Сложный эфир-ингибитор spla2

1 Область изобретения Это изобретение относится к соединениюингибитору sPLA2, имеющему высокую биодоступность. Предпосылки к созданию изобретения Структура и физические свойства непанкреатической секреторной фосфолипазы А 2 человека (называемой здесь далее "sPLA2") подробно описаны в двух статьях, а именно: "Клонирование и рекомбинантная экспрессия фосфолипазы А 2, присутствующей в синовиальной жидкости при ревматоидном артрите", Seilhamer, Jeffrey J.; Pruzanski, Waldemar; Vadas Peter;Chemistry, Vol. 264, No. 10, Issue of April 5, pp. 5335-5338, 1989, и "Структура и свойства непанкреатической фосфолипазы A2 человека",Kramer, Ruth M.; Hession, Catherine; Johansen,Berit; Hayes, Gretchen; McGray, Paula; Chow, E.Blake; The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, No. 10, Issue of April 5, pp. 5768-5775, 1989; содержание которых включено в описание в качестве ссылки. Предполагается, что sPLA2 является ограничивающим скорость ферментом в каскаде арахидоновой кислоты, который гидролизует мембранные фосфолипиды. Таким образом,важно разработать соединения, которые ингибируют опосредуемое sPLA2 выделение жирных кислот (например, арахидоновой кислоты) и являются высоко биодоступными для млекопитающих, особенно для людей. Такие соединения являются ценными в обычном лечении состояний, вызываемых и/или поддерживаемых избыточным образованием sPLA2; таких как септический шок, респираторный дистресс-синдром взрослых, панкреатит, травма, бронхиальная астма, аллергические риниты, ревматоидный артрит и т.д. Терапевтические агенты, которые могут быть даны перорально, являются, как правило,особенно предпочтительными и имеют улучшенные коммерческие возможности, благодаря присущей им легкости применения. Патент США 5654326 описывает некоторые ингибиторы sPLA2 типа индола и аналогичные сложноэфирные пролекарства. В частности, этот патент приводит в качестве примера метиловый эфир 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси) уксусной кислоты. Желательно разработать более высоко доступные ингибиторы sPLA2, особенно такие, которые пригодны для перорального введения. Краткое описание изобретения Это изобретение относится к новому соединению N-морфолиноэтиловому эфиру 3-(2 амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)1H-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты, который 2 является высоко биологически доступным при пероральном введении. Это изобретение относится к фармацевтическому препарату,содержащемуNморфолиноэтиловый эфир 3-(2-амино-1,2 диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол 4-ил)окси)уксусной кислоты в сочетании с носителем или разбавителем. Подробное описание изобретения Соединение 1H-индол-3-глиоксиламида этого изобретения. Соединение этого изобретенияNморфолиноэтиловый эфир 3-(2-амино-1,2 диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол 4-ил)окси)уксусной кислоты представлено структурной формулой (I)N-Морфолиноэтиловый эфир (I) является сложноэфирной формой известного ингибитораsPLA2, 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1(фенилметил)-1H-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты, представленной структурной формулой (II) ниже Соединение формулы (II) описано в примере 1 патента США 5654326 (содержание которого включено в качестве ссылки) и в европейской патентной заявке 95302166.4, публикация 0675110 (опубл. 4 октября 1995 г.). Открытие этого изобретения в том, что соединение формулы (I) является высоко биологически доступным при пероральном введении по сравнению с другими ингибиторами sPLA2. Синтез соединения изобретения В синтезе N-морфолиноэтилового эфира 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты(соединения формулы I выше) в качестве исходного материала используют 3-(2-амино-1,2 диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол 4-ил)окси)уксусную кислоту или ее соль (соединение формулы II выше). Этот исходный материал может быть получен путем схем реакций или способа примера 1 патента США 5654326 (содержание которого включено в опи 3 сание в качестве ссылки). Подобные способы показаны в европейской патентной заявке 95302166.4, публикация 0675110 (опубл. 4 октября 1995 г.). Другие традиционные способы также могут быть использованы для получения исходного материала. Процедуры, применимые для синтеза соединения этого изобретения, описаны в примере 1 ниже. Пример 1. Получение N-морфолиноэтилового эфира 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты соединения, представленного формулой Часть А. Получение N-трет-бутоксикарбонил-3-метокси-2-метиланилина. Раствор 44,4 г (344 ммоль) 3-метокси-2 метиланилина и 75 г (344 ммоль) ди-третбутилдикарбоната в 400 мл ТГФ нагревали, чтобы обеспечить рефлюкс в течение 4 ч. После концентрирования при пониженном давлении остаток забирали в этилацетат, промывали 1 н. лимонной кислотой, водой и сушили (MgSO4). После удаления растворителя при пониженном давлении остаток кристаллизовали из гексана,чтобы получить 64,5 г (выход 84%) N-третбутоксикарбонил-3-метокси-2-метиланилина,т.пл. 56-57 С. Анализы С 13 Н 19NО 3: Рассчитано: С 65,80, Н 8,07, N 5,90 Обнаружено: С 63,32, Н 7,83, N 5,56. Часть В. Получение 4-метокси-2-метил 1 Н-индола. Раствор 280 мл (0,36 моль) 1,3 М вторбутиллития в циклогексане медленно добавляли к N-трет-бутоксикарбонил-3-метокси-2-метиланилину (43 г, 0,18 моль) в 300 мл ТГФ, поддерживая температуру ниже -40 С с помощью ванны с сухим льдом в этаноле. Ванну удаляли и температуре позволяли расти до -20 С и затем ванну заменяли. После охлаждения до температуры -60 С добавляли по каплям 18,5 г (0,18 моль) N-метокси-N-метилглиоксиламида в равном объеме ТГФ. Реакционную смесь перемешивали 1 ч, охлаждающую ванну удаляли и перемешивание продолжали еще 1 ч. Затем ее выливали в смесь 600 мл простого эфира и 600 мл 1 н. НСl. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили над MgSO4 и концентрировали при пониженном давлении, чтобы получить 39,5 г смеси 1-(2-(трет-бутоксикарбониламино)-6-метоксифенил)-2-пропанона и исход 003277 4 ного анилида. Эту смесь растворяли в 100 мл метиленхлорида и 40 мл трифторуксусной кислоты и перемешивали в целом 26 ч. Смесь промывали водой, сушили (MgSO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле,элюируя смесью 20% EtOAc/гексан, чтобы получить при кристаллизации из смеси СН 2 Сl2/гексан 13,9 г 4-метокси-2-метил-1 Ниндола, т.пл. 80-86 С. Анализы С 10 Н 11NО: Рассчитано: С 74,51, Н 6,88, N 8,69 Обнаружено: С 74,41, Н 7,08, N 8,47. Часть С. Получение 4-метокси-2-метил-1(фенилметил)-1 Н-индола. 4-Метокси-2-метил-1 Н-индол (1 г, 6,2 ммоль) добавляли к 248 мг (6,2 ммоль) 60% гидрида натрия в минеральном масле (промывали гексаном перед добавлением ДМФ) в 15 мл ДМФ и после перемешивания в течение 0,5 ч добавляли 0,74 мл (6,2 ммоль) бензилбромида. Смесь перемешивали при комнатной температуре 18 ч, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Раствор этилацетата промывали рассолом, сушили (MgSO4) и после концентрирования при пониженном давлении остаток подвергали хроматографии на силикагеле,элюируя смесью 20% EtOAc/гексан, чтобы получить 1,3 г (выход 84%) 4-метокси-2-метил-1(фенилметил)-1 Н-индола, плавящегося при 96116 С. Анализы C17H17NO: Рассчитано: С 81,24, Н 6,82, N 5,57 Обнаружено: С 81,33, Н 6,74, N 5,29. Часть D. Получение 4-гидрокси-2-метил-1(фенилметил)-1 Н-индола. Раствор 1,25 г (5 ммоль) 4-метокси-2 метил-1-(фенилметил)-1H-индола и 20 мл 1 М ВВr3/СН 2 Сl2 в 50 мл метиленхлорида перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате, промывали рассолом и сушили (МgSO4). После концентрирования при пониженном давлении остаток подвергали хроматографии на силикагеле,элюируя смесью 20% EtOAc/гексан, чтобы получить 577 мг (выход 49%) 4-гидрокси-2-метил 1-(фенилметил)-1H-индола, 125-127 С. Анализы C16H15NO: Рассчитано: С 80,98, Н 6,37, N 5,90 Обнаружено: С 80,76, Н 6,26, N 5,80. Часть Е. Получение метилового эфира 2 метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси) уксусной кислоты. 4-Гидрокси-2-метил-1-(фенилметил)-1Hиндол (530 мг, 2,2 ммоль) добавляли к 88 мг (2,2 ммоль) 60% NaH в минеральном масле в 20 мл ДМФ и смесь перемешивали 0,67 ч. Затем добавляли 0,21 мл (2,2 ммоль) метилбромацетата и обеспечивали перемешивание в течение 17 ч. Смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Раствор этилацетата промывали рас 5 солом, сушили (МgSO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя смесью 20% EtOAc/гексан, чтобы получить 597 мг (выход 88%) метилового эфира 2-метил-1(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты, 140-143 С. Анализы C19H19NO3: Рассчитано: С 73,77, Н 6,19, N 4,53 Обнаружено: С 74,01, Н 6,23, N 4,32. Часть F. Получение метилового эфира 3(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты. Оксалилхлорид (0,16 мл, 1,9 ммоль) добавляли к 582 мг (1,9 ммоль) метилового эфира 2 метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты в 10 мл метиленхлорида и смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток забирали в 10 мл метиленхлорида. Безводный аммиак барботировали в течение 0,25 ч, смесь перемешивали 1,5 ч и испаряли при пониженном давлении. Остаток перемешивали с 20 мл этилацетата и смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали, чтобы получить 672 мг смеси метилового эфира 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси) уксусной кислоты и хлорида аммония, т.пл. 202215 С. Часть G. Получение 3-(2-амино-1,2 диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол 4-ил)окси)уксусной кислоты. Смесь 660 мг (1,7 ммоль) метилового эфира 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты и 10 мл 1 н. NaOH в 30 мл метанола нагревали, чтобы обеспечить рефлюкс в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и перемешивали 0,5 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток забирали вEtOAc/воду. Водный слой отделяли, подкисляли 1 н. НСl до рН 2-3 и экстрагировали EtOAc. При концентрировании раствора EtOAc кристаллизовали 431 мг (выход 69%) 3-(2-амино-1,2 диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1H-индол 4-ил)окси)уксусной кислоты, плавящейся при 218-220 С. Анализы C20H18N2O5: Рассчитано: С 65,57, Н 4,95, N 7,65 Обнаружено: С 63,31, Н 4,79, N 6,91. Часть Н. Получение N-морфолиноэтилового эфира 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2 метил-1-(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси) уксусной кислоты. Соединение данного изобретения может быть получено путем реакции гидрохлорида 4(2-хлорэтил)морфолина (доступного от Aldrich 6 дящем растворителе, предпочтительно в диметилформамиде. Суспензия должна быть нагрета до 60 С или другой подходящей температуры,пока не образуется раствор. Нагревание следует продолжать, пока реакция не завершится. Реакционную смесь следует обрабатывать, чтобы изолировать продукт, обычными органическими лабораторными методами. Анализ 1. Обезьян Cynomolgus использовали в фармакокинетическом изучении единственной дозы. Обезьянам (3 на эксперимент) вводили перорально единственную дозу 10 мг/кг одного из шести пролекарственных соединений индола,включая соединение этого изобретения. Серийные пробы крови получали вплоть до 24 ч после введения дозы. Плазму анализировали на соответствующую свободную кислоту, используя метод LC/MS. Рассчитывали также величины площади под кривой (аuс) для 8 и 24 ч. Цель этого анализа - оценить и сравнить пероральную доставку выбранных ингибиторовsPLA2. Подопытный субъект: Вид: Обезъяны Линия: Cynomolgus Приготовление дозы: Количество ингибитора sPLA2 переводили в эквиваленты свободной кислоты. Носитель: Суспензию ингибитора sPLA2 в 10% камеди акации готовили непосредственно перед введением дозы. Введение дозы: Путь: пероральный Частота: единственная доза Доза: 10 мг/кг (исходной кислоты) Объем дозировки: 5 мл/кг Таблица 1 Результаты фармакокинетического исследования на обезьянах Соединение типа сложного эфираN-морфолиноэтилового эфира 3-(2-амино-1,2 диоксоэтил)-2-метил-1-(фенилметил)-1H-индол 4-ил)окси)уксусной кислоты также определяли путем фармакокинетического исследования единственной пероральной дозы в плазме крысы. Цель этого анализа - оценить и сравнить пероральную доставку выбранных ингибиторовsPLA2. Подопытный субъект: Вид: крысы Линия: Fischer 344 Приготовление дозы: Количество ингибитора sPLA2 переводили в эквиваленты свободной кислоты. Носитель: Суспензию ингибитора sPLA2 в 10% камеди акации готовили непосредственно перед введением дозы. Введение дозы: Путь: пероральный Частота: единственная доза Доза: 10 мг/кг (исходной кислоты) Объем дозировки: 5 мл/кг Крыс выдерживали голодными в течение ночи. Отбор проб для испытания: Пробы крови (0,8 мл) отбирали в следующие моменты времени: 0,5, 1, 2, 4, 6 и 8 ч (2 крысы/момент времени). Анализ данных: Плазму анализировали ЖХВР, чтобы измерить концентрации различных ингибиторовsPLA2 (как свободных кислот). Смакс (максимальные концентрации в плазме) и величины AUC определяли из кривых средней концентрации в плазме против времени. 8 Таблица 2 Соединение типа сложного эфира 11 12 13 14 15 16 Хотя данное изобретение поясняется выше на некоторых конкретных вариантах воплощения, это не значит, что эти конкретные примеры будут ограничивать объем притязаний изобретения, который определяется прилагаемой формулой изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение N-морфолиноэтиловый эфир 3-(2-амино-1,2-диоксоэтил)-2-метил-1(фенилметил)-1 Н-индол-4-ил)окси)уксусной кислоты. 2. Применение соединения по п.1 в качестве средства для лечения состояний, вызываемых или поддерживаемых избыточным образованием sPLA2. 3. Фармацевтический препарат, содержащий соединение по п.1 в сочетании с носителем или разбавителем.