Поливалентная вакцинная композиция

011480 Настоящее изобретение относится к новым комбинированным вакцинным препаратам. Комбинированные вакцины (которые обеспечивают защиту против нескольких патогенов) очень желательны для уменьшения числа иммунизаций, необходимых для обеспечения защиты против нескольких патогенов,для снижения затрат на введение и для увеличения принятия и степеней охвата. Хорошо известное явление антигенной конкуренции (или интерференции) осложняет разработку многокомпонентных вакцин. Антигенная интерференция относится к наблюдению того факта, что введение нескольких антигенов часто приводит к ослабленному ответу на некоторые антигены по сравнению с иммунным ответом, наблюдаемым, когда такие антигены вводят по отдельности. Известны комбинированные вакцины, которые могут предотвращать Bordetella pertussis, Clostridium(см., например, WO 93/24148 и WO 97/00697). Согласно изобретению предложена поливалентная иммуногенная композиция, содержащая убитые целые клетки Bordetella pertussis, столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин и конъюгат белканосителя и капсульного полисахарида или олигосахарида Н. influenzae типа В (Hib), где количество конъюгата на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет 2,5 мкг, а иммуногенность конъюгата является эквивалентной или улучшенной по сравнению с такими же композициями, содержащими большие количества конъюгата. Предпочтительно такая композиция содержит поверхностный антиген вируса гепатита В. Кроме того, предложена поливалентная иммуногенная композиция, содержащая убитые целые клетки Bordetella pertussis, столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, поверхностный антиген вируса гепатита В и конъюгат белка-носителя и капсульного полисахарида или олигосахарида Н. influenzae типа В, где количество конъюгата на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет менее 10 мкг, а иммуногенность конъюгата является эквивалентной или улучшенной по сравнению с такими же композициями, содержащими большие количества конъюгата. Предпочтительными являются указанные композиции, в которых используемый белок-носитель выбран из группы, содержащей дифтерийный анатоксин, CRM197, ОМРС из N. meningitidis и белок D из Н. influenzae. Согласно изобретению предложена также поливалентная иммуногенная композиция, содержащая убитые целые клетки Bordetella pertussis, столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин и конъюгат белка-носителя и капсульного полисахарида или олигосахарида Н. influenzae типа В, где количество конъюгата на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет менее 10 мкг, а иммуногенность конъюгата является эквивалентной или улучшенной по сравнению с такими же композициями, содержащими большие количества конъюгата, и где используемый белок-носитель выбран из группы, содержащей дифтерийный анатоксин, CRM197, ОМРС из N. meningitidis и белок D из Н. influenzae. Предпочтительно такая композиция содержит поверхностный антиген вируса гепатита В. Предпочтительно в двух последних заявленных композициях количество полисахарида в конъюгате на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет 1-8 мкг; более предпочтительно количество полисахарида в конъюгате на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет примерно 2,5 мкг, примерно 4 мкг или примерно 5 мкг. Предпочтительными являются иммуногенные композиции по изобретению, где конъюгат белканосителя и капсульного полисахарида Н. influenzae типа В не адсорбирован на адъювантной соли алюминия. Согласно изобретению предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию по изобретению и фармацевтически приемлемый эксципиент. Предложен также способ приготовления вакцины по изобретению, включающий смешивание иммуногенной композиции, как она определена выше, с фармацевтически приемлемым эксципиентом. Согласно изобретению предложена иммуногенная композиция, как она определена выше, для применения в качестве вакцины. Предложена также вакцина по изобретению для применения для предупреждения или лечения млекопитающего, подверженного инфекции, посредством введения указанной вакцины системным путем или через слизистые оболочки. Способы получения столбнячного анатоксина (ТТ) хорошо известны в данной области техники. Например, ТТ предпочтительно получают путем очистки токсина из культуры Clostridium tetani с последующей химической детоксификацией, однако, альтернативно получают путем очистки рекомбинантного или генетически детоксифицированного аналога токсина (например, как описано в ЕР 209281)."Столбнячный анатоксин" также включает в себя иммуногенные фрагменты полноразмерного белка (например, фрагмент С - см. ЕР 478602). Способы получения дифтерийного анатоксина (DT) также хорошо известны в данной области техники. Например, DT предпочтительно получают путем очистки токсина из культуры Corynebacteriumdiphtheriae с последущей химической детоксификацией, однако, альтернативно получают путем очистки рекомбинантного или генетически детоксифицированного аналога токсина (например, CRM197 или другие мутанты, как описано в US 4709017, US 5843711, US 5601827 и US 5917017). Способы получения убитых целых клеток Bordetella pertussis (Pw), подходящих для данного изо-1 011480 бретения, раскрыты в WO 93/24148, которые являются подходящими способами приготовления лекарственного средства для получения DT-TT-Pw-HepB вакцин. Конъюгаты бактериального капсульного полисахарида могут содержать любой пептид-, полипептид- или белок-носитель, содержащий по меньшей мере один Т-хелперный эпитоп. Предпочтительно,используемый(ые) белок-носитель (белки-носители) выбран(ы) из группы, содержащей столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, CRM197, рекомбинантный дифтерийный токсин (как описано в любом из US 4709017, WO 93/25210, WO 95/33481 или WO 00/48638), пневмолизин (предпочтительно химически детоксифицированный, или детоксифицированный мутант) из S. pneumoniae, ОМРС из N. meningitidis и белок D (PD) из Н. influenzae (ЕР 594610). Полисахарид может быть связан с белком-носителем с помощью любого известного способа (например, Likhite, патент США 4372945 и Armor et al., патент США 4474757). Предпочтительно осуществляют CDAP-конъюгацию (WO 95/08348). При CDAP цианирующий реагент 1-циано-диметиламинопиридиния тетрафторборат (CDAP) предпочтительно используют для синтеза полисахарид-белковых конъюгатов. Реакцию цианирования можно осуществлять в относительно мягких условиях, чтобы избежать гидролиза полисахаридов, чувствительных к щелочи. Этот синтез дает возможность прямого связывания с белком-носителем. Иммуногенные композиции по данному изобретению предпочтительно изготавливают в виде вакцины для введения in vivo в организм хозяина, так что они обеспечивают титр антител, превышающий критерий для серологической защиты для каждого антигенного компонента для приемлемого процента субъектов людей. Это является важным тестом в оценке эффективности вакцины в популяции. Антигены с титром связанных антител, выше которого считается, что в организме хозяина наблюдается сероконверсия против антигена, хорошо известны, и такие титры опубликованы организациями, такими как Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ). Предпочтительно у более чем 80% статистически значимой выборки субъектов наблюдается сероконверсия, более предпочтительно у более чем 90%, еще более предпочтительно у более чем 93% и наиболее предпочтительно у 96-100%. Иммуногенная композиция по данному изобретению предпочтительно содержит адъюванты. Подходящие адъюванты включают в себя соль алюминия, такую как гель гидроксида алюминия (квасцы) или фосфат алюминия, но могут также представлять собой соль кальция, железа или цинка, либо могут представлять собой нерастворимую суспензию ацилированного тирозина или ацилированных сахаров, катионные или анионные производные полисахаридов, или полифосфазены. Адъювант может также быть выбран таким образом, чтобы являться предпочтительным индуктором ответа Th1-типа, для того чтобы способствовать развитию клеточно-опосредованной ветви иммунного ответа. Высокие уровни цитокинов Th1-типа способствуют индукции клеточно-опосредованных иммунных ответов на данный антиген, в то время как высокие уровни цитокинов Th2-типа способствуют индукции гуморальных иммунных ответов на данный антиген. Подходящие системы адъювантов, которые стимулируют преимущественно Th1-ответ, включают в себя монофосфорил липид А или его производное, в частности 3-дез-О-ацилированный монофосфорил липида А, и комбинацию монофосфорил липида А, предпочтительно 3-дез-О-ацилированного монофосфорил липида A (3D-MPL), вместе с солью алюминия. Усиленная система включает в себя комбинацию монофосфорил липида А и производного сапонина, в частности комбинацию QS21 и 3D-MPL, как раскрыто в WO 94/00153, или менее реактогенную композицию, где QS21 блокирован холестерином, как раскрыто в WO 96/33739. Особенно сильнодействующий адъювантный препарат, включающий в себяQS21, 3D-MPL и токоферол в эмульсии типа масло в воде, описан в WO 95/17210. Вакцина может дополнительно содержать сапонин, более предпочтительно QS21. Препарат может также содержать эмульсию типа масло в воде и токоферол (WO 95/17210). Неметилированные CpG-содержащие олигонуклеотиды (WO 96/02555) также являются предпочтительными индукторами Th1-ответа и являются подходящими для применения в настоящем изобретении. Соли алюминия являются предпочтительными адъювантами в вышеуказанных иммуногенных композициях. Вакцинные препараты по настоящему изобретению можно применять для защиты или лечения млекопитающего, подверженного инфекции, посредством введения указанной вакцины системным путем введения или через слизистые оболочки. Такие введения могут включать в себя инъекцию посредством внутримышечного, внутрибрюшинного, интрадермального или подкожного путей введения; либо посредством введения через слизистые оболочки в пероральный/пищеварительный, дыхательный, мочеполовой тракт. Количество антигена в каждой вакцинной дозе выбрано как количество, которое индуцирует иммунопротективный ответ без значительных неблагоприятных побочных эффектов при типичных вакцинах. Такое количество будет варьировать в зависимости от того, какой конкретно иммуноген используют и как он представлен. Содержание белковых антигенов в вакцине будет обычно находиться в диапазоне 1-100 мкг, предпочтительно 5-50 мкг, наиболее типично в диапазоне 5-25 мкг.-2 011480 После первичной вакцинации субъекты могут получать одну или несколько бустерных иммунизаций с достаточными промежутками времени. Получение вакцины в целом описано в Vaccine Design (The subunit and adjuvant approach (edsPowell M.F.Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York). Инкапсуляция в липосомы описана Fullerton, патент США 4235877. Все цитированные ссылки и публикации включены здесь путем ссылки. Примеры Примеры предложены только для целей иллюстрации и не предназначены для ограничения объема данного изобретения. Пример 1. Получение DT-TT-Pw-HepB (DTPw-HepB) вакцины. Это получение осуществляли, как описано в WO 93/24148. Эта вакцина имеется в продаже под названием Tritanrix-HepB (SmithKline Beecham Biologicals). Пример 2. Получение MenA-MenC-Hib (MenAC-Hib) вакцин. 1) MenC-Hib или MenA-MenC-Hib без адъювантовMenAC-Hib: капсульный полисахарид N. meningitidis типа А, конъюгированный с белком D (с использованием CDAP-методики), капсульный полисахарид N. meningitidis типа С, конъюгированный с белком D, и капсульный полисахарид Н. influenzae типа b, конъюгированный с ТТ, смешивали вместе в количестве 5 мкг каждого полисахарида в каждом конъюгате на 0,5 мл дозы для человека. Значение pH доводили до 6,1, и лиофилизировали в присутствии сахарозы.MenC-Hib: капсульный полисахарид N. meningitidis типа С, конъюгированный с белком D (с использованием CDAP-методики) и капсульный полисахарид Н. influenzae типа b, конъюгированный с ТТ,смешивали вместе в количестве 5 мкг полисахарида в каждом конъюгате на 0,5 мл дозы для человека. Значение pH доводили до 6,1, и лиофилизировали в присутствии сахарозы. 2) MenA-MenC-Hib с адъювантами Капсульный полисахарид N. meningitidis типа А, конъюгированный с белком D (с использованиемCDAP-методики), капсульный полисахарид N. meningitidis типа С, конъюгированный с белком D, и капсульный полисахарид Н. influenzae типа b, конъюгированный с ТТ, адсорбировали каждый отдельно в солевом растворе на фосфате алюминия (5 мкг каждого конъюгата на 100 мкг, 100 мкг и 60 мкг Al3+, соответственно, на дозу). Адсорбированные вакцины смешивали вместе при pH 6,1 и лиофилизировали в присутствии сахарозы. Пример 3. Клиническое испытание. В исследовании MenAC-Hib 001 оценивается иммуногенность, реактогенность и безопасность, индуцированная MenC-Hib и MenAC-Hib (адсорбированной и не адсорбированной), приготовленными согласно вышеуказанному примеру, которые давали младенцам в виде трехдозовой первичной вакцинации. Данное исследование представляло собой фазу II, рандомизированное исследование, и включало в себя пять исследуемых групп. Препараты, которые оценивали, представляли собой лиофилизированный простой и адсорбированный препарат MenAC-Hib и простой препарат MenC-Hib. Эти три препарата вводили младенцам в возрасте 3, 4 и 5 месяцев в трех первых исследуемых группах; Tritanrix-HepB давали сопутствующим образом (в виде отдельной инъекции) в этих трех группах. Простой препарат Men ACHib также разводили в жидкой комбинированной дифтерийно-столбнячной, цельно-клеточной коклюшной, гепатит В - вакцине (Tritanrix-HepB) и вводили в виде единой инъекции младенцам в возрасте 3, 4 и 5 месяцев в четвертой исследуемой группе. В пятой группе (контроль) вводили Tritanrix-HepB-Hib вакцину младенцам в возрасте 3, 4, 5 месяцев. Исследование было открытым, но в двух первых группах,получающих два различных препарата MenAC-Hib, являлось двойным слепым, также как и в двух последних группах, получающих Tritanrix-HepB-MenAC-Hib и Tritanrix-HepB-Hib вакцины. В итоге,исследуемые группы представляли собой: Результаты показали, что каждый препарат, который оценивали, индуцировал хороший иммунный ответ против каждого антигена; определяли антитела против менингококковых групп А и С, ПолиРибозил-Фосфата (капсульного полисахарида Н. influenzae типа b), дифтерийного анатоксина, столбнячного анатоксина, Bordetella pertussis и гепатита В. Каждый вакцинный препарат хорошо переносился. 0,15 и 1,0 мкг/мл являются типичными порогами титров, которые наблюдают для оценки серологической защиты. В случае DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцины Hib-интерференция отсутствует. Это также можно видеть на фиг. 1, которая показывает обратную кумулятивную кривую (RCC) данных. Кроме того, является неожиданным то, что не адсорбированная MenAC-Hib вакцина показала значительно более высокий анти-PRP титр по сравнению с адсорбированным препаратом. Пост-III анти-белок D IqG. См. также фиг. 2 для соответствующих RCC анти-PD IgG кривых. Как можно видеть, все препараты индуцировали иммунный ответ к белку-носителю (белок D). Пост-III анти-PSA (капсульный полисахарид менингококка A) IgG. Этот тест представляет собой тест ELISA, в котором определяют содержание IgG против менингококкового полисахарида А. На фиг. 3 показаны RCC графики данных. Отсутствует интерференция MenA полисахаридного антигена с индукцией, по меньшей мере, того же количества антител, которое имеется-4 011480 в случае DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцины. Пост-III анти-SBA против менингококка серогруппы А. Этот тест представляет собой бактерицидный тест, в котором определяют антитела с бактерицидными свойствами против менингококка серогруппы А. Отсутствует интерференция MenA полисахаридного антигена с индукцией, по меньшей мере, того же количества антител, которое имеется в случае Этот тест представляет собой тест ELISA, в котором определяют содержание IgG против менингококкового полисахарида С. На фиг. 4 показаны RCC графики данных. SBA-MenC представляет собой бактерицидный тест, в котором определяют бактерицидную активность сыворотки против менингококка С. Это является единицей измерения функциональных антител. На фиг. 5 показаны RCC графики данных. Отсутствует интерференция на MenC полисахаридный антиген, с индукцией такого же количества функциональных антител, как в случае, когда он присутствует в DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцине. Пост-III SBA-MenC против менингококка серогруппы С. Этот тест представляет собой бактерицидный тест, в котором определяют антитела с бактерицидными свойствами против менингококка серогруппы А. Это является единицей измерения функциональ-5 011480 ных антител. Отсутствует интерференция на MenC полисахаридный антиген с индукцией такого же количества функциональных антител, как в случае, когда он присутствует в DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцине. Уровни сероконверсии антител к дифтерии, столбняку, клеткам В. pertussis и НерВ. ВР относится к В. pertussis. Тест ELISA был сделан с определением IgG против цельноклеточных бактерий. Геометрический средний титр (GMT) антител к дифтерии, столбняку, клеткам В. pertussis и НерВ. Из предыдущих двух таблиц наблюдалось, что иммунный ответ на DT, ТТ, Pw и НерВ сходен с ответом, полученным с помощью зарегистрированной Tritanrix-HepB вакцины, с точки зрения как сероконверсии, так и GMT. Пример 4. Получение Hib - 11-валентной пневмококковой вакцины на основе конъюгата(Hib/Strep11V). Капсульный полисахарид Н. influenzae типа b, конъюгированный с ТТ (10 мкг полисахарида в конъюгате на дозу), который был лиофилизирован при pH 6,1 в присутствии лактозы [Hiberix (SmithKline Beecham Biologicals)] растворяли непосредственно (в день применения) в жидком растворе 11 валентного пневмококкового капсульного полисахарида (серотипы 1, 3, 4, 5, 6 В, 7F, 9V, 14, 18 С, 19F и 23F), конъюгированного с PD (1 мкг полисахарида в каждом конъюгате на дозу). Пневмококковую вакцину предварительно адсорбировали на 0,5 мг Al3+ (в виде AlPO4). Пример 5. Клинические испытания вакцины из примера 4. Вакцину из примера 4 и контрольную вакцину вводили в трехдозовом режиме (3-, 4-, 5-месячный возраст) немецким младенцам. Результаты иммунного ответа (определенного через 1 месяц после последнего первичного введения) были следующими. Антипневмококковые IgG антитела: GMC (мкг/мл) (с помощью ELISA)+ обозначает сопутствующее (в различных частях), а не комбинированное введение. Процент субъектов с концентрациями антител не менее чем 0,5 мкг/мл. 100% субъектов имели концентрации анти-PRP (Hib-полисахарид) антител не менее чем 1,0 мкг/мл.Hiberix (не адсорбированный Hib-TT-конъюгат) имела GMC после подобной схемы введения примерно 6 мкг/мл. Иммунный ответ в показателях антител, определенных ELISA, у младенцев, которые получали 11Pn-PD/Hib вакцину, был подобен ответу, наблюдаемому у тех, кто получал 11Pn-PD вакцину, для всех серотипов, за исключением серотипов 1, 3 и 9V, для которых тенденция к более низким геометрическим средним концентрациям наблюдалась для 11 Pn-PD/Hib вакцины. Однако эти различия были незначительны, как показано перекрыванием 95% доверительных интервалов. 11 Pn-PD/Hib вакцина индуцировала функциональные (опсонофагоцитические) антитела ко всем 11 серотипам. Комбинированная Hib-вакцина с пневмококковой конъюгатной вакциной не препятствовала в значительной степени пневмококковому иммунному ответу и, к удивлению, усиливала анти-PRP ответ по сравнению с обоими зарегистрированными вакцинами Infanrix-HeXa и Hiberix. Пример 6. Клиническое испытание эффекта более низких количеств Hib в DTPwHepB вакцине. Рандомизированное испытание для оценки иммуногенности вакцины на основе Hib-TT-конъюгата в различных дозах в SB Biologicals DTPwHepB (Tritanrix-HB) вакцины осуществляли в виде первичной вакцинации у здоровых младенцев в возрасте 6, 10 и 14 недель. 544 субъектам в четырех группах (по 136 каждая) вводили следующие вакцины. Группа 1: DTPwHepB непосредственно смешивали с полной дозой Hib-TT (PRP 10 мкг; ТТ 10-20 мкг; лактоза 12,6 мкг; алюминий (в виде солей) 0,15 мг); Группа 2: DTPwHepB непосредственно смешивали с половинной дозой Hib-TT (PRP 5 мкг; ТТ 1020 мкг; лактоза 10 мкг; алюминий (в виде солей) 0,0755 мг); Группа 3: DTPwHepB непосредственно смешивали с четвертичной дозой Hib-TT (PRP 2,5 мкг; ТТ 5-10 мкг; лактоза 10 мкг; алюминий (в виде солей) 0,036 мг); Группа 4: DTPwHepB сопутствующим образом вводили (в различных частях) с полной дозой HibTT. Геометрические средние титры (GMTs) анти-PRP антител через один месяц после третьей дозы были следующими: Препарат с низкой дозой, неожиданно, проявлял самые высокие величины GMT. Этот эффект должен быть даже больше, если Hib-TT вакцина не адсорбирована. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Поливалентная иммуногенная композиция, содержащая убитые целые клетки Bordetella pertussis,столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин и конъюгат белка-носителя и капсульного полисахарида или олигосахарида Н. influenzae типа В (Hib), где количество конъюгата на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет 2,5 мкг, а иммуногенность конъюгата является эквивалентной или улучшенной по сравнению с такими же композициями, содержащими большие количества конъюгата. 2. Поливалентная иммуногенная композиция, содержащая убитые целые клетки Bordetella pertussis,столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, поверхностный антиген вируса гепатита В и конъюгат белка-носителя и капсульного полисахарида или олигосахарида Н. influenzae типа В, где количество конъюгата на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет менее 10 мкг, а иммуногенность конъюгата является эквивалентной или улучшенной по сравнению с такими же композициями, содержащими большие количества конъюгата. 3. Поливалентная иммуногенная композиция, содержащая убитые целые клетки Bordetella pertussis,столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин и конъюгат белка-носителя и капсульного полисахари-7 011480 да или олигосахарида Н. influenzae типа В, где количество конъюгата на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет менее 10 мкг, а иммуногенность конъюгата является эквивалентной или улучшенной по сравнению с такими же композициями, содержащими большие количества конъюгата, и где используемый белок-носитель выбран из группы, содержащей дифтерийный анатоксин, CRM197, ОМРС из N. meningitidis и белок D из Н. influenzae. 4. Иммуногенная композиция по п.1 или 2, где используемый белок-носитель выбран из группы,содержащей дифтерийный анатоксин, CRM197, ОМРС из N. meningitidis и белок D из H. influenzae. 5. Иммуногенная композиция по пп.1, 3 или 4, содержащая поверхностный антиген вируса гепатита В. 6. Иммуногенная композиция по п.2 или 3, где количество полисахарида в конъюгате на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет 1-8 мкг. 7. Иммуногенная композиция по п.2 или 3, где количество полисахарида в конъюгате на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет примерно 2,5 мкг. 8. Иммуногенная композиция по п.2 или 3, где количество полисахарида в конъюгате на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет примерно 4 мкг. 9. Иммуногенная композиция по п.2 или 3, где количество полисахарида в конъюгате на 0,5 мл дозы от массы вакцины составляет примерно 5 мкг. 10. Иммуногенная композиция по пп.1-9, где конъюгат белка-носителя и капсульного полисахарида Н. influenzae типа В не адсорбирован на адъювантной соли алюминия. 11. Вакцина, содержащая иммуногенную композицию по пп.1-10 и фармацевтически приемлемый эксципиент. 12. Способ приготовления вакцины по п.11, включающий смешивание иммуногенной композиции по любому из пп.1-10 с фармацевтически приемлемым эксципиентом. 13. Иммуногенная композиция по пп.1-10 для применения в качестве вакцины. 14. Вакцина по п.11 для применения для предупреждения или лечения млекопитающего, подверженного инфекции, посредством введения указанной вакцины системным путем или через слизистые оболочки.