6277375, Ward. Альтернативно, для увеличения биологического времени полужизни,указанное антитело может быть модифицировано в области СН 1 или CL, так, чтобы оно содержало эпитоп связывания с рецептором "спасения", происходящий от двух "петель" домена СН 2 в Fc-области IgG,как описано в патентах США Ns. 5869046 и 6121022, Presta et al. В других вариантах изобретения Fc-область модифицируют путем замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка другим аминокислотным остатком в целях изменения эффекторной(ых) функции(й) антитела. Так, например, одна или несколько аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 и 322, могут быть заменены другим аминокислотным остатком так,чтобы данная замена приводила к изменению аффинности данного антитела по отношению к эффекторному лиганду, но с сохранением антигенсвязывающей способности родительского антитела. Эффекторным лигандом, по отношению к которому может быть изменена аффинность антитела, может быть, например, Fc-рецептор или компонент Cl комплемента. Этот метод подробно описан в патентах США 5624821 и 5648260, Winter et al. В другом примере одна или несколько аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 329,331 и 322, могут быть заменены другими аминокислотными остатками, так, чтобы данная замена приводила к изменению способности данного антитела связываться с CIq и/или к снижению или устранению комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). Этот метод подробно описан в патенте США No. 6194551, Idusogie et al. В другом примере один или несколько аминокислотных остатков в положениях аминокислот 231 и 239 модифицируют в целях изменения способности антитела к фиксации комплемента. Этот метод подробно описан в публикации заявки РСТ WO 94/29351, Bodmer et al. В еще одном примере Fc-область модифицируют в целях повышения способности антитела опосредовать антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и/или в целях повышения аффинности данного антитела к Fc-рецептору путем модификации одной или нескольких аминокислот в следующих положениях: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283,285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327,329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434,435, 437, 438 или 439. Этот метод подробно описан в публикации заявки РСТ WO 00/42072, Presta. Кроме того, сайты связывания на человеческих IgGI для FcRI, FcRII, FcRIII и FcRn были картированы, и были описаны варианты с улучшенной способностью к связыванию (см. Shields, R.L. et al. (2001), J. Biol.Chem. 276:6591-6604). Было показано, что специфические мутации в положениях 256, 290, 298, 333, 334 и 339 приводят к повышению уровня связывания с FcRIII. Кроме того, было показано, что нижеследующие комбинации мутаций: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A и S298A/E333A/K334A приводят к повышению уровня связывания с FcRIII. В еще одном варианте изобретения рассматриваются изменения уровня гликозилирования антитела. Так, например, может быть получено негликозилированное антитело (т.е. антитело, не содержащее гликозильных групп). Уровень гликозилирования может быть, например, изменен в целях повышения аффинности данного антитела к антигену. Такие углеводные модификации могут быть осуществлены,- 27019344 например, путем введения изменений в один или несколько сайтов гликозилирования в последовательности антитела. Так, например, могут быть введены одна или несколько аминокислотных замен, приводящих к элиминации одного или нескольких сайтов гликозилирования каркасного участка вариабельной области и, тем самым, к удалению гликозильных групп в данном сайте. Такое агликозилирование может приводить к повышению аффинности антитело по отношению к антигену. Этот метод был подробно описан в патентах США 5714350 и 6350861, Со et al. В некоторых других вариантах изобретения может быть получено антитело, имеющее измененный тип гликозилирования, такое как гипофукозилированное антитело, имеющее пониженное количество фукозильных остатков, или антитело, имеющее большое число групп GlcNac, расщепляющихся между двумя остатками. Было продемонстрировано, что такое изменение характера гликозилирования будет приводить к повышению ADCC-активности антитела. Указанные углеводные модификации могут быть осуществлены, например, путем экспрессии антитела в клетке-хозяине с измененным характером гликозилирования. Клетки с измененным характером гликозилирования описаны в литературе и могут быть использованы в качестве клеток-хозяев, в которых экспрессируются рекомбинантные антитела согласно изобретению и, тем самым, продуцируются антитела с измененным характером гликозилирования. Так,например, в клеточных линиях Ms704, Ms705 и Ms709 отсутствует ген фукозилтрансферазы, FUT8 (альфа-(1,6)-фукозилтрансферазы), а поэтому антитела, экспрессируемые в клеточных линиях Ms704, Ms705 и Ms709 не содержат фукозу в своих углеводах. FUT8-/клеточные линии Ms704, Ms705 и Ms709 были созданы путем направленной дизрупции гена FUT8 в клетках CHO/DG44 с использованием двух векторов замещения (см. публикацию патента США 20040110704, Yamane et al. и публикацию YamaneOhnuki et al. (2004), Biotechnol. Bioeng. 87:614-22). В качестве другого примера в ЕР 1176195, Hanai et al. описана клеточная линия с функционально инактивированным геном FUT8, который кодирует фукозилтрансферазу, а поэтому антитела, экспрессируемые в такой клеточной линии обнаруживают гипофукозилирование в результате снижения уровня фермента с альфа-1,6-связью или его элиминации. В работеHanai и др. также описаны клеточные линии, которые обладают низкой ферментативной активностью в отношении присоединения фукозы к N-ацетилглюкозамину, связывающемуся с Fc-областью антитела,или не обладают такой ферментативной активностью, например, клеточная линия крысиной миеломыYB2/0 (АТСС CRL 1662). В публикации заявки РСТ WO 03/035835, Presta, описан вариант клеточной линии СНО, а именно клетки Lec 13, которые обладают пониженной способностью присоединять фукозу к Asn(297)-связанным углеводам, что также приводит к гипофукозилированию антител, экспрессирующихся в данной клетке-хозяине (см. также Shields, R.L. et al. (2002), J. Biol. Chem. 277:26733-26740). В публикации заявки PCT WO 99/54342, Umana et al. описаны клеточные линии, сконструированные в целях экспрессии гликопротеин-модифицирующих гликозилтрансфераз (например, бета(1,4)-Nацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII, в результате чего антитела, экспрессируемые в сконструированных клеточных линиях, будут иметь большое число групп GlcNac, расщепляющихся между двумя остатками, что будет приводить к повышению ADCC-активности этих антител (см. также Umanaet al. (1999), Nat. Biotech. 17:176-180). Альтернативно, фукозные остатки антитела могут быть отщеплены под действием фермента фукозидазы. Так, например, альфа-L-фукозидаза удаляет фукозильные остатки из антител (Tarentino, A.L. et al. (1975), Biochem. 14:5516-23). Другой модификацией описанных здесь антител, рассматриваемой в настоящем изобретении, является ПЭГилирование. Антитело может быть ПЭГилировано, например, в целях увеличения биологического времени полужизни антитела (например, в сыворотке). Для ПЭГилирования антител указанное антитело или его фрагмент обычно подвергают реакции с полиэтиленгликолем (ПЭГ), таким как реакционноспособное сложноэфирное или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, при которых одна или несколько групп ПЭГ присоединяются к антителу или к его фрагменту. Предпочтительно ПЭГилирование осуществляют посредством реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой ПЭГ (или с аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). Используемый здесь термин "полиэтиленгликоль" охватывает любые формы ПЭГ, которые были использованы для дериватизации других белков, такие как моно(С 1-С 10)алкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или полиэтиленгликоль-малеимид. В некоторых вариантах изобретения ПЭГилируемым антителом является агликозилированное антитело. Методы ПЭГилирования белков известны специалистам и могут быть применены к антителам согласно изобретению. См., например, ЕР 0154316, Nishimura et al. и ЕР 0401384,Ishikawa et al. Методы конструирования антител. Как обсуждалось выше, анти-PD-L1-антитела, имеющие описанные здесь последовательности VH иVK, могут быть использованы для создания новых анти-PD-L1-антител путем модификации последовательностей VH и/или VK или присоединенной(ых) к ним константной(ых) области(ей). Таким образом, в другом аспекте изобретения, структурные особенности анти-PD-L1-антитела согласно изобретению, например, 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4, используются для создания структурно родственных анти-PD-L1-антител, которые сохраняют по меньшей мере одно функциональное свойство антител согласно изобретению, такое как связывание с человеческим PD-L1. Так, например,одна или несколько областей CDR антител 3G10, 12 А 4, 10 А 5, 5F8, 10 Н 10, 1 В 12, 7 Н 1, 11 Е 6, 12 В 7 или 13G4 или их мутантов могут быть объединены рекомбинантными методами с известными каркасными областями и/или с другими CDR с получением дополнительных рекомбинантно сконструированных анти-PD-L1-антител согласно изобретению, обсуждаемых выше. Модификациями других типов являются модификации, описанные в предыдущем разделе. Исходным материалом для такого метода конструирования являются одна или несколько из описанных здесь последовательностей VH и/или VK или одна или несколько их CDR-областей. Для создания сконструированного антитела, фактически, необязательно получать (т.е. экспрессировать в виде белка) антитело, имеющее одну или несколько рассматриваемых здесь последовательностей VH и/или VK или одну или несколько их CDR-областей. Точнее, информация,содержащаяся в указанной(ых) последовательности(ях), используется в качестве исходного материала для создания последовательности(ей) "второй генерации", происходящей(их) от исходной(ых) последовательности(ей), с последующим получение последовательности(ей) "второй генерации" и их экспрессии в виде белка. В соответствии с этим в другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу получения анти-PD-L1-антитела, включающему в себя:(a) создание антитела, имеющего (i) последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела, включающую в себя последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDSEQ ID NO:31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40; и/или последовательность CDR3, выбранную из группы,состоящей из SEQ ID NO:41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50; и/или (ii) последовательность вариабельной области легкой цепи антитела, включающую в себя последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 и 60, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70, и/или последовательность(b) модификацию по меньшей мере одного аминокислотного остатка в последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела, и/или в последовательности вариабельной области легкой цепи антитела, в целях создания по меньшей мере одной модифицированной последовательности антитела;(c) экспрессию указанной модифицированной последовательности антитела в виде белка. Для получения и экспрессии модифицированной последовательности антитела могут быть применены стандартные методы молекулярной биологии. Предпочтительным антителом, кодируемым модифицированной(ыми) генныой(ыми) последовательностью(ями) антител, является антитело, которое сохраняет одно, несколько или все функциональные свойства описанных здесь анти-PD-L1-антител, где такими функциональными свойствами являются,но не ограничиваются ими:(ii) повышение уровня пролиферации Т-клеток в анализе реакций в смешанной культуре лимфоцитов (РСКЛ);(iii) повышение уровня продуцирования интерферона- в анализе РСКЛ;(iv) повышение уровня секреции IL-2 в анализе РСКЛ;(vi) блокирование действия регуляторных Т-клеток на эффекторные Т-клетки и/или дендритные клетки. Функциональные свойства модифицированных антител могут быть оценены с помощью стандартных анализов, известных специалистам и/или описанных в настоящем патенте, таких как анализы, описанные в примерах (например, анализы с применением проточной цитометрии, анализы на связывание). В некоторых вариантах методов конструирования антител согласно изобретению в полноразмерную последовательность, кодирующую анти-PD-L1-антитело, или в ее часть могут быть введены неспецифические или специфические мутации, и полученные модифицированные анти-PD-L1-антитела могут быть скринированы на активность связывания и/или другие описанные здесь функциональные свойства. Методы введения мутаций описаны в литературе. Так, например, в публикации заявки РСТWO 02/092780, Short, описаны методы создания и скрининга мутированных антител с применением сайтнасыщенного мутагенеза, синтетической сборки путем лигирования или их комбинаций. Альтернативно,в публикации РСТ WO 03/074679, Lazar et al., описаны компьютизированные методы скрининга для оптимизации физико-химических свойств антител. Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела согласно изобретению. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим антитела согласно изобретению. Такие нуклеиновые кислоты могут присутствовать в целых клетках, в клеточных лизатах или в частично очищенной или, по существу, в чистой форме. Нуклеиновая кислота является "выделенной" или "по существу, чистой", если она очищена от других клеточных компонентов или других примесей, например, от других клеточных нуклеиновых кислот или белков, стандартными методами, включая обработку щелочью/ДСН, центрифугирование в градиенте плотности CsCl,колоночную хроматографию, электрофорез на агарозном геле и другие методы, хорошо известные спе- 29