Получение и очистка синтетического капсаицина

008705 Область изобретения Настоящее изобретение относится к способам получения и очистки синтетически полученного капсаицина. Предпосылки изобретения Капсаицин, жгучее вещество, полученное из растений семейства solanaceae (острые перцы чили) в течение длительного времени использовали в качестве экспериментального средства благодаря его селективному действию на небольшого диаметра афферентные нервные волокна, С-волокна и А-дельта волокна, которые, как считают, передают болевые сигналы. На основании экспериментов на животных сделан вывод, что капсаицин запускает в действие механизм деполяризации мембран С-волокон, раскрывая катионные канальца, проницаемые для кальция и натрия. Недавно был клонирован один из рецепторов для действия капсаицина. Капсаицин можно легко получить в результате этанольной экстракции плода capsicum frutescens или capsicum annum. Капсаицин известен под химическим названием N-(4 гидрокси-3-метоксибензил)-8-метилнон-транс-6-енамид. Капсаицин практически не растворим в воде, но легко растворяется в спирте, эфире, бензоле и хлороформе. Терапевтически капсаицин использовали в качестве наружного анальгетика. Капсаицин доступен коммерчески как Capsaicin USP от Steve WeissCo., 315 East 68th Street, New York, NY 10021 и, кроме того, его легко получить синтетически, используя опубликованные способы. См. Michalska et al., "Synthesis and Local Anesthetic Properties of N-substituted 3,4-Dimethoxyphenethylamine Derivatives", Diss Pharm. Pharmacol., Vol. 24, (1972), pp. 17-25, (Chem. Abs. 77: 19271 а), где раскрыты N-пентил- и N-гексил-3,4-диметоксифенилацетамиды, которые восстанавливают до соответствующих вторичных аминов. Капсаицин (USP) содержит не менее 110% всех капсаициноидов, что обычно соответствует 63% чистого капсаицина. USP капсаицин является транс-капсаицином(55-60%) и содержит также предшественники дигидрокапсаицина и нордигидрокапсаицина. Хотя подробный механизм действия до сих пор не известен, опосредствованные капсаицином эффекты включают:(ii) эвентуальную десенсибилизацию периферических ноцицепторов как реакцию на один или более из стимулов;(iii) клеточную дегенерацию чувствительных афферентов А-дельта и С-волокон;(vi) уменьшение абсолютного числа ноцицептивных волокон, не влияя при этом на абсолютное число неноцицептивных волокон. Способы синтеза капсаицина и его аналогов были приведены, например, Crombie et al., "Amides ofVegetable Origin Part VI Synthesis of Capsaicin", Journal of the Chemical Society, pp. 1025-1027 (1955), где раскрыт точный синтез капсаицина, N-(4-гидрокси-3-метоксибензил)-8-метилнон-транс-6-енамида, активного начала красного перца. В патенте США 4493848, выданном LaHann et al. 15 января 1985, раскрыты композиции N-[(замещенный фенил)метил]-цис-монозамещенного алкенамида и способы их получения для парэнтерального, перорального и наружного введения. В патенте США 5094782, выданном Chen et al. 10 марта 1992, раскрыто получение сукцината нонаноилваниллиламида из синтетического капсаицина (нонаноилваниллиламида) и сукцинового ангидрида. Кроме того, другие ссылки сообщают об использовании реакции Виттига, как ключевой стадии для введения двойной связи. Однако реакция Виттига всегда благоприятствует образованию цис-алкенового продукта. Таким образом, необходимы дополнительные стадии, включая фракционную перекристаллизацию, для изомеризации цис-продукта в транс-продукт, и для его выделения. Альтернативные способы синтеза капсаицина используют сложноэфирную перегруппировку Кляйзена как средство селективного образования транс-изомера олефиновой (алкеновой) двойной связи. Несмотря на преимущества по сравнению с реакцией Виттига, так как при этом невозможно образование цис-продукта, использование сложноэфирной перегруппировки Кляйзена приводит к получению исходного продукта, у которого углеродная цепочка слишком коротка. Поэтому для получения конечного продукта после стадии Кляйзена цепочку необходимо удлинить до сочетания с бензиламином. Было бы выгодно разработать такой способ полного синтеза транс-изомера капсаицина, который обеспечивал бы получение транс-изомера без дополнительных стадий, необходимых для синтеза капсаицина в известных ранее способах. Далее, было бы выгодно разработать способ очистки синтетического капсаицина, полученного раскрытыми здесь способами настоящего изобретения. Настоящее изобретение частично относится к тому факту, что транс-конфигурация задается в самом начале реакции синтеза, и сохраняется на протяжении всех четырех стадий процесса. Кроме того,настоящее изобретение частично относится к тому факту, что синтетически полученный транскапсаицин можно очистить до степени чистоты 99,0% или более. Цели и суть изобретения Целью настоящего изобретения является создание способа полного синтеза транс-изомера капсаицина или капсаициноподобных соединений.-1 008705 Другой целью настоящего изобретения является получение способа очистки капсаицина или капсаициноподобных соединений настоящего изобретения. В соответствии с указанными выше и другими целями в некоторых предпочтительных вариантах настоящего изобретения предложен четырехстадийный способ синтеза транс-изомера капсаицина. В некоторых других вариантах предложен способ получения транс-капсаицина, включающий а) алкилирование 3-метилбутина галогенвалериановой кислотой и/или -галогеноалкановой кислотой с получением 8-метил-6-нониновой кислоты и/или ее аналогов алкиновой кислоты следующей формулы (где n=4-8):d) ацилирование гидрохлорида 4-гидрокси-3-метоксибензиламина хлорангидридом с получением транс-капсаицина. В некоторых других вариантах предложен способ получения транс-капсаицина, в котором стадия а) включает стадии:i) смешивания безводного тетрагидрофурана (ТГФ) с гексаметилфосфорамидом (НМРА) и охлаждения смеси до температуры в интервале от около -78 до около -75 С;ii) добавления к смеси со стадии i) 3-метилбутина, с последующим добавлением по каплям основания при температуре от около -78 до около -65 С с получением второй смеси;iii) нагревания второй смеси вплоть до около -30 С и перемешивания (предпочтительно в течение около 30 мин); иiv) добавления по каплям раствора галогенвалериановой кислоты в безводном тетрагидрофуране при температуре около -30 С, причем галогенвалериановую кислоту добавляют в количестве, достаточном для превращения указанного 3-метилбутина в 8-метил-6-нониновую кислоту, и затем осуществления постепенного нагревания до комнатной температуры и перемешивания (предпочтительно в течение ночи) с получением реакционной смеси. В некоторых вариантах предложен способ получения неочищенного промежуточного продукта на стадии а), включающий далее стадии:i) добавления к реакционной смеси хлористо-водородной кислоты (НСl) (предпочтительно 3 М НСl), и экстрагирования реакционной смеси этилацетатом; иii) промывки экстрагированной реакционной смеси насыщенным солевым раствором с получением неочищенного продукта. В другом варианте изобретения предложен способ очистки неочищенного промежуточного продукта со стадии а), включающий стадии:i) очистки неочищенного продукта хроматографией на колонке с силикагелем при элюировании смесью этилацетат/гексан; иii) удаления растворителей в вакууме с получением промежуточного продукта со стадии а). В некоторых других вариантах предложен способ получения транс-капсаицина, в котором стадия b) включает стадии:i) растворения указанной 8-метил-6-нониновой кислоты в смеси безводного тетрагидрофурана и трет-бутилового спирта (t-BuOH) с получением раствора, и охлаждения указанного раствора до температуры от около -55 до около -40 С;ii) конденсации аммиака (NH3) в растворе при температуре от около -50 до около -40 С;iii) добавления стружек натрия по кусочкам при температуре от около -45 до около -30 С и перемешивания в течение промежутка времени, достаточного для растворения натрия (предпочтительно от около 30 мин до около 2 ч), иiv) добавления хлорида аммония (NH4Cl), нагревания до комнатной температуры и предоставления возможности NH3 испариться в течение ночи с получением реакционной смеси. В некоторых других вариантах, предложен способ получения транс-капсаицина, в котором стадияiii) стадии b) реакции включает далее добавление по кусочкам лития при температуре от около -65 до около -45 С и перемешивание в течение промежутка времени, достаточного для растворения лития(предпочтительно от около 30 мин до около 2 ч). В некоторых других вариантах предложен способ получения транс-капсаицина, в котором стадия b) включает далее стадии:i) перемешивания указанной реакционной смеси в течение ночи для испарения аммиака;ii) добавления безводного тетрагидрофурана и хлорида аммония, перемешивание указанной смеси в течение промежутка времени, достаточного для нейтрализации избытка лития (предпочтительно 30 мин);iii) добавления порциями смеси лед-вода;iv) экстрагирования указанной смеси этилацетатом, промывкой насыщенным солевым раствором и сушки над безводным сульфатом натрия; иv) фильтрования и удаления растворителей в вакууме с получением промежуточного продукта стадии b). В некоторых вариантах предложен способ получения неочищенного промежуточного продукта на стадии b), включающий далее стадии:ii) подкисления реакционной смеси НСl (предпочтительно 6 н. НСl) до рН от около 2 до около 3;iii) экстрагирования реакционной смеси этилацетатом, промывки насыщенным солевым раствором и сушки над безводным сульфатом натрия (Na2SO4); иiv) фильтрования и удаления растворителей в вакууме с получением неочищенного промежуточного продукта на стадии b). В другом варианте изобретения предложен способ очистки неочищенного промежуточного продукта со стадии b), включающий стадии:i) очистки продукта флэш-хроматографией на колонке с силикагелем и элюирования смесью этилацетат/гексан с получением промежуточного продукта со стадии b). В некоторых других вариантах предложен способ получения транс-капсаицина, в котором стадия с) включает стадии:i) добавления по каплям тионилгалогенида к 8-метил-6-ноненовой кислоте при комнатной температуре с образованием раствора;ii) нагревания раствора при температуре в интервале от около 50 до около 75 С в течение промежутка времени, достаточного для превращения указанной 8-метил-6-ноненовой кислоты в галогенангидрид (предпочтительно около 1 ч); иiii) удаления избытка тионилгалогенида в вакууме при температуре от около 40 до около 45 С с получением промежуточного продукта на стадии с). В некоторых других вариантах предложен способ получения транс-капсаицина, в котором стадия d) включает стадии:ii) добавления порциями при комнатной температуре к смеси со стадии i) водного раствора гидроксида натрия (предпочтительно 5 н. NaOH) и перемешивания (предпочтительно в течение около 30 мин);iii) добавления по каплям галогенангидрида в безводном эфире при температуре от около 0 до около 10 С в течение промежутка времени, достаточного для превращения галогенангидрида в амид (предпочтительно от около 20 мин до около 1 ч); и затемiv) постепенного нагревания смеси до комнатной температуры и перемешивания (предпочтительно в течение ночи). В некоторых вариантах предложен способ получения неочищенного транс-капсаицинового продукта на стадии d), включающий далее стадии:i) добавления к смеси воды и экстрагирования смеси этилацетатом с получением этилацетатного экстракта;ii) промывки указанного экстракта НСl (предпочтительно 1 н. НСl) и затем промывки бикарбонатом натрия (NаНСО 3);iii) промывки раствора насыщенным солевым раствором и сушки над безводным сульфатом натрияiv) фильтрования и удаления растворителей в вакууме с получением неочищенного продукта. В другом варианте изобретения предложен способ очистки неочищенного продукта - транскапсаицина со стадии d), включающий очистку неочищенного продукта хроматографией на колонке с силикагелем и элюирования смесью этилацетат/гексан с получением неочищенного продукта - транскапсаицина. В некоторых других вариантах предложен дополнительный способ очистки продукта - транскапсаицина, включающий стадии:(i) растворения неочищенного продукта - транс-капсаицина в смеси эфир/гексан и нагревания смеси при температуре от около 40 до около 45 С;ii) охлаждения смеси до комнатной температуры при перемешивании в течение около 2 ч; иiii) фильтрования смеси с получением очищенного продукта - транс-капсаицина. В некоторых других вариантах предложен способ очистки капсаицина высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), используя полупрепаративную ВЭЖХ. В некоторых вариантах настоящее изобретение направлено далее на способ очистки неочищенного продукта - транс-капсаицина настоящего изобретения или далее на очистку очищенного предварительно продукта - транс-капсаицина настоящего изобретения. Предпочтительно очистка обеспечивает получение высокоочищенного продукта - транс-капсаицина, со степенью чистоты около 97% или более, предпочтительно около 98% или более, более предпочтительно около 99% или более.-3 008705 Такую очистку называют здесь "полупрепаративной очисткой" или полупрепаративной очисткой капсаицина. Полупрепаративную очистку капсаицина в соответствии с настоящим изобретением осуществляют полупрепаративной ВЭЖХ. В некоторых предпочтительных вариантах капсаицин предварительно очищают перед тем, как осуществляют далее очистку капсаицина полупрепаративной ВЭЖХ. В некоторых вариантах, настоящее изобретение относится далее к высокоочищенному продукту капсаицину, полученному в соответствии с настоящим изобретением, где продукт - капсаицин имеет степень чистоты более чем около 97%, предпочтительно более чем около 98%, более предпочтительно более чем около 99% капсаицина. В некоторых других вариантах предложена композиция капсаицина для ослабления боли в участках организма нуждающегося в этом человека или животного, практически состоящая из транс-капсаицина. Предпочтительно композиция капсаицина включает высокоочищенный капсаицин настоящего изобретения и подходящий для способа введения носитель (например, для инъекции или для инфильтрации). В некоторых других вариантах, предложена композиция, включающая транс-капсаицин или транскапсаициноподобные соединения для лечения различных состояний, связанных с болью, например ноцицептивной болью (болью, передаваемой по непораженным нейрональным путям), невропатической болью (болью, вызываемой повреждением нервных структур), болью из-за повреждения нервов (невромы и невромы в развитии), невралгической болью (болью, возникающей в результате заболевания и/или воспаления нервов), болью, связанной с миалгией (болью, возникающей в результате заболевания и/или воспаления мышц), болью, связанной с болезненными точками, болью из-за опухолей в мягких тканях,болью, связанной с синдромами разрегулирования нейротрансмиттеров (дисбалансом количества/качества нейротрансмиттерных молекул, связанных с передачей сигналов в здоровых нервах) и болью,связанной с ортопедическими нарушениями, такими как состояния стопы, колена, бедра, позвоночника,плеча, локтя, кисти, головы и шеи. Предпочтительно, чтобы транс-капсаицин или транскапсаициноподобные соединения были высокоочищены. Для того, чтобы раскрытое здесь изобретение можно было понять более полно, представлены следующие определения: Термин "транс-капсаицин" в том смысле, как его используют в настоящем описании, охватывает как транс-изомеры капсаицина так и транс-изомеры всех капсаициноподобных соединений, полученных способами настоящего изобретения. Термин "рецептор капсаицина" в том смысле, как его используют в настоящем описании, охватывает ваниллоидный рецептор подтипа-1 (VR1), раскрытый здесь подробно, но не ограничивается VR1, и практически может быть в общем использован для обозначения рецепторных подтипов VR1 и VR2. Подробное описание изобретения Раскрытые здесь способы можно использовать для синтеза транс-капсаицина или транскапсаициноподобных соединений. В некоторых других вариантах настоящего изобретения транс-капсаицин синтезируют, используя следующие химические реакции: На первой стадии синтеза транс-капсаицина предпочтительно синтезируют первое промежуточное соединение, используя реакцию алкилирования. В одном предпочтительном варианте первое промежуточное соединение, которое синтезируют, предпочтительно является 8-метил-6-нониновой кислотой. 8 Метил-6-нониновую кислоту предпочтительно синтезируют алкилированием 3-метилбутина галогенвалериановой кислотой, такой как бромвалериановая кислота, хлорвалериановая кислота, фторвалериановая кислота, иодовалериановая кислота, астатвалериановая кислота, 1-мезилоксивалериановая кислота и 1-тозилоксивалериановая кислота. Реакцию алкилирования предпочтительно ведут, добавляя растворители, такие как гексаметилфосфорамид и тетрагидрофуран в присутствии подходящего основания, например, н-бутиллития (n-BuLi). В некоторых других вариантах настоящего изобретения можно использовать альтернативные основания,такие как втор-бутиллитий (sec-BuLi), трет-бутиллитий (t-BuLi), литийди(изопропил)амид (LDA), гидрид натрия (NaH), амид натрия (NaNH2), амид лития (LiNH2), метиллитий (MeLi), метилмагнийбромид(МеМgВr), этилмагнийбромид (EtMgBr), алкил или арилмагнийгалогениды и их смеси вместо бутиллития на стадии алкилирования. В некоторых других вариантах гексаметилфосфорамид можно заменить 1,2-диметил-3,4,5,6 тетрагидро-(1 Н)пиримидиноном. В некоторых других вариантах можно предпочтительно использовать дополнительные растворители, такие как простой эфир, на стадии реакции алкилирования. Неочищенный продукт, полученный на первой стадии синтеза, предпочтительно очищают хроматографией на колонке с силикагелем. В некоторых других вариантах промежуточное соединение со стадии 1 очищают экстракцией кислотой-основанием. В некоторых других вариантах промежуточное соединение со стадии 1 очищают вакуумной перегонкой или фракционной вакуумной перегонкой или низкотемпературной кристаллизацией. На второй стадии синтеза транс-капсаицина предпочтительно синтезируют второе промежуточное соединение, восстанавливая первое промежуточное соединение. В одном предпочтительном варианте второе синтезируемое промежуточное соединение является предпочтительно 8-метил-6-ноненовой кислотой. Реакцию восстановления предпочтительно ведут, используя литий, t-BuOH, NН 3/ТГФ. Однако в некоторых других вариантах гидриды металлов, такие как диизобутилалюминийгидрид (DIBAL-H), натрий в жидком аммиаке, литий с низшими алкиламинами, предпочтительно использовать на стадии восстановления для получения нужного продукта. Процентный выход целевого продукта будет зависеть от агента, выбранного для завершающей стадии реакции восстановления. В некоторых других вариантах t-BuOH можно заменить другими алкилспиртами, такими как вторичный бутиловый спирт (втор-BuOH), этиловый спирт (EtOH). На третьей стадии синтеза транс-капсаицина предпочтительно синтезируют третье промежуточное соединение активацией второго промежуточного соединения тионилгалогенидом, например, тионилхлоридом. В одном предпочтительном варианте третье синтезируемое промежуточное соединение является предпочтительно галогенангидридом, например, хлорангидридом, следующей формулы: где R2 выбирают из группы, состоящей из хлора, брома, имидазолидов, карбодиимидов и других отщепляемых групп, таких как смешанные сложные эфиры. В некоторых других предпочтительных вариантах можно предпочтительно использовать оксалилхлорид, пятихлористый фосфор, треххлористый фосфор и сульфурилхлорид вместо тионилгалогенида. В некоторых других вариантах активацию карбоновой кислоты можно обеспечить путем образования смешанных сложных эфиров с изобутилхлорформиатом, имидазолидами и карбодиимидом. В некоторых других вариантах активацию можно обеспечить,используя 1,3 дициклогексилкарбодиимид (DCC), гидрохлорид 1-этил-3-(3'-диметиламинопропил)карбодиимида(HOAt), комбинацию EDCI и HOAt или HOBt, или карбонилдиимидазола (CDI), тиокарбонилимидазола вместо тионилгалогенида. На четвертой стадии синтеза транс-капсаицина конечный продукт - транс-капсаицин синтезируют,используя ацилирование производного бензиламина галогенангидридом. В одном предпочтительном варианте производным бензиламина является гидрохлорид 4-гидрокси-3-метоксибензиламина. В некоторых вариантах гидрохлоридную соль 4-гидрокси-3-метоксибензиламина можно заменить 4-гидрокси-3-метоксибензиламином в реакции с хлорангидридом. В некоторых вариантах реакцию ацилирования галогенангидридом ведут, используя водный раствор гидроксида натрия (NaOH) в диметилформамиде (ДМФ) и диэтиловом эфире (Et2O). В других предпочтительных вариантах предпочтительно использовать альтернативные основания,такие как гидроксид калия (КОН), гидроксид лития (LiOH), карбонат натрия, карбонат калия, алкиламины, такие как триэтиламин, основание Хунига, 4-диметиламинопиридин (DMAP) и пиридин вместо гидроксида натрия. В некоторых других вариантах предпочтительно использовать альтернативные растворители, такие как тетрагидрофуран, 1,2-диметоксиэтан (DME), ацетонитрил, метилэтилкетон (МЕК), дихлорметан и хлороформ вместо смеси диметилформамид/эфир. В некоторых вариантах, на пятой и конечной стадии конечный (неочищенный) продукт - транскапсаицин очищают, используя перекристаллизацию. Предпочтительно перекристаллизация включает очистку продукта - транс-капсаицина, включающую стадии:(i) растворения неочищенного продукта - транс-капсаицина в смеси эфир/гексан и нагревания смеси до температуры от около 40 до около 45 С;ii) охлаждения смеси до комнатной температуры при перемешивании в течение около 2 ч; иiii) фильтрования смеси с получением очищенного продукта -транс-капсаицина. Альтернативно,конечный (неочищенный) продукт - транс-капсаицин можно очистить хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя, например, смесью этилацетат/гексан с получением очищенного продукта - транскапсаицина. Дополнительно или альтернативно, на вышеуказанной пятой и конечной стадии конечный продукт транс-капсаицин очищают полупрепаративной ВЭЖХ с получением высокоочищенного транс-капсаицина со степенью чистоты около 97%, или более предпочтительно около 98% или более, более предпочтительно около 99% или более. В некоторых вариантах используют, например, систему полупрепаративной ВЭЖХ, систему адсорбционной хроматографии, систему ионообменной хроматографии, хроматографии с исключением по размерам, или т.п. Предпочтительной системой ВЭЖХ является система адсорбционной хроматографии,такая как система хроматографии с обращенной фазой. В некоторых вариантах стадия конечной очистки настоящего изобретения включает обработку полупрепаративной ВЭЖХ с использованием изократического элюирования (например, с использованием изократической подвижной фазы) или градиентного элюирования (например, с градиентом подвижной фазы). При изократическом элюировании соединения (например, капсаицин и примеси) элюируют, используя подвижную фазу с постоянным составом. Соединения мигрируют через колонку, причем каждое соединение мигрирует с различной скоростью, что приводит к разделению соединений. При градиентном элюировании соединения можно элюировать, изменяя состав подвижной фазы, например, увеличивая концентрацию и/или силу органического растворителя. Подвижные фазы для применения в способах настоящего изобретения обычно включают, например, ацетонитрил, диоксан, этанол, изопропанол, гексан, EtOAc, метанол, тетрагидрофуран, воду, их комбинации и т.п. Наиболее предпочтительно, чтобы подвижная фаза включала метанол. Колонки для полупрепаративной ВЭЖХ для использования в способах настоящего изобретения включают, например, но ими не ограничиваются, Symmetry C18, Cogent HPS C18, Zorbax SB-C18 StableBond, Hichrom C18, Genesis 300 C18, OmniSphere C18, HxSil C18, и т.п. В некоторых предпочтительных вариантах транс-капсаицин, полученный способами настоящего изобретения, имеет степень чистоты капсаицина около 97% или более, около 98% или более, или 99% или более. В некоторых вариантах настоящее изобретение относится далее к соединению транс-капсаицина со степенью чистоты капсаицина около 97% или более, около 98% или более, или около 99% или более. Такой капсаицин называют здесь высокоочищенным капсаицином. В некоторых вариантах настоящее изобретение относится далее к высокоочищенным капсаициновым соединениям транс-капсаицина с уровнем количества примесей около 3% или менее, около 2% или менее, или около 1% или менее. Транс-капсаицин, полученный способами настоящего изобретения, предпочтительно пригоден для получения композиций для инъекций или инфильтраций, которые можно вводить в конкретные участки организма человека или животных для лечения боли. В том смысле, как их используют в настоящем описании, термины "транс-капсаицин" и "транскапсаициноподобные соединения" включают транс-изомеры капсаицина и капсаициноподобных соединений, которые действуют в тех же самых фармакологических сайтах, например, ваниллоидных рецепторах подтипа-1, что и капсаицин, если только нет других указаний. Известны капсаициноподобные соединения с аналогичными физиологическими свойствами, т.е.,воздействующими на деполяризацию мембран С волокон за счет открытия катионных канальцев, проницаемых для кальция и натрия. Например, в патенте США 4812446, выданном Brand (ProcterGambleCo.) 14 марта, 1989, раскрыты другие капсаициноподобные соединения и способы их получения. В патенте США 4424205, выданном LaHann 3 января, 1984 приведен список капсаициноподобных аналогов. Ton et al., Brit. J. Pharm. 10:175-182 (1955) обсуждают фармакологическое действие капсаицина и его аналогов. Если транс-капсаициноподобное соединение синтезируют способами настоящего изобретения, указанное транс-капсаициноподобное соединение должно предпочтительно обладать аналогичными транскапсаицину физиологическими свойствами, как это известно специалистам. Подходящие транс-капсаициноподобные соединения предпочтительно включают, но ими не ограничиваются, гомокапсаицин, эвгенол, куркумин, анандамид, пиперин, пиперилин, пипереттин, пиперолеин А, пиперолеин В, пиперанин и любые их комбинации или их смеси. Транс-капсаицин и транс-капсаициноподобные соединения, которые синтезируют способами настоящего изобретения, особенно пригодны для лечения расстройств или боли, которые можно облегчить,активируя ваниллоидные рецепторы, так как транс-изомеры являются распознаваемыми медиаторами механизма действия VR-1. Способы синтеза настоящего изобретения приводят к получению продукта капсаицина, который состоит практически из транс-капсаицина. Продукт капсаицин, полученный в соответствии с настоящим изобретением, содержит менее чем 1% цис-капсаицина.-6 008705 Ваниллоидный фрагмент представляет собой основной структурный компонент транс-капсаицина и транс-капсаициноподобных соединений, и поэтому предполагаемый сайт действия указанных транссоединений обычно чаще называют ваниллоидным рецептором (Szallasi 1994 Gen. Pharmac. 25:223-243). Напротив, хотя цис-изомер капсаицина обладает активностью, осуществляемой через ряд механизмов,VR-1 не рассматривается как представляющий основной эффект указанного агента.VR-1 является проницаемым для Са 2+ неселективным катионным канальцем, который активируется ваниллоидами, например капсаицином и резинифератоксином. Человеческий ваниллоидный рецептор,будучи экспрессирован в клетках млекопитающего, активируется капсаицином, при температурах выше 42 С и при рН менее 5,5. Активация всеми указанными эффекторами может быть существенно или полностью блокирована действием антагониста капсаицина - капсазепином.VR-1 обнаруживаются по всей длине первичных сенсорных нейронов с сомато I спинальнокорешкового и тригеминального ганглия. Диаметры указанных нейронов от маленького до среднего, и они являются источниками не миелинизированных С-волокон. VR-1 позитивные нейроны с С-волокнами можно разделить на два подраздела: пептидергические и непептидергические. Среди нейропептидов,обнаруженных в ваниллоид-чувствительных нейронах, лучше всего охарактеризованы вещества Р иCGRP. Непептидергические ваниллоид-чувствительные нейроны характеристически обладают Р 2 Х 3 пуринергическим рецептором и перекрестной десенсибилизацией между пуринергическими рецепторами и ваниллоидными рецепторами. Субпопуляция нейронов нервного узла содержит также VR-1. Считают,что VR-1 функционирует как общий рецептор для различных вредных стимулов, включая тепло, кислоты и некоторые растительные токсины. Кроме того, при воспалениях, эндогенные вещества, выделяемые из активированных иммунных клеток, могут также быть направлены на VR-1, активация которых, помимо ноцицепции, приводит также к CGRP-опосредствованной локальной вазодиляции. Считают, что в желудочно-кишечном тракте этот механизм играет центральную роль в защите слизистой оболочки. Напротив, роль VR-1 в центральных окончаниях первичных нейронов, т.е. спинного рога спинного мозга и роль эндогенных активаторов этих рецепторов не известны. Ваниллоиды, такие как транс-капсаицин, обладают бифазным воздействием на чувствительные периферические нервы, начальная возбуждающая фаза (проявляющаяся как боль и/или нейрогенное воспаление) с последующим длительным невосприимчивым состоянием, традиционно известным как десенсибилизация (Szallasi 2000 Trends Neurosci. 25:491-497). Композиции транс-капсаицина настоящего изобретения можно использовать для лечения различных состояний, связанных с болью, обеспечивая ослабление боли в специфических участках. Примеры подлежащих лечению состояний включают, но ими не ограничиваются, ноцицептивную боль (боль, передаваемую по неповрежденным нейрональным путям), невропатическую боль (боль, вызываемую повреждением нервных структур), боль из-за повреждения нервов (невромы и невромы в развитии), невралгическую боль (боль, возникающую в результате заболевания и/или воспаления нервов),боль, связанную с миалгией (боль, возникающую в результате заболевания и/или воспаления мышц),боль, связанную с болезненными точками, боль из-за опухолей в мягких тканях, боль, связанную с синдромами разрегулирования нейротрансмиттеров (дисбалансом количества/качества нейротрансмиттерных молекул, связанных с передачей сигналов в здоровых нервах) и боль, связанную с ортопедическими нарушениями, такими как состояния стопы, колена, бедра, позвоночника, плеча, локтя, кисти, головы и шеи. В некоторых вариантах настоящее изобретение относится далее к фармацевтической композиции,включающей капсаицин, полученный в соответствии с настоящим изобретением (например, высокоочищенный капсаицин). Предпочтительно, чтобы композиция включала капсаицин, полученный в соответствии с настоящим изобретением, (например, высокоочищенный капсаицин) и носитель, пригодный для введения человеку или животному. Предпочтительно, чтобы капсаицин был включен в носитель. Более предпочтительно, чтобы носитель был пригоден для введения путем инъекции или инфильтрации человеку или животному. В некоторых вариантах капсаицин растворяют в носителе, таком как масла, пропиленгликоль или другие растворители, обычно используемые для получения растворов для инъекций или инфильтраций. Подходящие фармацевтически приемлемые носители предпочтительно включают водные носители, неводные носители, противомикробные агенты, изотонические агенты, буферы, антиоксиданты, суспендирующие и диспергирующие агенты, эмульгирующие агенты, сквестранты или хелатирующие агенты и любые их комбинации или их смеси. Примеры водных носителей предпочтительно включают раствор хлорида натрия для инъекций, бактериостатический раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, изотонические растворы декстрозы для инъекций, стерильную воду для инъекций,бактериостатическую стерильную воду для инъекций, декстрановый лактированный раствор Рингера для инъекций и любые их комбинации или их смеси. Неводные парентеральные носители предпочтительно включают жирные масла растительного происхождения, хлопковое масло, кукурузное масло, кунжутное масло, арахисовое масло и любые их комбинации или их смеси. Дополнительные фармацевтически приемлемые носители также предпочтительно включают этиловый спирт, полиэтиленгликоль, глицерин и пропиленгликоль для смешиваемых с водой носителей и гидроксид натрия, хлористо-водородную кисло-7 008705 ту, лимонную кислоту или молочную кислоту для регулирования величины рН, и любые их комбинации или их смеси. Можно использовать любые из комбинаций вышеуказанных носителей. Предпочтительный носитель для использования в соответствии с настоящим изобретением включает около 20% PEG 300, около 10 мМ гистидина и около 5% сахарозы в воде для инъекций. Альтернативно или дополнительно один или более из следующих агентов можно также включить в композиции настоящего изобретения: Противомикробные агенты для использования в композициях включают бактериостатические или фунгистатические концентрации, предпочтительно фенолов, крезолов, соединений ртути, бензилового спирта, хлорбутанола, эфиров этил- и пропил-п-гидроксибензойных кислот, тимерозаль, бензалконийхлорид, бензетонийхлорид и их смеси. Изотонические агенты для использования в композициях настоящего изобретения предпочтительно включают хлорид натрия, декстрозу и любые их комбинации или их смеси. Буферы для использования в композициях настоящего изобретения предпочтительно включают ацетат, фосфат, цитрат и любые их комбинации или их смеси. Антиоксиданты для использования в композициях настоящего изобретения предпочтительно включают аскорбиновую кислоту, бисульфат натрия и любые их комбинации или их смеси. Суспендирующие и диспергирующие агенты для использования в композициях настоящего изобретения предпочтительно включают натрийкарбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу,поливинилпирролидон и любые их комбинации или их смеси. Эмульгирующие агенты для использования в композициях настоящего изобретения предпочтительно включают полисорбат 80 (Tween 80). Сквестранты или хелатирующие агенты ионов металлов для использования в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно включают этилендиаминтетрауксусную кислоту. Предпочтительно, если единичную дозу капсаицина вводят отдельно от или без локального анестезирующего агента, причем указанную дозу капсаицина можно предпочтительно скомбинировать с фармацевтически приемлемым носителем для инъекций или инфильтраций. В зависимости от выбранного фармацевтически приемлемого носителя, в некоторых вариантах единичную дозу капсаицина можно вводить в виде водного раствора или суспензии для инъекций или инфильтраций. Подробное описание предпочтительных вариантов Приводимые далее примеры иллюстрируют различные аспекты настоящего изобретения. Их не следует рассматривать как ограничивающие формулу изобретения каким-либо образом. Стадия 1: Алкилирование 3-метилбутина бромвалериановой кислотой Первая стадия синтеза транс-капсаицина включает синтез первого промежуточного соединения, например, (8-метил-6-нониновой кислоты) алкилированием 3-метилбутина галогенвалериановой кислотой,например, бромвалериановой кислотой. Первое промежуточное соединение композиции успешно синтезируют в лаборатории способом примеров I(а)-(е) следующим образом: Пример I(а). 8-Метил-6-нониновую кислоту получают, используя две отдельные реакции (реакция 1 и реакция 2), добавляя безводный тетрагидрофуран (15 мл) и гексаметилфосфорамид (3,8 мл) в 50 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную термометром, магнитной мешалкой и клапаном для впуска/выпуска азота. Смесь охлаждают до температуры от около -78 до около -75 С. Затем добавляют метилбутин (1 г),после чего по каплям добавляют 2,5 М n-BuLi (реакция 1 = 1 эквив. и реакция 2 = 2 эквив.) при температуре от около -78 до около -65 С. Смесь в обеих реакциях постепенно нагревают вплоть до около -30 С и перемешивают при указанной температуре в течение около 30 мин. Раствор 5-бромвалериановой кислоты (1,33 г в 3 мл ТГФ) по каплям добавляют при температуре около -30 С в течение от около 10 до около 15 мин. Затем смесь реакции 1 и реакции 2 постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакционные смеси (реакции 1 и 2) затем нагревают. Приблизительно 50 мл 3 М НСl добавляют к обоим растворам реакции 1 и реакции 2. Растворы затем экстрагируют этилацетатом (2 х 100 мл) и промывают насыщенным солевым раствором. В результате экстрагирования получают около 1,1 г неочищенного продукта из реакции 1 и около 0,8 г неочищенного продукта из реакции 2. Неочищенный продукт из реакции 1 очищают хроматографией на колонке, используя около 50 г силикагеля и элюируя смесью 2:1 гексан/этилацетат. Полученные фракции объединяют. Растворители удаляют в вакууме, получая промежуточный продукт стадии 1 (8-метил-6-нониновую кислоту). Промежуточный продукт представляет собой масло светло-желтого цвета. Масса полученного промежуточного соединения около 0,55 г (выход = 46%). Пример I(b). 8-Метил-6-нониновую кислоту получают, помещая гексаметилфосфорамид (30 мл) и безводный тетрагидрофуран (120 мл) в атмосфере азота в 500 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром. Смесь охлаждают до температуры от около -78 до около -70 С. Добавляют 3-метилбутин 7,9 г (11,8 мл) при -75 С, после чего по каплям добавляют 2,5-8 008705 М n-BuLi (46 мл) в течение около 20 мин. Смесь затем нагревают до -30 С, перемешивая при этом в течение около 45 мин. Раствор бромвалериановой кислоты (10,4 г в приблизительно 20 мл безводного ТГФ) по каплям добавляют при температуре от около -30 до около 25 С в течение около 20 мин. Смесь затем постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. По данным ТСХ в реакционной смеси отсутствует исходное вещество. К смеси добавляют 3 М НСl (100 мл) и воду (100 мл). Температуру повышают до около 3 С. Затем смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 200 мл). Экстракты объединяют и промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и растворители удаляют в вакууме при температуре приблизительно 35 С, получая неочищенный конечный продукт со стадии 1, который представляет собой масло светло-оранжево/желтого цвета. Неочищенный конечный продукт очищают хроматографией на колонке с силикагелем (примерно 250 г), элюируя смесью 1:2 этилацетат/гексан. Фракции объединяют, и растворители удаляют в вакууме, получая промежуточное соединение со стадии 2 в виде масла светло-желтого цвета. Масса около 6,7 г (71% выход). Пример I(с). Гексаметилфосфорамид (60 мл) и безводный тетрагидрофуран (240 мл; содержащий 250 частей на млн ингибитора ВНТ), помещают в 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром под клапаном для впуска/выпуска азота. Раствор охлаждают до -70 С. К раствору добавляют 3-метилбутин 15,7 г (23,6 мл). Затем по каплям добавляют 2,5 М n-BuLi (92 мл) при температуре ниже, чем около -50 С в течение 25 мин. Раствор постепенно нагревают до -30 С и перемешивают в течение 50 мин. По каплям добавляют раствор 5-бромвалериановой кислоты (20,8 г) в безводном тетрагидрофуране (40 мл) при температуре от около -30 до около -25 С в течение около 30 мин. Раствор постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. По данным ТСХ реакционной смеси реакция прошла гладко. Реакционную смесь охлаждают до температуры от 5 до 10 С. К раствору добавляют 3 М HCl (100 мл) и воду (150 мл). Полученную реакционную смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 200 мл). Данные ТСХ этилацетатных экстрактов свидетельствуют о том, что двух экстракций этилацетатом достаточно. Оба экстракта этилацетата объединяют, промывают насыщенным солевым раствором (350 мл), сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме, получая около 25,8 г промежуточного продукта. Неочищенный промежуточный продукт очищают хроматографией на колонке, используя около 300 г силикагеля, и элюируя смесью 1:2 этилацетат/гексан. Фракции, содержащие нужный продукт, объединяют. Растворители удаляют в вакууме, получая около 15 г промежуточного соединения (89% выход). Промежуточное соединение получают в виде масла светло-желтого цвета. Пример I(d) Безводный тетрагидрофуран (200 мл) и гексаметилфосфорамид (46 мл) помещают в 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром под клапаном впуска/выпуска N2. Смесь охлаждают до -70 С. Добавляют 3-метилбутин (18,1 мл) и получают прозрачный раствор. По каплям добавляют 2,5 М n-BuLi в гексане (90,7 мл) при -70 С в течение около 25 мин. Раствор постепенно нагревают до -30 С и перемешивают в течение 1 ч при температуре от около -25 до около 40 С. По каплям добавляют 5-бромовалериановую кислоту (16 г в 40 мл безводного ТГФ) при -30 С в течение около 10 мин. Раствор постепенно нагревают до комнатной температуры, и перемешивают в течение ночи в атмосфере N2. Данные ТСХ реакционной смеси свидетельствуют о завершении реакции. Реакционную смесь охлаждают до около 10 С и подкисляют, используя 3 н. HCl (80 мл) до рН около 3. Добавляют воду (200 мл). Раствор экстрагируют этилацетатом (2 х 300 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным солевым раствором (200 мл), сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме при температуре около 35 С, получая масло светло-желтого цвета (масса=18,7 г). Продукт очищают хроматографией на колонке с силикагелем (примерно 350 г), элюируя смесью 1:2 этилацетат/гексан. Фракции, содержащие нужный продукт, объединяют. Растворители удаляют в вакууме, получают масло светло-желтого цвета (масса=14,5 г) после сушки в вакууме в течение ночи. Пример I(е) Тетрагидрофуран (240 мл, ингибированный ВНТ) и гексаметилфосфорамид (60 мл) помещают в 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром в атмосфере азота. Указанную смесь охлаждают до -70 С. Затем добавляют 3-метил-1-бутин (15,6 г),после чего по каплям добавляют n-BuLi (92 мл) при температуре реакционной массы менее чем -50 С. Затем смесь постепенно нагревают до -30 С в течение 1 ч. Добавляют раствор 5-бромвалериановой кислоты (20,7 г) в тетрагидрофуране (40 мл), поддерживая при этом температуру реакционной массы ниже-30 С. Реакционную смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. По данным ТСХ реакционной смеси на этой стадии израсходована вся бромвалериановая кислота,и реакционную смесь подвергают окончательной обработке.-9 008705 Реакционную смесь охлаждают до 5-10 С и затем добавляют 3 М HCl (100 мл) и воду (150 мл) так,чтобы температура реакционной массы не поднялась выше 15 С. Затем раствор экстрагируют этилацетатом (2 х 200 мл), и органический слой сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая неочищенный промежуточный продукт стадии 1. Неочищенный промежуточный продукт очищают флэш-хроматографией на колонке, используя смесь в отношении 10:1 силикагель/субстрат, и элюируя смесью 1:2 этилацетат/гексан. Фракции, содержащие продукт, объединяют и концентрируют с получением промежуточного продукта стадии 1 (8-метил-6-нониновая кислота), который затем сушат в вакууме до постоянной массы. Полученный промежуточный продукт имеет вид масла светло-желтого цвета. Количество полученного промежуточного соединения составляет 15 г (выход=89%). Спектральные данные для промежуточного продукта стадии 1 следующие: 1H ЯМР (СDСl3)2,56-2,48(м, 1H), 2,38 (т, 2 Н), 2,18(дт, 2 Н), 1,75 (ушир.кв, 2 Н), 1,53 (ушир.кв, 2H), 1,13 (д, 6 Н); MS 167 (M1); GC: 100%. Пример I(f). Безводный ТГФ (5 л, ингибированный 250 част на млн. ВНТ) и НМРА (1,3 л) помещают в 22 л 4 горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, термометром, капельной воронкой,и клапаном для впуска/выпуска аргона. Полученную смесь охлаждают до -60 С, и добавляют 3-метил-1 бутин (509 мл). Затем добавляют n-BuLi (2,5 М, 502 мл) при температуре не более чем -60 С. Реакционную смесь постепенно нагревают до температуры не выше -30 С и поддерживают ее в течение около одного часа. Раствор 5-бромвалериановой кислоты (450 г) в безводном ТГФ (900 мл, содержащем 250 частей на млн. ВНТ) добавляют через капельную воронку при температуре не выше чем -30 С. Реакционную смесь постепенно нагревают при комнатной температуре и перемешивают в течение ночи. За ходом реакции следят с помощью ТСХ. Реакционную смесь охлаждают на бане со льдом до температуры 10 С, и гасят водой (10 л) порциями при температуре 30 С. Водный слой подкисляют до рН около 2-3, используя холодную 6 н. HCl,и дважды экстрагируют этилацетатом (10 л, 6 л). Этилацетатные экстракты объединяют и промывают насыщенным солевым раствором (10 л). После сушки над безводным Na2SO4, этилацетатный раствор фильтруют и концентрируют досуха в вакууме при температуре около 45 С, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищают хроматографией с нормальной фазой Biotage, используя смесь этилацетат/гексаны (1:2) в качестве элюента. Фракции, содержащие нужный продукт, объединяют и растворители удаляют в вакууме, получая 237 г (77% выход) продукта в виде масла бледно-желтого цвета. Пример I(g). 8-Метил-6-нониновую кислоту (1,4 г) растворяют в МТВЕ (10 мл). Раствор подщелачивают до рН 10-11 и дважды экстрагируют МТВЕ (2 х 8 мл). Водный слой подкисляют до рН около 2-3, используя холодную 6 н. HCl, и экстрагируют МТВЕ (2 х 8 мл). МТВЕ экстракты объединяют и промывают насыщенным солевым раствором (4 мл). Органический слой сушат над безводным Na2SO4, фильтруют и концентрируют досуха в вакууме, получая продукт. Стадия 2: Восстановление 8-метил-6-нониновой кислоты Вторая стадия синтеза транс-капсаицина включает синтез второго промежуточного соединения (8 метил-6-ноненовой кислоты) путем восстановления 8-метил-6-нониновой кислоты. 8-Метил-6 нониновую кислоту успешно восстанавливают в лаборатории в соответствии со способами примеров II(а)-(g) следующим образом: Пример II(а). 8-Метил-6-нониновую кислоту растворяют в безводном тетрагидрофуране (30 мл) и t-BuOH (0,42 мл) в 250 мл 3-горлой круглодонной колбе, снабженной термометром, магнитной мешалкой и холодильником под клапаном для впуска/выпуска азота. Раствор охлаждают до -40 С. Аммиак конденсируют в колбе при температуре от около -40 до около -50 С. По кусочкам добавляют натрий. Добавление кусочков натрия приводит к окрашиванию раствора в темно-синий цвет. Раствор перемешивают в течение около 30 мин при температуре от около -40 до около -45 С. Добавляют NH4Cl (1,7 г) (приблизительно 32 ммоль), и смесь постепенно нагревают до комнатной температуры. Аммиак выпаривают в течение ночи. По данным ТСХ реакционной смеси выход продукта составляет от около 30 до около 40%. Реакционную смесь подвергают обработке. Добавляют холодную воду (100 мл), и температуру повышают до значений в интервале от около 18 С до около 24 С. Затем раствор подкисляют, используя 6 н.HCl, до рН около 3. Раствор экстрагируют этилацетатом (2 х 80 мл). Этилацетатные слои объединяют,промывают насыщенным солевым раствором, сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме. Получают маслообразный промежуточный продукт светло-желтого цвета. Пример II(b). 8-Метил-6-нониновую кислоту, безводный тетрагидрофуран и t-BuOH помещают в 3-горлую круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой и холодильником, в смеси ацетон-сухой лед и термометром под клапаном для впуска/выпуска азота. Раствор охлаждают до около -50 С. Аммиак конденсируют в реакционной колбе при -40 С. Добавляют поштучно стружки натрия в течение около 10 мин. Раствор нагревают до -33 С и перемешивают в течение около 2 ч. По данным ТСХ реакционной смеси- 10008705 выход продукта составляет от около 30 до около 40%. Добавляют дополнительное количество натрия(примерно 0,3 г). NH3 постепенно выпаривают. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Добавляют NH4Cl (1 г), и раствор перемешивают в течение около 30 мин. Раствор затем гасят, используя воду, и экстрагируют этилацетатом (2 х 60 мл). Этилацетатные экстракты объединяют, промывают насыщенным солевым раствором, сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют, удаляя растворители в вакууме. Получают промежуточный продукт в виде масла светло-желтого цвета. Пример II(с). 8-Метил-6-нониновую кислоту помещают в 500 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, холодильником и термометром под клапаном для впуска/выпуска азота. Раствор охлаждают до около -40 С. В колбу добавляют конденсированный аммиак, смесь перемешивают до получения раствора. По кусочкам добавляют натрий до тех пор, пока сохраняется синий цвет смеси. Добавляют NH4Cl, и полученную смесь перемешивают в течение ночи для испарения NH3. Добавляют воду (100 мл) и этилацетат (60 мл). Затем смесь подкисляют, используя 6 н. HCl, до рН около 3. Органический слой выделяют, и водный слой экстрагируют этилацетатом (60 мл). Этилацетатные слои объединяют, промывают насыщенным солевым раствором и сушат над безводным Na2SO4. Пример II(d). 8-Метил-6-нониновую кислоту (10 г; примерно 10 мл) разбавляют безводным тетрагидрофураном(200 мл, без ингибитора) и безводным t-BuOH (7 мл). Раствор охлаждают до около -50 С. Аммиак (примерно 300-400 мл) конденсируют в смесь. Литий добавляют по кусочкам (3-4 г) в течение 30 мин. По данным ТСХ в реакционной смеси через 30 мин после добавления лития отсутствует исходное вещество. Затем реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере аргона для удаления NН 3 испарением. Затем данные ТСХ свидетельствуют о наличии некоторого количества побочного продукта. Добавляют безводный тетрагидрофуран (примерно 200 мл), после чего добавляют NH4Cl (примерно 30 г). Смесь перемешивают в течение 30 мин. В смесь порциями добавляют смесь воды и льда (примерно 400 мл). Затем смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 300 мл). По данным ТСХ реакционной смеси видно,что двух экстракций достаточно. Первые две экстракции объединяют, промывают насыщенным солевым раствором (200 мл), сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме при температуре около 35 С, в результате чего получают около 8,7 г маслообразного промежуточного продукта желтого цвета. Пример II(е). 8-Метил-6-нониновую кислоту (4 г), безводный тетрагидрофуран (120 мл, без ингибитора) и tBuOH (2,8 мл) помещают в 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную холодильником, термометром и магнитной мешалкой в токе аргона. Смесь охлаждают до температуры от около -55 до около -45 С.NН 3 (примерно 150-200 мл) конденсируют в колбе. По кусочкам добавляют литий (0,1-0,15 г/каждый) при температуре от около -60 до около -45 С, и смесь перемешивают до тех пор, пока не исчезает темносиний цвет, перед добавлением следующего кусочка лития. По данным ТСХ после добавления 0,4 г лития конверсия составляет приблизительно от 40 до около 50%. Затем добавляют дополнительный литий(0,75 г) и за завершением реакции следят с помощью ТСХ. Реакционную смесь перемешивают в течение дополнительного часа (температура от -45 до -42 С). Добавляют NH4Cl (2 г) порциями при температуре приблизительно от -45 до около -42 С. Смесь постепенно нагревают до комнатной температуры в течение ночи. По данным ТСХ реакционной смеси получают чистый продукт. Реакционную смесь охлаждают до около 5 С и гасят, используя смесь лед-вода (200 мл). Температуру повышают до около 25 С. Затем смесь подкисляют 6 н. HCl (примерно 50 мл добавляют порциями при 25 С) до рН от около 2 до около 3. Затем смесь экстрагируют этилацетатом (2 х 300 мл). Этилацетатные слои объединяют, промывают насыщенным солевым раствором (200 мл), сушат над безводнымNа 2SO4 и фильтруют. Сухую смесь концентрируют в вакууме при температуре около 30 С, получая промежуточный продукт в виде масла светло-желтого цвета (масса=3,8 г). Промежуточный продукт очищают флэш-хроматографией на колонке, используя силикагель (примерно от 100 до около 110 г), элюируя смесью 1:3 этилацетат/гексан. Фракции, содержащие нужный продукт, объединяют. Растворители удаляют в вакууме, получая промежуточный продукт светло-желтого цвета (масса=3,7 г). Пример II(f). 8-Метил-6-нониновую кислоту (4 г), безводный тетрагидрофуран (120 мл, без ингибитора) и t-BuOH (2,8 мл) помещают в 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную холодильником, термометром и магнитной мешалкой в токе аргона. Смесь охлаждают до температуры от около -55 до около -45 С. NH3 (примерно 150-200 мл) конденсируют в колбе. Литий (примерно 4-5 г) добавляют при температуре от около -65 до около -50 С в течение около 1 ч и 40 мин. Полученную смесь затем перемешивают при -35 С в течение около 30 мин и контролируют с помощью ТСХ, до момента исчезновения исходного вещества.- 11008705 Раствор гасят, используя NH4Cl (примерно 20 г) порциями до исчезновения синего цвета. Смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Смесь лед-вода (примерно 400 мл) добавляют порциями, и полученную смесь подкисляют, используя 6 н. HCl (примерно 150 мл) до рН от около 2 до около 3. Смесь экстрагируют этилацетатом (2 х 400 мл). Экстракты промывают насыщенным солевым раствором (300 мл), сушат над безводным Na2SO4,фильтруют и концентрируют в вакууме, получая масло светло-желтого цвета (масса=14,2 г). Неочищенный продукт очищают хроматографией на колонке с силикагелем (примерно 300-350 г), элюируя смесью 1:2 этилацетат/гексан. Фракции объединяют, растворители удаляют в вакууме и продукт сушат в вакууме до получения 12,2 г (86% выход) промежуточного продукта. Пример II(g). Тетрагидрофуран (200 мл, без ингибитора), кислоту (14 г) и трет-бутанол (7,7 г) помещают в 1 л 3 горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром в атмосфере аргона. Полученную смесь охлаждают до -50 С, используя баню со смесью сухой лед/ацетон. Аммиак (примерно 200 мл) конденсируют в реакционной смеси. Затем порциями добавляют в колбу литий до тех пор, пока сохраняется синий цвет. Реакционную смесь перемешивают при температуре ниже -35 С и контролируют с помощью ТСХ до тех пор, пока не наблюдается полное превращение исходного вещества. Реакционную смесь гасят, добавляя 20 г аммонийхлорида при -40 С. Данные газовой хроматографии подтверждают, что синтезирован только транс (Е) изомер. После нагревания до комнатной температуры и испарения аммиака в течение 10 ч добавляют смесь лед-вода (400 мл) и затем смесь подкисляют до рН 2-3, используя 6 н. HCl. Затем смесь экстрагируют этилацетатом (2 х 400 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным солевым раствором (300 мл) и сушат над сульфатом натрия (100 г), фильтруют и концентрируют в вакууме, получая второй промежуточный продукт. Второй промежуточный продукт представляет собой масло светложелтого цвета, которое очищают флэш-хроматографией на колонке с силикагелем; получая 12,2 г масла желтого цвета (86% выход), чистую транс 8-метил-6-ноненовую кислоту. Спектральные данные для второго промежуточного продукта следующие: 1MS 169 (M1). Пример II(h). 8-Метил-6-нониновую кислоту (225 г), безводный тетрагидрофуран (2,7 л, без ингибитора) и tBuOH (154 мл) помещают в атмосфере аргона в 22 л 4-горлую круглодонную колбу, снабженную холодильником, термометром и механической мешалкой. Смесь охлаждают до температуры от около -55 до около -45 С. Аммиак (примерно 4 л) конденсируют в колбе. Литий (примерно 30-35 г) добавляют порциями при температуре не выше -33 С, и перемешивают в течение не менее 30 мин, пока сохраняется темно-синий цвет. Порциями добавляют NH4Cl (143 г). Полученную смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и аммиак выпаривают. Порциями добавляют смесь лед-вода (3 л). Полученную смесь подкисляют, используя 6 н. HCl до рН 3, и экстрагируют этилацетатом (2 х 4,5 л). Органические слои объединяют, промывают насыщенным солевым раствором (5 л), сушат над сульфатом натрия, и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме,получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищают хроматографией на колонке Biotage (этилацетат/гексан 1:3), получая 214 г (94%) продукта в виде масла светло-желтого цвета. Результаты газовой хроматографии подтверждают отношение транс/цис (E/Z) от около 94:3 до около 94:5. Стадия 3: Активирование 8-метил-6-ноненовой кислоты Третья стадия синтеза транс-капсаицина включает синтез третьего промежуточного соединения(галогенангидрида) активированием 8-метил-6-ноненовой кислоты. 8-Метил-6-ноненовую кислоту успешно превращают в хлорангидрид в лаборатории в соответствии с примерами III(а)-(с) следующим образом: Пример III(а). 8-Метил-6-ноненовую кислоту помещают в 50 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную холодильником, капельной воронкой, термометром и магнитной мешалкой. 3,9 мл тионилхлорида (SOCl2) по каплям добавляют при комнатной температуре в течение около 25 мин. Затем раствор нагревают, используя водяную баню, при температуре от около 50 до около 60 С в течение около 1 ч. Избыток тионилхлорида удаляют в вакууме при температуре от около 40 до около 45 С, получая около 3 г третьего промежуточного продукта (хлорангидрид; масло светло-коричневато-желтого цвета). Пример III(b). 8-Метил-6-ноненовую кислоту (12 г) помещают в 100 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой, капельной воронкой, холодильником и термометром. Тионилхлорид (15,5 мл) по каплям добавляют при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 30 мин. Затем раствор- 12008705 нагревают в течение около 1 ч, доводя температуру от около 50 до около 65 С или около 74 С, в результате чего получают раствор коричневого цвета. Избыток тионилхлорида удаляют в вакууме при температуре от около 40 до около 42 С, получая около 13,4 г масла коричневого цвета. Промежуточный продукт затем сушат в вакууме при 40 С в течение 1 ч. Пример III(с). 8-Метил-6-ноненовую кислоту (12 г) помещают в 100 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой, капельной воронкой, холодильником и термометром. Затем по каплям добавляют тионилхлорид (25,2 г) в течение 30 мин. Реакционную смесь затем нагревают до 65-74 С в течение 1 ч. Избыток тионилхлорида удаляют в вакууме и получают неочищенный продукт - хлорангидрид. Неочищенный продукт - хлорангидрид затем используют на четвертой стадии синтеза без дальнейшей очистки для получения транс-капсаицина. Пример III(d). 8-Метил-6-ноненовую кислоту (200 г) обрабатывают тионилхлоридом (419 г). Затем реакционную смесь нагревают при температуре около 70 С в течение около 1 ч. Избыток тионилхлорида удаляют в вакууме до получения 249 г неочищенного продукта. Неочищенный хлорангидрид затем используют на четвертой стадии синтеза без дальнейшей очистки. Стадия 4: Сочетание бензиламинового производного с галогеноангидридом Четвертая стадия синтеза транс-капсаицина включает синтез конечного продукта - транскапсаицина в результате сочетания бензиламинового производного с галогеноангидридом. Бензиламиновое производное успешно сочетают с галогеноангидридом в лаборатории способом примеров III(a)-(c) следующим образом: Пример IV(а).HCl соль 4-гидрокси-3-метоксибензиламина (3,35 г) и диметилформамид (10 мл) помещают в 100 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную капельной воронкой, термометром и магнитной мешалкой в атмосфере азота. Порциями при комнатной температуре добавляют 5 н. NaOH (7 мл). Смесь перемешивают при 35 С в течение 30 мин. Затем смесь охлаждают до температуры от около 0 до около 5 С. По каплям добавляют хлорангидрид (полученный на стадии 3) в безводном эфире (30 мл) при температуре от около 0 до около 5 С или 10 С в течение около 20 мин. Добавляют дополнительные 5 мл безводного диметилформамида. Смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в атмосфере азота в течение ночи. Добавляют воду (150 мл). Смесь экстрагируют этилацетатом (1 х 100 мл и 1 х 50 мл). Этилацетатный экстракт промывают 1 н. HCl (2 х 60 мл), после чего насыщенным NaHCO3 (2 х 100 мл) и солевым раствором. Экстракт затем сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме при температуре от около 35 до около 40 С, получая густой остаток светлого оранжево-розового цвета (масса=3,4 г). Неочищенный продукт очищают хроматографией на колонке, используя от около 150 до около 160 г силикагеля, и элюируя смесью 1:1 этилацетат/гексан. Фракции, полученные после очистки на колонке, объединяют, концентрируют в вакууме при температуре около 40 С и сушат в вакууме до получения 3,1 г нужного продукта в виде твердого вещества белого цвета. Пример IV(b). Гидрохлорид 4-гидрокси-3-метоксибензиламина (13,4 г) и диметилформамид (40 мл) помещают в атмосфере азота в 500 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром. Смесь охлаждают до около 10 С. Порциями добавляют 5 н. NaOH (28 мл),используя баню со смесью лед-вода. Раствор перемешивают при температуре около 20 С в течение 30 мин, затем охлаждают до 5 С. По каплям добавляют хлорангидрид в безводном эфире (120 мл) при 5 С в течение около 1 ч (температуру повышают до около 7 С). Раствор постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Добавляют воду (400 мл), и полученную смесь затем экстрагируют этилацетатом (1 х 400 мл и 2 х 200 мл). По данным ТСХ экстрактов оказывается, что двух экстракций достаточно. Этилацетатные экстракты промывают 1 н. HCl (2 х 200 мл и 1 х 100 мл). Органические слои затем промывают NaHCO3 (2 х 200 мл и 200 мл), насыщенным солевым раствором, сушат над безводным Na2SO4 и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме,и остаток выпаривают совместно с эфиром (х 2) до получения около 21 г неочищенного продукта в виде липкого светло-коричневого остатка. Остаток сушат в течение ночи в вакууме (масса=20,2 г). Продукт очищают хроматографией на колонке, используя около 600 г силикагеля и элюируя: i) смесью 2:3 этилацетат/гексан (2 л); ii) смесью 1:1 этилацетат/гексан (3 л) и iii) смесью 3:2 этилацетат/гексан (3 л) с получения неочищенного соединения. Фракции объединяют, и растворители удаляют в вакууме при температуре около 40 С. Продукт выпаривают совместно с эфиром (х 2) и сушат в вакууме в течение ночи, получая нужный продукт в виде твердого вещества белого цвета. (масса=14,1 г, 65% выход). По данным ВЭЖХ чистота продукта 96%. Совпадающие фракции также объединяют и растворители удаляют в вакууме, получая 2,4 г менее чистого продукта. Сложноэфирный побочный продукт (1,4 г) также выделяют и характеризуют.- 13008705 В дополнительных вариантах воплощения настоящего изобретения очистку неочищенного продукта после добавления NaHCO3 путем обработки 2 н. NaOH проверяют в масштабе пробирки. Обнаружено,что соль растворима в этилацетате. Кроме того, было обнаружено, что предпочтительно регулировать температуру реакции (примерно 5-10 С) во время добавления хлорангидрида к реакционной смеси. Пример IV (с) Гидрохлорид 4-гидрокси-3-метоксибензиламина (13,4 г) и диметилформамид (40 мл) помещают в 500 мл 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром, в атмосфере азота. Раствор затем охлаждают до 10 С и по каплям добавляют 28 мл 5 н. гидроксида натрия таким образом, чтобы температура реакционной массы поддерживалась ниже 20 С. Раствор перемешивают в течение 30 мин при 20 С и затем охлаждают до 5 С. После охлаждения добавляют раствор хлорангидрида (13,3 г) в эфире (120 мл) в течение 1 ч, поддерживая при этом температуру реакционной массы 3-7 С. Затем реакционную смесь перемешивают в течение более 12 ч при 20 С. Реакционную смесь промывают водой (400 мл) и этилацетатом (2 х 200 мл). Объединенные органические фракции промывают 1 н. HCl (2 х 200 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 х 200 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл) и затем сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют в вакууме, получая твердое вещество розового цвета, которое очищают флэш-хроматографией на колонке, используя силикагель и смесь этилацетат/гексан (2:3 до 3:2). Чистые фракции объединяют и взвешивают, получая 14,1 г, что соответствует выходу 65% (ВЭЖХ=96% площади, % чистоты). В некоторых других вариантах предпочтительно избегать применения флэш-хроматографии на этой четвертой стадии, так как неочищенный продукт подвергают непосредственно кристаллизации, что обеспечивает получение продукта с хорошей степенью чистоты и выходом. Транс-капсаицин, полученный раскрытыми выше способами, перекристаллизовывают, используя смесь эфир/гексан (1:2, 150 мл) при температуре 40-45 С. Смесь охлаждают до комнатной температуры в течение 2 ч. Полученный белый осадок фильтруют и сушат до постоянной массы (масса=12,7 г (выход=91%. Спектральные данные для продукта - транс-капсаицина следующие: 1H ЯМР (CDCl3)6,866,75 (м, 3 Н), 5,82 (ушир.с, 2 Н), 5,35-5,32 (м, 2 Н), 4,34-4,32 (д, 2 Н), 3,86 (с, 3H), 2,22-2,17 (м, 3H), 2,00-1,95(м, 2 Н), 1,75-1,65 (м, 2 Н), 1,45-1,35 (м, 2 Н), 0,95 (д, 6 Н); MS=306 (М+1). Элементный анализ: Вычислено для C18H27NO3: С, 70,79; Н, 8,91; N, 4,59; Найдено: С, 70,94, Н,8,94; N, 4,75. Степень чистоты по данным ВЭЖХ (площадь, %) синтезированного транс-капсаицина составляет 98%. Пример IV(d) Гидрохлорид 4-гидрокси-3-метоксибензиламина (245 г) и диметилформамид (700 мл) помещают в 12 л 4-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром, в атмосфере аргона. Суспензию затем охлаждают до 10 С и по каплям добавляют 5 н. гидроксид натрия (494 мл) при температуре ниже 20 С. Раствор охлаждают до около 10 С и перемешивают в течение 30 мин, затем охлаждают до около 5 С. По каплям добавляют раствор хлорангидрида (249 г) в эфире(1,7 л) при температуре около 5 С. Реакционную смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разделяют между HCl (5 л) и этилацетатом (5 л). Водный слой выделяют и экстрагируют этилацетатом (5 л). Органические слои объединяют, промывают 1 н. HCl (5 л), насыщенным раствором бикарбоната натрия (3 х 5 л) и солевым раствором (5 л), затем сушат над сульфатом натрия и фильтруют. Растворитель удаляют в вакууме с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищают, используя две перекристаллизации из смеси эфир/гексан (1:2), получая 237 г (66% выход) нужного продукта. Данные ВЭЖХ подтверждают отношение транс/цис (E/Z) около 98:0,9. Очистка капсаицина перекристаллизацией Пример V(а). Неочищенный капсаицин (1 г; ВЭЖХ 91%) растворяют в смеси 1:2 эфир/гексан (15 мл). Смесь нагревают до температуры от около 40 до около 42 С, чтобы растворить твердую фазу. Смесь постепенно охлаждают до комнатной температуры при перемешивании. Получают не совсем белые частицы. Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение около 2 ч. Твердую фазу отфильтровывают, получая твердое вещество не совсем белого цвета (масса=0,74 г). Пример V(b). Капсаицин (14 г) растворяют в смеси 1:2 эфир/гексан (150 мл) при температуре от около 40 до около 45 С. Раствор постепенно охлаждают до комнатной температуры. Образуется осадок белого цвета. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение около 2 ч. Суспензию фильтруют,промывают смесью 1:2 эфир/гексан и сушат в вакууме при комнатной температуре в течение около 2 ч,получая твердое вещество белого цвета (масса=12,7 г; 91% выделено). Пример V(с). Смесь эфир/гексан (1:2, 2,5 л) добавляют к неочищенному капсаицину (337 г). Полученную смесь охлаждают до около 10 С и перемешивают в течение около 2 ч. Твердую фазу отфильтровывают, промывают смесью эфир/гексан (1:2) и снова перекристаллизовывают из смеси эфир/гексан (1:2) аналогич- 14008705 ным образом до получения 237 г нужного капсаицина со степенью чистоты по данным ВЭЖХ 98% и E/Z отношением 98:0,9. Полупрепаративная очистка капсаицина Пример VI(а) В примере VI(а) 10 г капсаицина очищают ВЭЖХ. Изократические условия: метанол/вода (57:43) при объемном расходе 10 мл/мин. Используют колонку Waters Symmetry Prep C18 (300 х 19 мм, 7 мк),SerialT22981A 04. А. Материалы, используемые для ВЭЖХ следующие: 1. Аппаратура Система ВЭЖХ Gilson с УФ детектором В. Экспериментальная процедура для ВЭЖХ следующая: 1. Приготовление образца Образец капсаицина (500 мг 95,4% чистоты) растворяют в 1 мл метанола ВЭЖХ степени чистоты. Концентрация образца, полученного для очистки, составляет приблизительно 500 мг/мл. 2. Условия ВЭЖХ для очистки Для очистки используют колонку Symmetry Prep C18, 300 х 19 мм-7 мк, со следующим: 3. Условия ВЭЖХ для анализа Используют колонку Synergi Hydro RP, 80A, 250 х 4,6 мм, и 4 мк для проверок степени чистоты со следующим: Объемный расход: 1 мл/мин Длительность цикла: 50 мин Вводимый объем: 10 мкл Длина волны: 281 нм С. Результаты Показано, что способ полупрепаративной очистки успешен. Конечная степень чистоты капсаицина составила 99,86%. Было выделено приблизительно 7,29 г капсаицина. Так как 1 г неочищенного мате- 15008705 риала был использован для исследования осуществимости способа, реальное количество обработанного неочищенного исходного материала составило приблизительно 9 г. Полный выход составил примерно 81%. Пример VI(b). В примере VI(b) для дальнейшей очистки капсаицина используют метод полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой. А. Материалы, используемые в методе ВЭЖХ, следующие: 1. Система ВЭЖХ и растворители а. Система ВЭЖХ Hitachi с УФ детектором.c. Растворители для ВЭЖХ (EM Science)MeOH: ВЭЖХ степени чистоты, Lot 42213232 Н 2O: ВЭЖХ степени чистоты, LOT 42347 В. Экспериментальная процедура для метода ВЭЖХ следующая: 1. ВЭЖХ метод, разработанный для очистки: Экстенсивные аналитические методы ВЭЖХ были разработаны для дальнейшей очистки. Общие условия ВЭЖХ оценки суммированы следующим образом: Объемный расход: 1,0 мл/мин Детектор: УФ=281 нм Температура: комнатная температура Концентрация образца: 2 мг/мл в ACN/H2O (1:1) Используемые колонки ВЭЖХ и подвижные фазы приведены в следующей таблице: Из всех разработанных способов предпочтителен способ с использованием колонки Symmetry C18(примесь) составляет 60,1 мин, тогда как капсаицин элюируется через 69,1 мин. Так как доступна только полупрепаративная ВЭЖХ колонка длиной 30 см, подвижную фазу в этом способе слегка модифицировали, чтобы скомпенсировать изменения. 2. Очистка капсаицина, содержащего 1,7% примесей полупрепаративной ВЭЖХ а. Приготовление образца Образец неочищенного капсаицина, содержащего 1,7% примесей, растворяют в примерно 20 мл МеОН ВЭЖХ степени чистоты.b. Условия ВЭЖХ Колонка: Symmetry C18 (300 х 19 мм, 7 мк) Подвижная фаза: А=Н 2O; В=МеОН Элюирование: Изократическое 5758% МеОН Температура: при комнатной температуре Объемный расход: 9,5 мл/мин Вводимый объем: 400-450 мкл Детектор: 281 нм (УФ) С. Результаты При оценке хроматограмм неочищенного капсаицина было обнаружено, что основной примесью является нордигидрокапсаицин, хотя наблюдались также следовые количества примесей, элюируемые позднее. Так как и нордигидрокапсаицин и капсаицин элюируются не ранее, чем через 60 мин, был осуществлен ввод с перекрыванием, чтобы снизить время цикла очистки до 45 мин, и при этом снизить расход растворителя. В процессе очистки фракции собирают и анализируют аналитической ВЭЖХ, чтобы подтвердить степень чистоты выше 99,0%. Все очищенные фракции объединяют и сушат, используя роторный испаритель при температуре 55-60 С. Продемонстрировано, что указанный способ очистки успешен. 9,85 г капсаицина обработали до конечной степени чистоты более чем 99,9%. Полный выход после очистки составил 80%. Пример VII. Сравнительный пример Вначале был предложен четырехстадийный способ синтеза транс-капсаицина, который включает: а) образование дианиона; b) алкилирование дианиона; с) восстановление дианиона и d) сочетание с бензиламиновым производным с получением транс-капсаицина. Четырехстадийный способ имеет следующий вид:- 17008705 В первом тесте, алкилирование 6-гептиновой кислоты предприняли, используя вначале 2 иодопропан в качестве алкилирующего реагента и LDA, NaH и LiNH2 в качестве оснований для получения алкенового аниона. Удалось выделить только исходную 6-гептиновую кислоту. Полученные результаты предполагают, что удаление HI из изопропилиодида (Е 2) было единственным процессом, вместо нужного нуклеофильного замещения для получения нужного изопропилалкина. Алкилирование 6-гептиновой кислоты исследовали далее, используя 2-бромпропан и изопропилмезилат в качестве алкилирующего реагента, и NaH и n-BuLi/AlCl3 в качестве оснований. В этих условиях не происходит образование нужного продукта. В дальнейших тестах алкилирования тестируют образование дианиона. В частности, 6-гептиновую кислоту (2 г) обрабатывают LDA (3 эквив.) в условиях, аналогичных тем, которые использовали ранее в реакциях изопропилгалогенида. Затем реакционную смесь обрабатывают бензилбромидом. Подтверждают образование продукта. В еще одном варианте было исследовано введение ортоэфирной защиты карбоксильной группы 6 гептиновой кислоты с последующим алкилированием алкиновой функции. Алкилирование бензилбромидом тестируют как модельную реакцию, используя 300 мг ортоэфира 6-гептиновой кислоты, используя n-BuLi и этилмагнийхлорид в качестве основания, соответственно. Использование в качестве основания n-BuLi приводит к получению смеси продукт/исходное соединение в отношении 7:2. Использование этилмагнийхлорида приводит к получению небольшого количества продукта с отношением продукт/исходное вещество 1:2. В другом тесте исследуют алкилирование Гриньяра, опосредствованное самарием, алкилированием ортоэфира изопропилиодидом в масштабе 300 мг, используя самарийиодид-самарий (SmI2) и этилмагнийбромид, соответственно. Ни в одной из реакций не наблюдается образования продукта. В другом тесте, транс-8-метил-6-ноненовую кислоту синтезируют, используя реакцию Виттига с последующей изомеризацией. Неочищенный капсаицин (1,4 г густого масла, примерно 84% транс- и 12% цис-изомера) очищают кристаллизацией из смеси эфир/гексан (1:3), получая 0,4 г не совсем белого твердого вещества. По данным ВЭЖХ степень чистоты составляет 91,5% при отношении транс/цис 91,5/6,7. Цис-изомер по-видимому менее кристалличен, и смесь (0,3 г) получают из липкого остатка. В другом тесте исследуют алкилирование ортоэфира 6-гептиновой кислоты изопропилбромидом в условиях Гриньяра, но образования нужного продукта не происходит. В приведенном выше описании изобретение было раскрыто со ссылкой на конкретные примеры вариантов и на их примеры. Однако, должно быть очевидно, что возможно осуществить различные модификации и изменения, не выходя за рамки сути и объема изобретения, представленных в приводимой далее формуле изобретения. Описание и рисунки, соответственно, следует рассматривать лишь как иллюстративные и ни коим образом не ограничивающие. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения транс-капсаицина, включающий:c) активирование указанной 8-метил-6-ноненовой кислоты с получением галогенангидрида или активированных производных кислоты; иi) смешивания безводного тетрагидрофурана с гексаметилфосфорамидом и охлаждения указанной смеси до температуры от около -78 до около -60 С;ii) добавления к указанной смеси со стадии i) 3-метилбутина с последующим добавлением по каплям основания при температуре от около -78 до около -65 С с получением второй смеси;iii) нагревания указанной второй смеси вплоть до около -30 С при перемешивании иiv) добавления по каплям галогенвалериановой кислоты в безводном тетрагидрофуране при температуре около -30 С, причем указанную галогенвалериановую кислоту добавляют в таком количестве,которого достаточно для превращения указанного 3-метилбутина в указанную 8-метил-6-нониновую кислоту, затем постепенного нагревания до комнатной температуры и перемешивания до получения реакционной смеси. 4. Способ по п.2, включающий далее:i) добавление хлористо-водородной кислоты к указанной реакционной смеси и экстрагирование указанной реакционной смеси этилацетатом; иii) промывку указанной экстрагированной реакционной смеси насыщенным солевым раствором с получением неочищенного продукта. 5. Способ по п.3, включающий далее:i) очистку указанного неочищенного продукта иii) удаление растворителей в вакууме с получением промежуточного продукта со стадии а). 6. Способ по п.5, где указанный неочищенный продукт очищают хроматографией на колонке. 7. Способ по п.5, где указанный неочищенный продукт очищают экстрагированием кислотойоснованием. 8. Способ по п.5, где указанный неочищенный продукт очищают вакуумной перегонкой. 9. Способ по п.5, где указанный промежуточный продукт со стадии а) является 8-метил-6 нониновой кислотой. 10. Способ по п.3, где указанную галогенвалериановую кислоту выбирают из группы, состоящей из бромвалериановой кислоты, хлорвалериановой кислоты, фторвалериановой кислоты, иодовалериановой кислоты и астатвалериановой кислоты, 1-мезилоксивалериановой кислоты, 1-тозилоксивалериановой кислоты. 11. Способ по п.10, где указанная галогенвалериановая кислота является бромвалериановой кислотой. 12. Способ по п.3, где гексаметилфосфорамид на стадии i) заменяют 1,2-диметил-3,4,5,6 тетрагидро-(1 Н)пиримидиноном. 13. Способ по п.4, где указанное основание выбирают из группы, состоящей из n-BuLi, sec-BuLi, tBuLi, литийди(изопропил)амида, гидрида натрия, амида натрия, амида лития, метиллития, метилмагнийбромида, этилмагнийбромида, алкил- или арилмагнийгалогенида или их смесей. 14. Способ по п.13, где указанное основание является н-бутиллитием. 15. Способ по п.1, где стадия b) включает стадии:i) растворения указанной 8-метил-6-нониновой кислоты в смеси безводного тетрагидрофурана и трет-бутилового спирта с получением раствора и охлаждения указанного раствора до температуры от около -55 до около -40 С;ii) конденсирования аммиака в указанном растворе до температуры от около -50 до около -33 С;iii) добавления натрия по кусочкам и перемешивания при температуре от около -45 до около -30 С и перемешивания в течение достаточного промежутка времени, чтобы растворить указанный натрий, иiv) добавления аммонийхлорида, нагревания до комнатной температуры и предоставления аммиаку возможности испариться с получением реакционной смеси. 16. Способ по п.15, где дополнительный литий добавляют после стадии iii). 17. Способ по п.15, где стадия iii) включает добавление лития при температуре от около -65 до около -45 С и перемешивание в течение промежутка времени, которого достаточно для того, чтобы растворился указанный литий. 18. Способ по п.15, включающий далее:ii) подкисление указанной реакционной смеси хлористо-водородной кислотой до рН от около 2 до около 3;iii) экстрагирование указанной реакционной смеси этилацетатом, промывку насыщенным солевым раствором и сушку над безводным сульфатом натрия иiv) фильтрование и удаление растворителей в вакууме с получением промежуточного продукта со стадии b). 19. Способ по п.18, где указанный промежуточный продукт со стадии b) является транс-8 метилноненовой кислотой. 20. Способ по п.17, где стадию ii) опускают. 21. Способ по п.15, где указанный аммоний на стадии ii) заменяют низшими алкиламинами. 22. Способ по п.15, где указанный литий на стадии iii) заменяют натрием. 23. Способ по п.15, где указанный трет-бутиловый спирт на стадии i) заменяют вторичным бутиловым спиртом (sec-BuOH), этиловым спиртом (EtOH) или другими алкиловыми спиртами. 24. Способ по п.15, где указанный литий, указанный тетрагидрофуран и указанный жидкий аммиак заменяют литием и жидким аммиаком или натрием и жидким аммиаком. 25. Способ по п.17, включающий далее стадии:i) перемешивания указанной реакционной смеси в течение ночи для испарения указанного аммиака;ii) добавления дополнительного безводного тетрагидрофурана и аммонийхлорида, перемешивания указанной смеси в течение промежутка времени, достаточного для нейтрализации избытка лития;iii) добавления порциями смеси лед-вода;iv) экстрагирования указанной смеси этилацетатом, промывания насыщенным солевым раствором и сушки над безводным сульфатом натрия иv) фильтрования и удаления растворителей в вакууме с полученим продукта - промежуточного соединения стадии b).i) охлаждения реакционной смеси и гашения смесью лед-вода;ii) подкисления указанной смеси хлористо-водородной кислотой, которую добавляют порциями до рН от около 2 до около 3;iii) экстрагирования указанной смеси этилацетатом, промывания насыщенным солевым раствором и сушки над безводным сульфатом натрия;iv) фильтрования и концентрирования в вакууме при температуре около 30 С с получением неочищенного продукта. 27. Способ по п.26, включающий далее стадию очистки указанного продукта флэш-хроматографией с получением промежуточного продукта стадии b). 28. Способ по п.26, включающий далее стадию очистки указанного неочищенного продукта вакуумной перегонкой. 29. Способ по п.1, где стадия с) включает стадии:i) добавления по каплям тионилгалогенида к указанной 8-метил-6-ноненовой кислоте при комнатной температуре с получением раствора;ii) нагревания указанного раствора при температуре от около 50 до около 75 С в течение промежутка времени, достаточного для превращения указанной 8-метил-6-ноненовой кислоты в указанный галогенангидрид; иiii) удаления избытка тионилгалогенида в вакууме с получением промежуточного продукта стадии с). 30. Способ по п.29, где указанный тионилгалогенид является тионилбромидом. 31. Способ по п.29, где указанный тионилгалогенид является тионилхлоридом. 32. Способ по п.29, где промежуточный продукт указанной стадии с) является галогенангидридом. 33. Способ по п.32, где указанный галогенангидрид является бромангидридом. 34. Способ по п.32, где указанный галогенангидрид является хлорангидридом. 35. Способ по п.32, где указанный галогенангидрид является активированной карбоновой кислотой. 36. Способ по п.35, где указанная активированная карбоновая кислота является имидазолидом. 37. Способ по п.35, где указанная активированная карбоновая кислота является карбодиимидом. 38. Способ по п.1, где стадия d) включает стадии:ii) добавления порциями при комнатной температуре к указанной смеси со стадии i) водного раствора гидроксида натрия и перемешивания с получением реакционной смеси;iii) добавления галогенангидрида в безводном эфире при температуре от около 0 до около 10 С в течение промежутка времени, достаточного для превращения указанного галогенангидрида в амид; и после этогоiv) постепенного нагревания указанной смеси до комнатной температуры и перемешивания. 39. Способ по п.38, включающий далее стадии:i) добавления к указанной смеси воды и экстрагирования указанной смеси этилацетатом с получением этилацетатного экстракта;ii) промывания указанного экстракта хлористо-водородной кислотой и после этого промывания бикарбонатом натрия;iii) промывания указанного раствора насыщенным солевым раствором и сушки над безводным сульфатом натрия;iv) фильтрования и удаления растворителей в вакууме с получением неочищенного продукта транс-капсаицина. 40. Способ по п.39, включающий далее стадии:i) очистки указанного неочищенного продукта хроматографией на колонке с получением продукта транс-капсаицина. 41. Способ по п.38, где указанный водный раствор гидроксида натрия на стадии ii) заменяют гидроксидом калия, гидроксидом лития, карбонатом натрия, карбонатом калия или алкиламином. 42. Способ по п.38, где указанный гидрохлорид 4-гидрокси-3-метоксибензиламина на стадии i) заменяют 4-гидрокси-3-метоксибензиламином. 43. Способ по п.41, где указанный алкиламин выбирают из группы, состоящей из триэтиламина, основания Хунига, 4-диметиламинопиридина и пиридина. 44. Способ по п.38, где указанный диметилформамид на стадии i) заменяют тетрагидрофураном, 2 диметоксиэтаном, ацетонитрилом, дихлорметаном, хлороформом или метилэтилкетоном. 45. Способ очистки продукта - транс-капсаицина по п.35, включающий стадии:i) растворения указанного неочищенного продукта - транс-капсаицина в смеси эфир/гексан и нагревания указанной смеси до температуры от около 40 до около 45 С;ii) охлаждения указанной смеси до комнатной температуры или ниже комнатной температуры иiii) фильтрования указанной смеси с получением очищенного продукта - транс-капсаицина.- 20008705 46. Способ по п.45, где стадия iii) включает фильтрование указанной смеси и промывание указанной смеси смесью эфир/гексан и сушку в вакууме с получением очищенного продукта - транскапсаицина. 47. Способ по п.1, включающий далее очистку указанного транс-капсаицина полупрепаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ). 48. Способ по п.39, включающий далее очистку указанного неочищенного продукта - транскапсаицина полупрепаративной ВЭЖХ. 49. Способ по п.40, включающий далее очистку указанного продукта - транс-капсаицина полупрепаративной ВЭЖХ. 50. Способ по п.47, где очистка полупрепаративной ВЭЖХ обеспечивает получение высокоочищенного транс-капсаицина со степенью чистоты капсаицина около 97% или более. 51. Способ по п.47, где очистка полупрепаративной ВЭЖХ обеспечивает получение высокоочищенного транс-капсаицина со степенью чистоты капсаицина около 98% или более. 52. Способ по п.41, где очистка полупрепаративной ВЭЖХ обеспечивает получение высокоочищенного транс-капсаицина со степенью чистоты капсаицина около 99% или более. 53. Продукт - транс-капсаицин, полученный способом по п.47. 54. Композиция капсаицина для ослабления боли в участке организма нуждающегося в этом человека или животного, состоящая практически из чистого транс-капсаицина. 55. Композиция по п.54, где указанный транс-капсаицин используют для лечения ноцицептивной боли, невропатической боли, боли, связанной с поражением нервов, невралгической боли, боли, связанной с миалгией, боли, связанной с болевыми точками, боли, вызываемой опухолями в мягких тканях,боли, связанной с синдромами разрегулирования нейротрансмиттеров, и боли, связанной с ортопедическими нарушениями. 56. Композиция по п.54, где указанный транс-капсаицин используют для лечения ортопедических нарушений, выбранных из группы, состоящей из нарушений стопы, колена, бедра, позвоночника, плеча,локтя, кисти, головы и шеи. 57. Композиция по п.54, представленная в виде состава для инъекций и содержащая указанный чистый транс-капсаицин. 58. Транс-капсаицин, включающий около 97% или более транс-капсаицина. 59. Транс-капсаицин, включающий около 98% или более транс-капсаицина. 60. Транс-капсаицин, включающий около 99% или более транс-капсаицина. 61. Фармацевтическая композиция, содержащая высокоочищенное соединение транс-капсаицина,включающее около 97% или более транс-капсаицина, около 98% или более транс-капсаицина, или около 99% или более транс-капсаицина, и носитель, пригодный для инфильтрации или инъекции. 62. Фармацевтическая композиция по п.61, где указанный носитель включает около 20% полиэтиленгликоля 300 (PEG 300), около 10 мМ гистидина и около 5% сахарозы и воду для инъекций.