Применение глюкагоноподобного пептида-1 (glp-1) или его аналогов для устранения катаболических изменений после оперативного вмешательства

1 Предпосылки создания изобретения 1. Область, к которой относится изобретение. Настоящее изобретение относится к способу ускорения выздоровления после оперативного вмешательства посредством предотвращения катаболической реакции и невосприимчивости к инсулину, вызванных хирургической травмой. 2. Вспомогательная информация. В западном мире ежегодно производят приблизительно 20000-25000 оперативных вмешательств на миллион жителей. Хирургическая травма, подобно любой другой травме, служит причиной явно выраженных изменений в обмене веществ [Шо Дж.Г.Ф. (Shaw J.H.F.) и другие,Ann. Surg., 209 (1):63-72 (1989); Литтл Р.А. (Little R.A.) и другие, Prog. Clin. Biol. Res. 263A:463-475 (1987); Фрейн К.Н. (Frayn K.N.),Clin Endocrinol. 24:577-599 (1986); Бранди Л.(Brandi L.) и другие, Clin. Sci. 85:525-35 (1993)]. Ускоренный синтез глюкозы, основного "топлива" регенерации тканей, представляет собой серьезное изменение обмена веществ после оперативного вмешательства, и происходит он за счет белка и энергетических запасов организма[Гамп Ф.Е. (Gump F.E.) и другие, J. Trauma,14:378-88 (1974); Блек Р.Б. (Black R.B.) и другие, Ann. Surg. 196:420-35 (1982)]. Ранее подобные изменения приписывали глюкорегуляторным стрессовым гормонам и другим катаболическим факторам, например,цитокинам, которые выделяются в виде реакции на травму. Чем более выражены изменения в сторону катаболизма, тем выше смертность и тем медленнее выздоровление пациента [Торелл А. (Thorell A.) и другие, Eur. J. Surg., 159:593-99Intern. Med., 147:1273-8 (1987)]. Послеоперационные катаболические состояния могут лечиться анаболическими гормонами, в частности, соматотропным гормоном и инсулиноподобным фактором роста-1 (IGF-1)Parent. Ent. Nutr. 14 (6):574-81 (1990)]. Результаты некоторых исследований показывают явно выраженное благотворное воздействие лечения инсулином на пациентов с катаболической травмой [Хинтон П. (Hinton P.) и другие, Lancet,17 (Апрель):767-69 (1971); Шизгал Г. (Shizgal Н.) и другие, Am. J. Clin. Nutr., 50:1355-63Res. 40:395-405 (1986); Сакураи И. (Sakurai Y.) и другие, Ann. Surg. 222:283-97 (1995)]. Результаты других исследований, однако,показывают, что послеоперационное благотвор 003701 2 ное воздействие инсулина часто ухудшается невосприимчивостью к инсулину. В случае невосприимчивости к инсулину нормальные концентрации инсулина вызывают реакции ниже нормального уровня. Невосприимчивость к инсулину может быть обусловлена снижением степени связывания инсулина с рецепторами,находящимися на поверхности клеток, либо изменениями внутриклеточного обмена веществ. Первый упомянутый случай, характеризующийся как снижение чувствительности к инсулину,может, как правило, преодолеваться повышенной концентрацией инсулина. Второй упомянутый случай, характеризующийся как снижение восприимчивости к инсулину, не может быть преодолен большими количествами инсулина. Невосприимчивость к инсулину после травмы может быть преодолена дозами инсулина, пропорциональными степени невосприимчивости к инсулину, и, таким образом, явно представляет собой снижение чувствительности к инсулину [Бранди Л.С. (Brandi L.S.) и другие,Clin. Science 79:443-450 (1990); Хендерсон А.А.(1990)]. Снижение чувствительности к инсулину после планового полостного оперативного вмешательства длится, как минимум, пять дней, но не более трех недель, и наиболее выражено в первый послеоперационный день. Для нормализации может потребоваться до трех недель. [Торелл A. (Thorell А.) и другие, (1993)]. Причины наблюдаемой временной невосприимчивости к инсулину после травмы не совсем понятны. Как кортизол, так и глюкагон могут способствовать возникновению катаболической реакции на травму [Альберти К.Г.М.М.Clin. Invest. 49:2256-70 (1970)]. Данные исследований послеоперационной невосприимчивости к инсулину не показали, однако, какой-либо корреляции между изменениями в уровнях упомянутых катаболических гормонов и изменениями степени чувствительности к инсулину после оперативного вмешательства [Торелл A.(Thorell А.) и другие (1993); Торелл A., Karolinska Hospital and Institute, 10401 Стокгольм,Швеция (1993); Торелл А. и другие, Вr. J. Surg. 81:59-63 (1994)]. Повышенная доступность липидов после травмы может вызывать невосприимчивость к инсулину в цикле глюкоза-жирные кислотыRev. 4 (7):623-38 (1988)]. Повышенная доступность свободных жирных кислот (FFA) вызывала невосприимчивость к инсулину и изменяла окисление субстрата с глюкозы на жир, даже в случае одновременного вливания инсулинаJ. Physiol. 259:E736-50 (1990); Бонадонна Р.К. и другие, Am. J. Physiol. 257:E49-56 (1989)]. Плановая операция обычно осуществляется после голодания в течение ночи для снижения опасности, связанной с анестезированием. Эта укоренившаяся практика голодания пациента в течение ночи (10-16 ч) перед оперативным вмешательством ускоряет развитие катаболического состояния и усугубляет невосприимчивость к инсулину. Результаты исследований,проведенных на крысах, подвергавшихся стрессовым нагрузкам, например, кровотечению и эндотоксикозу, показали, что голодание в течение менее 24 ч оказывает явное влияние на катаболическую реакцию на травму [АлибеговичSurg., 157:85-89 (1991); Лунгквист О. (Ljungqvist О.) и другие. Am. J. Physiol., 22:E692-98 (1990)]. Даже непродолжительное голодание перед появлением травмы у крыс вызывает существенное снижение углеводных резервов, глубокие изменения в гормональной среде, повышает реакцию на стресс и, что важнее всего, увеличивает смертность [Алибегович А. и другие, Circ.Shock, 39:1-6 (1993)]. Введение глюкозы перед оперативным вмешательством, осуществляемое перорально[Нигрен Дж. (Nygren J.) и другие, Ann. Surg. 222:728-34 (1995)] либо посредством вливания,снижает невосприимчивость к инсулину после оперативного вмешательства по сравнению с голодавшими пациентами. У пациентов, которым в течение ночи перед плановой полостной хирургической операцией вливали глюкозу (5 мг/кг/мин), чувствительность к инсулину после упомянутой операции снизилась, в среднем, на 32%, в то время как у пациентов, подвергшихся оперативному вмешательству после традиционного голодания в течение ночи, чувствительность к инсулину снизилась, в среднем, на 55%[Лунгквист О. и другие, J. Am. Coll. Surg. 178:329-36 (1994)]. Наряду с отрицательным воздействием голодания на выздоровление после оперативного вмешательства, иммобилизация пациента и питание пониженной калорийности во время и после оперативного вмешательства также повышают невосприимчивость к инсулину после упомянутого оперативного вмешательства. У здоровых добровольцев, как было показано, 24 часовая иммобилизация и питание пониженной калорийности вызывали 20-30% повышение невосприимчивости периферической нервной системы к инсулину. Таким образом, невосприимчивость к инсулину после предоперационного вливания глюкозы, о которой сообщалось ранее [Лунгквист О., (1994)], может, отчасти,вызываться аддитивным эффектом послеопера 003701 4 ционного постельного режима и питанием пониженной калорийности. Учитывая степень преобладания оперативных вмешательств, важно свести до минимума отрицательные побочные явления, например,катаболическую реакцию и невосприимчивость к инсулину, для улучшения выздоравливаемости и снижения смертности. Послеоперационная невосприимчивость к инсулину ухудшает эффективность лечения упомянутого катаболического состояния с помощью инсулина. Укоренившаяся медицинская практика предоперационного голодания обостряет послеоперационное катаболическое состояние и невосприимчивость к инсулину. Необходим, таким образом, способ лечения, преодолевающий как катаболическое состояние, так и невосприимчивость к инсулину. Как раскрывается в настоящем описании,одним из таких способов лечения, преодолевающим как катаболическое состояние, так и невосприимчивость к инсулину, является совместное введение глюкозы и инсулина перед,во время и после оперативного вмешательства. Вливание инсулина, однако, создает потенциальную возможность возникновения гипогликемии, которая определяется как уровень глюкозы в крови ниже 0,3 мМ. Гипогликемия повышает опасность желудочковых экстрасистолий и представляет собой опасное последствие вливания инсулина. С целью предотвращения гипогликемии был разработан алгоритм вливания инсулина для диабетиков [Хендра Т.Дж. (Hendra Т.J.) и другие, Diabetes Res. Clin. Pract., 16:213220 (1992)]. Однако в случае применения упомянутого алгоритма, гипогликемия развилась у 21% пациентов. В другом исследовании, посвященном контролированию уровня глюкозы после инфаркта миокарда, гипогликемия развилась у 18% пациентов в случае вливания инсулина и глюкозы [Мальмберг К.А. (Malmberg K.A.) и другие. Diabetes Care, 17:1007-1014 (1994)]. При вливании инсулина также часто требуется контролирование уровней глюкозы в крови для того, чтобы можно было обнаружить появление признаков гипогликемии и снять их как можно быстрее. У пациентов, которым в ходе осуществления вышеупомянутого исследования [Мальмберг, 1994] производили вливание инсулина, уровни глюкозы в крови измеряли, как минимум, через каждый час и, в соответствии с этим, корректировали скорость вливания. Таким образом, безопасность и эффективность способа лечения пациентов с инфарктом миокарда посредством вливания инсулина и глюкозы зависит от простоты и скорости доступа к данным, касающимся уровня глюкозы в крови. Подобная настоятельная потребность контролирования уровня глюкозы в крови возлагает тяжелое бремя на медицинский персонал,а также повышает неудобства и стоимость лечения. В результате этого клинические отделения 5 предоперационной подготовки часто не выделяют ресурсов на контролирование и приведение уровней глюкозы в крови в оптимальное состояние перед оперативным вмешательством,которого, например, можно было бы добиться посредством внутривенного введения инсулина. Учитывая опасность и нагрузку, связанные с вливанием инсулина, необходим альтернативный подход к пред/послеоперационному контролированию катаболических реакций на травму. Гормон инкретин, глюкагоноподобный пептид 1, сокращенно обозначаемый, как GLP1, образуется из проглюкагона в желудочнокишечном тракте и усиливает выделение инсулина, индуцируемое питательными веществами[Крциманн Б. (Krcymann В.) и другие, Lancet 2:1300-1303 (1987)]. Известно, что различные процессированные формы GLP-1 стимулируют секретирование инсулина (инсулинотропное действие) и образование цАМФ [см., например,Мойсов С. (Mojsov S.), Int. J. Peptide Protein Research, 40:333-343 (1992)]. Была установлена взаимосвязь между результатами различных лабораторных экспериментов in vitro и инсулинотропными реакциями млекопитающих, особенно людей, на экзогенное введение GLP-1,GLP-1(7-36) амида и GLP-1(7-37) кислоты [см.,например. Наук М.А. (Nauck M.A.) и другие,Diabetologia, 36:741-744 (1993); Гутняк М. (Gutniak М.) и другие, New England J. of Medicine,326 (20):1316-1322 (1992); Наук M.A. и другие,J. Clin. Invest, 91:301-307 (1993); и Торенс Б.(1993)]. GLP-1(7-36) амид оказывает явно выраженное антидиабетогенное воздействие на инсулинозависимых диабетиков посредством стимулирования чувствительности к инсулину и повышения выделения инсулина, индуцированного глюкозой, в физиологических концентрациях [Гутняк М. и другие. New England J. Med. 326:1316-1322 (1992)]. GLP-1(7-36) амид, в случае введения инсулинонезависимым диабетикам, стимулирует выделение инсулина, снижает секретирование глюкагона, замедляет опорожнение желудка и усиливает использование глюкозы [Наук, 1993; Гутняк, 1992; Наук, 1993]. Помехой для использования молекул типаGLP-1 для длительного лечения является то, что период полувыведения таких пептидов из системы кровообращения является весьма непродолжительным. Например, период полувыведения GLP-1(7-37) из системы кровообращения составляет всего лишь от 3 до 5 мин. Период полувыведения GLP-1(7-36) амида, в случае его подкожного введения, составляет приблизительно 50 мин. Таким образом, для достижения продолжительного воздействия упомянутые молекулы GLP должны вводиться посредством непрерывного вливания [Гутняк М. и другие,Diabetes Care 17:1039-1044 (1994)]. В настоящем изобретении непродолжительный период полу 003701 6 выведения GLP-1 из системы кровообращения и последующая необходимость в непрерывном его введении не являются недостатками, поскольку пациент перед проведением хирургической операции, как правило, госпитализируется,и жидкости непрерывно вводятся парентерально перед, в процессе и после оперативного вмешательства. Краткое изложение сущности изобретения Таким образом, настоящее изобретение впервые предоставляет способ ослабления послеоперационных катаболических изменений и невосприимчивости к инсулину и включает введение пациенту, имеющему в этом необходимость, соединения, выбираемого из группы, в состав которой входят GLP-1, GLP-1 аналоги,GLP-1 производные и их фармацевтически приемлемые соли. Краткое описание чертежей Фиг. 1 - кривая изменения (в процентном выражении) скорости вливания глюкозы (GIR) в течение послеоперационного (postop) периода относительно предоперационного (рrеор) периода у шести (6) контрольных пациентов и семи (7) пациентов, получающих гиперинсулинемическое, нормогликемическое вливание перед и в процессе осуществления планового оперативного вмешательства; фиг. 2 - кривая, демонстрирующая влияние непрерывного вливания GLP-1 (7-36) амида на среднюю концентрацию глюкозы в крови (мМ) у пяти инсулинонезависимых пациентов, больных сахарным диабетом (NIDDM), в течение ночи. Упомянутая кривая также показывает влияние непрерывного вливания инсулина на среднюю концентрацию глюкозы в крови у тех же самых пяти инсулинонезависимых пациентов-диабетиков, но в течение другой ночи; фиг. 3 - кривая, показывающая влияние вливания GLP-1(7-36) амида на среднюю концентрацию глюкозы в крови (мМ) у пяти инсулинонезависимых пациентовдиабетиков, при вливании его в течение дня в продолжение 3 ч, начиная с момента начала каждого приема пищи во время завтрака, обеда и ужина. Упомянутая кривая показывает также влияние подкожного введения инсулина на среднюю концентрацию глюкозы в крови у тех же самых пяти инсулинонезависимых пациентов-диабетиков, но в течение другого дня, и с впрыскиванием незадолго до начала каждого приема пищи. Подробное описание изобретения"GLP-1" означает GLP-1(7-37). По традиции, принятой в данной области, аминоконечная область GLP-1(7-37) обозначается номером 7, в то время как карбоксиконечная - номером 37. Аминокислотная последовательность GLP-1(737) хорошо известна в данной области, однако,она приведена далее для удобства читателя:"GLP-1 аналог" определяется, как молекула, имеющая одну или несколько аминокислотных замен, делений, инверсий либо добавок, по сравнению с GLP-1. К числу GLP-1 аналогов,известных в данной области, относятся, например, GLP-1(7-34) и GLP-1(7-35), GLP-1(7-36),Gln9-GLP-1(7-37), D-Gln9-GLP-1(7-37), Thr16Lys18-GLP-1(7-37) и Lys18-GLP-1(7-37). Предпочтительными GLP-1 аналогами являютсяGLP-1(7-36), которые представляют собой биологически процессированные формы GLP-1,обладающие инсулинотропными свойствами. Другие GLP-1 аналоги раскрываются в патенте США 5545618, который включен в настоящее описание в качестве ссылки."GLP-1 производное" определяется, как молекула, имеющая аминокислотную последовательность GLP-1 либо GLP-1 аналога, но дополнительно имеющая химическую модификацию одной или нескольких своих аминокислотных боковых групп, атомов -углерода, конечной аминогруппы либо конечной карбокислотной группы. Химическая модификация включает, но, однако, этим не ограничивается, добавку химических составляющих, образование новых связей и удаление химических составляющих. Модификации аминокислотных боковых групп включают, без ограничения, ацилирование лизиновых -аминогрупп, N-алкилирование аргинина, гистидина либо лизина, алкилирование глутаминовых либо аспарагиновых карбокислотных групп и деамидирование глутамина либо аспарагина. К модификациям конечных аминогрупп относятся, без ограничения, модификации дезаминогрупп, N-низших алкиловых, Nди-низших алкиловых и N-ацильных групп. К модификациям конечных карбоксильных групп относятся, без ограничения, модификации амидных, низших алкиламидных, диалкиламидных групп и низшего алкилового эфира. Низшим алкилом является C1-C4 алкил. Более того,одна либо несколько боковых групп, либо конечных групп могут защищаться с помощью защитных групп, известных среднему химикуспециалисту по белкам, -углерод аминокислоты может быть моно- либо диметилированным. В состав предпочтительной группы GLP-1 аналогов и производных, предназначенных для использования в настоящем изобретении, входят молекулы приведенной далее формулы: и их фармацевтически приемлемые соли, где R1 выбирают из группы, в состав которой входитL-гистидин, D-гистидин, дезаминогистидин, 2 аминогистидин, -гидроксигистидин, гомогистидин, -фторметилгистидин и -метилгистидин; Х выбирают из группы, в состав которой входит Аlа, Gly, Val, Thr, Ilе и -метилAla; Y выбирают из группы, в состав которой входит Glu, Gln, Ala, Thr, Ser и Gly; Z выбирают из группы, в состав которой входит Glu, Gln,Ala, Thr, Ser и Gly; и R2 выбирают из группы, в состав которой входит NH2 и Gly-OH; при условии, что упомянутое соединение имеет изоэлектрическую точку в пределах приблизительно от 6,0 приблизительно до 9,0, а также дополнительно при условии, что когда R1 - His, Х - Ala,Y - Glu и Z - Glu, R2 должен быть NH2. Многочисленные GLP-1 аналоги и производные, имеющие изоэлектрическую точку в этом диапазоне, были раскрыты и включают,например и т.п. [см., например, WO 91/11457]. Следующая предпочтительная группа активных соединений для использования в настоящем изобретении раскрывается в международной заявке WO 91/11457 и включает, по существу, GLP-1(7-34), GLP-1(7-35), GLP-1(7-36) либо GLP-1(7-37), или же их амидную форму, а также их фармацевтически приемлемые соли,имеющие, как минимум, одну модификацию,выбранную из группы, включающей:(a) замену лизина глицином, серином, цистеином, треонином, аспарагином, глутамином,тирозином, аланином, валином, изолейцином,лейцином, метионином, фенилаланином, аргинином либо D-лизином в положении 26 и/либо в положении 34; или же замену аргинина глицином, серином, цистеином, треонином, аспарагином, глутамином, тирозином, аланином, валином, изолейцином, лейцином, метионином, фе 9 нилаланином, лизином либо D-аргинином в положении 36;(b) замену триптофана устойчивой к окислению аминокислотой в положении 31;(c) замену, как минимум, одного из валина тирозином в положении 16; серина лизином в положении 18; глутаминовой кислоты аспарагиновой кислотой в положении 21; глицина серином в положении 22; глутамина аргинином в положении 23; аланина аргинином в положении 24; и лизина глутамином в положении 26; и(d) замену, как минимум, одного из аланина глицином, серином либо цистеином в положении 8; глутаминовой кислоты аспарагиновой кислотой, глицином, серином, цистеином, треонином, аспарагином, глутамином, тирозином,аланином, валином, изолейцином, лейцином,метионином либо фенилаланином в положении 9; глицина серином, цистеином, треонином, аспарагином, глутамином, тирозином, аланином,валином, изолейцином, лейцином, метионином либо фенилаланином в положении 10; и аспарагиновой кислоты глутаминовой кислотой в положении 15; и(e) замену гистидина глицином, серином,цистеином, треонином, аспарагином, глутамином, тирозином, аланином, валином, изолейцином, лейцином, метионином либо фенилаланином, или D- или N-ацилированной или алкилированной формой гистидина в положении 7; где в заменах (а), (b), (d) и (е) упомянутые замещенные аминокислоты могут, факультативно, быть в D-форме, а аминокислоты, замещенные в положении 7, могут, факультативно, быть в Nацилированной либо N-алкилированной форме. Поскольку фермент дипептидил-пептидазаIV (DPP IV) может нести ответственность за наблюдаемую ускоренную инактивацию in vivo введенного GLP-1 [см., например, Ментлайн Р.(Mentlein R.) и другие, Eur. J. Biochem., 214:829835 (1993)], предпочтительным является введение GLP-1 аналогов и производных, защищенных от воздействия DPP IV, в то время как более предпочтительным является введение Gly8GLP-1(7-36)NH2, Val8-GLP-1(7-37)ОН, a-мeтилAla8-GLP-1(7-36)NH2 и Gly8-Gln21-GLP-1(737)OH либо их фармацевтически приемлемых солей. Предпочтительным является использование в настоящем изобретении молекулы, заявленной в патенте США 5188666, который включен в настоящее описание в качестве ссылки. Такую молекулу выбирают из группы, в состав которой входит пептид, имеющий представленную далее аминокислотную последовательность: 10 где Х выбирают из группы, в состав которой входит Lys и Lys-Gly; и производное упомянутого пептида, где упомянутый пептид выбирают из группы, в состав которой входит фармацевтически приемлемая соль упомянутого пептида,полученная добавлением кислоты; фармацевтически приемлемая карбоксилатная соль упомянутого пептида; фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир упомянутого пептида; и фармацевтически приемлемый амид упомянутого пептида, выбранный из группы, в состав которой входит амид, низший алкиламид и низший диалкиламид. В состав другой предпочтительной группы молекул, предназначенных для использования в настоящем изобретении, входят соединения,заявленные в патенте США 5512549, который включен в настоящее описание в качестве ссылки, имеющие общую формулу и их фармацевтически приемлемые соли, где R1 выбирают из группы, включающей 4 имидазопропионил, 4-имидазоацетил либо 4 имидазо-,-диметилацетил; R2 выбирают из группы, включающей С 6-С 10 неразветвленный ацил, либо он отсутствует; R3 выбирают из группы, включающей Gly-OH либо NH2; и Хаа Lys либо Arg. Более предпочтительными соединениями последовательности 4 для использования в настоящем изобретении являются соединения,где Хаа - Arg и R2 - С 6-С 10 неразветвленный ацил. Весьма предпочтительными соединениями последовательности 4 для использования в настоящем изобретении являются соединения,где Хаа - Arg, R2 - С 6-С 10 неразветвленный ацил и R3 - Gly-OH. Более предпочтительными соединениями последовательности 4 для использования в настоящем изобретении являются соединения,где Хаа - Arg, R2 - С 6-С 10 неразветвленный ацил,R3 - Gly-OH и R1 - 4-имидазопропионил. Наиболее предпочтительным соединением последовательности 4 для использования в настоящем изобретении является соединение,где Хаа - Arg, R2 - C8 неразветвленный ацил, R3 Gly-OH и R1 - 4-имидазопропионил. Весьма предпочтительным является использование в настоящем изобретении молекулы, заявленной в патенте США 5120712, который включен в настоящее описание в качестве ссылки. Такую молекулу выбирают из группы, в состав которой входит пептид, имеющий представленную далее аминокислотную последовательность: и производное упомянутого пептида, где упомянутый пептид выбирают из группы, включающей фармацевтически приемлемую соль упомянутого пептида, полученную добавлением кислоты; фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль упомянутого пептида; фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир упомянутого пептида; и фармацевтически приемлемый амид упомянутого пептида, выбранный из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид. Наиболее предпочтительным является использование в настоящем изобретении GLP-1(736) амида либо его фармацевтически приемлемой соли. Аминокислотная последовательностьGLP-1(7-36) амида выглядит следующим образом: Способы получения упомянутого активного соединения, использованного в настоящем изобретении, а именно, GLP-1, GLP-1 аналога либо GLP-1 производного, использованного в настоящем изобретении, хорошо известны и описаны в патентах США 5118666,5120712 и 5523549, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки. Аминокислотную часть упомянутого активного соединения, использованного в настоящем изобретении, либо ее предшественника, получают 1) химией твердофазного синтеза; 2) очисткой GLP молекул из природных источников; либо 3) технологией рекомбинантных ДНК. Твердофазный химический синтез полипептидов хорошо известен в настоящей области и его описание можно найти в учебниках по данной области, см., например, Дагес Г. (DugasFreeman,СанФранциско (1969), стр. 24-66. Аминокислотная часть, например, может быть синтезирована по твердофазной методике с использованием синтезатора пептидов 430 А(компания PE-Applied Biosystems, Inc., 850 Lincoln Center Drive, Фостер Сити, Калифорния 94404) и синтетических циклов, поставляемых компанией PE-Applied Biosystems. Биохимические аминокислоты и другие реактивы коммер 003701 12 чески доступны от компании PE-Applied Biosystems и других компаний, занимающихся химическими поставками. К исходным рметилбензгидриламиновым смолам, с целью получения С-конечных карбоксамидов, применяют биохимические методы секвенирования с использованием протоколов двойных пар. Для получения С-конечных кислот, используют соответствующие полиакриламидные смолы. Asn,Gln и Arg соединяют, используя предварительно полученные гидроксибензотриазоловые эфиры. Могут быть использованы приведенные далее защитные группы боковых цепейArg, тозил,Asp, циклогексил,Glu, циклогексил,Ser, бензил,Thr, бензил,Туr, 4-бромкарбобензокси. Лишение защитных свойств биохимическими методами может осуществляться с помощью трифторуксусной кислоты в метиленхлориде. После завершения синтеза, упомянутые пептиды могут лишаться защитных свойств и отщепляться от смолы с помощью безводного фтороводорода (HF), включающего 10% метакрезола. Отщепление упомянутой защитной группы (групп) боковых цепей и упомянутого пептида от смолы осуществляется при температуре от -5 до 5 С в предпочтительном варианте на льду, в течение 60 мин. После удаления фтороводорода, упомянутый пептид/смолу промывают эфиром, пептид экстрагируют ледяной уксусной кислотой и лиофилизируют. Для получения активного соединения, используемого в настоящем изобретении, могут применяться способы, хорошо известные рядовому специалисту в области технологии рекомбинантных ДНК. Фактически, способам рекомбинантных ДНК может отдаваться предпочтение по причине более высокого выхода. Основными этапами получения рекомбинантной продукции являются следующие:a) выделение естественной последовательности ДНК, кодирующей молекулу GLP-1, либо конструирование синтетической или полусинтетической кодирующей последовательности ДНК для молекулы GLP-1,b) введение упомянутой кодирующей последовательности в экспрессирующий вектор с помощью способа, пригодного для экспрессии белков либо самостоятельно, либо в виде слитых белков,c) трансформация соответствующей эукариотической либо прокариотической клеткихозяина с помощью упомянутого экспрессирующего вектора,d) культивирование упомянутой трансформированной клетки-хозяина в условиях,обеспечивающих возможность экспрессии молекулы GLP-1, иe) выделение и очистка рекомбинантно продуцированной молекулы GLP-1. Как указывалось ранее, упомянутые кодирующие последовательности могут быть полностью синтетическими либо результатом модификаций более крупной нативной ДНК, кодирующей глюкагон. Последовательность ДНК,кодирующей предпроглюкагон, представлена в работе Ланда (Lund) и других, Рrос. Natl AcadSci. U.S.A. 79:345-349 (1982), и она может быть использована в качестве исходного материала при полусинтетическом продуцировании соединений, соответствующих настоящему изобретению, путем изменения нативной последовательности с целью достижения необходимых результатов. Синтетические гены, следствием транскрипции и трансляции которых in vitro или invivo является продуцирование молекулы GLP-1,могут конструироваться способами, хорошо известными в данной области. Опытному специалисту понятно, что вследствие естественного вырождения упомянутого генетического кода,может быть получено значительное, но, тем не менее, определенное количество последовательностей ДНК, все из которых будут кодировать молекулу GLP-1. Методика конструирования синтетического гена хорошо известна в данной области. См. Браун (Brown) и другие, (1979) Methods in Enzymology, издательство Academic Press, НьюЙорк, 68:109-151. Упомянутая последовательность ДНК программируется из необходимой аминокислотной последовательности с помощью генетического кода, который легко устанавливается рядовым биологом. После завершения программирования, сама упомянутая последовательность может продуцироваться с помощью традиционного устройства для синтезирования ДНК, например, синтезаторов ДНК модели 380 А либо 380 В (компания PE-Applied Biosystems, Inc., 850 Lincoln Center Drive, Фостер Сити, Калифорния 94404). Для экспрессии упомянутой аминокислотной части соединения, используемого в настоящем изобретении, последовательность синтетической ДНК, полученной методами генной инженерии, встраивается в один из многих подходящих экспрессирующих векторов на основе рекомбинантных ДНК с помощью соответствующих рестриктаз. См., в общем, МаниатисHarbor Laboratory Press, Нью-Йорк, том 1-3. Сайты рестриктазного расщепления встраиваются в любой конец ДНК, кодирующей молекулуGLP-1,для облегчения выделения из/включения в амплифицирующие и экспрессирующие векторы, хорошо известные в данной области. Конкретные использованные эндонуклеазы будут определяться характером рестриктазного расщепления исходного использованно 003701 14 го экспрессирующего вектора. Рестрикционные сайты выбираются для правильного ориентирования упомянутой кодирующей последовательности относительно контрольных последовательностей для обеспечения, тем самым, соответствующего внутрирамочного считывания и экспрессии необходимого белка. Упомянутая кодирующая последовательность должна позиционироваться таким образом, чтобы оказаться в соответствующей рамке считывания с промотором и сайтом связывания рибосом упомянутого экспрессирующего вектора, которые функционируют в упомянутой клетке-хозяине, в которой должен быть экспрессирован упомянутый белок. Для обеспечения эффективной транскрипции упомянутого синтетического гена, его необходимо функционально связать с областью промотора-оператора. Таким образом, упомянутая область промотора-оператора упомянутого синтетического гена размещается с такой же самой последовательной ориентацией относительно инициирующего кодона ATG упомянутого синтетического гена. В данной области известны различные экспрессирующие векторы, пригодные для трансформации прокариотических и эукариотических клеток. См., например, The PromegaPines Road, La Jolla, Калифорния, 92037). Кроме того, в патенте США 4710473 описываются векторы трансформации плазмиды кольцевой ДНК, пригодные для экспрессии экзогенных генов E.coli на высоких уровнях. Эти плазмиды пригодны в качестве трансформирующих векторов в методах рекомбинантных ДНК и(a) наделяют упомянутую плазмиду способностью к автономной репликации в клеткехозяине;(b) контролируют автономную репликацию плазмиды в зависимости от температуры,при которой поддерживаются культуры клеткихозяина;(c) стабилизируют обеспечение жизнедеятельности упомянутой плазмиды в популяциях клетки-хозяина;(d) направляют синтез белкового продукта,свидетельствующего о жизнедеятельности плазмиды в популяции клетки-хозяина;(e) обеспечивают последовательные сайты распознавания рестриктаз, характерные для упомянутой плазмиды; и(f) завершают транскрипцию мРНК. Упомянутые плазмиды кольцевой ДНК пригодны для использования в качестве векторов в методах рекомбинантных ДНК для обеспечения высоких уровней экспрессии экзогенных генов. 15 Следующим этапом после завершения конструирования экспрессирующего вектора для аминокислотной части соединения, используемого в настоящем изобретении, является введение упомянутого вектора в подходящую клетку и, тем самым, конструирование рекомбинантной клетки-хозяина, пригодной для экспрессирования упомянутого полипептида. Способы трансформации клеток векторами на основе рекомбинантных ДНК хорошо известны в данной области и их описание может быть найдено в таких общих справочных пособиях, как Маниатис и другие, см. ранее. Клетки-хозяева могут конструироваться как из эукариотических, так и из прокариотических клеток. Прокариотические клетки-хозяева, в общем, продуцируют упомянутый белок с более высокой скоростью и легче культивируются. Белки, экспрессированные высокоуровневыми бактериальными экспрессирующими системами, агрегируются, что является их характерной особенностью, в виде гранул либо внутриклеточных телец, которые содержат высокие уровни сверхпродуцированного белка. Подобные белковые скопления, как правило, должны выделяться, растворяться, денатурироваться и повторно укладываться с помощью способов, хорошо известных в данной области. См. Крюгер(Kreuger) и другие (1990) в Protein Folding, под редакцией Гираш (Gierasch) и Кинг (King), стр. 136-142, American Association for the Advancement of Science Publication89-18S, Вашингтон, округ Колумбия; и патент США 4923967. Изменения аминокислотной последовательности-предшественника GLP-1 либо GLP-1 аналога для получения необходимого GLP-1 аналога либо GLP-1 производного осуществляются с помощью хорошо известных способов: химическая модификация, ферментативная модификация либо сочетание химической и ферментативной модификации предшественниковGLP-1. Классические способы жидкофазного синтеза и полусинтетические способы также могут быть пригодными для получения молекулGLP-1, используемых в настоящем изобретении. Способы получения молекул GLP-1, соответствующих настоящему изобретению, хорошо известны рядовому химику-специалисту по белкам. Добавка ацильной группы к -аминогруппеLys34 может осуществляться с помощью любого из многочисленных способов, известных в данной области. См. Bioconjugate Chem. "Chemical 16 октановой кислоты. Упомянутый пептид может ацилироваться перед либо после добавки упомянутой имидазольной группы. Более того, если упомянутый пептид получают методами рекомбинантных ДНК, ацилирование может быть осуществлено перед ферментативным расщеплением. Кроме того, лизин в GLP-1 производном может быть ацилирован, как описано в международной заявке WO 96-29342, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки. В данной области описано существование и получение множества защищенных, незащищенных и частично защищенных, естественных и искусственных функциональных аналогов и производных GLP-1 (7-36) амида и молекулGLP-1(7-37) [см., например, патенты США 5120712 и 5118666, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки, и Орсков К. (Orskov C) и другие, J. Biol. Chem., 264 (22): 12826-12829 (1989), а также WO 91/11457 (Бакли Д.И. (Buckley D.I.) и другие, опубликованный 8 августа 1991 г.)]. Факультативно, могут защищаться амино и карбоксильные конечные аминокислотные остатки GLP-1 производных либо, факультативно,защищается только одна из конечных областей. Описание реакций образования и удаления таких защитных групп приведено в стандартных работах, в том числе, например, в "Protective(1981); и "The Peptides", том I, Schruder и Lebke,издательство Academic Press, Лондон и НьюЙорк (1965). К числу репрезентативных аминозащитных групп относятся, например, формил,ацетил, изопропил, бутоксикарбонил, флуоренилметоксикарбонил, карбобензилокси и т.п. К числу репрезентативных карбоксизащитных групп относятся, например, бензиловый эфир,метиловый эфир, этиловый эфир, t-бутиловый эфир, p-нитрофениловый эфир и т.п. Карбоксиконечные, низшие алкилоэфирные GLP-1 производные, используемые в настоящем изобретении, получают в результате реакции необходимого (C1-C4) алканола с необходимым полипептидом в присутствии каталитической кислоты,например,хлористоводородной кислоты. Подходящими условиями для упомянутого получения алкилового эфира являются следующие: температура реакции приблизительно 50 С и продолжительность реакции от приблизительно 1 до приблизительно 3 ч. Подобным же образом могут быть получены алкилэфирные производные Asp и/или Glu остатков. Получение карбоксамидного производного соединения, используемого в настоящем изобретении, осуществляется, например, как описано у Стюарта Дж.М. (Stewart J.M.) и других.Chemical Company Press, 1984. В настоящем исследовании может использоваться фармацевтически приемлемая солевая форма GLP-1, GLP-1 аналога либо GLP-1 производного. Кислотами, традиционно используемыми для получения солей, получаемых добавлением кислоты, являются неорганические кислоты, например, хлористо-водородная кислота,бромисто-водородная кислота,иодистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органические кислоты, например, p-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, pбромфенилсульфоновая кислота, угольная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, уксусная кислота и т.п. Примерами таких солей являются сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, фосфат,моногидрогенфосфат, дигидрогенфосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, иодид,ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат,формиат, изобутират, капроат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат,себацат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, сульфонат, ксилолсульфонат,фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират,цитрат, лактат, гамма-гидроксибутират, гликолят, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат,нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат,манделат и т.п. Предпочтительными солями,полученными добавлением кислоты, являются соли, полученные с помощью минеральных кислот, например, хлористо-водородной кислоты и бромисто-водородной кислоты, и, особенно,хлористо-водородной кислоты. К числу солей, полученных добавлением оснований, относятся соли, полученные из неорганических оснований, например, аммония либо гидроксидов, карбонатов, бикарбонатов щелочных либо щелочно-земельных металлов и т.п. Таким образом, к числу таких оснований,пригодных для получения солей, соответствующих настоящему изобретению, относятся гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, карбонат калия и т.п. Особо предпочтительными являются солевые формы.GLP-1, GLP-1 аналог либо GLP-1 производное, используемые в настоящем изобретении, перед использованием в настоящем изобретении могут вводиться в состав лекарственной формы с одним или несколькими наполнителями. Например, упомянутое активное соединение, используемое в настоящем изобретении,может образовывать комплексное соединение с двухвалентным катионом металла с помощью хорошо известных способов. К подобным катионам металлов относятся, например, Zn,Mn, Fe, Со, Cd, Ni и т.п. 18 Факультативно, упомянутое активное соединение, используемое в настоящем изобретении, может сочетаться с фармацевтически приемлемым буфером с регулированием рН для обеспечения приемлемой устойчивости и его пригодности для парентерального введения. Факультативно, может добавляться одно или несколько фармацевтически приемлемых антимикробных средств. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми антимикробными средствами являются метакрезол и фенол. Может добавляться одна или несколько фармацевтически приемлемых солей для регулирования ионной силы либо тоничности. Для дополнительного регулирования изотоничности упомянутой лекарственной формы может добавляться один либо несколько наполнителей. Примером наполнителя, регулирующего изотоничность, является глицерин. Введение может осуществляться любым путем, эффективность которого известна рядовому врачу. Предпочтение отдается парентеральному введению. Под парентеральным введением в медицинской литературе традиционно понимается впрыскивание дозированной лекарственной формы в организм с помощью стерильного шприца или какого-либо иного механического приспособления, например, инфузионного насоса. Парентеральными путями введения являются внутривенный, внутримышечный,подкожный, внутрибрюшинный, интраспинальный, подоболочечный, интрацеребровентрикулярный, внутриартериальный, субарахноидальный и эпидуральный. Более предпочтительными путями введения упомянутых соединений, используемых в настоящем изобретении, являются внутривенный, внутримышечный и подкожный. Еще более предпочтительными путями введения соединений, используемых в настоящем изобретении, являются внутривенный и подкожный. Для парентерального введения, активное соединение, используемое в настоящем изобретении, в предпочтительном варианте, сочетается с дистиллированной водой с соответствующим рН. Дополнительные фармацевтические способы могут использоваться для контролирования длительности действия. Препараты с контролируемым выделением могут быть получены посредством использования полимеров для образования комплексных соединений либо абсорбирования упомянутого активного соединения, используемого в настоящем изобретении. Продленное терапевтическое воздействие может обеспечиваться посредством выбора подходящих макромолекул, например, полиэфиров, полиаминокислот, поливинилпирролидона, этиленвинилацетата, метилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы либо протаминсульфата, а также посредством подбора концентрации макромолекул и способов включения с целью пролонгирования выделения. Другим возможным 19 способом увеличения продолжительности действия препаратов контролируемого выделения является включение активного соединения, используемого в настоящем изобретении, в частицы полимерного материала, например, полиэфиров, полиаминокислот, гидрогелей, полимера молочной кислоты либо сополимеров этилена и винилацетата. В альтернативном варианте,вместо включения соединения в упомянутые полимерные частицы, возможно заключение соединения, используемого в настоящем изобретении, в микрокапсулы, полученные, например, коацервативными способами либо межфазной полимеризацией, например, гидроксиметилцеллюлозы, либо в желатиновые микрокапсулы, соответственно, либо в коллоидные системы доставки лекарственного препарата, например, липосомы, альбуминовые микросферы,микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы,либо в макроэмульсии. Подобные способы раскрываются в Remington's Pharmaceutical Sciences(1980). Согласно настоящему изобретению пациент нуждается в соединениях, используемых в настоящем изобретении, приблизительно за 1-16 ч до оперативного вмешательства, которому подвергается упомянутый пациент, в процессе оперативного вмешательства и после упомянутого оперативного вмешательства в течение приблизительно не более 5 дней. Как упоминалось ранее, продолжительность периода времени перед началом оперативного вмешательства для введения упомянутых соединений, используемых в настоящем изобретении, составляет от приблизительно 16 до приблизительно 1 ч перед началом оперативного вмешательства. Продолжительность периода времени перед оперативным вмешательством, когда вещества, используемые в настоящем изобретении, следует вводить для снижения катаболического воздействия и невосприимчивости к инсулину, будет зависеть от факторов, влияние которых известно рядовому врачу,к числу наиболее существенных из которых относится, голодал ли пациент либо ему вливалась или выпаивалась глюкоза, либо упомянутый пациент получал какую-либо иную форму поддержки в течение подготовительного периода перед осуществлением оперативного вмешательства, а также, без ограничения, пол, масса и возраст пациента, степень неспособности регулировать уровень глюкозы в крови, первопричины любой неспособности регулировать уровень глюкозы в крови, предполагаемая тяжесть травмы, причиненной оперативным вмешательством, путь введения и биодоступность, персистирование в организме, лекарственная форма и эффективность введенного соединения. Предпочтительный период времени, в течение которого необходимо начинать введение соединений, используемых в настоящем изобретении,составляет приблизительно от 1 до приблизи 003701 20 тельно 10 ч до начала оперативного вмешательства. Наиболее предпочтительный промежуток времени для начала введения составляет приблизительно от 2 до 8 ч до начала оперативного вмешательства. Как объяснялось ранее, невосприимчивость к инсулину после оперативного вмешательства особого типа, плановой полостной операции, является наиболее глубокой в течение первого послеоперационного дня, длится, как минимум, в течение пяти дней, и для ее полной нормализации может потребоваться до трех недель [Торелл А. (Thorell A.) и другие (1993)]. Таким образом, пациенту после оперативного вмешательства может потребоваться введение соединений, используемых в настоящем изобретении, в течение периода времени после хирургической травмы, продолжительность которого будет зависеть от факторов, которые рядовым врачом будут поняты и определены. К числу этих факторов относится, голодал ли пациент,либо ему вливалась или выпаивалась глюкоза,либо упомянутый пациент получал какую-либо иную форму поддержки после оперативного вмешательства, а также, без ограничения, пол,масса и возраст пациента, степень неспособности регулировать уровень глюкозы в крови, первопричины любой неспособности регулировать уровень глюкозы в крови, фактическая тяжесть травмы, причиненной оперативным вмешательством, путь введения и биодоступность, персистирование в организме, лекарственная форма и эффективность введенного соединения. Предпочтительная продолжительность введения соединений, используемых в настоящем изобретении, составляет не более пяти дней после оперативного вмешательства. Упомянутый термин "послеоперационные катаболические изменения" хорошо известен рядовому хирургу [Шо Дж.Г.Ф. (Shaw J.H.F.) и другие, Ann. Surg. (1989); Литтл Р.А. (Little(1986); Бранди Л. (Brandi L.) и другие (1993)] и определяется в данном описании, как состояние обмена веществ, вызванное хирургической травмой, которое может быть охарактеризовано одним либо несколькими приведенными далее явлениями: отрицательный азотный баланс с потерей азота организмом [Вернерман Дж.(Wernerman J.) и другие, J. Parent. Enter. Nutr. 10:578-82 (1986); Таширо Т. (Tashiro T.) и другие, J. Parent. Enter. Nutr. 9:452-5 (1985)], периферическое использование жира в предпочтение глюкозе со снижением дыхательного коэффициента [Фрейн К.Н. (Frayn K.N.) и другие, Arch.(1981)] и эндогенное продуцирование глюкозы за счет белка и энергетических запасов организма, несмотря на гипергликемию [Гамп Ф.Е.(1985)]. Упомянутый термин "невосприимчивость к инсулину" также хорошо известен рядовому врачу и определяется в данном описании, как физиологическое состояние, при котором нормальные концентрации инсулина вызывают реакции ниже нормального уровня. Невосприимчивость к инсулину может быть обусловлена снижением степени связывания инсулина с рецепторами, находящимися на поверхности клеток, либо изменениями внутриклеточного обмена веществ. Первый упомянутый случай, характеризующийся, как снижение чувствительности к инсулину, может, как правило, преодолеваться повышенной концентрацией инсулина. Второй упомянутый случай, характеризующийся как снижение восприимчивости к инсулину, не может быть преодолен большими количествами инсулина. Невосприимчивость к инсулину после травмы может быть преодолена дозами инсулина, пропорциональными степени невосприимчивости к инсулину, и, таким образом, явно вызвана снижением чувствительности к инсулину [Бранди Л.С. (Brandi L.S.) и другие, Clin.(1990)]. Снижение чувствительности к инсулину после планового полостного оперативного вмешательства длится, как минимум, пять дней, но не более трех недель и наиболее выражено в первый послеоперационный день, причем для нормализации может потребоваться до трех недель. [Торелл A. (Thorell А.) и другие (1993)]. Причины наблюдаемой временной невосприимчивости к инсулину после травмы не совсем понятны. Доза GLP-1, GLP-1 аналога либо GLP-1 производного, эффективная в отношении нормализации уровня глюкозы в крови пациента,будет зависеть от ряда факторов, к которым относятся, без ограничения, пол, масса и возраст пациента, степень неспособности регулировать уровень глюкозы в крови, первопричины любой неспособности регулировать уровень глюкозы в крови, в случае одновременного введения глюкозы либо иного источника углевода, путь введения и биодоступность, персистирование в организме, лекарственная форма и эффективность введенного соединения. В случае непрерывного введения, подходящая скорость введения составляет приблизительно от 0,25 до 6 пмоль/кг массы тела/мин, в предпочтительном варианте приблизительно от 0,5 до 1,2 пмоль/кг/мин. В случае периодического введения при определении дозы, предназначенной для введения, необходимо учитывать промежуток времени между дозами, биодоступностьGLP-1, GLP-1 аналога либо GLP-1 производного и количество, необходимое для обеспечения нормального уровня глюкозы в крови. Определение дозы и скорости введения GLP-1, GLP-1 22 аналога либо GLP-1 производного для достижения необходимого клинического результата находится в пределах возможностей рядового врача. Настоящее изобретение будет более понятным со ссылкой на конкретные примеры,которые приведены для иллюстрирования, а не для ограничения настоящего изобретения. Пример 1. В этом исследовании принимали участие тринадцать пациентов, включенные в план проведения плановых операций (артропластика тазобедренного сустава). Ни у одного из упомянутых пациентов не было ранее случаев и не наблюдалось симптомов заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ, поражений печени либо диабета. Все тринадцать пациентов имели нормальные показатели уровней глюкозы в крови натощак, С-реактивного белка и результаты печеночной пробы (билирубин, щелочная фосфатаза, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза). Семь пациентов (инсулиновая группа, возраст 565 лет; индекс массы тела 251 кг/м 2) обследовались, начиная с 08:00 после ночного голодания. После начального основного периода, во время которого отбирались пробы для определения уровня глюкозы и гормонов в крови, а также в течение 30 мин осуществлялись косвенные калориметрические исследования,внутривенно вливали инсулин (Actrapid, компания Novo, Копенгаген) с постоянной скоростью 0,8 мЕд/кг/мин, в то время как для поддержания количества глюкозы в крови на постоянном уровне (4,5 мМ) внутривенно с переменной скоростью вводили глюкозу (200 мг/мл). По истечении часа при установившихся условиях всех пациентов подвергли стандартизированному оперативному вмешательству (артропластика тазобедренного сустава). Упомянутая операция началась через 29023 мин после начала вливания инсулина. Гиперинсулинемическое, нормогликемическое вливание осуществлялось в процессе оперативного вмешательства и продолжалось в течение дополнительных 3-4 ч после него. Полученные данные будут представлены в соответствии с приведенной далее номенклатурой:basal (основной период): 30 мин до начала вливания инсулина,preop clamp (предоперационный период): гиперинсулинемическое, нормогликемическое вливание в течение 60 мин перед оперативным вмешательством,early op (начальный этап оперативного вмешательства): от 10 до 40 мин после начала оперативного вмешательства,late op (завершающий этап оперативного вмешательства): последние 30 мин оперативного вмешательства,postop clamp (послеоперационный период): установившееся гиперинсулинемическое, нор 23 могликемическое вливание в течение 60 мин,начиная через 14330 мин после начала оперативного вмешательства. Вторую группу пациентов (контрольная группа, n=6, возраст 593 года; индекс массы тела 261 кг/м 2), соответствовавшую упомянутой инсулиновой группе по возрасту и индексу массы тела, подвергали предоперационной обработке согласно тому же самому протоколу(basal и preop clamp) за семь дней до оперативного вмешательства. Упомянутая контрольная группа не получала ни basal, ни preop clamp в день осуществления оперативного вмешательства. Однако сразу же после оперативного вмешательства каждому пациенту в упомянутой контрольной группе начали вливать инсулин(10):1041-47 (1989)] осуществляли в течение 30 мин на основном этапе, дважды в процессе оперативного вмешательства (early op и late op) и в течение последних 30 мин preop и postop периодов. Производился спланированный по времени отбор проб мочи для анализа выделения мочевины в моче. После корректировки изменений объема мочевого пула [Теппи Л. (Тарру L.) и другие. Diabetes 37:1212-16 (1988)] вычисляли небелковый расход энергии (ЕЕ), дыхательный коэффициент (RQ) и скорость окисления субстрата. Во время basal, preop, early op, late op иpostop периодов из нагретой вены руки повторно отбирали пробы крови. Уровни глюкозы в крови определяли сразу же после отбора проб по глюкозооксидазному методу (компания Yellow Springs Instruments, Еллоу Спрингз, Огайо)[Хаггет А.С. (Hugget A.S.) и другие, Lancet 2:368-70 (1957)]. Для определения сывороточных концентраций инсулина [Грилл В. (Grill V.) и другие, Metabolism 39:251-58 (1990)]; Спептида (компания Novo Research, Bagsvaerd,Дания); кортизола [Гаррис В. (Harris V.) и другие, в Джафф Б.М (Jaffe В.М.) и Берман Х.Р. 24 Все значения являются индивидуальными либо среднимиSЕМ (средняя квадратическая ошибка среднего). Статистическая значимость принимается при р 0,05, используя критерий знакового ранжирования Уилкоксона и U-тест Менна-Уитни для парных и непарных данных соответственно. Поскольку уровни инсулина в сыворотке во время postop периода в упомянутой контрольной группе были ниже, чем в упомянутой инсулиновой группе (р=0,06), скорость введения глюкозы была также откорректирована по преобладающим уровням инсулина посредством деления скорости введения глюкозы и среднего значения уровня инсулина в сыворотке в течение 60-минутных установившихся периодов. Уровни инсулина в сыворотке были одинаковыми в двух упомянутых группах как во время основного, так и во время рrеор периодов. В упомянутой инсулиновой группе уровни инсулина оставались в пределах 60 мкЕд/мл во время осуществления оперативного вмешательства и во время postop периода. В упомянутой контрольной группе уровни инсулина оставались неизменными по сравнению с основными уровнями в течение периода осуществления оперативного вмешательства. Уровни инсулина во время postop периода в контрольной группе существенно не отличались ни от уровней во время ргеор периода, ни от уровней в упомянутой инсулиновой группе во время postop периода. Уровни С-пептида (табл. I) были сходными между группами как во время основного, так и в течение рrеор и postop периодов. В инсулиновой группе по сравнению с упомянутой контрольной группой во время оперативного вмешательства отмечались более низкие уровни Спептида. Уровни глюкагона в сыворотке после оперативного вмешательства понижались (р 0,05) в обеих группах (табл. I). Однако относительное изменение после оперативного вмешательства(% против рrеор) было выше в инсулиновой группе (р 0,01 против контроля). Уровни кортизола в сыворотке (табл. I) после оперативного вмешательства в упомянутой инсулиновой группе снижались, в то время как соответствующие уровни в упомянутой контрольной группе имели тенденцию к увеличению (р=0,1). Послеоперационные уровни кортизола в упомянутой инсулиновой группе были ниже по сравнению с упомянутой контрольной группой (р 0,05). Таблица I Гормональные уровни у пациентов, подвергаемых артропластике тазобедренного сустава после голодания в течение ночи (контроль, n=6) либо после четырехчасовой физиологической гиперинсулинемииpostор С-пептид контроль 0,680,08 0,410,09 0,701,1 0,700,13 0,310,09 инсулин 0,680,09 0,450,05 0,420,06 0,580,12 0,520,11 Глюкагон контроль 482 421 433 413 372 инсулин 587 523 403 354 334 Кортизол контроль 22939 23821 15463 11643 36683 инсулин 17141 26635 23446 21244 17283 р 0,05 по сравнению с ргеор по критерию знакового ранжирования Уилкоксона; р 0,05 по сравнению с контролем по U-тесту Менна-Уитни. Уровни глюкагона после оперативного вмешательства снижались в обеих группах, хотя наибольшее снижение (%) наблюдалось в инсулиновой группе (р 0,01 против контроля). Уровни кортизола после оперативного вмешательства снижались в инсулиновой группе(р 0,05 против ргеор), в то время как уровни в упомянутой контрольной группе имели тенденцию к увеличению (р=0,1). Таким образом,уровни кортизола после оперативного вмешательства были значительно ниже в упомянутой инсулиновой группе по сравнению с упомянутой контрольной группой (р 0,05). Скорость вливания глюкозы в течение ргеор периода между упомянутой инсулиновой и упомянутой контрольной группами существенно не различалась. Упомянутая контрольная группа имела сниженную среднюю скорость вливания глюкозы, необходимую для поддержания нормогликемии в течение postop периода,по сравнению с рrеор периодом (-395%,р 0,05). В противоположность этому скорость вливания глюкозы поддерживалась в упомянутой инсулиновой группе в течение оперативного вмешательства и, в среднем, даже увеличивалась в течение postop периода (+1620%,р=0,02). Более существенным и неожиданным оказалось то, что средняя скорость вливания глюкозы в упомянутой инсулиновой группе в течение postop периода была значительно выше,по сравнению с соответствующими показателями в контрольной группе (р 0,05) (см. фиг. 1). Все изменения скорости вливания глюкозы в течение рrеор и postop периодов были статистически значимыми (р 0,05), независимо от того,производилось ли корректирование упомянутой скорости вливания глюкозы по средним уровням содержания инсулина в сыворотке в течение установившихся периодов. Скорость окисления глюкозы и жира в группах перед оперативным вмешательством была одинаковой. Во время оперативного вмешательства скорость окисления глюкозы в упомянутой инсулиновой группе была значительно выше, в то время как скорость окисления жира была значительно ниже (р 0,05 против контроля). В течение postop периода в упомянутой инсулиновой группе, по сравнению с упомянутым рrеор периодом, изменений скорости окисления субстрата не обнаруживалось. Расход энергии(ЕЕ) в покое во время и после оперативного вмешательства между группами не различался и оставался таким же самым, при сравнении с ргеор периодом, в обеих группах после оперативного вмешательства. Уровни глюкозы натощак в упомянутых инсулиновой и контрольной группах были одинаковыми. В установившемся состоянии в процессе вливания инсулина поддерживалась нормогликемия, вследствие чего средние межиндивидуальные коэффициенты изменения по глюкозе составляли 4,6% в упомянутой контрольной группе и 6,2% в упомянутой инсулиновой группе. Эти данные убедительно демонстрируют,что у пациентов, подвергаемых плановому оперативному вмешательству натощак, развивается послеоперационная невосприимчивость к инсулину и усиливается окисление жира. Более того,эти данные также впервые демонстрируют, что катаболические изменения после оперативного вмешательства полностью устраняются, а гормональная реакция на стресс полностью ослабляется, если пациенты подвергаются оперативной стрессовой нагрузке в условиях повышенных уровней содержания инсулина, которые поддерживаются в течение осуществления оперативного вмешательства. Пример 2.GLP-1(7-36) амид вводили путем подкожного вливания со скоростью 1,2 пмоль/кг/ч в течение десяти ночных часов пяти пациентам,страдающим инсулинонезависимым диабетом(NIDDM). В качестве контроля инсулин непрерывно вливали тем же самым пяти пациентам,однако не в те дни, в которые производилось вливание GLP-1(7-36) амида. Скорость вливания инсулина корректировали каждые 2 ч для 27 обеспечения оптимального контроля и во избежание гипогликемии. Как показывают данные,представленные в табл. II и на фиг. 2, подкожное вливание GLP-1(7-36) амида почти нормализовало уровень глюкозы в крови, не вызвав гипогликемию ни у одного из пациентов. Контролирование обмена веществ, осуществляв 003701 28 шееся с помощью GLP-1(7-36) амида, давало лучшие результаты, чем в случае применения инсулина, и средний уровень глюкозы в крови был ниже в случае обработки GLP-1(7-36) амидом, по сравнению с контролем статистически значимым количеством инсулина в 23:00, 0:00 и 1:00. Таблица II Средние уровни глюкозы в крови у пяти NIDDM пациентов, которым в течение десяти ночных часов непрерывно вливали GLP-1(7-36) амид. В ходе осуществления контрольного исследования с теми же самыми пациентами в другой день, путем непрерывного вливания вводили инсулин. Вливание GLP-1 Вливание инсулина (контроль) Часы Средний уровень Стандартная поСредний уровень Стандартная погрешглюкозы в крови, мМ грешность, мМ глюкозы в крови, мМ ность, мМ 21:00 7,5 0,45 6,9 0,68 22:00 5,4 0,76 6,6 0,55 23:00 4,1 0,16 5,9 0,98 0:00 4,4 0,23 5,6 0,90 1:00 4,4 0,29 5,1 0,58 2:00 4,8 0,34 5,2 0,58 3:00 5,2 0,41 5,4 0,30 4:00 5,4 0,41 5,7 0,25 5:00 5,8 0,41 6,0 0,30 6:00 6,0 0,45 6,1 0,38 7:00 6,2 0,45 6,1 0,33 Пример 3. В течение дня GLP-1(7-36) амид вливали пяти NIDDM пациентам в течение 3 ч во время завтрака, обеда и ужина. Время вливания (как указано на фиг. 3): 7:30-10:30 (завтрак), 10:301:30 (обед) и 4:30-7:30 (ужин). В ходе осуществления контрольного эксперимента в другой день, тем же самым пяти NIDDM пациентам подкожно вводили инсулин непосредственно перед началом приема пищи, как показано на фиг. 3. При вливании GLP-1 исчезали колебания уровня глюкозы, возникающие после приема пищи и наблюдаемые в случае введения инсулина. Вливание GLP-1 обеспечивало поддержа ние нормальных уровней содержания глюкозы в крови. Сразу же после завершения каждого вливания GLP-1 (7-36) амида, уровень содержания глюкозы в крови существенно повышался. При введении GLP-1 (7-36) амида не наблюдалось нежелательных побочных явлений. Эти данные свидетельствуют о том, что вливание GLP-1(736) амида обеспечивает более эффективный контроль уровней глюкозы после приема пищи,чем впрыскивание инсулина, и что упомянутый контроль остается эффективным в течение периода, когда продолжается вливание GLP-1(736) амида. Таблица III Средние уровни содержания глюкозы в крови пяти NIDDM пациентов, которым в течение трех часов, начиная с момента начала приема пищи, вливали GLP-1(7-36) амид. В контрольном исследовании,проводившемся в другой день с теми же самыми пациентами, непосредственно перед каждым приемом пищи путем подкожного впрыскивания вводили инсулин. Время начала приема пищи: 7:30, 10:30 и 4:30. Вливание GLP-1 Подкожное впрыскивание инсулина Часы Средний уровень Стандартная погрешСредний уровень Стандартная поглюкозы в крови, мМ ность, мМ глюкозы в крови, мМ грешность, мМ 7:00 5,4 0,35 6,1 0,41 8:00 4,9 0,38 7,0 0,51 9:00 5,7 0,59 9,1 0,74 10:00 5,8 1,06 9,9 0,78 11:00 8,1 0,94 8,2 0,76 12:00 9,4 0,59 6,5 0,74 13:00 7,2 1,18 9,1 0,90 14:00 5,3 1,21 8,1 0,91 15:00 7,2 0,71 7,0 0,87 16:00 10,4 0,26 7,2 0,57 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ ослабления послеоперационных катаболических изменений и невосприимчивости к инсулину, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, соединения, которое выбирается из группы, включающей GLP-1,GLP-1 аналоги, GLP-1 производные и их фармацевтически приемлемые соли. 2. Способ по п.1, где упомянутое соединение вводится внутривенно. 3. Способ по п.1, где упомянутое соединение вводится подкожно. 4. Способ по любому из пп.1-3, где скорость введения упомянутого соединения составляет от 0,25 до 6 пмоль/кг/мин. 5. Способ по п.4, где скорость введения упомянутого соединения составляет от 0,5 до 2,4 пмоль/кг/мин. 6. Способ по п.5, где упомянутая скорость составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,2 пмоль/кг/мин. 7. Способ по п.1, где упомянутое соединение вводится внутривенно и, кроме того, иным парентеральным путем. 8. Способ по п.7, где иным парентеральным путем является подкожный путь. 9. Способ по п.1, где упомянутым вводимым соединением является GLP 1(7-36) амид либо его фармацевтически приемлемая соль. 10. Способ ослабления послеоперационных катаболических изменений и гормональных реакций на стресс, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, соединения, которое проявляет инсулинотропную активность посредством взаимодействия с тем рецептором либо рецепторами, с которыми взаимодействуетGLP-1 при проявлении своей инсулинотропной активности. 11. Способ ослабления послеоперационных катаболических изменений и гормональных реакций на стресс, включающий введение соединения, которое усиливает чувствительность к инсулину посредством взаимодействия с тем рецептором либо рецепторами, с которыми взаимодействует GLP-1 для усиления чувствительности к инсулину.