Композиция, содержащая сиалированные молекулы ctla4-ig, и ее применение

КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ СИАЛИРОВАННЫЕ МОЛЕКУЛЫ CTLA4-Ig, И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ Изобретение раскрывает композиции, содержащие сиалированные молекулы CTLA4-Ig, и их применение. Предпосылки создания изобретения Антиген 4 цититотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4) - член суперсемейства иммуноглобулинов является молекулой, экспрессируемой на активированных Т-лимфоцитах. CTLA4 схож с молекулой костимулятора Т-лимфоцитов CD28, при этом обе молекулы связываются с В 7-1 (CD80) и В 7-2 (CD86) на антигенпредставляющих клетках (АПК). Однако CTLA4 передает Т-лимфоцитам ингибиторный сигнал,а CD28 передает стимуляторный сигнал. Молекулы CTLA4-Ig являются составными белками, которые включают домен антигена 4 цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4), связывающего лиганды, и постоянного участка тяжелой цепи иммуноглобулинов. Эта растворимая молекула оказывает физиологическое действие, связываясь с антигенами В 7 (CD80 и CD86) на поверхности различных антигенпредставляющих клеток (АПК), таким образом,блокируя функциональное взаимодействие В 7-1 и В 7-2 с CD28 на поверхности Т-лимфоцитов. Такая блокада приводит к подавлению активации Т-лимфоцитов и, следовательно, подавлению иммунного ответа. Таким образом, молекулы CTLA4-Ig могут стать основой способа торможения реакций отторжения трансплантированных тканей и (или) органов, а также использоваться для лечения заболеваний или состояний, обусловленных нарушением регуляции иммунного ответа в целом, включая аутоиммунные заболевания, например, молекулы CTLA4-Ig могут подавлять выработку антител к двуспиральной ДНК и уменьшать выраженность нефрита у мышей, предрасположенных к красной волчанке; также они могут уменьшать протеинурию и увеличивать выживаемость у мышей с выраженным нефритом и улучшать исход лечения псориаза и ревматоидного артрита. Чтобы повысить терапевтическую полезность молекул CTLA4-Ig, важно определить, какие изменения можно внести в молекулы для увеличения эффективности этой молекулы в качестве ингибитора стимуляции Т-лимфоцитов, например, за счет увеличения авидности и эффективности этих молекул в отношении антигенов В 7. Увеличение авидности и эффективности молекул CTLA4-Ig, возможно, поможет вводить меньшее количество молекул CTLA4-Ig пациенту для достижения желаемого терапевтического эффекта (т.е. введение менее высокой дозы). Увеличение авидности и эффективности молекулCTLA4-Ig, возможно, также поможет уменьшить число введений или частоту применения, необходимые для достижения желаемого терапевтического результата у пациента. Краткое описание изобретения Данное изобретение относится к улучшенным композициям и способам получения композиций, содержащих CTLA4-Ig. Данное изобретение относится к молекулам CTLA4-Ig, улучшенным композициям,содержащим молекулы CTLA4-Ig, и улучшенным способам получения (включая массовое производство) молекул CTLA4-Ig и других рекомбинантных белков. Данное изобретение включает любые перестановки и (или) комбинации любого из элементов и характеристик, описанных в данном документе, либо описанных по отдельности, либо в определенных комбинациях или перестановках. Клетки: данное изобретение позволяет получать клональную популяцию клеток яичника китайского хомяка, способную вырабатывать CTLA4-Ig. Данное изобретение позволяет получать клональную популяцию клеток яичника китайского хомяка, способную вырабатывать CTLA4-Ig, при этом каждая клетка содержит 30 или больше копий кассет экспрессии CTLA4-Ig. Данное изобретение также относится к клональной популяции клеток яичника китайского хомяка, способных вырабатывать CTLA4-Ig, при этом каждая клетка содержит 30 или больше копий кассет экспрессии CTLA4-Ig, где эти 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки. Данное изобретение также относится к клональной популяции клеток яичника китайского хомяка, способных вырабатывать CTLA4-Ig, при этом кассета экспрессии CTLA4-Ig стабильна на протяжении примерно 105 пассажей. В одном варианте CTLA4-Ig кодируется кассетой экспрессии, включающей последовательность нуклеиновых кислот, описанную Koduri R. с соавт. (Gene, 2001, 280:87-95) в патентах США 6800457 и 6521419, которые включены в данный документ в виде ссылок во всей полноте. В другом вариантеCTLA4-Ig кодируется кассетой экспрессии, встроенной в клеточный геном из клеточной популяции в определенном локусе, описанном Koduri R. с соавт. (Gene, 2001, 280:87-95) в патентах США 6800457 и 6521419, которые включены в данный документ в виде ссылок во всей полноте. В одном варианте популяция включает субпопуляцию клеток, содержащих 33 или больше копий кассет экспрессии CTLA4-Ig,где 33 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки субпопуляции. Данное изобретение позволяет получать клональную популяцию клеток яичника китайского хомяка, способную вырабатывать CTLA4-Ig, где по крайней мере 75% клеточной популяции содержат 30 или больше копий кассет экспрессии CTLA4-Ig, где 30 или больше копий интегрированы в единственном сайте в геноме каждой клетки 75% популяции. Данное изобретение позволяет получать клональную популяцию клеток яичника китайского хомяка, способную вырабатывать CTLA4-Ig, где по крайней мере 85% клеточной популяции содержат 30 или больше копий кассет экспрессии CTLA4-Ig, где 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки 85% популяции. Данное изобретение позволяет получать клональную популяцию клеток яичника китайского хомяка, способную вырабатывать CTLA4-Ig, где по крайней мере 95% клеточной популяции содержат 30 или больше копий кассет экспрессии CTLA4-Ig, где 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки-1 017765 95% популяции. В одном варианте клеточная популяция способа вырабатывать больше 0.5 г белкаCTLA4-Ig на 1 л жидкой культуры, где CTLA4-Ig проявляет приемлемые углеводные характеристики,где молярное отношение сиаловой кислоты к CTLA4-Ig составляет от 6 до примерно 14, когда объем культуры составляет 1000 л или больше. В другом варианте клеточная популяция адаптирована к бессывороточной среде с определенным химическим составом. В другом варианте CTLA4-Ig, полученный из культуры клеточной популяции, имеет коэффициент поглощения 1.000.05 AU млсм-1 мг-1. В другом варианте клеточная популяция, выращенная в культуре, способна вырабатывать полипептиды CTLA4-Ig,где: а) около 90% полипептидов CTLA4-Ig содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2,начинающуюся с метионина в положении остатка 27; б) около 10% полипептидов CTLA4-Ig включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, начинающуюся с аланина в положении остатка 26; в) около 4% полипептидов CTLA4-Ig включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, заканчивающуюся лизином в положении остатка 383; г) около 96% полипептидов CTLA4-Ig включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, заканчивающуюся глицином в положении остатка 382; и, на выбор, д) примерно меньше 1% полипептидов CTLA4-Ig включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, начинающуюся с метионина в положении остатка 25. Данное изобретение относится к клеточному потомству клональной клетки, где клеточное потомство вырабатывает CTLA4-Ig. В одном варианте клеточное потомство получают путем культивирования клональной родительской клетки на протяжении минимум 5 поколений. В другом варианте клеточное потомство получают путем культивирования клональной родительской клетки на протяжении минимум 10 поколений, на протяжении минимум 20 поколений, на протяжении минимум 40 поколений, на протяжении минимум 50 поколений, на протяжении минимум 75 поколений или на протяжении минимум 100 поколений. Данное изобретение относится к клеточной линии, получаемой из клональной клетки. В одном варианте клеточная линия является клональной. Данное изобретение относится к клеточной линии,способной вырабатывать: а) составной белок CTLA4-Ig, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10 (метионин в аминокислотной позиции 27 и глицин в аминокислотной позиции 382; фиг. 1A и 1 Б); б) составной белок CTLA4-Ig, содержащий аминокислотную последовательность SEQ IDNO:7 (метионин в аминокислотной позиции 27 и лизин в аминокислотной позиции 383; фиг. 1A и 1 Б); в) составной белок CTLA4-Ig, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9 (аланин в аминокислотной позиции 26 и глицин в аминокислотной позиции 382; фиг. 1A и 1 Б); г) составной белокCTLA4-Ig, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6 (метионин в аминокислотной позиции 26 и лизин в аминокислотной позиции 383; фиг. 1A и 1 Б); д) составной белок CTLA4-Ig, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8 (метионин в аминокислотной позиции 25 и глицин в аминокислотной позиции 382; фиг. 1A и 1 Б); или е) составной белок CTLA4-Ig, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5 (метионин в аминокислотной позиции 25 и лизин в аминокислотной позиции 382; фиг. 1A и 1 Б). В другом варианте клеточная линия способна вырабатывать составные белки CTLA4-Ig, где: а) около 90% полипептидов CTLA4-Ig содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, начинающуюся с метионина в остатке под номером 27; б) около 10% полипептидов CTLA4-Ig содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, начинающуюся с аланина в остатке под номером 26; в) около 4% полипептидов CTLA4-Ig содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, заканчивающуюся лизином в остатке под номером 383; г) около 96% полипептидов CTLA4-Ig содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, заканчивающуюся глицином в остатке под номером 383; и, на выбор, д) примерно меньше 1% полипептидов CTLA4-Ig содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, начинающуюся с метионина в остатке под номером 25. В другом варианте составные белки CTLA4-Ig, получающиеся из культуры клеточной популяции,характеризуются коэффициентом поглощения 1.000.05 AU млсм-1 мг-1. Данное изобретение относится к клеточной популяции - производному клональной клеточной линии. В одном варианте клеточная популяция содержит минимум одно генетическое изменение по сравнению с первоначальной клональной клеточной линией и где производная клеточная популяция способна вырабатывать CTLA4-Ig. В другом варианте клеточная популяция содержит минимум 2, минимум 3, минимум 4, минимум 5,минимум 6, минимум 7, минимум 8, минимум 10, минимум 15 или минимум 20 дополнительных генетических изменений по сравнению с родительской клеткой, где производная клеточная популяция способна вырабатывать CTLA4-Ig. В одном варианте генетическое изменение включает как минимум одну неконсервативную мутацию в клеточном геноме или рекомбинантной кассете экспрессии, кодирующейCTLA4-Ig. В другом варианте генетическое изменение включает минимум одну дополнительную рекомбинантную нуклеиновую кислоту внутри клетки. Еще в одном варианте изменение включает мутацию клеточного генома. В другом варианте изменение заключается в добавлении нуклеиновой кислоты либо в клеточный геном, либо в виде транс-нуклеиновой кислоты, которая кодирует антиапоптозный полипептид. Еще в одном варианте антиапоптозный полипептид связан с гликозилированием. В другом варианте генетическое изменение заключается минимум в одной мутации клеточного генома или рекомбинантной кассеты экспрессии, кодирующей CTLA4-Ig.-2 017765 Композиции: данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет от примерно 6 до примерно 18. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет от примерно 8 до примерно 18. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет примерно от 11 до примерно 18. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет примерно от 12 до примерно 18. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет от примерно 13 до примерно 18. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет примерно от 14 до примерно 18. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет примерно от 15 до примерно 17. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig или его молекуле, которое составляет примерно 16. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, где больше 95% молекул являются димерами CTLA4-Ig. В одном варианте больше 98% молекул CTLA4-Ig являются димерами. В другом варианте больше 99% молекул CTLA4-Ig являются димерами. В другом варианте больше 99.5% молекул CTLA4-Ig являются димерами. В другом варианте от 95 до примерно 99.5% молекул CTLA4-Ig являются димерами, и примерно 0.5 до примерно 5% молекулCTLA4-Ig являются тетрамерами или другими высокомолекулярными формами. В другом варианте примерно 98.6% молекул CTLA4-Ig являются димерами, и примерно 1.2% молекул CTLA4-Ig являются тетрамерами или высокомолекулярными формами, и примерно меньше 0.7% молекул CTLA4-Ig являются мономерами. Данное изобретение относится к популяции, состоящей из димеров CTLA4-Ig. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, где эта популяция преимущественно не содержит мономеры. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, где эта популяция преимущественно не содержит тетрамеры CTLA4-Ig. Данное изобретение относится к популяции молекулCTLA4-Ig, где эта популяция преимущественно не содержит димеры и тетрамеры CTLA4-Ig. В одном варианте каждый мономер каждого димера CTLA4-Ig содержит минимум три группы сиаловой кислоты. В другом варианте каждый мономер каждого димера CTLA4-Ig содержит минимум от 3 групп сиаловой кислоты до 8 групп сиаловой кислоты. Данное изобретение относится к очищенной популяции тетрамеров молекул CTLA4-Ig, где эта популяция преимущественно не содержит димеры CTLA4-Ig и, на выбор,где популяция включает количество, превышающее примерно 100 г. Данное изобретение относится к очищенной популяции молекул-тетрамеров CTLA4-Ig, где эта популяция преимущественно не содержит мономеры CTLA4-Ig и где, на выбор, популяция включает количество, превышающее примерно 100 г. В одном варианте каждая молекула тетрамер включает две пары полипептидов CTLA4-Ig, где каждый полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную только из группы, состоящей изSEQ ID NO:5-10, каждый член пары полипептидов ковалентно связан с другим членом и где две пары полипептидов нековалентно связаны друг с другом. В другом варианте каждая молекула тетрамер способна связываться с CD80 или CD86. Еще в одном варианте каждая молекула тетрамер обладает минимум двукратной авидностью к CD80 или CD86 по сравнению с молекулой димером CTLA4-Ig. Еще в одном варианте каждая молекула тетрамер обладает минимум двукратной способностью тормозить пролиферацию или активацию Т-лимфоцитов по сравнению с молекулой димером CTLA4-Ig. Данное изобретение относится к композиции, включающей молекулы CTLA4-Ig, где композиция содержит доминантные изоформы, визуализируемые на изоэлектрофокусировочном геле с CTLA4-Ig, который характеризуется изоэлектрической точкой пи, составляющей максимум 5.1, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В одном варианте данное изобретение относится к композиции, включающей молекулы CTLA4-Ig, где композиция содержит доминантные изоформы, визуализируемые на изоэлектрофокусировочном геле с CTLA4-Ig, который характеризуется изоэлектрической точкой пи, составляющей максимум 5.8, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В одном варианте пи увеличивается после обработки нейраминидазой. В одном варианте композиция включает доминантные изоформы, визуализируемые на изоэлектрофокусировочном геле с CTLA4-Ig, который характеризуется изоэлектрической точкой пи, составляющей максимум 5.7, 5.6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5.0, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6 или 4.5, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В другом варианте минимум 40% молекул CTLA4-Ig имеет изоэлектрическую точку, которая меньше или равна примерно 5.1, как определяется с помощью изоэлектрофокусировки. Еще в одном варианте минимум 70% молекул CTLA4-Ig имеет изоэлектрическую точку максимум примерно 5.1 как определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В другом варианте минимум 90% молекул CTLA4-Ig имеют изоэлектрическую точку, составляющую максимум примерно 2.5, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. Данное изобретение относится к попу-3 017765 ляции молекул CTLA4-Ig, пи которой составляет от примерно 2.00.2 до примерно 5.00.2. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, пи которой составляет от примерно 4.00.2 до примерно 5.00.2. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, пи которой составляет от примерно 4.30.2 до примерно 5.00.2. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig,пи которой составляет от примерно 3.30.2 до примерно 4.70.2. Данное изобретение относится к способу получения композиции, где композиция включает молекулы CTLA4-Ig, пи которых составляет от примерно 2.00.2 до примерно 5.00.2, при этом способ включает: а) проведение электрофореза смеси молекул CTLA4-Ig в изоэлектрофокусировочном геле, где единственная полоса на геле соответствует популяции молекул CTLA4-Ig, имеющих определенное пи, и б) выделение популяции молекул CTLA4Ig, характеризующихся пи в диапазоне от примерно 2.00.2 до примерно 5.00.2 с тем, чтобы получить композицию. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig,составляющим от примерно 15 до примерно 35. Данное изобретение относится к композиции молекулCTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 1.7 до примерно 3.6. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются средним молярным отношением галактозы на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 8 до примерно 17. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются средним молярным отношением фукозы на 1 моль димеров CTLA4Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 3.5 до примерно 8.3. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются средним молярным отношением маннозы на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 7.2 до примерно 22. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекулCTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся: а) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 15 до примерно 35, и б) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димеровCTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся: а) средним молярным отношениемGIcNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 15 до примерно 35, б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig,составляющим от примерно 1.7 до примерно 3.6, и в) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 15 до примерно 35, б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 1.6 до примерно 3.6, в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 8 до примерно 17, и г) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 15 до примерно 35, б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 1.6 до примерно 3.6, в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димеров CTLA4Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 8 до примерно 17, г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 3.5 до примерно 8.3, и д) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 15 до примерно 35, б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 1.6 до примерно 3.6, в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димеров CTLA4Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 8 до примерно 17, г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 3.5 до примерно 8.3, д) средним молярным отношением маннозы на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекулCTLA4-Ig, составляющим от примерно 7.2 до примерно 22, и е) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димеров CTLA4-Ig или молекул CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12.-4 017765 Данное изобретение относится к композиции, включающей молекулы CTLA4-Ig, где композиция характеризуется пиком NGNA на хроматограмме, составляющим примерно 9.5890.3, и пиком NANA на хроматограмме, составляющим примерно 10.5430.3. Данное изобретение относится к композиции,включающей молекулы CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются профилем углеводов, как показано на фиг. 67. Данное изобретение относится к композиции, включающей молекулы CTLA4-Ig, где молекулы CTLA4-Ig характеризуются профилем углеводов доменов I-V (например, I-IV), где домен I включает пики, соответствующие -сиалированным олигосахаридам, домен II включает пики, соответствующие моносиалированным олигосахаридам, домен III включает пики, соответствующие дисиалированным олигосахаридам, и домен IV включает пики, соответствующие трисиалированным олигосахаридам. Домен V включает пики, соответствующие тетрасиалированным олигосахаридам. В одном варианте разность времени удержания N-связанных олигосахаридов между первым пиком в домене I и главным пиком в домене II составляет от примерно 22 до примерно 28 мин. Данное изобретение относится к композиции, включающей молекулы димеры CTLA4-Ig, где минимум 0.5% молекул димеров CTLA4-Ig находятся в цистеинилированном состоянии. В одном варианте минимум 1.0% молекул димеров CTLA4-Ig находятся в цистеинилированном состоянии. Данное изобретение относится к популяции молекулCTLA4-Ig, где популяция характеризуется масс-спектрометрическим профилем, как показано на фиг. 8. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, где популяция характеризуется профилем капиллярного электрофореза, как показано на фиг. 19 и 20. Данное изобретение относится к композиции молекул CTLA4-Ig, где популяция характеризуется средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 18. Данное изобретение относится к композиции CTLA4-Ig, полученной каким-либо из способов, описанных в данном документе. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, где молекулы гликозилированы по аминокислотному остатку аспарагина в положении 102 последовательности SEQ ID NO:2, по аминокислотному остатку аспарагина в положении 134 последовательности SEQ ID NO:2, по аминокислотному остатку аспарагина в положении 233 последовательности SEQ ID NO:2, по аминокислотному остатку серина в положении 155 последовательности SEQ ID NO:2 или по аминокислотному остатку серина в положении 165 последовательности SEQ ID NO:2. Данное изобретение относится к популяции молекул CTLA4-Ig, где популяция молекул характеризуется: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера CTLA4-Ig или молекулы CTLA4-Ig,составляющим от примерно 15 до примерно 35; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig, составляющим от примерно 1.6 до примерно 3.6; в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig, составляющим от примерно 8 до примерно 17; г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig, составляющим от примерно 3.5 до примерно 8.3; д) средним молярным отношением маннозы на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig, составляющим от примерно 7.2 до примерно 22; е) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig, составляющим от примерно 6 до примерно 12; ж) пи, как определяется визуализацией на изоэлектрофокусировочного геле, в диапазоне от примерно от 2.40.2 до примерно 5.00.2; з) содержанием MCP-I максимум 5 млн-1; и) содержанием менее 3.0% тетрамера (например, 2.5% высокомолекулярных форм или тетрамера, 2.0% высокомолекулярных форм или тетрамера; к) содержанием меньше 0.5% мономера; л) тем, что полипептиды CTLA4-Ig популяции содержат аминокислотную последовательность, минимум на 95% идентичную SEQ ID NO:28; м) где молекулы CTLA4-Ig в популяции способны связываться с CD80 или CD86. Композиции: данное изобретение относится к композиции, включающей эффективное количество молекулы CTLA4-Ig, являющейся предметом данного изобретения, и фармацевтически приемлемый носитель. Данное изобретение относится к композиции, включающей наполнители, как описано в заявке на патент США 60/752150, зарегистрированной 20 декабря 2005 г. В одном варианте композиция включает CTLA4-Ig. В другом варианте композиция дополнительно включает фармацевтически приемлемый растворитель, адъювант или носитель. В другом варианте композиция дополнительно включает мальтозу, моноосновный натрия дигидрофосфат моногидрат, хлорид натрия, гидроксид натрия и стерильную воду. В другом варианте композиция включает сахарозу, полоксамер, моноосновный натрия дигидрофосфат моногидрат, натрия двуосновный фосфат безводный, хлорид натрия, гидроксид натрия и стерильную воду. Составы и наборы: данное изобретение относится к лиофилизированной смеси CTLA4-Ig, включающей минимум 95% димера CTLA4-Ig и максимум 5% тетрамера CTLA4-Ig. В одном варианте эта смесь включает минимум 98% димера CTLA4-Ig и максимум 2% высокомолекулярных форм или тетрамера CTLA4-Ig. В другом варианте смесь включает минимум 99% димера CTLA4-Ig и максимум 1% высокомолекулярных форм или тетрамера CTLA4-Ig. В другом варианте смесь включает минимум 8.0 моль сиаловой кислоты на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig. В другом варианте смесь включает от примерно 15.7 до примерно 31 моль GIcNAc на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig. В другом варианте смесь включает от примерно 1.6 до примерно 3.2 моль GalNAc на 1 моль димера или молекулы CTLA4Ig. В другом варианте смесь включает от примерно 9.3 до примерно 15.5 моль галактозы на 1 моль диме-5 017765 ра или молекулы CTLA4-Ig. В одном варианте смесь включает от примерно 3.6 до примерно 7.9 моль фукозы на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig. В одном варианте смесь включает от примерно 9.6 моль маннозы на 1 моль димера или молекулы CTLA4-Ig. Данное изобретение также относится к фармацевтическому набору, включающему: а) емкость, содержащую лиофилизированную смесь CTLA4-Ig,являющуюся предметом изобретения, и б) инструкции по разведению лиофилизированной смесиCTLA4-Ig с получением раствора для инъекции. Иллюстративные способы лечения: данное изобретение относится к способу торможения пролиферации (или активации) Т-лимфоцитов, при этом способ заключается в обеспечении контакта Тлимфоцита с эффективным количеством композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу подавления иммунного ответа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции сCTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу индукции иммунологической толерантности к антигену у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения воспаления у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения ревматоидного артрита, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения псориаза, при этом способ заключается во введении пациенту,нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения красной волчанки у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики аллергии у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики реакции "трансплантат против хозяина", при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики отторжения трансплантированного органа у пациента,при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения рассеянного склероза у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения болезни Крона у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции сCTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения сахарного диабета I типа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения воспалительных заболеваний кишечника у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения оофорита у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения гломерулонефрита у пациента, при этом способ заключается во введении человеку, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig,являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения аллергического энцефаломиелита у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения миастении у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к применению популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димерам или молекулам CTLA4-Ig, которое составляет от примерно 6 до примерно 18, в производстве лекарственных средств для лечения и (или) профилактики заболеваний, обусловленных иммунологическими механизмами. Данное изобретение относится к применению популяции молекул CTLA4-Ig, характеризующейся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димерам или молекулам CTLA4-Ig, которое составляет от примерно 6 до примерно 18, в производстве лекарственных средств для лечения ревматоидного артрита в упаковке вместе с вкладышем-инструкцией по применению данного средства для лечения ревматоидного артрита. Иллюстративные способы комбинированного лечения: данное изобретение относится к способу торможения пролиферации (или активации) Т-лимфоцитов, при этом способ заключается в обеспечении-6 017765 контакта Т-лимфоцита с эффективным количеством композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения, в комбинации с метотрексатом. Данное изобретение относится к способу подавления иммунного ответа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения, в комбинации с метотрексатом. Данное изобретение относится к способу индукции иммунологической толерантности к антигену у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с CTLA4-Ig, являющейся предметом изобретения, в комбинации с метотрексатом. Способы получения CTLA4-Ig: данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) выращивание клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, где выращивание происходит путем переноса из культуры для посева в жидкую культуру, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры. Жидкая культура может составлять минимум 1000 л, минимум 5000 л, минимум 10000 л, минимум 15000 л, минимум 20000 л, минимум 25000 л, минимум 30000 л, минимум 40000 л. В одном варианте стадия выращивания а) включает: i) культивирование клеток в бессывороточной среде с определенным химическим составом с минимум четырьмя пассажами с тем, чтобы получить плотность клеток минимум примерно 1.0105 жизнеспособных клеток на 1 мл, где каждый этап посева начинается с концентрации примерно 2105 на 1 мл и достигает 1-2 млн клеток на 1 мл; ii) поддержание клеток в культуре на протяжении времени, достаточного для получения из культуры рекомбинантного белка в минимальной концентрации примерно 0.5 г/л. В одном варианте белок является гликопротеином. В одном варианте белок является белком CTLA4-Ig. В одном варианте потомство клеток млекопитающего является потомством клеток клональной линии СНО, способной вырабатывать составной белок CTLA4-Ig, где клетки СНО имеют стабильно встроенные в их геном минимум 30 копий кассет экспрессии CTLA4-Ig. В одном варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 30%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 40%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 50%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 60%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 70, или 80, или 90,или 95%. Еще в одном варианте минимум четыре пассажа включают: i) выращивание клеток в культуре объемом минимум 50 мл до тех пор, пока плотность клеток не составит от примерно 1 до 2.5 млн клеток на 1 мл; ii) выращивание клеток в культуре объемом минимум 10 л до тех пор, пока плотность клеток не составит от примерно 1 до 2.5 млн клеток на 1 мл; iii) выращивание клеток в культуре объемом минимум 100 л до тех пор, пока плотность клеток не составит от примерно 1 до 2.5 млн клеток на 1 мл; и (iv) выращивание клеток в культуре объемом минимум 200 л до тех пор, пока плотность клеток не составит от примерно 1 до 2.5 млн клеток на 1 мл. В одном варианте в бессывороточную среду с определенным химическим составом добавляют галактозу. В одном варианте поддержание включает: i) снижение температуры культуры с 372 до 342 С;ii) снижение температуры культуры с 342 до 322 С. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 5 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 6 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 7 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 8 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 9 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 10 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 11 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 12 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 13 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 14 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 15 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 16 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 17 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С на протяжении минимум 18 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 322 С до тех пор, пока плотность клеток не составит от примерно 30105 до примерно 79105 клеток на 1 мл жидкой культуры. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) перенос клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, из культуры для посева в жидкую культуру, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г-7 017765 на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры, где выделение происходит, только когда жидкая культура содержит не меньше примерно 6.0 моль NANA на 1 моль белка или димера CTLA4-Ig. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) перенос клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, из культуры для посева в жидкую культуру, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры, где выделение происходит, только когда в жидкой культуре достигается плотность клеток от примерно 33105 до примерно 79105 клеток на 1 мл. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) перенос клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, из культуры для посева в жидкую культуру, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры, где выделение происходит, только когда жизнеспособность клеток составляет не ниже значения от примерно 20 до примерно 30% или примерно 38%. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) перенос клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, из культуры для посева в жидкую культуру минимальным объемом примерно 10000 л, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры, где выделение происходит,только когда концентрация эндотоксина составляет не больше 76.8 единиц эндотоксина на 1 мл жидкой культуры. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) перенос клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, из культуры для посева в жидкую культуру минимальным объемом примерно 10000 л, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры минимальным объемом примерно 10000 л, где выделение происходит, только когда бионагрузка составляет меньше 1 колониеобразующей единицы на 1 мл жидкой культуры. Жидкая культура в данном изобретении может быть минимальным объемом примерно 5000 л, минимум 10000 л, минимум 15000 л, минимум 20000 л, минимум 25000 л, минимум 30000 л, минимум 40000 л, минимум 50000 л, минимум 60000 л. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного белка, при этом способ включает: а) перенос клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный белок, из культуры для посева в жидкую культуру, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры, где выделение происходит только при соблюдении минимум двух из следующих условий: i) только когда жидкая культура содержит не меньше примерно 6.0 моль NANA на 1 моль белка, ii) плотность клеток в культуре составляет от примерно 33105 до примерно 79105 клеток на 1 мл, iii) жизнеспособность клеток составляет не меньше примерно 20% или примерно 38% или iv) содержание CTLA4-Ig в культуре выше 0.5 г/л. В одном варианте выделение включает: i) сбор надосадочной жидкости из культуры; ii) анионообменную хроматографию надосадочной жидкости для получения элюированного белкового продукта; iii) проведение хроматографии с гидрофобным взаимодействием белкового продукта, полученного на стадии (ii) с тем, чтобы получить обогащенный белковый продукт; iv) проведение аффинной хроматографии для получения элюированного и обогащенного белкового продукта; v) проведение анионообменной хроматографии обогащенного продукта, полученного на стадии (iv). В другом варианте обогащенный белковый продукт, полученный на стадии (iii), характеризуется тем, что процентное содержание любой высокомолекулярной примеси составляет меньше 25 мас.%. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (ii) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 75 ммоль HEPES и примерно 360 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 8.0. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (ii) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 25 ммоль раствора HEPES и примерно 325 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 7.0. В другом варианте хроматографию с гидрофобным взаимодействием стадии (iii) проводят с использованием единственного отмывочного буфера, содержащего примерно 25 ммольHEPES и примерно 850 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 7.0. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (iv) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 25 ммольTris и примерно 250 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 8.0. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (iv) проводят с использованием буфера-элюента, содержащего примерно 100 ммоль глицина и имеющего рН примерно 3.5. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (v) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 25 ммоль HEPES и от примерно 120 ммоль NaCl до примерно 130 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 8.0. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (v) проводят с использованием буфера-элюента, содержащего примерно 25 ммоль HEPES и примерно 200 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 8.0. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (ii) проводят с использованием колонки, заполненной анионообменной смолой, которая содержит первичные, вторичные, третичные или четвертичные функциональные аминогруппы. В другом варианте смола содержит четвертичную функциональную аминогруппу. В дру-8 017765 гом варианте хроматографию с гидрофобным взаимодействием стадии (iii) проводят с использованием смолы для гидрофобного взаимодействия, содержащей фенил, октил, пропил, алкоксил, бутил или изоамильную функциональную группу. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (iv) проводят с использованием колонки, содержащей белок А. Данное изобретение относится к способу получения CTLA4-Ig, при этом способ включает очисткуCTLA4-Ig из жидкой клеточной культуры так, чтобы очищенный CTLA4-Ig а) содержался в соотношении примерно 38 нг MCP-I на 1 г димера CTLA4-Ig, и б) включал меньше 2.5% высокомолекулярных форм CTLA4-Ig (например, тетрамер) по массе. Данное изобретение относится к способу полученияCTLA4-Ig, при этом способ включает: а) выращивание клеточного потомства или клеток СНО, способных вырабатывать CTLA4-Ig, где выращивание происходит из культуры для посева в жидкой культуре минимальным объемом примерно 10000 л, где концентрация CTLA4-Ig составляет минимум 0, 5 г на 1 л жидкой культуры; б) выделение CTLA4-Ig из жидкой культуры минимальным объемом примерно 10000 л, где хроматографию проводят на колонке со смолой для гидрофобного взаимодействия, содержащей как минимум фенильную функциональную группу, где выделение включает стадию хроматографии с гидрофобным взаимодействием, которую проводят с использованием единственного отмывочного буфера, содержащего примерно 25 ммоль HEPES и примерно 850 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 7.0. Молекулы CTLA4-Ig включают молекулы бета-полипептида. CTLA4A29YL104E-Ig - это молекула бетаполипептида. Настоящее изобретение относится к способам получения (включая массовое производство) композиций бета-полипептида или композиций молекул бета-полипептида и улучшенные композиции. Данное изобретение относится к молекулам бета-полипептида, улучшенным композициям, включающим молекулы бета-полипептида, и усовершенствованные способы получения (включая массовое производство) молекул бета-полипептида и других рекомбинантных гликопротеинов. Способы получения бета-полипептидов и других гликопротеинов: данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного гликопротеина, при этом способ включает: а) выращивание клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный гликопротеин, где выращивание происходит из культуры для посева в жидкой культуре минимальным объемом примерно 10000 л, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г/лимфоцит жидкой культуры, где выращивание включает: i) культивирование клеток в бессывороточной среде с определенным химическим составом с минимум четырьмя пассажами с тем, чтобы получить плотность клеток минимум примерно 1.0105 жизнеспособных клеток на 1 мл, где каждый этап посева начинается с концентрации примерно 2105 на 1 мл и достигает до 1-2 млн клеток на 1 мл; где культивирование включает: 1) культивирование клеток в бессывороточной среде-инокулюме с определенным химическим составом на протяжении от примерно 15 суток до примерно 25 суток; затем 2) культивирование клеток в бессывороточной базальной среде с определенным химическим составом до тех пор, пока плотность клеток не достигнет 4 млн на 1 мл; и ii) поддержание клеток в культуре на протяжении времени, достаточного для получения рекомбинантного белка из культуры в концентрации минимум примерно 0.5 г/л; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры минимальным объемом примерно 10000 л. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного гликопротеина, при этом способ включает: а) выращивание клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный гликопротеин, где выращивание происходит из культуры для посева в жидкой культуре минимальным объемом примерно 10000 л, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г/л жидкой культуры, где выращивание включает: i) культивирование клеток в бессывороточной среде с определенным химическим составом с минимум четырьмя пассажами с тем, чтобы получить плотность клеток минимум примерно 1.0105 жизнеспособных клеток на мл, где каждый этап посева начинается с концентрации примерно 2105 на 1 мл и достигает до 1-2 млн клеток на 1 мл; ii) поддержание клеток в культуре на протяжении времени, достаточного для получения рекомбинантного белка из культуры в концентрации минимум примерно 0.5 г/л; где поддержание включает: 1) снижение температуры культуры с 372 С до 342 С и 2) добавление полианионного соединения в культуру; б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры минимальным объемом примерно 10000 л. Данное изобретение относится к способу получения рекомбинантного гликопротеина, при этом способ включает: а) выращивание клеток млекопитающего, которые секретируют рекомбинантный гликопротеин, где выращивание происходит из культуры для посева в жидкой культуре минимальным объемом примерно 10000 л, где концентрация рекомбинантного белка составляет минимум 0.5 г/л жидкой культуры, и б) выделение рекомбинантного белка из жидкой культуры минимальным объемом примерно 10000 л, где выделение включает: i) получение растворимой фракции культуры стадии (а); ii) проведение аффинной хроматографии растворимой фракции, чтобы получить элюированный белковый продукт; iii) проведение анионообменной хроматографии элюированного белкового продукта стадии (ii) с тем, чтобы получить элюированный и обогащенный белковый продукт; и iv) проведение с этим белковым продуктом хроматографии с гидрофобным взаимодействием для получения обогащенного белкового продукта. В одном варианте осуществления изобретения белок включает CTLA4-Ig. В другом варианте белок включает бета-полипептид или молекулы бета-полипептида. В другом варианте белок включает бета-9 017765 полипептиды, содержащие SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16. В одном варианте осуществления изобретения минимум четыре пассажа включают: i) выращивание клеток в культуре минимальным объемом 50 мл до тех пор, пока плотность клеток не достигнет значения от примерно 1 до примерно 2.5 млн на 1 мл; ii) выращивание клеток в культуре минимальным объемом 10 л до тех пор, пока плотность клеток не достигнет значения от примерно 1 до примерно 2.5 млн на 1 мл; iii) выращивание клеток в культуре минимальным объемом 100 л до тех пор, пока плотность клеток не достигнет значения от примерно 1 до примерно 2.5 млн на 1 мл; и iv) выращивание клеток в культуре минимальным объемом 200 л до тех пор, пока плотность клеток не достигнет значения от примерно 1 до примерно 2.5 млн на 1 мл. В одном варианте осуществления изобретения выделение включает: i) получение растворимой фракции культуры стадии а); ii) проведение аффинной хроматографии растворимой фракции с получением элюированного белкового продукта; iii) проведение с элюированным белковым продуктом стадии (ii) анионообменной хроматографии с тем, чтобы получить элюированный и обогащенный белковый продукт; и iv) проведение хроматографии с гидрофобным взаимодействием обогащенного белкового продукта для получения обогащенного белкового продукта. В одном варианте обогащенный белковый продукт, полученный на стадии (iv), характеризуется тем, что процентное содержание любого высокомолекулярного мультимера не превышает 25 мас.%. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (iii) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 50 ммоль HEPES и примерно 135 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 7.0. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (iii) проводят с использованием буфераэлюента, содержащего примерно 50 ммоль HEPES и примерно 200 ммоль NaCl и имеющего рН примерно 7. В другом варианте хроматографию с гидрофобным взаимодействием стадии (iv) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 50 ммоль HEPES и примерно 1.2 моль (NH4)SO4,имеющего рН примерно 7.0. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (ii) проводят с использованием отмывочного буфера, содержащего примерно 25 ммоль NaH2PO4 и примерно 150 ммоль NaCl, имеющего рН примерно 7.5. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (ii) проводят с использованием буфера-элюента, содержащего примерно 250 ммоль глицина и имеющего рН примерно 3. В другом варианте анионообменную хроматографию стадии (iii) проводят с использованием колонки, заполненной анионообменной смолой, содержащей первичную, вторичную, третичную или четвертичную функциональную аминогруппу. В другом варианте смола содержит четвертичную функциональную аминогруппу. В другом варианте хроматографию с гидрофобным взаимодействием стадии(iii) проводят с использованием смолы для гидрофобного взаимодействия, содержащей фенил, октил,пропил, алкокси, бутил или изоамильную функциональную группу. В другом варианте функциональной группой является фенильная функциональная группа. В другом варианте аффинную хроматографию стадии (ii) проводят с использованием колонки, содержащей белок А. В другом варианте выращивание включает: i) культивирование клеток в бессывороточной среде с определенным химическим составом с минимум четырьмя пассажами с тем, чтобы получить плотность клеток минимум примерно 1.0105 жизнеспособных клеток на 1 мл, где каждый этап посева начинается с концентрации примерно 2105 на 1 мл и достигает примерно 1-2 млн клеток на 1 мл; и ii) поддержание клеток в культуре на протяжении времени, достаточного для получения из культуры рекомбинантного белка в минимальной концентрации примерно 0.5 г/л. В другом варианте культивирование включает: i) культивирование клеток в бессывороточной среде-инокулюме с определенным химическим составом на протяжении периода от примерно 15 суток до примерно 25 суток; затем ii) культивирование клеток в бессывороточной базальной среде с определенным химическим составом до тех пор, пока плотность клеток не достигнет примерно минимум 4 млн клеток на 1 мл. В другом варианте поддержание включает i) снижение температуры культуры с 372 до 342 С иii) добавление в культуру полианионного соединения. В одном варианте полианионным соединением является декстрана сульфат, где декстрана сульфат добавляют в культуру в конечной концентрации примерно 50 мг/мл. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 5 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 6 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 7 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 8 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 9 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 10 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 11 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 12 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 13 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 14 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 15 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 16 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении ми- 10017765 нимум 17 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 18 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 19 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 20 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 21 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 22 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 23 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 24 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 25 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 26 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 27 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении минимум 28 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С на протяжении до 28 суток. В другом варианте температуру поддерживают в диапазоне 342 С до тех пор, плотность клеток не достигнет значения от примерно 30105 до примерно 79105 клеток на 1 мл жидкой культуры. В одном варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 30%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 40%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 50%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 60%. В другом варианте достаточное время - это время, за которое жизнеспособность клеток не снижается ниже 70, или 80, или 90, или 95%. В одном варианте в бессывороточную среду с определенным химическим составом добавляют галактозу. В другом варианте выделение проводится, когда жидкая культура содержит не меньше примерно 6 моль сиаловой кислоты на 1 моль белка. В другом варианте выделение проводится, когда жидкая культура содержит от примерно 5.2 до примерно 7.6 моль сиаловой кислоты на 1 моль белка. В другом варианте выделение проводится, когда жидкая культура имеет плотность клеток от примерно 33105 до примерно 79105 клеток на 1 мл. В другом варианте выделение проводится, когда жизнеспособность клеток в жидкой культуре не снижается ниже примерно 37%. В другом варианте выделение проводится,когда концентрация эндотоксина не превышает примерно 4.8 единиц эндотоксина 1 мл жидкой культуры. В другом варианте выделение проводится, когда бионагрузка меньше примерно 1 колониеобразующая единица на 1 мл (КОЕ/мл) жидкой культуры. В другом варианте выделение проводится, если соблюдается минимум два из следующих условий: i) жидкая культура содержит не меньше примерно 6 моль сиаловой кислоты на 1 моль белка, ii) жидкая культура имеет плотность клеток от примерно 33105 до примерно 79105 клеток на 1 мл, iii) жизнеспособность клеток в жидкой культуре не снизилась ниже примерно 37%, или iv) содержание гликопротеина в культуре составляет от примерно 0.46 до примерно 0.61 г/л. В одном варианте клетки млекопитающего - это потомство клональной клеточной линии яичника китайского хомяка, которое вырабатывает какую-либо комбинацию бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, где каждая из клеток яичника китайского хомяка содержит стабильно встроенные в их геном минимум 30 копий кассеты экспрессии, включающей SEQ ID NO:3. В одном варианте жидкая культура включает клетку или клеточное потомство клеточной линии-продуцента, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к бета-полипептиду, содержащему SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, который получают способом, предусмотренным изобретением. Данное изобретение относится к композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и получается способом, предусмотренным изобретением. Данное изобретение относится к бета-полипептиду, который получают способом,предусмотренным изобретением. Клетки: данное изобретение относится к клональной клетке яичника китайского хомяка, включающей нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-полипептид или молекулу бета-полипептида. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бетаполипептиды или молекулы бета-полипептидов. В одном варианте бета-полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16. Данное изобретение относится к клональной клетке яичника китайского хомяка, включающей нуклеиновую кислоту, содержащую кассету экспрессии, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16. В одном варианте кассета экспрессии содержит последовательность SEQ ID NO:3. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где бета-полипептид экспрессируется согласно нуклеотидной последовательности плазмидного происхождения, имеющей инвентарный номер АТСС РТА-2104, и согласно положениям Будапештского договора, подписанного 19 июня 2000 г., хранящейся в Американском банке типов- 11017765 культур (АТСС), 20110, штат Виргиния, Манассас, Университетский бульвар, 10801. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, при этом каждая клетка содержит 30 или больше копий кассеты экспрессии бета-полипептида. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептиды или молекулы бетаполипептидов, при этом каждая клетка включает 30 или больше копий кассеты экспрессии бетаполипептида, где 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где кассета экспрессии бета-полипептида остается стабильной на протяжении примерно 105 пассажей. В одном варианте бета-полипептид кодируется кассетой экспрессии, встроенной в клеточный геном. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептид, где минимум 75% клеточной популяции содержат 30 или больше копий кассеты экспрессии бета-полипептида на клетку, где 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки 75% клеточной популяции. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептид, где минимум 85% клеточной популяции содержат 30 или больше копий кассеты экспрессии бета-полипептида на клетку, где 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки 85% клеточной популяции. Данное изобретение относится к популяции клональных клеток яичника китайского хомяка, вырабатывающей бета-полипептид, где минимум 95% клеточной популяции содержат 30 или больше копий кассеты экспрессии бета-полипептида на клетку, где 30 или больше копий встроены в единственный сайт генома каждой клетки 95% клеточной популяции. В одном варианте кассета экспрессии имеет плазмидное происхождение и хранится в банке АТСС под инвентарным номером РТА-2104. В другом варианте кассета экспрессии включает нуклеиновую кислоту, содержащую последовательность SEQ ID NO:3. В одном варианте клеточная популяция вырабатывает минимум примерно 0.5 г бета-полипептида на 1 л жидкой культуры, и где бета-полипептид имеет молярное отношение сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида, которое составляет от примерно 5.5 до примерно 8.5 при объеме культуры 1000 л или больше. В другом варианте клеточная популяция вырабатывает минимум 5, минимум 10 или минимум 20 г бета-полипептида на 1 л жидкой культуры. В другом варианте бета-полипептид имеет молярное отношение сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида, которое составляет от примерно 5 до примерно 10 при объеме культуры 1000 л или больше. В другом варианте клеточная популяция адаптирована к бессывороточной среде с определенным химическим составом. В другом варианте бета-полипептид, вырабатываемый в культуре клеточной популяции, имеет коэффициент поглощения от 1.00.05 AU млсм-1 мг-1. В другом варианте клеточная популяция, выращиваемая в культуре, вырабатывает бетаполипептиды, где: а) примерно 90% или примерно 80% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, начинающуюся с метионина в положении остатка 27; б) примерно 10% или примерно 20% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ IDNO:4, начинающуюся с аланина в положении остатка 26; в) от примерно 4 до примерно 8% бетаполипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, заканчивающуюся лизином в положении остатка 383; г) от примерно 92 до примерно 96% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, заканчивающуюся глицином в положении остатка 382; и, на выбор, д) примерно меньше 1% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQID NO:4, начинающуюся с метионина в положении остатка 25. Данное изобретение относится к клеточному потомству клеточной популяции, являющейся предметом изобретения, где клеточное потомство вырабатывает бета-полипептид. В одном варианте клеточное потомство получают путем культивирования клетки на протяжении минимум 5, минимум 10, минимум 20, минимум 40, минимум 50, минимум 75 поколений. В другом варианте клеточное потомство получают путем культивирования клетки на протяжении 27 поколений. Данное изобретение относится к клеточной линии, полученной из любой клетки, являющейся предметом изобретения. В одном варианте клеточная линия является клональной. В одном варианте клеточная линия вырабатывает: а) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQNO:4); б) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13 (метионин в положении аминокислоты 27 и лизин в положении аминокислоты 383 из SEQ ID NO:4); в) бетаполипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15 (аланин в положении аминокислоты 26 и глицин в положении аминокислоты 382 из SEQ ID NO:4); г) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 (аланин в положении аминокислоты 26 и лизин в положении аминокислоты 383 SEQ ID NO:4); д) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11 (метионин в положении аминокислоты 25 и лизин в положении аминокислоты 383 SEQ ID NO:4); е) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательностьID NO:4); или ж) любую комбинацию из вышеописанных. В одном варианте клеточная линия вырабатывает бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где: а) примерно 90 или примерно 80% бетаполипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, начинающуюся с метионина в положении остатка 27; б) примерно 10% или примерно 20% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, начинающуюся с аланина в положении остатка 26; в) от примерно 4 до примерно 8% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ IDNO:4, заканчивающуюся лизином в положении остатка 383; г) от примерно 92 до примерно 96% бетаполипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, заканчивающуюся глицином в положении остатка 382; и, на выбор, д) примерно меньше 1% бета-полипептидов содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, начинающуюся с метионина в положении остатка 25. В одном варианте бета-полипептиды, полученные путем культивирования этой клеточной линии, характеризуются коэффициентом поглощения 1.00.05 AU млсм-1 мг-1. Данное изобретение относится к клеточной популяции - производному клетки, являющейся предметом изобретения. В одном варианте клетки этой популяции содержат минимум одно добавочное генетическое изменение по сравнению с клеткой, являющейся предметом изобретения, из которой получена популяция и где клетки вырабатывают бета-полипептид. В другом варианте клетки этой популяции содержат минимум 2, минимум 3, минимум 4, минимум 5, минимум 6, минимум 7, минимум 8, минимум 9,минимум 10 или минимум 20 дополнительных генетических изменений по сравнению с клеткой, являющейся предметом изобретения, из которой получена популяция, где клетки вырабатывают бетаполипептид. В одном варианте генетическое изменение включает минимум одну неконсервативную мутацию в клеточном геноме и кассете экспрессии, кодирующей бета-полипептид. В другом варианте генетическое изменение включает минимум одну добавочную рекомбинантную нуклеиновую кислоту в клетке. В другом варианте генетическое изменение включает мутацию в клеточном геноме. В другом варианте генетическое изменение включает добавление нуклеиновой кислоты в клеточный геном или в виде транс-нуклеиновой кислоты, и где нуклеиновая кислота кодирует антиапоптозный полипептид. В другом варианте антиапоптозный полипептид связан с гликозилированием. В другом варианте генетическое изменение включает минимум одну мутацию клеточного генома или кассеты экспрессии, кодирующей бета-полипептид. В другом варианте клеточная популяция при выращивании в культуре вырабатывает: а) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16 (метионин в положении аминокислоты 27 и глицин в положении аминокислоты 382 из SEQ ID NO:4); б) бетаполипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7 (метионин в положении аминокислоты 27 и лизин в положении аминокислоты 383 SEQ ID NO:4); в) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15 (аланин в положении аминокислоты 26 и глицин в положении аминокислоты 382 SEQ ID NO:4); г) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 (аланин в положении аминокислоты 26 и лизин в положении аминокислоты 383 из SEQ ID NO:4); д) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательностьNO:4); е) бета-полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14 (метионин в положении аминокислоты 25 и глицин в положении аминокислоты 382 из SEQ ID NO:4); или ж) любую комбинацию вышеописанных вариантов. Композиции: данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов или молекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13,14, 15 или 16, со средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида от примерно 5 до примерно 10. В одном варианте среднее молярное отношение групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида составляет от примерно 5.5 до примерно 8.5. В одном варианте среднее молярное отношение групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида составляет от примерно 5.2 до примерно 7.6. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, имея среднее молярное отношение групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида примерно 6. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где больше 95% полипептидов представлены димерами. В одном варианте больше 98, больше 99 или больше 99.5% полипептидов представлены димерами. В другом варианте от примерно 95 до примерно 99.5% полипептидов представлены димерами, и от примерно 0.5 до примерно 5% полипептидов представлены тетрамерами или высокомолекулярными формами. В другом варианте примерно 98.6% полипептидов представлены димерами, и примерно 1.2% полипептидов представлены тетрамерами или высокомолекулярными формами и примерно меньше 0.6% полипептидов являются мономерами. В другом варианте примерно 95% полипептидов представлены димерами, и примерно 4% полипептидов представлены тетрамерами или высокомолекулярными формами и примерно 1% полипептидов являются выделенной популяцией димеров бетаполипептида, где каждый мономер полипептида содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14,- 13017765 15 или 16. В одном варианте популяция преимущественно не содержит мономер бета-полипептида. В другом варианте популяция преимущественно не содержит тетрамер бета-полипептида. Данное изобретение относится к выделенной популяции мономера бета-полипептида, преимущественно не содержащей димер и тетрамер бета-полипептида. В одном варианте каждый мономер каждого димера бетаполипептида содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и содержит минимум 2.5 группы сиаловой кислоты. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, обладающей активностью от примерно 70 до примерно 130% в анализе связывания В 7 по сравнению со стандартным CTLA4-Ig, где это анализ включает измерение поверхностного плазменного резонанса. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, обладающей активностью от примерно 50 до примерно 150% в анализе торможения ИЛ-2 в клетке человека по сравнению со стандартом. Данное изобретение относится к очищенной популяции тетрамеров или высокомолекулярных форм бета-полипептида, где каждый мономер полипептида содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, при этом популяция преимущественно не содержит димер бета-полипептида, и, на выбор, популяция содержит количество,превышающее примерно 100. Данное изобретение относится к очищенной популяции тетрамеров или высокомолекулярных форм бета-полипептида, где каждый мономер содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, при этом популяция преимущественно не содержит мономер бета-полипептида, и, на выбор, популяция содержит количество, превышающее примерно 100 г. В одном варианте каждая молекула тетрамера включает две пары бета-полипептидов, где каждый мономер полипептида содержит последовательностьSEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, и где каждый член пары полипептидов ковалентно связан с другим членом, и где две пары полипептидов нековалентно связаны друг с другом. В одном варианте каждая молекула тетрамера способна связываться с CD80 или CD86. В одном варианте каждая молекула тетрамера обладает минимум двукратной авидностью к CD80 или CD86 по сравнению с димером бетаполипептида, где каждый мономер димера полипептида содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12,13, 14, 15 или 16. В другом варианте каждая молекула тетрамера обладает минимум двукратной авидностью к CD80 или CD86 по сравнению с молекулой тетрамера CTLA4-Ig, содержащей последовательностьSEQ ID NO:2. В другом варианте каждая молекула тетрамера обладает минимум двукратной способностью тормозить активацию и пролиферацию Т-лимфоцитов по сравнению с димером бета-полипептида,где каждый мономер димера полипептида содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16. В другом варианте каждая молекула тетрамера обладает минимум двукратной способностью тормозить активацию и пролиферацию Т-лимфоцитов по сравнению с молекулой тетрамера CTLA4-Ig,содержащей последовательность SEQ ID NO:2. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13,14, 15 или 16, и где композиция включает доминантные изоформы, визуализируемые на изоэлектрофокусировочном геле, который имеет изоэлектрическую точку пи, не превышающую примерно 5.5, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В одном варианте пи увеличивается после обработки нейраминидазой. В одном варианте минимум 40% бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов имеет изоэлектрическую точку, не превышающую примерно 5.3, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В одном варианте минимум 70% бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов имеет изоэлектрическую точку, не превышающую примерно 5.3, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. В одном варианте минимум 90% бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов имеет изоэлектрическую точку, не превышающую примерно 5.3, что определяется с помощью изоэлектрофокусировки. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов или молекул бетаполипептидов, имеющих пи в диапазоне от примерно 2.00.2 до примерно 5.20.2. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов или молекул бетаполипептидов, имеющих пи в диапазоне от примерно 4.50.2 до примерно 5.20.2. Данное изобретение относится к выделенной популяции бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов, имеющих пи в диапазоне от примерно 4.70.2 до примерно 5.10.2. Данное изобретение относится к способу получения композиции, при этом композиция включает бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов с пи,находящейся в диапазоне от примерно 2.00.2 до примерно 5.20.2, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, при этом способ включает: а) проведение электрофореза смеси бета-полипептидов в изоэлектрофокусировочном геле, где единственная полоса на геле соответствует популяции бета-полипептидов или молекулам бета-полипептидов с определенной пи, и б) выделение популяции бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов, которые характеризуются пи,находящимся в диапазоне от примерно 2.00.2 до примерно 5.20.2 согласно условиям получения этой композиции. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или мо- 14017765 лекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13,14, 15 или 16, и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды,где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся от примерно 2.6 до примерно 3.6. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида,находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательностьSEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением фукозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 6.4 до примерно 7.0. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14,15 или 16 и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением маннозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 14 до примерно 16. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5 до примерно 10. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бетаполипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ IDNO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где молекулы характеризуются: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 2.6 до примерно 3.6; и в) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где молекулы характеризуются: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бетаполипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 2.6 до примерно 3.6; в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; и г) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 2.6 до примерно 3.6; в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 6.4 до примерно 7.0; и д) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бетаполипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находя- 15017765 щимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 2.6 до примерно 3.6; в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 6.4 до примерно 7.0; д) средним молярным отношением маннозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 14 до примерно 16; и е) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 8 до примерно 17; б) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бетаполипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; и в) профилем углеводов, преимущественно совпадающим с тем, что представлен на фиг. 8. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 8 до примерно 17; б) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; в) профилем углеводов, преимущественно совпадающим с тем, что представлен на фиг. 8; и г) содержанием тетрамера бета-полипептида ниже примерно 5%. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13,14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; б) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; б) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бетаполипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; и в) содержанием тетрамера бета-полипептида ниже примерно 5%. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13,14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; б) профилем углеводов, преимущественно совпадающим с тем, что представлен на фиг. 8. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бетаполипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; б) профилем углеводов, преимущественно совпадающим с тем, что представлен на фиг. 8. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; б) содержанием тетрамера или высокомолекулярных форм бета-полипептида ниже примерно 5%. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов,где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются: а) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; б) содержанием тетрамера или высокомолекулярных форм бета-полипептида ниже примерно 5%. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13,14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются профилем углеводов, преимущественно совпадающим с тем, что представлен на фиг. 8. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где полипептиды характеризуются профилем углеводов с доменами I-IV, где домен I включает пики, соответствующие -сиалированным олигосахаридам, домен II включает пики, соответствующие- 16017765 моносиалированным олигосахаридам, домен III включает пики, соответствующие дисиалированным олигосахаридам, и домен IV включает пики, соответствующие трисиалированным олигосахаридам. В одном варианте разность времени удержания N-связанных олигосахаридов между первым пиком в домене I и главным пиком в домене II составляет от примерно 11 до примерно 13 мин. В одном варианте на сумму доменов III и IV приходится от примерно 25 до примерно 36% всего профиля углеводов. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов, где каждый мономер полипептида содержит последовательность SEQ IDNO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где минимум примерно 0.5% молекул находятся в цистеинилированном состоянии. Данное изобретение относится к отдельной популяции бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где при масс-спектрометрии популяция дает профиль, как представлено на фиг. 10. Данное изобретение относится к отдельной популяции бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, характеризующуюся средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекуле бета-полипептида, которое находится в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5, где димер бета-полипептида или молекулы бетаполипептидов получают из клеток клеточной линии-продуцента. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, где полипептиды гликозилированы в аспарагине, находящемся в положении аминокислотного остатка 102 последовательности SEQ ID NO:4, в аспарагине, находящемся в положении аминокислотного остатка 134 из SEQ ID NO:4, в аспарагине, находящемся в положении аминокислотного остатка 233 из SEQ ID NO:4. Данное изобретение относится к выделенной композиции, включающей бета-полипептиды, где каждый полипептид содержит последовательность SEQ IDNO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где молекулы характеризуются: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 2.6 до примерно 3.6; в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 6.4 до примерно 7.0; д) средним молярным отношением маннозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 14 до примерно 16; е) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера полипептида или молекулы бета-полипептид, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; ж) пи, как определяется визуализацией на изоэлектрофокусировочном геле, в диапазоне от примерно 2.40.2 до примерно 5.20.2; з) содержанием MCP-I меньше или равного 5 млн-1; и) содержанием тетрамера или высокомолекулярных форм меньше 5%; к) на мономер приходится меньше 1% полипептида и л) бета-полипептиды или молекулы бета-полипептидов этой популяции, где аминокислотная последовательность минимум на 95% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO:4, 11, 12, 13, 14, 15 или 16, где бетаполипептиды в составе этой популяции способны связываться с CD80 и CD86. Данное изобретение относится к отдельной популяции бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательностьSEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где популяция молекул характеризуется: а) средним молярным отношением GIcNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 24 до примерно 28; б) средним молярным отношением GalNAc на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 2.6 до примерно 3.6; в) средним молярным отношением галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 11 до примерно 13; г) средним молярным отношением фукозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 6.4 до примерно 7.0; д) средним молярным отношением маннозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 14 до примерно 16; е) средним молярным отношением сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5; ж) пи, как определяется визуализацией на изоэлектрофокусировочном геле, в диапазоне от примерно 2.40.2 до примерно 5.20.2; з) содержанием MCP-I меньше или равным 5 млн-1; и) содержанием в бетаполипептиде тетрамера или высокомолекулярных форм меньше 5%; к) содержанием мономера меньше 1% и л) бета-полипептидами в этой популяции, где аминокислотная последовательность минимум на 95% совпадает с любой из последовательностей SEQ ID NO:4, 11, 12, 13, 14, 15 или 16, где молекулы бета-полипептиды в рамках этой популяции способны связываться с CD80 и CD86; или их фармацевтическими эквивалентами. Данное изобретение относится к композиции, включающей эффективное количество бетаполипептида, являющегося предметом изобретения, и фармацевтически приемлемого носителя. Данное изобретение относится к композиции, включающей наполнители, согласно описанию в заявке на патент- 17017765 США 60/752150; зарегистрированной 20 декабря 2005 г. В одном варианте композиция включает молекулы бета-полипептидов. В одном варианте композиция дополнительно включает фармацевтически приемлемый растворитель, адъювант или носитель. В одном варианте композиция дополнительно включает сахарозу, моноосновный натрия дигидрофосфат моногидрат, хлорид натрия, гидроксид натрия, соляную кислоту и стерильную воду. В другом варианте композиция включает сахарозу, полоксамер, моноосновный натрия дигидрофосфат моногидрат, натрия двухосновный фосфат безводный, хлорид натрия, гидроксид натрия и стерильную воду. В одном варианте композиция лиофилизирована. Данное изобретение относится к лиофилизированной композиции, включающей эффективное количество бетаполипептидов, являющихся предметом изобретения, сахарозу, моноосновный натрия дигидрофосфат моногидрат, хлорид натрия, гидроксид натрия и соляную кислоту. Составы и наборы: данное изобретение относится к лиофилизированной смеси бета-полипептидов,где каждый полипептид содержит последовательности SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16, включающей минимум 95% димера бета-полипептида и максимум 5% тетрамера бета-полипептида (высокомолекулярные формы). В одном варианте смесь включает минимум 98% димера бета-полипептида и не больше 2% тетрамера бета-полипептида (высокомолекулярные формы). В одном варианте смесь включает минимум 99% димера бета-полипептида и не больше 1% тетрамера бета-полипептида (высокомолекулярные формы). В одном варианте смесь включает минимум 5 моль сиаловой кислоты на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида. В одном варианте смесь включает от примерно 24 до примерно 28 моль GIcNAc на 1 моль из димера бета-полипептида (высокомолекулярные формы). В одном варианте смесь включает от примерно 2.6 до примерно 3.6 моль GalNAc на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида. В одном варианте смесь включает от примерно 11 до примерно 13 моль галактозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида. В одном варианте смесь включает от примерно 6.4 до примерно 7.0 моль фукозы на 1 моль димера бетаполипептида или молекулы бета-полипептида. В одном варианте смесь включает от примерно 14 до примерно 16 моль маннозы на 1 моль димера бета-полипептида или молекулы бета-полипептида. Данное изобретение также относится к фармацевтическому набору, включающему: а) емкость, которая содержит лиофилизированную бета-полипептидную смесь, являющуюся предметом изобретения, и б) инструкции по разведению лиофилизированной бета-полипептидной смеси для получения раствора для инъекции. Иллюстративные способы лечения: способ торможения пролиферации или активации Тлимфоцитов или обоих процессов, при этом способ заключается в обеспечении контакта Т-лимфоцита с эффективным количеством композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу торможения иммунного ответа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения заболеваний у пациента заболеваний, обусловленных иммунологическими механизмами, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу индукции иммунологической толерантности к антигену у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом,являющейся предметом изобретения. Этот способ относится к способу лечения воспаления у пациента,при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Этот способ относится к способу лечения ревматоидного артрита, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения псориаза у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения красной волчанки у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики аллергии у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики реакции "трансплантат против хозяина" у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики отторжения трансплантированного органа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики отторжения трансплантированной ткани у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики отторжения трансплантированной клетки у пациента, при этом способ заключается во- 18017765 введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения. В одном варианте трансплантированной клеткой является клетка костного мозга. В другом варианте трансплантированной клеткой является островковая клетка поджелудочной железы. В другом варианте трансплантированной клеткой является клетка, продуцирующая инсулин, - островковая клетка поджелудочной железы. Данное изобретение относится к способу лечения рассеянного склероза у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту,нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения болезни Крона у пациента,при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения сахарного диабета I типа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения воспалительных заболеваний кишечника у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения оофорита у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения гломерулонефрита у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения аллергического энцефаломиелита у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к способу лечения миастении у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом, являющейся предметом изобретения. Данное изобретение относится к использованию популяции бета-полипептидов или молекул бетаполипептидов, где каждый полипептид содержит последовательности SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где популяция характеризуется средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекулам бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5 до примерно 10, в производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения и (или) профилактики заболеваний, обусловленных иммунологическими нарушениями. Данное изобретение относится к использованию популяции бета-полипептидов или молекул бета-полипептидов, где каждый полипептид содержит последовательности SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16 и где популяция характеризуется средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекулам бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5 до примерно 10, в производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения ревматоидного артрита, в упаковке вместе с инструкциейвкладышем по применению при лечении ревматоидного артрита. В одном варианте популяция характеризуется средним молярным отношением групп сиаловой кислоты к димеру бета-полипептида или молекулам бета-полипептида, находящимся в диапазоне от примерно 5.5 до примерно 8.5. Иллюстративные комбинированные способы лечения: данное изобретение относится к способу торможения пролиферации или активации Т-лимфоцитов или обоих процессов, при этом способ заключается в обеспечении контакта Т-лимфоцита с эффективным количеством композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения, в комбинации с метотрексатом. Данное изобретение относится к способу торможения иммунного ответа у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бета-полипептидом,являющейся предметом изобретения, в комбинации с метотрексатом. Данное изобретение относится к способу индукции иммунологической толерантности к антигену у пациента, при этом способ заключается во введении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества композиции с бетаполипептидом, являющейся предметом изобретения, в комбинации с метотрексатом. Краткое описание чертежей Фиг. 1 А, 1 Б представляют нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO:1) части кассеты экспрессии молекулы CTLA4-Ig. Также показана аминокислотная последовательность (ИД ПСЛ:2), кодируемая этой нуклеиновой кислотой. Молекулы CTLA4-Ig, которые можно получить с помощью этой кассеты экспрессии, включают те, что имеют аминокислотную последовательность из остатков: i) 26-383 изSEQ ID NO:2, ii) 26-382 из SEQ ID NO:2, iii) 27-383 из SEQ ID NO:2, iv) 26-382 из SEQ ID NO:2, (v) 25382 из SEQ ID NO:2 и (vi) 25-383 из SEQ ID NO:2. Кассета экспрессии включает следующие районы: а) сигнальная последовательность онкостатина М (нуклеотиды 11-88 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 126 из SEQ ID NO:2); б) внеклеточный домен человеческого CTLA4 (нуклеотиды 89-463 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 27-151 из SEQ ID NO:2); в) модифицированный участок постоянного района человеческого IgG1 (нуклеотиды 464-1159 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 152-383 из SEQ ID NO:2), включая модифицированный шарнирный участок (нуклеотиды 464-508 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 152-166 из SEQID NO:1; аминокислоты 277-383 из SEQ ID NO:2). Фиг. 2 представляет нуклеиновую кислоту (верхний ряд) и аминокислотные (нижний ряд) последовательности, соответствующие CTLA4A29YL104E-Ig. Эта аминокислотная последовательность содержит отличия от аминокислотной последовательности, представленной на фиг. 1, где эти изменения затрагивают положение 29 (от А до Y) и положение 104 (от L до Е) при сравнении с SEQ ID NO:2, где нумерация аминокислотных остатков начинается с метионина (М), помеченного как "+1". Нуклеотидная последовательность CTLA4A29YL104E-Ig показана на этой фигуре, начиная с А в положении 79 (т.е. положении,помеченном как "+1" ниже М) до А в положении нуклеотида 1149 (SEQ ID NO:3). В частности, нуклеотидная последовательность, кодирующая CTLA4A29YL104E-Ig, соответствует последовательности от нуклеотида в положении 79 до нуклеотида в положении 1149, обозначенной как SEQ ID NO:3. Полная нуклеотидная последовательность, показанная на фиг. 2, обозначена как SEQ ID NO:23 и содержит последовательность нуклеиновых кислот, кодирующий сигнальный пептид онкостатина М. Фиг. 3 представляет аминокислотную последовательность (SEQ ID NO:4) молекулыCTLA4A29YL104E-Ig, включающей предпоследовательность онкостатина М (см. текст, выделенный курсивом и жирным шрифтом). Полипептиды, которые можно получать, - это молекулы, которые являются молекулами CTLA4A29YL104E-Ig, включают молекулы, имеющие аминокислотную последовательность из остатков: i) 26-383 из SEQ ID NO:4, ii) 26-382 из SEQ ID NO:4, iii) 27-383 из SEQ ID NO:4, iv) 26-382 изSEQ ID NO:4, (v) 25-382 из SEQ ID NO:4, (vi) 25-383 из SEQ ID NO:4. Фиг. 4 - модель CTLA4A29YL104E-Ig, показанная с N-связанными сайтами гликозилирования (N76,N108 и N207), дисульфидная связь С 120-С 120 и две аминокислотные замены, внесенные в домен CTLA4 (L104E и A29Y). Фиг. 5 представляют теоретическую аминокислотную последовательность из CTLA4A29YL104E-Ig(SEQ ID NO:4), определенную кДНК. Две аминокислотные замены внесены во внеклеточный доменCTLA-4 (L104E и A29Y) с тем, чтобы получить CTLA4A29YL104E-Ig. Эта последовательность идентифицирует сигнальный пептид (предпоследовательность) онкостатина М вместе с N-связанными сайтами гликозилирования. Фиг. 6 - диаграмма, на которой отображено связывание образцов CTLA4A29YL104E-Ig с козьими Fcантителами к человеческому IgG. Связывание образцов CTLA4A29YL104E-Ig выявлено путем измерения реакции, полученной на поверхности, при сравнении с немодифицированной поверхностью сенсорного чипа. Различные партии отображают три разных образца CTLA4A29YL104E-Ig. Фиг. 7 - диаграмма, на которой представлены кажущиеся молекулярные массы, которые соответствуют мультимерной, тетрамерной и димерной фракциям CTLA4-Ig на пике очистки хроматограммы с гидрофобным взаимодействием, что определено наложением двухколоночной гельпроникающей хроматографии с динамической детекцией рассеяния света и временем удержания на хроматограмме, полученной с помощью гельпроникающей хроматографии. Фиг. 8 А и 8 Б отображают репрезентативные изоэлектрофокусировочные гели с фракциями гликозилированных молекул CTLA4-Ig (включающих мономеры SEQ ID NO:2), выделенных и очищенных из пиков очистки, которые получены с помощью хроматографии с гидрофобным взаимодействием. Порядок загрузки для верхнего геля таков: дорожка 1, пи-маркры (Amersham); дорожка 2, стандартный димер CLTA4-Ig; дорожка 3, элюат белка А; дорожка 4, мультимер; дорожка 5, тетрамер, дорожка 6, димер. Порядок загрузки для нижнего геля таков: дорожка 1, пи-маркр (Amersham); дорожка 2, дорожка 2,стандартный димер CLTA4-Ig; дорожка 3, тетрамер; дорожка 4, диссоциированный тетрамер. По полосам видно, что тетрамер сиалилирован меньше, чем димер. Фиг. 9 демонстрирует преобладающие углеводные структуры и относительное содержание углеводов, наблюдаемое в димере CTLA4-Ig, включающем мономеры с последовательностью SEQ ID NO:2. Нумерация аминокислотных остатков на фигуре не соответствует SEQ ID NO:2. Чтобы нумерация аминокислотных остатков на фигуре соответствовала SEQ ID NO:2, нумерацию нужно увеличить на 26, т.е.76 превратить в 102. Фиг. 10 демонстрирует репрезентативный изоэлектрофокусировочный гель (рН от 4.0 до 6.5) димера CTLA4-Ig, содержащего мономеры с последовательностью SEQ ID NO:2. Дорожки 1 и 5 соответствуют калибровочному стандарту, каждая из дорожек 2, 3, 4 соответствует содержанию димера CLTA4-Ig 20 мкг/мкл. Фиг. 11 демонстрирует репрезентативный изоэлектрофокусировочный гель (рН от 4.0 до 6.5) димера CTLA4A29YL104E-Ig, содержащего мономеры с последовательностью SEQ ID NO:4. Дорожки 1 и 8 соответствуют калибровочному стандарту, каждая из дорожек 2-7 соответствует содержанию димераCTLA4A29YL104E-Ig 10 мкг/мкл. Фиг. 12 демонстрирует профиль N-связанных углеводов в популяции молекул CTLA4-Ig, включающей мономеры с последовательностью SEQ ID NO:2. Эти углеводы выделены из гликопептидов и разделены с помощью жидкостной хроматографии с пористым графитообразным углеродом и массспектрометрии N-связанных олигосахаридов. Хроматограммы отображают профиль популяции для каж- 20017765 дого сайта присоединения N-связи. А) Аспарагин 76 (аспарагин 102 в SEQ ID NO:2) углеводы из Т 5 пептида и Б) аспарагин 108 (аспарагин 134 в SEQ ID NO:2) углеводы из Т 7-пептида проявляют распределение среди моно- и мультисиалированных форм. В) Аспарагин 207 (аспарагин 233 в SEQ ID NO:2) углеводы из Т 14-пептида состоят преимущественно из несиалированных форм. Г) Представлено распределение N-связанных углеводов в отношении молекул CTLA4-Ig. Д) Отдельный необработанный спектр Т 5-пептида демонстрирует главный пик, соответствующий двухантенной моносиалированной структуре. Е) Отдельный необработанный спектр Т 14 демонстрирует главный пик, соответствующий двухантенной несиалированной структуре. Ж) Отдельный необработанный спектр состоит из немногочисленных форм,которые элюируются вместе с пиком на 64.23 минутах, который соответствует трехантенной дисиалированной структуре. З) Отдельный необработанный спектр выявляет главные формы в пике на 64.23 минутах, который соответствует двухантенной дисиалированной структуре. Фиг. 13 А, 13 Б демонстрируют УФ- и суммарную ионную хроматограмму (профиль) N-связанных олигосахаридов мономера CTLA4-Ig с SEQ ID NO:2 согласно хроматографии с пористым графитообразным углеродом в условиях кислотной элюции (0.05% TFA). Кривая на фиг. 13 А демонстрирует отрицательную сумму ионов в отношении хроматограммы, полученной с пористым графитообразным углеродом в условиях кислотной элюции (0.05% TFA). Кривая на фиг. 13 Б демонстрирует УФ-спектр при 206 нм в отношении хроматограммы, полученной с пористым графитообразным углеродом в условиях кислотной элюции (0.05% TFA). Фиг. 14 А, 14 Б демонстрируют УФ- и суммарную ионную хроматограмму (профиль) N-связанных олигосахаридов мономера CTLA4-Ig с SEQ ID NO:2 согласно хроматографии с пористым графитообразным углеродом в условиях основной элюции (0.4% NH4OH). Кривая на фиг. 14 А демонстрирует отрицательную сумму ионов в отношении хроматограммы, полученной с пористым графитообразным углеродом в условиях основной элюции (0.4% NH4OH). Кривая на фиг. 14 Б демонстрирует УФ-спектр при 206 нм в отношении хроматограммы, полученной с пористым графитообразным углеродом в условиях основной элюции (0.4% NH40H). Фиг. 15 демонстрирует сравнительные углеводные профили N-связанных олигосахаридов в отношении молекул CTLA4A29YL104E-Ig, содержащих SEQ ID NO:4. В отношении олигосахаридных доменов выявлено: домен I содержит несиалированные формы, в то время как домены II, III и IV содержат моно-,ди- и трисиалированные формы соответственно. Домены определены с помощью хроматографического выделения олигосахаридов и их анализа с помощью масс-спектрометрии. Фиг. 16 демонстрирует профиль N-связанных олигосахаридов в молекулах мономеров CTLA4-Ig,содержащих SEQ ID NO:2 и полученных с помощью анионообменной хроматографии с высоким рН и импульсного амперометрического детектора. Домены показаны в порядке возрастания содержания сиаловой кислоты в олигосахаридах. Домены I, II, III и IV содержат олигосахаридные структуры, содержащие соответственно 0, 1, 2 и 3 сиаловые кислоты. Метки пиков указывают олигосахаридные структуры,присвоенные при исследовании профилей пиков, собранных в результате профилирования с использованием пористого графитообразного углерода, при помощи анионообменной хроматографии с высоким рН и импульсного амперометрического детектора. Структурная идентификация углеводной структуры соответствует предыдущим находкам. Фиг. 17 А, 17 Б демонстрирует профиль молекулы мономера CTLA4-Ig, содержащего SEQ ID NO:2,который получен с использованием пористого графитообразного углерода. Это профиль получен путем прямого впрыска смеси переваренных углеводов, как описано в примере 3. Благодаря прямому впрыску возможна детекция структуры Р 4144, элюирующейся на 130 мин. Тетрасиалированная структура Р 4144 в профилях олигосахаридов, выделенных до впрыска, не выявлена. Фиг. 18 демонстрирует спектр с обратной сверткой и положительным электрораспылением (полученной с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии) для Т 9-фрагмента мономера с последовательностью SEQ ID NO:2. Спектр демонстрирует три главных О-связанных структуры. Спектр демонстрирует пептид из оснований с лестницей из сахаров, соответствующий О-связанной структуре(GalNAc)1(Gal)i(NeuAc)1. Часть спектра, выделенная жирным шрифтом, имеет 10-кратное усиление относительно части, не выделенной жирным шрифтом, и демонстрирует две дополнительные О-связанные структуры с (GalNAc)1(Gal)i(NeuAc)2 и (GalNAc)1(GlcNAc)i(Gal)2(NeuAc)2. Фиг. 19 демонстрирует точки присоединения и относительные популяции О-связанных углеводных структур в одной цепи мономера CTLA4-Ig, содержащего последовательность SEQ ID NO:2. Относительное содержание в каждом сайте демонстрирует данные, полученные с помощью двух или нескольких ортогональных методик, при этом они подвержены колебаниям. Также указана локализация ковалентного цистеинилирования. Фиг. 20 демонстрирует карту промежуточной плазмиды piLNrhuCTLA4-Ig. Эта плазмида содержит последовательность, которая кодирует молекулу CTLA4-Ig у человека (huCTLA4-Ig) (т.е. SEQ ID NO:1),где по бокам находятся сайты для энзиматического расщепления HindIII и XbaI. Фиг. 21 демонстрирует карту плазмиды pDl 6LEA29Y. Эта плазмида содержит последовательность,которая кодирует молекулу CTLA4A29YL104E-Ig у человека (т.е. SEQ ID NO:4). Фиг. 22 - это фотография блоттинга по Саузерну ДНК, экстрагированной из клеток СНО, экспрес- 21017765 сирующих кассеты экспрессии CTLA4-Ig, производные 1D5-100A1 (например, клон 17). Дорожки на геле слева направо соответствуют: дорожка М, маркр молекулярной массы ДНК; дорожка N, обработаннаяEcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (5 мг); дорожка 1, обработанная EcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (2.5 мкг) + 1 нг pcSDhuCTLA4-Ig; дорожка 2, обработанная EcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (2.5 мкг) + 0.5 нг pcSDhuCTLA4-Ig; дорожка 3, обработанная EcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (2.5 мкг) + 0.25 нг pcSDhuCTLA4-Ig; дорожка 4, обработанная EcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (2.5 мкг) + 0.125 нг pcSDhuCTLA4-Ig; дорожка 5, обработаннаяEcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (2.5 мкг) + 0.0625 нг pcSDhuCTLA4-Ig; дорожка 6, обработанная EcoRI/XbaI нетрансфицированная ДНК СНО (2.5 мкг) + 0.03125 нг pcSDhuCTLA4-g; дорожка 7,обработанная EcoRI/XbaI ДНК: МСВ (5.0 мкг); дорожка 8, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030618 А-01 (5.0 мкг); дорожка 9, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030712 А-01 (5.0 мкг); дорожка 10, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030801 А 01 (5.0 мкг); дорожка 11, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: МСВ (2.5 мкг); дорожка 12, обработаннаяEcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030618 А-01 (2.5 мкг); дорожка 13, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030712 А-01 (2.5 мкг); дорожка 14, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030801 А-01 (2.5 мкг); дорожка 15, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: МСВ (1.25 мкг); дорожка 16, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030618 А-01 (1.25 мкг); дорожка 17,обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030712 А-01 (1.25 мкг); дорожка 18, обработанная EcoRI/XbaI ДНК: ЕРСВ Номер партии С 20030801 А-01 (1.25 мкг). Фиг. 23 демонстрирует технологическую схему процесса культивирования в промышленном масштабе. Это процесс обеспечивает массовое производство рекомбинантных белков в 25000-л производственном реакторе. Фиг. 24 демонстрирует репрезентативную хроматограмму системы соответствия стандартам NGNA и NANA. Пик на -9.6 мин соответствует NGNA, пик на -10.6 мин - NANA. Фиг. 25 демонстрирует репрезентативную хроматограмму гидролизованных молекул CTLA4-Ig, содержащих мономеры с последовательностью SEQ ID NO:2. Пик на -8.4 мин соответствует пику растворителя. Пик на -9.6 мин соответствует NGNA. Пик на 10.5 мин соответствует NANA. Пик на -11.3 мин соответствует расщепленному NANA, получающемуся в условиях гидролиза. Доли площади, соответствующие NANA и расщепленной NANA, объединены для расчета молярного отношения NANA. Фиг. 26 А-26 В демонстрируют спектры цистеинилированного пептида CTLA4-Ig, полученные с помощью лазерной десорбции-ионизации в присутствии матрицы. Эти спектры получены для фрагментаCTLA4-Ig, выделенного после обработки трипсином/химотрипсином и содержащего цистеин 146 в SEQID NO:2. Фиг. 26 А демонстрирует спектр одноцепочечного пептида, иллюстрируя модификацию цистеинилированием. Фиг. 26 Б демонстрирует спектр одноцепочечного пептида после восстановления и демонстрирует, что модификация происходит по цистеину 146. Фиг. 26 В демонстрирует алкилирование восстановленного одноцепочечного пептида, что демонстрирует цистеинилирование в положении цистеина 146. Фиг. 27 демонстрирует схему клонирования, применяемую для получения вектора pcSD. pcDNA3 обработан рестрикционным ферментом Nael, чтобы выделить фрагмент массой 3.821 Kb, который содержит промоутер CMV, ген устойчивости к ампициллину и начало репликации Е.coli. pSV2-dhfr обработан рестрикционными ферментами PvuII и BamHIxa, чтобы выделить фрагмент массой 1.93 Kb, который содержит промоутер SV40 и ген dhfr, а затем конец ДНК "обрублен". Для получения pcSD оба фрагмента связаны вместе. Карта плазмиды pcSD показана в нижней части фигуры. Фиг. 28 демонстрирует схему клонирования, применяемую для получения вектора экспрессииpcSDhuCTLA4-Ig. pcSD обработан рестрикционными ферментами EcoRV и XbaI. piLN-huCTLA4-Ig обработан рестрикционным ферментом HindIII, конец ДНК "обрублен", а затем обработан рестрикционным ферментом XbaI, чтобы выделить фрагмент huCTLA4-Ig массой 1.2 Kb. Для получения pcSDhuCTLA4Ig, фрагмент CTLA4-Ig связан с обработанным вектором pcSD. Карта плазмиды pcSDhuCTLA4-Ig показана в нижней части фигуры. Эта плазмида приведена в линейное состояние и трансфицирована в клетки СНО, в которых отсутствует функциональный ген dhfr. Поскольку плазмида содержит функциональный ген dhfr, стабильные трансфектанты можно выбирать на основе клеточной выживаемости.pcSDhuCTLA4-Ig содержит кассету экспрессии, включающую промоутер CMV, последовательность,кодирующую молекулу CTLA4-Ig у человека (huCTLA4-Ig) (т.е. SEQ ID NO:1) и многохвостную последовательность BGH. Фиг. 29 демонстрирует электроферограмму системы пригодности аминированных моносахаридов,представленной в относительных единицах флуоресценции (RFU) против времени (мин). Фиг. 30 демонстрирует электроферограмму системы пригодности нейтральных моносахаридов,представленной в относительных единицах флуоресценции (RFU) против времени (мин). Фиг. 31 демонстрирует трипсиновую карту пептида CTLA4A29YL104E-Ig с мечеными пептидами. Табл. 23 соответствует меченым пептидам. Фиг. 32 демонстрирует Нозерн-анализ гибридизации CTLA4A29YL104E-Ig. Панель А демонстрирует гель с агаром, окрашенный этидия бромидом, где дорожка М - маркр РНК; дорожка 1 - суммарная РНКCTLA4A29YL104E-Ig, окрашенного синим красителем Кумасси. Дорожка 1 заполнена маркрами молекулярной массы; дорожки 2, 7 и 12 пусты; дорожки 3-6 - образцы CTLA4A29YL104E-Ig (восстановленные); дорожки 8-11 - образцы CTLA4A29YL104E-Ig (невосстановленные). Фиг. 35 демонстрирует анализ SDS-PAGE (восстановленный или невосстановленный)CTLA4A29YL104E-Ig, окрашенного серебряным красителем. Дорожка 1 заполнена маркрами молекулярной массы; дорожки 2, 7 и 12 пусты; дорожки 3-6 - образцы CTLA4A29YL104E-Ig (восстановленные); дорожки 811 - образцы CTLA4A29YL104E-Ig (невосстановленные). Фиг. 36 демонстрирует пептидную карту невосстановленного CTLA4A29YL104E-Ig, полученную обработкой трипсином и химотрипсином. Фиг. 37 демонстрирует пептидную карту невосстановленного CTLA4A29YL104E-Ig, полученную обработкой трипсином и эластазой. Фиг. 38 - диаграмма, отображающая пациентов с антителами к CTLA4-Ig или CTLA-4. Выработка антител ко всей молекуле CTLA4-Ig (части CTLA-4 и Ig) и только части CTLA-4 проанализирована с помощью анализов А и Б, как показано в примере 32. Фиг. 39 - схематическое изображение распределения клиренса и объема центрального компартмента в зависимости от статуса иммуногенности. Фиг. 40 - диаграмма, демонстрирующая профиль средних (SD) концентраций CTLA4-Ig в сыворотке в зависимости от времени у обезьян, которым ввели 10 мг/кг лекарственного вещества, полученного с помощью способа, являющегося предметом изобретения. Фиг. 41 - диаграмма эксклюзионной хроматограммы белка A (MAbSelect), очищенного из контроля и дезагрегированного материала CTLA4-Ig. Фиг. 42 - диаграмма анализа N-гликана, сравнивающего дезагрегированный материал (ii) с контролем (i). Фиг. 43 - диаграмма, демонстрирующая средние сывороточные концентрации CTLA4-Ig [мкг/мл] против времени (за 71 сутки). Фиг. 44 демонстрирует электроферограмму нейтральных моносахаридов, представленную в относительных единицах флуоресценции (RFU) против времени (мин). Фиг. 45 электроферограмму нейтральных аминомоносахаридов, представленную в относительных единицах флуоресценции (RFU) против времени (мин). Фиг. 46 демонстрирует сравнительные углеводные профили JV-связанных олигосахаридов для молекул CTLA4A29YL104E-Ig, содержащей SEQ ID NO:4. Выявлено четыре олигосахаридных домена, где домен I содержит несиалированные формы, а домены II, III и IV содержат моно-, ди- и трисиалированные формы соответственно. Фиг. 47 - диаграмма разделения CTLA4-Ig, смешанного в соотношении 1:1 с CTLA4A29YL104E-Ig, с помощью капиллярного электрофореза. Время миграции главных пиков составляет примерно 0.8 мин. Фиг. 48 - хроматограмма гидролизованного материала CTLA4A29YL104E-Ig, где пик NANA выявляется на 3.4 мин. Фиг. 49 демонстрирует несколько различных N-связанных углеводных структур, обнаруженных в белках млекопитающих. Во всех цепях имеются одинаковые сердцевинные структуры, содержащиеGIcNAc и три остатка маннозы. Фиг. 50 - диаграмма, демонстрирующая воздействие CTLA4-Ig (AUC) как функцию сиалирования гликопротеина (отношение NANA). Фиг. 51 - диаграмма, демонстрирующая воздействие CTLA4-Ig (AUC) как функцию углеводного профиля. При высокоэффективной анионообменной хроматографии получено большое число пиков, которые разрешены на четыре или пять доменов. Домены 1 и 2 - в основном несиалированные и моносиалированные структуры, домены 3 и 4 - в основном ди- и трисиалированные структуры. Фиг. 52 демонстрирует трипсиновую карту пептида CTLA4A29YL104E-Ig с мечеными пептидами. Табл. 56 соответствует меченым пептидам. Фиг. 53 демонстрирует сравнительные углеводные профили N-связанных олигосахаридов для молекул CTLA4-Ig, содержащих SEQ ID NO:2. Выявлены четыре олигосахаридных домена, где домен I содержит несиалированные формы, а домены II, III и IV содержат моно-, ди- и трисиалированные формы соответственно. Фиг. 54 А-54 Г - диаграмма, которая демонстрирует профили олигосахаридов CTLA4-Ig и пептидов Т 5, T7 и Т 14, полученные с помощью анионообменной хроматографии с высоким рН и импульсного амперометрического детектора. Фиг. 55 - диаграмма, которая демонстрирует профили олигосахаридов CTLA4-Ig, полученная с ис- 23017765 пользованием колонки, заполненной пористым графитообразным углеродом (Hypercarb). Фиг. 56 демонстрирует диаграмму фармакокинетических данных, полученных у обезьян, AUC на оси Y и проценту N-связанного гликозилирования, как показано в доменах I и II углеводного профиля на оси X. См. методики определения профиля N-связанных углеводов, например, в примерах 3, 44, 22 и 37. По мере увеличения процентной доли доменов I и II (и снижения процентной доли доменов III, IV и V),клиренс возрастает. Обратите внимание, что отрицательный контроль, CTLA4-Ig с низким содержанием сиаловой кислоты, выводится очень быстро. Обратите внимание, что в эту диаграмму включен вариантCTLA4-Ig, LEA (CTLA4-IgA29YL104E-Ig). Фиг. 57 А и 57 Б демонстрирует хроматограмму N-связанных углеводов, высвобожденных из CTA4Ig (что получается с помощью методик, описанных в примерах 3, 44, 22 и 37). Изображение на фиг. 57 А результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, без добавления галактозы в культуру. Изображение на фиг. 57 Б отображает добавление галактозы в культуру. Процентные доли Nсвязанных углеводов в каждом домене показаны в таблице-вставке. Фиг. 58 демонстрирует изображение хроматограммы N-связанных углеводов, высвобожденных изCTA4-Ig (что получается с помощью методик, описанных в примерах 3, 44, 22 и 37). Это результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, с добавлением галактозы в культуру на 8-е сутки. Изображение - результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, без добавления галактозы в культуру. Процентные доли N-связанных углеводов в каждом домене показаны в таблице-вставке. Фиг. 59 демонстрирует изображение хроматограммы N-связанных углеводов, высвобожденных изCTA4-Ig (что получается с помощью методик, описанных в примерах 3, 44, 22 и 37). Это результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, с добавлением галактозы в культуру на 14-е сутки. Изображение - результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, без добавления галактозы в культуру. Процентные доли N-связанных углеводов в каждом домене показаны в таблице-вставке. Фиг. 60 А и 60 Б демонстрирует изображения хроматограмм N-связанных углеводов, высвобожденных из CTA4-Ig (что получается с помощью методик, описанных в примерах 3, 44, 22 и 37). Фиг. 60 А результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, без добавления галактозы,Фиг. 60 Б - результат анализа с добавлением галактозы в культуру на 14-е сутки. Это изображение - результат анализа CTLA4-Ig, выработанного с помощью культивирования, без добавления галактозы в культуру. Процентные доли N-связанных углеводов в каждом домене показаны в таблице-вставке. Фиг. 61 демонстрирует изображение хроматограммы N-связанных углеводов, высвобожденных изCTA4-Ig (что получается с помощью методик, описанных в примерах 3, 44, 22 и 37). Это изображение получено в отношении материала CTLA4-Ig, который был выделен на стадии промывания колонки QFF,с выходом материала CTLA4-Ig c низким содержанием сиаловой кислоты. Относительные доли доменовI и II увеличились, а доменов III и IV уменьшились по сравнению с изображениями на фиг. 60, 59 и 58. Процентные доли N-связанных углеводов в каждом домене показаны в таблице-вставке. Фиг. 62 демонстрирует трипсиновую карту пептида CTLA4-Ig, указывающую, что Т 8 элюируется к концу фронта растворителя, а Т 9 элюируется на плече Т 27. Фиг. 63 - диаграмма, которая демонстрирует полный масс-спектр, соответствующий гликопептиду Т 8 из CTLA4-Ig. Фиг. 64 - диаграмма, которая демонстрирует полный масс-спектр, соответствующий гликопептиду Т 9 из CTLA4-Ig. Фиг. 65 - диаграмма, которая демонстрирует данные лазерной десорбции-ионизации в присутствии матрицы-TOF для фрагмента пептида Т 9 из CTLA4-Ig. Фиг. 66 А, 66 Б демонстрируют ионные хроматограммы и масс-спектры окисленных и нативных трипсиновых пептидов из CTLA4-Ig. Фиг. 67 демонстрирует типичный профиль N-связанных олигосахаридов (домены I, II, III, IV и V, и пики IA и IB в пределах в среднем 5% для партии). Пики 1A, 1B и 1 С соответствуют несиалированнымN-связанным олигосахаридным структурам G0, G1 и G2. Данные профиля приведены в таблице, расположенной чуть ниже. См. пример 44. Фиг. 68 демонстрирует изоэлектрофокусировочный гель с CTLA4-Ig. Полосы характеризуются: Фиг. 69 демонстрирует репрезентативный протокол количественного анализа CTLA4-Ig с использованием изоэлектрофокусировочного геля. Проведен количественный анализ геля и получены следующие данные: Фиг. 70 А демонстрирует типичный стандарт пригодности системы с впрыском 20 мкл в колонкуTOSO HAAS 3000 SWXL, оснащенной предохрантительной колонкой. Фиг. 70 Б демонстрирует эталонный материал с 20 мкл CTLA4-Ig для впрыска в колонку TOSO HAAS 3000 SWXL, оснащенную предохрантительной колонкой. Фиг. 71. Пример цифрового изображения анализа SDS-PAGE CTLA4-Ig с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (4-20), окрашенном синим красителем Кумасси. Фиг. 72 демонстрирует пример протокола количественного анализа с использованием SDS-PAGE,окрашенного синим красителем Кумасси. Фиг. 73 демонстрирует таблицу с данными количественного анализа с использованием SDS-PAGE,окрашенного синим красителем Кумасси, из фиг. 72. Фиг. 74 демонстрирует пример усиленного изображения анализа CTLA4-Ig SDS-PAGE с использованием геля, окрашенного синим красителем Кумасси, иллюстрирующий положения миграции главных и ожидаемых малых полос относительно маркров молекулярной массы. Фиг. 75 - отображение репрезентативного профиля N-связанных углеводов в эталонном и стандартном материале CTLA4-Ig. Это репрезентативный углеводный профиль, полученный после цикла на системе Waters. Время удержания определяется системой. Фиг. 76 - отображение репрезентативной хроматограммы стахиозной системы пригодности. Фиг. 77 - изображение репрезентативной хроматограммы материала гидролизованного CTLA4-Ig. Фиг. 78 демонстрирует сканированное изображение полиакриламидного (4-20%) геля, окрашенного синим красителем Кумасси, после анализа SDS-PAGE CTLA4A29YL104E-Ig с помощью электрофореза. Фиг. 79 демонстрирует технологическую схему стадий сбора, см. пример 28. Фиг. 80 демонстрирует электроферограмму системы пригодности аминомоносахаридов, см. пример 16.- 26017765 Фиг. 81 демонстрирует диаграмму фармакокинетических данных, полученных у обезьян, AUC на оси Y и проценту N-связанного гликозилирования, как показано в доменах I и II углеводного профиля на оси X. См. методики определения профиля N-связанных углеводов, например, в примерах 3, 44, 22 и 37. По мере увеличения процентной доли доменов I и II (и снижения процентной доли доменов III, IV и V)AUC возрастает. Обратите внимание, что отрицательный контроль, CTLA4-Ig с низким содержанием сиаловой кислоты, выводится очень быстро. Обратите внимание, что в эту диаграмму включена мутантная молекула CTLA4-Ig - CTLA4-IgA29YL104E-Ig (обозначенная как LEA). Фиг. 82 демонстрирует диаграмму фармакокинетических данных с AUC на оси Y и процентной долей N-связанного гликозилирования, как показано в доменах III и IV (что определяется по профилю Nсвязанных углеводов) на оси X. По мере увеличения процентной доли доменов I и II AUC возрастает. Обратите внимание, что отрицательный контроль, CTLA4-Ig с низким содержанием сиаловой кислоты,выводится очень быстро. См. методики определения профиля N-связанных углеводов, например, в примерах 3, 44, 22 и 37. Обратите внимание, что в эту диаграмму включена мутантная молекула CTLA4-Ig CTLA4-IgA29YL104E-Ig (обозначенная как LEA). Фиг. 83 демонстрирует диаграмму фармакокинетических данных с AUC на оси Y и процентной долей N-связанного гликозилирования, как показано в доменах III и IV (что определяется по профилю Nсвязанных углеводов) на оси X. По мере увеличения процентной доли доменов I и II AUC возрастает. Обратите внимание, что отрицательный контроль, CTLA4-Ig с низким содержанием сиаловой кислоты,выводится очень быстро. См. методики определения профиля N-связанных углеводов, например, в примерах 3, 44, 22 и 37. Обратите внимание, что в эту диаграмму включена мутантная молекула CTLA4-Ig CTLA4-IgA29YL104E-Ig (обозначенная как LEA). Фиг. 84 демонстрирует трипсиновую карту стандарта CTLA4-Ig. См. таблицу в конце примера 65 в отношении меток пиков. Малый пик, меченный как Т 1+А, - это трипсиновый пептид Т 1, удлиненный поN-концу остатком аланина. Малый пик, меченный как Т 31+K, - это трипсиновый пептид Т 31, удлиненный по С-концу остатком лизина. Фиг. 85 демонстрирует наложение данных для трипсиновой карты стандарта CTLA4-Ig плюс вместе с пиками 5 мол.% индикаторного пептида Т 6 ох, Met(O) 85 (84-93). См. пример 65. Фиг. 86 демонстрирует расширенный вид данных при 215 нм для трипсиновой карты стандартаCTLA4-Ig плюс вместе с пиками 5 мол.% индикаторного пептида T26deam1 Indicar Peptide,isoAsp294(281-302). См. пример 65. Подробное описание изобретения Молекулы CTLA4-Ig можно использовать для лечения различных заболеваний, включая заболевания, обусловленные патологическими иммунопролиферативными и иимунореактивными явлениями,такими как аутоиммунные реакции и аллергия. Изобретение относится к композициям CTLA4-Ig, которые, например, включают популяции молекул CTLA4-Ig, имеющих определенные модификации гликозилирования, имеющих определенные углеводные профили или характеристики, имеющих определенные мультимерные структуры и (или) имеющих определенные показатели авидности. Документы, включенные в данное описанное во всей их полноте, которые также описывают молекулы CTLA4-Ig, их применение и соответствующие методики, включают патенты США 5434131; 5851795; 5885796; 5885579 и 7094874. Данное изобретение также относится к клеточным линиям, способным вырабатывать большие количества молекул CTLA4-Ig посредством способов массового производства и культивирования, описанных в данном документе. Одна конкретная клеточная линия, являющаяся предметом изобретения, является клональной клеточной линией, которую можно использовать для массового производства молекулCTLA4-Ig, таких, которые имеют определенный профиль гликозилирования и углеводный профиль. По сравнению с гетерогенной и неклональной клеточной популяцией, имеющей инвентарный номер АТСС 68629 (см. патент США 5434131, который включен в данный документ во всей его полноте в виде ссылки), клональные клеточные линии, являющиеся предметом изобретения, могут секретировать популяцию молекул CTLA4-Ig, имеющую более воспроизводимый или более постоянный профиль гликозилирования или углеводный профиль. Кроме того, по сравнению с гетерогенной и неклональной клеточной популяцией под инвентарным номером АТСС 68629, клональные клеточные линии, являющиеся предметом изобретения, могут секретировать большие количества молекул CTLA4-Ig, отчасти за счет того, что настоящие клональные клеточные линии выбраны из-за того, что они содержат большое количество копий кассет экспрессии CTLA4-Ig, встроенных в единственный сайт клеточного генома. Данное изобретение относится к открытию того, что авидность и активность CTLA4-Ig (SEQ IDNO:2) можно увеличить за счет внесения замен двух аминокислот в В 7-связывающем регионе связывающего домена CTLA4: i) аланин в положении 29 из SEQ ID NO:2 заменен тирозином (A29Y), а ii) лизин в положении 104 из SEQ ID NO:2 заменен глутаматом (L104E). Данное изобретение относится к подроду молекул CTLA4-Ig, называемых "молекулами бета-полипептидов", включающими бетаполипептиды, которые обладают В 7-связывающей активностью и могут включать аминокислотную последовательность в SEQ ID NO:24 (внеклеточный домен CTLA4 с мутациями A29Y и L104E), связанную с постоянным участком иммуноглобулина его частью. Термины. Согласно тому, как используется в данном описании, термин "клональный" означает клеточную популяцию, которая выращивается из одной-единственной клетки. В отношении клональной клеточной линии или клональной клеточной популяции, способной вырабатывать молекулу CTLA4-Ig, клональная клеточная линия или популяция выращивается из одной-единственной клетки, выделенной из популяции клеток, которые были трансфицированы вектором экспрессии, кодирующим молекулу CTLA4-Ig. Трансфецированная популяция клеток может быть гетерогенной популяцией. Клональную клеточную линию или популяцию можно считать гомогенной в том смысле, что все клетки в популяции получают с использованием одного-единственного трансфектанта. Согласно тому, как используется в данном описании, термин "В 7-1" означает CD80; термин "В 7-2" означает CD86; термин "В 7" означает либо В 7-1, либо В 7-2, либо оба из них (CD80 и CD86). Термин"B7-1-Ig" или "B7-1Ig" означает CD80-Ig; термин "В 7-2-Ig"или "B7-2Ig" означает CD86-Ig. Согласно тому, как используется в данном описании, термины "CTLA4-Ig", или "молекула CTLA4Ig", или "молекула CTLA4Ig", или "белок CTLA4-Ig", или "белок CTLA4Ig" используются взаимозаменяемо и означают молекулу белка, которая включает, по меньшей мере, полипептид CTLA4-Ig, имеющий внеклеточный домен CTLA4, и постоянный участок иммуноглобулина или его часть. В некоторых вариантах, например, полипептид CTLA4-Ig включает минимум аминокислотную последовательность SEQID NO:18. В некоторых вариантах CTLA4 внеклеточный домен и постоянный участок иммуноглобулина или его часть могут относиться к дикому типу, или мутантному, или модифицированному. Мутантный полипептид CTLA4-Ig - это полипептид CTLA4-Ig, включающий мутантный внеклеточный доменCTLA4. Мутантная молекула CTLA4Ig включает минимум мутантный полипептид CTLA4-Ig. В некоторых вариантах внеклеточный домен CTLA4 и постоянный участок иммуноглобулина или его часть могут иметь источником организм млекопитающего, включая человека или мышь. В некоторых вариантах мутантный внеклеточный домен CTLA4 может иметь аминокислотную последовательность, которая минимум на 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична внеклеточному домену CTLA4, представленному на фиг. 1 или последовательности SEQ ID NO:18. В некоторых вариантах мутантный постоянный участок иммуноглобулина или его части может иметь аминокислотную последовательность, которая минимум на 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична постоянному участку иммуноглобулина (j), как показано на фиг. 1. Полипептид может также включать дополнительные белковые домены. МолекулаCTLA4-Ig может означать мономер полипептида CTLA4-Ig и также может означать мультимерные формы полипептида, такие как димеры, тетрамеры и гексамеры и т.д. (или другие высокомолекулярные формы). Молекулы CTLA4-Ig также способны связываться с CD80 и (или) CD86. Молекулы CTLA4-Ig включают мутантные молекулы CTLA4Ig, такие как "молекулы бета-полипептидов" например,CTLA4A29YL104E-Ig. Например, CTLA4-Ig включает молекулы CTLA4-Ig, a CTLA4A29YL104E-Ig включает молекулы бета-полипептидов (пример мутантных молекул CTLA4-Ig). Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "внеклеточный домен CTLA4" означает белковый домен, включающий всю или часть аминокислотной последовательности, показанной вSEQ ID NO:18, которая связывается с В 7-1 (CD80) и (или) В 7-2 (CD86). В некоторых вариантах внеклеточный домен CTLA4 может включать полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая минимум на 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотам 27-150 из SEQ IDNO:2, которые соответствуют тем же самым аминокислотам, что показаны в SEQ ID NO:18. Аминокислота 151 из SEQ ID NO:2 является соединительной аминокислотой. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "бета-полипептид" означает мутантный полипептид CTLA4-Ig, который 1) включает аминокислотную последовательность SEQ IDNO:18, где аминокислота в положении 29 заменена на тирозин, а аминокислота в положении 104 заменена на глутаминовую кислоту, на выбор, с другими добавочными мутациями, и постоянный участок иммуноглобулина или его часть; и 2) способен связываться с CD80 и (или) CD86. В некоторых вариантах,например, бета-полипептид включает минимум аминокислотную последовательность внеклеточного домена CTLA4A29YL104E-Ig (как показано в SEQ ID NO:24). Примеры бета-полипептидов, не налагающие ограничений, включают белатацепт и SEQ ID NO:4 и 11-16. В некоторых вариантах постоянный участок иммуноглобулина или его часть могут относиться к дикому типу, или мутантному или модифицированному. В некоторых вариантах постоянный участок иммуноглобулина или его часть могут иметь источ- 28017765 ником организм млекопитающего, включая человека или мышь. Дополнительные примеры бетаполипептидов, не налагающие ограничений, включают бета-полипептид, содержащий одну или больше аминокислотных мутаций, в постоянном участке иммуноглобулина или его части (например, замену цистеина 120 в SEQ ID NO:4), и бета-полипептид, включающей дополнительные мутации в одной или нескольких аминокислотах в положениях 25, 30, 93, 96, 103 или 105 SEQ ID NO:18. Молекулы бетаполипептида включает бета-полипептид. Молекулы бета-полипептида могут означать мономер бетаполипептида и мультимерные формы бета-полипептида, такие как димеры, тетрамеры, гексамеры и т.д. Например, белатацепт включает молекулы бета-полипептидов. Молекулы бета-полипептидов подробнее описаны в предварительной заявке на патент США 60/849543, зарегистрированной 5 октября 2006 г.,которая во всей полноте включена в данный документ в виде ссылки. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термины "глутамат" и "глутаминовая кислота" взаимозаменяемы. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "димер" означает белок CTLA4-Ig или молекулу CTLA4-Ig, состоящую из двух полипептидов CTLA4-Ig или мономеров, связанных или соединенных вместе. Связь между мономерами в димере может быть нековалентной или нековалентным взаимодействием, ковалентной связью или ковалентным взаимодействием или обоими сразу. Пример димера CTLA4-Ig показан на фиг. 4. Белок CTLA4-Ig или молекула CTLA4-Ig, состоящая из двух одинаковых мономеров, является гомодимером. Гомодимер CTLA4-Ig также включает молекулу, включающую два мономера, которые могут слегка отличаться в последовательностях. Гомодимер включает димер, где мономеры, соединенные вместе, имеют, по существу, одинаковые последовательности. Мономеры в гомодимере обладают значимой структурной гомологией. Например, различия в последовательностях могут быть обусловлены модификациями N-конца мономера. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "консервативная мутация" означает изменение в последовательности нуклеиновых кислот, где одна аминокислота заменены на другую того же самого класса (например, замена одной неполярной аминокислоты на другую, такую как изолейцин, валин, лейцин или метионин, или замена одной поляной аминокислоты на другую, такую как замена аргинина на лизин, глутаминовой кислоты на аспарагиновую кислоту или глутамата на аспарагин). Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "неконсервативная мутация" означает изменение в последовательности нуклеиновых кислот, где одна аминокислота заменена на другую другого класса (например, замена одноосновной аминокислоты, такой как лизин, аргинин или гистидин,на кислую аминокислоту, такую как аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту). Например,аминокислота может по биохимическому составу отличаться от другой аминокислоты по размеру, заряду, полярности, реакционной способности и другим характеристикам аминокислоты. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "выделенный" означает молекулу,извлеченную из ее естественной среды и находящуюся в среде, отличающейся от той, в которой находится молекула в естественных условиях, или вещество (например, белок), который частично или полностью извлечен или отделен от других компонентов его среды таким образом, что это вещество (например, белок) становится преобладающей формой (например, белковой формой), присутствующей в получающейся композиции, смеси или совокупности компонентов (например, на молярной основе эта форма содержится в намного больших количествах, чем любая другая индивидуальная форма в композиции). Например, смесь может состоять из больше чем примерно 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82,83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 или 95% выделенного CTLA4-Ig. "Выделенный" не исключает смеси молекул CTLA4-Ig с другими молекулами CTLA4-Ig из среды, в которой находится эта молекула в естественных условиях. "Выделенный" не исключает фармацевтически приемлемый наполнители, комбинированные с CTLA4-Ig, где CTLA4-Ig выделен из соответствующей среды, такой как клеточная культура, культура одного производственного цикла или биореактор и т.д. Согласно смыслу, использующемуся в данном документе, термин "выделение" означает осуществление процесса или методики, предназначенного для получения выделенной молекулы CTLA4-Ig. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "растворимый CTLA4" означает молекулу, которая может циркулировать in vivo или CTLA4, который не связан с клеточной мембраной. Например, растворимый CTLA4 может включать CTLA4-Ig, который содержит внеклеточный районCTLA4, связанный с Ig. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "растворимая фракция клеточной культуры" означает жидкую часть клеточной культуры, отличающуюся от или преимущественно не содержащую нерастворимые, мелкодисперсные или твердые компоненты клеточной культуры, такие как клетки, клеточные мембраны и ядра. Растворимая фракция может быть, например, надосадочной жидкостью, получающейся после центрифугирования клеточной культуры, или фильтратом, получающимся после фильтрования клеточной культуры. Согласно смыслу, использующемуся в данном описании, термин "кассета экспрессии" означает нуклеиновую кислоту, содержащую минимум 5'-регуляторный район (например, промоутер), функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей полипептид, и, на выбор, нетранслированный 3'-концевой район (например, стоп-кодон или последовательность полиаденилирования).