Ингибитор фосфолипазы а2

006768 Изобретение относится к медицине, в частности, к препаратам, обладающим антифосфолипазной активностью, а именно, к применению эмоксипина (метилэтилпиродинола) в качестве ингибитора фосфолипазы А 2. Известен ряд лекарственных препаратов, обладающих антифосфолипазной активностью, которые широко применяются, в том числе, при лечении панкреатита в качестве ингибиторов фосфолипазы А 2. Так, из исследований последних лет известно, что у лидокаина присутствует антифосфолипазный эффект, в частности по отношению к фосфолипазе А 2 [1]. Выявленные свойства лидокаина позволяют включить этот водорастворимый препарат в терапию острого панкреатита. Известно, что при экспериментальном панкреатите в поджелудочной железе, а также в печени и плазме крови возникают выраженные изменения качественного и количественного состава липидов. Нарушения обмена липидов возникали на фоне активизации свободно-радикальных реакций ПОЛ и фосфолипазы А 2. Мексидол, обладая антиоксидантной активностью, при остром панкреатите оказывал существенное влияние на состав липидов в исследованных тканевых структурах. В динамике патологического процесса заметное действие препарата отмечено почти на все фракции нейтральных липидов и фосфолипидов. Оказалось, что мексидол наряду с антиоксидантной активностью способен уменьшать активность фосфолипазы А 2. Об этом свидетельствовало снижение не только ее активности в тканевых структурах,но и уменьшение содержания фракций липидов, метаболизм которых связан с активностью энзима. Изложенное позволяет полагать, что для коррекции расстройств обмена липидов поджелудочной железы ведущего патогенетического механизма панкреатита - целесообразно включать мексидол, который корригирует обмен липидов и в печени, и плазме крови, что важно в коррекции гомеостаза на организменном уровне. [Модификация обмена липидов при панкреатите под влиянием мексидола., А.П. Власов. В.А. Трофимов. В.А. Березин. Т.В. Тарасова, P.P. Аширов, И.В. Саушев, Т.Н. Дубовская, Экспериментальная и клиническая фармакология, 2003, т. 661, с. 40-45] Известно, что эмоксипин благодаря своему механизму действия и широкому спектру фармакологических эффектов оказывает влияние на основные звенья патогенеза различных заболеваний, связанных с процессами свободнорадикального окисления и кислородзависимыми патологическими состояниями. В ситуациях, сопровождающихся усилением перекисного окисления липидов и гипоксией, оптимизирует биоэнергетические процессы - улучшает энергетический обмен клетки, активирует энергосинтезирующие функции митохондрий, оказывает модулирующее влияние на обмен гематопорфиринов и восстановленных пиридиннуклеотидов, влияет на содержание биогенных аминов и, таким образом, защищает аппарат клеток и структуру их мембран. Эмоксипин стабилизирует мембранные структуры, нивелирует вызванные гипоксией изменения физико-химических свойств клеточных мембран (уменьшает вязкость липидного бислоя и увеличивает текучесть мембраны), что благоприятно сказывается на ее метаболической и биосинтетической активности. Однако антифосфолипазные свойства эмоксипина - ингибирование действия фосфолипазы А 2 - ранее были неизвестны специалистам в данной области и авторами настоящего изобретения были обнаружены впервые. Таким образом, задачей настоящего изобретения является создание нового антифосфолипазного препарата, обладающего высокой ингибирующей фосфолипазу А 2 активностью. Поставленная задача решается применением эмоксипина в качестве ингибитора фосфолипазы А 2. Для доказательства обнаруженного эффекта был проведен целый ряд исследования ингибирующей активности эмоксипина. Результаты исследований были представлены в виде графических зависимостей,наглядно подтверждающих высокую активность эмоксипина в отношении фосфолипазы А 2. Некоторые из результатов представлены в качестве материалов, иллюстрирующих достоинства и преимущества настоящего изобретения, и на них изображены: Фиг. 1 - кинетика ингибирования фосфолипазы А 2 при разных концентрациях эмоксипина; фиг. 2 - влияние различных концентраций эмоксипина на ингибирование фосфолипазы А 2 через 10 и 15 мин воздействия. Ниже изобретение будет пояснено на одном из конкретных примеров его реализации со ссылкой на фиг. 1 и 2. В одном из исследований в 6 круглодонных колб вносили раствор 3,8 мг яичного фосфатидилхолина в хлороформе, растворитель упаривали на роторном испарителе и остаток солюбилизировали при интенсивном встряхивании в 2 мл 0,3% раствора тритона Х-100 в 0,05 М Трис-HCl буфере (рН 7,5), содержащем 2 мкМ СаСl2 (буфер А). К образовавшимся мицеллярным растворам субстрата добавляли аликвоты 1% раствора эмоксипина (5 разных концентраций, см. фиг. 1) и доводили объем каждой смеси до 3 мл буфером А. Реакцию начинали добавлением 50 мкг панкреатической фосфолипазы А 2, полученной из поджелудочной железы свиньи (Sigma, США), смесь перемешивали на магнитной мешалке при 37 С. Контрольный эксперимент проводили в отсутствие эмоксипина. Через определенные промежутки времени отбирали по 1 мл реакционной смеси и экстрагировали смесью растворителей хлороформ:метанол (2:1, по объему). Нижний хлороформно-метанольный слой отделяли, растворитель упаривали и продукты реакции анализировали с помощью хроматографии на-1 006768 пластинах с тонким слоем силикагеля ("Merck", Германия) в системе растворителей хлороформ:метанол: вода (65:25:4, по объему). Пластины проявляли реагентом на фосфолипиды, пятна фосфатидилхолина и его лизопроизводного выскребали и определяли в них содержание фосфора по методу, описанному в работе [1. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M. A universal reagent for phospholipid analysis // J.Chromatogr. -1975. -Vol. 114, N1. -P. 129-141.]. Степень гидролиза выражали как отношение содержания фосфора в продукте реакции лизофосфатидилхолине к суммарному содержанию фосфора продукта и непрореагировавшего исходного фосфатидилхолина в процентах. Результаты исследования, представленные на фиг. 2 с учетом данных по фиг. 1, наглядно демонстрируют, что эмоксипин достоверно ингибирует действие фосфолипазы А 2 на 80-90% уже через 10-15 мин взаимодействия. Литература. 1. Литвиненко Н.М., Кисель М.А. Эндогенные фосфолипазы А 2 (структура и функции). - Мн.: Наука и техника, 1991. - 270 с., Чикинв Ю.В. Применение альфа-токоферола и лидокаина в комплексном лечении острого панкреатита: Автореф. дис. канд. мед. наук: 14.00.27. - Новосибирск, 1995, с. 19. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Применение эмоксипина в качестве ингибитора фосфолипазы А 2.