Способ предотвращения и/или лечения болезни воспаленного кишечника, язвенного колита и болезни крона

СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ И/ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ВОСПАЛЕННОГО КИШЕЧНИКА, ЯЗВЕННОГО КОЛИТА И БОЛЕЗНИ КРОНА Изобретение относится к способу предотвращения и/или лечения болезни воспаленного кишечника, язвенного колита и болезни Крона путем введения субъекту, нуждающегося в этом,специальных Bifidobacterium бактерий, в том числе кисломолочного продукта, содержащего упомянутые специальные Bifidobacterium.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: КОМПАНИ ЖЕРВЭ ДАНОН (FR); ПРЕЗИДЕНТ ЭНД ФЭЛЛОУЗ ОФ ХАРВАРД КОЛЛИДЖ (US) Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения и уменьшения желудочнокишечного воспаления у лица путем введения специфического штамма Bifidobacterium, в частности кисломолочного продукта, содержащего упомянутый специфический штамм Bifidobacterium, для профилактики, лечения и уменьшения желудочно-кишечного воспаления, в том числе для профилактики и лечения воспалительного заболевания кишечника (IBD), язвенного колита (UC) и/или болезни Крона (CD) и для профилактики и лечения синдрома раздраженной толстой кишки (IBS). Уровень техники Желудочно-кишечный просвет интенсивно заселен бактериями, и для большинства многоклеточных это явление взаимовыгодно. Барьер, образованный эпителиальными клетками, существенен для симбиоза прокариотов и эукариотов, поскольку он создает границу, необходимую для их сосуществования, препятствуя воспалению слизистой оболочки под действием бактерий или других люминальных стимулов. Однако у некоторых особей этот баланс нарушается, приводя к постоянному желудочнокишечному воспалению (IBD), которое проявляется в виде двух основных заболеваний, болезни Крона и язвенного колита (UC), и может также вносить вклад в синдром раздраженной толстой кишки (IBS).Cell, 131, 33-45 (2007 разработали надежную мышиную модель язвенного колита, в которой патологические характеристики и реакция на анти-TNF лечение близко напоминают заболевание у человека. Было показано, что врожденный дефицит особого регуляторного гена в иммунной системе (возникающий в результате двойного нок-аута генов T-bet и RAG2; именуемых TRUC для T-bet RAG2 язвенного колита) приводит к агрессивному, спонтанному и передающемуся UC и увеличивает чувствительность к колиту у иммунологически интактных организмов. Патогенез этого заболевания проявляется в избыточном образовании провоспалительного цитокина TNF- в дендритных клетках толстой кишки. Иммунная система слизистой оболочки проявляет гиперактивную реакцию благодаря избыточному образованию в дендритных клетках толстой кишки TNF-, который токсичен для желудочно-кишечных эпителиальных клеток. Возникающее повреждение эпителиального барьера толстой кишки приводит к сдвигу симбиотической бактериальной популяции в направлении колитогенной флоры. Эта колитогенная флора может затем быть перенесена как вертикально, так и горизонтально к генетически интактным "хозяевам". Раскрытие изобретения Неожиданно при использовании описанной выше надежной мышиной модели было показано, что желудочно-кишечное воспаление у субъекта может быть уменьшено путем введения кисломолочного продукта, содержащего пробиотический штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, в особенности коммерчески доступный (ex Danone S.A.) молочнокислый пробиотический продукт, названныйActivia, содержащий упомянутый штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010. По одному воплощению изобретение относится к уменьшению желудочно-кишечного воспаления у субъекта путем введения упомянутому субъекту эффективного количества штамма Bifidobacterhimanimalis подвид lactis DN 173010. Штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010 обозначен номером 1-2494 в CNCM от 20 июня 2000 г. Этот штамм известен под показателем DN 173010 и защищен европейским патентом ЕР 1297176 как модулятор гликозилирования поверхности клеток желудочно-кишечного тракта.Bifidobacterium animalis - это грамм-положительная анаэробная палочкообразная бактерия, находящаяся в толстом кишечнике большинства млекопитающих, включая человека. Штамм Bifidobacteriumanimalis был ранее описан как два разных вида. В настоящее время оба вида относят к Bifidobacteriumanimalis с двумя подвидами animalis и lactis соответственно. Оба старых наименования Bifidobacteriumanimalis и Bifidobacterium lactis до сих пор применяют на товарных этикетках, поскольку этот вид часто используют в качестве пробиотика. В контексте данного изобретения наименования Bifidobacterium lactis и Bifidobacterium animalis подвид lactis могут быть использованы как взаимозаменяемые. По другому воплощению изобретение относится к уменьшению желудочно-кишечного воспаления у субъекта путем введения упомянутому субъекту эффективного количества кисломолочного продукта,содержащего упомянутый штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010. Согласно специфическому воплощению упомянутый кисломолочный продукт содержит две классические йогуртовые закваски, кисломолочные бактерии Streptococcus thermophilus и Lactobacillus bulgaricus. Хотя термин Activia- это собственная торговая марка Danone S.A., этот термин будет использован в настоящем описании для обозначения кисломолочного продукта, содержащего пробиотический штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN173010 вместе со штаммом S.thermophilus и штаммом L.bulgaricus. Согласно одному воплощению штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенный номером CNCM 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в течение по меньшей мере 14 дней, предпочтительно по меньшей мере в течение 21 дня, более предпочтительно в течение по меньшей мере 28 дней. Согласно одному воплощению штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенный номером CNCM 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в количе-1 021890 стве по меньшей мере 103 КОЕ за прием, предпочтительно между 103 и 1012 КОЕ за прием, более предпочтительно между 106 и 1011 за прием, наиболее предпочтительно в количестве около 1010 КОЕ за прием. Согласно одному воплощению штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенный номером CNCM 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в количестве по меньшей мере 103 КОЕ за прием, предпочтительно между 103 и 1012 КОЕ за прием, более предпочтительно между 106 и 1011 за прием, наиболее предпочтительно в количестве около 1010 КОЕ за прием, два раза в день, по меньшей мере 14 дней, предпочтительно по меньшей мере 21 день, более предпочтительно по меньшей мере 28 дней. Согласно одному воплощению штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенный номером CNCM 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в количестве по меньшей мере 103 КОЕ за прием, предпочтительно между 103 и 1012 КОЕ за прием, более предпочтительно между 106 и 1011 КОЕ за прием, наиболее предпочтительно в количестве около 1010 КОЕ за прием. Согласно одному воплощению штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенный номером CNCM 1-2494, вводят в виде фармацевтической композиции, в комбинации с фармацевтически приемлемым переносчиком, который может содержать наполнители. Согласно одному воплощению фармацевтическая композиция содержит также по меньшей мере еще один агент, обладающий активностью против IBD или IBS. Термин "фармацевтическая композиция" предназначен для обозначения "лекарства" или "ОТС(препарат, отпускаемый без рецепта)". Согласно другому воплощению кисломолочный продукт, содержащий упомянутый штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначаемый номеромCNCM 1-2494, вводят в виде йогурта. Согласно одному воплощению изобретение относится к способу профилактики, лечения и уменьшения желудочно-кишечного воспаления у субъекта путем введения упомянутого штаммаBifidobacterium animalisn подвид lactis DN 173010, обозначенного номером CNCM 1-2494, в частности кисломолочного продукта, содержащего упомянутый штамм Bifidobacterium animalis подвид lactisDN 173010, обозначенного номером CNCM 1-2494, для профилактики, лечения и уменьшения желудочно-кишечного воспаления, язвенного колита (UC) и/или болезни Крона (CD). Согласно одному воплощению уменьшение желудочно-кишечного воспаления определено как уменьшение провоспалительного цитокина TNF- в толстой кишке. Следовательно, согласно одному воплощению изобретение относится к способу уменьшения провоспалительного цитокина TNF- в толстой кишке, включающему этап введения упомянутому субъекту эффективного количества штамма Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенного номером CNCM 1-2494, или эффективного количества кисломолочного продукта, содержащего штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, обозначенного номером CNCM 1-2494, в частности продукта Activia. Термин "введение" предназначен означать "пероральное введение, т.е. субъект будет перорально принимать бактерии по настоящему изобретению или композицию, содержащую бактерии по настоящему изобретению, или предназначен означать "непосредственное введение", т.е. что бактерии по настоящему изобретению или композиция, содержащая бактерии по настоящему изобретению, будут непосредственно вводиться in situ, в частности с помощью колоноскопии или ректально через суппозитории. Пероральное введение композиции, содержащей бактерии по настоящему изобретению, может быть в форме желатиновых капсул, капсул, таблеток, порошков, гранул или оральных растворов или суспензий. В предпочтительном воплощении изобретения упомянутая композиция является пищевой композицией, которая может быть использована в производстве новых пищевых продуктов или пищевых ингредиентов, как определено в ЕС Regulation No. 258/97, и, в частности, в производстве функциональных пищевых продуктов. Пищу можно считать функциональной, если удовлетворительно показано, что она оказывает благотворный эффект на одну или несколько таргет-функций организма, кроме обычных эффектов питания, улучшая состояние здоровья и благополучия и/или снижая риск заболевания. В предпочтительном воплощении изобретения упомянутые бактерии вводят в форме молочного продукта. Конкретно, молочный продукт - это кисломолочный продукт и, более конкретно, кисломолочный продукт - это йогурт. Упомянутая композиция может, в частности, состоять из пробиотической упаковки, например в форме капсулы или желатиновой капсулы. Термин "пробиотики" предназначен для обозначения диетических добавок, содержащих потенциально полезные бактерии или дрожжи. Согласно определениям, принятым в настоящее время FAO/WHO,пробиотики - это "Живые микроорганизмы, которые при введении в адекватных количествах способствуют улучшению здоровья организма хозяин"а. Наиболее распространенный тип применяемых микробов- кисломолочные бактерии. Кисломолочные бактерии используют в пищевой промышленности уже много лет, поскольку они способны превращать сахара (включая лактозу) и другие углеводы в молочную кислоту. Это не только обеспечивает характерный кисловатый вкус кисломолочных продуктов, таких как йогурт, но также снижая рН, могут создавать худшие условия для роста гнилостных организмов, оказывая значительное преимущество для предотвращения желудочно-кишечных инфекций. Штаммы родовLactobacillus и Bifidobacterium - наиболее широко используемые пробиотические бактерии. Пробиотические бактериальные культуры предназначены для того, чтобы помочь восстанавливаться натуральной кишечной флоре. Их иногда рекомендуют врачи и чаще диетологи после курса антибиотиков или как часть лечения при кишечном кандидозе. Утверждается, что пробиотики усиливают иммунную систему, чтобы бороться с аллергией и другими иммунологическими заболеваниями. Согласно одному воплощению субъект - это млекопитающее, предпочтительно ребенок, взрослый человек или пожилой человек, наиболее предпочтительно взрослый человек. Согласно одному воплощению изобретение касается способа профилактики и лечения синдрома раздраженной кишки (IBS). В гастроэнтерологии синдром раздраженной кишки (IBS) или спастическая толстая кишка - это функциональное раздражение, характеризующееся болями в животе и изменениями ритма дефекации, не связанными с аномалиями при обычном клиническом тестировании. Он встречается очень часто и составляет 20-50% посещений гастроэнтеролога. Наиболее часто встречающиеся симптомы - боли в нижней части живота и вздутие, связанное с изменением ритма дефекации, и дискомфорт в области живота, проходящий при дефекации. Для понимания настоящего изобретения следует иметь в виду, что IBS - это синдром и что это выражение объединяет несколько симптомов, наблюдаемых у пациентов, страдающих от нарушений в желудочно-кишечной области. Таким образом, следует лечить не одну болезнь (IBS), но несколько типов болезней и чаще всего лечить или ослаблять один или несколько симптомов. Согласно одному воплощению настоящего изобретения способ по настоящему изобретению используют для профилактики и лечения синдрома раздраженной кишки (IBS), где IBS относится к, возникает вследствие и/или связан с желудочно-кишечным воспалением, в том числе с желудочнокишечным микровоспалением. Что касается нескольких типов IBS, характер болей в животе обычно описывают как связанный с преобладанием запора (IBS-C) или с преобладанием диареи (IBS-D) или их сочетания (IBS-M) или с отсутствием этих трех характеристик (IBS-U; U означает "Un субтип"). Предпочтительно способ по настоящему изобретению относится к лечению IBS-D (с преобладанием диареи). Наиболее предпочтительно способ по настоящему изобретению относится к уменьшению желудочно-кишечного воспаления у пациентов с диагнозом IBS-D. Предпочтительно способ по настоящему изобретению предназначен для лечения лиц с диагнозом по критерию ROME III. Наиболее предпочтительно способ по настоящему изобретению предназначен для уменьшения желудочно-кишечного воспаления у пациентов с диагнозом IBS-D согласно критериюROME - это процесс, разработанный для классификации функциональных желудочно-кишечных нарушений, основанный на клинических симптомах. Термин "критерий ROME III" предназначен для обозначения следующих критериев синдрома раздраженной кишки: рекуррентные боли в животе или дискомфорт по меньшей мере 3 дня в месяц за последние месяцы, связанные с 2 или большим числом следующих симптомов: 1) облегчение при дефекации; 2) начало, связанное с изменением частоты стула; 3) начало, связанное с изменением формы (внешнего вида) стула.Критерии, выполненные за последние 3 месяца с началом проявления симптомов по меньшей мере за 6 месяцев до установления диагноза."Дискомфорт" означает некомфортабельные неболевые ощущения. Другие симптомы, которые не существенны, но подтверждают диагноз IBS: аномальная частота стула (больше чем 3 движения кишечника в день или меньше чем 3 движения кишечника в неделю); аномальная форма стула (комковатый/твердый или жидкий/водянистый стул); аномальное прохождение стула (напряжение, безотлагательность или чувство неполного движения кишечника); выход слизи; вздутие или чувство растяжения в животе. Некоторые или все симптомы IBS могут наблюдаться в одно и то же время - некоторые симптомы могут быть более выражены, чем другие. Все критерии, необходимые для диагноза IBS-D, описаны в критерии Rome III (Longstreth et al.,2006). В дальнейшем изобретение будет объяснено несколькими примерами, не ограничиваясь ими. Понятно, что заявленные способы могут быть альтернативно сформулированы как вторая заявка на медицинское применение (композиция для применения), в частности, в тех случаях, когда заявки на способ не могут быть юридически использованы для гранта или патента; поэтому такие заявки не явно раскрыты в данном тексте. Краткое описания фигур Фиг. 1. Действие 4-недельного приема продуктов Activia, плацебо и воды на показатель колита у мышей TRUC и сравнение с контрольной группой (RAG2-/-). Фиг. 2. Действие 4-недельного приема продуктов Activia, плацебо и воды на показатель колита у мышей TRUC. Фиг. 3. Действие 4-недельного введения живой культуры В, lactis различного возраста (4, 8 и 12 недель) и сравнение с введением одной культуральной среды (MRS). Фиг. 4. Действие 4-недельного введения продуктов Activia и плацебо на провоспалительный цитокин TNF- в толстой кишке. Примеры Пример 1. Прием композиции Activia улучшает состояние при колите у мышей TRUC (фиг. 1). Продукты. Исследуемый продукт - кисломолочный продукт (Activia, Danone Research, Palaiseau), содержащий пробиотический штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010 (1,251010 колонии образующих единиц (КОЕ) на порцию) вместе с двумя классическими йогуртовыми штаммами-заквасками,Streptococcus thermophilus и Lactobacillus bulgaricus (1,210 КОЕ/порцию). Исследуемый продукт был без аромата. В качестве контроля использовали не заквашенный молочный продукт на основе молока без пробиотиков и с низким содержанием лактозы 4 г/порцию, как и в исследуемом продукте (подкисленное молоко). Продуктовое вмешательство. Мышей TRUC (n= 20) в возрасте 4 недели кормили либо исследуемым продуктом (n=10), либо контрольным продуктом (не заквашенным подкисленным молоком) (n=10) ежедневно в течение четырех недель. Микробный анализ. Собирали экскременты у мышей TRUC до и после кормления (в возрасте 4 и 8 недель соответственно), а также у 10 контрольных мышей (RAG2-/-). Экстрагировали фекальные DNA или RNA и выполняли полимеразную цепную реакцию qPCR для количественного определения различных бактериальных таксономических групп. Гистологический показатель колита. Воспаление толстой кишки оценивали с помощью гистологического анализа в конце кормления(возраст 8 недель) патоморфологом, не осведомленным о генотипе и лечебном вмешательстве. Результаты. Показано, что Activia улучшает состояние при TRUC колите. Пример 2. Небактериальные продукты Activia улучшают состояние при TRUC колите (фиг. 2). Эксперименты: см. выше - Мера выхода: гистологический показатель колита. Пример 3. Bifidobacterium animalis подвид lactis 173010 В улучшают состояние при TRUC колите(фиг. 3). Эксперименты: Bifidobacterium animalis lactis 173010 выращивали в течение ночи в среде MRS и бактериальную популяцию 4-5108 КОЕ собирали из этой культуры и затем вводили ежедневно в течение 4 недель BALB/c TRUC мышам в возрасте 4 (n=10), 8 (n=15) или 12 (n=15) недель. В качестве контроля вводили такой же объем одной среды MRS таким же образом, как в случае живой культуры. Гистологический показатель колита. Воспаление толстой кишки оценивали с помощью гистологического анализа в конце кормления патоморфологом, не осведомленным о генотипе и лечебном вмешательстве. Результаты. Пробиотический штамм Activia В.animalis lactis DN 173010 В влияет на тяжесть колита TRUC, но не в такой степени, как Activia. Эффект штамма 173010 В виден в ходе болезни TRUC либо на начальных, либо на поздних этапах. Эти результаты позволяют предположить, что действие Activia на течение TRUC колита не может быть снижено по сравнению с действием одного штамма 173010 В. Другие компоненты /характеристики этого молочного продукта также влияют на течение TRUC колита. Пример 4. Прием Activia снижает воспаление у мышей TRUC; Activia снижает избыточное образование провоспалительного цитокина TNF- в толстой кишке (фиг. 4). Эксперименты: см. выше - Мера выхода: уровень TNF- в толстой кишке (пг/мл) Заключение Микрофлора кишечника существенна для возникновения язвенного колита (UC), который спонтанно проявляется у T-bet RAG2-дефицитных мышей (Garrett et al.). В этой модели воспаления кишечника модуляция микрофлоры при терапии антибиотиками приводит к улучшению показателей UC. Это повышает вероятность того, что другие способы манипуляции микрофлорой также могут влиять на воспаление в этой модели. Целью данного исследования было определить микробную структуру микрофлоры кишечника мышей TRUC и проверить влияние пищи, содержащей живые бактерии, на хроническое же-4 021890 лудочно-кишечное воспаление. Влияние пищевого воздействия оценивали с помощью i) гистологии толстой кишки и ii) количественного анализа микрофлоры кишечника. Картирование микрофлоры кишечника в реальном времени с помощью qPCR образцов стула TRUC и RAG2-/- (контрольных) мышей продемонстрировало значительные различия в бактериальных популяциях, включающие существенное снижение бифидобактерии в TRUC. Чтобы проверить, улучшит ли заквашенное молоко, содержащее живые бифидобактерий, состояние колита в этой модели, мышей TRUC кормили заквашенным молоком, содержащим Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 17301 OB или контрольным продуктом (не заквашенным подкисленным молоком) в течение 4 недель. Интересно, что при приеме исследуемого продукта наблюдается значительное уменьшение воспаления кишечника, что видно по показателям гистологии и очевидно совпадает с изменениями микрофлоры кишечника. Результаты показывают, что прием заквашенного молока, содержащего Bifidobacterium animalis подвид lactisDN 173010, может уменьшить UC, потенциально с помощью непосредственных иммунных эффектов или создания неблагоприятных условий для предполагаемых патогенных бактерий, что может влиять на прогрессирование болезни в данной животной модели. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ предотвращения и лечения болезни воспаленного кишечника (IBD), язвенного колита(UC) и болезни Крона (CD) путем уменьшения желудочно-кишечного воспаления у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение упомянутому субъекту штамма Bifidobacterium animalis подвидlactis DN 173010, депонированного под номером CNCM 1-2494, в количестве от 103 до 1012 КОЕ в течение по меньшей мере 14 дней, причем упомянутый субъект является млекопитающим, включая взрослого человека. 2. Способ предотвращения и лечения болезни воспаленного кишечника (IBD), язвенного колита(UC) и болезни Крона (CD) путем уменьшения желудочно-кишечного воспаления у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение упомянутому субъекту кисломолочного продукта, содержащего штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis DN 173010, депонированного под номером CNCM 1-2494, в количестве от 103 до 1012 КОЕ в течение по меньшей мере 14 дней, причем упомянутый субъект является млекопитающим, включая взрослого человека. 3. Способ по п.2, в котором продукт, кроме того, включает кисломолочные бактерии Streptococcusthermophilus и Lactobacillus bulgaricus. 4. Способ по п.2, характеризующийся тем, что кисломолочный продукт представляет собой йогурт.