Композиция, содержащая рутин и полиненасыщенную жирную кислоту, имеющая ингибирующую активность в отношении 5a-редуктазы

Дата публикации и выдачи патента Номер заявки КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ РУТИН И ПОЛИНЕНАСЫЩЕННУЮ ЖИРНУЮ КИСЛОТУ, ИМЕЮЩАЯ ИНГИБИРУЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ 5 РЕДУКТАЗЫ Настоящее изобретение относится к применению выбранных действующих начал природного происхождения взамен экстракта из Boehmeria nipononivea для регуляции трофики волосяных фолликулов и образования секрета сальных желез в коже и их применению при алопеции со значительными практическими преимуществами и в отношении профиля безопасности. Композиция по изобретению основана на ассоциации омега-6 полиненасыщенных кислот и рутина в фармацевтически приемлемом носителе. 015819 Настоящее изобретение относится к композиции, имеющей ингибирующую активность в отношении 5-редуктазы. В частности, изобретение относится к композиции, подходящей для применения для нормализации образования секрета сальных желез и для трофики волосяных луковиц, для борьбы с истончением волос и выпадением волос и при алопеции. Настоящее изобретение относится к области фармацевтических, диетических или косметических продуктов, подходящих для стимуляции роста волос и регуляции образования секрета сальных желез в коже. Настоящее изобретение относится к области препаратов, подходящих для борьбы с выпадением волос и стимуляции роста волос и восстановления физиологических условий на уровне волосяных луковиц и сальных желез. Известно, что андрогенная алопеция является типом алопеции, поражающим большинство людей,страдающих от выпадения волос. Она состоит из прогрессирующего уменьшения и приближения к поверхности волосяных фолликулов. Существует генетическая предрасположенность к андрогенной алопеции. Вероятнее всего, происходит передача ферментов, вовлеченных в преобразование и накопление андрогенных гормонов, т.е. двух изоферментных форм 5-редуктазы (1 типа и 2 типа), ароматазы Р 450 и цитозольного рецептора андрогенов. Этот фермент, экспрессируемый, главным образом, на уровне фолликулярных клеток, действует, превращая тестостерон, основной мужской гормон, в его активное производное, дигидротестостерон или DHT, один из факторов, приводящих к андрогенной алопеции, телогенному выпадению волос (telogen effluvium) и себорее.DHT вреден для генетически предрасположенных волосяных фолликулов волосистой части кожи головы. Этот гормон вовлечен в превращение пушковых волос в длинные волосы у подростков и себорею. Фермент 5-редуктаза широко распространен в волосистой части кожи головы, способствуя накоплению DHT. Кроме того, большие количества 5-редуктазы и, следовательно, большие количества DHT образуются именно на уровне фолликулярных структур волосистой части кожи головы, что, препятствуя трофике фолликулов, вызывает истончение волос. Таким образом, были изучены активные вещества, которые, блокируя или уменьшая активность 5 редуктазы, вызывают снижение уровней DHT и, следовательно, уменьшение вредных эффектов на волосы. Также известно, что 1 тип 5-редуктазы локализован, главным образом, в сальных железах, в печени, в меньшей степени в кератиноцитах кожи и фолликулов, в сосочках дермы, в потовых железах. 2 тип 5-редуктазы локализован в придатке яичка, семенных пузырьках, предстательной железе и коже половых органов плодов, в эпителиальном влагалище волосяных фолликулов, в фибробластах кожи половых органов. Одними из наиболее широкоиспользуемых веществ для борьбы с выпадением волос являются ингибиторы 5-редуктазы, одним из которых является финастерид, эффективность которого подтверждена при лечении алопеции и чрезмерного образования секрета сальных желез. Применение этой молекулы, тем не менее, сопровождается побочными эффектами, среди которых сниженное либидо, импотенция, кожная сыпь, уменьшение количества спермы, а также общее противопоказание в случае беременности. Для преодоления этих недостатков были использованы альтернативные вещества природного происхождения, имеющие меньше побочных эффектов. Исследования на растении, имеющем происхождение из Японии, Boehmeria nivea var. nipononivea,принадлежащем семейству Urticaceae, продемонстрировали, что экстракты оказывают значительное действие в отношении стимуляции роста волос. Клинические исследования, проведенные авторами настоящей заявки, подтвердили, что водный экстракт из Boehmeria оказывает особо значительные терапевтические эффекты. По этой причине растительный экстракт из Boehmeria был использован как агент, регулирующий трофику волос, в композициях для перорального или местного применения.Urticaceae вызывают аллергические реакции также серьезные и, следовательно, противопоказаны, в частности, субъектам, подверженным риску атопической бронхиальной астмы. Поскольку вероятно, что фитокомплекс, экстрагируемый из этого растения, сам по себе содержит вещества, вызывающие эти аллергические реакции, следовательно, применение продуктов, содержащих экстракт Boehmeria, также необходимым образом противопоказано субъектам, подверженным риску аллергий, в частности субъектам с астмой. Это представляет собой серьезную причину для беспокойства, которая также препятствует использованию продукта всеми потенциальными пользователями. Таким образом, в ситуации на настоящий момент существует необходимость использовать препараты растительного происхождения, альтернативные по отношению к Boehmeria nipononivea, применение которых, тем не менее, минимизирует риск аллергических реакций. Одна из задач настоящего изобретения, таким образом, состоит в предоставлении композиции, ос-1 015819 нованной на действующих началах природного происхождения, которая, несмотря на то, что она действует на волосяные луковицы и регуляцию образования секрета сальных желез, минимизирует или устраняет риски развития аллергических реакций, типичных для Urticaceae. В свете этих задач согласно первому аспекту настоящего изобретения предложена композиция, содержащая ассоциацию омега-6 полиненасыщенных жирных кислот и рутина в фармацевтически приемлемом носителе. Авторы настоящей заявки продолжили изучение известных составляющих Boehmeria nipononivea и верификацию физиологических эффектов, оказываемых на экспериментальном уровне. На основании исследований было обнаружено, что ни одна из известных составляющих сама по себе не позволяет получить результаты, сопоставимые с целым экстрактом. Тем не менее, в процессе этого исследования авторы настоящей заявки пришли к рассматриваемому изобретению, которое неожиданно позволяет получить эффекты, сопоставимые или превышающие эффекты, которые могут быть получены с использованием целого экстракта, с использованием подходящей комбинации только двух его составляющих. Они представляют собой чистые вещества природного происхождения и имеются в продаже: рутин и полиненасыщенные жирные кислоты. Рутин представляет собой действующее начало, принадлежащее семейству флавоноидов, группе полифункциональных веществ, имеющих биологическую активность, интересную с функциональной точки зрения в области питания и лечения. С химической точки зрения флавоноиды представляют собой дифенилпропаноиды, разделенные на различные группы в зависимости от степени окисления гетероциклического кольца. Природа функциональных групп определяет активность флавоноидов как антиоксидантов и противовоспалительных агентов. Авторы изобретения обнаружили, что ассоциация рутина и омега-6 полиненасыщенных кислот в композиции приводит не только к получению высокой активности, но и к существенному снижению или устранению рисков развития аллергических реакций, ассоциированных с применением экстрактов изBoehmeria nipononivea. В дополнение к действию на 5-редуктазу полиненасыщенные кислоты, используемые в объеме изобретения, выполняют другие важные функции как структурного типа, поскольку они являются основными компонентами клеточных мембран всех тканей, так и метаболического типа, поскольку они принимают участие в ряде реакций окисления и циклизации с образованием простагландинов и лейкотриенов, участвующих в регуляции многочисленных функций в организме. Согласно воплощению изобретения омега-6 полиненасыщенные кислоты (PUFA), которые могут быть использованы в объеме изобретения, выбраны из группы, включающей следующее: Среди этих омега-6 полиненасыщенных кислот гамма-линоленовые кислоты, обозначаемые аббревиатурой GLA, и линолевая кислота оказались наиболее активными в регуляции активности фермента 5-редуктазы. Предпочтительная композиция по изобретению, таким образом, содержит ассоциацию гаммалиноленовой кислоты, линолевой кислоты и рутина в фармацевтически или физиологически приемлемом носителе.GLA является незаменимой жирной кислотой (EFA) из семейства омега-6. EFA необходимы для здоровья, поскольку они не образуются в организме, но должны поступать с пищей. EFA необходимы для нормального функционирования мозга, роста, развития, питания костей, регуляции метаболизма и поддержания репродуктивных процессов. GLA также оказывает противовоспалительное действие в дополнение к действию на рост кератиноцитов, нормализации липидного профиля. Линолевая кислота является еще одной жирной кислотой из семейства омега-6, которая в организме-2 015819 превращается в GLA. Авторы изобретения также обнаружили природный источник, особенно богатый полиненасыщенными жирными кислотами, в частности линолевой и линоленовой кислотой, в масле бурачника (Boragooffincinalis L). В частности, масло бурачника имеет следующий состав: Согласно воплощению изобретения масло бурачника используют в качестве ингредиента, богатогоGLA и линолевой кислотой, в композиции по изобретению. Композицию по изобретению используют в фармацевтической или диетической области в регуляции образования секрета сальных желез в коже и/или трофики волосяных фолликулов. В частности, композиция имеет показания для применения при атрофии волосяных луковиц, телогенном выпадении волос и андрогенной алопеции. В отношении применения экстракта Boehmeria nipononivea, применение композиции по изобретению также обеспечивает несколько особенно значимых преимуществ, среди которых применение действующих начал природного происхождения, являющихся чистыми, хорошо контролируемыми и имеющих стабильное качество; наоборот, экстракт имеет характерную для продуктов такого типа вариабельность; отсутствие проблем, связанных с сезонной поставкой растений, из которых получают экстракт, и,следовательно, периодического отсутствия доступности исходного сырья; действительно, экстракт изBoehmeria получают только один раз в год при сборе растения, и его необходимо получать в огромных количествах, результатом чего являются проблемы с хранением и консервацией; низкая стоимость природных действующих начал; отсутствие проблемы микробиологического загрязнения, часто наблюдаемого на экстракте Boehmeria, который, как все экстракты растительных лекарственных средств, обычно характеризуется достаточно большими микробными нагрузками, чем экстракты чистых веществ; как уже упомянуто, значительное снижение верификации аллергических ответов, связанных с некоторыми компонентами, присутствующими в растительных экстрактах из Urticacea (Boehmeria nipononivea). Применение композиции по изобретению также вызывает снижение образования секрета сальных желез с полезными эффектами на акне и себорею и регуляцию физиологического роста волос, с благоприятным эффектом на андрогенную алопецию, телогенное выпадение волос. Композиции по изобретению для системного или местного применения могут быть изготовлены в форме таблеток, пилюль, капсул, раствора, суспензии, сиропа, лосьона, пены, крема и в формах, подходящих для регулируемого высвобождения действующих начал. Препараты для введения по изобретению изготавливают в соответствии с обычными методиками изготовления диетических и/или фармацевтических продуктов, добавлением одного или более физиологически приемлемых носителей к синергическим действующим началам. Таким образом, используют физиологически приемлемые носители, смешанные с подходящими консервантами, стабилизаторами, эксципиентами, носителями и ароматизаторами. Типичная композиция для перорального применения, например, имеет форму таблетки с ядром, содержащим действующие начала, описанные выше, внутри покрывающей пленки. Покрытие обычно содержит одно или более чем одно вещество, выбранное из метилгидроксипропилцеллюлозы, микрокристаллической целлюлозы, стеариновой кислоты и подходящих красителей, таких как диоксид титана,оксид железа и т.п. В композиции по изобретению действующие начала по изобретению обычно присутствуют в раз-3 015819 личных количествах, обычно составляющих от 0,1 до 15 мас.%, более предпочтительно от 1 до 10 мас.%. Согласно другому воплощению предложен способ регуляции образования секрета сальных желез в коже и трофики волосяных фолликулов, включающий введение или нанесение препарата описанного выше типа субъекту, нуждающемуся в лечении. Согласно другому аспекту изобретения предложено применение омега-6 полиненасыщенной жирной кислоты и рутина для изготовления композиции для регуляции активности 5-редуктазы, особенно подходящей для регуляции образования секрета сальных желез в коже и/или трофики волосяных фолликулов. Следующие примеры приведены исключительно с целью иллюстрации настоящего изобретения, и их никоим образом не следует рассматривать как ограничивающие объем защиты в соответствии с прилагаемой формулой изобретения. Пример 1. Таблетка, покрытая оболочкой, для перорального применения в качестве пищевой добавки, которая, как указано, полезна для трофики волосяных луковиц до и в течение менопаузы.-4 015819 Пример 2. Таблетка для перорального применения. Пример 3. Таблетка для перорального применения с активностью, регулирующей образование секрета сальных желез, для борьбы с перхотью.-5 015819 Пример 4. Таблетка для перорального применения для предотвращения андрогенной алопеции у молодежи. Пример 5. Капсулы для перорального применения со стимулирующим действием на волосяные луковицы и нормализующим действием в отношении образования секрета сальных желез. Пример 6. Лосьон для местного применения с трофическим действием на волосяные луковицы и нормализующим действием в отношении образования секрета сальных желез. Было проведено исследование композиции из примера 1 для оценки способности действующих начал, входящих в ее состав, модулировать активность фермента 5-редуктазы in vitro после обработки в течение до 72 ч веществом, исследованным на клеточной линии мышиных фибробластов. Этот фермент присутствует в коже, в меланоцитах, фибробластах, кератиноцитах, он превращает тестостерон в дигидротестостерон (DHT) и играет ключевую роль при многих кожных расстройствах, таких как обыкновенные угри, гирсутизм, себорея и алопеция. В рассматриваемом исследовании фибробласты обрабатывали тестостероном для увеличения базальной продукции 5-редуктазы и затем исследуемым веществом в различных концентрациях в течение периода времени до 48 ч. Содержание образованного обработанными клетками DHT измеряли в различных конечных точках(в данном конкретном случае, через 24 и 48 ч) твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA), и процент ингибирования специфичной ферментативной активности может быть оценен сравнением с необработанными клетками. Титрованный экстракт Serenoa repens (Saw palm) хорошо известного в фармакопее растения ввиду его способности ингибировать 5-редуктазу и используемого с этой целью в лечении гиперплазии предстательной железы у мужчин использовали в качестве положительного контроля. Следующие продукты использовали в качестве веществ сравнения: сухой экстракт Boehmeria nipononivea; порошок масла бурачника (омега-6); рутин. Методика эксперимента Способ исследования Модель эксперимента. Клеточная модель, используемая для исследования in vitro, представляет собой мышиные фибробласты (клетки 3 Т 3). Клеточная линия имеет происхождение из фибробластов мышей-альбиносов штаммаSwiss, стабилизированных эмбрионами. Приготовление исследуемого образца. Образцы растворяли в растворе абсолютного этанола и воды (1:1) и затем разводили в среде в следующих концентрациях: сухой экстракт Boehmeria nipononivea - 10 мкг/мл; порошок масла бурачника (омега-6) - 6 мкг/мл; рутин - 0,5 мкг/мл; смесь порошка масла бурачника (омега-6) и рутина по изобретению - 6,5 мкг/мл. Положительный контроль.Serenoa repens в конечной концентрации 10 мкг/мл использовали в качестве положительного контроля в присутствии тестостерона 1 мкг/л. Методика исследования Фаза предварительной инкубации. Клетки высеивают в 25-см 3 колбах (Т 25) в культуральной среде DMEM (минимальной эссенциальной среде Дульбекко) с добавлением 10% FBS (сыворотки плода коровы). При достижении конфлюэнтности культуры обрабатывают в течение 24 ч 10 нг/мл тестостерона. Фаза обработки. После фазы предварительной инкубации культуры клети обрабатывают исходным материалом, указанным в предусмотренной конечной концентрации. Экстракт Serenoa repens в концентрации 0,1 мг/мл используют в качестве положительного контроля, в то время как отрицательный контроль состоит из планшетов, обрабатываемых растворителем. Воздействие продолжают в течение 24-48 ч в инкубаторе при 37 С, 5% СО 2, обновляя среду каждые 24 ч. Каждый образец исследуют в двух повторностях. В конце эксперимента проводят подсчет клеток для оценки возможных цитотоксических эффектов. Определение количества присутствующих DHT и тестостерона проводят иммунодиагностическими исследованиями (ELISA) во внеклеточном (стандартные культуральные среды) и внутриклеточном (клеточные экстракты) компартментах. Приготовление клеточных экстрактов. В конце эксперимента из каждого флакона собирают культуральную среду и готовят клеточный экстракт. Его приготовление включает четыре фазы: трипсинизацию клеточного слоя in situ в колбе; центрифугирование и сбор клеток в виде осадков; экстракцию с использованием Triton X-100 (1% в основной питательной среде); обработку ультразвуком в течение 30 мин. Определение DHT. Из каждой емкости брали 50 мкл культуральной среды для использования для определения DHT посредством ELISA-исследования, проводимого при комнатной температуре в каждой конечной точке(24-48 ч). Способ включает построение калибровочной кривой, вычисленной в диапазоне подходящих концентраций. В ELISA-исследовании используют специфическое антитело, направленное против человеческого DHT, иммобилизованное на твердом субстрате, и реагент (DHT, конъюгированный с пероксидазой хрена), конкурирующий за связывание с антителом. Реакцию выявляют посредством растворения субстрата, и при этом образуется окрашенное соединение, обратно пропорционально концентрации DHT. Для каждого образца считывают поглощение при 450 нм. Образцы считывали при длине волны 450 нм. Вычисление результатов Определение конечной концентрации дигидротестостерона (DHT). Как указано выше, реальную концентрацию DHT вычисляют по формуле[измеренная концентрация DHT] - [концентрация DHT в бычьей сыворотке] - [перекрестное связывание тестостерона],где количество DHT, присутствующего в среде (имеющего происхождение из бычьей сыворотки),равно 0,1 нг/мл. Перекрестное связывание тестостерона вычисляют по формуле[концентрация тестостерона]8,7/100. На данном этапе можно вычислить процент ингибирования 5-редуктазы. Результат выражают как измеренное среднее эксперимента. Суммарную погрешность эксперимента оценивают как не более чем 10%. Вычисляют % активности 5-редуктазы по отношению к контролю, не обработанному исследуемым веществом% снижения = [среднее поглощение контроля - среднее поглощение обработанного продукта]/ среднее поглощение контроля 100. Результаты показывают, что среди исследуемых веществ смесь омега-6 полиненасыщенных жирных кислот с рутином оказалась более эффективной, чем экстракт Boehmeria, в ингибировании активности фермента 5-редуктазы с максимальной активностью через 48 ч (-32,8%). Эффект Boehmeria и смеси омега-6 полиненасыщенных жирных кислот с рутином устанавливают быстрее, чем у положительного контроля, состоящего из Serenoa repens. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Композиция для регуляции трофики волосяных фолликулов и/или образования секрета сальных желез в коже для применения в лечении атрофии волосяных луковиц, телогенного выпадения волос (telogen effluvium), андрогенной алопеции, акне и себореи, состоящая из ассоциации по меньшей мере одной омега-6 полиненасыщенной жирной кислоты и рутина в фармацевтически приемлемом носителе. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная омега-6 полиненасыщенная жирная кислота выбрана из группы, включающей линолевую кислоту, гамма-линоленовую кислоту, эйкозадиеновую кислоту, дигомо-гамма-линоленовую кислоту, арахидоновую кислоту, докозадиеновую кислоту, адреновую кислоту, докозапентаеновую кислоту и их смеси. 3. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что указанная омега-6 полиненасыщенная жирная кислота представляет собой гамма-линоленовую кислоту (GLA), линолевую кислоту или их смеси. 4. Композиция по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что указанная омега-6 полиненасыщенная жирная кислота присутствует в количестве от 0,01 до 10 мас.% и указанный рутин присутствует в количестве от 0,001 до 10 мас.% относительно всей массы композиции. 5. Композиция по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что она содержит гамма-линоленовую кислоту (GLA), линолевую кислоту и рутин в качестве действующих начал в отношении 5-редуктазы. 6. Композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что эта композиция дополнительно содержит один или более из следующих компонентов: сухого экстракта филлантуса лекарственного, соевых изофлавонов, хелатного соединения цинка и аминокислоты, хелатного соединения меди и аминокислоты,d-пантотената кальция, трихлоргидрата спермидина, фолиевой кислоты, биотина, ресвератрола. 7. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она содержит масло бурачника и рутин. 8. Применение омега-6 полиненасыщенной жирной кислоты и рутина для регуляции трофики волосяных фолликулов и/или образования секрета сальных желез в коже для лечения атрофии волосяных луковиц, телогенного выпадения волос (telogen effluvium), андрогенной алопеции, акне и себореи. 9. Применение по п.8, где указанная полиненасыщенная жирная кислота выбрана из группы, включающей линолевую кислоту, гамма-линоленовую кислоту, эйкозадиеновую кислоту, дигомо-гаммалиноленовую кислоту, арахидоновую кислоту, докозадиеновую кислоту, адреновую кислоту, докозапентаеновую кислоту и их смеси. 10. Применение по п.8 или 9, где указанная полиненасыщенная жирная кислота включает гаммалиноленовую кислоту (GLA), линолевую кислоту и их смеси. 11. Применение масла бурачника в сочетании с рутином для изготовления композиции для регуляции активности 5-редуктазы. 12. Применение по п.11, где указанная 5-редуктаза представляет собой 5-редуктазу 2 типа. 13. Применение по любому из пп.8-12 для регуляции образования секрета сальных желез в коже и/или трофики волосяных фолликулов. 14. Применение по любому из пп.8-13, где указанная композиция представляет собой пищевую добавку или диетический продукт для перорального применения. 15. Применение по любому из пп.8-13, где указанная композиция представляет собой фармацевтический или косметический продукт для местного применения. Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2