Фармацевтические препараты на основе бибапцитида для визуализации и лечения тромбов

Номер патента: 5406

Опубликовано: 24.02.2005

Авторы: Дин Ричард Т., Листер-Джеймс Джон

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Реагент-предшественник, содержащий монокарбоксилат бибапцитида, для получения медикаментов, предназначенных для лечения тромбоза.

2. Диагностическая композиция, содержащая монокарбоксилат бибапцитида.

3. Диагностическая композиция по п.2, дополнительно содержащая дикарбоксилат бибапцитида.

4. Диагностическая композиция по п.3, дополнительно содержащая бибапцитид.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая тромболитическим действием, содержащая монокарбоксилат бибапцитида и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, дополнительно содержащая дикарбоксилат бибапцитида.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, дополнительно содержащая бибапцитид.

 

Текст

Смотреть все

005406 Данное изобретение относится к области диагностической визуализации тромбоза. Более конкретно, изобретение относится к фармацевтическим композициям для визуализации тромба. Изобретение также относится к области лечения тромбоза с использованием медикаментов, полученных из новых реагентов-предшественников. Тромбоз и тромбоэмболия, в особенности тромбоз глубоких вен (DVT) и эмболия легких (РЕ), являются общеизвестными клиническими состояниями, которые связаны со значительной распространенностью болезни и смертностью. Подсчитано, что в США приблизительно 5 млн пациентов переживают один или несколько случаев DVT в год и что происходит свыше 500000 случаев эмболии легких, следствием чего является 100000 смертельных исходов. Подсчитано также, что свыше 90% всех случаев эмболии легких возникают из-за DVT нижних конечностей. Терапия антикоагулянтом может быть эффективной при этих состояниях, если применяется на достаточно ранней стадии. Однако такое лечение связано с риском (например, внутреннее кровотечение), что препятствует необязательному профилактическому применению. Более предпочтительные методики тромболитического вмешательства (такие, как введение рекомбинантного активатора плазминогена ткани или стрептокиназы) могут быть использованы в острых случаях, но эти методики несут даже более значительный риск. Кроме того, эффективное клиническое применение этих методик требует того, чтобы место вызывающего раздражение тромбоза было идентифицировано, с тем чтобы отслеживать эффект лечения. По этим причинам очень желательны средства для быстрой локализации тромба in vivo, наиболее предпочтительно с использованием неинвазивных методов. В последнее время для идентификации тромбоза глубоких вен используют контрастную флебографию и исследование ультразвуком сжатой В-моды(тип колебаний); выбор того, какую методику использовать, зависит от предполагаемого места нахождения тромба. Однако последняя методика является инвазивной и обе методики являются неудобными для пациента. К тому же эти методики во многих случаях либо не подходят, либо дают неточные результаты. Используемые в настоящее время методы диагностики РЕ включают в себя рентгеновское исследование грудной клетки, электрокардиограмму (ЭКГ), артериальное давление кислорода, сканограммы перфузии и вентиляции легких и ангиографию легких. Кроме последней (инвазивной) процедуры, ни одна из этих методик не способна обеспечить однозначный диагноз. Недавно с помощью меченого 99mТс-пептидa-апцитида, который связывается с рецептором GPIIb/IIIa на тромбоцитах, являющихся компонентом тромба, обеспечивая тем самым средство визуализации, специфически нацеленное на тромб, завершили обширное клиническое исследование сцинтиграфической визуализации острого DVT. Набор для получения меченого 99mТс-апцитида, ACUTECT, проходит процесс оценки его безопас-ности в качестве радиофармацевтического про-дукта. В состав ACUTECT входит бибапцитид,химическая структура которого представлена ниже. Бибапцитид и его мечение радиоактивной меткой описаны в переуступленных в обычном порядке патентах США 5508020 и 5645815; в переуступленной в обычном порядке находящейся на рассмотрении в патентном ведомстве USSN 08/253317 и в заявках WO 93/23085; WO 93/25244; WO 94/23758 и WO 95/33496. Переуступленная в обычном порядке патентная заявка WO 94/07918 раскрывает, что бибапцитид может быть также использован без радиоактивной метки в качестве тромболитического средства. Бибапцитид является димером мономерного апцитида, который также раскрыт в указанных выше патентах и заявке США и в международных патентных заявках. Димерный бибапцитид образован через бисмалеимидную связь карбокси-концевых цистеинов двух мономеров апцитида. Мономерный апцитид связан в комплекс с 99 ТсО, и комплекс апцитид/99 Тс охарактеризован у Zheng, et al., Abstract 336, 213thAmerican Chemical Society Meeting, 13-17 апреля 1997. Авторы данного изобретения открыли два новых димера апцитида, монокарбоксилат бибапцитида и дикарбоксилат бибапцитида, которые присутствуют в водных растворах бибапцитида при рН примерно более 5. Эти новые димеры апцитида могут быть использованы в качестве предшественников для получения меченого 99mТc-апцитида. В одном воплощении изобретение относится к реагенту-предшественнику, содержащему монокарбоксилат бибапцитида.-1 005406 В другом воплощении изобретение относится к реагенту-предшественнику, содержащему дикарбоксилат бибапцитида. В другом воплощении изобретение относится к композиции, содержащей монокарбоксилат бибапцитида. В другом воплощении изобретение относится к композиции, содержащей дикарбоксилат бибапцитида. Еще в одном воплощении изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей монокарбоксилат бибапцитида и фармацевтически приемлемый носитель. В другом воплощении изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей дикарбоксилат бибапцитида и фармацевтически приемлемый носитель. Приведенные здесь ссылки на патентную и научную литературу создают основу для понимания специалистами. Выданные патенты США и патентоспособные заявки включены в описание в виде ссылки. Фармацевтические композиции согласно изобретению обеспечивают новые реагентыпредшественники, монокарбоксилат бибапцити-да и дикарбоксилат бибапцитида, для получения как средств визуализации, так и тромболитических средств, производных от бибапцитида. Химическая структура монокарбоксилата бибапцитида изображена ниже. Химическая структура дикарбоксилата бибапцитида изображена ниже. Наличие свободных карбоксилатных групп придает реагентам-предшественникам более высокую растворимость в водной среде, чем у бибапцитида. Например, сравнение растворимостей бибапцитида и дикарбоксилата бибапцитида в 0,1 М фосфатном буфере при различных рН при комнатной температуре показано в табл. 1 ниже. Таблица 1 Растворимости Бибапцитид можно получить в Diatide, Inc., Londonderry, NH, USA. Бибапцитид может быть получен,например, с использованием твердофазного синтеза пептида, как установлено в патентах США 5508020, 5645815, в USSN 08/253317 и в WO 93/23085; WO 93/25244; WO 94/23758, WO 94/07918 и WO 95/33496. Бибапцитид предпочтительно получают при рН примерно ниже 4 и выделяют в виде трифторацетатной соли. Трифторацетат бибапцитида солюбилизируют, используя ацетонитрил или этанол и воду или водный раствор, перед введением в состав препарата. Для использования млекопитающими, такими как люди, предпочтительна солюбилизация этанолом и водой или водным раствором.-2 005406 Монокарбоксилат бибапцитида и дикарбоксилат бибапцитида предпочтительно получают из бибапцитида путем повышения рН со-любилизированного бибапцитида с использованием подходящего буфера, такого как фосфатный буфер, доведенный до желаемого рН, как указано в примере 1, бикарбонатного буфера, как раскрыто в примере 2. Наиболее предпочтительно, когда монокарбоксилат бибапцитида и дикарбоксилат бибапцитида получают путем восстановления лиофилизованного трифторацетата бибапцитида буфером при физиологическом рН. Любой буфер может быть использован для доведения рН бибапцитида, чтобы получить монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида. Для получения реагентов-предшественников согласно изобретению могут быть использованы, например,фосфатный буфер, бикарбонатный буфер, боратный буфер, нитратный буфер, сульфатный буфер и тому подобное. В качестве варианта, монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида могут быть получены ферментативно, например с использованием гидролазы. Монокарбоксилат бибапцитида и дикарбоксилат бибапцитида могут быть изолированы и очищены с использованием известных методов,таких как ВЭЖХ, как показано в примерах 1 и 2. Стабильности бибапцитида, монокарбоксилата бибапцитида и дикарбоксилата бибапцитида при различных значениях рН приведены в табл. 2 ниже. Стабильность выражена в табл. 2 как время 95%-ной стабильности при комнатной температуре. Таблица 2 Стабильности Реагенты-предшественники согласно изобретению могут быть предоставлены в виде фармацевтической композиции. Предпочтительно фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит монокарбоксилат бибапцитида или дикарбоксилат бибапцитида. Более предпочтительно фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит монокарбоксилат бибапцитида и дикарбоксилат бибапцитида. Наиболее предпочтительно фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит монокарбоксилат бибапцитида, дикарбоксилат бибапцитида и бибапцитид. Количества монокарбоксилата бибапцитида, дикарбоксилата бибапцитида и бибапцитида в фармацевтическом препарате могут изменяться в соответствии с этим воплощением изобретения. Коммерчески приготовленный бибапцитид для продажи какACUTECT обычно содержит между около 10 и около 50% монокарбоксилата бибапцитида и между около 3 и около 12% дикарбоксилата бибапцитида. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может еще содержать фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, такой как разновидности подходящего альбумина. Как используется здесь, "фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель" может включать в себя любой или все растворители, дисперсионную среду, антибактериальные или противогрибковые агенты, изотонические агенты, ингибиторы фермента и тому подобное. Применение такой среды и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в этой области. Например, раствор для инъекций хлорида натрия и раствор для инъекций Рингера обычно используют в качестве разбавителей. Реагент-предшественник готовят как стерильный, апирогенный, парентерально приемлемый водный раствор, который необязательно может быть представлен в лиофилизованной форме и может быть восстановлен потребителем. Приготовление таких парентерально приемлемых растворов, имеющих благодаря рН изотоничность, стабильность и тому подобное, известно специалистам. Новые реагенты-предшественники согласно изобретению могут быть использованы для получения диагностических или терапевтических средств, производных от бибапцитида. Такие агенты включают в себя средства для сцинтиграфической визуализации для обнаружения и диагностики тромба, как описано более полно в патентах США 5508020, 5645815, в USSN 08/253317 и в WO 93/23085; WO 93/25244; WO 94/23758 и WO 95/33496. Монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида могут быть также использованы для получения тромболитических средств, как установлено в заявке WO 94/07918. Реагентыпредшественники согласно изобретению могут быть также использованы для получения тромболитического средства, содержащего направляющий пептид, полученный из бибапцитида, который ковалентно связан с тромболитической протеиназой, как подробно описано в совместно находящихся на рассмотрении патентных заявках USSN 08/753781 и USSN 08/982981. Когда реагент-предшественник согласно изобретению используют для получения меченого диагностического или терапевтического агента, производного от бибапцитида, может быть использована любая метка, генерирующая сигнал. Такие метки могут быть включены в состав или связаны в комплекс с реагентом-предшественником согласно изобретению любым способом, подходящим для конкретной метки,-3 005406 либо непосредственной ковалентной или нековалентной связью с реагентом-предшественником, либо не непосредственной ковалентной или нековалентной связью с ним. Подходящие метки включают в себя радиоактивные метки, флуоресцентные метки, парамагнитные метки, тяжелые элементы или ионы редкоземельных элементов, подходящие для использования в компьютерной томографии, и тому подобное. Предпочтительны радиоактивные метки. Более предпочтительно использовать в методах согласно изобретению -излучающие радионуклиды, такие как 123I, 67Ga, 111In и 99mТc. Более предпочтительно используют 99mТc для мечения реагентов-предшественников согласно изобретению. Когда в качестве метки используют 99mТc, 99mТc добавляют к фармацевтической композиции, содержащей монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида при значениях рН примерно выше 5, и полученную смесь нагревают столько времени и при такой температуре, которые достаточны для осуществления образования мономера апци-тида и метки указанного мономера радиоактивным изотопом. Предпочтительно, чтобы смесь фармацевтической композиции, содержащей монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида и 99mТc, нагревалась около 15 мин на кипящей водяной бане до образования агента сцинтиграфической визуализации, содержащего меченый 99mТс-апцитид. Меченые или немеченые агенты визуализации тромба или тромболитические средства, полученные с использованием реагентов-предшественников, согласно изобретению предпочтительно вводят внутривенно в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем живому млекопитающему. В соответствии с методиками данного изобретения агенты визуализации или тромболитические средства, полученные из фармацевтических композиций, содержащих монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида, предпочтительно вводят в одноразовой дозе в любой обычной среде для внутривенных инъекций, такой как физраствор или плазма крови. Количество раствора при инъецировании однократной дозы составляет примерно от 0,01 до 10 мл. Диагностические и терапевтические средства, полученные из фармацевтических композиций, содержащих монокарбоксилат бибапцитида и/или дикарбоксилат бибапцитида, предпочтительно вводят в диагностически или терапевтически эффективном количестве млекопитающему при потенциальном риске связанного с тромбом болезненного состояния или страдающему от такого болезненного состояния. Термин "диагностически эффективное количество" означает здесь общее количество каждого активного компонента фармацевтической композиции диагностического агента, полученного из монокарбоксилата бибапцитида и/или дикарбоксилата бибапцитида, или общее количество такого препарата, введенное в методе, использующем диагностический агент, которое достаточно для получения измеримого сигнала,локализованного на месте тромба in vivo. Термин "терапевтически эффективное количество" означает здесь общее количество каждого активного компонента фармацевтической композиции терапевтического агента, полученного из монокарбоксилата бибапцитида и/или дикарбоксилата бибапцитида, или общее количество такого препарата, введенное в методе, использующем терапевтический агент, которое достаточно для того, чтобы показать значительную пользу для пациента, т.е. уменьшение распространенности и тяжести тромба по сравнению с тем, что ожидается для сравнимой группы пациентов, не получающих терапевтического агента, как определено штатным врачом больницы. Применительно к индивидуальному активному ингредиенту, вводимому отдельно, термин относится к одному этому ингредиенту. Применительно к сочетанию термин относится к объединенным количествам активных ингредиентов, которые имеют результатом диагностический или терапевтический эффект, вводятся ли они в сочетании, последовательно или одновременно. Например, агенты визуализации или терапевтические агенты,полученные из монокарбоксилата бибапцитида и/или дикарбоксилата бибапцитида, могут быть введены в дозе приблизительно от 0,1 до 10 мг/кг массы тела, введены внутривенно либо целиком как болюс, либо частично как болюс, сопровождаемый вливанием через 1-2 ч. Когда диагностические или терапевтические агенты с радиоактивной меткой получают из монокарбоксилата бибапцитида и/или дикарбоксилата бибапцитида, унифицированная доза для введения имеет радиоактивность примерно от 0,01 до 100 мКи, предпочтительно приблизительно от 1 до 20 мКи. После внутривенного введения место тромба наблюдают в определенных аспектах путем радиовизуализации in vivo. Способы получения монокарбоксилата бибапцитида и дикарбоксилата бибапцитида полно пояснены на следующих примерах, которые показаны только с целью иллюстрации, но не для ограничения. Пример 1. Синтез монокарбоксилата бибапцитида. Трифторацетат бибапцитида (100 мг) суспендируют в 10 мл ацетонитрила (СН 3 СN), воздействуют ультразвуком в течение 1 мин и затем разбавляют 40 мл воды (H2O). Пептид растворяется полностью при добавлении воды (H2O). К этому раствору добавляют 40 мл 0,05 М фосфата натрия при рН 7, вызывающего легкое замутнение раствора. Раствор пептида имеет рН 1,2. Раствор инкубируют в кипящей водяной бане в течение 3 мин, в результате чего раствор становится прозрачным. Анализ ВЭЖХ указывает на наличие дикарбоксилата бибапцитида, монокарбоксилата бибапцитида и бибапцитида в приблизительных количествах 26, 54 и 14%, соответственно. Реакционный раствор непосредственно наносят на колонку Delta-Pak C18 47 х 300 мм, уравновешенную 10 мМ бикарбонатом аммония (NН 4 НСО 3), доведенным до рН 6-6,5 твердым CO2 (подвижная фаза С). Колонку промывают подвижной фазой С в течение 5 мин, сопровождая градиентом от 100/0 C/D до 90/10 C/D через 5 мин и затем 90/10 C/D до 80/20 C/D через 30 мин (подвижная фаза D=10 мМ NН 4 НСO3 в 75/25 СН 3 СN/Н 2 О при рН 6-6,5). Буферы ВЭЖХ не-4 005406 прерывно поддерживают при рН 6-6,5 твердым СO2. Фракции собирают на основе мониторинга эффлюента при 220 нм. Фракции затем анализируют методом аналитической ВЭЖХ и те, которые обнаруживают содержание чистого (98%) монокарбоксилата бибапцитида, объединяют и лиофилизуют, чтобы получить приблизительно 30 мг монокарбоксилата бибапцитида (30% выход) в виде белого порошка соли карбоната аммония. Анализ ЯМР монокарбоксилата бибапцитида (20% CD3CN/80% H2O, рН 6,Т=20 С), полученного таким образом, приведен в табл. 3 ниже. Таблица 3 Данные химического сдвига 1 Н-ЯМР (, м.д.) для монокарбоксилата бибапцитида Диастереомерные резонансы Пример 2. Синтез дикарбоксилата бибапцитида. Трифторацетат бибапцитида (100 мг) суспендируют в 5 мл СН 3 СN, воздействуют ультразвуком в течение 1 мин и затем разбавляют 25 мл H2O. Пептид полностью растворяется при добавлении H2O. К этому раствору добавляют 1 мл насыщенного бикарбоната натрия (NаНСО 3) и 0,5 мл 1 М карбоната калия(K2 СО 3). Раствор пептида определяют как имеющий рН 8,5 с помощью индикаторной рН бумаги. Раствор становится мутным при добавлении K2 СО 3, но медленно осветляется через 2 ч при комнатной температуре. Спустя 3 ч обнаруживают, что реакционный раствор содержит 84% дикарбоксилата бибапцитида, как измерено путем аналитической ВЭЖХ. Реакционный раствор наносят непоредственно на колонку Delta-Pak C18 47 х 300 мм, уравновешенную 10 мМ бикарбонатом аммония (NН 4 НСО 3), доведенным до рН 6-6,5 твердым СO2 (подвижная фаза С). Колонку промывают 100% подвижной фазой С в течение 5 мин, сопровождая градиентом от 100/0 C/D до 90/10 C/D через 5 мин и затем 90/10 C/D до 70/30 C/D через 30 мин. Буферы ВЭЖХ непрерывно поддерживают при рН 6-6,5 твердым СО 2. Фракции собирают на основе мониторинга эффлюента при 220 нм. Фракции затем анализируют с помощью аналитической ВЭЖХ и те, которые обнаруживают содержание чистого (98%) дикарбоксилата бибапцитида, объединяют и лиофилизуют, чтобы получить приблизительно 54 мг дикарбоксилата бибапцитида (содержание пептида 86%, изолированный выход 53%) в виде белого порошка соли карбоната аммония. Анализ ЯМР-5 005406 дикарбоксилата бибапцитида (20% CD3CN/80% H2O, рН 6, Т=20 С), полученного таким образом, приведен в табл. 4 ниже. Данные химического сдвига 1 Н-ЯМР (, м.д.) для дикарбоксилата бибапцитида Диастереомерные резонансы Следует понимать, что в предшествующем описании уделено особое внимание конкретным специфическим воплощениям изобретения и что все модификации или эквиваленты его находятся в сфере действия изобретения, как установлено в прилагаемой формуле изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Реагент-предшественник, содержащий монокарбоксилат бибапцитида, для получения медикаментов, предназначенных для лечения тромбоза. 2. Диагностическая композиция, содержащая монокарбоксилат бибапцитида. 3. Диагностическая композиция по п.2, дополнительно содержащая дикарбоксилат бибапцитида. 4. Диагностическая композиция по п.3, дополнительно содержащая бибапцитид. 5. Фармацевтическая композиция, обладающая тромболитическим действием, содержащая монокарбоксилат бибапцитида и фармацевтически приемлемый носитель. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, дополнительно содержащая дикарбоксилат бибапцитида. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, дополнительно содержащая бибапцитид.

МПК / Метки

МПК: A61P 7/02, A61K 51/08

Метки: визуализации, бибапцитида, фармацевтические, основе, препараты, лечения, тромбов

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/7-5406-farmacevticheskie-preparaty-na-osnove-bibapcitida-dlya-vizualizacii-i-lecheniya-trombov.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Фармацевтические препараты на основе бибапцитида для визуализации и лечения тромбов</a>

Похожие патенты