Селективные агонисты рецептора y2 для терапевтического воздействия

011860 Область, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к пептиду или пептидным соединениям, которые ведут себя как селективные агонисты Y2 по сравнению с Y1 и Y4 рецепторами, и их применению при лечении состояний,чувствительных к активации Y2 рецепторов, например при лечении ожирения и избыточного веса, и состояний, при которых они рассматриваются как содействующие факторы, и для стимуляции гиперсекреции. Предпосылки создания изобретения Семейство пептидов с PP-складкой.NPY (нейропептид Y) (человеческая последовательность SEQ ID No:1), PYY (пептид YY) (человеческая последовательность SEQ ID No:2) и PP (панкреатический пептид) (человеческая последовательность SEQ ID No: 3) являются секретируемыми в природе гомологичными, содержащими последовательность из 36 аминокислот, амидированными по С-концу пептидами, которые характеризуются общей трхмерной структурой - PP-складкой, поразительно устойчивой даже в разбавленном водном растворе и важной для рецепторного распознавания (узнавания) пептидов. Первоначально с помощью рентгеновского кристаллографического анализа (PCA) более подробно была охарактеризована рентгеновская структура птичьего PP с разрешением до 0,98 , и уникальная структура получила сво название от этого пептида (Blundell et al. 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 4175-79; Glover et al. 1984, Eur. J. Biochem. 142: 379-85). Затем была проанализирована, главным образом,с помощью ЯМР-спектроскопии PP-складчатая структура других членов семейства. Ясно, что как РСА,так и ЯМР-спектроскопические исследования проводят в очень концентрированном или тврдом состоянии; однако точный анализ методом кругового дихроизма подтверждает, что NPY и PP даже в водном растворе принимает PP-складчатую структуру, необычную для такого малого пептида (Fuhlendorff et al. 1990, J. Biol. Chem. 265:11706-12). Важно отметить, что анализ протеолитической устойчивости пептидов и их фрагментов и аналогов чтко показывает, что, например, полноразмерный PP1-36 даже в разбавленном водном растворе сохраняет складчатую конфигурацию, которая защищает его от расщепления некоторыми ферментами, которые быстро и легко расщепляют аналоги, не способные принятьPP-складчатую структуру вследствие минорных замен (Schwartz et al. 1990, Annals NY, Acad. Sci. 611: 35-47).PP-складчатая структура, общая для NPY, PYY и PP, состоит из: 1) N-концевой полипролиноподобной спирали (соответствующей остаткам 1-8 с Pro2, Pro5 и Pro8),за которой следует 2) участок бета-поворота типа I (соответствующий остаткам с 9 по 12), далее следуют 3) амфифильная альфа-спираль (остатки 13-30), которая расположена антипараллельно полипролиновой спирали с углом около 152 между осями спиралей, и 4) С-концевой гексапептид (остатки 31-36). Складчатая структура стабилизирована за счт гидрофобных взаимодействий между боковыми цепями амфифильной альфа-спирали, которые тесно переплетаются с тремя гидрофобными остатками пролина (Schwartz et al. 1990). Помимо ключевых остатков в рецепторе, распознающем С-концевой гексапептид, именно ядерные гидрофобные остатки, которые являются консервативными в целом семействеPP-складчатых пептидов, стабилизируют PP-складчатую структуру. На фиг. 1 А изображена последовательность NPY с остатками, консервативными в ряду NPY, PYY и PP, показанными белыми буквами на тмном фоне. На фиг. 1 А также показаны элементы PP-складчатой структуры, описанные выше. С-концевой гексапептид, важный для рецепторного узнавания, является неструктурированным, ноPP-складка обеспечивает устойчивый каркас, презентирующий C-концевой гексапептид рецепторам (иллюстрируется на фиг. 1 В), которые до некоторой степени зависят или не зависят также от участковN-конца пептида. Анализ методом ЯМР-спектроскопии показал, что дальние С- и N-концевые участки,например NPY, являются достаточно подвижными, это означает, что PP-складке постоянно угрожает опасность оказаться с "расстегнутой молнией" на свободном конце.NPY является весьма распространнным нейропептидом, обладающим разнообразным действием в различных частях как центральной, так и периферической нервной системы, действующим с помощью различных субтипов рецептора в организме человека: Y1, Y2, Y4 и Y5. Основными NPY рецепторами являются Y1 рецептор, который обычно является постсинаптическим рецептором, передающим "действие" NPY нейронов, и Y2 рецептор, который обычно является пресинаптическим, ингибирующим рецептором. Это также имеет место в гипоталамусе, где NPY нейроны, которые также экспрессируют антагонист/обратный агонист рецептора мелакортина AgRP (агутиродственный пептид), ведут себя как первичные "сенсорные" нейроны в стимулирующей ветви дугообразного (аркуатного) ядра. Поэтому в этом"сенсорном ядре" для регуляции аппетита и потребления энергии NPY/AgRP нейроны, вместе с ингибирующими POMC/CART нейронами, контролируют гормональный и питательный статус организма, так как эти нейроны являются мишенью как действующих продолжительно регуляторов, таких как лептин и инсулин, так и кратковременных регуляторов, таких как грелин и PYY (см. ниже). СтимулирующиеNPY/AgRP нейроны распространяются, например, на паравентрикулярное ядро - также гипоталамуса,где, как полагают, их постсинаптическими нацеленными рецепторами являются Y1 и Y5 рецепторы.NPY является наиболее эффективным из известных соединений, способствующих повышению потреб-1 011860 ления пищи, так как грызуны после интрацеребровентрикулярной (ICV) инъекции NPY едят до тех пор,пока они в буквальном смысле не лопнут. AgRP, полученный при использовании NPY/AgRP нейронов,ведт себя как антагонист, главным образом, в отношении рецепторов меланокортинов типа 4 (МС-4) и блокирует действие пептидов из РОМС, в основном aMSH, на этот рецептор. Так как МС-4 рецепторный сигнал действует как ингибитор потребления пищи, действие AgRP, точно так же, как действие NPY,является стимулирующим сигналом для потребления пищи (т.е. ингибирование ингибирования, угнетение угнетения). На NPY/AgRP нейронах обнаружены ингибирующие-пресинаптические Y2 рецепторы,которые являются мишенью как локально высвобождающегося NPY, так и кишечного гормонаPYY выделяется в процессе еды, пропорционально калорийности пищи, энтероэндокринными клетками в дистальной части тонкого кишечника и толстой кишки, действуя как на периферии на функции ЖКТ, так и в центральной области как сигнал насыщения. Полагают, что периферически PYY действует как ингибитор - "удар под дых"- например, двигательной функции (моторики) верхнего ЖКТ, секреции желудочной кислоты и секреции экзокринных клеток поджелудочной железы. Полагают, что "центрально" PYY действует, главным образом, на пресинаптические ингибирующие Y2 рецепторы на NPY/AgRP нейронах в дугообразном (аркуатном) ядре, к которому он поступает из крови (Batterham et al. 2002,Nature, 418: 650-4). Пептид выделяется в виде PYY1-36, но часть - около 50% - циркулирует в кровотоке в виде PYY3-36, который является продуктом расщепления дипептидилпептидазой-IV, ферментом, который удаляет дипептид с N-конца пептида, при условии, что Pro или Ala находится в положении два, как во всех трх PP-складчатых пептидах: PP, PYY и NPY (Eberlein et al. 1989, Peptides, 10: 797-803). Таким образом, PYY в кровотоке представляет собой смесь PYY1-36, который действует как на Y1, так и на Y2 рецепторы (так же как Y4 и Y5 с различной аффинностью), и PYY3-36, который обладает более низкой аффинностью в отношении рецепторов Y1, Y4 и Y5 рецепторов, чем в отношении Y2 рецептора.PP представляет собой гормон, который выделяется эндокринными клетками в панкреатических островках, почти исключительно регулируемых вагусно холинергическими воздействиями, проявляемыми, главным образом, при потреблении пищи (Schwartz, 1983, Gastroenterology, 85: 1411-25). PP оказывает различное действие на желудочно-кишечный тракт, но оно обычно не наблюдается в изолированных клетках и органах и, очевидно, зависит от отсутствия нарушения вагусной иннервации (Schwartz, 1983,Gastroenterology, 85: 1411-25). В соответствии с этим PP-рецепторы, называемые Y4 рецепторами, расположены, главным образом, в стволе мозга с сильной экспрессией в моторных вагусных нейронах, активация которых вызывает периферические эффекты PP, и в ядрах одиночного пучка (NTS), активация которых вызывает действие PP как гормона насыщения (Whitecomb et al. 1990, Am. J. Physiol. 259: G687-91,LarsenKristensen, 1997, Brain Res. Mol. Brain Res. 48: 1-6). Следует отметить, что PP в крови имеет доступ к этой области мозга, так как гематоэнцефалический барьер "пропускает" в этой области, где обнаруживаются различные гормоны с периферии. Недавно были приведены доводы, что влияние PP на потребление пищи опосредуется действием на нейроны - в особенности POMC/CART нейроны в дугообразном ядре (Batterham et al. 2004. Abstract 3.3. International NPY Symposium in Coimbra, Portugal). PP действует через Y4 рецепторы, к которым он проявляет аффинность в субнаномолярных концентрациях, в отличие от PYY и NPY, которые проявляют аффинность к этому рецептору в наномолярных концентрациях (Michel et al. 1998, Pharmacol. Rev. 50:143-150). PP также проявляет заметную аффинность к рецептору Y5, но она, по-видимому, не имеет физиологического значения для циркуляции PP как вследствие отсутствия доступа к клеткам в ЦНС, где этот рецептор главным образом экспрессируется, так и вследствие относительно низкой аффинности к PP. Рецепторы PP-складчатых пептидов. Существует четыре точно установленных типа рецепторов PP-складчатых пептидов у человека: Y1,Y2, Y4 и Y5, которые (все) распознают NPY1-36 и PYY1-36 с аналогичной аффинностью. Одно время высказывалось предположение о типе рецептора Y3, который мог иметь предпочтение в отношении NPY по сравнению с PYY, но в настоящее время его не воспринимают как реальный подтип рецепторов(Michel et al. 1998, Pharmacol. Rev. 50: 143-150). Был клонирован подтип рецепторов Y6, однако в организме человека он экспрессируется в усечнной форме, не содержащей ТМ-VII, а также хвоста рецептора, и, следовательно, по меньшей мере, сам по себе, по-видимому, не может образовывать функциональную рецепторную молекулу.Y1 рецепторы. Исследования по аффинности наводят на мысль, что Y1 одинаково хорошо связывается как с NPY,так и с PYY, но, в принципе, не с PP. Аффинность к Y1 зависит от идентичности обеих концевых последовательностей PP-складчатой молекулы (NPY/PYY), например являются важными остатки Tyr1 и Pro2,и зависит от того, чтобы пептидные концы были представлены (презентированы) "правильным образом". На C-конце, где важными являются боковые цепи нескольких остатков, Y1 рецептор, подобно Y5 и Y4 рецептору, но не Y2 рецептору, допускает некоторые замены в положении 34 (обычно Gln), такие как Pro(Fuhlendorff et al. 1990, J. Biol. Chem. 265: 11706-12; Schwartz et al. 1990, Annals NY Acad. Sci. 61: 35-47). Сообщалось о некоторых исследованиях зависимости структура-функция, касающихся требований Y1 иY2 рецепторы. Исследования аффинности наводят на мысль, что Y2 одинаково хорошо связывается как с NPY, так и с PYY, но, в принципе, не с PP. Для рецептора нужен, главным образом, С-конец PP-складчатого пептида (NPY/PYY). Таким образом, длинные C-концевые фрагменты, например вплоть до NPY13-36 (целая альфа-спираль плюс C-концевой гексапептид), распознаются с относительно высокой аффинностью, т.е. в пределах величины, равной десятикратной величине аффинности полноразмерного пептида (Sheikh etN-концевые делеции, которые приводят к утрате связывания с Y1 рецептором, позволяют вс ещ до некоторой степени сохранять связывание с Y2 рецептором. Однако аффинность С-концевых фрагментов снижается примерно в 10 раз по сравнению с NPY/PYY даже для сравнительно длинных фрагментов. Остаток Gln в положении 34 NPY и PYY является в высшей степени важным для распознавания (узнавания) лиганда Y2 рецептором (Schwartz et al. 1990, Annals NY Acad. Sci. 611: 35-47).("субнаномолярная аффинность"), соответствующих концентрациям, обнаруживаемым в плазме, тогда как NPY и PYY распознаются со значительно более низкой аффинностью. Такие исследования наводят на мысль, что Y4 рецептор в высшей степени зависим от С-конца PP-складчатых пептидов и что относительно короткие N-концевые делеции уменьшают аффинность лигандов. Сообщалось о некоторых исследованиях структура-активность, относящихся к Y4 рецептору (Gehlert et al. 1996, Mol. Pharmacol. 50: 112-18; Walker et al. 199,7 Peptides 18: 609-12).Y5 рецепторы. Исследования аффинности показывают, что Y5 одинаково хорошо связывается с NPY и PYY, но также связывается с PP с более низкой аффинностью, которая, однако, ниже обычных уровней этого гормона в кровотоке. PYY3-36 также хорошо распознатся рецептором Y5, однако этот рецептор по большей части (в значительной степени) экспрессируется в ЦНС, где такой пептид не может легко получить доступ к рецептору при введении на периферии.PP-складчатые пептиды и их аналоги были предложены для применения при лечении ожирения и связанных с этим заболеваний, включая, например, синдром Прадера-Вилли, на основании действия этих пептидов, продемонстрированного на животных моделях и на человеке, и на основании того факта, что у людей, страдающих ожирением, наблюдаются низкие базальные уровни PYY и PP, а также более слабые реакции этих пептидов на пищу (Hoist J.J. et al. 1983, Int. J. Obes. 7: 529-38; Batterham et al. 1990, Nature). В 1993 году сообщалось, что вливание PP больным с синдромом Прадера-Вилли PP снижает потребление пищи (Berntson et al. 1993, Peptides, 14: 497-503), и этот эффект был подтверждн вливанием PP здоровым людям (Batterham et al. 2003, Clin. Endocrinol. Metab. 88: 3989-92). PP-складчатые пептиды также были предложены для применения при аналогичном терапевтическом ангиогенезе (Zukowska et al. 2003,Trends Cardiovasc. Med. 13: 86-92) и при воспалительном заболевании кишечника (см., например,Международную заявку WO 03/105763). Однако нативные PP-складчатые пептиды не являются оптимальными для применения в качестве биофармацевтических веществ. Например, полноразмерные пептиды PYY1-36 и NPY1-36 реагируют слишком неизбирательно со всеми типами рецепторов Y и, следовательно, будут вызывать побочные эффекты в сердечно-сосудистой системе и, например, рвоту. Кроме того, природные пептиды не оптимизированы по устойчивости белка, так как их готовят таким образом, чтобы они действовали в течение сравнительно короткого времени в качестве нейропептида или гормона. Природный, более селективный в отношении Y2 пептид, PYY3-36, имеет, например, искажнную тыльную сторону, так что егоPP-складчатая структура ухудшена вследствие элиминирования важного остатка Pro2 полипролиновой спирали, который в полноразмерном пептиде взаимодействует с Tyr27 в амфифильной спиральной области молекулы. Для лечения состояний, откликающихся на Y-рецепторную модуляцию, желательно, следовательно,использовать Y-рецепторные PP-складчатые пептиды или PP-складчатые пептиды-миметики, которые являются специфическими в отношении выбранного Y рецептора, предполагаемого в качестве мишени, и которые устойчиво сохраняют элементы PP-складчатой структуры, важные для рецепторного связывания. В частности, было бы в высшей степени желательно использовать такие агенты, которые селективны в отношении Y2 рецептора по сравнению с Y1 и Y4 рецепторами. Y2 рецептор является рецептором,который оказывает благотворное действие, например, на потребление пищи и расход энергии при лечении ожирения, метаболического синдрома и т.д., а также именно Y2 рецептор способствует достижению терапевтического ангиогенеза у пациентов, например, с заболеванием периферических сосудов или с заболеванием коронарных сосудов. Однако агент, который действует как агонист Y2 рецептора, не очень применим для такого лечения, если он не является селективным к Y2 рецептору по сравнению с Y1 и Y4 рецепторами. Агонизм к Y1 рецептору может вызвать серьзные побочные эффекты в сердечнососудистой системе - повышение кровяного давления, а также в почках - натрийурез. Аналогично желательна селективность к Y2 по сравнению с Y4, так как два природных Y2 и Y4 агониста, PYY и PP соот-3 011860 ветственно, вызывают многие аналогичные эффекты, например, в желудочно-кишечном тракте, некоторые из которых могут быть благотворными, но некоторые из них могут вызывать нежелательные побочные эффекты. Например, как Y2, так и Y4 рецепторы промотируют антисекреторные эффекты в тонком и толстом кишечнике соответственно при использовании нейронов и непосредственно через эпителий (Coxet al. 2001, Br. J. Pharmacol. 135: 1505-12). Таким образом, по-видимому, аддитивный или, возможно, даже, синергический антисекреторный эффект получают с помощью комбинированной стимуляции Y2 иY4 рецептора, что может привести к констипации. Некоторые общие термины, применяемые в описании. Аффинность: Аффинность пептида к специфическому рецептору выражается, например, величинойIC50 или величиной K1 или Kd, которая в конкретном неограничивающем примере определяется анализом, например, таким как анализ конкурентного связывания. Значение IC50 соответствует концентрации пептида, который замещает релевантный для данного рецептора радиоактивный лиганд, применяемый в количестве, значительно меньшем, чем Kd для этого радиоактивного лиганда, на 50%. Аппетит: Естественная потребность в еде или сильное желание еды. Повышенный аппетит обычно приводит к повышенному пищевому поведению. Супрессоры аппетита: Соединения, понижающие потребность в еде (желание есть). Связывание: Специфическое взаимодействие между двумя молекулами, так что две молекулы взаимодействуют. Связывание с рецептором может быть специфическим и селективным, так что связывается преимущественно одна молекула по сравнению с другой молекулой. Специфическое связывание можно определять константой диссоциации (Kd). Эта величина зависит от селективности испытуемого соединения. Например, соединение с Kd ниже 10 нМ обычно считается прекрасным возможным лекарством. Однако соединение с более низкой аффинностью, но селективное в отношении конкретного рецептора также может быть хорошим возможным лекарством. Индекс массы тела (ИМТ, BMI): Математическая формула для измерения массы тела, иногда также называемая индексом Кветеля. BMI рассчитывают как частное от деления массы (в кг) на рост 2 (в м 2). Современными стандартами как для мужчин, так и для женщин, принятыми за "нормальные", являютсяBMI около 20 кг/м 2. В одном варианте изобретения для определения страдающего ожирением субъекта можно применять BMI выше 25 кг/м 2. Первая степень ожирения соответствует BMI 25 кг/м 2. Вторая степень ожирения соответствует BMI 30-40 кг/м 2 и третья степень ожирения соответствует BMI выше 40 кг/м 2 (Jequier, 1987, Ain. J. Clin. Nutr. 45: 1035-47). Идеальный вес тела различен у разных видов и индивидуумов и зависит от роста, строения тела, строения костей и пола. Потребление калорий, или потребление в калориях: Число калорий (энергия), потребляемых индивидуумом. В контексте настоящего изобретения этот термин идентичен термину "потребление энергии". Косметическое лечение: Предполагается, что этот термин обозначает лечение не с медицинской целью, но для улучшения качества жизни субъекта, например внешнего вида субъекта. Этот термин включает лечение субъекта, желающего снизить свой вес, не будучи человеком, страдающим избыточным весом или ожирением. Потребление пищи: Количество пищи, потребляемой индивидуумом. Потребление пищи можно измерять объмом или весом. Это выражение включает:i) потребление пищи как общее количество поглощнной индивидуумом пищи иii) потребление пищи как количество белков, жиров, углеводов, холестерина, витаминов, минералов или любых других пищевых компонентов, поглощнных индивидуумом. Соответственно, выражение "потребление пищи" в контексте настоящего изобретения аналогично выражению "потребление энергии". Нормальная дневная диета: Среднее потребление пищи индивидуумом данного вида. Нормальную дневную диету можно выражать терминами "потребление калорий", "потребление белков", "потребление углеводов" и/или "потребление жиров". Нормальная дневная диета человека обычно содержит следующее: от около 2000, около 2400 или около 2800 до значительно большего числа калорий. Кроме того,нормальная дневная диета человека обычно включает примерно 12-45 г белков, около 120-610 г углеводов и около 11-90 г жиров. Низкокалорийная диета составляет примерно не более 85% и предпочтительно не более 70% нормального потребления в калориях человека. У животных потребности в калориях или в пище меняются в зависимости от вида и размера животного. Например, у кошек общее потребление калорий на 1 кг, а также распределение белков, углеводов и жиров в процентах меняется с изменением возраста кошки и репродуктивного состояния. Ожирение: Состояние, при котором избыточный вес тела может стать причиной повышенного риска для здоровья человека (см. Barlow and Dietz, Pediatrics, 102: E29, 1998; National Institutes of Health,National Heart, Lung and Blood Institute (NHLBI), Obes. Res. (suppl. 2): 51, S209, 1998). Избыточный телесный жир является результатом дисбаланса между потреблением и расходом энергии. В одном варианте изобретения для оценки ожирения применяют индекс массы тела (BMI). В одном варианте изобретенияBMI примерно от 22 кг/м 2 (т.е. примерно на 10% выше нормального значения) и примерно до 30 кг/м 2 рассматривается как избыточный вес, особенно примерно от 25 до 30 кг/м 2, тогда как BMI 30 кг/м 2 или выше рассматривается как ожирение.-4 011860 Избыточный вес: Вес индивидуума, который выше идеального веса его тела. Индивидуум с избыточным весом может страдать ожирением, но необязательно ожирением. В одном варианте изобретения индивидуумом (человеком), страдающим избыточным весом, является любой индивидуум, желающий снизить свой вес. В другом варианте изобретения индивидуум (человек) с BMI примерно от 22 кг/м 2 (т.е. примерно на 10% выше нормального значения) и примерно до 30 кг/м 2 рассматривается как человек,страдающий избыточным весом, особенно примерно от 25 до 30 кг/м 2. Следует отметить, что субъекты,имеющие BMI немногим выше нормального значения (например, около 22-25 кг/м 2), очень часто желают снизить вес, хотя это возможно только в косметических целях. Эффективность (активность): In vitro эффективность соединения определяется величиной EC50, т.е. концентрацией, которая дат 50% максимально достижимого эффекта, определяемого релевантным для данного рецептора анализом передачи сигнала. Субъект: Субъект может быть любым субъектом, включая как человека, так и млекопитающих. Так,субъект может быть человеческим или нечеловеческим приматом, сельскохозяйственным животным,таким как свиньи, крупный рогатый скот, овцы и птицы, спортивным или домашним животным, таким как собаки, кошки, лошади, хомяки, и грызунами. Терапевтически эффективное количество: Доза, достаточная для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности конкретного состояния или заболевания и/или для ослабления специфических признаков или симптомов конкретного состояния или заболевания. Термин (выражение) включает дозу, достаточную для предупреждения прогрессирования или для того, чтобы вызвать регрессию нарушения, или дозу, способную облегчить признак или симптом нарушения, или дозу, которая позволяет достичь нужного результата. В вариантах изобретения, относящихся к косметическому лечению или к лечению избыточного веса или ожирения, терапевтический эффект рецепторного агониста определяется количеством, достаточным для ингибирования или прекращения увеличения веса тела, или количеством,достаточным для снижения аппетита, или количеством, достаточным для уменьшения потребления энергии или пищи или для повышения расхода энергии. Предполагается, что термин (выражение) "косметически эффективное количество" обозначает дозу, достаточную для достижения нужного эффекта при лечении субъекта. Подробное описание изобретения В свом самом широком аспекте настоящее изобретение охватывает применение Y-рецепторного агониста, отличного от PYY3-36, селективного в отношении Y2 рецептора по сравнению с Y1 и Y4 рецепторами, для получения композиции для активации Y2 рецепторов, причм:(а) указанный агонист является PP-складчатым пептидом или PP-складчатым пептидом-миметиком,выбранным из PYY, NPY, PYY миметиков и NPY миметиков, который не содержит остатка тирозина, соответствующего Tyr1 в NPY, и/или не содержит остатка пролина, соответствующего Pro2 в NPY, и/или не содержит остатка серина, аспарагина, глутамина, треонина, лейцина, изолейцина, валина, метионина, триптофана, тирозина или фенилаланина, соответствующего Ser3 в NPY,содержит остаток, отличный от лейцина, в положении, соответствующем Leu24 в NPY, и/или содержит остаток, отличный от аргинина, в положении, соответствующем Arg25 в NPY, и/или содержит остаток, отличный от гистидина, в положении, соответствующем His26 в NPY, и/или содержит остаток, отличный от изолейцина, в положении, соответствующем Ile28 в NPY, и/или содержит остаток, отличный от аспарагина, в положении, соответствующем Asn29 в NPY, и/или содержит остаток, отличный от лейцина или метионина, в положении, соответствующем Leu30 в(б) указанный агонист является PP-складчатым пептидом или PP-складчатым пептидом-миметиком,выбранным из PP и PP-миметиков, которые содержат С-концевую аминокислотную последовательностьY2-рецепторного распознавания и не содержат пролина в положении, соответствующем Pro2 в PP, и/или не содержат лейцина в положении, соответствующем Leu3 в PP, и/или не содержат глутаминовой кислоты в положении, соответствующем Glu3 в PP; илиY2-рецепторного распознавания (узнавания), связанную по своему N-концу с амфифильным доменом аминокислотной последовательности, содержащим по меньшей мере один альфа-спиральный поворот,прилегающий к N-концу указанной последовательности Y2-рецепторного распознавания, причм указанный поворот ограничен спиральной конфигурацией за счт ковалентной внутримолекулярной связи, и(ii) в случае, когда агонист имеет N-концевую структуру, аналогичную NPY или PYY, он содержит одну или более модификаций, перечисленных в (а), см. выше, и в случае, когда агонист имеет N-концевую структуру, аналогичную PP, он содержит одну или более модификаций, перечисленных в (б), см. выше. Специфическая терминология, относящаяся к изобретению. Агонисты, к которым относится настоящее изобретение, являются селективными в отношении Y2 рецептора по сравнению с Y1 и Y4 рецепторами. В контексте настоящего изобретения это условие выполняется, если величина IC50 агониста по меньшей мере в 10 раз ниже в отношении Y2 рецептора, чем в отношении Y1 и Y4 рецепторов, при определении методами анализа аффинности по данному описанию.-5 011860 В целом, что касается эффективности (активности), значения EC50 агонистов по данному изобретению также по меньшей мере в 10 раз ниже для Y2 рецептора, чем в отношении Y1 и Y4 рецепторов, как определено анализом активности по данному описанию. Многие из предпочтительных агонистов по данному изобретению имеют величины аффинности и эффективности по меньшей мере в 100 раз выше в отношении Y2 рецепторов, чем в отношении Y1 и Y4 рецепторов, эта разница выше разницы, полученной в случае природного пептида PYY3-36. Некоторые из предпочтительных агонистов по данному изобретению имеют величины аффинности и эффективности по меньшей мере в 1000 раз выше в отношении Y2 рецепторов, чем в отношении Y1 и Y4 рецепторов. Для целей данного описания PP-складчатый пептид представляет собой молекулу, имеющую 3-D структуру, которая, будучи картирована на оригинальную 3-D структуру птичьего PP, определнную методом PCA (Blundell et al. 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 4175-79; Glover et al. 1984, Eur. J. Biochem. 142: 379-85), имеет домены, соответствующие доменам и практически выравниваемые, как и в доменах N-концевой полипролиноподобной спирали, области бета-поворота типа I, амфифильной альфаспирали и С-концевого гексапептида указанного NPY, PYY и/или PP (фиг. 1). Таким образом, описание различных доменов PP-складчатых пептидов, применяемых в данном изобретении, относится к оригинальной рентгеновской структуре птичьего PP (Blundell et al. 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 417579; Glover et al. 1984, Eur. J. Biochem. 142: 379-85; Schwartz et al. 1990).PP-складчатый пептид-миметик по настоящему описанию обозначает молекулу, имеющую 3-D структуру, которая при картировании на оригинальную 3-D структуру птичьего PP, по меньшей мере,имеет домены, соответствующие доменам и практически выравниваемые, как и в доменах последнего поворота амфифильной альфа-спирали и С-концевого гексапептида PP. PP-складчатые пептидымиметики могут также при вышеуказанном картировании иметь домены, соответствующие одному или более остальных поворотов амфифильной альфа-спирали, N-концевой полипролиноподобной спирали и области бета-поворота типа I. Пептид-миметик необязательно состоит исключительно из последовательности альфа-аминокислот, связанных классическими пептидными связями. Одна или более связей в такой последовательности может быть замещена пептидомиметическими связями, такими как обратная амидная и восстановленная пептидная связи, так что пептид-миметик можно рассматривать как псевдопептидную последовательность. Такие замены связей могут придать устойчивость к расщеплению эндопептидазами и улучшить фармакодинамические свойства молекулы. Такие сравнения 3-D структуры, как упомянутые в вышеприведнных определениях"PP-складчатого пептида" и "PP-складчатого пептида-миметика", можно делать, конструируя модели молекул сравнения на основании координат их атомов, определяемых, например, методом PCA или с помощью одной или более компьютерных программ, выпускаемых для визуализации прогнозируемой на основании структурной формулы 3-D структуры молекулы, например "Maestro Modeling Environment" отSchrodinger Inc., 1500, S. W. First Avenue, Suite 1180 Portland, OR 97201; "Insight II Modeling Environment",версия 4.0, от Accelrys Inc. San Diego; и "SYBYL 7.0" от Tripos Inc., 1699 South Hanley Rd., St. Louis,Missouri, 63144, USA. Следует отметить, что 3-D структура PP-складчатого пептида или PP-складчатого пептида-миметика по настоящему изобретению необязательно должна точно соответствовать и обычно не соответствует точно 3-D структуре природного NPY, PPY или PP. Наблюдаемая 3-D структураPP-складчатого пептида или PP-складчатого пептида-миметика меняется в зависимости от применяемых экспериментальных условий, и в особенности малые пептиды могут казаться более или менее разврнутыми в определнных условиях. Однако достаточно, чтобы PP-складчатый пептид или PP-складчатый пептид-миметик имел домены, соответствующие описанным выше доменам PP-складки, и чтобы он имел структурные элементы для того, чтобы принять общую форму, аналогичную форме нативного пептида, в котором С-концевая и, при наличии, N-концевая последовательности были нормально ориентированы. В агонистах, к которым относится данное изобретение, C-концевая последовательностьY2-рецепторного распознавания (распознавания Y2 рецептором) представляет собой последовательность обычно протяжнностью около 5-7 остатков и в особенности гексапептидную последовательность, расположенную на С-конце агониста, которая в случае е присутствия в PP-складчатом пептиде илиPP-складчатом пептиде-миметике связывается с Y2 рецептором и активирует рецептор за счт этого связывающего взаимодействия. Классические С-концевые последовательности Y2-рецепторного распознавания представляют собой последовательности, обнаруживаемые в природном NPY или PYY пептиде,но, как станет очевидно из данного описания, эти классические последовательности можно модифицировать для того, чтобы сохранить распознавание Y2, но уменьшить распознавание Y1. С-концевая последовательность, присутствующая в любом конкретном агонисте, представляет собой последовательностьY2-рецепторного распознавания, если рассматриваемый PP-складчатый пептид или PP-складчатый пептид-миметик взаимодействует с Y2 рецептором в анализах аффинности и/или активности по данному описанию, когда эта последовательность присутствует, но не тогда (или в незначительной степени), когда эта последовательность удалена (делетирована). В данном описании выражение, такое как "остаток, соответствующий положению Ser3 NPY", является ссылкой на аминокислотный остаток агониста, который при картировании 3-D структуры агониста на 3-D структуру NPY отображается (картируется) наиболее близко к остатку Ser3 NPY. Аналогично,-6 011860 выражение, такое как "положение, соответствующее положению Glu4 PP", является ссылкой на положение аминокислотного остатка в агонисте, который при картировании 3-D структуры агониста на 3-D структуру PP отображается (картируется) наиболее близко к остатку Glu4 PP. Действительная нумерация конкретного остатка в конкретном пептиде может отличаться от этой нумерации, например, вследствие делеций относительно природных пептидов. В целом, PP-складчатые агонисты или PP-складчатые агонисты-миметики, которые рассматриваются в настоящем изобретении, обычно имеют пептидный каркас или частично пептидный каркас, по меньшей мере, имеют C-концевую аминокислотную последовательность и часто N-концевую аминокислотную последовательность, хотя остальная часть каркаса может представлять собой непептидный линкерный радикал, например линейную или разветвлнную алкиленовую цепь. Аминокислоты, присутствующие на пептидном(ых) участке(ах) агонистов, обычно являются природными, особенно в С- иN-концевых последовательностях, которые взаимодействуют с Y2 рецептором, но также могут присутствовать неприродные альфа-аминокислоты, которые защищают PP-складку, но не предупреждаютY2-рецепторное связывание. Если агонисты по настоящему изобретению содержат С- и N-концевые аминокислотные последовательности, то С-концы могут быть амидированы и/или N-концы могут быть ацилированы с целью придать резистентность к карбокси- и/или аминопептидазам. На самом деле С-концы нативных NPY, PYY иPP пептидов являются амидированными, так что С-концевая аминокислота агониста по изобретению может быть также амидированной. В данном описании ссылки на аминокислоты даются в виде их обычных названий или в виде сокращений, например валин (Val), лейцин (Leu), изолейцин (Ile), метионин (Met), фенилаланин (Phe), аспарагин (Asn), глутаминовая кислота (Glu), глутамин (Gln), гистидин (His), лизин (Lys), аргинин (Arg),аспарагиновая кислота (Asp), глицин (Gly), аланин (Ala), серин (Ser), треонин (Thr), тирозин (Tyr), триптофан (Trp), цистеин (Cys) и пролин (Pro). Когда называется обычное название или аббревиатура без указания стереоизомерной формы, следует понимать, что речь идт об L-форме рассматриваемой кислоты. Когда подразумевается D-форма, она специально указывается в названии аминокислоты. Иногда, когда этого требует контекст, L-форма скорее описывается, нежели подразумевается. Термин "консервативная замена" по данному описанию обозначает, что одна или более аминокислот замещены на другой, биологически сходный остаток. Примеры включают замену на аминокислотные остатки со сходными характеристиками, например малые аминокислоты, кислые аминокислоты, полярные аминокислоты, основные аминокислоты, гидрофобные аминокислоты и ароматические аминокислоты. Неограничивающие примеры консервативных аминокислотных замен, пригодных для применения в настоящем изобретении, включают консервативные аминокислотные замены, представленные в приведнной ниже таблице, и аналогичные замены исходного остатка неприродными альфа-аминокислотами с аналогичными характеристиками. Например, в предпочтительном варианте изобретения остатки Met замещаются на норлейцин (Nle), биоизостер Met, но который, в отличие от Met, трудно окисляется. Другим примером консервативной замены на остаток, обычно не присутствующий в эндогенных пептидах и белках млекопитающих, является консервативная замена Arg или Lys, например, на орнитин, канаванин,аминоэтилцистеин или другую основную аминокислоту. Более подробные сведения о фенотипически молчащих заменах в пептидах и белках даны, например, в Bowie et al. Science, 247, 1306-1310, 1990. Если не указано иначе в контексте, в котором он встречается, термин "замещнный" в применении к любому фрагменту по данному описанию означает имеющий до четырх совместимых заместителей,каждый из которых, независимо, может представлять собой, например, (C1-C6)алкил, (С 1-C6)алкокси,-7 011860 гидрокси, гидрокси(С 1-C6)алкил, меркапто, меркапто(C1-C6)алкил, (С 1-C6)алкилтио, галоген (включая фтор, бром и хлор), трифторметил, трифторметокси, нитро, нитрил (-CN), оксо, фенил, -СООН, -COORA,-CORA, -SO2RA, -CONH2, -SO2NH2, -CONHRA, -SO2NHRA, -CONRARB, -SO2NRARB, -NH2, -NHRA, -NRARB,-OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHSO2ORA, -NRBSO2OH,-NHCONH2, -NRACONH2, -NHCONHRB, -NRACONHRB, -NHCONRARB или -NRACONRARB, где RA и RB,независимо, обозначают (С 1-C6)алкильную группу. "Возможный (необязательный) заместитель" может представлять собой одну из приведнных выше замещающих групп. Если контекст не диктует иначе, ссылки по данному описанию на NPY, PYY и PP пептиды и их последовательности относятся к человеческим формам этих пептидов и их последовательностям. Однако часто NPY, PYY и PP пептиды других млекопитающих образуют PP-складчатые пептиды-миметики человеческих NPY, PYY и PP или консервативно замещнных человеческих NPY, PYY и PP, когда эти термины применяются в данном описании. Агонисты типа (а) для применения по данному изобретению Обычно агонисты типа (а) являются PP-складчатыми аналогами NPY или PYY или PP-складчатыми миметиками NPY или PYY, имеющими модификации для того, чтобы значительно снизить активность кY1 рецептору. Такие PP-складчатые аналоги и миметики включают пептиды, имеющие полный комплемент характеристик PP-складчатых пептидов (N-концевую полипролиноподобную спираль, бетаповорот, амфифильную альфа-спираль и С-концевой гексапептид), пептидные аналоги, в которых часть каркаса (например, остатки бета-поворота и прилегающие остатки) замещена на непептидную спейсерную цепь, и усечнные (процессированные) пептиды, содержащие С-концевой гексапептид и последний поворот амфифильной альфа-спирали, но не содержащие целую полипролиноподобную спираль или е часть и/или весь бета-поворот или его часть. Одна группа Y2-селективных агонистов типа (а), см. выше, к которому относится изобретение, содержит остаток, отличный от Tyr, Trp или Phe в положении, соответствующем Tyr1 в NPY, и/или остаток, отличный от Pro, в положении, соответствующем Pro2 NPY, и/или остаток, отличный от Ile, Leu,Val, Phe, Trp, Tyr, Ser, Thr и Asn, в положении, соответствующем Ser3 в NPY, и/или остаток, отличный от лизина или аргинина, в положении, соответствующем Lys4 NPY. Особенно предпочтительная подгруппа агонистов этого типа состоит из пептидов, имеющих последовательность, идентичную последовательности человеческого NPY, за исключением того, что остаток,отличный от Tyr, Trp или Phe, находится в положении 1, и/или остаток, отличный от Pro, находится в положении 2, и/или остаток, отличный от Ile, Leu, Val, Phe, Trp, Tyr и Asn, находится в положении 3,и/или остаток, отличный от лизина или аргинина, находится в положении 4. Хотя предпочтительна существенная идентичность между такими агонистами и нативными последовательностями (помимо любых описанных изменений в положениях 1-4), может быть допустима консервативная замена других остатков нативной последовательности, особенно удалнная от С-концевой гексапептидной последовательности. Агонисты типа (b) для применения по данному изобретению Обычно агонисты типа (b) представляют собой PP-складчатые аналоги PP или PP-складчатые миметики PP, которые содержат модификации с целью значительно понизить их активность к Y4 рецепторам и повысить их активность к Y2 рецепторам. Как и в случае агонистов типа (а), этот класс включает пептиды, имеющие полный комплемент характеристик PP-складчатых пептидов (N-концевую полипролиноподобную спираль, бета-поворот, амфифильную альфа-спираль и С-концевой гексапептид), пептидные аналоги, в которых часть каркаса (например, остатки бета-поворота и прилегающие остатки) замещена на непептидную спейсерную цепь, и усечнные (процессированные) пептиды, содержащие С-концевой гексапептид и последний поворот амфифильной альфа-спирали, но не содержащие целую полипролиноподобную спираль или е часть и/или весь бета-поворот или его часть. Предпочтительная группа Y2-селективных агонистов типа (b), см. выше, к которым относится данное изобретение, содержит Gln или структурно сходный остаток в положении 34 и остаток, отличный отVal, в положении, соответствующем Leu3 в PP, и/или остаток, отличный от Glu или Asn, в положении,соответствующем Glu4 в PP. Особенно предпочтительная подгруппа агонистов этого типа состоит из пептидов, имеющих последовательность, идентичную последовательности человеческого PP, за исключением того, что в положении 34 имеется остаток Gln, и остаток, отличный от Pro, Tyr, Phe и Trp, в положении 2, и/или остаток,отличный от Ile, Leu, Met и Val, в положении 3, и/или остаток, отличный от Glu или Asn, в положении 4. Хотя предпочтительна существенная идентичность между такими агонистами и нативными последовательностями (помимо любых описанных изменений в положениях 2-4), может быть допустима консервативная замена других остатков нативной последовательности, особенно удалнная от C-концевой гексапептидной последовательности.-8 011860 Агонисты типа (с) для применения по изобретению Как правило, агонисты типа (с) можно рассматривать как PP-складчатые пептидные аналоги илиPP-складчатые миметики, у которых минимальные структурные признаки PP-складки (С-концевой гексапептид и последний поворот альфа-спирали) стабилизированы определнной внутримолекулярной ковалентной связью. Агонисты этого типа характеризуются внутримолекулярной связью, которая либо не имеет эквивалента в нативных NPY, PYY или PP пептидах, либо соответствует нековалентному взаимодействию, либо замещает нековалентное взаимодействие с ковалентной связью, например ковалентный дисульфидный мостик между Cys2 и D-Cys27 в [Cys2,D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 13) имитирует нековалентное гидрофобное взаимодействие между боковыми цепями Pro2 и Tyr27, наблюдаемое в рентгеновской структуре птичьего PP. Установлено, что такая связь может служить для стабилизации обязательных элементовY2-распознавания и последнего поворота альфа-спирали, и/или презентации N-конца. В полноразмерных или близких к полноразмерным пептидах такая связь может стабилизировать нативную PP-складчатую структуру, как таковую. Это выгодно по двум причинам: во-первых, она стабилизирует С-концевой участок амфифильной альфа-спирали и, тем самым, презентирование С-концевой аминокислотной последовательности Y2-распознавания оптимальным образом, что вызывает высокую активность к Y2 рецептору; во-вторых, за счт стабилизации целой PP-складки, как таковой, пептид становится менее чувствительным к протеолитическому расщеплению, так как для таких ферментов часто требуется, чтобы их целевые последовательности находились в относительно нескрученной форме (Schwartz et al. 1990). Внутримолекулярная связь может также способствовать Y2-селективным агонистам, которые трудно модифицируются сравнительно со структурой нативных пептидов, например агонистам, у которых отсутствует один или более доменов, или участков доменов, имеющихся в нативных пептидах. Одна группа агонистов такого типа (с) имеет PP-складчатую структуру, в которой ограничивающая спиральный поворот внутримолекулярная связь тянется от аминокислотного остатка в амфифильном домене до точки связывания в N-концевом участке агониста, соответствующем домену полипролинаPP-складчатого пептида, который тянется антипараллельно амфифильному домену. В случае, когда такие агонисты имеют N-концевую структуру, аналогичную N-концевой структуре NPY или PYY, например имеющую N-концевой домен, который картируется на последние несколько остатков NPY или PYY, агонисты не должны содержать остаток тирозина, соответствующего Tyr1 NPY, и/или не содержат остаток пролина, соответствующий Pro2 в NPY, и/или не содержат остатка серина, аспарагина, глутамина, треонина, лейцина, изолейцина, валина, метионина, триптофана, тирозина или фенилаланина, соответствующего Ser3 NPY, и/или не содержат остатка лизина или аргинина, соответствующего Lys4 NPY. В случае,когда такие агонисты имеют N-концевую структуру, аналогичную N-концевой структуре PP, например имеющую N-концевой домен, который картируется на последние несколько остатков PP, агонисты не содержат остаток пролина в положении, соответствующем Pro2 в PP, и/или не содержат остаток лейцина в положении, соответствующем Leu3 в PP, и/или не содержат остаток глутаминовой кислоты в положении, соответствующем Glu4 PP. Сдерживающая (ограничивающая) спиральный поворот внутримолекулярная связь, например дисульфидная или лактамная связь, в вышеприведнных случаях может простираться от аминокислотного остатка в амфифильном домене до одного из четырх N-концевых остатков. В особенно предпочтительной подгруппе агонисты этого типа состоят из пептидов, имеющих последовательность, идентичную последовательности человеческого PYY, за исключением того, что сдерживающая спиральный поворот внутримолекулярная связь тянется от аминокислотного остатка в амфифильном домене до точки связывания в N-концевой части домена полипролина. Такая связь может находиться между остатками в положениях 5 и 20 или 8 и 16 или, в особенности, между положениями 2 и 27,например дисульфидная связь между D-Cys в положении 27 и Cys в положении 2. D-форма Cys предпочтительна в положении 27, так как она оптимально ориентирует тиольную боковую цепь с образованием дисульфидного мостика с "нормальной" L-формой Cys, введнного в положение 2, чтобы вся молекула целиком приняла и имитировала PP-складчатую структуру. Следует отметить, что хотя полноразмерныеPP-складчатые пептиды, содержащие стабилизирующую внутримолекулярную связь, могут иметь дальний N-концевой участок молекулы, которая в принципе требуется для Y1-рецепторного распознавания,аналоги по настоящему изобретению не ведут себя как агонисты Y1 рецептора или только лишь с низкой активностью, как описано выше. Причиной этого является либо то, что внутримолекулярная связь, как таковая, включает остатки,которые обычно требуются для Y1 распознавания, например Pro2 и Tyr27, либо в случаях, когда связь находится в положении, удалнном от эпитопов распознавания Y1, замены в пептиде делают сознательно, чтобы гарантировать селективность к Y2 по сравнению с Y1. Хотя предпочтительна существенная идентичность между такими агонистами и нативной последовательностью PYY (помимо любых изменений, вызванных созданной внутримолекулярной связью), в таких аналогах может быть допустима консервативная замена других остатков нативной последовательности, особенно удалнная от С-концевой гексапептидной последовательности.-9 011860 В другой группе агонистов типа (с) сдерживающая спиральный поворот внутримолекулярная связь соединяет остатки в последнем спиральном повороте домена альфа-спирали, например лактамная связь,образующаяся между остатками Lys и Glu в спиральном повороте или между остатком в С-концевой аминокислотной последовательности Y2-распознавания и остатком в последнем спиральном повороте домена альфа-спирали, например лактамный мостик между Lys28 и Glu32 в [Lys28, Glu32]PYY25-36(SEQ ID No: 19, фиг. 2 В). Одна подгруппа агонистов этого типа имеет последовательность, идентичную последовательности человеческого PYY, за исключением того, что она является усечнной по N-концу,например по остатку 27, и, конечно, за исключением любых изменений, необходимых при создании внутримолекулярной связи. Аспекты агонистов типа (а), (b) и (с), применяемых по данному изобретению С-конец. Будучи селективными к Y2, все три типа агониста, к которому относится данное изобретение, содержат С-концевую аминокислотную последовательность Y2-рецепторного распознавания (распознавания Y2 рецептором (рецептора. Методом проб и ошибок в анализах аффинности и активности по данному описанию можно легко определить, действительно ли конкретная С-концевая испытуемая последовательность узнат Y2 рецептор. Одна группа предпочтительных C-концевых последовательностей-X-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-C(=O)NR1R2, где Х не является ни основным, ни кислым остатком, R1 и R2, каждый, обозначают водород или C1-C6 алкил, или е консервативно замещнный вариант, в котором Thr замещн на His или Asn, и/или Tyr замещн на Trp или Phe; и/или Arg замещн на Lys. В настоящее время предпочтительно, когда R1 и R2, каждый, обозначают водород. Одна конкретная С-концевая аминокислотная последовательностьY2-рецепторного распознавания представляет собой -Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-C(=O)NH2, a другая представляет собойY2-рецепторного распознавания, может быть слита (связана) по своему N-концу с амфифильным доменом аминокислотной последовательности, содержащим по меньшей мере один альфа-спиральный поворот, прилегающий к N-концу указанного эпитопа, и N-концевой аминокислотной последовательностью по меньшей мере из двух аминокислот, причм указанные С- и N-концевые аминокислотные последовательности соединены пептидными связями с линкерным радикалом, который может представлять собой линейный или разветвлнный алкиленовый радикал, необязательно содержащий одну или более двойных или тройных связей. Например, пептидные связи линкерного радикала могут быть образованы, соответственно, карбоксильной группой и аминогруппой аминокислоты формулы NH2(CH2)nCO2H, где n имеет значение от 2 до 12, главным образом 6, 7, 8, 9 или 10. Так, агонист может являться аналогом NPY, PPY или PP, который содержит описанный мостик Cys-Cys, но при этом его аминокислотные остатки, соответствующие 5-24 нативного пептида, замещены на аминокарбоновую кислоту с углеродной цепью, содержащей 6-10 атомов углерода, выбранную из группы, состоящей из 6-аминогексановой кислоты(ипсилон-аминокапроновой кислоты), 7-аминогептановой кислоты, 8-аминооктановой кислоты,9-аминононановой кислоты и аминодекановой кислоты. В конкретных вариантах изобретения предпочтительны 8-аминооктановые кислоты (в данном описании иногда сокращнно называемые "Aoc"). Примером такого агониста является [Cys2,Aoc5-24, D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 16; фиг. 2 А).N-конец. Все три типа Y2-селективных агонистов, которые рассматриваются в данном изобретении, можно ацилировать по их N-концу для того, чтобы придать резистентность к аминопептидазной активности. Например, ацилирование можно осуществлять с помощью ацилирующей группы, содержащей в цепи 2-24 углеродных атома, и конкретным примером является N-концевое ацетилирование. Агонисты, пригодные для применения по данному изобретению До настоящего времени основные Y2-селективные агонисты для применения по настоящему изобретению были описаны в целом и приводились конкретные примеры таких агонистов. Однако такие агонисты, включая специфически идентифицированные агонисты, можно подвергнуть различным модификациям с целью улучшения их фармакокинетики, фармакодинамики и метаболических свойств. Такие модификации могут включать связывание агониста с функциональными группами (также известными как мотивы), известными сами по себе в технике пептидных или белковых фармацевтических веществ. Три конкретные модификации, дающие конкретное преимущество в случае агонистов, которые рассматривает настоящее изобретение, вне зависимости от типа (а), (b) или (с), представляют собой присоединение мотивов связывания с сывороточным альбумином, или мотивов связывания гликозаминогликана(GAG), или ПЭГилирование. Мотивы связывания сывороточного альбумина Мотивы связывания сывороточного альбумина (мотивы, связывающие сывороточный альбумин) обычно являются липофильными группами, вводимыми для того, чтобы способствовать продолжительному пребыванию в организме после введения, или по другим причинам, которые могут связываться- 10011860 различными известными способами с пептидными или белковыми молекулами, например, i) ковалентной связью, например, с функциональной группой в боковой цепи аминокислотного остатка; ii) за счт функциональной группы, встроенной в пептид или подходящим образом дериватизированный пептид; iii) в виде единого участка пептида. Например, в Международной заявке WO 96/29344 (Novo Nordisk A/S) и в статьях P. Kurtzhals et al. 1995, Biochemical, J. 312: 725-31 и L.B. Knudsen et al. 2000, J. Med. Chem. 43: 1664-69 описан ряд подходящих липофильных модификаций, которые можно использовать для агонистов, рассматриваемых в данном изобретении. Подходящие липофильные группы включают необязательно замещнные, насыщенные или ненасыщенные, линейные или разветвлнные углеводородные группы, содержащие 10-24 углеводных атома. Такие группы могут образовывать целую боковую цепь или часть боковой цепи в каркасе агониста, например, за счт простой эфирной, тиоэфирной, амино, сложноэфирной или амидной связи с боковой цепью аминокислотного остатка скелета, или с углеродным атомом скелета или боковой цепи каркаса (скелета) непептидного линкерного радикала в скелете PP-складчатого миметика-агониста. Химический способ присоединения липофильной группы не важен, но приведнные боковые цепи, включая липофильные группы, являются примерами групп, которые могут связываться со скелетным углеродом агониста или его подходящего ответвления и состоят из: где n обозначает целое число от 9 до 15,где r обозначает целое число от 9 до 15,где s обозначает целое число от 9 до 15,где m обозначает целое число от 8 до 18,где р обозначает целое число от 10 до 16,где q обозначает целое число от 10 до 16,где n обозначает целое число от 9 до 15,где р обозначает целое число от 10 до 18,где m обозначает целое число от 8 до 18,где p обозначает целое число от 10 до 16,где q обозначает целое число от 10 до 16, и частично или полностью гидрированный циклопентанофенантреновый скелет. В одном методе химического синтеза боковая цепь, содержащая липофильную группу, представляет собой C12, C14, C16 или С 18 ацильную группу, например тетрадеканоильную группу, ацилирующую аминогруппу в боковой цепи остатка каркаса агониста. Как указывалось, модификация агонистов для применения с целью улучшить характеристики связывания с сывороточным белком является методом, который можно применять в целом и, в частности, в случае специфических агонистов, перечисленных выше. Так,например, подходящие модифицированные агонисты включают [Cys2,N-(N'-тетрадеканоил)-гаммаглутамоил-Lys13,D-Cys27]PYY,[Cys2,N-(N'-тетрадеканоил)-гамма-глутамоил-Lys4,D-Cys27]PYY,[N-(N'-тетрадеканоил)-гамма-глутамоил-Lys13]PYY3-36 или [N-(N'-тетрадеканоил)-гамма-глутамоилLys4]PYY3-36.GAG-связывание Как и в случае липофильных мотивов связывания с сывороточным альбумином, обсуждавшихся выше, агонисты, рассматриваемые в данном изобретении, можно модифицировать, вводя мотив GAG связывания в качестве боковой цепи или участка боковой цепи скелета агониста. ИзвестныеGAG-связывающие мотивы для введения таким способом включают аминокислотные последовательности ХВВХВХ и/или ХВВВХХВХ, где В обозначает остаток основной аминокислоты, а X обозначает любой аминокислотный остаток. Несколько, например три, таких последовательностей можно ввести в виде конкатамерных (линейная цепь) или дендримерных (разветвлнная цепь) повторов. Специфические конкатамерные GAG мотивы включают Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala и Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala(каждый из которых может, например, соединяться амидной связью, образующейся между С-концом конкатамерного мотива GAG-связывания и аминогруппой в боковой цепи аминокислоты в каркасе аго- 11011860 ниста, такой как ипсилон-аминогруппа Lys13 в агонисте [Cys2,Lys13, D-Cys27]PYY (фиг. 3A) или Lys13 в агонисте [Lys13]PYY3-36. Вместо того, чтобы присоединяться к агонисту в виде боковой цепи, или части боковой цепи каркасного остатка, GAG мотив может ковалентно связываться с С- или (предпочтительно) с N-концом агониста либо непосредственно, либо через линкерный радикал. В этом случае GAG-связывающий мотив может также содержать аминокислотную последовательность ХВВХВХ и/или ХВВВХХВХ, где В обозначает основной аминокислотный остаток, а X обозначает любой аминокислотный остаток, например последовательность [ХВВВХХВХ]n, где n обозначает число от 1 до 5, В обозначает основной аминокислотный остаток, а X обозначает любой аминокислотный остаток. Такие конкатамерные повторы имеют тенденцию образовывать альфа-спирали, когда они связываются с GAG, и затем, когда они сливаются с С-концевым гексапептидом/последним поворотом альфа-спирали, они могут стабилизировать этот поворот и, тем самым, презентировать комбинированную структуру для Y2-рецепторного распознавания оптимальным образом. Конкретными примерами агонистов этого типа являются [ХВВВХХВХXBBBXXBX]PYY25-36 или [ХВВВХХВХ-ХВВВХХВХ-XBBBXXBX]PYY25-36, где В обозначает основной аминокислотный остаток, а X обозначает любой аминокислотный остаток, в частностиAla-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-AlaPYY25-36 (SEQ ID No: 21) (фиг. 3B). Агонисты, селективные к Y2, к которым относится настоящее изобретение, применимы, среди прочего, для терапевтического ангиогенеза. В частности, для такого применения агонисты предпочтительно содержат мотив, связывающий гликозаминогликан (GAG), обсуждавшийся выше. Такие мотивы гарантируют, что агонисты связываются с GAG во внеклеточной матрице и тем самым обеспечивают пролонгированную локальную экспозицию Y2 рецепторов в этой ткани. Факторы роста, хемокины и т.д. связываются с GAG за счт участков основных аминокислот, которые взаимодействуют с кислыми сахарамиGAG. Эти положительно заряженные эпитопы на факторах роста обычно состоят из боковых цепей основных остатков, которые в последовательности необязательно расположены последовательно, но часто находятся в непосредственной близости за счт элемента вторичной структуры, такого как альфаспираль или поворот, или за счт общей трхмерной структуры белка. Описаны некоторыеGAG-связывающие линейные последовательности, обсуждавшиеся выше, например ХВВХВХ и ХВВВХХВХ, где В представляет собой основной остаток (Hileman et al. Bioassays, 1998, 20: 156-67). Методом кругового дихроизма было показано, что эти сегменты при связывании с GAG образуют альфаспирали. Если такие последовательности помещены, например, в конкатамерную или дендримерную конструкцию, где присутствует три таких последовательности, например каждая в виде ARRRAARA последовательности, результирующий 24-мерный пептид, например ARRRAARA-ARRRAARAARRRAARA, гарантирует сохранение во внеклеточной матрице, аналогичной высокомолекулярному полилизину, т.е. он не вымывается в течение 4-часового вливания (Sakharov et al. FEBS Lett. 2003,27: 6-10). Таким образом, факторы роста и хемокины, естественно, создаются с двумя типами связывающих мотивов: один мотив связывания с рецептором, с помощью которого осуществляется сигнальная трансдукция, и один мотив связывания с GAG, с помощью которого достигается присоединение и пролонгированная локальная активность. Пептиды, такие как PYY и NPY, являются нейропептидами и гормонами, которые достаточно быстро вымываются из ткани, а не оптимизируются для пролонгированной активности. Присоединяя GAG-связывающий мотив к Y2 селективному агонисту по настоящему изобретению или к классическому известному пептидному агонисту PYY3-36, создают бифункциональную молекулу, аналогичную факторам роста и хемокинам, содержащую как эпитоп, ответственный за связывание с рецептором на PP-складчатом пептидном участке, так и GAG-связывающий мотив. Пример такого агониста показан на фиг. 3A. Как обсуждалось выше, в предпочтительном варианте изобретения GAG-связывающий мотив, например 24-мерная последовательность, описанная выше, помещают в виде N-концевого растягиванияY2-селективного агониста. Это расположение особенно интересно для усечнных по N-концуPP-складчатых миметиков-агонистов. Хотя эти агонисты-миметики по данному описанию являются селективными к Y2, они могут проявлять несколько пониженную аффинность или активность к Y2 рецептору по сравнению с PYY3-36 или PYY. Такие усечнные PP-складчатые агонисты-миметики можно легче растянуть (удлинить) при использовании конкатамерного GAG-связывающего мотива, так как при связывании с GAG образуется альфа-спираль, которая может способствовать стабилизации спирального участка и, тем самым, корректному презентированию C-концевого сегмента. Пример такого агониста показан на фиг. 3B. Другим подходящим положением для введения GAG-связывающего мотива, такого как конкатамерная или дендримерная конструкция, PP-складчатых пептидов является положение 14 для NPY пептидов и их аналогов и положение 13 для PYY и PP пептидов и их аналогов. Однако, как обсуждалось выше,остаток, содержащий GAG-связывающий мотив, можно ввести в любое положение в агонистах при условии, что это введение согласуется с сохранением PP-складчатой структуры, требуемой в агонистах типа (а), (b) и (с), рассматриваемых в данном изобретении, и нужной С-концевой последовательностьюY2-распознавания. Так, GAG-связывающий мотив можно в качестве части спейсерной конструкции поместить в аналоги, в которых часть PP-складки замещена на непептидный спейсер. ПЭГилирование При ПЭГилировании полиалкиленоксидный(ые) радикал или радикалы ковалентно связывается(ются) с пептидными или белковыми лекарствами с целью увеличения эффективного периода полужизни в организме после введения и снижения иммуногенности, повышения растворимости и т.д. Термин происходит от названия предпочтительного полиалкиленоксида, применяемого в таких процессах, а именно, образованного из этиленгликоля полиэтиленгликоля, или "ПЭГ" ("PEG"). Подходящий радикал ПЭГ может присоединяться к агонисту любым подходящим химическим методом, например, за счт каркасного аминокислотного остатка агониста. Например, в случае молекулы,подобной ПЭГ, в качестве присоединяющей группы часто применяется ипсилон-аминогруппа лизина или N-концевая аминогруппа. Другие присоединяющие (встраивающие) группы включают свободную карбоксильную группу (например, свободную карбоксильную группу C-концевого аминокислотного остатка или остатка аспарагиновой или глутаминовой кислоты), подходящим образом активированные карбонильные группы, меркаптогруппы (например, меркаптогруппы цистеинового остатка), остатки ароматических кислот (например, Phe, Tyr, Trp), гидроксигруппы (например, гидроксигруппы в Ser, Thr или OH-Lys), гуанидин (например, Arg), имидазол (например, His) и частицы окисленных углеводов. Если агонист является ПЭГилированным, он обычно содержит 1-5 молекул полиэтиленгликоля(ПЭГ), например 1, 2 или 3 молекулы ПЭГ. Каждая молекула ПЭГ имеет молекулярную массу примерно от 5 до примерно 100 кДа, например, молекулярная масса составляет около 10-40 кДа, около 12 кДа или предпочтительно не более 20 кДа. Подходящие молекулы ПЭГ выпускаются фирмами Shearwater Polymers, Inc. и Enzon, Inc. и их можно выбрать из SS-PEG, NPC-PEG, альдегид-ПЭГ, mPEG-SPA, mPEG-SCM, mPEG-BTC, SC-PEG,трезилированного mPEG (патент США 5880255) или оксикарбонил-окси-N-дикарбоксиимид-ПЭГ (патент США 5122614). В особом варианте изобретения вышеупомянутый агонист [Cys2,Lys13,DCys27]PYY можно ПЭГилировать по ипсилон-аминогруппе остатка Lys13, а агонист [Cys2,DCys27]PYY можно ПЭГилировать по остатку Lys4. Сывороточный альбумин, GAG и ПЭГ Вне зависимости от того, осуществляется ли модификация агониста за счт присоединения групп для того, чтобы способствовать связыванию сывороточного альбумина, GAG-связыванию или повысить устойчивость с помощью ПЭГилирования, мотив связывания сывороточного альбумина, или мотивGAG-связывания, или ПЭГ-радикал может являться боковой цепью или образовывать часть боковой цепи при каркасном углероде агониста, соответствующем любому из следующих положений PYY или PP: 1, 3, 4, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 30 и 32 или соответствующем любому из следующих положений NPY: 1, 3, 4, 6, 7, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 30 и 32. В особенности, если агонист является агонистом типа (с), мотив связывания сывороточного альбумина, или мотив GAG-связывания, или ПЭГ-радикал может также являться боковой цепью или образовывать часть боковой цепи при каркасном углероде агониста, соответствующем любому из следующих положений PYY, NPY или PP: 2, 5, 8, 9, 13, 14, 20 и 24. Конъюгация с биомолекулами большего размера Как описывается выше, можно присоединять некоторые мотивы в различных положениях вPP-складчатом пептиде или PP-складчатом пептиде-миметике, не ослабляя их высокую Y-рецепторную аффинность (см. примеры). Аналогичным образом селективные к Y2 рецепторам агонисты можно использовать в качестве химерных (гибридных, слитых) белков, в которых они связаны, например, с альбумином или молекулой другого белка или носителя, что обеспечивает благоприятную фармакокинетику или другие свойства, например пониженное выведение почками. Как известно, в технике существует множество химических модификаций и линкеров, которые можно использовать для такого ковалентного соединения, также как можно использовать множество белков или носителей. Особенно предпочтительно ковалентное присоединение селективного Y2 пептидного агониста к альбумину и в положенияхPP-складчатой структуры, которые указаны в другом месте данного описания в связи с модификациями с помощью различных мотивов. В предпочтительном варианте данного изобретения терминирующий пептид в С-концевой аминокислотной последовательности Y2-рецепторного распознавания гибридизован(слит, связан) с С-концом большой биомолекулы, такой как альбумин. Такие гибридные белки можно получать различными полусинтетическими методами, когда пептид можно получать пептидным синтезом по данному описанию, а биомолекулу - методом рекомбинантной ДНК. Гибридный белок можно также получать целиком как рекомбинантную молекулу, экспрессированную, например, в виде молекулы-предшественника, удлиннную за счт последовательности Gly-Lys-Arg, которая, будучи экспрессирована в виде секреторного белка в эукариотических клетках, отщепляется биосинтетическими ферментами и Gly превращается в карбоксамид на C-концевом остатке Tyr C-концевой последовательности- 13011860 Стабилизация Как указывается в разных местах в данном описании, многие из селективных Y2 агонистов по настоящему изобретению стабилизируются различными способами, например N-концевым ацилированием,или замещением каркасных участков агониста на непептидный линкер, или внутренней циклизацией за счт мостиковых связей для стабилизации PP-складчатой структуры. Эта стабилизация в большинстве случаев служит двум целям, причм одной целью является презентирование эпитопов рецепторного распознавания оптимальным образом в отношении Y2 рецептора за счт сохранения PP-складки; а второй целью является стабилизация пептида против расщепления, т.е., главным образом, против протеолитического расщепления. Это особенно важно, когда селективные Y2 агонисты также модифицированы для того, чтобы продлить период полужизни, достичь пролонгированного высвобождения и/или продолжительной экспозиции с тканями за счт присоединения различных мотивов, обсуждавшихся выше. Обычно пептидные агонисты очень быстро выводятся, главным образом, через почки, и устойчивость белка,как таковая, может быть неважна; однако, когда присутствие пептида в различных жидкостях организма продлевается одним или более способами на много часов, особенно важно, чтобы биологическая активность пептида также оставалась интактной, т.е. чтобы пептид стабилизировался в форме, устойчивой к протеолитическому воздействию, описанному как вообще, так и в отношении специфических примеров селективных Y2 пептидов-агонистов, например PP-складчатых стабилизированных, циклического[Cys2,D-Cys27]PYY и его различных аналогов. Пептиды, индуцирующие спираль Ацилирование по N-концу агонистов, которые рассматривает данное изобретение, упоминалось как способ стабилизации агониста против действия аминопептидаз. Другая стабилизирующая модификация включает ковалентное присоединение стабилизирующей пептидной последовательности из 4-20 аминокислотных остатков ковалентно на N- и/или C-конце, предпочтительно на N-конце. Аминокислотные остатки в таком пептиде выбирают из группы, состоящей из Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu,Lys, Arg, His, Met и т.д. В представляющем особый интерес варианте изобретения присоединяемый(SEQ ID No: 11). Они могут присоединяться на N-конце PP-складчатого пептидного агониста или могут быть помещены на N-конце усечнного по N-концу PP-складчатого агониста-миметика или укороченного на N-конце PP-складчатого агониста-миметика, если спейсерный пептид вводится между новымN-концом стабилизирующего пептида. Такие модификации особенно интересны, так как нить (цепь) из остатков Lys имеет тенденцию образовывать альфа-спиральную структуру и индуцировать е в последующих остатках, что, как обсуждается выше, является выгодным для презентирования рецептору последнего поворота спирали в С-концевой аминокислотной последовательности Y2-рецепторного распознавания селективных к Y2 агонистических пептидов по настоящему изобретению. Общее описание таких удлинений стабилизирующего пептида дано в Международной заявке WO 99/46283 (ZeAland Pharmaceuticals). Рецепторные агонисты, которые рассматриваются в настоящем изобретению, можно получать общеизвестными методами, например синтетическими, полусинтетическими и/или методами рекомбинантной ДНК. Способы включают стандартные методы получения пептидов, такие, например, как синтез в растворе и твердофазный синтез. Руководствуясь учебником и общими знаниями в данной области техники, специалист поймт, как получать агонисты и их производные и модификации.- 14011860 Конкретные агонисты для применения по данному описанию Конкретные примеры агонистов по изобретению включают в себя следующие: и их консервативно замещнные аналоги. Особенно предпочтительными Y2-селективными агонистами для применения по настоящему изобретению являются [Cys2,D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 13), [Lys4,Gln34]PP (SEQ ID No: 12; фиг. 2 В),[Cys2,Aoc5-24,D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 16) и их аналоги с консервативными заменами.- 15011860 Далее описываются конкретные агонисты по изобретению наряду с фармакологическими свойствами их молекул, а также химические свойства и устойчивость пептидов.PYY2-36 (SEQ ID No: 4) Этот высокоселективный Y2-рецепторный агонист типа (а) имеет многие характеристики рецепторного связывания, общие с эндогенным пептидом PYY3-36, но проявляет повышенную стабильность по сравнению с PYY3-36. Основной эндогенной формой PYY в кровотоке является PYY3-36 вследствие эффективного и быстрого расщепления дипептидилпептидазой-IV (DPP-IV), при которой удаляются два первых остатка, но образуется более неустойчивый пептид, в котором отсутствует структурно важный остаток Pro2, как обсуждалось выше. Профиль рецепторного распознавания. В PYY2-36 отсутствует остаток Tyr1, и он обладает слабой аффинностью к Y1 рецептору, но он связывается с Y2 рецептором с высокой аффинностью, равной, например, аффинности PYY3-36, и будучи пептидом, образованным из PYY, распознатся Y4 рецептором с низкой аффинностью, сходной с аффинностью PYY3-36. Устойчивость белка.PYY2-36 имеет преимущество перед PYY3-36, а именно, он более устойчив и, следовательно, является лучшим биофармацевтическим агентом. Повышенная стабильность белка (устойчивость) основана на следующем: 1) он не является субстратом для DPP-IV, когда не содержит остатка Pro или Ala в положении 2; 2) его N-концевой остаток Pro предотвращает расщепление огромным большинством других аминопептидаз, включая, например, аминопептидазу N; 3) сохранение важного Pro2 обеспечивает более устойчивую PP-складку, чем в PYY3-36, так как важное взаимодействие между Pro2 и последними спиральными поворотами антипараллельной альфаспирали, т.е. в особенности Tyr27, вс ещ имеется в PYY2-36. Этот высокоселективный Y2-рецепторный агонист типа (а) является новым пептидом, который имеет многие характеристики рецепторного связывания, общие с эндогенным пептидом PYY3-36, но обладает повышенной стабильностью пептида по сравнению с PYY3-36. Профиль рецепторного распознавания. В [D-Ala1]PYY отсутствует боковая цепь остатка Tyr1, и он обладает пониженной аффинностью кY1 рецептору, но он связывается с Y2 рецептором с высокой аффинностью, равной, например, аффинности PYY3-36, и, будучи пептидом, образованным из PYY, распознатся Y4 рецептором с низкой аффинностью, сходной с аффинностью PYY3-36. Устойчивость белка.[D-Ala1]PYY имеет преимущество перед PYY3-36, а именно, он более устойчив и, следовательно,является лучшим биофармацевтическим агентом. Повышенная стабильность (устойчивость) основана на том, что его D-форма его N-концевого остатка Ala предотвращает расщепление огромным большинством аминопептидаз, включая, например, DPP-IV и аминопептидазу N. Кроме того, как и в PYY2-36, сохранение важного Pro2 обеспечивает более устойчивую PP-складку, чем в PYY3-36, так как важное взаимодействие между Pro2 и последними спиральными поворотами антипараллельной альфа-спирали, т.е. в особенности Tyr27, вс ещ имеется в [D-Ala1]PYY. Эти высокоселективные Y2-рецепторные агонисты типа (а) являются новыми пептидами, в которые для достижения Y2 селективности введена(ы) замена(ы) в N-концевом полипролиновом сегменте PYY. Профиль рецепторного распознавания. В [D-Ala2]PYY2-36 отсутствует Tyr1 и отсутствует также боковая цепь Pro2, тогда как в[D-Ala2]PYY отсутствует только важная боковая цепь Pro2, и, следовательно, оба агониста связываются с низкой аффинностью, аналогичной аффинности PYY3-36, с Y1 рецептором, но с высокой аффинностью связываются с Y2 рецептором. Как показано в табл. 1, аффинность [D-Ala2]PYY составляет 0,93 нМ к Y2 рецептору, в отличие от 483 нМ к Y1 и 31 нМ к Y4 рецептору; как показано в табл. 2, активность [D-Ala2]PYY равна 1,4 к Y2 рецептору, в отличие 127 нМ к Y1 рецептору и 591 нМ к Y4 рецептору. Устойчивость белка.[D-Ala2]PYY и [D-Ala2]PYY2-36 имеют преимущество перед PYY3-36, а именно, они более устойчивы и, следовательно, являются лучшими биофармацевтическими агентами. Повышенная стабильность(устойчивость) основана на том, что его D-форма его N-концевого остатка Ala в [D-Ala2]PYY2-36 предотвращает расщепление огромным большинством аминопептидаз, включая, например, DPP-IV и аминопептидазу N, и тем, что замена Pro2 в [D-Ala2]PYY служит той же цели. Этот высокоселективный Y2-рецепторный агонист типа (а), в который для обеспечения селективности к Y2 по сравнению с Y1 введена модификация в домене альфа-спирали. [Ala28]PYY является новым пептидом.- 16011860 Профиль рецепторного распознавания. В [Ala28]PYY отсутствует боковая цепь остатка Leu28, и его аффинность к Y1 рецептору понижена в 300 раз по сравнению с PYY; важно отметить, что сохраняется высокая аффинность к Y2 и низкая аффинность к Y4 рецептору. Следовательно, [Ala28]PYY имеет лучшее "селективное окно" (интервал селективности) между Y2 и Y1, чем, например, PYY3-36. Устойчивость белка.[Ala28]PYY содержит устойчивую PP-складку, аналогичную PYY. Поэтому, чтобы улучшить его свойства как биофармацевтического препарата и предотвратить, например, расщепление аминопептидазами, можно получить ацетилированную по N-концу форму, обсуждавшуюся выше, или замену Ala28 можно комбинировать, например, с заменами D-Ala1 или D-Ala2, которые также дополнительно улучшают (увеличивают) "окно" распознавания между Y2 и Y1. Этот другой селективный Y2-рецепторный агонист типа (а), в который для обеспечения селективности к Y2 по сравнению с Y1 введена модификация в домене альфа-спирали. [Ala30]PYY является новым пептидом. Профиль рецепторного распознавания. В [Ala30]PYY отсутствует боковая цепь остатка Leu30, и его аффинность к Y1 рецептору понижена в 100 раз по сравнению с PYY; важно отметить, что сохраняется высокая аффинность к Y2 и низкая аффинность к Y4 рецептору. Следовательно, [Ala30]PYY имеет "селективное окно" (интервал селективности) между Y2 и Y1, аналогичное "селективному окну", например PYY3-36. Устойчивость белка.[Ala30]PYY содержит устойчивую PP-складку, аналогичную PYY. Поэтому, чтобы улучшить его свойства как биофармацевтического препарата и предотвратить, например, расщепление аминопептидазами, можно получить ацетилированную по N-концу форму, обсуждавшуюся выше, или замену Ala30 можно комбинировать, например, с заменами D-Ala1 или D-Ala2, которые также дополнительно улучшают (увеличивают) "окно" распознавания между Y2 и Y1. Этот другой высокоселективный Y2-рецепторный агонист типа (а), являющийся новым пептидом, в который для обеспечения селективности к Y2 по сравнению с Y1 введена модификация в C-концевой аминокислотной последовательности Y2 распознавания, как таковой. Профиль рецепторного распознавания. В [Ala31]PYY отсутствует боковая цепь остатка Val30, и его аффинность к Y1 рецептору понижена в 1500 раз по сравнению с PYY. Его аффинность к Y2 рецептору понижена в 3-4 раза, а его низкая аффинность к Y4 рецептору сохраняется. Следовательно, [Ala31]PYY имеет значительно повышенное "селективное окно" (интервал селективности) между Y2 и Y1, чем, например, PYY3-36. Устойчивость белка.[Ala31]PYY содержит устойчивую PP-складку, аналогичную PYY. Поэтому, чтобы улучшить его свойства как биофармацевтического препарата и предотвратить, например, расщепление аминопептидазами, можно получить ацетилированную по N-концу форму, обсуждавшуюся выше, или замену Ala31 можно комбинировать, например, с заменами D-Ala1 или D-Ala2, которые также дополнительно улучшают (увеличивают) "окно" распознавания между Y2 и Y1. Этот пептид представляет собой высокоселективный к Y2 агонист типа (b), т.е. основнойPP-складчатый пептид представляет собой PP с С-концевой аминокислотной последовательностьюY2-рецепторного распознавания, которая обеспечивает высокую аффинность к Y2 и Y4 рецептору плюс низкую аффинность к Y1 рецептору. Для того чтобы достичь селективности к Y2 по сравнению с Y4,сделана замена в положении 4 в N-концевом полипролиновом домене PP, что нарушает распознаваниеY4. Как обсуждалось выше, селективности к Y2 по сравнению с Y4 можно также добиться с помощью других замен. [Lys4,Gln34]PP обладает дополнительным интересным свойством: он проявляет относительно высокую аффинность также к Y5 рецептору по сравнению с другими селективными к Y2 лигандами, а также PP-складчатыми пептидами в целом. Таким образом, [Lys4,Gln34]PP и его аналоги, например, такие, которые представлены ниже, можно рассматривать как комбинированные Y2-Y5 селективные агонисты. Профиль рецепторного распознавания (узнавания).[Lys4,Gln34]PP проявляет in vitro активность (см. табл. 2) к Y2 рецептору, очень близкую активности PYY3-36. В отношении Y1 рецептора [Lys4,Gln34]PP имеет разницу ("окно") EC50 между активностями к Y2 и Y1 рецепторов более чем в 100 раз, которая сходна с PYY3-36. Аналогично, "окно селективности" [Lys4,Gln34]PP к Y4 рецептору составляет почти 100 раз. Следовательно, [Lys4,Gln34]PP является высокоселективным агонистом к Y2 рецептору по сравнению с Y1, Y4, созданном на каркасе PP. Интересно отметить, что [Lys4,Gln34]PP обладает очень высокой активностью к Y5 рецептору, в отличие, например, от PYY3-36. Активность [Lys4,Gln34]PP к Y5 рецептору даже ещ выше, чем активность наиболее активных эндогенных лигандов PYY и NPY.[Lys4,Gln34]PP содержит устойчивую PP-складку, аналогичную PP. Чтобы улучшить его свойства как биофармацевтического препарата и предотвратить, например, расщепление аминопептидазами, можно получить ацетилированную по N-концу форму, обсуждавшуюся выше, или замены можно комбинировать, например, с заменами D-Ala1 или D-Ala2, которые также дополнительно улучшают (увеличивают) "окно" распознавания между Y2 и Y1. Это новые высокоселективные к Y2 агонисты типа (b), т.е. основной PP-складчатый пептид представляет собой PP с С-концевой аминокислотной последовательностью Y2-рецепторного распознавания,которая обеспечивает высокую аффинность к Y2 и Y4 рецептору плюс низкую аффинность к Y1 рецептору. Что касается [Lys4,Gln34]PP, чтобы получить селективность к Y2 по сравнению с Y4, сделана замена в положении 4 в N-концевом полипролиновом домене PP, что нарушает распознавание Y4. Аналогично [Lys4,Gln34]PP, эти пептиды обладают дополнительным интересным свойством, они проявляют относительно высокую аффинность также к Y5 рецептору по сравнению с другими селективными к Y2 лигандами, а также PP-складчатыми пептидами в целом. Важно, что в [Lys4,Leu17,Gln34]PP,[Lys4,Leu17,Leu30,Gln34]PP и в [Lys4,Nle17,Nle30,Gln34]PP один или оба остатка Met в положении 17 и 30 замещены либо на Leu, либо на норлейцин (Nle), который не может окисляться. Таким образом, эти три пептида представляют собой группу Y2 селективных пептидов, в которых окисление остатков Met предотвращено с помощью замены на неокисляющийся остаток. Устойчивость белка [Lys4,Leu17,Gln34]PP.[Lys4,Leu17,Leu30,Gln34]PP и [Lys4,Nle17,Nle30,Gln34]PP обладают общей устойчивостью, аналогичной устойчивости [Lys4,Gln34]PP, однако эти пептиды не восприимчивы к окислению одного или более остатков Met, что при некоторых обстоятельствах является преимуществом биофармацевтического препарата. Этот пептид, который в данном описании также называется C2-NPY, представляет собой высокоселективный к Y2 агонист типа (с), т.е. пептид, содержащий С-концевую аминокислотную последовательностью Y2-рецепторного распознавания, слитую (гибридизованную) по своему N-концу с амфифильным доменом аминокислотной последовательности, состоящим в данном случае из NPY25-30, который принимает спиральную конфигурацию (ограничен этой конфигурацией) за счт внутримолекулярной ковалентной связи, расположенной в данном случае между Cys2, введнным в сегмент NPY1-4, соответствующий домену N-концевой полипролиновой спирали, и D-Cys27, введнным в домен альфа-спирали. В С-2 NPY последовательность из остатков 5-24 NPY замещают на 8-аминооктановую кислоту(Krstenansky et al. 1989, PNAS 86: 4377-81, СохKrstenansky,1991, Peptides 12: 323-27). [Cys2,Aoc524.D-Cys27]NPY является высокоселективным агонистом, имеющим дополнительное преимущество по сравнению, например, с PYY3-36, так как он намного меньше - только 16 остатков - и вс ещ очень устойчив. Показано in vivo, что соответствующий [Ahx5-24,гамма-Glu2-eps-Lys30]NPY, в котором имеется лактамный мостик между Glu в положении 2 и Lys в положении 30 PP-складчатого усечнного NPY наряду со спейсером аминогексановой кислоты между остатками 4 и 25, в отличие от NPY, не вызывает повышения давления у крыс, т.е. при испытаниях in vivo у него отсутствует классический Y1 рецепторный эффект (Beck-Sickinger et al. 1992, Eur. J. Biochem. 206: 957-64). Устойчивость белка. Это циклический пептид. Этот пептид, который в данном описании может также называться C2-PYY, является новым, высокоселективным Y2 агонистом типа (с), т.е. пептидом, содержащим С-концевую аминокислотную последовательностью Y2-рецепторного распознавания, слитую (гибридизованную) по своему N-концу с амфифильным доменом аминокислотной последовательности, состоящим в данном случае из NPY25-30,который принимает спиральную конфигурацию (ограничен этой конфигурацией) за счт внутримолекулярной ковалентной связи, расположенной в данном случае между Cys2, введнным в сегмент PPY1-4,соответствующий домену N-концевой полипролиновой спирали, и D-Cys27, введнным в домен альфаспирали. В С-2 PPY последовательность из остатков 5-24 PPY замещена на 8-аминооктановую кислоту. С-2 PYY отличается от С-2 NPY в положениях 3 (Ile вместо Ser), 28 (Leu вместо Ile) и 31 (Val вместо Ile),делающих С-2 PYY истинным миметиком С- и N-концов PYY, но находящимся в форме, которая заставляет значительно меньший по размеру пептид (16 остатков вместо 36) быть селективным к Y2 агонистом. Важно, что C2-3YY обладает более высокой активностью к Y2 рецептору, чем C2-NPY. Профиль рецепторного распознавания (узнавания).C2-PYY не стимулирует Y1 рецептор даже при концентрации 1 мкМ. Важно, что С 2-PYY также не стимулирует ни Y4, ни Y5 рецептор даже при концентрации 1 мкМ. Последнее наблюдение является особенно удивительным, так как это самая низкая активность, наблюдаемая для аналога PP-складчатого пептида. Таким образом, С 2 PYY является агонистом Y2 в концентрациях менее 10 нмоль, чья селективность относительно Y1 рецептора в 10 раз лучше, чем у PYY3-36, и который является высокоселективным относительно Y4 и даже Y5 рецептора. Устойчивость белка. С-2 NPY является циклическим пептидом, который, благодаря своему дизайну по сравнению с природной PP-складкой, имитирует конец этой структуры в виде структуры, ограниченной благодаря внешнему дисульфидному мостику. Эти пептиды являются новыми высокоселективными Y2 агонистами типа (с), т.е. пептидами, содержащими С-концевую аминокислотную последовательностью Y2-рецепторного распознавания, слитую (гибридизованную) по своему N-концу с амфифильным доменом аминокислотной последовательности, состоящим в данном случае либо из PYY25-30, либо из NPY25-30, который принимает спиральную конфигурацию (ограничен этой конфигурацией) за счт внутримолекулярной ковалентной связи, расположенной в данном случае между Cys2, введнным либо в сегмент PPY1-4, либо в сегмент NPY1-4, соответствующий домену N-концевой полипролиновой спирали, и D-Cys27, введнным в домен альфаспирали. В PP-складчатых миметиках последовательность из остатков 5-24 PPY замещена на остаток 8 аминооктановой кислоты. Эти пептиды представляют собой группу таких пептидов, примерами которых являются: Ас-дес-Tyr1[Cys2,Aoc5-24,D-Cys27]PYY (соответствует [Cys2,Aoc5-24,D-Cys27]PYY, в котором Tyr1 замещн по N-концу блокирующей ацетильной группой) и [Cys2,Ile3,Aoc5-24,DCys27,Val31]NPY (соответствует [Cys2,Аос 5-24,D-Cys27]NPY, в котором два остатка замещены с целью сделать его более подобным PYY). С помощью таких модификаций создатся группа Y2 селективных пептидов, из которой можно выбрать пептиды, особенно пригодные для клинического применения. Этот пептид является высокоселективным Y2 агонистом типа (с), который также был создан для более высокой устойчивости белка. По аналогии с конструкциями С-2 NPY и С-2 PYY между Cys в положении 2 и D-Cys в положении 27 вводят внутримолекулярный дисульфидный мостик, который, однако, вводят в полноразмерную молекулу PYY для стабилизации PP-складчатой структуры. Таким образом, [Cys2,D-Cys27]PYY представляет здесь группу селективных Y2 агонистических пептидов со стабилизирующей внутримолекулярной связью между N-концевой поли-Pro последовательностью и амфифильным спиральным сегментом. У других членов этой группы дисульфидный мостик может быть образован между остатками в других положениях, или может быть ковалентная внутримолекулярная связь другого типа, например лактамный мостик между гамма-карбоксильной группой остатка Glu2 и ипсилон-аминогруппой остатка Lys30, например в [Glu2-Lys30]PYY. [Cys2,D-Cys27]PYY, является активным,например, также будучи ацетилированным по N-концу, эта модификация предупреждает в дальнейшем расщепление пептида аминопептидазами. [Cys2,D-Cys27]PYY является новым соединением. Профиль рецепторного распознавания.[Cys2,D-Cys27]PYY стимулирует Y2 рецептор (см. табл. 2) с активностью (EC50=0,33 нМ), аналогичной активности PYY3-36, тогда как Y1 рецептор стимулирует с активностью более 1 мкМ, т.е. он более чем в 20 раз менее активен к Y1 рецептору, чем PYY3-36. Величина EC50 [Cys2,D-Cys27]PYY к Y4 рецептору составляет более 1 мкМ. Таким образом, [Cys2,D-Cys27]PYY является селективным к Y2 агонистом в концентрациях менее десяти наномолей, чей индекс селективности относительно Y1 рецептора составляет около 10 000, что в 50-100 раз лучше, чем у PYY3-36. Устойчивость белка. Благодаря стабилизации PP-складки за счт внутримолекулярного дисульфидного мостика[Cys2,D-Cys27]PYY более стабилен, чем PYY3-36, в котором удалн остаток Pro2, важный участок чувствительного к гидрофобным воздействиям сегмента, который стабилизировал PP-складку, и даже более стабилен, чем сам PYY1-36. Дисульфидный мостик в основном предупреждает "расстгивание молнии"PP-складки, и PP-складка удерживает пептид в конформации, в которой эндопептидазе затруднн доступ к пептиду. Замена Pro2 на Cys имеет дополнительное преимущество, так как она делает пептид полностью резистентным к расщеплению дипептидилпептидазой-IV, для которой PYY1-36 без этого является очень хорошим субстратом. Эта повышенная устойчивость ещ дополнительно повышена в ацетилированном по N-концу варианте [Cys2,D-Cys27]PYY.In vivo рецепторная селективность. В исследовании с повышением дозы [Cys2,D-Cys27]PYY вводят внутривенным вливанием собакам после анестезии в виде последовательных инфузий в течение 30 мин в дозах 0,3, 1, 3, 10, 30 и 100 мкг/кг. Плазматические уровни [Cys2,D-Cys27]PYY определяют радиоиммуноанализом, обнаруживается линейная зависимость от дозы. При наивысшей дозе у собак получают уровни в плазме 32 нМ.- 19011860 Тем не менее, не наблюдается никакого зависящего от дозы действия ни на кровяное давление, ни на частоту сердечных сокращений. Общеизвестно, что PYY и NPY, агонисты как Y1, так и Y2 рецепторов,при значительно более низких уровнях в плазме повышают кровяное давление. Таким образом, эти эксперименты показывают, что [Cys2,D-Cys27]PYY in vivo также является высокоселективным пептидом,лишнным какой-либо измеримой активности к Y1 рецептору.In vivo влияние на скорый прим пищи. Либо PYY3-36, либо [Cys2,D-Cys27]PYY, либо физиологический раствор вводят в виде подкожных инъекций группам из 8 мышей в дозах 3 или 30 мкг (PYY3-36) или 10 и 100 мкг ([Cys2,D-Cys27]PYY) на животное после 16-часового перерыва в еде. На фиг. 4 показано суммарное потребление пищи мышами.PYY3-36 в дозе 30 мкг ингибирует потребление пищи в течение первых 2 ч, но эффект постепенно исчезает в течение следующих 2-6 ч. [Cys2,D-Cys27]PYY оказывает более ярко выраженное и продолжительное действие на потребление пищи у мышей, чем PYY3-36. Так, даже в дозе 10 мкг наблюдают более эффективное подавление потребления пищи, и этот эффект длится в течение более 8 ч. Фиг. 4. Таким образом, [Cys2,D-Cys27]PYY, равный PYY3-36 по активности к Y2 рецептору, как определено анализами сигнальной трансдукции in vitro, очевидно, является более активным и, возможно, связан с повышенной устойчивостью белка, что присуще стабилизированному дисульфидным мостиком пептиду [Cys2,DCys27]PYY. Эти пептиды являются типичными членами семейства пептидов, представляющих собой высокоселективные к Y2 агонисты, которые стабилизированы с помощью химических реакций белков за счт дисульфидного мостика (для предупреждения расщепления эндопептидазами) и которые могут быть ацетилированы по N-концу для предупреждения расщепления аминопептидазами (пептид является естественно амидированным по C-концу, что предупреждает расщепление карбоксипептидазами) и алкилилированы по ипсилон-аминогруппе Lys, введнного в положение 13 (в петле PP-складки, далеко от сайта распознавания рецептора), через гамма-глутаминовокислый спейсер длинноцепной жирной кислотой, который при циркуляции предохраняет (гарантирует) связывание модифицированного пептида с альбумином и тем самым обеспечивает продолжительное действие пептида. Аналогичное свойство, т.е. связывание с альбумином, может быть достигнуто с помощью алкилирования другими длинноцепными жирными кислотами с различной длиной цепи и различной степенью насыщенности (Kurzhals, P. et al. Biochem. J. 1995, 312: 725-31). Ясно также, что алкилирование пептида длинноцепной жирной кислотой можно осуществлять посредством модификации других введнных аминокислот или модифицированных аминокислот, таких как Cys, или что альбуминсвязывающий фрагмент может быть составной частью неприродного аминокислотного остатка, содержащегося в пептиде. Алкилированная аминокислота в данном примере находится в положении 13 PYY, но она может находиться в пептиде в любом положении, которое не ослабляет рецепторного распознавания пептида, которое предпочтительно находится в положениях 1-30 (ср. общее описание, см. выше). Профиль рецепторного распознавания. Как показано в табл. 1 и 2, введение остатка Lys в положение 13 в [Cys2,D-Cys27]PYY и присоединение длинной алкильной цепи к ипсилон-аминогруппе Lys13 не изменяет высокой аффинности этого циклического пептида к Y2 рецептору, а именно: IC50=0,79 нМ и EC50=0,48 для [Cys2,D-Cys27]PYY;IC50=0,60 нМ и EC50=1,9 для [Cys2,Lys13,D-Cys27]PYY; и IC50=0,90 нМ и EC50=0,68 для [Cys2,N-(8-(8 гамма-глутамоиламинооктаноиламино)октаноил)-Lys13,D-Cys27]PYY. Этот пептид является типичным членом семейства пептидов, представляющих собой высокоселективные к Y2 агонисты, которые стабилизированы с помощью химических реакций белков за счт дисульфидного мостика (для предупреждения расщепления эндопептидазами) и которые ацетилированы поN-концу для предупреждения расщепления аминопептидазами (пептид является естественно амидированным по C-концу, что предупреждает расщепление карбоксипептидазами) и алкилилированы по альфа-аминогруппе Tyr1 длинноцепной жирной кислотой, что, помимо защиты от действия аминопептидаз,также в кровотоке сохраняет связывание модифицированного пептида с альбумином и, тем самым, обеспечивает длительное действие пептида. Этот пептид представляет группу Y2 селективных пептидов, модифицированных с помощью GAGсвязывающего мотива с целью получить in vivo связывание с GAG в тканях, а именно, чтобы получить- 20011860 пролонгированную локальную экспозицию Y2 рецептора (и Y5 рецептора, если пептид относится к группе пептидов с комбинированной Y2 и Y5 селективностью) в целевой ткани и/или пролонгированное высвобождение вследствие пролонгированного удерживания в сайте (месте) введения в организм, например, подкожной инъекцией. В данном конкретном случае GAG-связывающий мотив - линейная тримерная форма последовательности Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala - соединяется с ипсилонаминогруппой Lys, введнного в положение 13 в "основной" пептид [Cys2,D-Cys27]PYY (см. фиг. 3A). Синтез этого пептида для анализа "кэпированного" на N-конце GAG-связывающего мотива группой флуоресцена описан ниже. Профиль рецепторного распознавания. Как обсуждается выше, введение Lys13 не меняет высокой аффинности и активности к Y2 рецептору стабилизированного циклического пептида [Cys2,D-Cys27]PYY или его высокой селективности к Y2 рецептору относительно Y1 и Y4 рецепторов (табл. 1 и 2). Важно, что присоединение содержащего 24 остатка GAG-связывающего мотива [Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala]3 к ипсилон-аминогруппе Lys13 не влияет на высокую Y2-рецепторную аффинность (IC50=0,21 нМ) или активность (EC50=0,37 нМ) или его высокую селективность к Y2 рецептору (см. табл. 1 и 2). Связывание с гепарином. Как показано на фиг. 5, меченый флуоресцеином вариант [Cys2,N-(Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-ArgAla)3-Lys13,D-Cys27]PYY почти полностью адсорбируется на HiTrap колонке с гепарин-сефарозой, и он начинает элюироваться, когда матрицу экспонируют с 2- или 3-молярным количеством NaCl, это показывает, что пептид, модифицированный GAG-мотивом, проявляет очень высокую аффинность к GAG,представленных в данном случае гепарином. Следует отметить, ранее было продемонстрировано, что пептидный мотив такого типа, который связывается с гепарином с такой аффинностью, гарантирует invivo удерживание во внеклеточной матрице аналогично высокомолекулярному полилизину, а именно, не вымывается в течение 4-часового периода перфузии (Sakharov et al. FEBS, Lett. 2003, 27: 6-10). Таким образом, [Cys2,N-(Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala)3-Lys13,D-Cys27]PYY представляет группу Y2 селективных пептидов, "декорированных" высокоаффинными GAG-связывающими мотивами, и, тем самым достигается продолжительная локальная экспозиция рецептора в целевой ткани, например после внутриартериальной инъекции, например, в коронарную или бедренную артерию. Пептид [Cys2,D-Cys27]PYY2-36 является высокоселективным Y2 агонистом типа (с), который также создан с целью высокой устойчивости белка. По аналогии с [Cys2,D-Cys27]PYY между Cys в положении 2 и D-Cys в положении 27 вводится внутримолекулярный дисульфидный мостик, однако здесь он вводится в PYY2-36, чтобы стабилизировать PP-складчатую структуру. Tyr1 либо отсутствует, либо заменн ацетилированием по N-концу. [Cys2,D-Cys27]PYY2-36 и его ацетилированную по N-концу форму можно модифицировать с помощью различных мотивов, например, введением сайта присоединения, такого как Lys13 или другого остатка в другом положении, как указано в другом месте данного описания,представленных для других Y2-селективных пептидов, в положениях, которые сохраняют их селективность к Y2, при этом добавляя положительные свойства, обсуждавшиеся выше. [Cys2,D-Cys27]PYY2-36 и его ацетилированная по N-концу форма являются новыми соединениями. Все эти пептиды являются высокоселективными Y2 агонистами типа (с), в которых по аналогии с[Cys2,D-Cys27]PYY между Cys в положении 2 и D-Cys в положении 27 введн внутримолекулярный дисульфидный мостик, однако здесь он введн в NPY, и различные аминокислотные остатки пептидов замещены на С- и N-концах с целью сделать пептид более похожим на PYY, но сохранить общую PPскладку NPY. В некоторых аналогах остатки Met замещены на остатки Leu или Nle для того, чтобы избежать возможного окисления пептида. Этот циклический додекапептидный аналог PYY, стабилизированный внутримолекулярным лактамным мостиком, является высокоселективным Y2 агонистом типа (с), который состоит только из 12 остатков вместо 34, как в PYY3-36, в котором между остатком в домене альфа-спирали и остатком вC-концевой аминокислотной последовательности Y2 распознавания. Leu28 в PYY (положение 4 в настоящем додекапептиде) замещн на остаток Lys, и Thr32 (положение 8 настоящего додекапептида) замещн на остаток Glu, а амино- и карбоксильная группы в боковых цепях этих остатков соединяются,образуя лактамный мостик. Описано, что близкий аналог NPY является селективным Y2 агонистом с активностью, аналогичной NPY (Rist et al. 1996, FEBS Lett. 394: 169 173).[Lys28,Glu32]PYY25-36 проявляет активность к Y2 рецептору, аналогичную активности PYY3-36,но он, по правде говоря, не распознатся Y1 рецептором и из-за основной PYY структуры не распознатся также Y4 рецептором. Устойчивость белка.[Lys28,Glu32]PYY25-36 является циклическим, структурно упорядоченным пептидом, который,благодаря своему дизайну, имитирует концевой участок молекулы PYY, а именно, имеет напряжнную структуру из-за стабилизирующего спираль внутримолекулярного лактамного мостика. Этот аналог PYY является высокоселективным агонистом Y2 типа (с), который модифицирован за счт слияния по своему N-концу с последовательностью, индуцирующей альфа-спираль, состоящей из шести остатков Lys. Благодаря индуцирующим спираль свойствам этих остатков и общей предрасположенности домена альфа-спирали PYY, в данном случае остатков 25-30, к тому, чтобы принять структуру альфа-спирали, индуцирующая спираль последовательность презентирует PYY25-36 оптимальным образом для Y2-рецепторного распознавания. Профиль рецепторного распознавания.-[Lys]6-PYY25-36 проявляет высокую аффинность к Y2 рецептору (IC50=4,1 нМ) и слабо распознатся Y1 рецептором (IC50=520 нМ) и Y4 рецептором (IC50=213 нМ). Устойчивость белка.-[Lys]6-PYY25-36 проявляет сильную склонность к образованию спиральной структуры, что делает его более устойчивым, чем пептиды такого размера в целом. Клинические показания.Y2-специфические агонисты, которые рассматриваются в настоящем изобретении, важны для лечения состояний, откликающихся на активацию Y2 рецепторов. Такие состояния включают состояния, для которых показаны регуляция потребления энергии или энергетический метаболизм или индукция ангиогенеза. Для применения в каждом таком случае агонист может включать модификацию или мотив, которые придают устойчивость к пептидазам, свойства связывания с сывороточным белком или ПЭГилирование для того, чтобы продлить период полужизни в сыворотке и/или в ткани. Главным образом, для индукции ангиогенеза агонист может содержать GAG-связывающий мотив для продления периода полужизни в тканях и экспозиции с Y рецептором. Заболевания или состояния, при которых показана индукция ангиогенеза, включают заболевание периферических сосудов, заболевание коронарных сосудов, инфаркт миокарда, удар, состояния, при которых вс вышеперечисленное рассматривается как способствующий фактор, заживление ран и восстановление тканей. Заболевания или состояния, при которых показана регуляция потребления энергии или энергетический метаболизм, включают ожирение и избыточный вес и состояния, при которых ожирение и избыточный вес рассматриваются как способствующие факторы, такие как булимия, нейрогенная булимия, синдром X (метаболический синдром), диабет, сахарный диабет типа 2 или инсулиннезависимый сахарный диабет (NTDDM), гипергликемия, устойчивость к инсулину, нарушенная толерантность к глюкозе, сердечно-сосудистое заболевание, гипертензия, атеросклероз, заболевание коронарных артерий, инфаркт миокарда, заболевание периферических сосудов, удар, тромбоэмболическое заболевание, гиперхолистеринемия, гиперлипидемия, болезни желчного пузыря, остеоартрит, остановка дыхания во сне, репродуктивные нарушения, такие как синдром поликистоза яичников, или рак молочной железы, простаты или толстой кишки. 1. Ожирение и избыточный вес. Было показано, что PYY3-36 снижает аппетит, потребление пищи и вес тела у различных грызунов при периферическом введении (Batterham et al. Nature, 2002, 418: 595-7; Challis et al. BBRC Nov. 2003,311: 915-9), а также для снижения аппетита у человека также при периферическом введении (Batterham etal 2002). Данные на животных, включая исследования нокаутированных по рецептору животных, чтко показывают, что это действие PYY3-36 опосредуется Y2 рецепторами и NPY/AgRP и РОМС нейронами в дугообразном ядре. Интересно, что этот эффект является продолжительным и наблюдается в течение 24 ч после, например, единичной интраперитонеальной инъекции PYY3-36. Такое продолжительное воздействие на аппетит и т.д. хорошо известно также после ICV (интрацеребровентрикулярной) инъекции,особенно AgRP. Уровни PYY и пищевая реакция на PYY часто ниже у субъектов, страдающих ожирением, и находятся в обратной корреляции с их BMI (индекс массы тела). Важно отметить, что субъект,страдающий ожирением, не резистентен к действию PYY, так как инфузия PYY3-36 в течение 90 мин снижает потребление пищи у субъектов, страдающих ожирением, аналогичным образом в течение длительного времени (Batterham et al. 2003, NEJM, 349: 941-48). Следовательно, Y2 селективные агонисты, которые рассматриваются в настоящем изобретении,пригодны для применения для субъекта, такого как млекопитающее, включая человека, чтобы регулировать потребление энергии. Соответственно, изобретение относится к способам изменения потребления- 22011860 энергии, потребления пищи, аппетита и расхода энергии. В данном описании раскрывается способ уменьшения потребления энергии или пищи путм введения субъекту косметически или терапевтически эффективного количества такого агониста. В одном варианте изобретения введение рецепторного агониста приводит к снижению количества или общего веса, или общего объма пищи. В другом варианте изобретения это может вызывать снижение потребления компонента пищи, например снижение прима липидов, углеводов, холестерина или белков. В любых способах по данному описанию могут вводиться предпочтительные соединения, которые подробно обсуждаются в данном описании. В дополнительном варианте изобретения раскрывается способ снижения аппетита путм введения терапевтически эффективного количества такого агониста. Аппетит можно измерять (определять) любыми способами, известными специалисту в данной области техники. Например, пониженный аппетит можно определять с помощью физиологической оценки. В таком варианте изобретения введение рецепторного агониста приводит к изменению чувства голода, насыщения и/или сытости. Голод можно оценивать любыми способами, известными специалисту в данной области техники. В одном варианте изобретения голод оценивают с помощью физиологических анализов,таких как оценка чувства голода и сенсорного восприятия, используя, например, анкету. В другом варианте изобретения раскрывается способ по данному описанию изменения энергетического метаболизма у субъекта. Способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества такого агониста, тем самым изменяется расход энергии. Энергия сжигается в физиологических процессах. Организм может непосредственно изменять расход энергии, модулируя эффективность этих процессов или изменяя количество или природу протекающих процессов. Например, в процессе пищеварения энергия в организме затрачивается при прохождении через пищеварительный тракт и усвоении пищи, и в клетках, при этом эффективность клеточного метаболизма может меняться, выделяя больше или меньше тепла. В другом варианте изобретения раскрывается способ по данному описанию любых и всех манипуляций дугообразной цепи, описанных в данном изобретении, которые согласованно изменяют потребление пищи и соответственно изменяют расход энергии. Расход энергии является результатом клеточного метаболизма, белкового синтеза, интенсивности обмена веществ и усвоения калорий. Таким образом, в данном варианте изобретения периферическое введение вызывает повышенный расход энергии и пониженную эффективность усвоения калорий. В одном варианте изобретения терапевтически эффективное количество рецепторного агониста по изобретению вводят субъекту, тем самым повышая расход энергии. В некоторых вариантах изобретения как при терапевтическом, так и при косметическом применении Y2 селективный агонист можно использовать для контроля веса и лечения, снижения или предупреждения ожирения, в частности для достижения одного или более из нижеприведнных результатов: предупреждение и снижение увеличения массы тела; индукция и промотирование потери веса и уменьшение ожирения, определяемого с помощью индекса массы тела. Как указано выше, изобретение также относится к применению Y2 селективного агониста для регуляции одного или более чувств: аппетита, сытости или голода, в частности одного или более из нижеперечисленного: уменьшения, подавления и ингибирования аппетита; индукции, увеличения, повышения и промотирования сытости и ощущения насыщения и уменьшения, ингибирования и подавления голода и ощущения голода. Это раскрытие относится далее к применению Y2 селективного агониста для поддержания одного или более из нижеперечисленного: заданного веса тела, заданного индекса массы тела, желаемого внешнего вида и хорошего здоровья. В другом, или альтернативном, аспекте данное изобретение относится к способу лечения и/или предупреждения пониженного энергетического метаболизма, нарушений питания, нарушения аппетита,избыточного веса, ожирения, булимии, нейрогенной булимии, синдрома X (метаболического синдрома) или связанных с этим осложнений или рисков, включая диабет, сахарный диабет типа 2 или инсулиннезависимый сахарный диабет (NIDDM), гипергликемию, устойчивость к инсулину, нарушенную толерантность к глюкозе, сердечно-сосудистое заболевание, гипертензию, атеросклероз, застойную сердечную недостаточность, удар, инфаркт миокарда, тромбоэмболические заболевания, гиперхолистеринемию, гиперлипидемию, болезни желчного пузыря, остеоартрит, остановка дыхания во сне, репродуктивные нарушения, такие как синдром поликистоза яичников, или рак молочной железы, простаты или толстой кишки, причм способ заключается во введении субъекту, такому как млекопитающее, включая человека, эффективной дозы одного или более Y2-селективных агонистов по данному описанию. 2. Терапевтический ангиогенез. Ряд in vitro исследований влияния на рост клеток сосудов гладких мышц, гипертрофию вентрикулярных кардиомиоцитов, а также на пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток наводят на мысль, что NPY может действовать как ангиогенный фактор (Zukowska-Grojek et al. 1998, Circ. Res. 83: 187-95). Важно отметить, что исследования in vivo как на мышиной модели корнеальных микрокарманов, так и анализ хорионаллантоисной мембраны (САМ) цыплят подтвердили, что NPY является мощным ангиогенным фактором, который приводит к возникновению васкулярных структур, подобных сосудистому дереву, с проявляющейся вазодилатацией, как наблюдалось в ином случае только для фактора роста фибробластов-2 (FGF-2), а не на примере ангиогенных структур сосудистого эндотелиального фактора роста (СЭФР, VEGF) (Ekstrand et al. 2003, PNAS, 100: 6033-38). При развитии эмбрионов цыплятNPY индуцировал прорастание сосудов из ранее имевшихся кровеносных сосудов. Действие NPY не наблюдается у животных, нокаутированных по Y2 рецептору, это указывает, что Y2 рецептор отвечает за ангиогенный эффект NPY (Ekstrand et al. 2003). Это замечание подтверждается также наблюдениями,показывающими, что Y2 рецептор является высокоактивированным (позитивно регулируется) в ишемических сосудах, и фермент, который генерирует эндогенный, селективный Y2 лиганд PYY3-36, дипептидилпептидазу-IV, также является высокоактивированным. При различных сердечно-сосудистых заболеваниях, например, таких как атеросклероз, считается,что в периферических сосудах, а также в коронарных сосудах индукция ангиогенеза является благотворной. Также считают, что индукция ангиогенеза благотворна для обеспечения реперфузии после инфаркта микарда. Полагают, что особенно FGF-2 является эффективным агентом для индукции ангиогенеза у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Однако подобно большинству ангиогенных факторовFGF-2 является фактором роста и может также стимулировать рост опухолей, вызывая ангиогенез. Как представлено выше, NPY, действующий через Y2 рецепторы, индуцирует неоваскуляризацию типа, аналогичного неоваскуляризации, индуцируемой FGF-2, однако NPY является нейропептидом, а не классическим фактором роста и не вызывает осложнений в виде индукции роста опухоли. Таким образом, Y2 агонист является агентом, пригодным для терапевтического ангиогенеза. Однако особенно важно для такого применения то, что агонист не проявляет Y1-рецепторного агонизма, так как это оказывало бы нежелательное действие на сердечно-сосудистую систему. Это означает, что пептиды, которые рассматриваются в данном изобретении, являются Y2 селективными рецепторными агонистами или являются особенно подходящими терапевтическими агентами также с учтом того, что они вызывают ангиогенез. Они особенно применимы после модификации с присоединением GAG-связывающего мотива, обсуждавшегося выше. Дальнейшее уточнение. Действие FGF-2, как действие большинства классических факторов, частично опосредуется или регулируется с помощью их связывания с гликозаминогликаном (GAG) во внеклеточной матрице. Это связывание с GAG гарантирует, что ангиогенный фактор действует в соответствующем пространстве и времени и что он не скоро вымывается из ткани. Для применения в терапевтическом ангиогенезе малых пептидов и пептидов-миметиков, таких как описанные в настоящем изобретении, это особенно важно. Поэтому в предпочтительном варианте изобретения пептиды включают один или более GAG-связывающих мотивов, которые гарантируют, что они присоединятся к GAG во внеклеточной матрице с целью индуцировать оптимальный ангиогенез после введения. Это можно осуществлять, например, внутривенным или внутриартериальным введением или, например, можно вводить непосредственно в коронарные артерии, чтобы индуцировать ангиогенез в сердце при болезни коронарной артерии и/или после острого инфаркта миокарда. Аналогично, такое соединение можно вводить внутриартериальной инъекцией в бедренную артерию для лечения болезни периферических сосудов. Его можно также, например, применять для топического, местного введения в кожные поражения, чтобы стимулировать более быстрое заживление ран. Продолжительной экспозиции с Y рецептором, эффективной для индукции ангиогенеза, можно также добиться, используя пептид по настоящему изобретению, модифицированный мотивом, связывающим сывороточный альбумин. Таким образом, в предпочтительном варианте изобретения Y2 селективные агонисты содержатGAG-связывающий мотив, который вводят в положение, где он не снижает устойчивости пептида или не снижает активности и селективности пептида. Особый вариант изобретения относится к PYY3-36, содержащему один или более GAG-связывающих мотивов. В другом варианте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество Y2 и/или Y4 селективных агонистов, включающих GAG-связывающий мотив в комбинации с гепарином в терапевтически эффективном носителе. Соответственно, в одном варианте данное изобретение относится к применению модифицирующих изменений Y2 селективного рецепторного агониста в системе ангиогенеза, особенно для индукции ангиогенеза, такого как ангиогенез, ассоциированный заболеваниями или состояниями, например, такими как сердечно-сосудистые заболевания, включая болезнь периферических сосудов с такими симптомами,как перемежающаяся хромота, болезнь коронарных артерий и инфаркт миокарда; процессы репарации тканей, включая заживление ран на коже, воспалительные состояния, включая воспалительные состояния в желудочно-кишечном тракте, такие, например, как язвы, колит, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона и т.д. Особый вариант изобретения включает применение рецепторного агониста для индукции ангиогенеза в сердце, или в кровеносных сосудах, или в тканях, таких как ткани слизистой оболочки, включая слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта, и кожа. 3. Заживление ран. Сообщалось, что у животных, у которых Y2 рецептор селективно выделяется (элиминирует) за счт делеции его гена, заживление ран замедляется, и что ухудшается ассоциированная с этим неоваскуляризация (Ekstrand et al. 2003, PNAS, 100: 6033-38). Поэтому селективные Y2 агонисты по настоящему изобретению применимы для улучшения заживления ран. Для этого пептиды можно вводить различными способами, включая парентеральное введение. Однако предпочтительным способом применения являет- 24011860 ся топическое введение, например в виде раствора, дисперсии, порошков, плиток, крема, мази, лосьона,геля, гидрогеля, трансдермальной системы доставки, включая пластыри, пэтчи и т.д. Для топического применения их можно использовать в обычной форме (как таковые). Однако в предпочтительном варианте изобретения пептиды модифицируют с помощью одного или более GAG-связывающих мотивов по данному описанию для того, чтобы гарантировать продолжительное местное действие пептида с помощью связывания с GAG в ткани. 4. Воспалительное заболевание кишечника. Ранее было описано применение PYY для предупреждения и/или лечения воспалительного заболевания кишечника; см. Международную заявку 03/105763 на имя Amylin Pharmaceuticals, Inc. Следовательно, агонисты по данному изобретению являются также эффективными для лечения или предупреждения воспалительного заболевания кишечника. Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению агонистов по данному описанию для такой медицинской цели. В представляющем интерес варианте изобретения пептиды содержат один или более GAG-связывающих мотивов, ср. выше. 5. Остеопороз. В нескольких работах, посвящнных изучению животных, нокаутированных по Y2, показано очень большое влияние на образование трабекулярной кости (например, Sainsbury et al. Mol. Cell. Biol. 2003,23: 5225-33). Y2 рецептор также участвует в образовании кости, ср. Baldock et al. 2002, J. Clin. Invest. 109: 915-21. Поэтому Y2-селективные агонисты по настоящему изобретению применимы для лечения остеопороза. Полагают, что особенно применимы для лечения остеопороза или родственных заболеваний пептиды, содержащие один или более GAG-связывающих мотивов. В подгруппе популяции Y2 агонисты могут не оказывать предполагаемого действия вследствие генетических изменений, таких как полиморфизм в гене Y2 рецептора. Утрата функциональных мутаций в этих рецепторах связана, по-видимому, с ожирением. Поэтому в предпочтительном варианте изобретения осуществляют анализ Y2 рецепторного гена субъекта, которого нужно лечить, чтобы проверить эти гены на полиморфизм/мутации и идентифицировать такой полиморфизм. На основании такого анализа можно проводить оптимальное лечение субъектов. Например, только субъекты с нормальным генотипом или с полиморфизмом, который не влияет на функцию Y2 агонистов, можно лечить с применением таких агонистов. Другая возможность - повысить дозу Y2 агониста, вводимую субъектам, экспрессирующим ослабленный рецептор, чтобы гарантировать оптимальное действие лекарства. В случае, когда ожирение субъекта вызвано недостаточностью функции Y2 рецептора, можно утверждать, что лечение, например,большими дозами Y2 агониста является формой заместительной терапии при условии, что, по меньшей мере, некоторая релевантная рецепторная функция вс ещ сохраняется, например, у гетерозиготных пациентов. В одном варианте изобретения перед началом постоянного лечения Y2 агонистом, чтобы быть уверенными, что эти соединения оказывают предполагаемое действие на субъекта, подлежащего лечению,можно провести срочный тест. Таким способом гарантируется, что лечение агонистами Y2 проходят только чувствительные к этим соединениям субъекты. Применение Y2 селективных агонистов в комбинации с Y4 агонистами и другими агентами Рассматриваемая одновременно Международная патентная заявка, поданная в один день с заявкой на данное изобретение, раскрывает Y4-селективные агонисты и их применение для лечения. В приложении к описаниию вкратце суммируются структурные признаки, требующиеся для Y2 агониста по заявке на изобртение, и даются конкретные примеры Y4 селективных агонистов. Как коротко обсуждается ниже, Y2-агонисты по данному изобретению можно применять при лечении вместе с Y4-специфическими агонистами. Применяя комбинированное лечение двумя соединениями, соответственно селективным Y2 агонистом и селективным Y4 агонистом, можно свободно, т.е. независимо друг от друга, изменять дозу каждого из этих соединений, чтобы достичь максимального целебного эффекта. То есть, например, возможно применение субмаксимальной дозы селективного к Y2 соединения для того, чтобы, возможно, вызвать лишь минимальные побочные эффекты, например, за счт Y2 рецепторов периферической сердечнососудистой системы, или тошноту, при одновременном введении максимальной или даже сверхмаксимальной дозы агониста Y4 для того, чтобы обеспечить очень сильное действие у всех субъектов за счт Y4 рецепторного пути, который имеет более широкое терапевтическое окно. Сопутствующая частичная - стимуляция Y2-рецепторного пути гарантирует более мощное воздействие на регуляцию аппетита и расход энергии, чем стимуляция одного Y4 агониста. Например, Y2 агонист может оказывать более явно выраженное действие на опорожнение желудка, чем Y4 агонист. А сопутствующая стимуляция Y4 рецептора позволяет применять более низкую и более безопасную дозу Y2 агониста, которая была бы неэффективна при индивидуальном применении. В тех случаях, когда для достижения комбинированной стимуляции Y4 и Y2 рецепторов используют два индивидуальных соединения, схему введения доз можно корректировать, как указано выше. Соответственно, в конкретных вариантах изобретения комбинацию Y2 агониста и Y4 агониста вводят таким образом, чтобы соотношение дозы агониста Y2 и агониста Y4 составляло примерно от 0,1:10 до примерно 10:0,1, а именно, от примерно от 0,1:1 до примерно 1:0,1, примерно от 0,2:1 до примерно 1:0,2,- 25011860 примерно от 0,3:1 до примерно 1:0,3, примерно от 0,4:1 до примерно 1:0,4, примерно от 0,5:1 до примерно 1:0,5, например 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 и т.д. Как упоминалось выше, представляет интерес комбинация Y2 и Y4 агониста, где такое соотношение между количествами Y2 и Y4, при котором максимальный эффект достигается при минимальных (если вообще таковые имеют место) побочных эффектах. Соответственно, предусматривается, чтобы концентрация Y2 агониста в такой комбинации была меньше, чем концентрация Y4 агониста. Упоминавшиеся выше концентрации и соотношения относятся к молярным концентрациям и к молярным соотношениям соответственно. Таким образом, в предпочтительном варианте изобретения для лечения ожирения селективный Y2 агонист вводят в сочетании с селективным Y4 агонистом. Соединения можно вводить одинаковым способом или различными способами. Способ введения, в принципе, может быть любым упомянутым в данном описании способом, причм парентеральный и топический способы представляют наибольший интерес. Соответственно, в одном варианте изобретения оба агониста, агонисты Y2 и Y4, вводят, например, топическим способом, таким как назальный или подкожная инъекция, а в другом варианте изобретения агонист Y2 вводят назально, а агонист Y4 вводят подкожной инъекцией или наоборот. Другие подходящие комбинации или способы применения входят в объм настоящего изобретения. Агонисты Y2 и Y4, применяемые в комбинированном лечении, могут находиться в одной и той же фармацевтической композиции (например, в виде смеси в фармацевтической композиции) или они могут находиться в раздельных фармацевтических композициях для одновременного, последовательного или индивидуализированного применения с конкретными инструкциями по применению. Соответственно,такие композиции могут быть представлены в виде набора, содержащего Y2 агонист и Y4 агонист в одной и той же упаковке или в различных отдельных упаковках и, необязательно, с инструкциями по применению. Селективные к Y2 агонисты по изобретению можно комбинировать при лечении ожирения, диабета и родственных заболеваний с различными другими лекарствами, имеющими целью аппетит и расход энергии, эти лекарства включают, но без ограничения, лекарства, такие как ингибиторы липаз ЖКТ, ингибиторы обратного захвата нейромедиаторов, антагонисты каннабиноидных рецепторов и обратные агонисты, а также другие типы нейромедиатора, включая, но без ограничения, 5 НТ рецепторы, и/или гормона, включая, но без ограничения, агонисты или антагонисты GLP-1, MC4, МС 3-рецепторов. Так как селективные Y2 агонисты направлены на гомеостатический регуляторный механизм для связи между ЖКТ и ЦНС, т.е. на Y2 рецепторы обычно нацелен опосредующий насыщение кишечный гормон PYY,особенно полезно совмещать лечение комбинированными Y2 селективными агонистами с лечением лекарством, направленным на важнейший гедонический механизм регуляции аппетита и расхода энергии,таким как СВ 1 рецепторы, например, являющиеся частью системы поощрения. Поэтому применение Y2 агонистов при лечении ожирения и родственных заболеваний в комбинации с СВ 1 антагонистом является предпочтительным вариантом настоящего изобретения. Дозировки Терапевтически эффективное количество Y2 рецепторного агониста по данному изобретению зависит от конкретного применяемого агониста, возраста, веса и состояния субъекта, проходящего лечение,тяжести и типа состояния или заболевания, которое нужно лечить, способа введения и эффективности применяемой композиции. Например, терапевтически эффективное количество Y2 рецепторного агониста может меняться примерно от 0,1 мкг на 1 кг массы тела примерно до 1 г на 1 кг массы тела, например, от 1 до примерно 5 мкг на 1 кг массы тела или от около 5 мкг до около 1 мг на 1 кг массы тела. В другом варианте изобретения рецепторный агонист вводят субъекту в количестве 0,5-135 пмоль на 1 кг массы тела или 72 пмоль на 1 кг массы тела. В одном конкретном неограничивающем примере примерно 5-50 нмоль вводят в виде подкожной инъекции, например, около 2-20 нмоль или около 1,0 нмоль. Точную дозу специалист в данной области техники легко определит исходя из активности конкретного применяемого соединения (такого как агонист рецептора), возраста, веса, пола и физиологического состояния субъекта. Доза агониста может быть молярным эквивалентом терапевтически эффективной дозы PYY3-36. Это количество можно разделить на одну или несколько доз для применения ежедневно, через день,еженедельно, через каждые две недели, ежемесячно или с любой другой подходящей частотой. Обычно прим осуществляют один или два раза в день. Способы применения Агонист Y2 рецептора, а также косметические или фармацевтические композиции по данному изобретению можно вводить любым способом, включая энтеральный (например, оральное введение) или парентеральный способ. В конкретном варианте изобретения предпочтительным является парентеральный способ, включающий внутривенную, внутрисуставную, интраперитонеальную (внутрибрюшинную),подкожную, внутримышечную, надчревную инъекцию и инфузию, а также сублингвальный (подъязычный), трансдермальный (чрескожный), топический, трансмукозный, включая назальный, способ или ингаляция, например лгочная ингаляция. В конкретных вариантах изобретения предпочтительным являет- 26011860 ся подкожный и/или назальный способ применения. Агонисты рецепторов можно вводить, как таковые, в подходящем носителе или их можно вводить в виде подходящей фармацевтической или косметической композиции. Такие композиции также входят в объм настоящего изобретения. Ниже описаны подходящие фармацевтические композиции. Специалист в данной области техники знает, что такая композиция может быть также пригодна для косметического применения, или он знает, как скорректировать композицию, чтобы сделать е косметической, используя подходящие косметически приемлемые эксципиенты. Фармацевтические композиции Агонисты рецепторов (рецепторные агонисты, также называемые "соединения") по данному изобретению для применения в медицине или косметике обычно бывают в виде фармацевтической композиции, содержащей конкретное соединение или его производное совместно с одним или более физиологически или фармацевтически приемлемым эксципиентом. Соединения можно вводить животному, включая млекопитающих, таких как, например, человек,любым подходящим способом введения, например, таким как оральный, трансбуккальный, назальный,окулярный, лгочный, топический, трансдермальный, вагинальный, ректальный, парентеральный (включая, наряду с другими, подкожный, внутримышечный и внутривенный, ср. выше) способ, в дозе, которая эффективна для индивидуальных целей. Специалист в данной области техники знает, как выбрать подходящий способ введения. Как указывалось выше, предпочтительным является парентеральное введение. В конкретном варианте изобретения рецепторные агонисты вводят подкожно и/или назально. Общеизвестно в уровне техники, что подкожные инъекции может легко сделать себе сам пациент. Композицию, пригодную для конкретного способа применения, индивидуально для каждого пациента легко определит практикующий врач. Различные фармацевтически приемлемые носители и их состав описаны в обычных монографиях о препаратах, например в Remington's Pharmaceutical Sciences byE.W. Martin. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по изобретению, может быть в виде тврдой, полутврдой или жидкой композиции. Для парентерального применения композиция обычно находится в жидком виде, или в полутврдом, или тврдом виде для имплантации. Жидкие композиции, которые представляют собой стерильные растворы или дисперсии, могут применяться, например, для внутривенной, внутримышечной, внутриоболочечной, эпидуральной, интраперитонеальной или подкожной инъекции или инфузии. Соединения можно также приготовить в виде стерильной тврдой композиции, которую можно растворять или диспергировать до или во время введения, например, в стерильной воде, физиологическом растворе или другой подходящей стерильной среде для инъекций. Композиция в жидком виде может представлять собой раствор, эмульсию, включая наноэмульсии,суспензию, дисперсию, липосомную композицию, смесь, спрей или аэрозоль (два последних типа являются особенно релевантными для назального применения). Подходящие среды для растворов или дисперсий обычно бывают на водной основе или на основе фармацевтически приемлемых растворителей, например, таких как масло (например, кунжутное или арахисовое масло) или органический растворитель, например, такой как пропанол или изопропанол. Кроме того, композиция по изобретению может содержать дополнительные фармацевтически приемлемые эксципиенты, например, такие как агенты, корректирующие рН, осмотически активные агенты, например,для того, чтобы довести изотоничность композиции до физиологически приемлемых уровней, агенты коррекции вязкости, суспендирующие агенты, эмульгаторы, стабилизаторы, консерванты, антиоксиданты и т.д. Предпочтительной средой является вода. Композиции для назального применения могут также содержать подходящие нераздражающие носители, например, такие как полиэтиленгликоли, гликофурол, и т.д., а также энхансеры всасывания, хорошо известные специалисту в данной области техники (например, со ссылкой на Remington's Pharmaceutical Science). Для парентерального применения в одном варианте изобретения агонист рецептора можно вообще готовить смешением агониста рецептора заданной степени чистоты в виде стандартной лекарственной формы для инъекций (в виде раствора, суспензии или эмульсии) с фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, т.е. таким, который не является токсическим для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях и который совместим с другими ингредиентами композиции. Обычно препараты готовят с помощью однородного и тщательного смешения (контактирования) рецепторного агониста с жидкими носителями, или с тонкоизмельчнными тврдыми носителями, или с теми и другими. Затем, при необходимости, продукту придают форму нужного препарата. Предпочтительно носитель представляет собой парентеральный носитель, более предпочтительно раствор, изотонический с кровью реципиента. Примеры таких носителей включают воду, физиологический солевой раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Также применимы по данному описанию неводные носители, такие как нелетучие масла и этилолеат, а также липосомы. Благодаря амфифильной природе пептидов по данному описанию подходящие формы также включают мицеллярные препараты, липосомы и другие типы препаратов, содержащие один или более соответствующих липидов, таких, например, как- 27011860 фосфолипиды и т.п. Предпочтительно они суспендируются в водном носителе, например в изотоническом буферном растворе при рН около 3,0-8,0, предпочтительно при рН около 3,5-7,4, 3,5-6,0 или около 3,5-5,0. Применимые буферные вещества включают ацетатный, цитратный, фосфатный, боратный, карбонатный буферы, например, такие как цитрат натрия-лимонная кислота или фосфат натрия-фосфорная кислота и ацетат натрия-уксусная кислота. Композиции также могут быть предназначены для контролируемой или пролонгированной доставки рецепторного агониста после введения, чтобы создать схему с менее частым введением. Обычно подходящей считается схема прима лекарственного вещества 1-2 раза в сутки, но в объм настоящего изобретения также входят другие схемы применения, такие, например, как более частое и менее частое введение. Для осуществления пролонгированной доставки рецепторного агониста можно применять подходящий носитель, включающий, например, липиды или масла, чтобы образовать депо в месте введения, из которого рецепторный агонист медленно высвобождается в систему кровообращения, или можно использовать имплантат. Подходящие с этой точки зрения композиции включают липосомы и биоразрушаемые частицы, в которые включн рецепторный агонист. В таких случаях, когда нужны тврдые композиции, эти композиции могут быть в виде таблеток,таких как обычные таблетки, шипучие таблетки, таблетки, покрытые оболочкой, формованные таблетки или подъязычные таблетки, в виде пеллет, порошков, гранул, гранулятов, материала в виде макрочастиц,тврдых дисперсий или тврдых растворов. Полутврдая форма композиции может представлять собой жевательную резинку, мазь, крем, линимент, пасту, гель или гидрогель. Другие подходящие лекарственные формы фармацевтических композиций по изобретению могут представлять собой вагитории, суппозитории, пластыри, накладки (пэтчи), таблетки, капсулы, саше, пастилки, устройства и т.д. Лекарственная форма может быть предназначена для неограниченного (свободного) или контролируемого высвобождения, например, за счт того, что таблетки могут иметь соответствующие покрытия. Фармацевтическая композиция может содержать терапевтически эффективное количество соединения по изобретению. Содержание соединения по изобретению в фармацевтической композиции по изобретению составляет, например, около 0,1-100% вес./вес. фармацевтической композиции. Фармацевтические композиции можно готовить любым способом, хорошо известным специалисту в области приготовления фармацевтических препаратов. В фармацевтических композициях соединения обычно объединяются с фармацевтическим эксципиентом, т.е. терапевтически инертным веществом или носителем. Носитель может иметь весьма разнообразные формы в зависимости от заданной лекарственной формы и способа применения. Фармацевтически приемлемые эксципиенты могут представлять собой, например, наполнители,связующие, вещества, способствующие расщеплению, разбавители, вещества, способствующие проглатыванию, растворители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, стабилизаторы, энхансеры, красители,вещества, придающие вкус и запах, агенты коррекции рН, замедлители, увлажняющие средства, поверхностно-активные агенты, консерванты, антиоксиданты и т.д. Подробности можно найти в фармацевтических справочниках, например, таких как Remington's Pharmaceutical Science или Pharmaceutical ExcipientHandbook. В нижеприведнных примерах описано получение и активность некоторых конкретных агонистов по изобретению. Синтезы Сокращения Пептидные агонисты по данному изобретению можно синтезировать твердофазным пептидным синтезом, применяя либо автоматический синтезатор пептидов, либо обычный лабораторный синтез. Тврдым носителем может являться, например, полимер хлортритила (Cl) или полимер Ванга (Wang),каждый из которых можно легко приобрести. Активные группы этих полимеров легко реагируют с карбоксильной группой N-Fmoc аминокислоты, при этом связывая е с полимером ковалентной связью. Связанный с полимером амин можно депротекционировать экспозицией с пиперидином. Затем вторую N-защищнную аминокислоту можно присоединить к элементу полимер-аминокислота. Эти стадии повторяют до тех пор, пока не получат нужную последовательность. По окончании синтеза связанный с полимером защищнный пептид можно депротекционировать и отщепить от смолы под действием трифторуксусной кислоты (ТФК, TFA). Ниже даны примеры реагентов, облегчающих присоединение новых аминокислот к связанной с полимером аминокислотной цепи: тетраметилурония гексафторфосфат (HATU), O-(1 Н-бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат(TBTU),1 Н-гидроксибензотриазол (HOBt). Также предпочтительнее бывает пептидный синтез в растворе, нежели твердофазный пептидный синтез. Модификация боковых амино- и карбоксильных групп аминокислоты пептидной цепи, например,введением GAG-связывающего или другого мотива, описанного выше, является простым способом селективной защиты и депротекции других реакционноспособных групп боковых цепей, не участвующих в реакции. Пептиды по данному описанию получают твердофазным синтезом на полимере PAL Peg-PS (амидная смола Applied BioScience, Warrington, UK GEN913401) с применением реакций с защитной группыFmoc с 5 избытком реагента. Все реакции связывания осуществляют в присутствии HCTU, растворитель ДМФА. Снятие Fmoc проводят 20%-ным раствором пиперидина в ДМФА в течение 10-15 мин. Однако эти пептиды можно также синтезировать различными другими стандартными методами пептидного синтеза, такими как химические реакции с защитной группой tBOC и реакции в растворе вместо твердофазного синтеза, и т.д. Синтез иллюстрируется приведнным ниже описанием, но подобными методами можно получать другие пептиды по данному описанию. Ниже описаны синтез циклического Y2 селективного пептида [Cys2,Lys13,D-Cys27]PYY(SEQ ID No: 39) и синтез аналогов либо с GAG-связывающим мотивом, мотивом связывания с сывороточным белком, либо с фрагментом полиэтиленгликоля, присоединнными по ипсилон-аминогруппеLys13. Как правило, защитной группой в боковой цепи является Fmoc, за исключением В случае [Cys2,Lys13,D-Cys27]PYY следующие специальные защитные группы используют для того, чтобы добиться селективного снятия защиты (селективной депротекции): Пептид синтезируют твердофазным синтезом на полимере PAL Peg-PS (смола, которая при расщеплении образует биологически важную карбоксиаламидную (карбоксамидную) группу) с применением реакций с Fmoc с 5-кратным молярным избытком реагента. Все реакции связывания осуществляют в присутствии HCTU с ДМФА в качестве растворителя. Снятие Fmoc после каждой стадии присоединения проводят 20%-ным раствором пиперидина в ДМФА в течение 10-15 мин. Присоединение проверяют после каждой стадии количественным анализом с нингидрином. В некоторых случаях можно применять- 29011860 двойное связывание (двойную конденсацию). После синтеза полноразмерных пептидов защитную группу в ипсилон-аминогруппе Lys13 селективно снимают, обрабатывая 2% раствором гидразина в ДМФА в течение 15-20 мин, при этом пептид вс ещ остатся связанным с полимером. Затем смолу делят на различные партии для получения недериватизированного пептида, а также трх пептидов, модифицированных с помощью различных мотивов. 1. [Cys2,Lys13,D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 39) - "материнский пептид" - отщепляют от полимера и депротекционируют обработкой смесью 95% трифторуксусной кислоты; 2,5% воды; 2,5% трипропилсилана в течение 2-3 ч. Внутримолекулярный стабилизирующий дисульфидный мостик между и Cys2D-Cys27 образуется в процессе окисления на воздухе при растворении пептида с концентрацией 1 мг/мл в ацетате аммония,рН 8,5-9,0 и перемешивании в течение 24-48 ч до тех пор, пока не исчезнут свободные тиолы, определяемые реактивом Эллмана. Пептид очищают обращнно-фазовой ВЭЖХ: колонка Vydac 300 , 25010 мм, элюент (буфер А=0,05% ТФК в воде; буфер В=60% MeCN: 40% воды: 0,05% ТФК) в градиенте 30-80% буфера В в течение 20 мин, 2 мл/мин. Определяют OD при 215 нм и элюент, содержащий конкретный пептид, собирают и лиофилизируют. Структуру пептида подтверждают масс-спектрометрией, аминокислотным анализом и в ряде случаев также анализом аминокислотной последовательности. 2. [Cys2,N-(8-(8-гамма-Глутамоиламинооктаноиламино)октаноил)-Lys13,D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 28). Для того чтобы присоединить мотив связывания сывороточного альбумина,8-(8-гамма-глутамоиламинооктаноиламино)октаноильную группу связывают со свободной ипсилонаминогруппой остатка Lys13 после удаления защитной Dde группы, пептидным синтезом, с помощью защищнной аминооктановой кислоты, а затем дважды с помощью защищнной гамма-глутаминовой кислоты, в то время как пептид вс ещ остатся связанным со смолой. Пептид, модифицированный с применением мотива, депротекционируют, циклизуют и очищают,как описано выше для "материнского пептида". 3. Флуоресцеин-[Cys2,N-(Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala)3-Lys13,D-Cys27]PYY (SEQ ID No: 30). Для того чтобы присоединить GAG-связывающий мотив, мотив строят постадийно пептидным синтезом, используя свободную ипсилон-аминогруппу Lys13, после удаления Dde группы, на пептиде[Cys2,Lys13,D-Cys27]PYY, вс ещ связанном с полимером, используя стандартный метод с Fmoc, как в целом описано выше: GAG-связывающая последовательность, присоединнная таким образом, представляет собой Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-AlaArg-Ala. Флуоресцеиновую метку присоединяют для in vitro и in vivo для аналитических целей в виде его 5,6 изомера - NHS эфира, 10 избыток в течение 72 ч - к N-концу окончательной GAG-связывающей последовательности. Пептид, модифицированный с помощью GAG-связывающего мотива, отщепляют от полимера, депротекционируют, циклизуют и очищают, как описано выше для "материнского пептида". 4.[Cys2,N-N'-(21-Амино-4,7,10,13,16,19-гексаоксагенэйкозаноил)-гамма-глутамоил-Lys13-DCys27]PYY (SEQ ID No: 37). Для того чтобы присоединить фрагмент полиэтиленгликоля к Y2 селективному пептиду, защищнную 21-амино-4,7,10,13,16,19-гексаоксагенэйкозановую кислоту связывают пептидным синтезом, используя свободную ипсилон-аминогруппу Lys13, после удаления Dde группы, на пептиде [Cys2,Lys13,DCys27]PYY, вс ещ связанном с полимером, а затем присоединяют защищнную гамма-глутаминовую кислоту. ПЭГилированный пептид отщепляют от полимера, депротекционируют, циклизуют и очищают, как описано выше для "материнского пептида". Используя вышеописанные методы, синтезируют в качестве примеров следующие агонисты по изобретению: