Комбинация дибромида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидрокси­этил)тиазолия] и артесуната для лечения тяжелой формы малярии

КОМБИНАЦИЯ ДИБРОМИДА 1,12-ДОДЕКАМЕТИЛЕН-БИС-[4-МЕТИЛ-5-(2 ГИДРОКСИЭТИЛ)ТИАЗОЛИЯ] И АРТЕСУНАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТЯЖЕЛОЙ ФОРМЫ МАЛЯРИИ Объектом изобретения является комбинация, содержащая дибромид 1,12-додекаметилен-бис[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат. Объектом изобретения является также фармацевтическая композиция, содержащая дибромид 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2 гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат. Кроме того, объектом изобретения является также применение такой комбинации для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики тяжелой формы малярии. Наконец, объектом изобретения является также набор для лечения или профилактики тяжелой формы малярии. Фрэсс Лоран, Виаль Анри, Вейн Шарон Орор (FR) Медведев В.Н. (RU)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: САНОФИ-АВЕНТИС; САНТР НАСЬОНАЛЬ ДЕ ЛЯ РЕШЕРШ СЬЕНТИФИК (СНРС); ЮНИВЕРСИТЕ МОНПЕЛЬЕ II (FR) Настоящее изобретение относится к новой комбинации противомалярийных активно действующих веществ, а именно дибромида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесуната, а также к фармацевтической композиции, содержащей такую комбинацию, подходящую для лечения и/или профилактики малярии. Малярия является одной из главных причин смерти от инфекций во всем мире и поражает ежегодно более 500 млн человек, из которых каждый год умирает от 1,5 до 3 млн. Это бедствие захватывает главным образом часть Африки, находящуюся южнее Сахары, Юго-Восточную Азию и Латинскую Америку. Малярию распространяют четыре типа паразитов рода Plasmodium (P. falciparum, P. malariae, P. vivax и P. ovale), переносимые кровососущими комарами анофелес. Plasmodium falciparum, широко распространенный в Африке, является наиболее вирулентным паразитом, ответственным за большинство летальных форм заболевания. Сильное обострение заболевания, наблюдающееся уже несколько лет, обусловлено многими факторами, в том числе резистентностью многих штаммов Plasmodium falciparum к использующимся в настоящее время лекарствам, таким как хлорохин, мефлохин, амодиахин, или к антифолиевым и антифолиновым средствам, таким как пириметамин и сульфадоксин. Многие лица, пораженные малярией, имеют острую инфекцию, с незначительными физическими признаками, за исключением легкой анемии и увеличения объема селезенки (спленомегалия). Симптомы зависят от разновидности малярии. Однако общими клиническими признаками являются, в частности,плохое самочувствие, гипертермия (жар), головная боль, расстройства пищеварения, такие как тошнота,рвота и/или боли в желудке, диарея, слабость, боли в мышцах, артралгия (боли в суставах) и желтуха. Лечение производится обычно путем приема хлорохина (или основного гидрохлорида хинина в случае резистентности к хлорохину) до достижения улучшения и исчезновения паразитов в крови (обычно от 3 до 5 дней). Затем пациент обычно принимает одно лекарственное средство, состоящее из 1,5 г сульфадоксина и 75 мг пириметамина. Используется также другое лечение на основе антифолиевых и антифолиновых средств или на основе маларона. Тяжелая форма малярии, вызываемая Plasmodium falciparum, является церебральной малярией, связанной с сильным повышением температуры (40 С) и комой с неблагоприятным прогнозом, несмотря на лечение, при которой смертность повышается иногда до 20% у взрослых и 15% у детей. Наступление тяжелой формы малярии является постепенным или внезапным. Она начинается с мгновенных кратковременных судорог одной или нескольких мышц, сопровождающихся расслаблением. Они являются локализованными или распространяются на все тело. Эта разновидность малярии сопровождается нистагмом (непрерывное подрагивание глаз в горизонтальной плоскости), иногда напряженностью шеи и нарушением рефлексов. Тяжелая малярия может сопровождаться также кровоизлияниями сетчатой оболочки глаза, гипогликемией, отеками легких, поражением почек, анемией и/или гематомезисом (выброс крови из пораженных органов, которая проглатывается и затем снова появляется в виде кровотечения,сопровождающегося рвотой). В случае Plasmodium falciparum, вызывающего осложненную малярию или церебральную малярию,а также другие тяжелые поражения, требуется экстренная медицинская помощь, когда 1% эритроцитов(красных кровяных телец) или более поражены паразитами у лица, которое еще не было привито от этого заболевания. Приоритетным в лечении в случае тяжелой малярии является массивное и быстрое снижение паразитемии (за 24-48 ч после начала лечения), чтобы исключить летальный прогноз. После подавления паразитемии и подтверждения прогноза жизни может применяться более классическое противомалярийное лечение, например хлорохином или основным гидрохлоридом хинина. Лечение тяжелой формы малярии трудно осуществлять пероральным или ректальным путем, так как заболевание часто сопровождается рвотой и сильной диареей. Артемизинин, выделенный в 1972 г. из растения Artemisia annua (qinghaosu), уже веками использующегося в Китае, обладает мощной противомалярийной активностью. В продажу выпускаются также производные с улучшенными фармакологическими свойствами, такие как артеметер, артеэтер и артесунат. Артемизинин и его производные, в частности артесунат, являются сегодня частью наиболее эффективных активно действующего веществ против Plasmodium falciparum. Однако эти соединения едва ли приводят к полному выздоровлению, и отмечаются многочисленные рецидивы. Таким образом, использование артемизинина или его производных в монотерапии могло бы быть причинным фактором селекции резистентных паразитарных штаммов. В настоящее время научное сообщество рекомендует использование комбинаций активно действующих веществ, в частности комбинации артемизинин или его производных с другими противомалярийными активно действующими веществами. Эта политерапия, называемая ACT (Artemisinin-basedCombination Therapy - комбинированная терапия на основе артемизинина), рекомендуется с 2002 г. Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ). Она предлагает множество преимуществ: улучшение терапевтической эффективности в отношении резистентных штаммов, взаимную защиту двух активных веществ от появления резистентности, снижение передачи заболевания и усиления резистентности. Известно несколько комбинаций этого типа. Например, предлагалась комбинация артеметера с люмефантрином, выпускаемая в продажу под наименованием Coartem, а также комбинация артесуната с амодиахином (Arsucam). Комбинация феррохина с производным артемизинина описана в документе WO 2006/111647. Однако благоприятный эффект политерапии ACT не является ни очевидным, ни предсказуемым. Например, в публикации С. Snyder и др., Experimental Parasitology 115 (2007), 296-300, показано, что комбинация пиперахина с соединением QZ277 кажется более обещающей, чем комбинация пиперахина с производным артемизинина, таким как артеметер. Также, комбинация хлорохина и артесуната не достигает удовлетворительных уровней эффективности (Am. J. Trop. Med. Hyg., 2003, 69(1), 19-25 и Transactions of the Royal Society of Tropical Medicineand Hygiene, 2003, 97, 429-433) и может привести к селекции резистентных штаммов, в частности, резистентных к хлорохину. Таким образом, хотя стратегия ACT рекомендована ВОЗ, тем не менее поиск новых комбинаций противомалярийных активно действующих веществ все-таки не является очевидным и должен продолжаться. Настоящее изобретение относится к комбинации бис-тиазолиевой соли (соединение формулы (VI,а именно дибромида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия], и артесуната. Такая комбинация обнаруживает интересный и непредсказуемый синергизм и, следовательно, может быть использована для профилактики и/или лечения малярия, в частности, тяжелой формы малярии. Соединения формулы (VI), а также их предшественники в смысле настоящего изобретения, описаны в патенте, опубликованном под номером ЕР 1196371. Предшественники бис-тиазолиевых солей формулы (VI) в контексте настоящего изобретения отвечают формулам (I), (II), (III), (IV) и (V) патента ЕР 1196371. Действительно, этот патент описывает предшественники лекарств с противомалярийным эффектом, отличающихся тем, что это продукты, способные образовывать соли четвертичного бисаммония и отвечающие общей формуле (I) в которой А и А' являются одинаковыми или отличаются друг от друга и означают либо соответственно группу A1 и A1' формулы где n означает целое число от 2 до 4; R1 означает атом водорода, алкильный радикал C1-C5, необязательно замещенный арильным радикалом (в частности, фенильным радикалом), гидрокси, алкокси, причем алкильный радикал содержит от 1 до 5 атомов углерода, или арилокси (в частности, фенилокси); W означает атом галогена, выбранный из хлора, брома или йода, или нуклеофобную группу, как тозильныйCH3-C6H4-SO3, мезитильный CH3-SO3 радикал, CF3-SO3, NO2-C6H4-SO3,либо группу А 2, которая представляет собой формильный -СНО или ацетильный -СО-СН 3 радикал; В и В' являются одинаковыми или отличающимися друг от друга и означают либо соответственно группы B1 и B1', если А и А' означают соответственно А 1 и A1', причем В 1 и В 1' означают группу R1, которая имеет то же определение, что и R'1 выше, но не может быть атомом водорода,либо соответственно группы В 2 и В'2, если А и А' означают А 2, причем В 2 или В'2 означают группу в которой -Ra означает группу RS- или RCO-, где R означает алкильный радикал C1-C6, в частностиC1-C5, линейный, разветвленный или циклический, необязательно замещенный одной или несколькими группами гидрокси, алкокси или арилокси, или аминогруппу, и/или группу -СООН или СООМ, где М означает алкил C1-C3; фенильный или бензильный радикал, причем фенильный радикал необязательно замещен по меньшей мере одним алкильным радикалом или С 1-С 5 алкокси, который сам, необязательно замещен аминогруппой, или азот- или кислородсодержащим гетероциклом, группу -СООН или -СООМ; или группу -СН 2-гетероцикл, с 5 или 6 элементами, содержащую азот и/или кислород;R3 означает атом водорода, алкильный или алкенильный радикал C1-C5, необязательно замещенный-ОН, фосфатную группу, алкоксирадикал, причем алкильный радикал является радикалом C1-C3; или арилокси или алкил- или арилкарбонилоксигруппу; илиR2 и R3 вместе образуют цикл с 5 или 6 атомами углерода; R2 и R3 могут быть связаны, образуя цикл из 5-7 атомов (углерод, кислород, сера);означает либо простую связь, когда А и А' означают А 1 и A'1, или когда А и А' означают А 2, т.е. группуZ означает алкильный радикал C6-C21, в частности от С 12 или C13 до C21, при необходимости с введением одной или нескольких кратных связей, и/или один или несколько гетероатомов О и/или S, и/или один или несколько ароматических циклов,и фармацевтически приемлемые соли этих соединений,при условии, что R'1 не означает Н или алкильный радикал C1 или С 2, когда n=3 или 4, a R1 означает алкильный радикал C1-C4, и Z означает алкильный радикал C6-C10. В ЕР 1196371 описана также подгруппа соединений-предшественников, описаных выше, отвечающих общей формуле (II) в которой R1, R'1, W, n и Z имеют значения, определенные выше. В ЕР 1196371 описана также другая подгруппа соединений-предшественников, образованная предшественниками, описанными выше, для которых Z означает алкильный радикал C13-C21. В ЕР 1196371 описана также подгруппа соединений-предшественников, образованная предшественниками, описанными в предшествующей подгруппе, для которых Z означает группу -(CH2)16-. В ЕР 1196371 описаны, в частности, предшественники, выбранные из дигидрохлорида N,N'диметил-N,N'-(5-хлорпентил)-1,16-гексадекандиамина или дигидрохлорида N,N'-диметил-N,N'-(4 хлорпентил)-1,16-гексадекандиамина. В ЕР 1196371 описана, кроме того, группа предшественников, отвечающих общей формуле (III) или общей формуле (IV) или общей формуле (V)(ТЕ 13),или, наконец, из: 2,15-(N,N'-диформил-N,N'-диметил)диамино-1,16-S-тиобензоилгексадека-1,15-диена (ТЕ 15),2,15-(N,N'-диформил-N,N'-дибензил)диамино-1,16-S-тиобензоилгексадека-1,15-диена (ТЕ 16). Кроме того, в ЕР 1196371 описаны циклические производные, образованные из предшественников тиазолиевых солей, обладающих хорошей противомалярийной активностью и отвечающих общей формуле (VI) при условии, что Z не является алкильным радикалом С 6-С 8, когда Rc, Rd, R2 и R3 означают метильный радикал, или когда Rc и Rd, с одной стороны, и R2 и R3, с другой стороны, вместе образуют ароматические циклы из 6 атомов углерода,Rd означает R2 или Р, причем Р означает группу формулыRd=R2; Rd=P, если Rc=R3 и Rb=R1; и Rc=U, если Rb=R1, и Rd=R2. Согласно настоящему изобретению соединения формулы (VI) могут находиться в форме свободного основания, соли, гидрата или сольвата. В частности, в документе ЕР 1196371 среди циклических производных, описанных выше, упоминаются производные, выбранные из: дибромида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] (Т 3); дииодида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-метоксиэтил)тиазолия] (Т 4); дииодида 1,12-додекаметилен-бис-(4-метилтиазолия) (Т 6); дииодида 1,16-гексадекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-метоксиэтил)тиазолия] (Т 8); дииодида 3,10-диоксадодекаметилен-бис-[5-(1,4-диметил)тиазолия] (Т 9); дибромида 3,10-диоксадодекаметилен-бис-[5-(1-бензил,4-метил)тиазолия] (Т 10); дииодида додекаметилен-бис-[5-(1-метил-4-этоксикарбонилэтил)тиазолия] (Т 12); дибромида додекаметилен-бис-[5-(1-метил-4-этоксикарбонилэтил)тиазолия] (Т 13); дииодида додекаметилен-бис-[4-(1-метил)тиазолия] (Т 15); дибромида додекаметилен-бис-[4-(1-бензил)тиазолия] (Т 16). Наконец, в ЕР 1196371 описан способ получения бис-тиазолиевых солей и их предшественников,указанных выше, в частности, синтез соединений формулы (VI), таких, как Т 3, Т 4, Т 6, Т 8, Т 9, Т 10, Т 12,Т 13, Т 15 и Т 16. В частности, синтез Т 3 описан на с. 18 патента ЕР 1196371. Также, противомалярийная активность соединения Т 3 описана в таблице 13, с. 28 этого же документа. Таким образом, изобретение относится к комбинации бис-тиазолиевой соли формулы (VI), дибромида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] (Т 3) и артесуната. В этой комбинации, каждое из активно действующих веществ используется в концентрации, соответствующей способности победить инфекцию. В каждой комбинации соответствующие количества соединений зависят от этих активных доз. Дибромид 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] (Т 3) имеет в комбинациях по изобретению следующую структуру: Объектом изобретения является также фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активно действующего вещества комбинацию Т 3 и артесуната, определенных ранее. Такая фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективные дозы дибромида 1,12 додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесуната, а также по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Указанные эксципиенты выбирают, в соответствии с фармацевтической формой и желательным способом введения, из обычных эксципиентов, которые известны специалисту. Диапазон содержаний каждого соединения определяется в зависимости от их доз, проявляющих активность против малярии при монотерапии и отражающих их соответствующую способность победить инфекцию. Подходящие стандартные лекарственные формы включают формы для перорального введения, такие как таблетки, мягкие или твердые желатиновые капсулы, порошки, гранулы и пероральные растворы или суспензии, формы для сублингвального, буккального, интратрахеального, внутриглазного, интраназального введения, формы для введения ингаляцией, формы для топического, чрескожного, подкожного,внутримышечного или внутривенного введения (болюс или перфузия), формы для ректального введения и имплантаты. Для топического нанесения соединения согласно изобретению можно использовать в кремах, гелях, мазях или лосьонах. Предполагаемыми способами введения могут быть пероральный, ректальный и парентеральный способы, в частности внутримышечный, интраректальный и внутривенный, в частности вливание. Для парентерального введения используются подходящие для инъекций водные суспензии, изотонические солевые растворы или стерильные растворы, которые содержат фармакологически совместимые диспергаторы и/или смачиватели, например, пропиленгликоль или бутиленгликоль. В случае необходимости суспензии могут также содержать антиокислительные вспомогательные добавки, или активно действующие вещества согласно изобретению могут быть растворены в подходящих растворах, таких как глюкоза или NaCl, чтобы позднее вводиться перфузией. Для парентерального способа введения, в частности перфузией, предпочтительные суточные дозы каждого из двух активно действующих веществ в комбинации по изобретению таковы, как указано ниже: Т 3: от 0,01 до 3 мг/кг; артесунат: от 1 до 5 мг/кг. Могут иметь место особые случаи, когда подходит более высокая или более низкая дозировка, такие дозировки не выходят за рамки изобретения. Согласно обычной практике доза, подходящая для каждого пациента, определяется врачом в зависимости от способа введения, массы тела и реакции указанного пациента. Комбинация по изобретению предназначена для приема в течение 1-4 дней подряд, за один или несколько приемов в день каждого из двух активно действующих веществ, предпочтительно за 1-3 приема(перорально или ректально) или болюса в день. Это время лечения, ограниченное предпочтительно 4 днями или менее, особенно выгодно, чтобы массивно и быстро снизить паразитемию и, устранив летальный прогноз, позволить затем лечить пациента от собственно малярии. Это последующее лечение может осуществляться путем монотерапии производными артемизинина, любым другим известным лечением от малярии, а также приемом комбинации согласно изобретению. Одним примером дозировки и способа введения может быть 2,4 мг/кг/сут артесуната и 1 мг/кг/сут Т 3 в течение первых 24 ч (J1) после поступления больного, имеющего тяжелую форму малярии, затем 1,2 мг/кг/сут артесуната и 0,8 мг/кг/сут Т 3 в течение следующих 48 ч (J2 и J3), причем артесунат и Т 3 вводятся перфузией из емкости для единственного вливания в день J1 и из емкостей для раздельного вливания в J2 и J3. Введение каждого из двух активно действующих веществ может проводиться одновременно или раздельно, или растянуто во времени (последовательное введение). Когда введение проводится одновременно, оба активно действующих веществ можно объединить в одной фармацевтической форме (связанная комбинация), например, в таблетке илилатиновой капсуле,подходящих для перорального введения, или в одной и той же емкости для вливания, или в форме, подходящей для интраректального введения. Оба активно действующих вещества комбинации по изобретению могут также, независимо от того,вводятся ли они одновременно или нет, находиться в разных фармацевтических формах. Для этого комбинации по изобретению могут находиться в виде набора, содержащего, с одной стороны, соединение Т 3, а с другой стороны, артесунат, причем указанное соединение Т 3 и артесунат находятся в раздельных отделениях и предназначены для одновременного, раздельного или растянутого во времени введения(последовательное введение). В качестве примера, стандартная лекарственная форма Т 3 в виде таблетки может содержать следующие компоненты: Также в качестве примера стандартная лекарственная форма артесуната в виде таблетки может со-6 022711 держать 50 или 100 мг артесуната и обычные эксципиенты, например лактозу, кроскармелозу, безводную коллоидную окись кремния, микрокристаллическую целлюлозу и стеарат магния. Также в качестве примера, стандартная лекарственная форма, содержащая комбинацию артесуната и Т 3, может содержать 1,5 мг Т 3 и 50 мг артесуната, а также обычные эксципиенты, указанные выше,причем суточная доза для взрослого набирается за 4 приема по одной таблетке или за один прием 4 таблеток. Эти же дозировки Т 3, артесуната или комбинации Т 3 и артесуната применяются для единичных форм введения ректальным путем, с эксципиентами, известными специалисту. Для способа введения путем парентеральной инъекции, стандартная лекарственная форма Т 3 может содержать 1 мг Т 3, например, в ампуле, а также обычные эксципиенты, хорошо известные специалисту,такие как глицерин и фосфатный буфер, причем ампула рассчитана на 10 кг веса тела. Также в качестве примера, стандартная лекарственная форма артесуната и Т 3 в ампуле может содержать 24 мг артесуната и 1 мг Т 3, а также обычные эксципиенты, указанные выше, причем ампула может вводиться из расчета одна ампула на 10 кг веса тела. Объектом изобретения является также применение комбинации, содержащей в качестве активно действующих веществ дибромид 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики малярии, в частности, тяжелой формы малярии. Наконец, объектом изобретения является набор для лечения или профилактики малярии, содержащий, с одной стороны, дибромид 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и, с другой стороны, артесунат, причем указанный дибромид 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2 гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат находятся в раздельных отделениях или емкостях для перфузии и предназначены для одновременного или последовательного введения. Комбинация согласно изобретению была объектом фармакологических и биохимических испытаний in vivo на мышах, инфицированных плазмодием типа Plasmodium falciparum (штамм Plasmodiumvinckei petteri), позволяющих подтвердить ее эффективность и синергический эффект, который она обеспечивает в лечении малярии. Измерение in vivo противомалярийной активности на мышах, инфицированных Plasmodium vinckeiir = внутриректальное введение. 1. Описание используемого испытания in vivo. Заражение мышей. В день 0 (J0) самок мышей типа "Swiss" (OF1, 22-26 г) (Charles River Laboratories, France, 59 rue dela Paix, 76410 Saint-Aubin-les-Elbeuf), заражают путем iv в хвостовую вену 108 инфицированных паразитами эритроцитов, суспендированных в 200 мкл NaCl (0,9%). Использованные паразиты относятся к типуPlasmodium vinckei petteri (штамм 279 BY, поставляется Dr. I. Landau, Paris, France). Предварительно мышей акклиматизируют в течение двух недель. Они получают еду и питье без ограничений. Инъекцию 108 инфицированных паразитами эритроцитов проводят в день 1 (J1) до степени паразитемии от 5 до 10% (7,20,2%). Штамм Plasmodium vinckei petteri поддерживается еженедельным инфицированием мышей 107-108 зараженными паразитами эритроцитами, суспендированными в солевом фосфатном буфере (0,9%) (заражение внутрибрюшинным путем). Получение растворов Т 3 и артесуната/ Продукты растворяют в фосфатном буфере 0,3 М (рН 8,1). Конечная концентрация раствора Т 3 составляет от 40 до 200 мг/л в зависимости от дозы. Конечная концентрация раствора артесуната составляет от 100 до 500 мг/л в зависимости от дозы. Продукты вводятся ip. Объем введения составляет порядка 100 мкл, но зависит от веса мыши. Лечение. Мышей обрабатывают один раз в день в течение 4 дней J1, J2, J3 и J4 (Peters, W., J.H. Portus, B.L.interfering with Plasmodium phospholipid metabolism. Antimicrob. Agents Chemother., 2003, 47, 2598-2605). Использовалось по четыре мыши на каждую дозу. Животным вводили путем ip, в зависимости от конкретного случая, Т 3, артесунат или смесь этих двух растворенных активно действующих веществ. Измерение паразитемии. На пятый день отбирали несколько капель крови из хвоста мыши, чтобы определить паразитемию посредством FACS (Fluorescence-activated cell sorter - флуоресцентный сортер клеток) и получить мазок крови. Сначала паразитемию определяли путем FACS на 20000 клетках. Красные тельца, отобранные дляFACS, фиксировали в глутаральдегиде, затем метили флуорохромом (YOYOl), который метит ДНК и,следовательно, только зараженные паразитами клетки (Barkan, D., Ginsburg, H., and Golenser, J. 2000. Optimisation of flow cytometric measurement of parasitemia in plasmodium-infected mice. Int. J. Parasitol. 30: 649-653). Паразитемия ниже 15% пересчитывалась затем на мазках. Мазки фиксировали метанолом, затем окрашивали по Гимзе. Под микроскопом подсчитывали число зараженных паразитами клеток крови. Паразитемия выражается в процентах зараженных эритроцитов, присутствующих в анализе на образце из 2000 клеток. Значения ED50 и ED90 определяют в день J5. Паразитемия определяется в первый и десятый день лечения, затем на 15-й, 22-й и 47-й дни. Мыши, у которых мазок в день J5 не выявляет никаких следов паразитов, будут проверяться снова в течение по меньшей мере 1 месяца после конца лечения, чтобы обнаружить возможное увеличение числа паразитов. Исцеляющая доза есть доза продукта, которая обеспечивает выживание всей партии получавших лечение животных через месяц. Определение ED50. Нулевой процент ингибирования соответствует среднему из значений паразитемии, наблюдавшихся у инфицированных мышей, не получавших лечения. 100% ингибирования соответствует очень низкой или нулевой паразитемии, ниже 0,01%. Значения ED50 определены линейной интерполяцией кривой доза-ответ, представленной в логарифме концентраций. 2. Измерение противомалярийной активности in vivo комбинации Т 3 и артесуната в отношении штамма паразита Plasmodium vinckei petteri. Чтобы доказать синергический эффект двух соединений, важно знать их активность, когда они принимаются по отдельности, чтобы связать их с дозами, близкими к их ED50. Случай их введения парентеральным путем соответствует клинической ситуации тяжелой формы малярии. В этом случае важно быстро снизить паразитемию в ходе первых дней лечения. При тестируемых дозах один введенный артесунат не может снизить паразитемию в первый день, а также на следующие дни (фиг. 1). Т 3 эффективно снижает паразитемию через 4 дня лечения дозой 1 мг/кг/сут, но не препятствует росту паразитемии после первого дня лечения (фиг. 2). Полученные значения ED50 представлены в следующей табл. I. Таблица I Чем ниже ED50, тем лучше активность. Так, один Т 3 показывает лучшую активность в отношении паразитемии (0,55 мг/кг/сут), чем один артесунат (2,5 мг/кг/сут). Кроме того, один Т 3 в дозе 0,5 мг/кг/сут позволяет достичь полного излечения через месяц (результаты не показаны), тогда как один артесунат, в дозе 2,5 мг/кг/сут, этого не позволяет. 3. Измерение противомалярийной активности in vivo комбинации Т 3/артесунат в отношении штамма паразита Plasmodium vinckei petteri. Для этого исследования комбинации выбрана доза 2,5 мг/кг/сут артесуната (чуть ниже, но близкая кED50), причем доза I 0,5 мг/кг/сут полностью неактивна в отношении паразитемии до 4 дней. Т 3 оценивался в комбинации с дозой ниже, близкой к и выше ED50, а именно 0,2, 0,5 и 1 мг/кг/сут. Неожиданно оказалось, как показано на фиг. 3, 4 и 5, что комбинация, содержащая Т 3 (в любых указанных выше дозах) с артесунатом, присутствующим в дозе 2,5 мг/кг/сут, позволяет существенно снизить степень паразитемии по сравнению с раздельным приемом только Т 3 или только артесуната. В частности, важно констатировать, что через 24 ч после первого введения (день 2) и при любой введенной дозе Т 3 наблюдается снижение паразитемии у мышей, тогда как при введении этих продуктов раздельно они являются неактивными. Табл. II (и фиг. 3, 4, 5) приводят среднюю паразитемию, выявленную в день 2 (4 животных на дозу). Следует отметить, что имеется статистически значимый синергический эффект через 24 ч после первого введения (день 2) для Т 3 в дозах 0,2, 0,5 и 1 мг/кг в комбинации с артесунатом в дозе 2,5 мг/кг. Этот очень значительный синергический эффект после первого дня лечения особенно важен в случае лечения тяжелой формы малярии, как раз где клиницисты стремятся к быстрому и массивному снижению паразитемии у пациента, чтобы отодвинуть летальный прогноз. Начиная с дозы Т 3 в 0,5 мг/кг/сут в сочетании с 2,5 мг/кг/сут артесуната, паразитемия сохраняется на своем исходном уровне до начала лечения в течение всей продолжительности лечения, тогда как отдельное введение продуктов этого не позволяет (табл. II, фиг. 3-5). Соединение Т 3 ответственно за основной эффект в полном излечении мышей через месяц. Совместное введение артесуната в дозе 2,5 мг/кг/сут не улучшает исцеляющую дозу, полученную с одним Т 3. Обсужденные выше результаты представлены в табл. III. Таблица III Таким образом, когда 2 активно действующие вещества вводятся в комбинации, паразитемия существенно снижается в 4 первых дня лечения. Этот эффект заметно выше при сравнимых и даже меньших дозах, чем дозы, определенные для введения каждого из двух активно действующих веществ, взятых по отдельности. В частности, когда Т 3 принимается в комбинации с артесунатом, причем артесунат присутствует в дозе по меньшей мере 2,5 мг/кг/сут, наблюдается благоприятный эффект уменьшения паразитемии. Таким образом, понятно, что комбинация двух активно действующих веществ особенно эффективна в окне,задаваемом минимальной дозой одного из соединений и отношением одного из соединений к другому внутри этого окна. Результаты, полученные in vivo на мышах, инфицированных Р. vinckei petteri, доказывают, что комбинация по изобретению, состоящая из артемизинина или одного из его производных (в частности, артесуната) и бис-тиазолиевой соли (соединение формулы (VI, в частности Т 3, выгодны для лечения малярии и, в частности, тяжелой формы малярии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Комбинация, содержащая в качестве активно действующих веществ дибромид 1,12 додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат, для лечения и/или профилактики тяжелой формы малярии. 2. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективные дозы артесуната и дибромида 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия], а также по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, для применения в лечении и/или профилактике тяжелой формы малярии. 3. Фармацевтическая композиция для применения по п.2, отличающаяся тем, что она подходит для перорального, ректального введения или для инъекций и предпочтительно подходит для внутривенных инъекций, в частности в виде вливаний. 4. Применение комбинации по п.1 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики тяжелой формы малярии. 5. Набор для применения в лечении или профилактике тяжелой формы малярии, содержащий дибромид 1,12-додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат, причем 1,12 додекаметилен-бис-[4-метил-5-(2-гидроксиэтил)тиазолия] и артесунат находятся в разных отделениях и предназначены для одновременного или последовательного введения.