Соли производных гуанидина и фармацевтические композиции на их основе

006558 Изобретение касается новых солей производных гуанидина и фармацевтических композиций, содержащих соли в качестве биологически активного вещества, а также их получения. В заявке WO 97/45401 описаны производные гуанидина общей формулы (1) Формула 1 в которой X обозначает группы -R1, -NHR1, -NH-NH-CHR1R2 или NH-N=CR1R2, причем R1 и R2 независимо друг от друга обозначают водород, линейный или разветвленный С 3-С 20-алкильный или С 3-С 20 циклоалкильный, адамантильный, норборнильный, трициклодецильный или бензильный, пиридильный,индолильный, хинолильный, антрацильный, фенантрильный, перинафтильный или хинуклидинильный радикал. Использование этих соединений в качестве биологически активных веществ в фармацевтических композициях основано в особенности на ингибировании сфингомиелиназ. В качестве примеров соединений, соответствующих формуле 1, описаны исключительно основания в свободной форме. Вследствие своей детергентной структуры описанные основания и их соли, полученные путем нейтрализации неорганическими кислотами или путем растворения в забуференном физиологическом растворе поваренной соли, характеризуются сильными гемолитическими и повреждающими ткани свойствами. Далее, из неорганических солей в присутствии неорганических фосфат-ионов в водных растворах образуются нерастворимые фосфаты гуанидина. Поэтому они при относительно низких концентрациях в крови выпадают в осадок и тем самым становятся фармацевтически не эффективными. В результате этого фармацевтическая применимость производных гуанидина сильно ограничена. Поэтому задача состояла в том, чтобы изготовить физиологически переносимую и одновременно эффективную препаративную готовую форму производных гуанидина. Неожиданно было обнаружено, что соли, образующиеся при взаимодействии активных производных гуанидина с определенными органическими кислотами, обладают почти стократно уменьшенным гемолитическим действием и выдающейся локальной переносимостью при неизменяющейся эффективности, особенно в отношении ингибирования сфингомиелиназы. Далее, они не осаждаются неорганическими фосфатами. Благодаря этому соли согласно изобретению обладают значительно повышенной возможностью дозирования. Поставленная задача решается с помощью солей общей формулы (2) Формула 2 причем X обозначает валентную связь -CH2-NH-, -CH2-NH-NH- или -CH=N-NH-, и R обозначает линейный или разветвленный C1-С 30-алкильный, С 3-С 20-циклоалкильный, адамантильный, норборнильный,трициклодецильный, бензильный, фурильный, пиридильный, антрацильный, нафтильный, фенантрильный, перинафтильный или хинуклидинильный остаток, который может быть замещен одной или несколькими гидроксильными группами, С 1-С 4-алкоксигруппами, C1-С 4-алкильными группами и/или одним или несколькими атомами галогена, или одной или несколькими аминогруппами, иY обозначает линейный или разветвленный С 1-С 12-алкильный, С 3-С 8-циклоалкилный, бензильный,фурильный или пиридильный остаток, который может быть замещен одной или несколькими гидроксильными группами, карбоксильными группами, C1-C4-алкоксигруппами, С 1-С 4-алкильными группами и/или одним или несколькими атомами галогена, или одной или несколькими аминогруппами. Предпочтительно R обозначает пентильный, гексильный, гептильный, октильный, нонильный, децильный, ундецильныи, додецильный, тридецильный, циклододецильный, трицикло[5,2,1,02,6]децильный, бицикло[2,2,1]-циклогексильный или толуильный остаток. Особенно предпочтителен децильный остаток.X предпочтительно обозначает -CH2-NH-NH- или -CH=N-NH-, особенно -CH=N-NH-. Особенно предпочтительно Y обозначает метил, этил, пропил, изопропил, бутил, пентил, гексил,гептил, октил, нонил, децил, ундецил и додецил, а также гидроксиэтил- и 2-гидрокси-2,3-дикарбоксипропил. Наиболее предпочтительны метил, этил, октил, нонил, децил, ундецил и додецил, а также гидроксиэтил- и 2-гидрокси-2,3-дикарбоксипропил. Особенно предпочтительными соединениями согласно изобретению являются ундециламиногуанидинацетат, ундециламино гуанидинлактат, ундециламиногуанидинэнантат, ундециламино гуанидинпеларгонат и, в особенности, ундецилиденаминогуанидинацетат, ундецилиденаминогуанидинлактат, ундецилиденаминогуанидинэнантат и ундецилиденаминогуанидинпеларгонат. Вместо карбоновых кислот также могут быть использованы соответствующим образом замещенные сульфоновые или фосфоновые кислоты. Понятно, что изобретение касается в данном случае как чистых-1 006558 оптических изомеров, так и их смесей, а также рацематов, таутомерных форм или стереоизомеров. Соли производных гуанидина согласно изобретению более не обладают детергентным действием,так как полярная группа гуанидина связана с гидрофобным анионом кислоты. Поэтому эти соединения являются физиологически хорошо переносимыми. Неожиданно соли гуанидина согласно изобретению являются хорошо растворимыми в воде вплоть до концентраций 1000 мМоль/л, и не осаждаются фосфатионами из водных растворов. Активность, особенно в отношении ингибирования сфингомиелиназы, напротив, не изменяется или изменяется лишь незначительно. Получение гуанидинов известно, например, из заявки WO 97/45401. Получение солей гуанидина согласно изобретению можно осуществить простым путем посредством контактирования свободного основания с соответствующей свободной кислотой. Контактирование возможно как в пригодных растворителях, прежде всего в воде, так и непосредственно самих веществ, в особенности, если кислота и/или основание являются жидкими. Может быть предпочтительным добавление кислоты в избытке. Далее изобретение касается фармацевтических композиций, содержащих соли производных гуанидина согласно изобретению в качестве биологически активного вещества. Фармацевтические композиции могут быть использованы для лечения онкологических заболеваний, аутоиммунных заболеваний,сердечно-сосудистых заболеваний, инфекций и в особенности вирусных заболеваний. Биологически активные вещества пригодны также для профилактики. Предпочтительными биологически активными веществами являются ундецилиденаминогуанидинацетат, ундецилиденаминогуанидинлактат и особенно ундецилиденаминогуанидинэнантат и ундецилиденаминогуанидинпеларгонат. Композиции согласно изобретению содержат обычно наряду с биологически активным веществом согласно изобретению вспомогательные вещества и добавки, которые содействуют доведению до препаративных готовых форм. Также, например, в случае комбинированных препаратов могут быть добавлены другие биологически активные вещества, поскольку они химически совместимы с биологически активными веществами согласно изобретению. В качестве препаративных готовых форм принимают во внимание: жидкие композиции для инъекций; таблетки, капсулы, порошки, растворы, суспензии или эликсиры для орального применения; мази, кремы, эмульсии или лосьоны для наружного применения; порошки и растворы для ингаляции и суппозитории. Способы получения препаративных готовых форм известны специалистам. Наряду с переработкой солей согласно изобретению до получения готовых форм применения эти биологически активные вещества могут также быть переработаны до готовых форм применения путем предоставления свободного основания и кислоты, предпочтительно в эквимолярных количествах, и переработки этой смеси, в случае необходимости, с другими вспомогательными веществами и добавками. При этом соль получают in situ или при высвобождении из препаративной готовой формы в организме. Требуемые концентрации находятся в области от 0,5 до 30% биологически активного вещества в растворе для инъекций и, по крайней мере, около 1% биологически активного вещества в композициях для остальных форм применения. Дневная доза составляет для взрослых от 5 до 1000 мг. Следующие примеры позволяют ближе познакомиться с изобретением, при этом не ограничивая его. Пример 1. Получение ундецилиденаминогуанидинацетата. 23,4 г (0,1 Мол) ундецилиденаминогуанидина (т.е. С 10 Н 21-CH=N-NH-C(NH)-NH2, далее сокращенно обозначенного C11AG) суспендируют в 234 мл дистиллированной воды и после нагревания до 60 С при перемешивании медленно добавляют 6,005 г ледяной уксусной кислоты. Через 30 мин перемешивания отфильтровывают и охлаждают до 0 С. Выкристаллизовавшуюся соль отфильтровывают и промывают ледяной водой. Получают 27,8 г ацетата (выход 94,5%). Пример 2. Получение ундецилиденаминогуанидинэнантата. 23,4 г (0,1 Мол) ундецилиденаминогуанидина (C11AG) суспендируют в 234 мл дистиллированной воды и после нагревания до 60 С при перемешивании медленно добавляют 13,02 г энантовой кислоты. Через 30 мин перемешивания отфильтровывают и охлаждают до 0 С. Выкристаллизовавшуюся соль отфильтровывают и промывают ледяной водой. Получают 22 г энантата (выход 60,4%). Пример 3. Получение ундецилиденаминогуанидинпеларгоната. 23,4 г (0,1 Мол) ундецилиденаминогуанидина (C11AG) суспендируют в 234 мл дистиллированной воды и после нагревания до 60 С при перемешивании медленно добавляют 15,82 г пеларгоновой кислоты. Через 30 мин перемешивания отфильтровывают и охлаждают до 0 С. Выкристаллизовавшуюся соль отфильтровывают и промывают ледяной водой. Получают 36,1 г пеларгоната (выход 92%). Пример 4. Получение других солей ундецилиденаминогуанидина. 1,1 мМоль кислоты и 1 мМоль C11AG (234 мг) растворяют в 3 мл этилацетата. Избыточную кислоту удаляют трехкратным экстрагированием с дистиллированной водой. После сушки в вакууме получают соль с выходом более чем 90%. В табл. 1 приведены растворимости полученных солей и их температуры плавления, а также соответствующие данные для солей из примеров 1-3. Оказалось, что достаточно длинноцепочечные кислоты также образуют еще хорошо растворимые в воде соли. Но менее водорастворимые соли могут в отдельных случаях быть пригодными для специального применения. Пример 5. Гемолитическая активность различных солей C11AG. Соли молочной кислоты, уксусной кислоты, соляной кислоты, энантовой кислоты и пеларгоновой кислоты получали, как описано выше. Кровь мышей (взятую из хвостовой вены) разбавляли в соотношении 1:100 в изотоническом растворе глюкозы. К каждому 0,1 мл разбавленной мышиной крови добавляли различные соли C11AG в конечной концентрации 4-4000 мкг/мл. После смешивания и инкубации при комнатной температуре в течение 20 мин кратковременно центрифугировали и измеряли оптическую плотность при 405 нм. Оптическая плотность является мерой количества гемоглобина, высвободившегося из эритроцитов. На чертеже показана измеренная оптическая плотность в зависимости от концентрации производного гуанидина, представленной в логарифмической форме. Конечная концентрация удваивается по мере надобности от точки измерения до следующей. Показано, что производные гуанидина согласно изобретению только при концентрациях 32 мкг/мл и сверх этого проявляют достойную внимания гемолитическую активность, в то время как хлорид уже между 8 и 16 мкг/мл проявляет явное гемолитическое действие. Пример 6. Растворимость солей C11AG в фосфатном буфере. Был приготовлен 1 М буферный раствор фосфата калия, рН 7,4. Ряд разбавленных проб фосфата от 1000 мМ до 1 мМ смешивали с C11AG-солями молочной кислоты, уксусной кислоты, соляной кислоты,энантовой кислоты и пеларгоновой кислоты, так что в каждом случае конечная концентрация солиC11AG составляла 4 мМ. Образование кристаллов контролировали с помощью микроскопа при 40 кратном увеличении. Результаты приведены в табл. 2. В то время как хлорид уже при 1 мМ образует нерастворимые фосфаты, в случае ацетата и лактата фосфаты выпадают в осадок лишь при 10 мМ, и в случае энантата и пеларгоната даже растворы с 1000 мМ фосфат-иона являются стабильными. Таблица 2 Пример 7. Ингибирование нейтральной сфингомиелиназы. Соли молочной, уксусной, соляной, энантовой и пеларгоновой кислот получали аналогичным способом, как описано выше. Паранитрофенилфосфорилхолин растворяли в 0,1 М Tris при рН 7,2 и 10 мМ МgСl2 до концентрации 1 мг/мл. После добавления 0,1 единицы нейтральной сфингомиелиназы из Bazillus cereus добавляли различные соли C11AG с концентрациями между 0,1 и 1000 мкг/мл. После инкубации при 37 С в течение 24 ч измеряли оптическую плотность при 405 нм. Оптическая плотность является мерой количества расщепленного субстрата. Из кривых активность - доза определяли концентрацию, при которой наблюдалось ингибирование активности фермента на 50% (IC50). Результаты приведены в табл. 3. Показано, что активность частично даже улучшается, но, во всяком случае, не опускается существенно ниже, чем активность хлорида. Таблица 3-3 006558 Пример 8. Физиологическая переносимость различных солей C11AG. Из солей уксусной, соляной кислоты, энантовой и пеларгоновой кислот готовили растворы в изотоническом растворе глюкозы с концентрациями 4 мМ, 20 мМ, 40 мМ и 120 мМ. В каждом случае по 0,1 мл вводили подкожно 3 безволосым мышам (Stamm Swiss, Nu/Nu). Через 24 ч фиксировали степень повреждения ткани. Результаты приведены в табл. 4, где обозначены неявные повреждения = -, покраснения = + , отеки =и некрозы = . Оказалось, что хлорид уже при 20 мМ приводит к покраснениям и отекам. Ацетат до 20 мМ является хорошо переносимым, и вызывает только при 120 мМ такие повреждения, которые наблюдаются в случае хлорида уже при 20 мМ. Предпочтительные энантаты и пеларгонаты даже при 12 0 мМ не вызывают повреждений. Таблица 4 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соли производных гуанидина формулы причем X обозначает валентную связь, -CH2-NH-, -CH2-NH-NH- или -CH=N-NH- и R обозначает линейный или разветвленный C1-С 30-алкильный, С 3-С 20-циклоалкильный, адамантильный, норборнильный,трициклодецильный, бензильный, фурильный, пиридильный, антрацильный, нафтильный, фенантрильный, перинафтильный или хинуклидинильный остаток, который может быть замещен одной или несколькими гидроксильными группами, С 1-С 4-алкоксигруппами, С 1-С 4-алкильными группами и/или одним или несколькими атомами галогена, или одной или несколькими аминогруппами, иZ- обозначает карбоксильную группу O-CO-Y-, гдеY обозначает линейный или разветвленный С 1-С 12-алкильный, С 3-С 8-циклоалкильный, бензильный,фурильный или пиридильный остаток, который может быть замещен одной или несколькими гидроксильными группами, карбоксильными группами, C1-C4-алкоксигруппами, С 1-С 4-алкильными группами и/или одним или несколькими атомами галогена, или одной или несколькими аминогруппами, или группу сульфоновой или фосфоновой кислот. 2. Соль по п.1, отличающаяся тем, что R обозначает пентильный, гексильный, гептильный, октильный, нонильный, децильный, ундецильный, додецильный, тридецильный, циклододецильный, трицикло[5,2,1,02,6]-децильный, бицикло[2,2,1]-циклогексильный или толуильный остаток, в особенности децильный остаток. 3. Соль по п.1 или 2, отличающаяся тем, что Y обозначает метил, этил, пропил, изопропил, бутил,пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, додецил, гидроксиэтил или 2-гидрокси-2,3 дикарбоксипропил. 4. Соль по одному из пп.1-3, отличающаяся тем, что X обозначает -CH2-NH-NH- или -CH=N-NH-. 5. Соль по п.1, отличающаяся тем, что представляет собой ундецилиденаминогуанидинацетат, ундецилиденаминогуанидинлактат и в особенности ундецилиденаминогуанидинэнантат или ундецилиденаминогуанидинпеларгонат. 6. Фармацевтическая композиция для лечения онкологических заболеваний, аутоиммунных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний, инфекций или вирусных заболеваний, содержащая активное вещество и в случае необходимости обычные добавки и вспомогательные вещества, отличающаяся тем,что она в качестве активного вещества содержит одну или несколько солей по одному из пп.1-5. 7. Способ получения фармацевтической композиции по п.6, отличающийся тем, что соль по одному из пп.1-5 смешивается с обычными добавками или вспомогательными веществами. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что перед смешением соль получают из приблизительно эквимолярных количеств соответствующего основания и кислоты. 9. Применение соли по п.1 в качестве средства для лечения онкологических заболеваний, аутоиммунных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний, инфекций или вирусных заболеваний. 10. Применение фармацевтической композиции по п.6 для лечения онкологических заболеваний,аутоиммунных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний, инфекций или вирусных заболеваний.