Очистка сырых масел, содержащих pufa

006503 Настоящая заявка относится к масляным смесям, содержащим по меньшей мере две полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA), и к способам их получения комбинированием первого масла, содержащего PUFA, со вторым маслом, содержащим PUFA (обычно содержащим PUFA, отличную от PUFA в первом масле). В частности, изобретение относится к получению разделяемых и неразделяемых смесей очищенных масел смешиванием сырого масла, содержащего 6-PUFA (например, ARA), с сырым маслом, содержащим 3-PUFA (например, DHA или ЕРА) с образованием смеси сырых масел, а затем обработкой (например, очисткой) полученной смеси масел. Получение неразделяемой смеси масел, содержащих PUFA, известно. Например, в WO-A-92/12711(Martek Corporation) предложено получение неразделяемой смеси микробных (полученных из микроорганизмов) масел и применение такой неразделяемой смеси в композиции для младенцев. Указанные авторами микробные масла содержат ЕРА, DHA или ARA, хотя упоминаются также рыбные и растительные масла. В данном документе речь идет о получении неразделяемой смеси микробных масел для имитации содержания PUFA в грудном женском молоке. В частности, эта заявка защищает неразделяемые смеси DHA и ARA в соотношениях 1-5:2-12, таком как соотношение приблизительно 1:3. В примерах WO-A-92/12711 способы ферментации дают выход трех различных масел микробного происхождения, ARASCO, DHASCO и EPASCO, и все они представлены в сырых формах (см. примеры 1-3). Затем из них получают неразделяемые смеси, и предполагается, что их можно добавлять в композицию для младенцев. Однако в действительности композицию для младенцев (или другой пищевой продукт) не получают, и было обнаружено, что данные сырые масла не пригодны для включения в композицию для младенцев. Например, сырые масла могут содержать различные соединения (фосфолипиды,пигменты, микроэлементы-металлы, свободные жирные кислоты, моно- и диглицериды, стерины, серу,продукты окисления, такие как альдегиды и эпоксиды, и различные другие вещества, нерастворимые в воде или масле), которые нежелательны, особенно в неразделяемой смеси масел, которую предстоит включить в пищу (для младенцев). При добавлении любого вещества в пищевой продукт необходимо соблюдать предосторожность для исключения примесей и других соединений, которые могут оказывать побочные эффекты. Это особенно актуально для веществ, которые предстоит ввести в композицию для младенцев, потому что новорожденные и младенцы особенно восприимчивы к примесям или другим нежелательным веществам. Поэтому целью настоящего изобретения является, по меньшей мере, уменьшение этих недостатков, а по возможности, их предотвращение или устранение. Настоящее изобретение в его самом широком диапазоне касается применения одной или несколько методик очистки для превращения сырого масла в очищенное масло, причем очищенное масло пригодно для включения в композицию для младенцев или в другой пищевой продукт. Очистка может удалять примеси или другие нежелательные вещества, и в результате масло может подходить для приема в пищу людьми. Очистка может происходить после объединения сырых масел, и поэтому ее необходимо проводить лишь однократно. Поэтому первый аспект настоящего изобретения относится к способу получения смеси масел, причем способ включает(a) объединение сырого масла, содержащего 6-PUFA (например, ARA), с сырым маслом, содержащим 3-PUFA (например, DHA или ЕРА), с образованием смеси сырых масел; и(b) очистку смеси сырых масел с получением очищенной смеси, содержащей 6- и 3-PUFA. Таким образом, в соответствии с изобретением очистка проводится после того, как сырые масла были объединены, т.е. иными словами, очищается смесь сырых масел. Это значит, что может потребоваться один этап очистки. Затем может быть необходима небольшая дальнейшая обработка. Это также значит, что нет необходимости в наличии двух масел, которые могут находиться в немного различных"степенях окисления" (например, если уровни окисления двух масел слегка различны), и можно избежать необходимости в двух различных процедурах очистки, поскольку каждая процедура может отличаться от той, которая была подобрана для определенного масла, подвергаемого очистке. Способ может дополнительно включать (например, во время очистки) удаление одного или более из следующих компонентов: фосфолипида, микроэлемента-металла, пигмента, углевода, белка, свободной жирной кислоты (СЖК), вещества, нерастворимого в масле, вещества, нерастворимого в воде, мыльного или омыленного вещества, продукта окисления, серы, моно- или диглицерида, продукта разложения пигмента, растворителя и/или стерина. Очистка может уменьшить или удалить неприятный вкус и запах и/или повысить устойчивость масла. Осуществление данного способа (например, очистки) может включать обесклеивание - т.е. удаление клейких компонентов (или обработку кислотой), нейтрализацию (или обработку щелочью), промывание водой, отбеливание, фильтрование, дезодорацию, осветление и/или охлаждение (или удаление твердых компонентов жиров вымораживанием). Предпочтительно очистка включает обработку кислотой и/или обработку щелочью (обесклеивание и нейтрализацию). Альтернативно, способы очистки могут включать отбеливание и/или дезодорацию. Однако предпочтительно очистка включает отбеливание и/или дезодорацию и, оптимально, дополнительно обработку кислотой и щелочью. Объединение на эта-1 006503 пе (а) может, таким образом, происходить после того, как выполнен один или несколько из этих этапов(очистки), другими словами, некоторые из этих этапов могут быть выполнены перед объединением на этапе (а), а некоторые могут быть выполнены на (объединенной) смеси масел при очистке на этапе (b). В данной ситуации предпочтительно, чтобы объединение на этапе (а) происходило перед дезодорацией. Такие этапы как обесклеивание, обработка щелочью, отбеливание и/или охлаждение могут выполняться или на отдельных маслах перед объединением, или на смеси масел. Таким образом, термин "сырое" масло может относиться к недезодорированному маслу, в то время как очищенное масло может представлять собой дезодорированное масло. Таким образом, изобретение может включать объединение масла,содержащего 6-PUFA, с маслом, содержащим 6-PUFA, для образования смеси масел, а затем очистку(например, дезодорацию) смеси масел. Данные дополнительные способы предпочтительно выполняются во время очистки на этапе (b), но один или несколько из них могут выполняться или на масле, содержащем 6-PUFA, и/или на масле, содержащем 3-PUFA, перед тем как масла объединяются на этапе (а). Второй аспект относится к очищенной смеси масел, включающей (6-PUFA и 3-PUFA, которая преимущественно пригодна для употребления людьми (например, младенцами). Это может быть неразделяемая смесь очищенных масел, которую можно получить способом первого аспекта. Третий аспект относится к съедобному составу, включающему смесь очищенных масел второго аспекта. Данный состав может представлять собой пищевой продукт, предпочтительно адаптированный для употребления людьми, и, необязательно, композицию для младенцев, пищевую добавку или фармацевтическую композицию. Четвертый аспект относится к способу получения съедобного состава по третьему аспекту, причем способ включает введение масла по второму аспекту в состав. Масло может добавляться или дополнительно вводиться в существующий состав или масло может добавляться или примешиваться к одному или нескольким (съедобным) ингредиенту(ингредиентам) и/или компоненту(компонентам) состава во время изготовления. Способы очистки Обработка растворителем Эта обработка может снизить содержание и/или удалить смолы и/или белки. Предпочтительны полярные растворители, например ацетон. Это особенно подходит для 3-масел, например масел, содержащих DHA. Обесклеивание (или обработка кислотой) Эта обработка может удалить ряд веществ, таких как фосфолипиды, микроэлементы-металлы, пигменты, углеводороды и/или белки, или снизить их содержание. Это особенно желательно для удаления некоторого количества или всех (гидратируемых и/или не гидратируемых) фосфолипидов. Они могут представлять собой окрашенные соединения и как таковые являются нежелательными, особенно в (белой) композиции для младенцев. Они могут вызвать осложнения на более позднем этапе обработки щелочью (если он используется) ввиду их эмульгирующих свойств. Кроме того, они могут вызвать нежелательное потемнение, если используется этап дезодорации. Фосфолипиды могут осаждаться на сосудах для хранения, и если это происходит, их удаление может представлять трудности. Способ предпочтительно включает добавление воды и фосфорной и/или лимонной кислоты (например, Н 3 РО 4) к маслу с последующим смешиванием, если необходимо. Если используется лимонная кислота, то это предпочтительно 50% водный раствор. Для фосфорной кислоты может использоваться 85% водный раствор. После этого масло может нагреваться, например, для разрушения любой образовавшейся эмульсии. Затем могут быть удалены "смолы" или другие нежелательные вещества, например,центрифугированием. Обесклеивание может начинаться с нагревания. При необходимости может использоваться нагревание, например, при температуре от 50 до 80 С, такой как от 55 до 75 С, оптимально от 60 до 70 С. Затем может быть добавлена кислота. Для фосфорной кислоты это может быть от 0,1 до 2,0 г, например от 0,5 до 1,5 г, предпочтительно от 0,8 до 1,2 г фосфорной кислоты на 1 кг масла. Данные цифры основаны из расчета на 85% раствор фосфорной кислоты, и, таким образом, количество кислоты может варьировать для различных концентраций кислоты (например, от 50 до 95%, от 70 до 90%, от 80 до 88% фосфорной кислоты), и такие (пропорциональные) эквиваленты также предполагаются в данном случае. При некоторых способах может также добавляться вода, хотя обычно это можно опустить. При использовании количество добавляемой воды может составлять от 25 до 125%, например, от 50 до 100%,оптимально от 70 до 80 маc.% фосфолипидов, присутствие которых предполагается в масле. В отношении к маслу количество воды может составлять от 0,1 до 15%, например от 0,5 до 10%, оптимально от 1 до 5% (или по массе, или по объему). Если используется вода, то предпочтительно (фосфорная) кислота добавляется к маслу перед водой. Данная обработка может занимать от 5 мин до 1 ч, например от 10 до 30 мин, предпочтительно от 15 до 20 мин. Температура может быть от 50 до 110 С, предпочтительно от 80 до 100 С, оптимально от 70 до 90 С.-2 006503 Если должна также иметь место нейтрализация или отбеливание, любой из этих этапов может комбинироваться с обесклеиванием. Содержание фосфолипидов в масле перед обесклеиванием может быть от 2 до 3,5 маc.%. Обработка щелочью (известная также как рафинирование) Она также может именоваться нейтрализацией, поскольку она включает щелочь, которая может нейтрализовать любую кислоту, присутствующую в масле. Данная кислота может присутствовать в результате обработки кислотой, такой как обсужденное выше обесклеивание. Обработка щелочью предназначена для удаления или снижения содержания свободных жирных кислот (СЖК), фосфолипидов, пигментов, микроэлементов-металлов, веществ, нерастворимых в масле веществ и/или веществ, нерастворимых в воде. Предпочтительно на данной стадии удаляются некоторые или все свободные жирные кислоты. Они могут вызвать проблемы в пищевых продуктах ввиду их характеристик вспенивания. Кроме того, они могут быть токсичными. Обработка щелочью предпочтительно превращает свободные жирные кислоты (СЖК), в мыла или гидролизует триглицериды (омыление). Это происходит в результате реакции ионов щелочных металлов особенно натрия со СЖК. Предпочтительно концентрация СЖК снижена ниже 0,2%, предпочтительно ниже 0,1%, оптимально менее чем до 0,05 мас.%. Данная стадия может представлять собой периодический или непрерывный процесс. Предпочтительно перед добавлением щелочи содержание СЖК оценивают посредством известных методик, в частности, кислотного числа. (Например, содержание СЖК можно проверить титрованием). Может использоваться избыток щелочи, например, если масло уже было подвергнуто обработке кислотой, такой как обесклеивание. При необходимости может (сначала) применяться нагревание, например, до температуры от 50 до 90 С, например от 55 до 85 С, оптимально от 60 до 80 С. Затем может быть выполнено титрование для определения того, сколько кислоты присутствует, и, следовательно, сколько щелочи может потребоваться. Затем щелочь может быть смешана с маслом. Подходящие щелочи представляют собой гидроксиды щелочных, щелочно-земельных металлов или аммония. Гидроксиды щелочных металлов предпочтительны, поскольку они могут минимизировать помехи на этапе дезодорации, если он позднее используется; предпочтительным является гидроксид натрия. Щелочь может добавляться в концентрации от 10 до 15%,например от 12 до 13%. Количество добавляемой щелочи может быть достаточно для нейтрализации масла. Полученные в результате мыла или омыленные вещества могут затем удаляться или отделяться центрифугированием, например, с использованием самоочищающихся центрифуг. Последние могут быть загерметизированы или закрыты во избежание контакта с воздухом. Определенные или любые (остающееся) мыла могут быть удалены промыванием, например, с использованием воды, например, при температуре от 80 до 120 С, предпочтительно от 90 до 100 С. Затем может применяться второе центрифугирование. Если дополнительно используется стадия промывания водой, за ней при целесообразности может следовать стадия сушки. Альтернативный способ удаления СЖК, или в дополнение, или вместо обработки щелочью, представляет собой применение дистилляции или дезодорации (иногда называемой физическим рафинированием в данной области), причем последняя из указанных методик обсуждается позднее. Перед тем, как его подвергают данной стадии (или любой обработке, удаляющей СЖК), сырое масло может иметь концентрацию СЖК от 0,2 до 0,6%, например от 0,3 до 0,5%. Антиоксиданты Могут использоваться любые подходящие антиоксиданты. Примеры включают токоферол (например, от 400 до 1200, предпочтительно от 600 до 1000, оптимально от 600 до 800 млн-1) и/или аскорбилпальмитат (например, от 50 до 150, предпочтительно от 70 до 130, оптимально от 80 до 120 мг/кг масла). Отбеливание На данной стадии предполагается удалить или снизить содержание пигментов, продуктов окисления, микроэлементов-металлов, серы и любых мыл или омыленных продуктов (например, образующихся в результате обработки щелочью). В частности, данная стадия удаляет не только окрашенные соединения, но и пигменты, такие как каротины (например, -каротин), хлорофиллы, соединения, вызывающие потемнение, соединения, которые придают вкус и запах, гидропероксиды и/или любые нежелательные металлы. Если применяется сушка перед отбеливанием, она может происходить при температуре от 50 до 100 С, предпочтительно от 60 до 90 С, оптимально от 70 до 80 С. Сушка может проводиться в вакууме. Отбеливание предпочтительно включает адсорбцию одной или нескольких из этих примесей. Можно использовать любое очищающее средство или адсорбент (данные термины используются взаимозаменяемо). Таковые могут включать тонко раздробленное и/или активированное вещество, например тонко раздробленную естественную и/или активированную глину, углерод и/или отбельную глину (например,продукт на основе отбельной глины или бентонита). Масло смешивают с выбранным адсорбентом. Используемое количество адсорбента будет зависеть от цвета масла и от количества примесей, которое, как-3 006503 считают, находится в масле. Однако в качестве ориентировочных указаний можно использовать адсорбент в отношении к маслу в количестве от 0,25 до 5 мас.%, предпочтительно от 0,5 до 3 мас.%, оптимально от 0,75 до 1,5 мас.%. Затем смесь масла и адсорбента может распыляться, например, в вакууме. Это может удалить воздух. Затем масло можно нагреть, например, при температуре от 80 до 130 С, предпочтительно от 90 до 120 С или оптимально от 100 до 110 С. Время контакта между маслом и адсорбентом может составлять от 5 до 40 мин, предпочтительно от 10 до 30 мин, оптимально от 5 до 25 мин. Затем масло может быть охлаждено и/или профильтровано. Отбеливание может включать обеспечение контакта масла с удаляющей мыло добавкой, например,обработанным кремнеземным продуктом, таким как Trisyl, особенно если была выполнена обработка щелочью. Тем самым могут быть удалены металлы и/или смолы. Она (добавка) может добавляться в количестве от 0,1 до 5 кг, например от 0,5 до 3,0 кг на 1 кг масла. Данная стадия может применяться в виде периодического или непрерывного процесса. Отбеливание и/или фильтрование могут проводиться без присутствия воздуха, например, в вакууме или с использованием (слоя) инертного газа, такого как N2. Охлаждение (или удаление твердых компонентов жиров путем вымораживания) Эта операция может удалить насыщенные триглицериды (т.е. триглицериды из насыщенных жирных кислот). Это полезно, потому что насыщенные триглицериды могут увеличить точку мутности. Данная стадия включает охлаждение масла, предпочтительно так, чтобы образовались кристаллы(включающие соединения или примесь, которые предстоит удалить). Таким образом, предпочтительно будут получены кристаллы, содержащие насыщенные триглицериды. Масло может храниться в резервуаре, и если условия позволяют, это может быть внешний резервуар. Хранение может происходить в более прохладных условиях, например, во время зимы. Альтернативно масло может охлаждаться, например, с использованием теплообменников. Предпочтительно образуются относительно большие кристаллы. Действительно, преимущественным является образование больших кристаллов или кристаллов, которые имеют более высокую плотность, чем масло. Таким образом, кристаллы предпочтительно выпадают или мигрируют на дно емкости с маслом, например, с образованием осадка. Предпочтительно масло охлаждают медленно. Конечная (или полученная в результате охлаждения) температура составляет предпочтительно от 0 до 10 С, например от 3 до 7 С, оптимально от 5 до 6 С. Во время охлаждения масло может перемешиваться, но предпочтительно лишь в условиях легкого перемешивания. Преимущественно следует избегать высоких скоростей сдвига. Время, затраченное на охлаждение масла до данной температуры, может составлять от 12 до 36 ч, например от 18 до 30 ч, оптимально от 21 до 27 ч. Затем масло может быть отфильтровано. Фильтрование проводится так, чтобы любой осадок (или кристаллы) можно было удалить. Это может быть связано с использованием стандартного оборудования,такого как пластина и рамочный фильтр-пресс. Альтернативные способы удаления осадка или кристаллов включают центрифугирование или вакуумное фильтрование. Дезодорация Данная процедура может удалить или снизить содержание жирных кислот и свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, продуктов окисления, продуктов разложения пигментов, растворителей и/или стеринов. В частности, она может удалить нежелательные соединения, придающие вкус и запах,например, альдегиды и кетоны. Она может также удалить углеводороды, например, образовавшиеся в результате распада гидропероксидов. Другие соединения, которые могут быть удалены, включают стерины и токоферолы. Предпочтительно дезодорация включает дистилляцию, например, с паром. Она предпочтительно проводится в вакууме или, по меньшей мере, при пониженном давлении (например, от 1 до 8102 Па),таком как от 2 до 4102 Па). Температура масла может быть от 100 до 300 С, например от 150 до 250 С,оптимально 180 до 220 С. Данная стадия может выполняться в виде периодического, полунепрерывного или непрерывного способа. Предпочтительно уровни СЖК в масле снижаются до уровня ниже 0,06%, предпочтительно ниже 0,04%, оптимально ниже 0,03% (например, с использованием показателей ПЧ (перекисного числа) и АЧ. (анизидинового числа). Осветление Данная процедура может удалить некоторое количество или все нерастворимые в масле вещества(их последние следовые количества). Она может включать осветление масла, например, с использованием цилиндрического ("свечка") или (патронного) фильтра. Предпочтительный способ Таким образом, способ (очистки) по изобретению предпочтительно включает(a) объединение (сырого) масла, содержащего 6-PUFA, с (сырым) маслом, содержащим 3-PUFA,с получением смеси (сырых) масел. Данный этап может выполняться в этот момент (или сначала), или-4 006503 позднее, после того как был выполнен один или нескольких этапов с (с) до (i). Однако объединение должно происходить до этапа (j);(b) очистку, которая может выполняться или на отдельных маслах, содержащих 6- и 3-PUFA,или на смеси масел (полученной в результате объединения). Таким образом, очистка может включать(c) необязательно, обработку кислотой или обесклеивание или удаление фосфолипидов, микроэлементов-металлов, пигментов, углеводородов и/или белков;(d) необязательно, обработку щелочью или удаление свободных жирных кислот, фосфолипидов,пигментов, микроэлементов-металлов, нерастворимых в воде веществ и/или нерастворимых в масле веществ;(f) необязательно, добавление одного или нескольких антиоксидантов;(g) необязательно, отбеливание или удаление пигментов, продуктов окисления, микроэлементовметаллов, серы и/или мыла;(i) охлаждение, или вымораживание, или удаление насыщенных триглицеридов. Если масла, содержащие 6-PUFA и 3-PUFA, еще не были объединены, то их объединяют (как на этапе (а с образованием смеси масел на данной стадии. До данного момента масла все еще могут рассматриваться как сырые;(j) дезодорацию или удаление свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, продуктов окисления, продуктов разложения пигментов, растворителей и/или стеринов;(k) необязательно, осветление или удаление нерастворимых в масле веществ. При некоторых способах очистки этапы (с), (d) и (g) не являются необязательными. Другими словами, хотя в описанном выше способе может выполняться только этап дезодорации (j), в некоторые варианты реализации могут быть включены этапы (с), (d) и (g). Альтернативно или дополнительно, этап (i) не является необязательным и/или предпочтительно один или оба этапа (f) и (k) не являются необязательными. Описанные выше этапы (c)-(i) применимы к любой последовательности операций очистки. Например, они могут проводиться на смеси сырых масел. Однако один или несколько из описанных выше этапов (c)-(i) могут выполняться на сыром масле, содержащем 6-PUFA и/или на сыром масле, содержащем 3-PUFA, затем масла могут объединяться, и этапы (j) и/или (k) выполняют на смеси масел. После очистки (и, таким образом, в очищенном масле) содержание (нежелательных или тяжелых) металлов предпочтительно значительно снижается. Количество мышьяка (As) предпочтительно составляет ниже 0,2 млн-1 предпочтительно ниже 0,1 млн-1, оптимально ниже 0,05 млн-1. Количество свинца(Рb) предпочтительно составляет ниже 0,06 млн-1, предпочтительно ниже 0,04 млн-1, оптимально ниже 0,02 млн-1, предпочтительные количества ртути (Нg) и кадмия (Cd) такие же, как количества, определенные для свинца. Полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA) и маслаPUFA может представлять собой или единственную PUFA, или две или более различных PUFA. Все или каждая из PUFA могут быть из семейства n-3 или n-6. Предпочтительно она представляет собой С 18-,С 20- или C22-PUFA по меньшей мере с 18 атомами углерода и 3 двойными связями. PUFA могут быть предоставлены в виде свободной жирной кислоты, соли, в качестве сложного эфира жирной кислоты(например, сложного метилового или этилового эфира), в качестве фосфолипида и/или в виде моно-, диили триглицерида. Подходящие (n-3 и n-6) PUFA включают докозагексаеновую кислоту (DHA, 22:6 3), в подходящем случае из водорослей или грибков, таких как (Dinoflagellate) Crypthecodinium или (грибок) Thraustochytrium;- линоленовую кислоту (GLA, 18:3 6);-линоленовую кислоту (ALA, 18:3 3); сопряженную линолевую кислоту (октадекадиеновую кислоту, CLA); дигомолиноленовую кислоту (DGLA, 20:3 6); арахидоновую кислоту (ARA, 20:4 6) и эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА, 20:5 3). Предпочтительные PUFA включают арахидоновую кислоту (ARA), докозагексаеновую кислотуPUFA могут быть из естественного (например, растительного или морского) источника или могут быть получены из одноклеточного или микробного источника. Таким образом, PUFA могут быть микробного, водорослевого или растительного происхождения (или из источника). В частности, PUFA могут продуцироваться бактерией, грибком или дрожжами. Предпочтительны грибки предпочтительно отрядаMucorales, например Mortierella, Phycomyces, Blakeslea, Aspergillus, Traustochytrium, Pythium или Entomophthora. Предпочтительным источником ARA является источник из Mortierella alpina, Blakesleatrispora, Aspergillus terreus или Pythiumi insidiosum. Водоросли могут представлять собой Dinoflagellate и/или включать Porphyridium, Nitszchia или Crypthecodinium (например, Crypthecodinium cohnii). Дрожжи включают дрожжи рода Pichia или Saccharomyces, такие как Pichia ciferii. Бактерии могут быть из родаPropionibacterium. Масло, содержащее 3-PUFA (например, DHA) может представлять собой морское, например рыбье (такое как тунцовое) масло. Масло, содержащее 6- и/или 3-PUFA (например, ARA, DHA или ЕРА), может представлять собой масло, полученное из микробов или одиночных клеток. Предпочтительно как 6-, так и 3-PUFA (например, GLA, ARA и ЕРА) могут быть получены из грибов, таких как Mortierella, Pythium или Entomophthora, PUFA 3 (например, GLA, ARA и ЕРА) могут быть получены из водорослей, таких как Porphyridium или Nitszchia. Предпочтительно масло 6- или 3- (например, содержащее ARA, DHA или ЕРА) представляет собой микробное масло, продуцируемое микроорганизмом. Это могут быть бактерии, дрожжи, водоросли или грибы. Предпочтительно PUFA имеет по меньшей мере четыре (4) двойных связи. Получение масла PUFA В способе по изобретению микроорганизм сначала может подвергаться ферментации, например, в сосуде-ферментере, содержащем среду для культивирования. Условия ферментации могут быть оптимизированы для получения высокого содержания PUFA в полученной в результате биомассе (а позднее в масле). Если это желательно, и, например, после окончания ферментации, микроорганизмы могут быть убиты или подвергнуты пастеризации. Это может производиться для инактивации любых нежелательных ферментов, например, ферментов, которые могут вызвать разложение или снизить выход PUFA. Затем биомасса может быть удалена из ферментера и, при необходимости, из него может быть удалена жидкость (обычно вода). Может применяться любая подходящая методика разделения твердых и жидких веществ. Этот процесс (удаление воды) может представлять собой механический способ, такой как центрифугирование и/или фильтрование. Подходящие центрифуги можно приобрести у компанийWestfalia или Tetra Laval. Центрифугирование может продолжаться от 2 до 8, например от 3 до 7,оптимально от 4 до 6 мин. Время пребывания составляет от 0,1 до 3, например от 0,3 до 2, оптимально от 0,5 до 1,0 мин. Центрифуга может работать при режиме от 2000 до 8000 g, например от 3000 до 7000 g,оптимально от 4000 до 6000 g. После разрыва и разделения способ по изобретению может дополнительно включать экстрагирование, очистку или выделение одной или нескольких PUFA. Затем клетки могут промываться, например, с использованием водного раствора (такого как вода),например, для удаления любых внеклеточных растворимых в воде соединений. Предпочтительно сырое масло, содержащее PUFA (например, ARA), включает от 10 или 15 до 25 или 30% PUFA. Очищенное масло (например, ARA) предпочтительно включает от 30 или 35 до 45 или 50% PUFA. Получение сырых масел Все или каждое сырое масло может представлять собой микробное (например, полученное из одиночной клетки) сырое масло, или оно может представлять собой морское (например, рыбье) масло или растительное масло (или сырое, или частично обработанное). Следовательно, масла, содержащие 3- и 6-PUFA, предпочтительно получены (или происходят) из источника в виде микроба или одиночной клетки. В частности, сырые масла, содержащие 3-PUFA (DHA и/или ЕРА), могут представлять собой масла из морепродуктов. Если масло PUFA должно содержать GLA, то сырое масло может представлять собой растительное масло, например масло черной смородины, огуречника аптечного, подсолнечника,сои культурной или примулы. В ряде документов описывается получение сырых масел, содержащих PUFA. Микробные масла,содержащие ARA, раскрыты в WO-А-92/13086 (Martek), ЕРА - в WO-A-91/14427 (Martek), и DHA - вWO-A-91/11918 (Martek). Заявитель настоящего изобретения уже описал различные способы экстрагирования масел, содержащих PUFA, из микробных источников, и их можно найти в WO-A-97/36996 и WOА-97/37032 (оба принадлежат компании Gist-brocades). Получение масел, содержащих ARA, DHA и ЕРА,также описано в WO-A-92/12711 (Martek). Предпочтительно, чтобы большинство PUFA в масле были в виде триглицеридов. Так предпочтительно по меньшей мере 50%, например по меньшей мере 60% или оптимально по меньшей мере 70%PUFA находится в форме триглицеридов. Однако количество триглицеридов может быть выше, например, составлять по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% или 98% масла. Из этих триглицеридов предпочтительно по меньшей мере 40%,например по меньшей мере 50%, а оптимально по меньшей мере 60% PUFA присутствуют в положенииглицерина (в главной цепи триглицерида) , известном также как положение 1 или 3. Может быть предпочтительно, чтобы по меньшей мере 20%, например по меньшей мере 30%, оптимально по меньшей мере 40% PUFA было в положении(2). Приемлемо, чтобы очищенное масло отвердевало при температуре от 4 до 6 С. В очищенном масле содержание триглицеридов составляет предпочтительно по меньшей мере 90%, например по меньшей-6 006503 мере 93%, а оптимально по меньшей мере 95%. Содержание моноглицеридов и/или диглицеридов составляет предпочтительно менее чем 7%, например менее чем 5%, оптимально менее чем 3%. Количество моноглицеридов может быть менее чем 0,5%, например менее чем 0,1%, оптимально менее чем 0,1%. Содержание стерина в очищенном масле составляет предпочтительно менее чем 5%, например менее чем 3%, оптимально менее чем 2%. В очищенном масле содержание (желательной) PUFA составляет предпочтительно по меньшей мере 30%, например по меньшей мере 35%, оптимально по меньшей мере 40% или 45%. Количество свободных жирных кислот составляет предпочтительно не более чем 0,5%. Смеси и неразделяемые смеси В данном описании термин "смесь" включает комбинацию масел (например, при которой масла после объединения могут быть обратно разделены на являющиеся их исходными компонентами масла) и неразделяемые смеси (в которых после объединения масла являются неразделимыми). Пример первых представляет собой такую систему, когда одно (или даже оба) из масел являются (например, микро-) инкапсулированными таким образом, что хотя масла смешаны, их можно разделить на первоначальные составляющие масла, которые они представляли собой перед смешиванием. Однако предпочтительны неразделяемые смеси, в которых масла однородно перемешаны и разделение на первоначальные составляющие масла невозможно. Смеси могут состоять из множества (по меньшей мере двух) масел, хотя предпочтительны смеси 2, 3 или 4 масел. Предпочтительно масла представляют собой только масла из микробов или одиночных клеток, другими словами, масла из других источников (например, морских и/или растительных) могут быть исключены и, таким образом, не присутствовать. Соотношение 6- : 3-PUFA в смеси очищенных масел составляет предпочтительно от 1:5 до 5:1,оптимально от 1:1 до 1:2. Предпочтительно количество 6-PUFA (особенно, если она представляет собой ЕРА) составляет по меньшей мере 1/5 количества 6-PUFA (особенно, если она представляет собойARA) в смеси очищенных масел. Действительно, предпочтительно, чтобы 3-PUFA составляла по меньшей мере 25%, например по меньшей мере 30%, оптимально 35% содержания 6-PUFA. Предпочтительные признаки или характеристики одного аспекта применимы и к другому с соответствующими изменениями. Теперь изобретение будет описано путем иллюстрации со ссылкой на следующие примеры, которые не следует рассматривать как ограничивающие, но которые являются просто иллюстрациями настоящего изобретения. Пример 1. Сырое масло, содержащее ARA, получают с использованием способа примера 16 заявки WO-A97/36996 (Gist-brocades) с использованием гексана в качестве растворителя для экстракции. СодержаниеARA составляет 35%. Сырое масло, содержащее DHA (27% DHA), получают из морского источника(масло тунца) от Pronova Biocare., P.O.Box 2109, N-3202 Sandefjord, Norway (EPAX 0525TG). Затем масла, содержащие ARA и DHA, смешивают вместе для образования неразделяемой смеси. В стерильный резервуар из нержавеющей стали сначала загружают 10 кг сырой ARA. В резервуар добавляют 30 кг сырого масла, содержащего DHA, при перемешивании в течение 15 мин (исключая воздух). Это дает смесь сырых масел с соотношением масел ARA:DHA (мас.) 1:3 (соотношение ARA:DHA 1:2,31). Затем смесь сырых масел очищают в соответствии со следующей последовательностью операций. Очистка Данная процедура состоит из четырех главных этапов с добавлением промежуточных этапов, если и когда это необходимо. Четыре главных этапа следующие: обработка кислотой (обесклеивание); обработка щелочью (нейтрализация);(если необходимо, промывание водой и сушка, например, для удаления мыла или остатков мыла); отбеливание;(если необходимо, охлаждение или удаление твердых компонентов жиров вымораживанием). 1. Обесклеивание (обработка кислотой). Данная процедура выполняется в первую очередь для удаления фосфолипидов. Масло нагревают до 70 С. Фосфорную кислоту растворяют в воде до концентрации 85%. Этот раствор добавляют в масло (около 3 маc.% фосфолипидов в масле) из расчета 1,5 г раствора фосфорной кислоты на 1 кг масла. Масло выдерживают при температуре 80 С в течение 15 мин. Смесь масла и фосфорной кислоты первоначально образует эмульсию, которую деэмульгируют при дальнейшем нагревании. Затем смолы удаляют центрифугированием. 2. Очистка щелочью (нейтрализация). Проводят титрование для определения количества кислоты,присутствующей в масле, а, следовательно, для расчета количества щелочи, требуемого для нейтрализа-7 006503 ции. В масло добавляют щелочь (гидроксид натрия, 15%) и тщательно смешивают. Полученное мыло(омыленные вещества) затем отделяют при помощи самоочищающихся центрифуг (герметично закрытых во избежание контакта с воздухом). Затем любые следовые количества мыла отмывают, используя горячую воду (94 С), с последующим центрифугированием. 3. Отбеливание. Сначала масло сушат при 70 С в вакууме. Затем в масло добавляют адсорбент (Trisyl, Grace Davison, 1 об.% масла) и вмешивают. Масло нагревают до 105 С и смесь масла с адсорбентом распыляют в перемешиваемый резервуар для отбеливания с целью удаления воздуха. Адсорбенту дают возможность находиться в контакте с маслом в течение приблизительно 20 мин, после чего маслу дают возможность охладиться и фильтруют. 4. Удаление твердых компонентов жиров вымораживанием (охлаждение). Масло (теперь приблизительно при 35 С) медленно охлаждают до 4 С в условиях легкого перемешивания. Эта процедура занимает около 24 ч. Масло выдерживают при 4 С в течение еще 24 ч. Затем масло фильтруют с использованием пластины и рамочного фильтра-пресса при давлении 200 кг/м 2 (от 2104 до 5104 Па). 5. Дезодорация. Масло дистиллируют паром в вакууме при температуре 180 С и низком давлении(от 200 до 400 Па). Сравнение данных анализа сырой ARA перед очисткой и очищенного перемешанного до получения неразделимой смеси масла, содержащего ARA и DHA, представлено в табл. 1. Таблица 1 Пример 2. Сырое масло, содержащее ARA, получают в соответствии со способом сравнительного примера 1,как описано в WO-A-97/43362 (Gist-brocades). Оно содержит приблизительно 30% ARA. Сырое масло DHA получают с использованием последовательности операций, описанной в примере 21 заявки WO-A-97/36996 (Gist-brocades). Оно содержит 60% триглицерида, 12% диглицеридов и 3,7% стеринов. Концентрация DHA составляет 32,6%. Затем каждое из сырых масел обрабатывают с использованием той же последовательности операций, что и в примере 1, со следующими изменениями:(i) при обработке кислотой время контакта с фосфорной кислотой составляет 20 мин, а температура масла составляет 70 С для масла, содержащего ARA, а для масла, содержащего DHA, взамен используют лимонную кислоту (50%, 20 мин, 75 С);(ii) при обработке щелочью концентрация гидроксида натрия составляет 13%, и обработку горячей водой (промывание водой) пропускают;(iii) при отбеливании используют 1,5% адсорбента Tonsil (Sd-Chemie, Munich, Germany) и его проводят при 100 С в течение 15 мин. 10 кг каждого из двух полученных сырых масел подвергают смешению в резервуаре емкостью 30 л при перемешивании с образованием неразделимой смеси ARA:DHA 1:1 (по объему) (соотношениеARA:DHA 1:1,09). Неразделимую смесь двух масел затем подвергают дезодорации при температуре 200 С, а затем осветляют с использованием патронного фильтра. Пример 3 (сравнительный). Очищенное микробное масло, содержащее ARA (38% ARA), происходящее из Mortierella alpina, (5 кг) получают от DSM N.V., Food Specialties Division, P.O. Box 1/2600 MA Delft, the Netherlands под торговой маркой OPTIMAR. Данное масло было очищено с использованием последовательности операций примера 1. Очищенное масло, содержащее DHA, (10 кг), приобретенное у компании Pronova, Norway,содержащее 27% DHA (ЕРАХ 0525TG), затем смешивают до получения неразделимой смеси с очи-8 006503 щенным маслом, содержащим ARA. Данные два масла смешивают друг с другом в баке из нержавеющей стали, оборудованном мешалкой (соотношение ARA:DHA 1:1,54). Пример 4. Сырое масло, содержащее ARA, использованное в примере 1, очищают с использованием последовательности операций примера 1 со следующими изменениями:(ii) щелочь представляет собой KОН (10%);(iii) промывание водой проводят при 85 С, но небольшим объемом воды, поэтому последующее промывание не требуется;(iv) отбеливание проводят при 90 С в течение 30 мин и(v) охлаждение проводят до 5 С и выдерживают при 5 С в течение 2 сут. В табл. 2 представлены анализы масла до и после очистки. Таблица 2 Затем сырое масло, содержащее DHA, из примера 2 также отдельно и независимо подвергают такой же последовательности операций как сырое масло, содержащее ARA. Полученное в результате масло,содержащее ARA (10 кг), затем смешивают до образования неразделимой смеси с полученным в результате маслом, содержащим DHA (33% DHA, 15 кг), в баке из нержавеющей стали, оборудованном мешалкой. Неразделимая смесь масел имеет соотношение ARA:DHA 1:1,16, и ее затем подвергают дезодорации при 220 С. Обзор различных последовательностей операций очистки показан в табл. 3. В примере 3 используют такую же очистку как в примере 1, за исключением использования сырых масел, содержащих ARA (38%) и DHA (25%) (соотношение ARA:DHA 1:2,6). Пример 5. Последовательность операций примера 1 повторяют, за исключением того, что сырое масло, содержащее ЕРА (полученное использованием примера WO-A-91/14427 для получения экстрагированного масла из одиночных клеток, Martek), используют вместо сырого масла, содержащего DHA. Затем масло,содержащее ARA (35% ARA, 10 кг) смешивают до получения неразделимой смеси с маслом, содержащим ЕРА (37% ЕРА, 5 кг), в баке из нержавеющей стали, оборудованном мешалкой. Полученная в результате очищенная и неразделимая смесь масел имеет соотношение ARA:EPA 1:0,53. Примеры 6-8. Неразделимую смесь масел примера 1 (0,5 кг) смешивают с частицами лактозы (10 кг) в миксереLdige путем добавления неразделимой смеси масел со скоростью 10 кг/мин. Полученный в результате порошок хранят в атмосфере азота. Затем порошкообразную смесь добавляют в порошкообразную композицию для младенцев (20 кг SMA Gold, United Kingdom). Аналогичную процедуру проводят с использованием очищенной неразделимой смеси ARA/DHA примера 4 и очищенной неразделимой смесиARA/EPA примера 5. Пример 9. Партию в 200 кг порошкообразной композиции для младенцев, содержащей 2 кг неразделимой смеси DHA/ARA в виде однородной жидкости, получают в соответствии со следующей последовательностью операций. В композицию для младенцев добавляют неразделимую смесь масел и нагревают до температуры 50 С. Неразделимую смесь распыляют со скоростью 0,5 кг/ч на композицию для младенцев,проходящую через псевдоожиженный слой со скоростью 50 кг/ч. Температуру устанавливают так, чтобы потеря воды в результате сушки составила от 1 до 2%. Пример 10. Партию в 1000 кг композиции для младенцев дополняют неразделимой смесью масел в соответствии с примером 2 следующим образом. Сначала получают премикс, содержащий 27 кг неразделимой масляной смеси ARA/DHA. Данный премикс также содержит витамины и минералы и лактозу и имеет общую массу 200 кг. Затем премикс добавляют в 800 кг композиции для младенцев, высушенной распылением, а затем смешивают в миксере Chronicle Nauta 50 RK. Данную порошкообразную быстрорастворимую композицию превращают в молоко для употребления новорожденными добавлением стерильной воды (13 г порошкообразной композиции для младенцев на 90 мл воды).- 10006503 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения смеси масел, включающий(a) объединение сырого масла, содержащего ARA, с сырым маслом, содержащим 3-PUFA, с получением смеси сырых масел и(b) очистку смеси сырых масел с получением очищенной смеси, содержащей ARA и 3-PUFA. 2. Способ по п.1, в котором(i) очистка включает удаление фосфолипидов, микроэлементов-металлов, пигментов, мыла, углеводов, белков, серы, стеринов, моно- или диглицеридов, насыщенных триглицеридов и/или свободных жирных кислот;(ii) смесь масел представляет собой неразделимую смесь масел;(iv) на этапе (а) производится объединение только двух или трех масел, все из которых представляют собой масла, полученные из одиночных клеток или микробов. 3. Способ по пп.1-2, в котором очистка включает обработку кислотой, обработку щелочью, нейтрализацию, промывание водой, фильтрование, осветление, удаление твердых компонентов жиров путем вымораживания, отбеливание и/или дезодорацию. 4. Способ по любому из предшествующих пунктов, который дополнительно включает(c) необязательно, обработку кислотой или обесклеивание, или удаление фосфолипидов, микроэлементов-металлов, пигментов, углеводов и/или белков;(d) необязательно, обработку щелочью или удаление свободных жирных кислот, фосфолипидов,пигментов, микроэлементов-металлов, не растворимых в воде веществ и/или не растворимых в масле веществ;(f) добавление одного или нескольких антиоксидантов;(g) необязательно, промывание водой, отбеливание или удаление пигментов, продуктов окисления,микроэлементов-металлов, серы и/или мыла;(i) необязательно, охлаждение или удаление насыщенных триглицеридов вымораживанием;(j) дезодорацию или удаление свободных жирных кислот, моно- или диглицеридов, продуктов окисления, продуктов разложения пигментов, растворителей и/или стеринов;(k) необязательно, осветление или удаление не растворимых в масле веществ. 5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором(iii) один или несколько из этапов (с), (d) и/или (i) по п.4 не являются необязательными;(iv) один или несколько из этапов (c)-(i) по п.4 выполняются на сыром масле, содержащем ARA,и/или на сыром масле, содержащем 3-PUFA, затем полученные масла объединяются как на этапе (а), а смесь масел затем обрабатывается в соответствии с этапами (j) и/или (k); и/или(v) 3-PUFA имеют по меньшей мере четыре двойных связи. 6. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором или(i) масло, содержащее 3-PUFA (например, DHA), представляет собой рыбное масло и/или масло,содержащее ARA или 3-PUFA (DHA или ЕРА), представляет собой микробное масло; и/или(ii) сырое масло, содержащее ARA, получено из грибка отряда Mortierella, необязательно, из грибкаMortierella alpina, и/или масло, содержащее 3-PUFA, получено из организма Crypthecodinium cohnii; или(iii) масло, содержащее либо ARA, либо 3-PUFA, представляет собой растительное масло. 7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором в смеси очищенных масел(i) количество 3-PUFA (например, ЕРА), составляет по меньшей мере 20% от количества ARA; и/или(ii) очищенное масло имеет соотношение ARA:DHA от 1:5 до 5:1, необязательно, от 1:1 до 1:2. 8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором очищенное масло имеет содержание максимум 0,1% свободных жирных кислот, максимум 0,2% фосфолипидов, содержание фосфора ниже 10 млн-1, содержание железа ниже 0,05 млн-1, содержание меди ниже 0,02 млн-1 и/или перекисное число(ПЧ) ниже 1,0. 9. Смесь очищенных масел, включающая ARA и 3-PUFA, которая пригодна для употребления человеком, таким как новорожденный или младенец, и представляет собой неразделимую смесь очищенных масел, которая может быть получена способом по любому из предшествующих пунктов. 10. Съедобный состав, включающий очищенную смесь масел по п.9, представляющий собой, например, пищевой продукт (предпочтительно адаптированный для употребления людьми и, в частности, в виде композиции для младенцев), пищевую добавку или фармацевтическую композицию.- 11006503 11. Способ получения съедобного состава, причем способ включает введение в состав смеси масел,полученной способом по любому из пп.1-8, или смеси очищенных масел по п.9. 12. Способ по п.11, в котором состав представляет собой пищевой продукт для новорожденных или композицию для младенцев.