Фармацевтическая композиция на основе дигидрофосфата ротиготина

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ ДИГИДРОФОСФАТА РОТИГОТИНА Изобретение относится к фармацевтическим композициям для профилактики или лечения расстройств ЦНС, таких как болезнь Паркинсона, синдром беспокойных ног, синдром паркинсонизма плюс, депрессия, фибромиалгия и/или симптомы паркинсонизма, содержащим дигидрофосфат ротиготина, при этом величина рН композиции 5. Композиции могут применяться в составе системы для трансдермальной доставки, например, в ионофоретической системе. Применение указанных композиций характеризуется улучшенной трансдермальной доставкой лекарственного средства пациенту.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЮСиБи ФАРМА ГМБХ (DE) Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к дигидрофосфату 6-(пропил-(2-тиофен-2-илэтил)амино)тетралин-1 ола (дигидрофосфату ротиготина), к применению его в качестве лекарственного препарата, например,для лечения болезни Паркинсона, RLS, фибромиалгин и/или депрессии, в частности при электромоторном введении. Данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям, пригодным для проведения ионофореза, которые обеспечивают улучшенную ионофоретическую доставку ротиготина по меньшей мере к одной ткани-мишени. Составы эти характеризуются также растворимостью солей в водных растворах (от хорошей до отличной). Данное изобретение предусматривает также применение композиций, содержащих дигидрофосфат для введения по меньшей мере в одну ткань-мишень и/или лечения одной из болезней, указанных выше, у пациента путем ионофоретической доставки состава по изобретению. Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим кислотно-аддитивную соль ротиготина, а именно дигидрофосфат ротиготина, и к их применению, в частности, для использования в системе для ионофоретической доставки. Оно также относится к применению этих композиций для лечения расстройств ЦНС, например болезни Паркинсона и/или синдрома беспокойных ног. Сведения о предшествующем уровне техники Ротиготин - это международное непатентованное наименование (INN) соединения (-)-5,6,7,8 тетрагидро-6-[пропил-[2-(2-тиенил)этил]амино]-1-нафталинола, структурная формула которого приведена ниже Ротиготин представляет собой неэрголиновый агонист допамина в отношении D1/D2/D3 рецепторов, который структурно похож на допамин и имеет сходный профиль рецептора, но большее сродство к рецептору. В противоположность другим неэрголиновым агонистам допамина ротиготин имеет значительную активность по отношению к D1, что усиливает его физиологическое действие. В противоположность эрголиновым соединениям ротиготин имеет очень низкое сродство к рецепторам 5 НТ 2 В и поэтому не приводит к риску возникновения фиброза. Действие на недопаминергические рецепторы (такое как 5-HT1A агонизм и A2B-антагонизм) могут обеспечивать другие преимущества, такие как антидискинетическая активность, нейрозащитная (нейропротекторная) активность и антидепрессивная активность. Ротиготин известен как активный агент для лечения пациентов, страдающих от болезни Паркинсона (см. заявку WO 2002/089777), синдрома "паркинсонизмаплюс" (заявка WO 2005/09231), депрессии(заявка WO 2005/009424) и синдрома беспокойных ног (заявка WO 2003/092677), а также для лечения или профилактики потери допаминергических нейронов (заявка WO 2005/063237). Ротиготин испытывали в виде его свободного основания или гидрохлорида ротиготина. Синдром беспокойных ног (RLS) представляет собой неврологическое заболевание, которое выражается в ложном ощущении неприятных симптомов в ногах, сопровождаемом сильной потребностью в движении. Симптомы RLS включают покалывание, подрагивание, болезненные ощущения, зуд, жжение,судороги или боль, что приводит к непреодолимому стремлению субъекта к движению. Это состояние наиболее часто возникает в тех случаях, когда такой субъект находится в состоянии покоя. Терапевтические исследования выявили разнообразные результаты, полученные при монотерапевтическом лечении агонистами допамина, опиатами, бензодиазепинами, карбамазепином, клонидином или леводопой (LDOPA) в комбинации с ингибитором допа-декарбоксилазы. Применение L-DOPA для лечения RLS было предметом очень большого числа работ. Длительное лечение леводопой (L-DOPA) приводит к заметному ослаблению этого состояния и улучшению качества сна и жизни. Недостаток наиболее распространенных способов монотерапии состоит в том, что в зависимости от продолжительности лечения количество активного ингредиента должно прогрессивно возрастать для того, чтобы обеспечить успешные результаты лечения. Неожиданно было установлено, что монотерапевтическое введение трансдермальной композиции, содержащей ротиготин, особенно в виде пластыря, приводит к подавлению и уменьшению симптомов RLS, при этом активным веществом является ротиготин. Болезнь Паркинсона, как полагают, в основном вызывается дегенерацией допаминергических нейронов в черном веществе (substantia nigra). Болезнь Паркинсона поражает в основном людей среднего возраста и более старших людей, она поражает как мужчин, так и женщин. Наиболее часто болезнь Пар-1 021940 кинсона появляется в возрастной группе старше 70 лет, болезнь Паркинсона проявляется у 1,5-2,5% людей этой группы. Средний возраст начала этой болезни составляет от 58 до 62 лет, у большинства пациентов болезнь Паркинсона развивается в возрасте от 50 до 79 лет. В США примерно 800000 людей страдают от болезни Паркинсона. Клинический диагноз болезни Паркинсона основан на наличии характерных физических признаков. После начала болезнь развивается постепенно, медленно прогрессирует и проявляется в наличии различных клинических признаков. Данные свидетельствуют, что стриарное (относящееся к полосатому телу) содержание допамина снижается на 20% от его уровня у подобранных по возрасту людей в контрольной группе перед появлением симптомов. Болезнь Паркинсона, наряду с другими методами, пытались лечить леводопой (L-допой), которая все еще представляет собой "золотой стандарт" при лечении болезни Паркинсона. Леводопа проходит гематоэнцефалический барьер как предшественник допамина и затем превращается в допамин в мозгу.L-допа облегчает симптомы болезни Паркинсона, но может приводить к появлению серьезных побочных эффектов. Более того, лекарство имеет тенденцию к потере своей эффективности после первых двух-трех лет лечения. После пяти-шести лет терапии только 25-50% от общего числа пациентов испытывали улучшение. Кроме того, основной недостаток используемой в настоящее время терапии болезни Паркинсона заключается в возможном проявлении "синдрома флуктуаций", который выражается в состоянии"отсутствия" периодов с гипокинезией или акинезией. Пациенты, у которых появляются непредсказуемые или спорадические явления "все или ничего" при применении оральной терапии для болезни Паркинсона, характеризуются предсказуемым благоприятным ответом на в/в введение L-допы и других агонистов допамина, что позволяет предположить, что флуктуации в концентрациях лекарства в плазме отвечают за явление "все или ничего". Частота флуктуации "наличие - отсутствие" может уменьшаться путем непрерывных инфузий агонистов рецепторов допамина апоморфина и лисурида. Однако такой способ введения является неудобным. Следовательно,предпочтительны и в прошлом предлагались другие способы введения, обеспечивающие более постоянный уровень лекарства в плазме, такие как топический способ. Трансдермальная доставка лекарства является альтернативой оральной доставке и подкожной инъекции. В течение ряда лет были изучены различные способы доставки с целью увеличения степени доставки лекарства через кожу. Трансдермальная доставка является хорошо разработанным способом введения лекарства, при этом наблюдается эффект первого прохода лекарства через печень (пресистемный метаболизм). Были исследованы некоторые методы трансдермальной доставки ротиготина. Результаты показали значительное увеличение биодоступности по сравнению с оральным способом доставки и появление непрерывной доставки. Монотерапия с применением ротиготина путем пассивной диффузионной трансдермальной доставки ограничена, однако, степенью проницаемости через кожу и может потребовать титрования доз, чтобы удовлетворить индивидуальные терапевтические потребности. К настоящему времени были описаны различные трансдермальные терапевтические системы (TTS) для введения ротиготина. В заявке WO 94/07468 описана трансдермальная терапевтическая система, содержащая гидрохлорид ротиготина в качестве активного вещества в двухфазной матрице, которая практически образована гидрофобным полимерным материалом в качестве непрерывной фазы и дисперсной гидрофильной фазой, содержащейся в ней и в основном включающей лекарство и гидратированную двуокись кремния. Двуокись кремния повышает максимально возможную нагрузку гидрофильной соли в TTS. Кроме того, состав по заявке WO 94/07468 обычно содержит дополнительные гидрофобные растворители, вещества, ускоряющие проницаемость, диспергирующие агенты и, в особенности, эмульгатор,который требуется для эмульгирования водного раствора активного начала в фазе липофильного полимера TTS, полученная с использованием этой системы, была испытана на здоровых субъектах и на пациентах с болезнью Паркинсона. Средняя концентрация лекарства в плазме, достигнутая с помощью этой системы, составляла примерно 0,15 нг/мл при применении пластыря площадью 20 см 2, содержащего 10 мг гидрохлорида ротиготина. Эта величина рассматривается как слишком низкая для достижения действительно эффективного лечения или облегчения симптомов, относящихся к болезни Паркинсона. Различные другие трансдермальные терапевтические системы (TTS) были описаны, например, в заявке WO 99/49852. TTS включает поддерживающий слой, инертный по отношению к компонентам матрицы, самоклеящийся матричный слой, содержащий эффективное количество ротиготина или гидрохлорида ротиготина, и защитную пленку, которую удаляют перед применением TTS. Матрица состоит из неводной полимерной адгезивной системы на основе акрилата или силикона. В трансдермальной системе для доставки (TDS, что является синонимом TTS), описанной в заявкеWO 94/07468 и многих других родственных заявках, лекарство пересекает мембрану за счт пассивной диффузии. Недостаток этих видов трансдермального введения состоит в том, что доступно очень ограниченное гибкое дозирование, например, из-за возможных индивидуальных доз, ограниченной максимальной дневной дозы, требований назначения, непрерывного или пульсирующего введения, продолжительности введения. Однако так как кожу следует рассматривать как очень эффективный барьер для большинства лекарств-кандидатов, такой вид мембранных контролируемых систем более или менее ограничен на практике трансдермальной доставкой активных веществ, которые обладают очень высокой проницаемостью через кожу. Кроме того, должны удовлетворяться специальные требования к кинетике высвобождения лекарства, такие как контактная доставка в течение нескольких дней. Поток ротиготина, который получается при применении этих пассивных трансдермальных терапевтических систем, не всегда достаточен для всех пациентов. Для увеличения степени доставки лекарства через кожу в течение ряда лет были изучены различные способы доставки. Было сделано несколько попыток повысить скорости трансдермальной доставки лекарства с использованием альтернативных источников энергии, таких как электроэнергия и ультразвук. Трансдермальная доставка с помощью электроэнергии также называется электропереносом. Термин "электроперенос" или "электромотивное введение", используемый в данной заявке, в общем относится к доставке агента (например, лекарства) через мембрану, такую как кожа, мембрана слизистой оболочки или ногтевая мембрана. Одну из возможностей представляет собой ионофорез. Пропуская небольшой ток через кожу, можно ускорить трансдермальную доставку малых заряженных молекул с ионной связью. Ионофорез включает применение электромотивной силы для того, чтобы побудить к движению и "протолкнуть" ионы через слои кожи в ткань-мишень. Особенно подходящими целевыми тканями для локализованного лечения являются те, которые находятся рядом с сайтом доставки. Незаряженные молекулы также могут быть доставлены с применением ионофореза методом, называемым электроосмосом. Эта методика "электропереноса" имеет несколько преимуществ по сравнению, например, с оральной доставкой инъекцией или пассивной трансдермальной доставкой лекарства. Ключевые преимущества ионофоретической доставки лекарства включают отсутствие боли и возможности инфекции, связанной с применением иглы, возможность контролировать скорости доставки лекарств, возможность программировать профиль доставки лекарства и сведение к минимуму локального повреждения тканей. Одной из интересных характеристик этого метода является возможность модулирования скорости переноса в кожу и через кожу. Это важное преимущество для лекарств с узким "терапевтическим окном" (узким коридором безопасной концентрации), таких как агонисты допамина. Ионофоретическая трансдермальная доставка относится к введению ионов или растворимых солей фармацевтически активных соединений в ткани организма под действием наложенного электрического поля. В некоторых случаях, например, когда трансдермальная доставка путем регулируемых пластырей с пассивной диффузией оказывается неэффективной или неприемлемой из-за низкого прохода через кожу,что требует применения очень больших пластырей, ионофоретическая доставка может стать предпочтительным способом доставки такого соединения. Кроме того, ионофоретическая трансдермальная доставка имеет основное преимущество, состоящее в том, что можно точно регулировать вводимое количество и этот способ может быть использован для простого титрования дозы для пациентов до некоторого уровня введения в течение промежутка времени, достигающего нескольких недель. Устройства для электропереноса используют по меньшей мере два электрода, которые находятся в электрическом контакте с некоторыми участками кожи, ногтей, мембраны слизистой оболочки или другой поверхностью тела. Один электрод, обычно называемый "донорным" электродом, представляет собой электрод, который доставляет агент в организм. Другие электроды, обычно называемые "противоэлектродами", служат для замыкания электрической цепи в организме. Например, если агент, который должен быть доставлен, является положительно заряженным, т.е. является катионом, тогда анодом служит донорный электрод, а катодом служит противоэлектрод, который нужен для замыкания цепи. Или же, если агент является отрицательно заряженным, т.е. является анионом, тогда катодом служит донорный электрод, а анодом служит противоэлектрод. Оба электрода, анод и катод, могут также считаться донорными электродами, если должны быть доставлены и анионный, и катионный агенты или незаряженные растворенные агенты. Кроме того, системы доставки путем электропереноса обычно требуют наличия одного резервуара (с лекарством) или источника агента, который должен быть доставлен в организм. Ионофорез широко используют при трансдермальной доставке лекарств. Преимущество этого способа состоит в том, что в отличие от трансдермальных пластырей он основан на активном переносе в электрическом поле. Этот способ обеспечивает доставку водорастворимых ионных лекарств, которые неэффективно абсорбируются через кожу. В присутствии электрического поля электромиграция и электроосмос являются доминирующими силами при переносе массы. Эти движения измеряются в единицах величины химического потока, обычно в мкмол./см 2 ч. Существует ряд факторов, которые влияют на ионофоретический перенос, включая величину рН кожи, концентрацию лекарства и его характеристики,конкуренцию ионов, размер молекул, ток, напряжение, промежуток времени наложения поля и величину сопротивления кожи. Преимущество этого метода (ионофореза) состоит в том, что величину потока можно точно регулировать и управлять ею при помощи внешнего тока. Степень увеличения, которая может быть достигнута,-3 021940 в большей части зависит от величины заряда, липофильности и молекулярного веса лекарства. Соединения, которые увеличивают чрескожное проникновение лекарства, были широко применены в исследованиях пассивной трансдермальной доставки, хотя применение этих соединений для людей ограничено степенью раздражения кожи, которое они могут вызывать. Ионофорез представляет собой метод, позволяющий осуществлять движение ионов растворимых солей через мембрану при разнице потенциалов внешнего тока, которая возникает при прохождении через кожу под действием электрического тока низкого напряжения. Действие тока контролируется при помощи электронного устройства, которое регулирует напряжение в ответ на изменение электрического сопротивления кожи. Заряженное лекарство, а также другие ионы переносятся через кожу как компонент возникшего потока ионов. Многочисленные факторы влияют на электрофоретическую доставку, включая пропорциональность потока по отношению к плотности тока и наличие ионов, отличных от ионов лекарства. Ток с плотностью до 0,5 мА/см 2 считается переносимым для пациентов. Ионофоретическое лечение начинает действовать быстро по сравнению с пассивной трансдермальной доставкой, длящейся часы. Поскольку количество доставленного лекарства пропорционально применяемому току, значительные преимущества ионофореза включают возможность предварительного программирования доставки лекарства, возможность точного определения доз на индивидуальной основе или точного определения времени непрерывно или прерывисто. По сравнению с пассивной трансдермальной доставкой ионофорез обеспечивает некоторые преимущества, которые полезны при лечении болезни Паркинсона: он позволяет программировать поток лекарства с желаемой терапевтической скоростью путем регулирования электрического тока. Для пациента, который нуждается в лекарстве, преимущество состоит в том, что количество лекарства может быть приспособлено для индивидуального пациента. Другим преимуществом является то, что ионофорез позволяет осуществлять непрерывное, а также пульсирующее введение лекарства и быстрое начало или окончание введения лекарственного препарата, если это необходимо, путем простого включения или отключения ионофоретической системы для доставки. Предпочтительно, чтобы контроль скорости и продолжительности доставки лекарства осуществлялись таким образом, чтобы избежать возможного риска передозировки и дискомфорта при введении недостаточной дозы. Однако при осуществлении любого данного способа электропереноса одновременно могут возникать в некоторой степени более чем один процесс, включая, по меньшей мере, некоторую "пассивную диффузию". Соответственно термины "электроперенос" или "электромотивное введение", используемые в данной заявке, должны интерпретироваться как можно шире, чтобы они включали электрический или улучшенный перенос по меньшей мере одного агента, который может быть заряженным, незаряженным или смесью таких агентов, независимо от того, каковы механизм или механизмы, обеспечивающие в действительности перенос агента. Например, общий ионофоретический поток состоит из пассивного потока (Jpass), электроосмотического потока (JEO) и электромигрирующего потока (JEM). Последние два потока являются ионофоретическими. Другой агонист допамина, который использовали при лечении болезни Паркинсона, представляет собой R-апоморфин. R-апоморфин является международным непатентованным названием (INN) соединения (R)-5,6,6 а,7-тетрагидро-6-метил-4 Н-дибензохинолина-11,12-диола. Некоторые подходы к созданию системы для ионофоретического введения R-апоморфина уже были описаны ранее (см., например,R. van der Geest, М. Danhof, Н.Е. Bodde "Iontophoretic Delivery of Apomorphine: In Vitro Optimization andintegrated pharmacokinetic-pharmacodynamic approach to optimization of R-apomorphine delivery in Parkinson's disease", Advanced Drug Delivery Reviews (1998), 33, 253-263). Однако несмотря на эти усилия можно было определить только концентрации в нижнем конце интервала терапевтических концентраций(1,4-10,7 нг/мл). Еще одним антагонистом допамина является гидрохлорид ропинирола. Ропинирол (INN) представляет (4-[2-дипропиламино)этил]-1,3-дигидро-2 Н-индол-2-он. Хотя ионофоретическое введение ропинирола возможно, удается получить только потоки при низких значениях терапевтического интервала (см. A. Luzardo-Alvarez, M.В. Delgado-Charro, J. Blanco-Mendez, "Iontophoretic Delivery of Ropinirole Hydrochloride:Effect of Current Density and Vehicle Formulation", Pharmaceutical Research (2001), 18 (12), 1714-1720). Заявка WO 2004/050083 относится к способу лечения или облегчения симптомов болезни Паркинсона, который использует ионофоретическую доставку агониста рецептора допамина, ротиготина. Композиция, применяемая в ионофоретической системе доставки, включает ротиготин в виде его гидрохлоридной соли и по меньшей мере один хлорид в концентрации от 1 до 140 ммол/л композиции с величиной рН от 4 до 6,5. Для оптимального результата предпочтительной является концентрация гидрохлорида ротиготина, равная по меньшей мере 0,5 мг/мл, как видно из примеров 1 и 2 европейского патента. Хотя изучение трансдермальной ионофоретической доставки ротиготина HCl показало, что применение электрического тока, проходящего через кожу, обеспечивает более стабильные потоки лекарства с более коротким латентным периодом по сравнению с пассивной доставкой лекарства в этих опытах, максимальная растворимость ротиготинаHCl в донорной фазе оказалась лимитирующим фактором при его ионофоретическом переносе через кожу. Была сделана попытка повысить растворимость ротиготина пу-4 021940 тем изменения состава донорного раствора, например путем добавления поверхностно-активных веществ или сорастворителей или изменения источника ионов Cl-. Недостаток этой ионофоретической системы доставки состоит в том, что, например, увеличение концентрации хлорида натрия приводит к уменьшению потока ротиготина. Еще одним лимитирующим фактором является растворимость гидрохлорида ротиготина в водных растворителях, а также эффект сильного высаливания, например, хлорида натрия. Многие пациенты нуждаются в концентрациях, которые значительно выше величин концентраций,возможных при применении ионофоретической доставки упомянутых выше композиций и/или нуждаются во введении лекарства в течение более длительного промежутка времени. Все еще существует необходимость создания системы трансдермальной доставки, обеспечивающей, с одной стороны, большую гибкость дозирования (например, индивидуальное дозирование) и позволяющей, с другой стороны, непрерывное, а также пульсирующее введение, если это желательно, в течение длительного времени. Цель данного изобретения состоит в регулировании (т.е. канализировании/маневрировании) переноса ротиготина по направлению к коже и через кожу из резервуара с лекарством, тем самым в оптимизации введения индивидуального количества ротиготина, требующегося пациенту, и увеличении потока ротиготина, проходящего через границу между TDS и кожей. Другой целью и другим аспектом данного изобретения является создание композиции, которая увеличивает доставку ротиготина по направлению к коже и через кожу в течение по меньшей мере 24 ч,предпочтительно в течение промежутка времени более 24 ч. Еще одна цель данного изобретения заключается в обеспечении как непрерывной, так и прерывистой доставки активного соединения через кожу. Сущность изобретения Данное изобретение предусматривает фармацевтические композиции, пригодные для проведения ионофореза, которые обеспечивают улучшенную ионофоретическую доставку ротиготина по меньшей мере к одной целевой ткани. Эти составы характеризуются растворимостью солей в водных растворах от хорошей до отличной. Настоящее изобретение предусматривает также введение ротиготина по меньшей мере в одну целевую ткань и/или лечение одной из болезней, упомянутых выше, у пациента путем ионофоретической доставки состава по изобретению. Данное изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую дигидрофосфат ротиготина, для профилактики или лечения расстройств ЦНС, таких как болезнь Паркинсона, синдром беспокойных ног, синдром паркинсонизма плюс, депрессия, фибромиалгия и/или симптомы паркинсонизма, причем величина рН фармацевтической композиции 5. Композиция дополнительно может содержать фармацевтически приемлемый электролит, например хлоридную соль. В отном из вариантов изобретения концентрация хлоридной соли составляет от 1 до 140 ммол/л. Неожиданно было установлено, что благодаря повышению максимальной растворимости фармацевтически приемлемых солей ротиготина, в частности дигидрофосфата ротиготина (ротиготинаН 3 РО 4), существенное увеличение максимального потока лекарства по сравнению с гидрохлоридом ротиготина может быть достигнуто и может поддерживаться в течение по меньшей мере 24 ч, что облегчает его применение. В случае дигидрофосфата ротиготина было достигнуто увеличение максимальной растворимости ротиготинаН 3 РО 4, увеличение максимального потока, равное 170%, по сравнению с ротиготиномHCl, что может поддерживаться в течение по меньшей мере 24 ч, что облегчает его применение. Баланс между растворимостью и эффективностью доставки может быть достигнут путем выбора величины рН донора, например, между 5 и 6,0. При осуществлении ионофореза могут быть достигнуты терапевтические уровни с быстрым началом и они могут поддерживаться регулируемым образом путем подбора величины плотности тока. Далее оказалось неожиданным, что согласно одному из вариантов по контрасту с растворимостью ротиготинаHCl наличие NaCl не влияет на растворимость солей ротиготина по изобретению, например ротиготинаH3PO4. Данное изобретение обеспечивает далее два очень важных преимущества ионофоретической доставки ротиготина в комбинации с ионофорезом по сравнению с трансдермальной пассивной диффузией при симптоматическом лечении, например, болезни Паркинсона. Благодаря активной трансдермальной доставке время начала для достижения желаемого уровня лекарства может быть значительно снижено. Кроме того, можно проводить титрование концентрации в плазме путем регулирования плотности тока,что позволяет индивидуально модулировать доставку в соответствии с желаемой схемой приема. Используя параметры, определенные моделированием in vitro переноса, установили при in vivo стимуляциях, что ионофоретические терапевтические уровни могут быть достигнуты с быстрым началом и могут поддерживаться регулируемым образом путем выбора величины плотности тока. Можно получить скорость потока равную 50 мкг/см 2/ч. Было получено линейное отношение между ионофорезом (устойчивое состояние потока) и плотностью тока, что позволяет проводить титрование индивидуальной дозы для пациента. Краткое описание фигур На фиг. 1 показано примерное строение ионофоретической ячейки; на фиг. 2 приведен график зависимости скорости потока ротиготина в стабильном состояниист. откл. от концентрации лекарства; фиг. 3 отражает временный профиль ионофоретического потока ротиготинаH3PO4, растворенного в буферном растворе лимонной кислоты с pH 5,0; на фиг. 4 показана корреляция Fluxss во время пассивной фазы (когда нет тока) и ионофоретической фазы (плотность тока = 500 мкАсм-2) в зависимости от концентрации донора при различных значениях рН; фиг. 5 показывает совместное влияние величины рН раствора донора и концентрации лекарств на скорость потока ротиготина во время пассивной фазы и стадии ионофореза в устойчивом состоянии; на фиг. 6 показано влияние величины плотности тока на скорость трансдермального потока лекарства в стабильном состоянии из растворов доноров; фиг. 7 отражает график,показывающий прогноз моделирования ионофоретической доставки ротиготинаH3PO4; на фиг. 8 приведена порошковая рентгенограмма (XPRD) дигидрофосфата ротиготина; на фиг. 9 приведены 1H NMR спектры дигидрофосфата ротиготина. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Согласно одному аспекту данное изобретение предусматривает фармацевтические композиции, которые пригодны для проведения ионофореза и которые обеспечивают улучшенную ионофоретическую доставку ротиготина пациенту, предпочтительно человеку, нуждающемуся в лечении какой-либо болезни. Таким образом, данное изобретение относится к ионофоретической доставке ротиготина, включая катодный или анодный ионофорез. Настоящее изобретение относится также к применению композиций с регулируемым профилем доставки при лечении болевых расстройств, особенно расстройств ЦНС, в особенности болезни Паркинсона и синдрома беспокойных ног. Кислотно-аддитивная соль ротиготина, дигидрофосфат ротиготина,имеет растворимость в воде, равную от примерно 83 до 34 мкмол/мл при величине рН примерно от 4 до примерно 5,5. Когда соли помещаются в раствор (например, в водный раствор), эти соли растворяются и образуют протонированные катионы ротиготина и противоионы (например, цитрата или фосфата). Как таковые, катионы ротиготина доставляются анодным электродом устройства для электропереноса. Согласно одному варианту концентрация активного агента, рассчитанная для свободного основания ротиготина, в композиции составляет примерно 16 мкмол/мл ротиготина при величине pH6 и/или по меньшей мере примерно 30 мкмол/мл ротиготина при величине pH5. Согласно другому варианту концентрация активного агента, рассчитанная на свободное основание ротиготина, в композиции равна по меньшей мере примерно 50 мкмол/мл ротиготина при величине pH4. Композиции согласно изобретению пригодны для применения в качестве лекарственного препарата, в частности, для лечения расстройств ЦНС, таких как болезнь Паркинсона, фибромиалгия, синдром беспокойных ног, депрессия и/или симптомы, сопутствующие болезни Паркинсона. Они подходят для применения в системе трансдермальной доставки. Такая система трансдермальной доставки может представлять собой, например, пластырь, устройство для электропереноса, систему ионофоретической доставки. Одна из целей данного изобретения состоит в получении стабильных солей ротиготина с повышенной растворимостью в растворах при величине рН менее 6,0. Ротиготин в виде свободного основания имеет высокую растворимость в обычных органических растворителях, но низкую растворимость в воде. В условиях, предусмотренных данным изобретением, можно получать фармацевтическую композицию с более высокой концентрацией эффективного ротиготина без необходимости дополнительного добавления соли (солей) (ионов), например, хлорида. Недостаток систем, известных из уровня техники,состоит в эффекте высаливания, который уменьшает перенос доступного ротиготина через кожу. В предыдущих попытках одно из основных ограничений ионофоретического переноса ротиготинаHCl заключалось в его низкой растворимости. Например, максимальная растворимость ротиготинаHCl составляла только 22,4 мкмол/мл (в отсутствие других хлоридных солей) при величине рН 5 и в присутствии 0,07 моль NaCl максимальная растворимость ротиготинаHCl снижалась до 6,3 мкмол/мл при величине рН 5,0. В этом исследовании ионофоретический перенос при различных концентрациях ротиготинаHCl между 1,4 и 3,9 мкмол/мл характеризовалась линейной зависимостью между Fluxss и концентрацией донора. Это свидетельствовало о том, что максимальный ионофоретический поток ротиготина еще не был достигнут, но низкая растворимость ротиготинаHCl предотвращала дальнейшее увеличение ионофоретического потока. Растворимость ротиготина является важным решающим компонентом максимальной концентрации лекарства. Проблема соли присоединения кислоты к ротиготину, имеющей максимальную растворимость в водном растворе при величине рН, равной примерно 6, составляющая менее 30 мкмол/мл (рассчитанная на основе количества ротиготина в этой фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты), например, ротиготинаHCl состоит в том, что их применение для электропереноса ограничено из-за низкой или незначительной скорости ионофоретического переноса. Другой недостаток заключается в отрицательном влиянии добавления хлоридных солей на растворимость ротиготинаHCl и, следова-6 021940 тельно, на концентрацию ротиготина, доступную для проникновения через кожу. Неожиданно было установлено, что некоторые соли более растворимы, чем гидрохлоридная соль ротиготина и поэтому особенно подходят для фармацевтических композиций, используемых при осуществлении трансдермального электропереноса, например, ионофореза. Подходящей для трансдермального электропереноса солью ротиготина является дигидрофосфат ротиготина Согласно изобретению фармацевтически приемлемой солью является дигидрофосфат ротиготина, который имеет формулу Один из вариантов включает фармацевтическую композицию, содержащую соль 6-(пропил-(2 тиофен-2-илэтил)амино)тетралин-1-ола (ротиготина) и, возможно, фармацевтически приемлемый электролит, при этом указанная соль представляет собой дигидрофосфат ротиготина. Согласно другому варианту фармацевтическая композиция содержит, по меньшей мере, дигидрофосфат ротиготина, характеризуется тем, что имеет растворимость до насыщения в водном растворе, которая составляет по меньшей мере примерно 40 мкмол/мл при величине рН 5. Все величины растворимости до насыщения, указанные выше, рассчитаны исходя из количества ротиготина в фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты. Температурный интервал, в котором растворимость до насыщения может быть достигнута, обычно включает интервал от примерно 15 до примерно 40 С. По одному из вариантов таким интервалом могут быть температуры от примерно 18 до примерно 38 С, по другому варианту - от примерно 18 до примерно 25 С. Согласно одному из вариантов желательные растворы для ионофореза содержат в растворе все количество лекарства и концентрация лекарства не должна быть слишком близка к пределу растворимости лекарства. Если концентрация лекарства близка к пределу растворимости, небольшие изменения температуры или состава композиции могут привести к осаждению лекарства. Для того чтобы избежать осаждения соли ротиготина, согласно одному варианту количество содержащейся соли ротиготина меньше, чем количество, которое необходимо для достижения насыщения раствора. Согласно другому варианту фармацевтическая композиция по изобретению содержит фармацевтически приемлемую соль ротиготина в количестве, составляющем по меньшей мере 80% от количества, необходимого для достижения насыщения. Согласно другому варианту это количество составляет по меньшей мере 90% от количества, которое необходимо для достижения насыщения. По одному из вариантов величина рН фармацевтической композиции 5,5 и еще по одному варианту рН 5,0. Согласно одному из вариантов растворимость до насыщения соли ротиготина равна по меньшей мере 30 мкмол/мл при значении величины рН от 4 до 5,5. Величина рН раствора в резервуаре с лекарством может быть равна по меньшей мере примерно 3,0 согласно некоторым вариантам. Величина рН может поддерживаться на постоянном уровне при помощи буфера, такого как цитратный буфер или фосфатный буфер. Согласно одному из вариантов изобретения фармацевтическая композиция содержит также растворитель-буфер. Подходящими растворителями-буферами являются все буферы, которые обеспечивают очень небольшие изменения рН раствора, когда небольшое количество кислоты или основания добавляется в этом интервале рН. Это включает величины рН 6. Подходящие буферы представляют собой, например, HCl, цитрат натрия, лимонную кислоту/ацетат натрия, лимонную кислоту/Na2HPO4. Согласно одному из вариантов фармацевтически приемлемая соль ротиготина добавляется в буфер при величине рН между примерно 3 и 6 (предпочтительно между примерно 4 и 5,9) или между 5 и 6(предпочтительно между примерно 5 и 5,9). Термин "буфер" относится к растворам соединений, которые, как известно, являются безопасными для фармацевтического или ветеринарного применения в составах и которые способны поддерживать или регулировать величину рН состава в интервале, являющемся желательным для этого состава. Концентрация соли ротиготина в резервуаре с лекарством согласно варианту может составлять, например, по меньшей мере примерно 30 мкмол/мл при рН 5,5, согласно еще одному варианту концентрация соли ротиготина в резервуаре с лекарством может быть равна примерно 40 мкмол/мл при рН 5. Кроме того, резервуар с лекарством в составе ионофоретической системы может включать другие добавки. Такие добавки могут быть выбраны из хорошо известных добавок, обычно используемых в процессе ионофореза. Такие добавки включают, например, противомикробные агенты, консерванты, антиоксиданты, ускорители проницаемости и буферные вещества. Неожиданно было установлено, что ионофоретическая доставка (доза и профиль), при помощи которой конкретное активное соединение общей формулы (I) вводится пациенту, может регулироваться соответствующей комбинацией начальной концентрации лекарства и электролита и применяемого тока(постоянный/переменный) в ионофоретической системе. Например, было обнаружено, что комбинация плотности тока (постоянного/переменного) и исходного количества электролита может привести к получению ионофоретического устройства разумного размера, которое позволяет регулировать профиль доставки лекарства. Возможность точно регулировать профиль доставки лекарства в процессе ионофореза может обеспечить лучшее регулирование действия лекарства на субъекта. Кроме того, возможность точного регулирования профиля доставки лекарства при ионофорезе делает ионофоретическую доставку более эффективным способом доставки. Для целей электромотивного введения и, в частности, ионофоретического введения фармацевтически соль ротиготина в добавление к водной форме в виде солевого раствора может быть в любой форме,в которой ионы ротиготина свободно перемещаются. В этих случаях лекарство может быть введено в гель (такой как желатиновый), гидрогель, в смолу, пену или неионный крем, чтобы сделать процесс ионофореза удобным. Для трансдермальной доставки методом электропереноса были предложены серебряные аноды,чтобы поддержать стабильность величины рН в анодном резервуаре. Один из недостатков применения серебряного анода в устройстве для доставки лекарства методом электропереноса, состоит в том, что пропускание тока через серебряный анод вызывает окисление серебра (Ag -Ag++ е- ), образуются катионы серебра, которые конкурируют с катионным лекарством при доставке в кожу путем электропереноса. Миграция ионов серебра в кожу приводит к эпидермальному обесцвечиванию (TED) кожи. Следовательно, согласно некоторым вариантам в композицию согласно данному изобретению включаются дополнительно источники ионов хлоридов, таких как хлоридные соли. Эти хлориды эффективно доставляют достаточно ионов для предотвращения миграции ионов серебра и сопутствующего обесцвечивания кожи при доставке ротиготина трансдермально путем электропереноса с применением серебряного анода. Для начала электрохимической реакции на аноде с применением электрода Ag/AgCl к раствору донора часто добавляют хлоридные соли в качестве электролитов. Примеры подходящих электролитов включают все соединения, отдающие ионы Cl-, которые растворимы в воде, такие как HCl, NaCl, KCl,CaCl2, MgCl2, триэтиламмонийхлорид и трибутиламмонийхлорид. Согласно одному из вариантов подходящие электролиты включают все соединения, отдающие ионы Cl-, которые растворимы в воде, при условии, что это не гидрохлорид ротиготина. Согласно еще одному варианту электролит представляет собой NaCl. Требуемое количество электролита зависит от таких факторов, как площадь переноса в устройстве, объем наполнителя или носителя, концентрация активного соединения, плотность тока, продолжительность ионофореза и эффективность переноса. Подходящая концентрация хлоридов находится в пределах от 1 до 140 ммол/л, предпочтительно от 50 до 100 ммол /л, более предпочтительно от 60 до 80 ммол/л. Согласно другим вариантам электролит может содержаться в количестве, равном, например, по меньшей мере примерно 0,005 ммоль, по меньшей мере примерно 0,01 ммоль или по меньшей мере примерно 0,05 ммоль. Электролит может содержаться в количествах, например, не более примерно 2 ммол,не более примерно 1,0 ммоль или не более примерно 0,3 ммоль. Начальное количество электролита может быть выражено как концентрация, составляющая, например, по меньшей мере примерно 0,005 М, по меньшей мере примерно 0,01 М или по меньшей мере примерно 0,03 М. Начальное количество электролита может быть выражено как концентрация, составляющая, например, не более примерно 2 М, не более примерно 0,2 М или не более примерно 0,02 М. Композиция, описанная в данной заявке, может использоваться в донорной фазе ионофоретического устройства. Обычно донорная фаза содержится в резервуаре донора. Согласно данному изобретению можно применять любое обычное ионофоретическое устройство. Такие ионофоретические устройства описаны, например, в статье V. Nair, О. Pillai, R. Poduri, R. Panchagnula "Transdermal Iontophoresis. Part I:Basic Principles and Considerations", Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. (1999), 21 (2), 139-151. Резервуар, предназначенный для лекарства, содержит лекарство и возможный электролит с водным раствором или (гидро)гелем в качестве наполнителя или носителя. Резервуар с гелем может содержать водорастворимые полимеры или гидрогели. В принципе может быть применен любой гель. Композиция по изобретению большей частью используется в донорной фазе ионофоретического устройства. Согласно некоторым вариантам ионофоретическая система включает (а) трансдермальное устройство для доставки, прикрепленное к коже, при этом устройство включает первый электрод и второй электрод и резервуар, способный вмещать соединение, указанный выше, и, возможно, фармацевтически приемлемый электролит в электрическом сообщении с первым и вторым электродами и (б) средство для соединения источника электрической энергии с первым и вторым электродами. Ионофоретическое устройство дает возможность ускорить трансдермальный перенос полярных электрически заряженных лекарств. Помимо увеличения переноса лекарства ионофорез дает возможность доставлять лекарство запрограммированным путем. Это важно при лечении болезни Паркинсона,когда вследствие узкого терапевтического окна решающим является ночное индивидуальное дозирование. Следовательно, возможно при помощи ионофоретического устройства осуществлять пульсирующее или непрерывное введение лекарства. Согласно одному из вариантов изобретения фармацевтическая композиция, применяемая для трансдермального введения, в частности применяемая для ионофоретического введения, может быть использована как для пульсирующего, так и для непрерывного введения. Согласно одному из вариантов данного изобретения фармацевтическая композиция пригодна для лечения болезни Паркинсона, синдрома беспокойных ног, депрессии, фибромиалгии и/или симптомов паркинсонизма. Согласно другому варианту фармацевтическая композиция применяется в ионофоретическом устройстве для ее введения методом электропереноса с целью лечения болезни Паркинсона и/илиRLS (симптома беспокойных ног). Композиции предпочтительно вводить методом ионофореза. Плотность тока, используемая во время ионофореза, может меняться в зависимости от потребностей пациента и будет зависеть от типа ионофоретического устройства и применяемой композиции. Плотность тока может быть определена практикующим врачом. Например, плотность тока может составлять от примерно 0,001 до примерно 1,0 мА/см 2. В общем, подходящая плотность тока может предпочтительно быть в пределах от 200 до 500 мкА/см 2. Согласно одному из вариантов плотность тока может быть в пределах от 20 до 400 мкА/см 2. Согласно другому варианту плотность тока находится в пределах от 300 до 380 мкА/см 2. Согласно одному варианту получается поток со скоростью, равной по меньшей мере примерно 12 мкг/см 2/ч, согласно другому варианту эта величина равна по меньшей мере примерно 20 мкг/см 2/ч, по меньшей мере примерно 30 мкг/см 2/ч, по меньшей мере примерно 40 мкг/см 2/ч. Ионофорез может проводиться в течение времени, достаточного для введения эффективного количества лекарства в кожу. Во время доставки ток может быть постоянным или переменным, например пульсирующим или с чередующимся напряжением. Или же, альтернативно, ток может возрастать во время доставки лекарства,чтобы оттитровать увеличивающуюся концентрацию соединения формулы (I). Напряжение, применяемое на стадии наложения тока, выбирается в интервале величин напряжений,которые не приводят к повреждению кожи живого организма и не сказываются отрицательно на скорости трансдермальной абсорбции активного соединения. Величина напряжения может быть равна, например, по меньшей мере примерно 0,1 В, или по меньшей мере примерно 0,5 В, или по меньшей мере примерно 1 В. Напряжение также может быть, например, менее примерно 40 В, или менее примерно 20 В,или менее примерно 10 В. Пульсирующий или переменный ток может быть с частотой, равной, например, по меньшей мере примерно 0,01 Гц, или по меньшей мере примерно 100 Гц, или по меньшей мере примерно 5 кГц. Пульсирующий или переменный ток может иметь частоту, например, не более примерно 200 кГц, или не более примерно 100 кГц, или не более примерно 80 кГц. Пульсирующий или переменный ток может использовать практически любой вид формы волны, включая, например, синусоидальную, квадратную,трехугольную, зубчатую, прямоугольную и т.д. Кроме того, пульсирующий или переменный ток может использоваться с рабочим циклом менее 100%. Примеры Для того чтобы сравнить величины максимальной растворимости фармацевтически приемлемых солей ротиготина, например ротиготинаН 3 РО 4 и ротиготинаHCl, осуществляли определение растворимости солей ротиготина по методике, описанной Nugroho et al. (Pharm. Res. 21 (2004), 844-855), этот источник включен в качестве ссылки в данную заявку. Авторы определяли растворимость ротиготинаHCl. Вкратце, методика состояла в следующем. Соль ротиготина солюбилизировалась в 10 мМ буфере с лимонной кислотой при рН 4,5 и 6 в присутствии и в отсутствие NaCl (при комнатной температуре). Последующее регулирование величины рН в каждой пробирке осуществляли путем чередующихся добавления небольших количеств 1 М NaOH при встряхивании и определения величины рН до тех пор, пока величина рН каждого раствора не стабилизируется при исходной величине для буфера. Каждый раствор встряхивали еще в течение 48 ч, после чего каждый раствор центрифугировали и отфильтровывали. Концентрацию соли в каждом растворе определяли методом ВЭЖХ. Комнатная температура или температура окружающей среды, используемые в данной заявке, находятся в пределах от 18 до 25 С, предпочтительно, если такая температура равна 20 С. Подготовку рогового слоя кожи человека (HSC) осуществляли в соответствии с методом, описанным ранее (Nugroho et al., J. Control. Release (2005) 103, 393-403), этот источник включен в данную заявку в качестве ссылки. Вкратце, подготовку проводят следующим образом. В течение 24 ч после хирургического удаления кожи человека удаляли остаточный подкожный жир. Образцы человеческой кожи(DHS) получали, удаляя кожу при помощи прибора дерматома до толщины около 300 мкм. Для того чтобы получить HSC, DHS инкубировали, располагая дермальный слой на ватманской бумаге, пропитанной-9 021940 раствором 0,1% трипсина в 150 мМ фосфатного буфера (PBS) с рН 7,4 (NaCl: 8 гл-1, Na2HPO4: 2,86 гл-1,KH2PO4: 0,2 гл-1, KCl: 0,19 гл-1) в течение ночи при температуре 4 С и затем 1 ч при температуре 37 С,после чего HSC снимали с лежащих ниже жизнеспособных эпидермиса и дермиса. Затем HSC промывали в 0,1% растворе ингибитора трипсина в воде Millipore и несколько раз в воде и хранили в десикаторе в атмосфере N2.In vitro перенос осуществляли, используя 9-канальный источник электропитания, контролируемый компьютером для получения непрерывного постоянного тока (Electronics Department, Gorlaeus Laboratories, Leiden University, The Netherlands) во время ионофореза. Система была снабжена дифференциальными входными каналами в источнике тока, что позволяет осуществить в режиме он-лайн измерение электросопротивления HSC в каждой диффузионной ячейке. Электроды Ag/AgCl использовали как пару драйверных электродов. Все опыты по переносу проводили, используя три непрерывных потока через ячейку, как описано в источнике (Nugroho et al., J. Control Release (2005) 103, 393-403). На стороне анода применяли донорный состав, буферированный 10 мМ буфера с лимонной кислотой. Катодную камеру заполняли PBS с рН 7,4. Фаза акцептора, поддерживаемая при температуре 32 С, непрерывно промывалась PBS с рН 6,2 (NaCl: 8 гл-1, KCl: 0,19 гл-1, Na2HPO42 Н 2 О: 0,43 гл-1, KH2PO4: 0,97 гл-1) со скоростью потока 7,0 млч-1. Если не найдено где-либо описания протокола, применяли следующий: 6 ч пассивной диффузии, затем 9 ч ионофореза с плотностью тока 500 мАсм-2 и 5 ч пассивной диффузии. Образцы отбирали каждый час при помощи автоматического коллектора (ISCO Retriever IV, Beun De Ronde BV, Abcoude, The Netherlands). Конкретные условия изучения отдельного переноса описаны ниже. Аналитический метод Перед началом и в конце стадии переноса измеряли величину рН в донорном и акцепторном отделениях. Все образцы в процессе ионофоретического переноса анализировали методом RP - HPLC, используя Superspher 60RP - select В, колонку 75 мм 4 мм (Merck KGaA, Darmstadt, Germany). Ротиготин обнаруживали, применяя сканирующий флуоресцентный детектор (Waters 474, Millipore, Milford,MA, USA) при длинах волн возбуждения и излучения, равных 276 нм и 302 нм соответственно. Ацетаминофен обнаруживали с использованием УФ-детектора (DualAbsorbance Detector 2487, Waters, Milford, USA) при длине волны 254 нм. Отфильтрованная и дегазированная мобильная фаза содержала 60% Н 2 О (об/об), 40% ACN (об/об) и 0,05% метансульфокислоты (об/об). Объем впрыска составлял 50 мкл,скорость потока равнялась 1,0 млмин-1. Концентрация ротиготина была определена количественно согласно 3 стандартам при концентрации, равной 0,005, 2 и 5 мкгмл-1. Внутрианалитическая вариация величин времени удерживания и площади была менее 2,0%. В случае ацетаминофена калибровочные кривые характеризовались линейной зависимостью при использовании концентраций соединений в интервале между 0,1 и 40 мкгмл-1(r20,9999). Предел обнаружения (LOD) и предел нижней границы, определяемых концентраций (LOQ) ацетаминофена, были определены опытным путем при концентрациях 5,8 и 9,6 нгмл-1 соответственно. Согласно литературным данным предел детектирования ротиготина (основания) составляет 11 нгмл-1. Анализ полученных данных Дня определения устойчивого состояния потока во время пассивного и ионофоретического переноса строили график зависимости кумулятивной скорости потока при переносе от времени. Устойчивое состояние потока определяли по линейной части наклона этой линии по методу определения латентного периода проницаемости. Все данные представлены как среднее значениестанд. отклонение (s. d.). Когда проводили статистический анализ при сравнении только 2 групп, применяли t-критерий Стьюдента. Когда сравнивали 3 и более групп, применяли однофакторный метод статистического дисперсионного анализа ANOVA. Если общая р-величина была менее 0,05, для сравнения разных групп использовали поправку Бонферонни. При проведении статистического анализа уровень значимости р был менее 0,05(р 0,05). Пример 1. Растворимость гидрофосфата ротиготина и гидрохлорида ротиготина. Максимальные величины растворимости гидрохлорида ротиготина (сокращение RoHCl) и гидрофосфата ротиготина (сокращение ротиготинН 3 РО 4 или RoН 3 РО 4) определяли в зависимости от величины рН в ряде растворителей (табл. 1). RoН 3 РО 4 растворялся в указанном буфере, после чего величину рН полученного раствора доводили до целевой величины путем добавления раствора гидроокиси натрия. Во время этого добавления ротиготин осаждался, что свидетельствовало о достижении насыщения. Лекарство определяли методом ВЭЖХ в отфильтрованном растворе. Таблица 1. Растворимость ротиготинаН 3 РО 4 и ротиготинаHCl в различных средах при величине рН 4, 5 и 6 в присутствии и в отсутствие 68 нМ NaCl (n=2-3) Как показано в табл. 1, в присутствии NaCl в составе донора растворимость ротиготина значительно увеличилась, когда HCl была заменена Н 3 РО 4. При выбранных величинах рН добавление NaCl не влияет существенно на растворимость ротиготинаН 3 РО 4 (двухфакторный дисперсионный анализ ANOVA; рН 0,05), что противоречит результатам, полученным для ротиготинаHCl (см. Nugroho). В случае ротиготинаHCl растворимость сильно уменьшалась после добавления 68 мМ NaCl. Величина рН оказывает очень сильное влияние на растворимость ротиготинаН 3 РО 4. Уменьшение величины рН в донорной фазе от 6 до 5 и затем до 4 привело к значительному увеличению растворимости ротиготина (двухфакторный дисперсионный анализ ANOVA; р 0,05). По сравнению с ротиготиномHCl растворимость ротиготинаН 3 РО 4 в 2, 7, 12 раз больше при рН 6, 5 и 4 соответственно. Далее, в противоположность растворимости гидрохлоридной соли наличиеNaCl не влияет на растворимость ротиготинаН 3 РО 4. Пример 2. Опыты с проведением ионофореза. Многие из опытов проводили при следующих условиях - стандартные условия (если иное не оговорено, то эти условия использовались в примерах): донорный растворитель: цитратный буфер (10 мМ цитрата, см. табл. 2), 4 г/л NaCl и 23 г/л маннита, рН указан в опыте. Таблица 2. Величины концентраций, применяемые для получения цитратных буферов при указанных значениях рН, другие компоненты - см. выше Приготовление донорной жидкости: ротиготинН 3 РО 4 в определенном количестве растворяют в указанном донорном растворителе с получением достаточного количества донорной жидкости с выбранной концентрацией. Величину рН полученного раствора доводят до нужного значения путем добавления раствора гидроокиси натрия. Затем раствор отфильтровывают через мембранный фильтр (размер пор 0,45 мкм) и разбавляют тем же самым донорным растворителем, чтобы получить концентрированный раствор лекарства указанной концентрации. Акцепторная жидкость: PBS, рН 6,2, 0,965 г/л KH2PO4, 0,425 г/л Na2HPO42 Н 2 О, 8 г/л NaCl, 0,19 г/лKCl. Катодная жидкость: PBS, рН 7,4, 0,19 г/л KH2PO4, 1,44 г/л Na2HPO42 Н 2 О, 8 г/л NaCl, 0,19 г/л KCl. Скорость потока ацепторной жидкости 6,5 мл/ч. Температура ванны циркулирующей воды 37 С. Протокол ионофореза: 6 ч - отсутствие тока, 9 ч - 500 А/см 2, 5 ч - отсутствие тока. Расчет устойчивого состояния потока: средние величины скорости потока, записанные с интервалом времени, в течение которого каждая величина отклоняется не более чем на 10% от среднего значения. Ионофоретические ячейки, использовавшиеся в опытах, представляли собой ячейку с тремя отделениями. Пример устройства ячейки показан на фиг. 1. Как показано на фиг. 1, ячейка состоит из трех отделений. Анодное (+ электрод) и катодное (- электрод) отделения, в которых расположены Ag- и AgCl-электрод соответственно. В донорном (анодном) отделении находится положительно заряженное лекарство ротиготин, растворенное в буферном растворе. Между анодным и катодным отделениями расположено третье отделение. Во время ионофореза постоянный поток буфера проходит через это отделение, стимулируя поток крови in vivo. На обеих сторонах центрального отделения кожа человека зажимается (между анодно-акцепторным отделением и катодно-акцепторным отделением). Кожа зажимается таким образом, что внутренний слой кожи или роговой слой обращен к отделению с акцептором. Таким образом, имитируется in vivo ситуация. Некоторые из этих условий в опытах менялись для того, чтобы изучить влияние их изменения на скорость потока лекарства. Как указано ниже, для изучения ионофоретической доставки ротиготинаН 3 РО 4 осуществлялась серия исследований ионофоретического переноса в различных условиях. В течение 6 ч до начала ионофореза ток не пропускали, наблюдали за пассивным переносом ротиготина, который достигал своего стабильного состояния в течение этих 6 ч. По наклону линейной части кривой зависимости кумулятивного потока от времени рассчитывали скорость потока в пассивном стабильном состоянии (Fluxpss). Изучали также влияние величины рН раствора донора на пассивный перенос ротиготинаН 3 РО 4. Результаты изучения переноса при разных концентрациях донора при величине рН донора, равной 5 и 6, показаны на фиг. 4. Нелинейное гиперболическое соответствие показало наличие корреляции между Fluxpss и концентрацией донора при рН 5 (R2=0,889). Увеличение величины рН донорной фазы от 5 до 6 приводило к увеличению пассивного потока ротиготинаН 3 РО 4 очень резко: близко к насыщению ротиготинаН 3 РО 4 в донорной фазе могла быть достигнута максимальная величина потока, равная 10,81,9 нмолсм-2 ч-1 при рН 5 и равная 24,9 нмолсм-2 ч-12,5 при рН 6. Для изучения ионофоретического переноса ротиготинаН 3 РО 4 был проведен ряд исследований при различных условиях, особое внимание обращалось на: (i) отношение между скоростью потока и концентрацией донора, (ii) влияние величины рН, (iii) определение числа переноса, (iv) влияние плотности тока,(v) влияние хлоридной соли и (vi) in vivo моделирование.(i) Влияние концентрации донора В опытах по изучению переноса использовали 4 различные концентрации ротиготинаН 3 РО 4 (4,4,9,5, 22,2 и 47,5 мМ, что соответствует концентрациям свободного основания ротиготина, равным 1,4, 3, 7 и 15 мг/мл соответственно). Все опыты по изучению переноса проводились в присутствии 68 мМ NaCl в донорной фазе. Таблица 3. Зависимость скорости потока в устойчивом состоянии от концентрации лекарства в донорной фазе, условия: рН 5,0, другие условия см. в тексте Примечание. Средние величины получены в результате 4 опытов, в табл. 3 указаны номинальные концентрации, действительные концентрации лекарства различны в разных опытах. Самая высокая концентрация лекарства на графике, представленном на фиг. 2, составляет 80% от величины максимальной растворимости ротиготинаН 3 РО 4 при величине рН 5,0. Линейное отношение между концентрацией лекарства в интервале от 0,5 до 1,4 мг/мл и скоростью потока в устойчивом состоянии, наблюдавшееся ранее для ротиготинаHCl, в интервале более высоких концентраций между 1,4 и 15 мг/мл, больше не наблюдается. Вместо этого увеличение концентрации от 7 до 15 мг/мл привело к возрастанию скорости потока всего лишь от 38 до 41 мкг/см 2/ч. Как показано на фиг. 3, данное изобретение приводит к немедленному увеличению скорости потока ротиготинаН 3 РО 4, который достигает устойчивого состояния в течение 4 ч. Результаты ряда опытов по изучению ионофоретического переноса при различных концентрациях ротиготинаН 3 РО 4, изменяющихся от 4,4 до 47,5 мМ при величинах рН, равных 5 и 4,4, и 13,5 мМ (миллиимолей) при рН 6, показаны на фиг. 2 и 4. Существует нелинейное отношение между Fluxss и концентрацией донора при величине рН 5(R2 =0,825). При этом Fluxss при одинаковой концентрации ротиготинаН 3 РО 4 увеличивается с увеличением величины рН раствора донора.(ii) Влияние величины рН Помимо описанных в (i) опытов по изучению переноса при 4 различных концентрациях ротиготинаН 3 РО 4 (4,4; 9,5; 22,2 и 47,5 мм) при рН 5, был изучен также перенос ротиготинаН 3 РО 4 (4,4 и 13,0 мм) при рН 6. Все опыты по изучению переноса проводились в присутствии 68 мМ NaCl в донорной фазе. Однако, сравнивая величины Fluxss при величине рН 5 и 6, близкие к состоянию насыщения в донорной фазе, можно отметить, что Fluxss очень похожи на величины, показанные на фиг. 4. Были также проведены опыты по изучению влияния величины рН и концентрации донора на скорость переноса лекарства при пассивном и ионофоретическом переносе. Акцепторный растворитель (с рН 6,2) был одним и тем же во всех опытах. В табл. 4 и на фиг. 5 показано влияние величины рН и концентрации лекарства на скорость потока ротиготина в устойчивом состоянии во время пассивной и активной стадий переноса в ряде опытов. Таблица 4. Влияние величины рН донорного раствора на скорость потока лекарства при пассивном и ионофоретическом переносе лекарства ротиготина (рассчитано на свободное основание ротиготина) Как можно видеть, наиболее высокие достигнутые концентрации ротиготина при рН 5,0, 5,5 и 6,0,равны примерно 4, 10 и 15 мг/мл, что составляет 90% (при рН 5,0 и 5,5) или 80% (при рН 6,0) от максимальной величины растворимости соли присоединения кислоты к ротиготину, например к ротиготинуН 3 РО 4 при этой величине рН.(iii) Определение числа переноса В единственном опыте изучали зависимость между Fluxss и плотностью тока с раствором донора,буферированным при рН 5,5 и содержащим 31,3 мМ ротиготинаН 3 РО 4 в присутстви 68 мМ NaCl. Применяли следующий протокол: 6 ч - пассивная фаза + 6 ч - 166 мкАсм-2 + 6 ч - 333 мкАсм-2 + 6 ч - 500 мкАсм-2 + 6 ч - пассивная фаза. Концентрация донора составляла 90% от максимальной растворимости ротиготинаН 3 РО 4 в этих условиях. Увеличение плотности тока привело к значительному возрастанию скорости потока, который достиг устойчивого состояния в течение 6 ч. Величины плотности тока, равные 0 (пассивная фаза), 166, 333 и 500 мкАсм-2, привели к достижению величин Fluxss, составляющих 24,41,9; 65,89,3; 109,715,7 и 154,527,0 нмолсм-2 ч-1 соответственно. Отличное линейное соответствие можно было наблюдать между Fluxss и плотностью тока (R2=0,999), число переноса было рассчитано по наклону линии, отражающей корреляцию при 0,7%. Число переноса ротиготинаН 3 РО 4 при рН 5,5 в присутствии 68 мМ NaCl определяли по наклону кривой зависимости Fluxss от плотности тока при 0,7%,это число выше, чем число переноса ротиготинаHCl (0,4%) при рН 5, что может быть объяснено более высокой концентрацией ротиготинаН 3 РО 4 в растворе донора.(iv) Влияние плотности тока Величина плотности тока во время эксперимента менялась следующим образом: 0-6 ч - тока нет; 612 ч - 167 мкА/см 2; 12-18 ч - 333 мкА/см 2; 18-24 ч - 500 мкА/см 2; 24-30 ч - тока нет. Протокол а: влияние плотности ионофоретического тока на устойчивое состояние потока изучали при концентрации донора (рассчитано на свободное состояние), равной 7 мг/мл, и рН 5,0. В каждом опыте применяли три значения плотности тока с двумя ячейками на каждую величину плотности тока. Протокол b: влияние плотности ионофоретического тока на устойчивое состояние потока изучали при концентрации донора (рассчитано на свободное состояние), равной 9,9 мг/мл (31,3 мМ) (90% от максимальной растворимости при рН 5,5) и при рН 5,5. В каждом опыте применяли три значения плотности тока с двумя ячейками на каждую величину плотности тока. Результаты приведены в табл. 5. Таблица 5. Плотность потока при ионофоретическом устойчивом состоянии при различных величинах плотности тока, концентрация лекарства 7 мг/мл (протокол а) и 9,9 мг/мл (протокол b) Из этих результатов, как показано на фиг. 6, можно сделать вывод, что имеется линейная зависимость между использованными величинами плотности тока и трансдермальным потоком ротиготина при обеих величинах рН и концентрации. В отсутствие тока наблюдался поток лекарства, который отражает уровень пассивной диффузии. Изменение плотности тока приводит к быстрому изменению потока ротиготина предсказуемым путм и, следовательно, плотность потока может быть отрегулирована в соответствии с требованиями индивидуального пациента. Зависимость от плотности тока далее изучалась для концентрации ротиготинаH3PO4, равной 31,3 мМ, раствор был буферирован лимонной кислотой до рН 5,5, в него добавляли 68 мм NaCl. Применяли следующий протокол: 6 ч - пассивная фаза + 6 ч - 166 мкАсм-2 + 6 ч 333 мкАсм-2 + 6 ч - 500 мкАсм-2 + 6 ч - пассивная фаза.(v) Влияние хлорида натрия Как показано в табл. 1, хлорид натрия не оказывает отрицательного влияния на растворимость фосфата ротиготина и поэтому хлорид натрия может добавляться к раствору донора для осуществления электрохимической реакции на аноде.(vi) In vivo моделирование После оценки и оптимизации трансдермальной доставки этого обещающего соединения in vitro изучали возможность ионофоретической доставки ротиготина in vivo путм ряда имитаций, используя метод фармакокинетического моделирования. Первая стадия заключалась в определении параметров,регулирующих in vitro ионофоретическую доставку ротиготинаН 3 РО 4 (47 мМ), буферированного до рН 5, через роговой слой человека. Величина Fluxss хорошо коррелирует с величиной, рассчитанной по методу латентного периода проницаемости. Кроме того, диагностические графики моделирования данных подтверждают, что эта модель успешно описывает in vitro ионофоретический перенос ротиготинаН 3 РО 4. На следующей стадии очевидные фармакокинетические параметры, описанные в литературе,объединялись с наиболее подходящими параметрами Fluxss, KR и tL для прогнозирования уровней лекарства в плазме in vivo. В случае такого моделирования для оценки ионофоретической доставки ротиготина(47 мМ, рН 5) в течение 24 ч использовали два разных протокола и проводили сравнение с пассивной доставкой ротиготина. Как известно из литературы, пассивная доставка ротиготина при помощи пластыря с площадью 10 см 2, в количестве 2 мг за 24 ч приводила к максимальной концентрации в плазме(Cmax), составляющей 215 пгмл-1 через 16 ч 21. Как показано на фиг. 7, использование плотности тока,равной 350 мкАсм-2, в течение 24 ч (протокол 1) должно было привести к Cmax, равной 630 пгмл-1. При помощи ионофореза может быть достигнута не только более высокая скорость потока, более интересным является то, что уже через 5 ч может быть достигнута концентрация лекарства в плазме, равная 240 пгмл-1. Следовательно, in vivo ионофоретическая доставка ротиготина была имитирована с применением протокола 2, когда вначале плотность тока в течение 5 ч составляла 350 мкАсм-2, после чего величину плотности тока снижали до 150 мкАсм-2, что привело к устойчивой концентрации лекарства в плазме в течение 19 ч. Это моделирование демонстрирует два очень важных преимущества ионофоретической доставки ротиготина в комбинации с ионофорезом для симптоматического лечения болезни Паркинсона по сравнению с трансдермальной пассивной диффузией. Вследствие активной трансдермальной доставки время для достижения желаемого уровня может быть значительно снижено. Кроме этого, возможно осуществлять титрование концентрации лекарства в плазме путм регулирования плотности тока, что позволяет индивидуально модулировать доставку в соответствии с желательным режимом прима лекарства. Заключение Одно из преимуществ данного изобретения состоит в увеличении растворимости ротиготинаН 3 РО 4 по сравнению с растворимостью ротиготинаHCl, что приводит к увеличению максимального ионофоретического переноса лекарства. При рН 5 достигается максимальный ионофоретический перенос, составляющий 80,214,4 нмолсм-2 ч-1, в то время как в случае ротиготинаН 3 РО 4 максимальная величина ско- 14021940 рости потока составляла 135,812,5 нмолсм 2 ч-1. Это означает, что максимальная скорость потока может быть увеличена до 170% за счт замены гидрохлоридной соли фосфатной солью. Кроме более высокой скорости потока можно отметить другое практическое преимущество, заключающееся в том, что можно использовать высокую концентрацию донора при рН 5. Данные показали, что в этом случае через 24 ч при поддержании максимальной скорости потока, составляющей 135,8 нмолсм-2 ч-1, количество ротиготинаH3PO4 в донорной фазе снизилось на 35%. В случае стабильного состояния потока это уменьшение концентрации донора привело к снижению только на 10%, что свидетельствует о том, что при высокой концентрации донора высокая скорость потока лекарства может поддерживаться в течение длительного времени. Рассматривая эти результаты в сочетании, предпочтительно можно найти баланс между эффективностью переноса и концентрацией донора путм выбора величины рН раствора донора. С одной стороны, путм увеличения значения рН можно повысить эффективность переноса, однако ограниченная растворимость соединения при рН 6, препятствует использованию высокой концентрации. С другой стороны, при величине рН 6, эффективность переноса меньше, тем не менее может быть достигнута высокая скорость потока в течение длительного времени благодаря более высокой растворимости ротиготинаН 3 РО 4. Полученные данные свидетельствуют о том, что ионофорез ротиготина с использованием солей присоединения кислот к ротиготину, в частности дигидрофосфата ротиготина, обеспечивающий более высокую чем 16 мкмол/мл растворимость соли до насыщения в водном растворе при величине рН менее 6 и/или растворимость соли до насыщения в водном растворе, равную по меньшей мере 30 мкмол/мл при рН 5,является обещающим, причм все указанные выше величины растворимости до насыщения рассчитаны на основе общего количества ротиготина в фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты. Могут быть достигнуты величины скорости потока лекарства около 50 мкг/см 2/ч. Была получена линейная зависимость между ионофорезом (устойчивым состоянием потока) и плотностью тока, что позволяет осуществлять титрование индивидуальной дозы для пациента. Пример 3. Общая методика получения кислотно-аддитивной соли ротиготина. Свободное основание ротиготина (6 г) растворяли в изопропаноле (IPA) (24 мл, 4 объма) при температуре окружающей среды (примерно 20 С) и 800 мкл раствора помещали в сосуд, который закрывали пробкой и оставляли при температуре окружающей среды на 1,5 ч. Раствор нагревали до 60 С и добавляли кислоту в виде раствора (1 экв. в воде (Н 2 О) или THF в зависимости от растворимости). Реакционную смесь перемешивали при повышенной температуре в течение 10 мин и затем медленно охлаждали до температуры окружающей среды. Через 2 ч выдержки при температуре окружающей среды раствор хранили при температуре 4 С в течение 16 ч. Дигидрофосфат ротиготина (LJC - 028 - 037 - 1) Свободное основание ротиготина (500 мг, 1,5810-3 моль) помещали в круглодонную колбу объмом 5 мл и при температуре окружающей среды добавляли IPA (1,5 мл, 3 в). В раствор в виде тврдого вещества добавляли Н 3 РО 4 (171 мг, 1,1 экв.), немедленно происходила агломерация образовавшегося тврдого продукта. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре окружающей среды и обрабатывали ультразвуком для того, чтобы разрушить комок продукта. Полученный порошок перемешивали в течение 1 ч и затем отфильтровывали тврдое вещество и промывали его. Тврдый продукт начал расплываться и поэтому попал опять в фильтраты, после чего добавляли Н 2 О (75 мкл). Реакционную смесь нагревали до 55 С, выдерживали при этой температуре в течение 15 мин и охлаждали до температуры окружающей среды. После 12 дней выдержки без перемешивания при температуре окружающей среды от смолы отделяли жлтый раствор и концентрировали его под вакуумом с получением почти белого тврдого вещества. Полученный продукт сушили в печке при температуре, равной 40 С,под вакуумом в течение 2 ч. Получали аморфное тврдое вещество с выходом 525 мг, который анализировали методом XRPD (фиг. 8). Дифрактограмма этого вещества не могла считаться эталоном, так как оно было аморфным. Важно иметь в виду, что в некристаллическом веществе молекулы образца ориентированы хаотично и, следовательно, будут иметь спектр Фурье непрерывного характера, амплитуда которого распределяется более однородно и со значительно уменьшенной интенсивностью и, что более важно, потеряна информация об ориентации. В кристалле молекулы принимают ту же самую ориентацию, что и в жидкости, в порошке или в аморфном состоянии, наблюдаемый сигнал усредняется при возможных ориентациях молекул. Поэтому соль была далее охарактеризована методом 1H ЯМР (фиг. 9)(она содержит небольшие количества IPA) и методом элементарного анализа. Содержание углерода и водорода определяли в соответствии с DIN 51721; содержание фосфора и серы определяли в соответствии с DIN EN 1189 (фотометрически): С 51,3%, Н 6,96%, S 6,75%, Р 8,17%, все эти данные соответствуют расчту. Метод дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) не позволил получить чткого сигнала. Аналитические методы Ядерно-магнитная резонансная спектроскопия (ЯМР) Все спектры снимали на спектрометре Bruker AVANCE 400 MHz Spectrometer в DMSO (в диметилсульфоксиде). Рентгеновская порошковая дифрактометрия (XRPD) Рентгеновскую порошковую дифрактометрию проводили на дифрактометре Bruker C2, снабжнномXYZ-приставкой и лазерным видеомикроскопом для автоматического размещения образцов; и детектором HiStar area Detector с типичным временем сбора данных, составляющим 120 с. Напряжение и сила тока в герметичной медной трубке (Cu K-излучение; 1,5406 ) были равны 40 кВ и 40 мА. Рентгеновская оптика в дифрактометре С 2 состоит из единственного зеркала Gbel, соединнного с коллиматором,имеющим точечную диафрагму диаметром 0,3 мм. Расходимость пучка лучей, а именно эффективный размер пятна рентгенограммы был равен примерно 4 мм. Тета - тета непрерывное сканирование проводили на расстоянии образца от детектора, равном 20 см, эффективный интервал углов 2 был равен 3,229,8. Ежемесячно проверяли калибровку прибора со стандартом ( - Al2O3) (плоская пластинка NIST 1976) методом корундового числа. Подготовка образцов проводилась путм лгкого прижатия образца весом 1-2 мг к стеклянному слайду для получения ровной поверхности. Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC) Данные DSC получали при помощи прибора ТА instruments Q 1000. Калибровку по энергии и температуре проводили при помощи стандарта, представляющего собой индий. Образцы нагревали со скоростью 10 С/мин в атмосфере азота (скорость продувки равнялась 30 мл/мин) в открытых алюминиевых поддонах, если не указано иное. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения расстройств ЦНС, таких как болезнь Паркинсона, синдром беспокойных ног, синдром паркинсонизма плюс, депрессия, фибромиалгия и/или симптомы паркинсонизма, содержащая дигидрофосфат ротиготина, причем величина рН фармацевтической композиции 5. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фармацевтически приемлемый электролит. 3. Фармацевтическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что электролит представляет собой хлоридную соль. 4. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что концентрация хлоридной соли составляет от 1 до 140 ммол/л. 5. Фармацевтическая композиция по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция содержит дигидрофосфат ротиготина в количестве менее 100% в расчете на количество, необходимое для достижения насыщения. 6. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-5 в составе системы для трансдермальной доставки. 7. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-5 в составе системы для трансдермальной доставки, которая представляет собой ионофоретическую систему. 8. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-5 для профилактики или лечения расстройств ЦНС, таких как болезнь Паркинсона, синдром беспокойных ног, синдром паркинсонизма плюс, депрессия, фибромиалгия и/или симптомы паркинсонизма. Фиг. 2. Ионофоретическое стабильное состояниест. откл. (n=1-4 ячейки) потока ротиготина в зависимости от конц. лекарства. рН (донор) = 5,0. Другие условия см. в тексте. Ровная линия из уравнения: поток = 7,94Ln (Roконц.) + 19,09 Фиг. 3. Профиль времени истечения при ионофорезе для ротиготинаН 3 РО 4, раств. в буферном растворе лимонной кислоты, рН 5, содержащем 68 мМ NaCl при двух различных конц., 9,5 мМ (квадраты) и 22,0 мМ (замкн. треугольники). Данные показывают сред. зн.ст. откл. (n=3). Плотность тока =500 мкАсм-2(квадраты). Линия корреляции пассивного Fluxss в зависимости от конц. донора является сплошной, а линия корреляции ионофоретического Fluxss - прерывистой. Данные показывают среднее значениест. откл. (n=3) Фиг. 5. Совместное влияние рН раствора донора и конц. лекарства во время пассивных и ионофоретических стадий трансдермального устойчивого потока ротиготина. Линии рассчитаны по уравнениям: Фиг. 6. Влияние плотности тока на величину потока лекарства в трансдермальном устойчивом состоянии из донорных растворов, содержащих 7,0 мг/мл/ рН 5,5 (протокол а) или 9,9 мг/мл/ рН 5,5 (протокол b) Фиг. 7. Прогноз моделирования ионофоретической доставки ротиготинаН 3 РО 4 (47 мМ) с применением разных протоколов: протокол 1: 24 ч, 350 мкАсм-2; протокол 2: 5 ч, 350 мкАсм-2+19 ч, 150 мкАсм-2. Кружочки обозначают среднее геометрическое предсказание концентрации в плазме (Ср)