Применение 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида для лечения офтальмологических состояний

011864 Область техники Данное изобретение относится к применению производных ретинила для лечения офтальмологических состояний. Предпосылки создания изобретений Цикл превращений родопсина, или зрительный цикл, или ретиноидный цикл, представляет собой ряд реакций под действием света и ферментов, в результате которых активный хромофор зрительного пигмента, родопсин, превращается в полностью-трансизомер, который затем последовательно регенерируется. Часть цикла осуществляется во внешнем сегменте палочек, а часть цикла проходит в ретинальном пигментном эпителии (RPE, РПЭ). Компоненты этого цикла включают различные дегидрогеназы и изомеразы, а также белки для переноса интермедиатов между фоторецепторами и RPE (РПЭ). Другие белки, ассоциированные с циклом превращений родопсина (зрительным циклом), отвечают за перенос, удаление и/или расположение соединений и токсических продуктов, которые накапливаются в результате избыточного продуцирования ретиноидов в зрительном цикле (цикле превращений родопсина), таких как полностью-транс-ретиналь (atRAL). Например, N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламин(А 2 Е) образуется при конденсации полностью-транс-ретиналя с фосфатидилэтаноламином. Хотя определнные уровни этого флуорофора с оранжевым свечением переносятся фоторецепторами и RPE (РПЭ),избыточные количества могут оказывать вредное воздействие, включая продуцирование липофусцина, и,возможно, друзы под пятном. См., например, Finneman, S.C., Proc. Natl. Acad. Sei., 99: 3842-47 (2002). Кроме того, А 2 Е может быть цитотоксичен к RPE, что может привести к поражению и деструкции сетчатки. Друзы представляют собой внеклеточные отложения ниже RPE и являются факторами повышенного риска развития возрастной дегенерации жлтого пятна (макулярной дегенерации). См., например,Crabb, J.W., et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 99: 14682-87 (2002). Таким образом, удаление и устранение токсических продуктов, образующихся в результате побочных реакций в зрительном цикле, является важным, так как различного рода доказательства указывают на то, что избыточная аккумуляция токсических продуктов частично ответственна за симптомы, ассоциированные с дегенерацией жлтого пятна и дистрофиями сетчатки. Существует два главных типа возрастной дегенерации жлтого пятна: влажная и сухая формы. Сухая дегенерация жлтого пятна, которая ответственна примерно за 90% всех случаев, известна также как атрофическая, неэкссудативная или друзоподобная дегенерация жлтого пятна. При сухой дегенерации жлтого пятна друзы обычно аккумулируются в ткани RPE сетчатки. Потеря зрения возникает тогда, когда друзы препятствуют функции фоторецепторов в зоне жлтого пятна. Такая форма дегенерации жлтого пятна постепенно через много лет приводит к потере зрения. Влажная дегенерация жлтого пятна, отвечающая примерно за 10% случаев, также известна как хороидальная неоваскуляризация, субретинальная неоваскуляризация, экссудативная или дисковидная(дисциформная) дегенерация. При влажной дегенерации жлтого пятна под жлтым пятном может происходить аномальный рост сосудов; через эти сосуды в жлтое пятно может поступать кровь и жидкость и поражать фоторецепторные клетки. Исследования показали, что сухая форма дегенерации жлтого пятна может перейти во влажную форму дегенерации жлтого пятна. Влажная форма дегенерации жлтого пятна может быстро прогрессировать и вызвать тяжлое поражение центрального (макулярного) зрения. Болезнь Штаргардта, также известная как макулярная дистрофия Штаргардта или жлтопятнистое глазное дно (Fundus Flavimaculatus), представляет собой наиболее часто встречающуюся ювенильную форму макулярной дистрофии. Исследования показывают, что это состояние передатся как аутосомный рецессивный признак в АВСА 4 гене (также известном как ABCR ген). Этот ген является членом ABC суперсемейства генов, которые кодируют трансмембранные белки, участвующие в энергозависимом транспорте широкого спектра веществ через мембраны. Симптомы болезни Штаргардта включают снижение центрального зрения и трудность адаптации в темноте, проблемы, которые обычно ухудшаются с возрастом, так что у многих больных болезнью Штаргардта наблюдается потеря зрения от 20/100 до 20/400. Больные болезнью Штаргардта обычно стараются избегать яркого света из-за возможного сверхпродуцирования полностью-транс-ретиналя. Методы диагностики болезни Штаргардта включают наблюдение за появлением атрофических или бронзового цвета признаков разрушения в жлтом пятне и присутствием многочисленных желтоватобелых пятен в сетчатке, окружающей атрофическое поражение в центре сетчатки. Другие диагностические тесты включают электроретинограмму, электроокулограмму и проверку адаптации к темноте. Кроме того, для подтверждения диагноза можно применять флуоресцентную ангиограмму. В этом последнем тесте наблюдение за "тмной" или "молчащей" сосудистой оболочкой, по-видимому, обусловлено аккумуляцией липофусцина в ретинальном пигментном эпителии пациента, одним из ранних симптомов дегенерации жлтого пятна. В настоящее время выбор средств лечения дегенерации жлтого пятна и макулярных дистрофий ограничен. Некоторые больные сухой формой AMD восприимчивы к высоким дозам витаминов и минералов. Кроме того, в некоторых исследованиях указывается, что лазерная коагуляция друз предупреждает или замедляет развитие друз, которое может привести к более тяжлым симптомам сухой формы AMD.-1 011864 Наконец, в некоторых исследованиях показано, что экстракорпоральный реоферез помогает больным сухой формой AMD. Однако достижения ограничены и остатся настоятельная потребность в новых методах и средствах оказания помощи и ограничения потери зрения, обусловленной дегенерацией жлтого пятна и макулярными дистрофиями. Сущность изобретения Объектом настоящего изобретения является применение 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида для изготовления лекарственного препарата для уменьшения образования или ограничения распространения географической атрофии в глазу млекопитающего или фоторецепторной дегенерации, или для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации (дегенерации желтого пятна). В одном аспекте изобретения 4-гидроксифенилретинамид представляет собой сольват или фармацевтически приемлемую соль. В одном аспекте изобретения рассматривается применение 4-гидроксифенилретинамида для изготовления лекарственного препарата для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации(дегенерации желтого пятна). Еще в одном аспекте изобретения рассматривается применение 4-метоксифенилретинамид для изготовления лекарственного препарата для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации(дегенерации желтого пятна). При этом лекарственный препарат может иметь форму, пригодную для системного применения. Указанный лекарственный препарат может также иметь форму, пригодную для перорального введения. В другом аспекте изобретение включает лекарственный препарат на основе 4 гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида и имеет форму таблетки, порошка, пилюли,драже, капсулы, жидкости, геля, сиропа, эликсира, суспензии или взвеси. Изобретение также рассматривает возможность включения в лекарственный препарат (а) лизофосфатидилхолина, моноглицерида и жирной кислоты; (б) муки, подсластителя и смачивающего средства; или (с) кукурузного масла и неионного сурфактанта. Объектом настоящего изобретения является также применение 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида для уменьшения образования или ограничения распространения географической атрофии в глазу млекопитающего или фоторецепторной дегенерации или для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации (дегенерации желтого пятна). При этом 4-гидроксифенилретинамид может быть использован в форме сольвата или фармацевтически приемлемой соли. В одном аспекте данного изобретения рассматривается применение 4-гидроксифенилретинамида для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации (дегенерации желтого пятна). В другом аспекте данного изобретения рассматривается применение 4-метоксифенилретинамида для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации (дегенерации желтого пятна). Другой аспект данного изобретения охватывает применение, при котором лечение является системным. Настоящее изобретение включает применение 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида для уменьшения образования или ограничения распространения географической атрофии в глазу млекопитающего или фоторецепторной дегенерации или для лечения сухой формы возрастной молекулярной дегенерации (дегенерации желтого пятна), при котором лекарственный препарат вводят перорально. В любом из вышеуказанных аспектов имеются дополнительные варианты изобретения, в которых(а) эффективное количество соединения вводятся млекопитающему системно; (б) эффективное количество соединения вводятся млекопитающему орально; (в) эффективное количество соединения вводятся млекопитающему внутривенно; (г) эффективное количество соединения вводятся млекопитающему в глаз; (д) эффективное количество соединения вводятся млекопитающему с помощью ионофореза или (е) эффективное количество соединения вводятся млекопитающему с помощью инъекции. В любом из вышеуказанных аспектов имеются дополнительные варианты изобретения, в которых млекопитающим является человек, включая варианты изобретения, в которых (а) человек является носителем мутантного АВСА 4 гена болезни Штаргардта, или человек имеет мутантный ELOV4 ген болезни Штаргардта, или содержит генетический вариант фактора комплемента Н (CFH), ассоциированный с возрастной дегенерацией жлтого пятна, или (б) человек имеет офтальмологическое состояние или признак, выбранные из группы, состоящей из болезни Штаргардта, рецессивного пигментного ретинита,географической атрофии (из которых скотома является одним неограничивающим примером), фоторецепторной дегенерации, сухой формы AMD, рецессивной колбочко-палочковой дистрофии, экссудативной возрастной дегенерации жлтого пятна (макулярной дегенерации), колбочко-палочковой дистрофии и пигментного ретинита. В любом из вышеуказанных аспектов имеются дополнительные варианты изобретения, в которых млекопитающее представляет собой животную модель дегенерации сетчатки, при-2 011864 меры которой приводятся в данном описании. В любом из вышеупомянутых аспектов дополнительные варианты содержат многократное введение эффективного количества соединения, включая дополнительные варианты, в которых (i) время между введениями при многократном применении составляет по меньшей мере одну неделю; (ii) время между введениями при многократном применении составляет по меньшей мере один день; и (ш) соединение вводят млекопитающему каждые 12 ч. В других или альтернативных вариантах изобретения предусмотрены "лекарственные каникулы", когда введение соединения временно прекращают или дозу вводимого соединения временно снижают; по окончании "лекарственных каникул" введение доз возобновляют. Продолжительность "лекарственных каникул" может варьироваться от 2 дней до 1 года. В любом из вышеуказанных аспектов дополнительные варианты изобретения включают введение по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из группы, состоящей из индуктора продуцирования оксида азота, противовоспалительного агента, физиологически приемлемого антиоксиданта, физиологически приемлемого минерала, отрицательно заряженного фосфолипида, каротиноида, статина, антиангиогенного лекарства, ингибитора матриксных металлопротеаз, 13-цис-ретиноевой кислоты(а) дополнительный агент является индуктором продуцирования оксида азота, включая варианты изобретения, в которых индуктор продуцирования оксида азота выбирают из группы, состоящей из цитруллина, орнитина, нитрозированного L-аргинина, нитрозилированного L-аргинина, нитрозированного(б) дополнительный агент представляет собой противовоспалительный агент, включая варианты изобретений, в которых противовоспалительный агент выбирают из группы, состоящей из нестероидного противовоспалительного препарата, преднизона, дексаметазона и ингибитора циклооксигеназы;(в) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый антиоксидант, включая варианты изобретения, в которых физиологически приемлемый антиоксидант выбирают из группы, состоящей из витамина С, витамина Е, бета-каротина, кофермента Q и 4-гидрокси 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-N-оксил, или варианты изобретения, в которых (i) по меньшей мере один физиологически приемлемый антиоксидант вводят с 4-гидроксифенилретинамидом или 4 метоксифенилретинамидом, или (ii) по меньшей мере два физиологически приемлемых антиоксиданта вводят с с 4-гидроксифенилретинамидом или 4-метоксифенилретинамидом;(г) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый минерал, включая варианты изобретения, в которых физиологически приемлемый минерал выбирают из группы, состоящей из соединения цинка (II), соединения Cu (II) и соединения селена (II), или варианты,дополнительно включающие введение млекопитающему физиологически приемлемого антиоксиданта;(д) дополнительный агент представляет собой отрицательно заряженный фосфолипид, включая варианты изобретения, в которых отрицательно заряженный фосфолипид представляет собой фосфатидилглицерин;(е) дополнительный агент представляет собой каротиноид, включая варианты, в которых каротиноид выбирают из группы, состоящей из лютеина и зеаксантина;(ж) дополнительный агент представляет собой статин, включая варианты изобретения, в которых статин выбирают из группы, состоящей из розувастатина, питивастатина, симвастатина, правастатина,церивастатина, мевастатина, велостатина, флувастатина, компактина, ловастатина, далвастатина, флуиндостатина, аторвастатина, аторвастатина кальция и дигидрокомпактина;(з) дополнительный агент представляет собой антиангиогенное лекарство, включая варианты изобретения, в которых антиангиогенное лекарство представляет собой руфаб V2, триптофанил-тРНКсинтетазу, ПЭГилированный аптамер антитела против VEGF, скваламин, анекортава ацетат, пролекарство комбретастатина А 4, макуген, мифепристон, субтенон, триамцинолона ацетонид, интравитреальный кристаллический триамцинолона ацетонид, AG3340, флуоцинолона ацетонид и VEGF- Trap;(и) дополнительный агент представляет собой ингибитор матриксных металлопротеаз, включая варианты изобретения, в которых ингибитор матриксных металлопротеиназ представляет собой тканевый ингибитор металлопротеиназ, 2-макроглобулин, тетрациклин, гидроксамат, хелатирующий агент, синтетический фрагмент ММР, сукцинил меркаптопурин, фосфонамидат и гидроксаминовую кислоту;(к) дополнительный агент представляет собой 13-цис-ретиноевую кислоту (включая производные 13-цис-ретиноевой кислоты), 11-цис-ретиноевую кислоту (включая производные 11-цис-ретиноевой кислоты), 9-цис-ретиноевую кислоты (включая производные 9-цис-ретиноевой кислоты);(л) дополнительный агент представляет собой производное ретиниламина, включая производное полностью-транс-ретиниламина; производное 13-цис-ретиниламина, производное 11-цис-ретиниламина или производное 9-цис-ретиниламина;(м) дополнительный агент вводят (i) перед введением 4-гидроксифенилретинамида или 4-3 011864 метоксифенилретинамида, (ii) после введения 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, (iii) одновременно с введением 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или (iv) как до, так и после введения 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида; или(н) дополнительный агент и 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида вводят в одной и той же фармацевтической композиции. В любом из вышеуказанных аспектов дополнительные варианты изобретения включают применение для лечения млекопитающего экстракорпорального метода-реофереза. В любом из вышеуказанных аспектов дополнительные варианты изобретения включают проведение лечения млекопитающего, выбранного из группы, состоящей из ограниченной транслокации сетчатки,фотодинамической терапии, применения лазера для лечения друз, хирургической операции по поводу макулярных разрывов, хирургической операции по поводу макулярной транслокации, Phi-движения,бомбардировки протонным пучком, хирургической операции по поводу отслоения сетчатки и операции на стекловидном теле, операции вдавливания сферы, хирургии в субмакулярной области, транспупиллярной термотерапии, терапии фотосистемы I, стимуляции микротоками, противовоспалительных агентов, РНК-интерференции, введения глазных лекарств, таких как фосфолина иодид, или эхотиофата, или ингибиторов угольной ангидразы (карбоангидразы), имплантации микрочипов, терапии стволовыми клетками, генной заместительной терапии, генной терапии с помощью рибозима, трансплантации фоторецепторных/ретинальных клеток и акупунктуры. В любом из вышеприведнных аспектов дополнительные варианты включают применение лазерной фотокоагуляции для удаления друз из глаза млекопитающего. В любом из вышеприведнных аспектов дополнительные варианты включают введение млекопитающему, по меньшей мере, однократно, эффективного количества второго соединения, представляющего собой 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид, причм первое соединение отличается от второго соединения. В любом из вышеприведнных аспектов дополнительные варианты включают (а) мониторинг образования друз в глазу млекопитающего; (б) определение уровней липофусцина в глазу млекопитающего с помощью аутофлуоресценции; (в) измерение остроты зрения глаза млекопитающего; (в) проведение изучения поля зрения глаза млекопитающего, включая варианты, в которых изучение поля зрения представляет собой исследование поля зрения на анализаторе Хамфри; (г) измерение аутофлуоресценции или спектров поглощенияN-ретинилиденфосфатидил-этаноламина,дигидро-N-ретинилиден-Nретинилфосфатидилэтаноламина,N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,дигидро-Nретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/или N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина в глазу млекопитающего; (д) изучение скорости чтения и/или остроты зрения при чтении; (е) измерение размера скотомы; или (ж) измерение размера и числа поражений от географической атрофии. В любом из вышеприведнных аспектов дополнительные варианты включают определение, является ли млекопитающее носителем мутантного АВСА 4 аллеля, характерного для болезни Штаргардта, или имеет ли оно мутантный ELOV4 аллель, характерный для болезни Штаргардта, или имеет ли оно генетический вариант фактора комплемента Н, ассоциированный с возрастной дегенерацией жлтого пятна. В любом из вышеприведнных аспектов дополнительные варианты включают дополнительное лечение дегенерации сетчатки. В другом аспекте изобретения охватываются фармацевтические композиции, содержащие 4 гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид или их фармацевтически приемлемые соли. Ещ в одном варианте изобретения возможно дополнительное введение по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из группы, состоящей из индуктора продуцирования оксида азота,противовоспалительного агента, физиологически приемлемого антиоксиданта, физиологически приемлемого минерала, отрицательно заряженного фосфолипида, каротиноида, статина, антиангиогенного лекарства, ингибитора матриксных металлопротеаз, 13-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 13 цис-ретиноевой кислоты), 11-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 11-цис-ретиноевой кислоты), 9-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 9-цис-ретиноевой кислоты) и производных ретиниламина. В дополнительных вариантах изобретения: (а) дополнительный агент является индуктором продуцирования оксида азота; (б) дополнительный агент представляет собой противовоспалительный агент; (в) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый антиоксидант; (г) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый минерал; (д) дополнительный агент представляет собой отрицательно заряженный фосфолипид; (е) дополнительный агент представляет собой каротиноид; (ж) дополнительный агент представляет собой статин; (з) дополнительный агент представляет собой антиангиогенное лекарство; (и) дополнительный агент представляет собой ингибитор матриксных металлопротеаз; (к) дополнительный агент представляет собой 13-цис-ретиноевую кислоту. В другом варианте вышеприведнного аспекта лечение ретинопатии дополнительно включает модулирование лецитин-ретинол-ацилтрансферазы в глазу млекопитающего, включая варианты изобретения, в которых (а) ретинопатия представляет собой ювенильную дегенерацию жлтого пятна (ювениль-4 011864 ную макулярную дегенерацию), включая болезнь Штаргардта; (б) ретинопатия является сухой формой возрастной дегенерации жлтого пятна; (в) ретинопатия представляет собой колбочко-палочковую дистрофию (дистрофию колбочек-палочек сетчатки); (г) ретинопатия представляет собой пигментный ретинит; (д) ретинопатия представляет собой влажную форму возрастной дегенерации жлтого пятна; (е) ретинопатия представляет собой географическую атрофию и/или фоторецепторную дегенерацию; или (ж) ретинопатия представляет собой липофусциновую дегенерацию сетчатки. В другом аспекте данного изобретения лечение дополнительно включает введения млекопитающему, по меньшей мере, однократно, эффективного количества 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. Ещ в одном варианте изобретения способ лечения далее включает введение по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из группы, состоящей из индуктора продуцирования оксида азота, противовоспалительного агента, физиологически приемлемого антиоксиданта, физиологически приемлемого минерала, отрицательно заряженного фосфолипида, каротиноида, статина, антиангиогенного лекарства, ингибитора матриксных металлопротеаз, 13-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 13-цис-ретиноевой кислоты), 11-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 11-цисретиноевой кислоты), 9-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 9-цис-ретиноевой кислоты) и производных ретиниламина. Другие варианты изобретения включают способы, в которых: (а) дополнительный агент является индуктором продуцирования оксида азота; (б) дополнительный агент представляет собой противовоспалительный агент; (в) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый антиоксидант; (г) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый минерал; (д) дополнительный агент представляет собой отрицательно заряженный фосфолипид; (е) дополнительный агент представляет собой каротиноид;(ж) дополнительный агент представляет собой статин; (з) дополнительный агент представляет собой антиангиогенное лекарство; (и) дополнительный агент представляет собой ингибитор матриксных металлопротеаз; или (к) дополнительный агент представляет собой 13-цис-ретиноевую кислоту. В другом аспекте способы лечения ретинопатии включают введение млекопитающему агента, который ослабляет ночное зрение млекопитающего, включая варианты изобретения, в которых (а) ретинопатия представляет собой ювенильную дегенерацию жлтого пятна (ювенильную макулярную дегенерацию), включая болезнь Штаргардта; (б) ретинопатия является сухой формой возрастной дегенерации жлтого пятна; (в) ретинопатия представляет собой колбочко-палочковую дистрофию (дистрофию колбочек-палочек сетчатки); (г) ретинопатия представляет собой пигментный ретинит; (д) ретинопатия представляет собой влажную форму возрастной дегенерации жлтого пятна; (е) ретинопатия представляет собой географическую атрофию и/или фоторецепторную дегенерацию; или (ж) ретинопатия представляет собой липофусциновую дегенерацию сетчатки. Ещ в одном аспекте данного изобретения способ дополнительно включает введение млекопитающему, по меньшей мере, однократно, эффективного количества 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. Ещ в одном варианте изобретения способ далее включает введение по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из группы, состоящей из индуктора продуцирования оксида азота,противовоспалительного агента, физиологически приемлемого антиоксиданта, физиологически приемлемого минерала, отрицательно заряженного фосфолипида, каротиноида, статина, антиангиогенного лекарства, ингибитора матриксных металлопротеаз, 13-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 13 цис-ретиноевой кислоты), 11-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 11-цис-ретиноевой кислоты), 9-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 9-цис-ретиноевой кислоты) и производных ретиниламина. Другие варианты изобретения включают способы, в которых: (а) дополнительный агент является индуктором продуцирования оксида азота; (б) дополнительный агент представляет собой противовоспалительный агент; (в) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый антиоксидант; (г) дополнительный агент представляет собой по меньшей мере один физиологически приемлемый минерал; (д) дополнительный агент представляет собой отрицательно заряженный фосфолипид; (е) дополнительный агент представляет собой каротиноид; (ж) дополнительный агент представляет собой статин; (з) дополнительный агент представляет собой антиангиогенное лекарство; (и) дополнительный агент представляет собой ингибитор матриксных металлопротеаз; или (к) дополнительный агент представляет собой 13-цис-ретиноевую кислоту. В другом аспекте изобретения охватываются фармацевтические композиции для (а) уменьшения образования N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина, N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина, дигидроN-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина, N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/или N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина в глазу млекопитающего, (б) уменьшения образования липофусцина в глазу млекопитающего, (в) уменьшения образования друз в глазу млекопитающего, (г) предупреждения дегенерации жлтого пятна в глазу млекопитающего, (д) уменьшения образования полностью-транс-ретиналя в глазу млекопитающего, (е) нарушения цикла превращений родопсина (зрительного цикла) в глазу млекопитающего, и/или (ж) защиты глаза млекопитающего от света, заключающиеся во введении млекопитающему эффективного количест-5 011864 ва первого соединения,имеющего структуру 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида и фармацевтически приемлемого носителя. Соединения, включающие, но без ограничения, соединения, имеющие структуру 4 гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, которые находят применение для (а) уменьшения образования N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина, N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина, дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина, N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/илиN-ретинилиденфосфатидилэтаноламина в глазу млекопитающего, (б) уменьшения образования липофусцина в глазу млекопитающего, (в) уменьшения образования друз в глазу млекопитающего, (г) предупреждения дегенерации жлтого пятна в глазу млекопитающего, (д) уменьшения образования полностью-транс-ретиналя в глазу млекопитающего, и/или (е) защиты глаза млекопитающего от света, имеют по меньшей мере одно из нижеприведнных свойств: способность нарушать цикл превращений родопсина (зрительный цикл) в глазу млекопитающего, способность вызывать обратимую гемералопию ("куриную слепоту") у млекопитающего, приемлемую биодоступность в ткани глаза и способность вызывать только ограниченное и приемлемое раздражение в глазу млекопитающего. В другом аспекте охватываются способы уменьшения образования или ограничения распространения географической атрофии и/или фоторецепторной дегенерации в глазу млекопитающего, включающие введение млекопитающему, по меньшей мере, однократно, эффективного количества первого соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. В дополнительных или альтернативных вариантах изобретения охватываются способы, содержащие далее введение по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из группы, состоящей из индуктора продуцирования оксида азота, противовоспалительного агента,физиологически приемлемого антиоксиданта, физиологически приемлемого минерала, отрицательно заряженного фосфолипида, каротиноида, статина, антиангиогенного лекарства, ингибитора матриксных металлопротеаз, 13-цис-ретиноевой кислоты (включая производные 13-цис-ретиноевой кислоты), 11-цисретиноевой кислоты (включая производные 11-цис-ретиноевой кислоты), 9-цис-ретиноевой кислоты(включая производные 9-цис-ретиноевой кислоты) и производных ретиниламина. В дополнительных или альтернативных вариантах любого из вышеприведнных способов, включающих введение соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей, способы дополнительно включают измерение скорости чтения и/или остроты зрения при чтении (reading acuity) млекопитающего. В дополнительных или альтернативных вариантах любого из вышеприведнных способов, включающих введение соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей, способы дополнительно включают измерение количества и размера скотом в глазу млекопитающего. В дополнительных или альтернативных вариантах любого из вышеприведнных способов, включающих введение соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей, способы дополнительно включают измерение количества и размера и/или количество поражений в виде географической атрофии в глазу млекопитающего. В дополнительных или альтернативных вариантах любого из вышеприведнных способов, включающих введение соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей, способы дополнительно включают уменьшение этерификации витамина А в глазу млекопитающего. В дополнительных или альтернативных вариантах любого из вышеприведнных способов, включающих введение соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей, способы дополнительно включают снижение аутофлуоресценции липофусцина в ретинальном пигментном эпителии в глазу млекопитающего. В дополнительных или альтернативных вариантах любого из вышеприведнных способов, включающих введение соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей, способы дополнительно включают уменьшение концентрации субстрата для белка зрительного цикла после (downstream) LRAT в глазу млекопитающего. В дополнительных или альтернативных вариантах изобретения белок нижестоящих превращений зрительного цикла выбирают из группы, состоящей из белка-шаперона, изомеразы и дегидрогеназы. В другом аспекте охватываются способы уменьшения концентрации субстрата для белка зрительного цикла после LRAT в глазу млекопитающего, включающие введение млекопитающему, по меньшей мере, однократно, эффективного количества первого соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. В дополнительных или альтернативных вариантах изобретения белок нижестоящих превращений зрительного цикла выбирают из группы, состоящей из белка-шаперона, изомеразы и дегидрогеназы. В другом аспекте охватываются способы уменьшения этерификации витамина А в глазу млекопитающего, включающие введение млекопитающему, по меньшей мере, однократно, эффективного коли-6 011864 чества первого соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. В другом аспекте охватываются способы модуляции активности клеточного ретинальдегидсвязывающего белка (CRALBP), включающие контактирование CRALBP с соединениями, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. В другом варианте изобретения соединение непосредственно реагирует с клеточным ретинальдегидсвязывающим белком. В другом варианте изобретения такая модуляция осуществляется in vivo. В альтернативном варианте изобретения такая модуляция осуществляется in vitro. В другом варианте изобретения такая модуляция осуществляется в глазу млекопитающего. Ещ в одном варианте изобретения такая модуляция является полезной для млекопитающего с офтальмологическим заболеванием или состоянием. Ещ в одном варианте изобретения такая модуляция улучшает или иным способом облегчает по меньшей мере один симптом, обусловленный офтальмологическим заболеванием или состоянием у млекопитающего. В других или альтернативных вариантах изобретения заболевание или состояние выбирают из группы, состоящей из дегенерации жлтого пятна, макулярной дистрофии, ретинопатии. В других или альтернативных вариантах изобретения соединение представляет собой 4-гидроксифенилретинамид; или его метаболит, или его фармацевтически приемлемое пролекарство, или фармацевтически приемлемую соль. В других или альтернативных вариантах изобретения соединение представляет собой 4 метоксифенилретинамид; или его метаболит, или его фармацевтически приемлемое пролекарство, или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте охватываются способы непрямой модуляции активности белков зрительного цикла, которые модулируются не непосредственно соединениями, выбранными из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида или их фармацевтически приемлемых солей. В одном варианте такого аспекта соединения непосредственно модулируют один из белков зрительного цикла (связываясь с таким белком или связываясь с лигандом такого белка, причм это связывание может быть химической связью, физической связью или их комбинацией, включая водородную связь) таким образом, чтобы понизить концентрацию ожидаемого продукта реакции этого белка зрительного цикла. В другом варианте изобретения белком зрительного цикла, который непосредственно модулируется указанными соединениями является LRAT. В другом варианте изобретения непосредственная модуляция LRAT соединением уменьшает концентрацию сложных полностью-транс-ретиниловых эфиров. В другом варианте изобретения уменьшение концентрации полностью-транс-ретиниловых эфиров непрямо модулирует активность белков дальнейших стадий зрительного цикла, понижая концентрацию субстратов для таких белков последующих стадий зрительного цикла. В других вариантах изобретения такие белки последующих стадий зрительного цикла (последующие белки зрительного цикла) включают изомеразы, белки-шапероны и дегидрогеназы. Другие цели, особенности (признаки) и преимущества способов и композиций по данному описанию станут очевидны после ознакомления с нижеприведнным подробным описанием. Однако следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, иллюстрирующие конкретные варианты изобретения, даны только в качестве иллюстрации, так как различные изменения и модификации, не нарушающие сущности и объма изобретения, из данного подробного описания станут очевидны специалистам в данной области техники. Все приведнные в данном описании ссылочные материалы, включая патенты, патентные заявки и публикации, ссылкой вводятся в данное описание во всей полноте. Краткое описание фигур На фиг. 1 а-1 с иллюстрируются различные анализы методом обращнно-фазовой ЖХ ацетонитрильных экстрактов сыворотки. Сыворотку получают от мышей, которым вводили либо ДМСО (фиг. 1 а), либо 10 мг/кг N-(гидроксифенил)ретинамида (HPR) (фиг. 1b), либо 20 мг/кг HPR (фиг. 1 с) в течение 14 дней. На фиг. 2 а показана концентрация в глазу полностью-транс-ретинола (atROL) и HPR как функция времени у мышей после инъекции 10 мг/кг HPR. На фиг. 2b показаны концентрации в сыворотке полностью-транс-ретинола и HPR у мышей после 14-дневной обработки ДМСО, 10 мг/кг HPR или 20 мг/кг HPR; см. изменнную и исправленную версию этой фигуры на фиг. 11. На фиг. 3 а показаны результаты контрольного анализа связывания при взаимодействии между ретинолом и ретинол-связывающим белком, полученные методом тушения флуоресценции. На фиг. 3b показаны результаты анализа связывания при взаимодействии между ретинолом и ретинол-связывающим белком в присутствии HPR (2 мкМ), полученные методом тушения флуоресценции. На фиг. 4 а иллюстрируется действие HPR на биосинтез А 2 РЕ-Н 2 в организме abca4 нуль-мутантных мышей. На фиг. 4b иллюстрируется действие HPR на биосинтез А 2 Е в организме abca4 нуль-мутантных мышей. На фиг. 5 иллюстрируется эффект дозы HPR на активность LRAT в RPE, определнный in vitro биохимическим анализом.-7 011864 На фиг. 6 а иллюстрируется действие HPR на биосинтез сложного полностью-транс-ретинилового эфира по результатам in vitro биохимического анализа. На фиг. 6b иллюстрируется действие HPR на биосинтез 11-цис-ретинола по результатам in vitro биохимического анализа. На фиг. 6 с иллюстрируется действие HPR на биосинтез 11-транс-ретинола по результатам in vitro биохимического анализа. На фиг. 7 иллюстрируется взаимодействие клеточного ретинальдегид-связывающего белка(CRALBP) с различными лигандами, определяемое методом тушения флуоресценции. На фиг. 8 иллюстрируется взаимодействие CRALBP с различными лигандами, определяемое методами высокоэффективной гель-хроматографии и УФ/видимой спектрофотометрии. На фиг. 9 иллюстрируется связывание N-4-(метоксифенил)ретинамида (MPR) с ретинолсвязывающим белком (RBP), определяемое методом тушения флуоресценции. На фиг. 10 иллюстрируется модуляция TTR связывания с RBP-MPR, определяемое методами высокоэффективной гель-хроматографии и УФ/видимой спектрофотометрии. На фиг. 11 показаны результаты анализа ретинола в сыворотке в зависимости от концентрации фенретинида. На фиг. 12 показана корреляционная диаграмма, связывающая концентрацию фенретинида с уменьшением ретинола, А 2 РЕ-Н 2 и А 2 Е в организме АВСА 4 нуль-мутантных мышей. На фиг. 13 иллюстрируется (фиг. 13 А) тушение флуоресценции белка CRALBP под действием 11 цис-ретиналя (11cRAL) и (фиг. 13 В) тушение флуоресценции CRALBP под действием фенретинида. На фиг. 14 показаны результаты спектроскопического анализа связывания фенретинида с CRALBP. На фиг. 15 иллюстрируется тушение флуоресценции аро-CRALBP в зависимости от концентрации 11 cRAL или фенретинида. На фиг. 16 показано влияние фенретинида на этерификацию витамина А в ретинальном пигментном эпителии. На фиг. 17 показана ретиноидная композиция у адаптированных к свету обработанных ДМСО иHPR мышей (фиг. А); влияние HPR на регенерацию хромофора зрительного пигмента (фиг. 17 В); влияние HPR на возвращение в цикл обесцвеченного хромофора (фиг. 17 С); и электрофизиологические измерения функции палочек (фиг. 17D), функции палочек и колбочек (фиг. 17 Е) и регенерация в результате фотообесцвечивания (фиг. 17F). На фиг. 18 показаны результаты анализа уровней А 2 РЕ-Н 2 и А 2 Е в зависимости от дозы фенретинида и времени лечения (фиг. 18A-F) и аутофлуоресценция липофусцина в RPE ABCA4 нуль-мутантных мышей как функция лечения фенетринидом (фиг. 18G-I). На фиг. 19 иллюстрируется изображение под световым микроскопом сетчатки животных, получавших ДМСО и HPR. На фиг. 20 показаны поглощения (оптической плотности) и флуоресценции экстрактов из глазного бокала контрольных мышей (фиг. 20 А) и мышей, предварительно пролеченных HRP (фиг. 20 В) после 12 дневных "лекарственных каникул"; кривые поглощения и флуоресценции экстрактов из глазного бокала контрольных мышей (фиг. 20 С) и мышей, предварительно пролеченных HRP (фиг. 20D) после 28 дневных "лекарственных каникул"; на гистограммах представлены относительные уровни А 2 Е для мышей, описанных на фиг. 20 A-D. Подробное описание изобретения Соединения, такие как 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид и аналогичные им применялись для лечения рака. В частности, соединение N-(4-гидроксифенил)ретинамид, также известный как фенретинид, HPR или 4-HPR, активно испытывался для лечения рака молочной железы.Moon, et al., Cancer Res: 39: 1339-46 (1979). Фенретинид описан в патентах США 4190594 и 4323581. Кроме того, известны другие методы получения фенретинида, и, далее, получены и прошли испытание на эффективность при лечении рака многочисленные аналоги фенретинида. См., например, опубликованную патентную заявку США 2004/0102650; патент США 6696606; VilleneuveChan, Tetrahedron Letters, 38: 6489-92 (1997)4 Um, S.J., et al., Chen. Pharm. Bull, 52: 501-506 (2004). Важно, однако, отметить общую тенденцию таких соединений вызывать у больных людей определнные побочные эффекты, включая нарушение ночного зрения. См., например, Decensi, A., et al., J. Natl. Cancer Inst., 86: 1-5-110(1994); Mariani, L., Tumori., 82: 444-49 (1996). В последних исследованиях также получены определнные доказательства того, что N-(4-гидроксифенил)ретинамид может индуцировать нейроноподобную дифференцировку в некоторых культивированных человеческих RPE клетках. См. Chen, S., et al., J. Neurochem.,84: 972-81 (2003). Неожиданно оказалось, что 4-гидроксифенилретинамид и 4-метоксифенилретинамид можно применять для облегчения состояния пациентов, страдающих чувствительностью к различным макулярным дегенерациям и дистрофиям, включая, но без ограничения, сухую форму возрастной дегенерации жлтого пятна (макулярной дегенерации) и болезни Штаргардта. Конкретнее, 4-гидроксифенилретинамид и 4 метоксифенилретинамид оказывают следующее благоприятное воздействие на таких больных людей: снижение количества полностью-транс-ретиналя (atRAL), уменьшение образования липофусцина,-8 011864 уменьшение образования друз и уменьшение чувствительности к свету. Понижается тенденция образовывать А 2 Е в тканях глаза, что частично вызвано уменьшением повышенной аккумуляции полностьютранс-ретиналя в этих тканях. Так как сам А 2 Е цитотоксичен в отношении RPE (что может привести к гибели клеток сетчатки), введение 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида (самостоятельно или в комбинации с другими агентами по данному описанию) снижает скорость аккумуляции А 2 Е, цитотоксического агента, тем самым оказывая благоприятное воздействие на больного. Кроме того,так как А 2 Е является основным флуорофором липофусцина, меньшие количества А 2 Е в тканях глаза также приводят к уменьшению тенденции к накоплению липофусцина в таких тканях. Таким образом,способы и композиции по данному описанию можно рассматривать как лечение на основе липофусцина,так как введение 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида (самостоятельно, или в сочетании с другими агентами, по данному описанию) уменьшает, снижает или иным образом нарушает аккумуляцию липофусцина в тканях глаза. Снижение скорости аккумуляции липофусцина в тканях глаза благотворно действует на пациентов с такими заболеваниями или состояниями, как макулярные дегенерации и/или дистрофии. Кроме того, так как сухая форма возрастной дегенерации жлтого пятна часто предшествует влажной форме возрастной дегенерации жлтого пятна, применение 4-гидроксифенилретинамида и 4 метоксифенилретинамида можно также использовать как профилактическое лечение этого последнего офтальмологического состояния. Интересно отметить, что 4-гидроксифенилретинамид и 4-метоксифенилретинамид и/или их производные также оказывают влияние на ферменты или белки в зрительном цикле (цикле превращения родопсина). Например, в этерификации в ретинальном пигментном эпителии участвует лецитин-ретинолацилтрансфераза (LRAT), которая катализирует перенос ацильной группы с лецитина на ретинол. Введение 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида и/или их производных модифицирует активность LRAT, что оказывает благоприятное воздействие на пациентов, страдающих различными макулярными дегенерациями и дистрофиями. Витамин А в сыворотке доставляется к избыточным печночным тканям-мишеням и мгновенно этерифицируется с помощью мембраносвязанного фермента LRAT. LRAT катализирует перенос жирной кислоты с мембранных фосфолипидов на ретинол, при этом образуются сложные полностью-трансретиниловые эфиры, основная форма хранения витамина А во всех тканях. В RPE сложные полностьютранс-ретиниловые эфиры являются единственным субстратом для уникального фермента изомеразы,который образует светочувствительный предшественник хромофора зрительного пигмента, 11-цисретинол. В результате последующего окисления этого ретиноида и конъюгации с опсиновым апопротеином в сетчатке образуется родопсин. Показано, что N-(4-гидроксифенил)ретинамид вызывает заметное ингибирование активности LRAT в мембранах, полученных из печени и тонкого кишечника. Кроме того, мы показали (например, пример 13) в первый раз, что активность LRAT в RPE глаза ингибируется HPR. Как обсуждается в примерах,введение HPR также ассоциируется с пониженным содержанием в сыворотке ретинола и ретинолсвязывающего белка (RBP). Таким образом, помимо системного действия HRP (например, пониженные уровни ретинола в сыворотке) имеется также внутриклеточное фермент-специфическое действие (например, активность LRAT в RPE клетках). Тот факт, что гомеостаз витамина А в глазу зависит не только от доставки ретинола из сыворотки, но также от внутриклеточных запасов ретиниловых эфиров для создания хромофора зрительного пигмента, наводит на мысль, что действие HPR может быть наиболее отчтливым в этом органе. Кроме того, 4-гидроксифенилретинамид и 4-метоксифенилретинамид также связываются с клеточным ретинальдегид-связывающим белком (CRALBP), который является другим белком зрительного цикла. Для иллюстрации этого эффекта и только в качестве примера данные, представленные на фиг. 7 и 8,показывают, что HPR связывается с CRALBP. Таким образом, можно ожидать, что в глазных тканях, в которых можно обнаружить CRALBP, соединения, аналогичные 4-гидроксифенилретинамиду и 4 метоксифенилретинамиду, связываются с CRALBP и, соответственно, (а) модулируют связывание других соединений, таких как ретинальдегид, с CRALBP, (б) модулируют активность CRALBP, (в) служат в качестве лиганда для CRALBP, (г) испытывают (претерпевают) активность, катализируемую CRALBP,включая активность переноса, и/или (е) служат в качестве терапевтического агента в способах и композициях по данному описанию. Зрительный цикл (цикл превращений родопсина). Сетчатка позвоночных содержит фоторецепторные клетки двух типов - палочки и колбочки. Палочки приспособлены для зрительного восприятия при слабом свете. Колбочки менее чувствительны, они обеспечивают зрительное восприятие с высокой временной и пространственной разрешающей способностью, и отвечают за цветовосприятие. При дневном свете реакция палочек очень интенсивна (сильна) и зрительное восприятие опосредуется исключительно колбочками. Оба типа клеток содержат структуру, называемую наружным сегментом, содержащим пучок мембранных дисков. Реакции зрительной трансдукции происходят на поверхностях этих дисков. Первой стадией зрительного восприятия является поглощение фотона опсин-пигментной молекулой (родопсин), которое включает изомеризацию хромофора из 11-цис-формы в полностью-трансформу. До то-9 011864 го как восстановится светочувствительность, образующийся полностью транс-ретиналь должен опять превратиться в 11-цис-ретиналь в полиферментном процессе, который происходит в ретинальном пигментном эпителии, монослое клеток, прилегающем к сетчатке. Макулярные или ретинальные дегенерации и дистрофии(дегенерации и дистрофии жлтого пятна). Макулярная дегенерация (также называемая ретинальной дегенерацией) представляет собой заболевание глаза, которое включает разрушение (повреждение) жлтого пятна, центральной области сетчатки. Примерно 85-90% случаев макулярной дегенерации представляют собой "сухую" (атрофическую или ненеоваскулярную) форму. При сухой макулярной дегенерации разрушение сетчатки обусловлено образованием малых жлтых отложений, известных как друзы, под жлтым пятном; помимо этого, аккумуляция липофусцина в RPE ведт к фоторецепторной дегенерации и географической атрофии. Эти явления вызывают истончение и иссушение жлтого пятна. Локализация и величина истончения в сетчатке, вызванного друзами, коррелирует с величиной утраты центрального (макулярного) зрения. Дегенерация пигментированного слоя сетчатки и фоторецепторы, лежащие над друзами, становятся атрофическими и могут вызвать постепенную утрату центрального зрения. Наконец, потеря ретинального пигментного эпителия и нижележащих фоторецепторных клеток приводит к географической атрофии. Введение млекопитающему по меньшей мере одного соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида и 4 метоксифенилретинамида, может уменьшить образование или ограничить распространение фоторецепторной дегенерации и/или географической атрофии в глазу млекопитающего. Только в качестве примера,введение HPR и/или MPR млекопитающему можно применять для лечения фоторецепторной дегенерации и/или географической атрофии в глазу млекопитающего. При "влажной" макулярной дегенерации образуются новые кровеносные сосуды (т.е. неоваскуляризация), улучшая доступ крови к ткани сетчатки, особенно под жлтым пятном, областью сетчатки, отвечающей за наше чткое центральное зрение. Новые сосуды легко поражаются и иногда разрушаются,вызывая кровотечение и поражение окружающей ткани. Хотя влажная макулярная дегенерация возникает только в 10% от всех случаев макулярной дегенерации, она ответственна, примерно, за 90% случаев слепоты, связанной с макулярной дегенерацией (дегенерацией жлтого пятна). Неоваскуляризация может привести к быстрой потере зрения и последующему рубцеванию тканей сетчатки и кровотечению в глазу. Эта покрытая рубцами ткань и кровь создают тмную и искажнную область зрительного восприятия,часто делая глаз практически слепым. Прямые линии становятся волнистыми. Многие люди с макулярной дегенерацией также сообщают о туманном, размытом изображении и слепых пятнах (скотома) в поле своего зрения. Белки, стимулирующие рост, называемые сосудистым эндотелиальным фактором роста, или VEGF, были нацелены на инициирование этого аномального роста сосудов в глазу. Это открытие привело к интенсивному исследованию экспериментальных лекарств, которые ингибируют или блокируют VEGF. Исследования показали, что анти-VEGF агенты можно применять для блокирования или предупреждения аномального роста кровеносных сосудов. Такие анти-VEGF агенты останавливают или ингибируют стимуляцию VEGF, так что рост кровеносных сосудов уменьшается. Такие анти-VEGF агенты могут также с успехом применяться против ангиогенеза или для блокады способности VEGF индуцировать рост кровеносных сосудов под сетчаткой, а также против повреждения кровеносных сосудов. Введение по меньшей мере одного соединения, выбанного из 4-гидроксифенилретинамида и 4 метоксифенилретинамида млекопитающему может уменьшить образование или ограничить распространение влажной формы возрастной макулярной дегенерации в глазу млекопитающего. Только в качестве примера, введение млекопитающему HPR и/или MPR можно применять для лечения влажной формы возрастной макулярной дегенерации в глазу млекопитающего. Аналогично, HPR и/или MPR можно применять для лечения неоваскуляризации и образования аномальных кровеносных сосудов под жлтым пятном глаза млекопитающего. Болезнь Штаргардта представляет собой макулярную дистрофию, которая проявляется как рецессивная форма макулярной дегенерации, начинающаяся в детстве. См., например, Allikmets et al., Science,277:1805-07 (1997); Lewis et al., Am. J. Hum. Genet., 64: 422-34 (1999); Stone el al., Nature Genetics, 20: 32829 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67: 793-799 (2000); Klevering, el al., Ophthalmology, 111: 546-553(2004). Болезнь Штаргардта клинически характеризуется прогрессирующей потерей центрального зрения и прогрессирующей атрофией RPE над жлтым пятном. Мутации в человеческом гене АВСА 4 белка Rim(RmP) ответственны за болезнь Штаргардта. На ранней стадии заболевания у пациентов наблюдается замедленная адаптация к темноте, но в остальном функция палочек является нормальной. Гистологически болезнь Штаргардта ассоциируется с отложением гранул липофусцинового пигмента в клетках RPE. Мутации в АВСА 4 также влекут за собой рецессивный пигментный ретинит, см., например, Cremers et al., Hum. Mol. Genet, 7: 355-62 (1998), рецессивную колбочко-палочковую дистрофию, см. id., и неэкссудативную возрастную макулярную дегенерацию, см. например, Allikmets et al., Science, 277: 180507 (1997); Lewis et al., Am. J. Hum. Genet, 64: 422-34 (1999), хотя частота АВСА 4 мутаций при AMD попрежнему является неопределнной. См. Stone et al., Nature Genetics, 20: 328-29 (1998); Allikmets, Am. J.Hum. Gen., 67: 793-799 (2000); Klevering, et al., Ophthalmology, 111: 546-553 (2004). Так же как и болезнь Штаргардта, эти заболевания ассоциируются с замедленной адаптацией палочек к темноте. См. Steinmetzet al., Brit. J. Ophthalm., 11: 549-54 (1993). Отложения липофусцина в клетках RPE также наблюдаются в заметном количестве при AMD, см. Kliffen et al., Microsc. Res. Tech., 36: 106-22 (1997), и некоторых случаях пигментного ретинита. См. Bergsma el al., Nature, 265: 62-67 (1977). Помимо этого, аутосомная доминантная форма болезни Штаргардта вызывается мутациями в гене ELOV4. См. Karan, et al., Proc. Nail.Acad. Sci. (2005). Кроме того, существует несколько типов макулярных дегенераций, поражающих детей, подростков или взрослых, которые общеизвестны как ранняя или ювенильная макулярная дегенерация. Многие из таких типов являются наследственными и рассматриваются как макулярная дистрофия, а не дегенерация. Некоторые примеры макулярных дистрофий включают палочко-колбочковую дистрофию, корнеальную дистрофию, дистрофию Фукса, макулярную дистрофию Сорсби, болезнь Беста и ювенильный рестеноз, а также болезнь Штаргардта. Химическая терминология Соединения по данному описанию могут иметь один или более хиральных центров, а каждый центр может существовать в R и S конфигурации. Соединения по данному описанию включают все диастереомерные, энантиомерные и эпимерные формы, а также их подходящие смеси. При необходимости можно получать стереоизомеры методами, известными в уровне техники, например разделением стереоизомеров на хиральных хроматографических колонках. Состав по данному описанию включают применение N-оксидов, кристаллических форм (также известных как полиморфные) или фармацевтически приемлемых солей 4-гидроксифенилретинамида и 4 метоксифенилретинамида, а также активных метаболитов этих соединений, имеющих активность такого же типа. Только в качестве примера, известным метаболитом фенретинида является N-(4 метоксифенил)ретинамид, также известный как 4-MPR или MPR. Другим известным метаболитом фенретинида является 4-оксофенретинид. В некоторых случаях соединения могут существовать в виде таутомеров. Все таутомеры входят в объм соединений по данному описанию Кроме того, соединения по данному описанию могут существовать в виде неразрешнных (неразделнных), а также в виде сольватированных форм с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п. Сольватированные формы соединений по данному описанию также рассматриваются как входящие в объм настоящего изобретения. Фармацевтические композиции Другим аспектом изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие 4 гидроксифенилретинамид и 4-метоксифенилретинамид и фармацевтически приемлемый разбавитель,эксципиент или носитель. Термин "фармацевтическая композиция" относится к смеси 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида с другими химическими соединениями, такими как носители, стабилизаторы,разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты, загустители и/или эксципиенты. Фармацевтическая композиция облегчает введение соединения в организм. В уровне техники существуют различные методы введения соединения, включая, но без ограничения, внутривенный, оральный, парентеральный, офтальмологический (глазной), лгочный и топический способы введения. Термин "носитель" относится к относительно нетоксическим соединениям или агентам, которые облегчают введение соединения в клетки или ткани. Термин "разбавитель" относится к химическим соединениям, применяемым для разведения представляющего интерес соединения перед доставкой. Разбавители могут также стабилизировать соединения, так как они могут создать более устойчивую среду. Соли, растворнные в буферных растворах (которые также могут обеспечить контроль или поддержание рН), используются в уровне техники в качестве разбавителей, включая, но без ограничения, фосфатно-солевой буферный раствор. Выражение "физиологически приемлемый" относится к материалу, такому как носитель или разбавитель, который не аннулирует биологическую активность или свойства соединения и является нетоксическим. Выражение "фармацевтически приемлемая соль" относится к производному соединения, которое не вызывает заметного раздражения в организме, в который вводится и не аннулирует биологическую активность или свойства соединения. Фармацевтически приемлемую соль можно получать реакцией 4 гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида с кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота,метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и т.п. Фармацевтически приемлемые соли можно также получать по реакции 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида с основанием с образованием соли, такой как аммониевая соль, соль щелочного металла, например соль натрия или калия, соль щелочно-земельного металла, например соль кальция или магния, соль органического основания, такого как дициклогексиламин, Nметил-D-глюкамин, трис(гидроксиметил)метиламин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и т.п., или другими известными в уровне техники методами."Метаболит" соединения по данному описанию представляет собой производное этого соединения,образующееся при метаболизме (в процессе обмена веществ) соединения (когда соединение метаболизи- 11011864 руется). Выражение "активный метаболит" относится к биологически активному производному соединения, образующемуся при метаболизме соединения. Выражение "метаболизируется" относится к множеству (ряду) процессов (включая, но без ограничения, реакции гидролиза и реакции, катализируемые ферментами), в результате которых конкретное вещество изменяется в организме. Таким образом, ферменты могут вызывать специфические структурные изменения соединения. Например, цитохром Р 450 катализирует различные реакции окисления и восстановления, тогда как уридиндифосфатглюкуронилтрансферазы катализируют перенос молекулы активированной глюкуроновой кислоты на ароматические спирты, алифатические спирты, карбоновые кислоты, амины и свободные сульфгидрильные группы. Дополнительные сведения о метаболизме можно получить в The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9thEdition, McGraw-Hill (1996). Метаболиты соединений по данному описанию можно идентифицировать либо введением соединений хозяину и анализом образцов ткани хозяина, или инкубацией соединений с печночными клеткамиin vitro и полученных соединений. Оба метода общеизвестны в уровне техники. Только в качестве примера, MPR является известным метаболитом HPR. MPR систематически аккумулируется в организме пациентов, которых постоянно лечат с помощью HPR. Одной из причин того,что MPR систематически аккумулируется, является только то, что MPR медленно метаболизируется (если вообще метаболизируется), тогда как HPR метаболизируется в MPR. Кроме того, MPR может подвергаться относительно медленному клиренсу. Таким образом, (а) при применении и определении биодоступности HPR следует принимать во внимание фармакокинетику и фармакодинамику HPR, (б) MPR является более устойчивым к метаболизму, чем HPR, и (в) MPR может стать биодоступным скорее, чемHPR после всасывания. Другим известным метаболитом фенретинида является 4-оксофенретинид.MPR можно также рассматривать как активный метаболит. Как показано на фиг. 9 и 10, MPR (как иHPR) может связываться с ретинолсвязывающим белком (RBP) и предупреждать связывание RBP с транс-эритрином (TTR). В результате, когда либо HPR, либо MPR вводят пациенту, в качестве одной из особенностей ожидается, что MPR будет аккумулироваться и связываться с RBP и ингибировать связывание ретинола с RBP, a также связывание RBP с TTR. Соответственно, MPR может (а) служить в качестве ингибитора связывания ретинола с RBP, (б) служить в качестве ингибитора связывания RBP с TTR,(в) ограничивать транспорт ретинола в некоторые ткани, включая глазные ткани, и (г) переноситься с помощью RBP в некоторые ткани, включая глазные ткани. Очевидно, MPR связывается с RBP слабее,чем HPR, таким образом, является менее сильным ингибитором связывания ретинола с RBP. Тем не менее, ожидается, что как MPR, так и HRP будут ингибировать, приблизительно эквивалентно, связываниеRBP с TTR. Кроме того, предполагается, что MPR (аналогично HPR) будет связываться с белками зрительного цикла, включая LRAT и CRALBP. В этом смысле MPR действует таким же образом и может служить в качестве терапевтического агента в способах и композициях по данному описанию. Термин "пролекарство" относится к агенту, который превращается в исходное соединение in vivo. Пролекарства часто применяются потому, что в некоторых ситуациях их проще применять, чем исходное лекарство. Они могут, например, быть биодоступными при оральном применении, тогда как исходное(материнское) лекарство не является таковым. Пролекарство может также иметь повышенную по сравнению с исходным лекарством растворимость в фармацевтических композициях. Примером, без ограничения, пролекарства является соединение (4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид),которое применяют в качестве сложного эфира ("пролекарства") с целью облегчить перенос через клеточную мембрану, где растворимость в воде является вредной для подвижности, но который затем в процессе обмена веществ гидролизуется до карбоновой кислоты, активной частицы, как раз внутри клетки, где растворимость в воде является полезной. Другим примером пролекарства может служить короткий пептид (полиаминокислота), связанный с кислотной группой, где пептид метаболизируется с высвобождением активной группы. Соединения по данному описанию можно вводить человеку как таковые (per se) или в виде фармацевтических композиций, в которых они смешиваются с другими ингредиентами, в виде комбинированной терапии или с подходящим(и) носителем (носителями) или эксципиентом (эксципиентами). Способы приготовления и применения соединений по настоящей заявке можно найти в "Remington: The Scienceand Practice of Pharmacy", 20th ed. (2000). Способы введения Подходящие способы введения могут включать, например, оральное, ректальное, трансмукозное,трансдермальное, лгочное, глазное или кишечное введение; парентеральную доставку, включающую внутримышечную, подкожную, внутривенную, внутримозговую инъекции, а также интратекальную, непосредственную внутрижелудочковую, интраперитонеальную, интраназальную или внутриглазную инъекции. Или же можно вводить соединение скорее местным, нежели системным способом, например инъекцией соединения непосредственно в орган, часто виде депо-препаратов или виде препарата пролонгированного действия. Кроме того, можно вводить лекарство в целенаправленной системе доставки, например в липосоме, покрытой специфическим в отношении органа антителом. Липосомы нацеливаются на орган и селективно захватываются органом. Кроме того, лекарство можно доставлять в виде препара- 12011864 та с быстрым высвобождением, в виде препарата с длительным высвобождением или в виде препарата с промежуточным высвобождением лекарственного вещества. Композиция/Препарат (Рецептура) Фармацевтические композиции, содержащие 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид, можно готовить способом, который сам по себе известен, например обычными методами смешения, растворения, грануляции, приготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, улавливания и прессования. Фармацевтические композиции можно готовить обычным способом, используя один или более фармакологически приемлемых носителей, содержащих эксципиенты или добавки, которые упрощают процесс изготовления препаратов из активных соединений и которые можно применять в фармации. Соответствующий препарат зависит от выбранного способа применения. Любой из общеизвестных методов, носителей и эксципиентов можно применять, если он подходит и изучен в уровне техники; например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, см. выше. 4-Гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид можно вводить различными способами,включая все виды локальной доставки в глаз. Кроме того, их можно вводить системно, например орально или внутривенно. Например соединения можно вводить топически в глаз ил можно готовить в виде различных глазных композиций, пригодных для топического введения, таких как растворы, суспензии, гели или мази. Таким образом, "глазное применение (введение)" охватывает, но без ограничение, внутриглазную инъекцию, субретинальную инъекцию (под сетчатку), интравитреальную инъекцию, периокулярную инъекцию, инъекции в субконъюктивальный мешок, ретробульбарные инъекции, внутрикамерные инъекции (включая инъекции в переднюю или стекловидную камеру глазного яблока), инъекции или имплантаты под пространство Тенона, глазные растворы, глазные суспензии, глазные мази, глазные имплантаты и глазные вставки, внутриглазные растворы, применение ионтофореза, включение в хирургические растворы для орошения, и тампоны (только в качестве примера, пропитанный ватный тампон,введнный в свод). Введение композиции в глаз обычно приводит к непосредственному контакту агентов с роговицей,через которую проходит по меньшей мере часть введнных агентов. Часто эффективное время удержания композиции в глазу составляет около 2-24 ч, обычно около 4-24 ч и наиболее часто около 6-24 ч. Композиция, содержащая 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид может в качестве иллюстрации быть в виде жидкости, когда агенты присутствуют в растворе, суспензии или в том и другом. Обычно, когда композицию вводят в виде раствора или суспензии, первая порция агента находится в растворе, а вторая порция агента присутствует в виде макрочастиц в виде суспензии в жидкой матрице. В некоторых вариантах изобретения жидкая композиция может включать образование геля. В других вариантах изобретения жидкая композиция является водной. Или же, композиция может быть в виде мази. Подходящими композициями могут являться водный раствор, суспензия или раствор/суспензия, которые могут быть в виде глазных капель. Нужную дозу можно вводить, капая в глаз известное число капель. Например, при объме капли 25 мкл введение 1-6 капель доставит 25-150 мкл композиции. Водные композиции обычно содержат около 0,01-50%, чаще около 0,1-20%, ещ чаще около 0,2-10% и наиболее часто около 0,5-5%, вес./об., 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида. Обычно водные композиции имеют офтальмологически приемлемые рН и осмолярность. "Офтальмологически приемлемый" ("приемлемый для глаза") в отношении препарата, композиции или ингредиента обычно означает отсутствие устойчивого вредного действия на пролечиваемый глаз или его функцию или на общее состояние здоровья проходящего лечение субъекта. Временные эффекты, такие как слабое раздражение или чувство "жжения", обычны для местного введения агентов в глаз и соответствуют "офтальмологически приемлемым" рассматриваемым препарату, композиции или ингредиенту. Применимая водная суспензия может также содержать один или более полимеров или суспендирующих агентов. Пригодные полимеры включают водорастворимые полимеры, такие как целлюлозные полимеры, например гидроксипропилметилцеллюлозу, и не растворимые в воде полимеры, такие как сшитые карбоксилсодержащие полимеры. Подходящие композиции могут также содержать офтальмологически приемлемый мукоадгезивный полимер, выбранный, например, из карбоксиметилцеллюлозы,карбомера (полимера акриловой кислоты), полиметилметакрилата, полиакриламида, поликарбофила,сополимера акриловой кислоты и бутилакрилата, альгината натрия и декстрана. Подходящие композиции могут также включать офтальмологически приемлемые солюбилизирующие агенты с целью способствовать растворимости 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида. Термин "солюбилизирующий агент" обычно включает агенты, которые приводят к образованию мицеллярного раствора или истинного раствора агента. Некоторые офтальмологически приемлемые неионные поверхностно-активные вещества (сурфактанты), например полисорбат 80, могут применяться в качестве солюбилизирующих агентов, как и офтальмологически приемлемые гликоли, полигликоли, например полиэтиленгликоль 400, и простые эфиры гликолей. Пригодные композиции могут также включать один или более офтальмологически приемлемых корректирующих pН агентов или буферизующих агентов, включая кислоты, такие как уксусная, борная,- 13011864 лимонная, молочная, фосфорная и хлористо-водородная кислоты; основания, такие как гидроксид натрия, фосфат натрия, борат натрия, цитрат натрия, ацетат натрия, лактат натрия и трис-гидроксиметиламинометан; и буферы, такие как цитрат/декстроза, бикарбонат натрия и хлорид аммония. Такие кислоты, основания и буферы вводят в количестве, требующемся для поддержания рН композиции в офтальмологически приемлемом интервале. Применимые композиции могут также включать одну или более офтальмологически приемлемых солей в количестве, требующемся для того, чтобы довести осмолярность композиции до офтальмологически приемлемого интервала значений. Такие соли включают соли с натрием, калием или аммонием в качестве катионов и с хлоридом, цитратом, аскорбатом, боратом, фосфатом, бикарбонатом, сульфатом,тиосульфатом или бисульфитом в качестве анионов; подходящие соли включают хлорид натрия, хлорид калия, тиосульфат натрия, бисульфит натрия и сульфат аммония. Другие подходящие композиции могут также включать один или более офтальмологически приемлемых консервантов для ингибирования. Подходящие консерванты включают ртутьсодержащие вещества, такие как мерфен и тиомерсаль; стабилизированный диоксид хлора; и четвертичные аммониевые соединения, такие как бензалкония хлорид, цетилтриметиламмония бромид и цетилпиридиния хлорид. Другие пригодные композиции могут включать один или более офтальмологически приемлемых сурфактантов для повышения физической стабильности или для других целей. Подходящие неионные сурфактанты (ПАВ) включают полиоксиэтилен глицериды жирных кислот и растительные масла, например полиоксиэтилен (60) гидрированное касторовое масло; и полиоксиэтилен простые алкиловые и алкилфениловые эфиры, например октоксинол 10, октоксинол 40. Другие подходящие композиции могут включать, только в качестве примера, аскорбиновую кислоту и метабисульфит натрия. Композиции в виде водных суспензий могут быть упакованы в одноразовые (не герметизируемые повторно) контейнеры на стандартную дозу. Или же можно использовать герметизирующиеся повторно контейнеры на несколько доз, в этом случае в состав композиции обычно вводят консервант. Офтальмологическая композиция может быть также в тврдом виде, е можно помещать между глазом и веком или в конъюктивальный мешок, где он высвобождает агент. Высвобождение происходит в глазную жидкость, которая омывает поверхность роговицы, или непосредственно в саму роговицу, с которой тврдая композиция обычно находится в тесном контакте. Тврдые композиции (изделия), пригодные для имплантации в глаз таким образом, обычно состоят, прежде всего, из полимеров и могут быть биоразрушаемыми и не биоразрушаемыми. Для внутривенного введения 4-гидроксифенилретинамид и 4-метоксифенилретинамид можно приготовить в виде водных растворов, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнка, раствор Рингера или физиологический солевой буферный раствор. Для трансмукозного введения в препарате используют смачивающие жидкости, подходящие для проникновения через данный барьер. Такие смачивающие жидкости общеизвестны в уровне техники. Для других парентеральных инъекций соответствующие препараты могут включать водные или неводные растворы, предпочтительно, с физиологически совместимыми буферами или эксципиентами. Такие эксципиенты общеизвестны в технике. Подходящей рецептурой для солюбилизации больших количеств соединений являются, только в качестве примера, положительно, отрицательно заряженные или незаряженные (нейтральные) фосфолипиды или смешанные системы липидных агрегатов соль желчной кислоты/фосфатидилхолин, такие как описанные в Li, C. Y., Pharm. Res. 13: 907-913 (1996). Другая рецептура с соединениями, которую можно использовать для той же цели, включает применение растворителя, содержащего спирт, такой как этанол, в комбинации с алкоксилированным касторовым маслом. См., например, опубликованную патентную заявку США 2002/0183394. Или же рецептура для солюбилизации представляет собой эмульсию,состоящую из липоида, диспергированного в водной фазе, стабилизирующее количество неионного сурфактанта (ПАВ), необязательно растворитель и, необязательно, изотонический агент. Ещ одна рецептура для солюбилизации содержит включает кукурузное масло и неионный сурфактант (ПАВ). См. патент США 4665098. Ещ одна рецептура, включает лизофосфатидилхолин, моноглицерид и жирную кислоту. См. патентСША 4874795. Ещ одна рецептура включает муку, подсластитель и смачивающее средство. См. опубликованную Международную заявку WO 2004/069203. Ещ одна рецептура для улучшения солюбилизации включает димиристоил фосфатидилхолин, соевое масло, трет-бутиловый спирт и воду. См. опубликованную патентную заявку США 2002/0143062. Для орального введения 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида их можно легко приготовить, смешивая активные соединения с фармацевтически приемлемыми общеизвестными в уровне техники носителями или эксципиентами. Такие носители способствуют приготовлению из соединений по данному описанию таблеток, порошков, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, эликсиров, суспензий и т.п., для проглатывания пациентом, проходящим лечение. Фармацевтические препараты для орального применения можно получать, смешивая один или более тврдых эксципиентов с одним или более соединений по данному описанию, необязательно размешивая полученную смесь и обрабатывая смесь гранул, после добавления, при необходимости, подходящих добавок для получения сердцеви- 14011864 ны таблеток или драже. Подходящими эксципиентами являются, в частности, сахара, включая лактозу,сахарозу, маннит или сорбит; препараты целлюлозы, например, такие как маисовый крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, камедь трагаканта, метилцеллюлоза,микрокристаллическая целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза; или другие, такие как поливинилпирролидон (PVP или повидон) или фосфат кальция. При желании можно добавлять агенты, способствующие измельчению, такие как сшитая натрий кроскармеллоза, агар или альгиновая кислота или е соль, такая как альгинат натрия. Сердцевина драже покрывается подходящей оболочкой. Для этой цели можно применять концентрированные растворы сахара, которые, необязательно, могут содержать аравийскую камедь (гуммиарабик), тальк, поливинилпирролидон, гель карбопола, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, растворы лака и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Красители или пигменты можно добавлять в покрытия таблеток или драже для идентификации или для характеристики различных доз комбинаций активных соединений. Фармацевтические препараты, которые можно использовать перорально, включают наполненные желатиновые капсулы, а также мягкие заплавленные желатиновые капсулы и пластификатор, такие как глицерин или сорбит. Наполненные капсулы могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, связующим, таким как крахмалы, и/или смазками, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Кроме того, можно добавлять стабилизаторы. Все рецептуры для орального применения должны быть в виде лекарственных форм, пригодных для такого применения. Для трансбуккального или подъязычного (сублингвального) применения композиции могут быть в виде таблеток, пастилок или гелей, приготовленных соответствующим образом. Для другой подходящей рецептуры с применением 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида используются устройства для трансдермальной доставки ("пластыри"). Такие трансдермальные пластыри можно использовать для обеспечения непрерывной или дискретной инфузии соединений по настоящему изобретению в контролируемых количествах. Конструкция и применение трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов общеизвестна в технике. См., например, патент США 5023252. Такие пластыри можно создать для непрерывной, "пульсирующей" доставки фармацевтических агентов или доставки фармацевтических агентов по требованию. Кроме того, трансдермальную доставку 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида можно осуществлять с помощью ионтофоретических пластырей и т.п. Трансдермальные пластыри могут обеспечить контролируемую доставку соединений. Скорость всасывания можно замедлить, используя мембраны, контролирующие скорость, или помещая соединение в полимерную матрицу или гель. Напротив,для повышения скорости всасывания можно применять энхансеры всасывания. Рецептуры, пригодные для трансдермального применения, могут быть в виде дискретных пластырей и могут быть липофильными эмульсиями или буферами, водными растворами, растворнными и/или диспергированными в полимере или вязком материале. Трансдермальные пластыри можно помещать на различные участки тела пациента, включая глаз. Другие ионтофоретические устройства, которые можно использовать для глазного применения 4 гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, представляют собой Eyegate аппликатор,созданный и запатентованный Optis France S. A., и ионтофоретическая система Ocuphor Ocular, созданная Iomed, Inc. Для введения с помощью ингаляции 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид обычно доставляются в виде аэрозоля (спрея) из герметичных упаковок под давлением или небулайзера,с применением подходящего газа-вытеснителя, например дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, диоксида углерода или другого подходящего газа. В случае сжатого аэрозоля лекарственную дозу можно определять с помощью клапана для доставки отмеренного количества. Можно приготовить для применения в ингаляторе или инсуффляторе капсулы и ампулы, например, из желатина,содержащие порошковую смесь соединения и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал. Соединения можно приготовить для парентерального применения в виде инъекции, например болюсной инъекции или непрерывной инфузии. Препараты (рецептуры) для инъекции могут быть в виде разовой дозы лекарственной формы, например в ампулах, или многодозовых флаконах с добавлением консервантов. Композиции могут быть в таких формах как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях и могут содержать такие агенты, как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. Фармацевтические рецептуры для парентерального введения включают водные растворы активных соединений в водорастворимой форме. Кроме того, суспензии активных соединений также можно приготовить в виде масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или синтетические эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать ве- 15011864 щества, которые повышают вязкость суспензии, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Необязательно, суспензия может также содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость соединений, для приготовления высококонцентрированных растворов. Или же активный ингредиент может быть в виде порошка для смешения перед употреблением с подходящим носителем, например стерильной апирогенной водой. Соединения можно также готовить в виде ректальных композиций, таких как ректальные гели, ректальные пены, ректальные аэрозоли, суппозитории или удерживающие клизмы, например, содержащие подходящую основу суппозиториев, такую как масло какао или другие глицериды. Помимо вышеописанных рецептур соединения могут также готовиться в виде депо-препаратов. Такие препараты пролонгированного действия можно вводить имплантацией (например, подкожной или внутримышечной) или внутримышечной инъекцией. Так, например, соединения можно готовить с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в подходящем масле), или ионообменными смолами, или в виде слаборастворимых производных, например в виде слаборастворимой соли. Инъецируемые депо-формы можно получать, создавая микроинкапсулированные матрицы (также известных как микрокапсульные матрицы) 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида в биоразрушаемых полимерах. В зависимости от соотношения лекарства к полимеру и природы конкретного используемого полимера скорость высвобождения лекарства можно контролировать. Депопрепараты для инъекций можно также приготовить, заключая лекарство в липосомы или микроэмульсии. Только в качестве примера, депо-препараты для заднего юкстасклерального введения можно использовать в качестве способа применения 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида. Склера представляет собой тонкий лишнный сосудов слой, состоящий из высокоупорядоченной коллагеновой сети, окружающей большую часть глаза позвоночных, так как склера лишена сосудов, е можно использовать в качестве природного депо для хранения, из которого инъецированный материал не может быстро удаляться или выводиться из глаза. Рецептура, применяемая для введения соединения в склеральный слой глаза, может быть в любой форме, пригодной для введения в склеру инъекцией с помощью иглы малого диаметра, подходящей для инъекции в склеральный слой. Примерами форм, применимых в виде инъекций, являются растворы, суспензии или коллоидные суспензии. Фармацевтический носитель для гидрофобных соединений (4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида) представляет собой систему сорастворителей, содержащую бензиловый спирт, неполярный сурфактант (ПАВ), смешивающийся с водой (растворимый в воде) органический полимер и водную фазу. Система сорастворителей может содержать 10% этанола, 10% полиэтиленгликоля 300, 10% полиэтиленгликоля 40 касторового масла (ПЭГ-40 касторовое масло) и 70% воды. Эта система сорастворителей хорошо растворяет гидрофобные соединения, а сама является малотоксичной при системном применении. Естественно, пропорции в системе сорастворителей могут заметно меняться, не нарушая е свойств растворимости и токсичности. Кроме того, единичные элементы компонентов системы сорастворителей могут меняться, например вместо ПЭГ-40 касторового масла могут использоваться другие низкотоксические неполярные ПАВ, размер фракции полиэтиленгликоля 300 может меняться; полиэтиленгликоль могут заменить другие биосовместимые полимеры, например поливинилпирролидон; и в водный раствор могут быть введены другие сахара или полисахариды. Или же можно применять другие системы доставки гидрофобных фармацевтических соединений. Липосомы и эмульсии являются общеизвестными примерами наполнителей или носителей для гидрофобных лекарств. Некоторые органические растворители, такие как N-метилпирролидон, также можно использовать, хотя обычно ценой большей токсичности. Кроме того, соединения можно доставлять с помощью системы с пролонгированным высвобождением, такой как полупроницаемые матрицы из тврдых гидрофобных полимеров, содержащих терапевтический агент. Известны различные материалы с пролонгированным высвобождением, и их хорошо знают специалисты в данной области техники. Капсулы с пролонгированным высвобождением могут, в зависимости от их химической природы, высвобождать соединения от нескольких недель до более 100 дней. В зависимости от химической природы и биологической устойчивости терапевтического реагента можно применять другие методы для стабилизации белка. Один препарат для введения 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида используется с фенретинидом при лечении нейробластомы, простаты и рака яичника, и выпускается Avanti Polar Lipids, Inc. (Alabaster, Alabama) под названием Lym-X-Sorb. Этот препарат, который содержит упорядоченную липидную матрицу, включающую лизофосфатидилхолин, моноглицерид и жирную кислоту,создан для улучшения доступности фенретинида при оральном введении. Такой препарат, например оральный препарат, который включает лизофосфатидилхолин, моноглицерид и жирную кислоту, предложен также для улучшения биодоступности 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида, для лечения офтальмологических заболеваний и состояний, включая, но без ограничения, макулярные дегенерации и дистрофии. Все препараты по данному описанию можно улучшить с помощью антиоксидантов, металлхелатирующих агентов, тиолсодержащих соединений и других обычных стабилизирующих агентов.- 16011864 Примеры таких стабилизирующих агентов включают, но без ограничения: (а) около 0,5-2% вес./об. глицерина, (б) около 0,1-1% вес./об. метионина; (в) около 0,1-2% вес./об. монотиоглицерина, (г) около 1-10 мМ EDTA, (д) около 0,01-2% вес./об. аскорбиновой кислоты, (е) 0,003-0.02% вес./об. полисорбата 80, (ж) 0,001-0.05% вес./об. полисорбата 20, (з) аргинин, (и) гепарин, (к) декстран сульфат, (л) циклодекстрины,(м) пентозан полисульфат и другие гепариноиды, (н) двухвалентные катионы, такие как катионы магния и цинка; или (о) их комбинации. 4-Гидроксифенилретинамид и 4-метоксифенилретинамид можно получать в виде солей с фармацевтически совместимыми противоионами. Фармацевтически совместимые соли можно получать со многими кислотами, включая, но без ограничения, хлористо-водородную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли обычно более растворимы в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие формы свободной кислоты или основания. Способы лечения, дозы и комбинированная терапия Термин "млекопитающее" обозначает всех млекопитающих, включая человека. Млекопитающие включают, только в качестве примера, человека, нечеловеческих приматов, коров, собак, кошек, коз,овец, свиней, крыс, мышей и кроликов. Термин "эффективное количество" по данному описанию относится к такому количеству вводимого соединения, которое до некоторой степени облегчает один или более симптомов заболевания, состояния или нарушения, которое подвергается лечению. Композиции, содержащие соединение(я) по данному описанию, можно применять для профилактического и/или терапевтического лечения. Термин "лечение" применяется для обозначения любого профилактического и/или терапевтического лечения. При терапевтическом применении композиции вводят пациенту, уже страдающему заболеванием, состоянием или нарушением, в количестве, достаточном для излечения или, по меньшей мере, частичного прекращения симптомов заболевания, нарушения или состояния. Количества, эффективные для такого применения, зависят от тяжести и течения заболевания,нарушения или состояния, предыдущего лечения, общего состояния здоровья пациента и реакции на лекарства и оценки лечащего врача. Компетентностью в данной области техники считается определение таких терапевтически эффективных количеств обычными экспериментами (например, клиническими испытаниями с повышением дозы). При профилактических применениях композиции, содержащие соединения по данному описанию,вводят пациенту, восприимчивому к конкретному заболеванию, нарушению или состоянию или имеющему иной повышенный риск конкретного заболевания, нарушения или состояния. Такое количество определяют как "профилактически эффективное количество или доза". При таком применении точные количества зависят также от состояния здоровья пациента, его массы и т.п. Компетентностью в данной области техники считается определение таких профилактически эффективных количеств обычными экспериментами (например, клиническими испытаниями с повышением дозы). Термины "повышать" или "повышение" означают увеличение или пролонгирование либо эффективности, либо длительности нужного эффекта. Так, что касается усиления эффекта (повышения эффективности) терапевтических агентов, термин "повышение" относится к способности увеличивать или пролонгировать либо эффективность, либо длительность действия других терапевтических агентов на систему. "Количество, эффективное для усиления (повышения)", по данному описанию, относится к количеству, достаточному для усиления эффекта другого терапевтического агента в заданной системе. В применении к пациенту количества, эффективные для этой цели зависят от тяжести и течения заболевания,нарушения или состояния, предыдущего лечения, общего состояния здоровья пациента и реакции на лекарства и оценки лечащего врача. В том случае, когда состояние здоровья пациента не улучшается, по решению врача соединения можно вводить постоянно, т.е. в течение длительного периода, включая период в течение всей жизни пациента, чтобы ослабить или иным способом регулировать или ограничить симптомы заболевания или состояния пациента. В том случае, когда состояние пациента улучшается, по решению врача лекарства можно давать постоянно; или же дозу вводимого лекарства можно временно снизить или прим можно на некоторое время прекратить (т.е. "лекарственные каникулы"). Продолжительность лекарственных каникул может меняться от 2 дней до 1 года, включая, например, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 15 дней, 20 дней, 28 дней, 35 дней, 50 дней, 70 дней, 100 дней, 120 дней, 150 дней, 180 дней, 200 дней, 250 дней, 280 дней, 300 дней, 320 дней, 350 дней и 365 дней. Уменьшение дозы в течение лекарственных каникул может составлять 10-100%, включая, например, только 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50,55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 и 100%. После улучшения состояния пациента при необходимости вводят поддерживающую дозу. Затем дозу или частоту введения или обе можно снизить, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором улучшение, достигнутое в результате лечения заболевания, нарушения или состояния, сохраняется. Однако пациенту может потребоваться промежуточное длительное лечение при любом повторении симптомов. Количество данного агента, которое соответствует такому количеству, меняется в зависимости от- 17011864 таких факторов, как конкретное соединение, состояние и тяжесть заболевания, особенности (например,масса) субъекта или хозяина, нуждающегося в лечении, но, тем не менее, может определяться обычным способом, известным в уровне техники, в соответствии с обстоятельствами, включая, например, конкретный вводимый агент, способ применения, пролечиваемое состояние и субъект или хозяин, которого следует лечить. Однако обычно дозы, применяемые для лечения взрослого человека, составляют 0,025000 мг в день, предпочтительно 1-1500 мг в день. Нужную дозу можно обычно вводить в виде разовой дозы или в виде дробных доз, вводимых одновременно (или через короткие промежутки времени) или через соответствующие интервалы, например, в виде двух, трх, четырх или более субдоз в день. В некоторых случаях может быть целесообразнее вводить по меньшей мере одно из соединений по данному описанию (или фармацевтически приемлемые соль, сложный эфир, амид, пролекарство или сольват) в комбинации с другим терапевтическим агентом. Только в качестве примера, если один из побочных эффектов, испытываемых пациентом в результате прима одного из соединений по данному описанию, является воспаление, то целесообразнее вводить противовоспалительный агент в комбинации с первичным терапевтическим агентом. Или, только в качестве примера, терапевтическую эффективность одного из соединений по данному описанию можно повысить, вводя адъювант (т.е. сам по себе адъювант может оказывать минимальное терапевтическое воздействие, но в комбинации с другим терапевтическим агентом общее благоприятное терапевтическое воздействие на пациента увеличивается). Или, только в качестве примера, благоприятное воздействие, испытываемое пациентом, можно повысить, применяя одно из соединений по данному описанию с другим терапевтическим агентом (что также включает схему лечения), который также оказывает благотворное терапевтическое воздействие. Только в качестве примера, при лечении макулярной дегенерации, включающем введение одного из соединений по данному описанию, повышенного благоприятного терапевтического воздействия можно достичь, давая пациенту также другие терапевтические агенты или терапевтические средства для лечения макулярной дегенерации. В любом случае, вне зависимости от заболевания, нарушения или состояния, лечение которого осуществляется, общее благоприятное терапевтическое воздействие, испытываемое пациентом, может быть просто аддитивным воздействием двух терапевтических агентов или же синергическим воздействием. Конкретные неограничивающие примеры возможной комбинированной терапии включают применение по меньшей мере одного соединения, выбранного из 4-гидроксифенилретинамида и 4-метоксифенилретинамида, с индукторами оксида азота (NO), статинами, отрицательно заряженными фосфолипидами, антиоксидантами, минералами, противовоспалительными агентами, антиангиогенными агентами, ингибиторами матриксных металлопротеаз и каротиноидами. В некоторых примерах подходящие комбинированные агенты могут относиться к нескольким категориям (только в качестве примера, лютеин представляет собой антиоксидант и каротиноид). Далее, 4-гидроксифенилретинамид или 4 метоксифенилретинамид можно также вводить с добавками, которые могут оказывать благотворное воздействие на пациента, включая, только в качестве примера, циклоспорин А. Кроме того, 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид можно также применять в комбинации с процедурами, которые могут оказать дополнительное или синергическое благотворное воздействие на пациента, включая, но только в качестве примера, применение экстракорпореального реофереза (также известного как мембранная дифференциальная фильтрация), применение имплантируемых миниатюрных телескопов, лазерной фотокоагуляции друз и терапии с помощью микростимуляции. Показано, что применение антиоксидантов благотворно воздействует на пациентов с макулярными дегенерациями и дистрофиями. См., например, Arch. Ophthalmol, 119: 1417-36 (2001); Sparrow et al., J.Biol. Chem., 278: 18207-13 (2003). Примеры подходящих антиоксидантов, которые можно использовать в комбинации по меньшей мере одним соединением, выбранным из 4-гидроксифенилретинамида или 4 метоксифенилретинамида, включают витамин С, витамин A, бета-каротин и другие каротиноиды, кофермент Q, 4-гидрокси-2,2,6,6-тетраметилпиридин-N-оксил (также известный как темпол), лютеин, бутилированный гидрокситолуол, ресвератрол, аналог тролокса (PNU-83836-Е) и экстракт черники. Показано также, что применение некоторых минералов благотворно влияет на больных макулярными дегенерациями и дистрофиями. См., например, Arch. Ophthalmol, 119: 1417-36 (2001). Примеры подходящих минералов, которые можно применять в комбинации по меньшей мере с одним соединением, выбранным из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, включают медьсодержащие минералы, такие как оксид меди (только в качестве примера); цинксодержащие минералы, такие как оксид цинка (только в качестве примера); и селенсодержащие соединения. Показано также, что применение некоторых отрицательно заряженных фосфолипидов положительно влияет на пациентов с макулярными дегенерациями и дистрофиями. См., например, ShabanRichter,Biol. Chem., 383: 537-45 (2002); Shaban et al., Exp. Eye Res., 75: 99-108 (2002). Примеры подходящих отрицательно заряженных фосфолипидов, которые можно применять в комбинации по меньшей мере с одним соединением, выбранным из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, включают кардиолипин и фосфатидилглицерин. Положительно заряженные и/или нейтральные (незаряженные) фосфолипиды могут также оказывать благотворное воздействие на больных макулярными дегенерациями и дистрофиями при применении в комбинации с 4-гидроксифенилретинамидом или 4 метоксифенилретинамидом.- 18011864 Применение некоторых каротиноидов согласуется с сохранением фотопротекции, необходимой в фоторецепторных клетках. Каротиноиды являются природными пигментами от жлтого до красного цвета терпеноидного ряда, которые можно обнаружить в растениях, водорослях, бактериях и некоторых животных, таких как птицы и моллюски и ракообразные. Каротиноиды представляют собой большой класс молекул, из которых идентифицировано более 600 природных каротиноидов. Каротиноиды включают углеводороды (каротины) и их кислородные производные, содержащие спиртовые группы (ксантофиллы). Они включают актиниоэритрол, астаксантин, кантаксантин, капсантин, капсарубин, -8'апокаротиналь (апокаротиналь), -12'-апокаротиналь, -каротин, -каротин (смесь - и -каротинов), каротины, -цирптоксантин, лютеин, ликопен, виолеритрин, зеаксантин и сложные эфиры их гидроксильных или карбоксильных производных. Многие каротиноиды встречаются в природе в виде цис- и транс-изомерных форм, тогда как синтетические соединения часто являются рацемической смесью. У людей сетчатка селективно аккумулирует в основном два каротиноида: зеаксантин и лютеин. Полагают, что эти два каротиноида способствуют защите сетчатки, так как они являются сильными антиоксидантами и поглощают синий свет. Исследования, проведнные на переплках, показали, что в группах,находящихся на диете с недостатком каротиноидов, сетчатка имеет низкие концентрации зеаксантина и страдает тяжлым световым поражением, что подтверждается очень большим числом апоптотических фоторецепторных клеток, тогда как в группе с высокой концентрацией зеаксантина наблюдается минимальное поражение. Примеры каротиноидов, подходящих для комбинирования по меньшей мере с одним соединением, выбранным из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, включают лютеин и зеаксантин, а также любой из вышеуказанных каротиноидов. Подходящие индукторы оксида азота включают соединения, которые стимулируют эндогенныйNO, или повышают уровни эндогенного эндотелиального расслабляющего фактора (EDRF) in vivo, или являются субстратами для синтазы оксида азота. Такие соединения включают, например, L-аргинин, Lгомоаргинин, N-гидрокси-L-аргинин, включая их нитрозированные и нитрозилированные аналоги (например, нитрозированный L-аргинин, нитрозилированный L-аргинин, нитрозированный N-гидрокси-Lаргинин, нитрозилированный N-гидрокси-L-аргинин, нитрозированный L-гомоаргинин и нитрозилированный L-гомоаргинин), предшественники L-аргинина и/или их физиологически приемлемые соли, в том числе, например, цитруллин, орнитин, глутамин, лизин, полипептиды, содержащие по меньшей мере одну из этих аминокислот, ингибиторы фермента аргиназы (например, N-гидрокси-L-аргинин и 2(S)амино-6-бороногексановая кислота) и субстраты для синтазы оксида азота, цитокины, аденозин, брадикинин, калретикулин, бисакодил и фенолфталеин. EDRF является фактором расслабления сосудов, секретируемым эндотелием, и идентифицируется как оксид азота или родственное ему производное (Palmeret ah, Nature, 327: 524-526 (1987); Ignarro et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84: 9265-9269 (1987. Статины служат в качестве агентов, снижающих содержание липидов и/или подходящих индукторов оксида азота. Кроме того, показана связь между применением статинов и замедлением начала или развития макулярной дегенерации. G. McGwin, et al., British Journal of Ophthalmology, 87: 1121-25 (2003). Таким образом, статины могут оказать благотворное воздействие на пациента, страдающего офтальмологическим состоянием (таким как макулярные дегенерации и дистрофии и дистрофии сетчатки), при введении в комбинации с 4-гидроксифенилретинамидом или 4-метоксифенилретинамидом. Подходящие статины включают, только в качестве примера, розувастатин, питивастатин, симвастатин, правастатин,церивастатин, мевастатин, велостатин, флувастатин, компактин, ловастатин, далвастатин, флуиндостатин, аторвастатин, аторвастатин кальций (геми(полу)кальциевую соль аторвастатина) и дигидрокомпактин. Подходящие противовоспалительные агенты, с которыми могут применяться 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид, включают, только в качестве примера, аспирин и другие салицилаты, кромолин, недокромил, теофиллин, зилейтон, зафирлукаст, монтелукаст, пранлукаст, индометацин и ингибиторы липоксигеназы; нестероидные противовоспалительные средства (НСПВС, NSAID)(такие как ибупрофен и напроксин); преднизон, дексаметазон, ингибиторы циклооксигеназы (т.е. ингибиторы СОХ-1 и/или СОХ-2, такие как напроксен и целебрекс); статины, только в качестве примера,розувастатин, питивастатин, симвастатин, правастатин, церивастатин, мевастатин, велостатин, флувастатин, компактин, ловастатин, далвастатин, флуиндостатин, аторвастатин, аторвастатин кальций (геми(полу)кальциевую соль аторвастатина) и дигидрокомпактин; и диассоциированные стероиды. Подходящие ингибиторы матриксных металлопротеаз (ММР) также можно вводить в комбинации с 4-гидроксифенилретинамидом или 4-метоксифенилретинамидом для лечения офтальмологические состояния или симптомы, ассоциированные с макулярными или ретинальными дегенерациями (дегенерациями сетчатки). Известно, что ММР гидролизуют большинство компонентов внеклеточного матрикса. Эти протеиназы участвуют во многих биологических процессах, таких как ремоделирование нормальных тканей, эмбриогенез, заживление ран и ангиогенез. Однако при многих болезненных состояниях, включая макулярную дегенерацию, наблюдается повышенная экспрессия ММР. Многие ММР идентифицированы, большинство из них представляют собой мультидоменные цинкзависимые эндопептидазы. Известен ряд ингибиторов металлопротеиназ (см., например, обзор об ингибиторах ММР Whittaker M. et al.,- 19011864Chemical Reviews 99(9): 2735- 2776 (1999. Типичные примеры ингибиторов ММР включают тканевые ингибиторы металлопротеиназ (TIMP) (например, TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 или TIMP-4), 2 макроглобулин, тетрациклины (например, тетрациклин, миноциклин и доксициклин), гидроксаматы (например, BATIMASTAT, MARIMISTAT TROCADE), хелатирующие вещества (например, EDTA, цистеин, ацетилцистеин, D-пеницилламин и соли золота), синтетические фрагменты ММР, сукцинилмеркаптопурины, фосфонамидаты и гидроксаминовые кислоты. Примеры ингибиторов ММР, которые можно применять в комбинации с 4-гидроксифенилретинамидом или 4-метоксифенилретинамидом,включают, только в качестве примера, любой из вышеприведнных ингибиторов. Показано, что применение антиангиогенных или анти-VEGF лекарств оказывает благотворное воздействие на пациентов с макулярными дегенерациями и дистрофиями. Примеры подходящих антиангиогенных или анти- VEGF лекарств, которые можно было бы применять в комбинации по меньшей мере с одним соединением, выбранным из 4-гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида, включают руфаб V2 (Rhufab V2, люцентис (Lucentis , триптофанил- тРНК синтетаза (TrpRS), Eye00l (антиVEGF ПЭГилированный аптамер), скваламин, Retaane 15 мг (анекортав ацетат для депо-суспензии;Alcon, Inc.), комбретастатин А 4 пролекарство (СА 4 Р), макуген, мифепрекс (мифепристон-ru486), субтенон триамцинолона ацетонид, интравитреальный кристаллический триамцинолона ацетонид, приномастат (AG3340-синтетический ингибитор металлопротеиназ, Pfizer), флуоцинолона ацетонид (включая внутриглазной (интраокулярный) имплантат флуоцинолона, BauschLomb/Control Delivery Systems),ингибиторы VEGFR (Sugen) и VEGF-Trap (регенерон/Aventis). Другие фармацевтические средства, которые применялись для помощи при ухудшении зрения,можно использовать в комбинации по меньшей мере с одним соединением, выбранным из 4 гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида. Такие средства включают, но без ограничения, такие агенты как висудин вместе с нетермическим лазером, РКС 412, эндовион (Endovion (NeuroSearch A/S, нейротрофические факторы, включая, в качестве примера, глиальный нейротрофический фактор и цилиарный нейротрофический фактор, диатазем, дорзоламид, фототроп (Phototrop), 9-цисретиналь, глазные препараты (включая Echo терапию), в том числе фосфолина иодид, или эхотиофат,или ингибиторы карбон-ангидразы, АЕ-941 (AEterna Laboratories, Inc.), Sirna-027 (Sirna Therapeutics,Inc.), пегаптаниб (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences), нейротрофины (включая, только в качестве примера, NT-4/5, Genentech), Cand5 (Acuity Pharmaceuticals), ранибизумаб (Genentech), INS-37217 (InspirePharmaceuticals), антагонисты интегрина (включая антагонисты интегрина от Jerini AG и от Abbott Laboratories), EG-3306 (Ark Therapeutics Ltd.), BDM-E (BioDiem Ltd.), талидомид (используемый, например, вEntreMed, Inc.), кардиотрофин-1 (Genentech), 2-метоксиэстрадиол (Allergan/Oculex), DL-8234 (Toray Industries), NTC-200 (Neurotech), тетратиомолибдат (University of Michigan), LYN-002 (Lynkeus Biotech),соединение из водорослей (Aquasearch/Albany, Mera Pharmaceuticals), D-9120 (Celltech Group plc), ATXS10 (Hamamatsu Photonics), TGF-бета 2 (Genzyme/Celtrix), ингибиторы тирозинкиназы (Allergan, SUGEN,Pfizer), NX-278-L (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences), Opt-24 (OPTIS France SA), нейропротекторы ганглиев клеток сетчатки (Cogent Neurosciences), производные N-нитропиразола (Texas AM UniversitySystem), KP-102 (Krenitsky Pharmaceuticals) и циклоспорин А. См. опубликованную патентную заявку США 20040092435. Во всяком случае несколько терапевтических агентов (одним из которых является одно из соединений по данному описанию) можно вводить в любом порядке или даже одновременно. При одновременном введении несколько терапевтических агентов можно вводить в виде разовой унифицированной формы или в виде нескольких форм (только в качестве примера, либо в виде одной пилюли, либо в виде двух отдельных пилюль). Один из терапевтических агентов можно давать в виде многократных доз или оба агента можно давать в виде многократных доз. При неодновременном применении промежуток времени между многократными дозами может варьироваться от более чем ноль недель до менее четырх недель. Кроме того, комбинированные методы, композиции и препараты (рецептуры) не обязательно ограничивать применением только двух агентов; мы предусматриваем применение составных (сложных) терапевтических комбинаций. Только в качестве примера, 4-гидроксифенилретинамид или 4 метоксифенилретинамид можно применять по меньшей мере с одним антиоксидантом и по меньшей мере с одним отрицательно заряженным фосфолипидом или их можно применять по меньшей мере с одним антиоксидантом и по меньшей мере с одним индуктором продуцирования оксида азота; или их можно применять по меньшей мере с одним индуктором продуцирования оксида азота и по меньшей мере с одним отрицательно заряженным фосфолипидом и т.д. Кроме того, указанные соединения можно также применять в комбинации с методами, которые могут оказывать аддитивное или синергическое положительное воздействие на пациента. Методы, известные, предполагаемые или рассматриваемые как облегчающие зрительное расстройство, включают, но без ограничения, "ограниченную транслокацию сетчатки", фотодинамическую терапию (включая, только в качестве примера, нацеленную на рецептор PDT, Bristol-Myers Squibb, Co.; порфимер натрия (porfimerlutetium), Pharmacyclics Inc.), антисмысловые олигонуклеотиды (включая, например, продукты, прошедшие испытание в Novagali Pharma SA, и ISIS-13650, Isis Pharmaceuticals), лазерную фотокоагуляцию,лечение друз лазером, хирургию макулярных разрывов сетчатки, хирургическую транслокацию макулы,имплантированные миниатюрные телескопы, ангиографию Phi-движения (также известную как микролазерная терапия и или ангиография фидерных сосудов), бомбардировку протонным пучком, микростимуляционную терапию, хирургическую операцию по поводу отслоения сетчатки и операцию на стекловидном теле, операцию вдавливания сферы, хирургию в субмакулярной области, транспупиллярную термотерапии, терапию фотосистемы I, применение РНК интерференции (RNAi), экстракорпореальный реоферез (также известный как мембранная дифференциальная фильтрация или реотерапия), имплантацию микрочипов, терапию стволовыми клетками, генную заместительную терапию, генную терапию с помощью рибозима (включая генную терапию элемента ответа на гипоксию, Oxford Biomedica; Lentipak, Genetix; PDEF генную терапию, GenVec), трансплантацию фоторецепторных/ретинальных клеток (включая трансплантируемые ретинальные клетки эпителия, Diacrin, Inc.; трансплантат ретинальных клеток (сетчатки), Cell Genesis, Inc) и акупунктуру. Другие комбинации, которые можно использовать для помощи человеку (индивидууму), включают генетический анализ, чтобы определить, является ли индивидуум носителем мутантного гена, известного как гена, связанного с офтальмологическими состояниями. Только в качестве примера, полагают, что дефекты в человеческом гене АВСА 4 ассоциированы с пятью отдельными ретинальными фенотипами,включая болезнь Штаргардта, колбочко-палочковую дистрофию, возрастную макулярную дегенерацию и пигментный ретинит. См., например, Allikmets et al., Science, 277:1805- 07 (1997); Lewis et al., Am. J.Hum. Genet., 64: 422-34 (1999); Stone et al., Nature Genetics, 20: 328-29 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen.,67: 793-799 (2000); Klevering, et al., Ophthalmology, 111: 546-553 (2004). Кроме того, аутосомная доминантная форма болезни Штаргардта вызывается мутациями в гене ELOV4. См. Karan, et al., Proc. Natl.Acad. Sci. (2005). Предполагается, что на пациентов, имеющих любую из этих мутаций, благотворное терапевтическое и/или профилактическое воздействие окажут методы по данному описанию. Синтез соединений Соединения, такие как 4-гидроксифенилретинамид или 4-метоксифенилретинамид, можно синтезировать обычными синтетическими методами, известными специалистам в данной области техники, или методами, известными в уровне техники, в комбинации с методами по данному описанию. См., например, опубликованную патентную заявку США 2004/0102650; Um, S. J., et al., Chem. Pharm. Bull., 52: 501506 (2004). Кроме того, некоторые соединения, такие как фенретинид, можно получить от промышленных поставщиков. В качестве дополнительного руководства можно также использовать нижеприведнные синтетические методы. Образование ковалентных связей реакцией электрофила с нуклеофилом Некоторые примеры ковалентных связей и предшествующих функциональных групп, которые дают эти ковалентные связи, представлены в таблице, озаглавленной "Примеры ковалентных связей и их предшественников (исходных)". Предшествующие (исходные) функциональные группы показаны как электрофильные группы и нуклеофильные группы. Функциональная группа в органическом соединении может быть соединена непосредственно или через спейсер или линкер, указанные ниже. Примеры ковалентных связей и их предшественников (исходных) Обычно углеродные электрофилы чувствительны к атаке комплементарных нуклеофилов, включая углеродные нуклеофилы, при этом атакующий нуклеофил отдат электронную пару углеродному электрофилу с образованием новой связи между нуклеофилом и углеродным электрофилом. Подходящие углеродные нуклеофилы включают, но без ограничения, алкильные, алкенильные,арильные и алкинильные соединения Гриньяра, литийорганические, цинкорганические соединения, алкильные, алкенильные, арильные и алкинильные соединения олова (оловоорганические соединения, органостаннаны), алкил-, алкенил-, арил- и алкинилборные соединения (органобораны и органоборонаты); эти углеродные нуклеофилы являются предпочтительными, так как они кинетически устойчивы в воде или полярных органических растворителях. Другие углеродные нуклеофилы включают фосфорные илиды, енолы и еноляты; преимуществом этих углеродных нуклеофилов является то, что они легко образуются из хорошо известных специалистам в области синтетической органической химии предшественников. Углеродные нуклеофилы, при применении их в сочетании с углеродными электрофилами, образуют новую углерод-углеродную связь между углеродным нуклеофилом и углеродным электрофилом. Неуглеродные нуклеофилы, пригодные для связывания с углеродными электрофилами, включают,но без ограничения, первичные и вторичные амины, тиолы, тиолаты и тиоэфиры, спирты, алкоксиды,азиды, семикарбазиды и т.п. Эти неуглеродные нуклеофилы, при использовании их в сочетании с углеродными электрофилами, обычно образуют связи с гетероатомом (С-Х-С), где X обозначает гетероатом,например кислород или азот. Применение защитных групп Термин "защитная группа" относится к химическим группам, которые блокируют некоторые или все реакционноспособные группы и предотвращают участие этих групп в химических реакциях до уда- 22011864 ления защитной группы. Предпочтительно, чтобы все защитные группы снимались различными способами. Защитные группы, отщепляющиеся в совершенно различных условиях реакции, соответствуют требованию дифференцированного удаления. Защитные группы можно удалять с помощью кислоты,основания и гидрогенолизом. Группы, такие как тритильная, диметокситритильная, третбутилметилсилильная, неустойчивы в кислоте, и их можно использовать для защиты реакционных групп карбокси- и гидрокси- в присутствии аминогрупп, защищенных группами Cbz, которые удаляются гидрогенолизом, и Fmoc групп, неустойчивых в основной среде. Реакционные группы карбокси- и гидроксиможно блокировать неустойчивыми в основной среде группами, такими как, но без ограничения, метильная, этильная и ацетильная, в присутствии аминов, защищенных неустойчивыми в кислой среде группами, такими как трет- бутилкарбамат, или карбаматами, которые устойчивы как в кислой, так и в основной среде, но удаляются гидролитически. Реакционные карбоксильные и гидроксильные группы можно блокировать с помощью удаляемых гидролизом защитных групп, таких как бензильная группа, тогда как аминогруппы способны образовывать водородную связь с кислотами, можно блокировать с помощью групп, неустойчивых в основной среде, таких как Fmoc. Реакционноспособные карбоксильные группы можно защитить, превращая в эфирные производные, как показано в примерах в данном описании, или их можно блокировать с помощью удаляемых при окислении защитных групп, таких как 2,4-диметоксибензильная, тогда как присутствующие в том же соединении аминогруппы можно блокировать с помощью неустойчивых к фтору силилкарбаматов. Блокирующие аллильные группы применимы в присутствии кислых и основных защитных групп,так как первые устойчивы и удаляются под действием металла или -кислотных катализаторов. Например, защищнную аллильной группой карбоновую кислоту можно депротекционировать по реакции, катализируемой Pd0, в присутствии неустойчивой в кислоте третбутилкарбаматной группы или неустойчивой в присутствии основания ацетатной защитной группы для аминогруппы. Ещ одной формой защитной группы является полимер, с которым может связываться соединение или интермедиат. До тех пор пока остаток связан с полимером, эта функциональная группа блокируется и не может реагировать. При отщеплении от полимера функциональная группа способна реагировать. Типичные блокирующие/защитные группы можно выбрать из Другие защитные группы описаны в Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed.,John WileySons, New York, NY, 1999, которая во всей полноте вводится в данное описание в качестве ссылки. Иллюстрирующие примеры Нижеприведнные примеры иллюстрируют способы испытания эффективности и безопасности 4 гидроксифенилретинамида или 4-метоксифенилретинамида. Эти примеры представлены только для иллюстрации и не ограничивают объм изобретения по данному описанию. Исследование на людях Детектирование макулярной или ретинальной дегенерации. Идентификацию аномальных кровеносных сосудов в глазу можно сделать с помощью ангиографии. Эта идентификация может способствовать определению, какие пациенты являются кандидатами на применение кандидатного вещества или другой способ лечения для того, чтобы затруднить или предупредить дальнейшую потерю зрения. Ангиограммы можно также применять для последующего лечения, а также для будущей оценки нового роста сосудов. Флуоресцеиновая ангиограмма (флуоресцеиновая ангиография, флуоресцеиновая ангиоскопия) является методом визуализации хороидальной и ретинальной циркуляции в задней части глаза. Флуоресцеиновый краситель инъецируют внутривенно с последующей многокадровой съмкой (ангиография),- 23011864 офтальмологической оценкой (ангиоскопия) или же с помощью Гейдельбергского ретинального ангиографа (конфокальная сканирующая лазерная система). Кроме того, сетчатку можно изучать с помощью ОСТ, неинвазивного способа для получения профильных изображений сетчатки высокого разрешения. Флуоресцеиновые ангиограммы используют при оценке широкого ряда ретинальных и хороидальных заболеваний анализом подтекания или возможного поражения кровеносных сосудов, питающих сетчатку. Их также используют для оценки аномалий глазного нерва и радужной оболочки по Беркоу el al., Am.J. Ophthalmol. 97: 143-7 (1984). Аналогично, ангиограммы с применением индоцианинового зелного можно применять для визуализации циркуляции в задней части глаза. Флуоресцеин более эффективен для изучения ретинальной циркуляции, тогда как индоцианин лучше подходит для наблюдения за более глубоким слоем хороидальных кровеносных сосудов. Применение индоцианиновой ангиографии целесообразно, когда можно не видеть неоваскуляризацию с одним флуоресцеином. Подходящие для человека дозы соединений, имеющих структуру фенретинида, определяют стандартным исследованием с повышением дозы. Однако некоторые указания можно получить при использовании таких соединений для лечения рака. Например, дозу 4800 мг/м 2 фенретинида, соединения,имеющего структуру фенретинида, вводят больным различными типами рака. Такие дозы вводили трижды в день, и наблюдаемая токсичность была минимальной. Однако рекомендуемая доза для таких пациентов составляет 900 мг/м 2, с учтом наблюдаемых предельных достижимых уровней в плазме. Кроме того, биодоступность фенретинида повышается при приме с пищей, причм концентрация в плазме в три раза выше после прима пищи с высоким содержанием жиров, чем после прима углеводсодержащей пищи. Наблюдения за случайной ночной (куриной) слепотой у людей наводят на мысль о заметной недостаточности регенерации родопсина при нормальных терапевтических дозах. На основании этих данных мы предполагаем, что ингибирующие концентрации фенретинида в RPE ткани достигаются при дозах,аналогичных дозам, или, возможно, ниже доз для лечения рака человека. Пример 1. Испытание эффективности лечения макулярной дегенерации фенретинидом Предварительно все больные (люди) проходят обычное офтальмологическое обследование, включая флуоресцеиновую ангиографию, определение остроты зрения, электрофизиологических показателей и биологических и реологических показателей. Критерии включения следующие: острота зрения от 20/160 до 20/32 по меньшей мере в одном глазу и признаки AMD, такие как друзы, ареолярная атрофия,отслойка пигментного эпителия или субретинальная неоваскуляризация. Беременных или активно кормящих детей пациенток исключают из исследования. Двести больных человек, у которых диагностирована макулярная дегенерация (дегенерация жлтого пятна) или у которых в глазах наблюдается прогрессирующее образование А 2 Е, липофусцина или друз, делят на контрольную группу примерно из 100 пациентов и экспериментальную группу из 100 пациентов. Фенретинид вводят в экспериментальной группе ежедневно. В контрольной группе вводят плацебо по той же схеме, по которой вводят фенретинид в экспериментальной группе. Вводить фенретинид или плацебо пациенту можно либо орально, либо парентерально в количествах, которые эффективно ингибируют развитие или рецидив макулярной дегенерации. Эффективные дозы находятся в интервале около 1- 4000 мг/м 2 три раза в день. Одним из методов измерения прогрессирования макулярной дегенерации как в контрольной, так и в экспериментальной группах является оптимально скорректированная острота зрения, измеряемая по шкале Исследования раннего лечения диабетической ретинопатии (ETDRS) (Lighthouse, Long Island, NY) с использованием оценки строк и метода вынужденного выбора (Ferris el al., Am J Ophihalmol, 94: 97-98(1982). Острота зрения регистрируется в logMAR. Изменение одной строки по шкале ETDRS эквивалентно 0.1 logMAR. Другие типичные методы измерения прогрессирования макулярной дегенерации как в контрольной, так и в экспериментальной группе включают проверку поля зрения, в том числе, но без ограничения, проверку на анализаторе поля зрения Хамфри и измерение/мониторинг спектров аутофлоресценции или поглощения (оптической плотности) N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина, дигидро-Nретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/или N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина в глазу пациента. Аутофлуоресценцию измеряют, используя различное оборудование, включая, но без ограничения, конфокальный сканирующий лазерный офтальмоскоп. См. Bindewald, et al., Am. J. Ophthalmol,137: 556-8 (2004). Другие методы измерения прогрессирования макулярной дегенерации как в контрольной, так и в экспериментальной группе включают фотографирование дна, наблюдение за изменениями аутофлуоресценции во времени на Гейдельбергском ретинальной ангиографе (или же методы, описанные в Hammer,et al. Ophthalmologe 2004 Apr. 7 [Предварительная публикация (Epub) перед патентом] и снятие флуоресцеиновых ангиограмм во время начального (базовая линия) визита и последующих визитов через три,шесть, девять и двенадцать месяцев. Документирование морфологических изменений включает изменения (а) размера, характера и распространения друз; (б) развития и прогрессирования хороидальной неоваскуляризации; (в) других промежуточных изменений или аномалии дна; (г) скорости чтения и/или- 24011864 чткости чтения; (д) размера скотом; или (е) размера и числа поражений географической атрофии. Кроме того, необязательно проводят тест Amster Grid и цветовой тест. Для статистической оценки улучшения зрения в ходе введения лекарства исследователи применяют шкалу ETDRS (logMAR) и стандартный протокол рефракции и остроты зрения. Оценка средней ETDRS(logMAR) оптимально скорректированной остроты зрения (BCVA), начиная с базовой линии в течение действительных визитов через определнные интервалы после лечения, может способствовать определению статистического улучшения зрения. Для оценки ANOVA (однофакторный дисперсионный анализ между группами) между контрольной и экспериментальной группой средние изменения в ETDRS (logMAR) остроте зрения, начиная с базовой линии в течение действительных визитов через определнные интервалы после лечения, сравнивают с применением ANOVA для "двухгрупповой модели" методом повторных измерений с ковариацией на неструктурированных сетках, используя программу SAS/STAT (SAS Institute Inc, Cary, North Carolina). Оценка токсичности после начала исследования включает проверку каждые три месяца в течение последующего года, на следующий год каждые четыре месяца, а затем каждые шесть месяцев. Уровни фенретинида и его метаболита N-(4-метоксифенил)-ретинамида в плазме можно также оценивать в ходе этих посещений. Оценка токсичности включает применение фенретинида, а также проверку пациентов контрольной группы. Пример 2. Проверка эффективности снижения продуцирования А 2 Е фенретинидом. Тот же самый дизайн протокола, включая протоколы предварительного обследования, введения(соединения), оценки введения доз и токсичности, которые описаны в примере 1, используют также для проверки эффективности соединений при снижении или другом ограничении продуцирования А 2 Е в глазу пациента. Методы измерения/мониторинга образования А 2 Е включают измерение аутофлоресценции Nретинилиденфосфатидилэтаноламина, дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина, Nретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина, дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/илиN-ретинилиденфосфатидилэтаноламина в глазу пациента. Аутофлуоресценцию измеряют, используя различное оборудование, включая, но без ограничения, конфокальный сканирующий лазерный офтальмоскоп. См. Bindewald, et al., Am. J. Ophthalmol., 137: 556-8 (2004), или методы регистрации спектров аутофлуоресценции или поглощения (оптической плотности), описанные в примере 1. Другие тесты, которые можно применять в качестве суррогатных маркеров эффективности конкретного лечения, включают проверку остроты и поля зрения, проверку скорости чтения и/или чткости зрения, определение размера и числа скотом и/или географических атрофических поражений, как описано в примере 1. Применяют статистические анализы, описанные в примере 1. Пример 3. Проверка эффективности снижения продуцирования липофусцина фенретинидом. Тот же самый дизайн протокола, включая протоколы предварительного обследования, введения(соединения), оценки введения доз и токсичности, которые описаны в примере 1, используют также для проверки эффективности фенретинида при снижении или другом ограничении продуцирования липофусцина в глазу пациента. Можно также применять статистические анализы, описанные в примере 1. Тесты, которые можно применять в качестве суррогатных маркеров эффективности конкретного лечения, включают проверку остроты и поля зрения, определение размера и числа скотом и/или географических атрофических поражений и измерение/мониторинг аутофлуоресценции некоторых соединений в глазу пациента, как описано в примере 1. Пример 4. Проверка эффективности снижения образования друз фенретинидом. Тот же самый дизайн протокола, включая протоколы предварительного обследования, введения(соединения), оценки введения доз и токсичности, которые описаны в примере 1, используют также для проверки эффективности фенретинида при снижении или другом ограничении образования друз в глазу пациента. Можно также применять статистические анализы, описанные в примере 1. Методы измерения прогрессирования образования друз как в контрольной, так и в экспериментальной группе включают фотографирование дна и снятие флуоресцеиновых ангиограмм во время начального (базовая линия) визита и последующих визитов через три, шесть, девять и двенадцать месяцев. Документирование морфологических изменений включает изменения (а) размера, характера и распространения друз; (б) развития и прогрессирования хороидальной неоваскуляризации; (в) другие промежуточные изменения или аномалии дна. Другие тесты, которые можно применять в качестве суррогатных маркеров эффективности конкретного лечения, включают проверку остроты и поля зрения, скорости чтения/или чткости при чтении, определение размера и числа скотом и/или географических атрофических поражений и измерение/мониторинг аутофлуоресценции некоторых соединений в глазу пациента, как описано в примере 1. Пример 5. Генетический анализ макулярной дистрофии. Полагают, что дефекты в человеческом гене АВСА 4 ассоциированы с пятью отдельными ретинальными фенотипами, включая болезнь Штаргардта, колбочко-палочковую дистрофию, возрастную макулярную дегенерацию (как сухую, так и влажную форму) и пигментный ретинит. См., например, AllikmetsGenetics, 20: 328-29 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67: 793-799 (2000); Klevering, et al., Ophthalmology, 111: 546-553 (2004). Кроме того, аутосомная доминантная форма болезни Штаргардта вызывается мутациями в гене ELOV4. См. Karan, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (2005). Диагностировать болезнь Штаргардта у пациентов можно любым из следующих анализов: (а) детектирование мутации методом прямого секвенирования, который может включать секвенирование всех экзонов и фланкирующих областей интронов АВСА 4 и ELOV4 для выявления мутации(й) последовательности; (б) геномный анализ методом Саузерн-блоттинга; (в) Microarray анализы (анализы микрочипов), которые включают все известные варианты ABCA4 и ELOV4; и (г) анализ жидкостной хроматографией тандемной масс-спектрометрией в сочетании с иммуноцитохимическим анализом с применением антител и Вестерн-блоттинга. Фотографии дна, флуоресцеиновые ангиограммы и визуализация с помощью сканирующего лазерного офтальмоскопа наряду с анамнезом пациента и его или е семьи может прогнозировать и/или подтвердить диагноз. Исследование на мышах и крысах Оптимальную дозу соединений фенретинида, блокирующую образование А 2 Е у мышей abca4-/-,можно определить стандартным методом испытания с повышением дозы. Один иллюстрирующий метод с использованием фенретинида представлен ниже. Однако аналогичные подходы можно применять для других соединений, имеющих подобную структуру. Действие фенретинида на полностью-транс-ретиналь в сетчатке адаптированных к свету мышей предпочтительно определяют в дозах, которые включают терапевтическую дозу. Предпочтительный способ включает введение мышам разовой интраперитонеальной дозы утром. Для сохранения пониженных уровней полностью-транс-ретиналя в сетчатке в течение дня могут потребоваться более частые инъекции. Мыши, нокаутированные по АВСА 4. АВСА 4 кодирует белок rim (RmP), переносчик АТР-связывающей кассеты (ABC) в дисках наружного сегмента фоторецепторов палочек и колбочек. Перенеснный субстрат для RmP неизвестен. Мыши,полученные в результате нокаутирующей мутации в гене abca4, см. Weng et al., Cell, 98: 13- 23 (1999),подходят для изучения RmP функции, а также для in vivo скрининга эффективности кандидатных веществ. Эти животные проявляют сложный глазной фенотип: (i) медленная дегенерация фоторецептора,(ii) замедленное восстановление чувствительности палочек после воздействия света, (iii) пониженный уровень atRAL и пониженный уровень atROL в фоторецепторных наружных сегментах после фотообесцвечивания, (iv) существенно повышенный уровень фосфатидилэтаноламина (РЕ) в наружных сегментах,и (v) аккумуляция липофусцина в RPE клетках. См. Weng et al., Cell, 98: 13-23 (1999). Скорость фоторецептроной дегенерации можно контролировать у пролеченных и непролеченных мышей дикого типа и мышей abca4-/- двумя методами. Один метод представляет собой исследованиеERG анализ-на мышах в различное время и заимствован из клинической диагностики. См. Weng et al.,Cell, 98: 13-23 (1999). Электрод помещают на корнеальной поверхности анестезированной мыши и регистрируют электрический ответ сетчатки на вспышку света. Амплитуда -волны, которая возникает в результате индуцированной светом гиперполяризации фоторецепторов, является чувствительным индикатором фоторецепторной дегенерации. См. Kedzierski et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 38: 498-509(1997). ERG анализ делают на живых животных. Поэтому одну и ту же мышь можно анализировать повторно в течение курса исследования. Точным методом количественного определения фоторецепторной дегенерации является гистологический анализ ретинальных срезов. Число фоторецепторов, остающихся в сетчатке в каждой временной точке, определяют подсчтом рядов ядер фоторецепторов в наружном нуклеарном слое. Тканевая экстракция. Образцы глаз оттаивают на льду в 1 мл PBS, рН 7,2 и гомогенизируют вручную, используя стеклянный гомогенизатор DUALL. Образец гомогенизируют дополнительно после добавления 1 мл смеси хлороформ/метанол (2:1, об.об.). Образец переносят в пробирку из боросиликатного стекла и липиды экстрагируют 4 мл хлороформа. Органический экстракт отмывают 3 мл PBS, рН 7,2, и образцы затем центрифугируют при 3000g, 10 мин. Органическую (хлороформ) фазу декантируют, а водную фазу снова экстрагируют другой порцией 4 мл хлороформа. После центрифугирования органические (хлороформ) фазы объединяют и образцы сушат досуха под азотом. Оставшиеся образцы ресуспендируют в 100 мкл гексана и анализируют методом ВЭЖХ, описанным ниже. ВЭЖХ анализ. Хроматографическое разделение проводят на колонке Agilent Zorbax Rx-Sil Column (5 мкм, 4,6250 мм) на жидкостном хроматографе серии Agilent 1100, снабжнном флуоресцентным и диодным детекторами. Подвижная фаза (гексан/2-пропанол/этанол/25 мМ KH2PO4, pH 7,0/уксусная кислота; 485/376/100/50/0,275, об./об.) подается со скоростью 1 мл/мин. Идентификацию пиков образцов делают,сравнивая со временем удерживания и спектрами поглощения аутентичных стандартов. Данные приводятся как максимальная флуоресценция (У.Е.Ф., L.U.), регистрируемая в детекторе флуоресценции. Пример 6. Воздействие фенретинида на аккумуляцию А 2 Е. Мышам экспериментальной группы вводят фенретинид, а мышам контрольной группы вводят один- 26011864 ДМСО и анализируют аккумуляцию А 2 Е. Экспериментальной группе дают 2,5-20 мг/кг фенретинида в день в 10-25 мкл ДМСО. Если эффекта не наблюдается, дают более высокие дозы, причм наивысшая доза составляет 50 мг/кг. Контрольной группе вводят 10-25 мкл одного ДМСО в виде инъекций. Либо экспериментальные соединения, либо контрольное вещество вводят мышам интраперитонеальной (и.п.,i.p.) инъекцией через различные экспериментальные временные периоды, не превышающие одного месяца. Для анализа аккумуляции А 2 Е в RPE мышей abca4-/- 2,5-20 мг/кг фенретинида в день интраперитонеально инъецируют 2-месячным мышам abca4-/-. Через 1 месяц как экспериментальных, так и контрольных мышей умерщвляют и методом ВЭЖХ определяют уровни А 2 Е в RPE. Кроме того, можно провести мониторинг спектров аутофлуоресценции или поглощения N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина, дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина, N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина, дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/или N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина на УФ/Vis спектрофотометре. Пример 7. Воздействие фенретинида на аккумуляцию липофусцина. Мышам экспериментальной группы вводят фенретинид, а мышам контрольной группы вводят один ДМСО и анализируют аккумуляцию липофусцина. Экспериментальной группе дают 2,5-20 мг/кг фенретинида в день в 10-25 мкл ДМСО. Если эффекта не наблюдается, дают более высокие дозы, причм наивысшая доза составляет 50 мг/кг. Контрольной группе вводят 10-25 мкл одного ДМСО в виде инъекций. Либо экспериментальные соединения, либо контрольное вещество вводят мышам и.п. (i.p.) инъекцией через различные экспериментальные временные периоды, не превышающие одного месяца. Или же мышам можно имплантировать насос, который доставляет либо экспериментальные вещества, либо контрольное вещество со скоростью 0,25 мкл/ч через различные экспериментальные временные периоды, не превышающие одного месяца. Для анализа действия фенретинида на образование липофусцина у получавших и не получавших фенретинид мышей abca4-/- можно исследовать глаза методами электронной или флуоресцентной микроскопии. Пример 8. Воздействие фенретинида на гибель палочковых клеток или нарушение функции палочек. Мышам экспериментальной группы вводят фенретинид, а мышам контрольной группы вводят один ДМСО и исследуют воздействие фенретинида на гибель палочковых клеток или нарушение функции палочек. Экспериментальной группе дают 2,5-20 мг/кг фенретинида в день в 10-25 мкл ДМСО. Если эффекта не наблюдается, дают более высокие дозы, причм наивысшая доза составляет 50 мг/кг. Контрольной группе делают инъекции 10-25 мкл одного ДМСО. Либо экспериментальные соединения, либо контрольное вещество вводят мышам и.п. (i.p.) инъекцией через различные экспериментальные временные периоды, не превышающие одного месяца. Или же мышам можно имплантировать насос, который доставляет либо экспериментальные вещества, либо контрольное вещество со скоростью 0,25 мкл/ч через различные экспериментальные временные периоды, не превышающие одного месяца. Мышей, которым вводят 2,5-20 мг/кг фенретинида в день в течение примерно 8 недель, можно изучать на предмет воздействия фенретинида на гибель палочковых клеток или нарушение функции палочек мониторингом результатов ERG и гистологией сетчатки. Пример 9. Испытание на защиту от светового поражения. Следующее исследование заимствовано из Sieving, P.A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 98: 1835-40(2001). При продолжительных (chronic) исследованиях воздействия света 7-недельных самцов крысальбиносов Sprague-Dawley помещают в условия 12-часового светового цикла, создаваемого флуоресцентным светильником белого света с освещнностью 5 люкс. Крысам постоянно, в течение 8 недель,трижды в день ежедневно делают и.п. инъекции 20-50 мг/кг фенретинида в 0,18 мл ДМСО. Контрольным крысам инъецируют и.п. 0,18 мл ДМСО. Крыс умерщвляют через 2 дня после последней инъекции. Если эффекта не наблюдается, дают более высокие дозы, причм наивысшая доза составляет 50 мг/кг. При срочных исследованиях воздействия света крыс приучают к темноте в течение ночи и делают однократную инъекцию фенретинида 20-50 мг/кг в 0,18 мл ДМСО при тусклом красном свете и держат в темноте в течение 1 ч, а затем воздействуют обесцвечивающим (bleaching) светом и проводят ERG измерения. Крыс выдерживают при освещении белым флуоресцентном светом (2000 люкс) в течение 48 ч.ERG регистрируют через 7 дней и тотчас же проводят гистологические исследования. Крыс умерщвляют и глаза удаляют. Толщину внешнего нуклеарного слоя цилиндрических клеток и длину наружного сегмента палочек (ROS) измеряют через каждые 200 мкм на протяжении обеих полусфер, показания усредняют, получают размер клеточных изменений во всей сетчатке. ERG регистрируют у "хронических" крыс (из длительного исследования) на 4 и 8 неделе обработки. У крыс из "экспресс"(срочного)-исследования за восстановлением палочек после обесцвечивающего света следят с помощью адаптированных к темноте ERG, используя раздражители, которые не выявляют вклада колбочек. Восстановление колбочек наблюдают с помощью фотопических ERG. Перед ERG животных подготавливают при слабом красном свете и анестезируют. Зрачки расширяют и ERG регистрируют на обоих глазах одновременно, используя роговичные петли из золотой проволоки.- 27011864 Пример 10. Комбинированная терапия с применением фенретинида и аккутана. Мышей и/или крыс тестируют как описано в примерах 6-9, но с двумя дополнениями. В одном дополнении группам мышей и/или крыс дают увеличивающиеся дозы аккутана, от 5 до 50 мг/кг в день. В другом дополнении группам мышей и/или крыс вводят комбинацию 20 мг/кг в день фенретинида и увеличивающиеся дозы аккутана, от 5 до 50 мг/кг в день. Преимущество комбинированной терапии анализируют как описано в примерах 6-9. Пример 11. Действие фенретинида на аккумуляцию липофусцина (и/или А 2 Е) у abca 4 нульмутантных мышей: Фаза I-Доза-эффект и действие на ретинол в сыворотке. Воздействие HPR на уменьшение концентрации ретинола в сыворотке животных и человека навело нас на мысль исследовать также возможность уменьшения на липофусцине и токсическом бетаретиноидном конъюгате. Основанием для такого подхода являются два основных научных факта: 1) уменьшение концентрации витамина А в глазу за счт ингибирования известного фермента зрительного цикла (11-цис-ретинолдегидрогеназы) приводит к уменьшению липофусцина и А 2 Е; 2) у животных, которых держат на диете с дефицитом витамина А, наблюдается резкое уменьшение аккумуляции липофусцина. Таким образом, целью данного примера является исследование действия HPR на животной модели, которая демонстрирует массивную аккумуляцию липофусцина и А 2 Е в глазной ткани, abcd4 нульмутантной мыши. Началом исследования явилось изучение влияния HPR на концентрацию ретинола в сыворотке. Животных делят на три группы и дают либо ДМСО, либо 10 мг/кг HPR, либо 20 мг/кг HPR в течение 14 дней. По окончании периода исследования собирают кровь животных, готовят сыворотку и экстракт сыворотки в ацетонитриле анализируют обращнно-фазовой ЖХ/MS. Снимают УФ/Vis спектры и определяют массу/заряд для подтверждения идентичности элюированных пиков. Полученные хроматограммы образцов изображены: на фиг. 1 а - экстракт abcd4 нуль-мутантной мыши, получающей носитель дляHPR, ДМСО; на фиг. 1b - 10 мг/кг HPR; на фиг. 1 с - 20 мг/кг HPR. Данные чтко показывают зависящее от дозы уменьшение концентрации ретинола в сыворотке. Количественные данные указывают, что при 10 мг/кг HPR содержание полностью-гранс-ретинола снижается на 40%, см. фиг. 11. При 20 мг/кг HPR содержание полностью-транс-ретинола снижается на 72%, см. фиг. 11. Равновесные концентрации ретинола и HPR в сыворотке (при 20 мг/кг HPR) определены как 2,11 мкМ и 1,75 мкМ соответственно. Основываясь на этих данных, мы приступили к дальнейшему изучению механизма(ов) уменьшения содержания ретинола при обработке с помощью HPR. Логично предположить, что HPR может замещать ретинол при конкуренции в сайте связывания ретинола на RBP. Подобно ретинолу RBP поглощает (тушит) световую энергию в области флуоресценции белка; однако, в отличие от ретинола, HPR не флуоресцирует. Следовательно, можно измерять вытеснение ретинола из целого белка RBP, наблюдая за уменьшением флуоресценции как белка (340 нм), так и ретинола (470 нм). Мы анализируем конкурентное связывание, используя концентрации RBP-ретинола/HPR, аналогичные концентрациям, определнным из 14-дневного эксперимента в 20 мг/кг HPR по данному описанию. Данные этих анализов показывают, что HPR эффективно вытесняет ретинол из полного белка (голопротеина) RBP-ретинол при физиологической температуре, см. фиг. 3b. Конкурентное связывание HPR с RBP зависит от дозы и является насыщаемым. В контрольных анализах уменьшение флуоресценции ассоциируется с сопутствующим увеличением флуоресценции белка, см. фиг. 3 а. Как определено, этот эффект вызван действием температуры, так как константа диссоциации RBP-ретинола повышается (уменьшение сродства) во времени при 37 С. В целом, эти данные наводят на мысль, что увеличение содержания HPR выше эквимолярных эквивалентов по отношению к целому белку (голопротеину) RBP (например, 1,0 мкМ HPR, 0,5 мкМ RBP) вызывает замещение значительной части ретинола из RBP in vivo. Пример 12. Действие фенретинида на аккумуляцию липофусцина (и/или А 2 Е) у abca 4 нульмутантных мышей: Фаза II- Продолжительное лечение abca 4 нуль-мутантных мышей. Мы предприняли исследование продолжительностью один месяц с целью оценки действия HPR на уменьшение содержания А 2 Е и предшественников А 2 Е у abcd4 нуль-мутантных мышей. HPR вводят в ДМСО (2 мг/кг, и.п.) abcd4 нуль-мутантным мышам (BL6/129, возраст 2 месяца) ежедневно в течение 28 дней. Контрольные соответствующие по возрасту/штамму мыши получают только ДМСО. Выборку производят в дни 0,14 и 28 (n=3 в группе), глаза энуклеируют и хлороформом экстрагируют составляющие,растворимые в хлороформе (липиды, ретиноиды и конъюгаты липид-ретиноид). Мышей умерщвляют цервикальной дислокацией, глаза энуклеируют и быстро замораживают в криогенных ампулах. Затем экстракты образцов анализируют методом ВЭЖХ с он-лайн детектированием флуоресценции. Результаты этого исследования показывают заметное раннее уменьшение содержания предшественника А 2 Е,А 2 РЕ- Н 2, см. фиг. 4 а, и последующее уменьшение содержания А 2 Е, см. фиг. 4b. Количественный анализ показал уменьшение содержания А 2 РЕ-Н 2 на 70% и уменьшение содержания А 2 Е на 55% после введения HPR в течение 28 дней. Аналогичное исследование для подтверждения действия HPR можно провести на электроретинографических и морфологических фенотипах. Пример 13. Действие фенретинида на гомеостаз витамина А в ретинальном пигментном эпителии. Мы изучали действие HPR на ферменты или белки зрительного цикла с помощью in vitro биохимических анализов. Конкретно, изучают использование экзогенного полностью-транс-ретинола мембрана- 28011864 ми, приготовленными из бычьего RPE. Типичные данные этих исследований представлены на фиг. 5. Кинетический анализ данных ингибирования показывает, что полумаксимальное ингибирование LRAT происходит примерно при 20 мкМ HPR. Равновесные уровни HPR в RPE (определяемые у мышей, которым и.п. ежедневно в течение 28 дней вводят 20 мг/кг HPR) в интервале 5-10 мкМ. Имея это в виду, мы изучали влияние 10 мкМ HPR на продуцирование полностью-транс-ретиниловых сложных эфиров и 11 цис-ретинола в анализах, аналогичных вышеописанным. Помимо повышения использования в полностью-транс-ретинола (фиг. 6 с) и синтеза полностью-транс-ретиниловых сложных эфиров (фиг. 6 а), данные показывают статистически значимое ингибирование биосинтеза 11-цис-ретинола (р 0,05, показано звздочкой), см. фиг. 6b. В присутствии эндогенных ретиноидов использование (утилизация) экзогенного полностью транс-ретинола чрезвычайно низко, а 11-цис-ретинол образуется только из эндогенных полностью-транс-ретиниловых сложных эфиров. На самом деле, когда мы проводим наши эксперименты в присутствии эндогенных ретиниловых сложных эфиров, мы не наблюдаем влияния HPR на образование 11-цис-ретинола; однако сохраняется ингибирование активности LRAT. Таким образом, очевидно, ретиноидные кислоты действуют по меньшей мере на две мишени в зрительном цикле. Мы определили, что вызванное HPR уменьшение биосинтеза 11-цис-ретинола происходит за счт ингибирования LRAT и снижения уровней полностью-транс-ретиниловых сложных эфиров. В этом случае истощается фермент изомераза для субстрата и образование 11-цис-ретинола снижается. В агрегате, что выясняется в результате нескольких исследований, существует множество мишеней для модуляции биосинтеза зрительного хромофора. Пониженный уровень зрительного хромофора приводит к последующему снижению уровня полностью-транс-ретиналя, ретиноида, из которого образуется А 2 Е. Таким образом, введение HPR оказывает не только системное действие, снижая количество ретинола, доставляемого в глаз, но также оказывает внутриклеточное воздействие на снижение равновесных уровней полностью-транс-ретиналя. Конечным результатом является пониженный уровень А 2 Е в RPE,как показано выше. Таким образом, одним из выводов из этого исследования является то, что на лечение макулярных дегенераций и дистрофий, включая, но без ограничения, регуляции образования полностью-трансретиналя, N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина, N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина, дигидро-Nретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,N-ретинилиден-N-ретинилфосфатидилэтаноламина,дигидро-N-ретинилиден-N-ретинилэтаноламина и/или N-ретинилиденфосфатидилэтаноламина, географической атрофии, скотомы, липофусцина и друз в глазу млекопитающего, можно воздействовать, вводя агент или агенты, которые могут как понижать уровни ретинола в сыворотке, так и модулировать по меньшей мере один фермент или белок зрительного цикла, включая, только в качестве примера, LRAT активность. Предполагается, что такой метод двойного действия для лечения макулярных или ретинальных дистрофий и дегенераций или ослабления симптомов, ассоциированных с такими заболеваниями или состояниями, является общим методом, и он изучен, как описано выше, на примере фенретинида. Кроме того, а) применение агента или агентов, которые понижают уровни ретинола в сыворотке пациента, не модулируя по меньшей мере один фермент в зрительном цикле, или б) применение агента или агентов, которые модулируют по меньшей мере один фермент в зрительном цикле, не снижая уровни ретинола в сыворотке пациента, само по себе может также обеспечить лечение таких дистрофий или дегенераций или связанных с ними симптомов. Анализы, такие как описанные выше, можно применять для того, чтобы выбрать агенты, обладающие таким двойным действием, включая агенты, выбранные из соединений, имеющих структуру фенретинида, а также другие агенты. Возможные основные соединения включают другие агенты, о которых известно, что они действуют на уровень ретинола в сыворотке, или показано, что они действуют на уровень ретинола в сыворотке. Чтобы определить влияние HPR на ферменты или белки зрительного цикла in vivo, можно изучить регенерацию родопсина из эндогенных запасов ретиноидов на получавших HPR мышах и контрольных мышах, соответствующих по возрасту/штамму. Пример 14. Комбинированная терапия с применением фенретинида и статина. Испытание на мышах и/или крысах проводят так же, как в примерах 6-9, но с двумя дополнениями. В одном дополнении группам мышей и/или крыс дают соответствующий статин, такой как: липитор (аторвастатин), мевакор (ловастатин), правакол (правастатин натрий), зокор (симвастатин), лескол (флувастатин натрий) и т.п. в оптимальной дозе в зависимости от массы. В другом дополнении группам мышей и/или крыс вводят комбинацию 20 мг/кг в день фенретинида и увеличивающиеся дозы статина, используемого на предыдущей стадии. Предполагаемые дозы таких статинов для человека составляют, например, липитор(аторвастатин) 10-80 мг/день, мевакор (ловастатин) 10-80 мг/день, правакол (правастатин натрий) 10-40 мг/день, зокор (симвастатин) 5-80 мг/день, лескол (флувастатин натрий) 20-80 мг/день. Дозы статинов для мышей и/или крыс следует рассчитывать в зависимости от массы. Положительное воздействие (преимущество) комбинированной терапии анализируют как описано в примерах 6-9. Пример 15. Комбинированная терапия с применением фенретинида, витаминов и минералов. Испытание на мышах и/или крысах проводят так же, как в примере 14, но берут витамины и минералы. Вводить фенретинид в комбинации с витаминами и минералами можно либо орально, либо парен- 29011864 терально в количествах, эффективно ингибирующих развитие или рецидив макулярной дегенерации. Начальные испытуемые дозы фенретинида находятся в интервале около 20 мг/кг в день фенретинида плюс 100-1000 мг витамина С, 100-600 мг витамина Е, 10000-40000 Межд. Ед. витамина А, 50-200 мг цинка и 1-5 мг меди в течение 15-20 недель. Положительное воздействие (преимущество) комбинированной терапии анализируют как описано в примерах 6-9. Пример 16. Исследование связывания с клеточным ретинальдегид-связывающим белком (CRALBP) методом тушения флуоресценции. 0,5 мкМ Аро-CRALBP инкубируют с 1 мкМ 11-цис-ретиналя (11cRAL), полностью-транс-ретиналя(atRAL) или N-4-гидроксифенилретинамида (HPR) в PBS при комнатной температуре в течение 1 ч. В качестве контроля такой же объм ДМСО добавляют к раствору Apo-CRALBP. Интенсивность эмиссии в спектрах излучения определяют между 290 и 500 нм с длиной волны возбуждения 280 нм и полосой пропускания 2 нм (см. фиг. 7). По сравнению с контрольным ДМСО все три ретиноида заметно тушат флуоресцентное излучениеCRALBP, причм наивысший коэффициент тушения наблюдается в случае 11cRAL, а низший - в случаеHPR, это наводит на мысль, что все три соединения связываются с CRALBP. По-видимому, тушение флуоресценции является результатом переноса флуоресцентной резонансной энергии между ароматическими остатками белков и связанными ретиноидами. Пример 17. Изучение связывания с CRALBP методом высокоэффективной гель-хроматографии. 4 мкМ Аро-CRALBP инкубируют с 8 мкМ 11cRAL, atRAL или HPR в PBS при комнатной температуре в течение 1 ч. В контрольном эксперименте эквивалентный ДМСО добавляют к раствору CRALBP. 50 мкл каждой смеси анализируют на колонке для гель-хроматографии BioRad-Sil SEQ125 (3007,8 мм). В контрольном эксперименте с ДМСО (см. фиг. 8 а) apo-CRALBP элюируют в виде мультимеров(пик элюции при 8,1 мл); в то же время лигандсвязанный цельный белок (голопротеин) сдвигается к мономерной форме (пик элюции при 9,4 мл). В присутствии 11cRAL основная часть CRALBP связана с лигандом и сильное поглощение наблюдается при 430 нм в положении элюции мономера (см. фиг. 8b). Менее половины atRAL связано с CRALBP (см. фиг. 8 с) и только малое количество HPR связано с CRALBP,на это указывает пик поглощения (оптической плотности) при 350 нм (см. фиг. 8d). Пример 18. Исследование связывания MPR с ретинол-связывающим белком (RBP) методом тушения флуоресценции. 0,5 мкМ Apo-RBP инкубируют с 0,25, 0,5, 1 и 2 мкМ MPR в PBS при комнатной температуре в течение 1 ч соответственно. В качестве контроля Apo-RBP в такой же концентрации инкубируют с 1 мкМHPR или 1 мкМ atROL. Все смеси содержат 0,1% этанола (об./об.). Интенсивность эмиссии в спектрах излучения определяют между 290 и 550 нм с длиной волны возбуждения 280 нм и полосой пропускания 3 нм. Как показано на фиг. 9, в случае MPR наблюдается зависящее от концентрации тушение флуоресценции RBP, а насыщение тушения флуоресценции наблюдается при соотношении 1 мкМ MPR на 9,5 мкМ RBP. Так как, по-видимому, наблюдаемое тушение флуоресценции является результатом переноса флуоресцентной резонансной энергии между ароматическими остатками белков и связанной молекулойMPR, предполагают, что MPR связывается с RBP. Коэффициент тушения при использовании MPR меньше, чем в случае atROL и HPR, двух других лигандов, которые связываются с RBP. Пример 19. Изучение связывания транстиретина (TTR) с RBP методом высокоэффективной гельхроматографии. 10 мкМ Apo-RBP инкубируют с 50 мкМ MPR в PBS при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к раствору прибавляют 10 мкМ TTR и смесь инкубируют при комнатной температуре ещ в течение 1 ч. 50 мкл смеси образцов в присутствии и в отсутствие TTR анализируют на колонке для гельхроматографии BioRad-Sil SEQ125 (3007,8 мм). В контрольных экспериментах смесь atROL-RBP иatROL-RBP-TTR анализируют таким же образом. Как показано на фиг. 10 а, в образце MPR-RBP наблюдается пик элюции для RBP (при 11 мл) с сильной полосой поглощения при 360 нм, что указывает на связывание RBP с MPR; после инкубации сTTR это поглощение при 360 нм остатся с пиком элюции RBP, тогда как пик элюции TTR (при 8,6 мл) не содержит видимой полосы поглощения при 360 нм (см. фиг. 10b), это указывает, что MPR-RBP не связывается с TTR. В контрольном эксперименте с atROL-RBP при пике (максимальной) элюции RBP наблюдается сильное поглощение при 330 нм (см. фиг. 10 с); после инкубации с TTR более половины этой полосы поглощения при 330 нм сдвигается к пику элюции TTR (см. фиг. 10d), это указывает, чтоatROL-RBP связывается с TTR. Таким образом, MPR ингибирует связывание TTR с RBP. Пример 20. Анализ зависимости ретинола в сыворотке от концентрации HPR. АВСА 4 нуль-мутантным мышам дают указанную дозу HPR в ДМСО (и.п.) ежедневно в течение 28 дней (n=4 мыши на группу, получающую дозу). По окончании периода исследования собирают пробы крови животных и готовят сыворотку. После преципитации ацетонитрилом сывороточных белков определяют концентрации ретинола и HPR в растворимой фазе методом обращнно-фазовой ЖХ/MS (см. фиг 11). Идентичность элюированных соединений подтверждают спектрами поглощения в УФ/Vis-области и