Полиморфные модификации дифосфата производного-4″- замещенного-9-дезокси-9а-аза-9а-гомоэритромицина

1 Настоящее изобретение относится к новой кристаллической соли дифосфату [2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-2,6-дидезокси-3 С-метил-3-O-метил-4-С-[(пропиламино)метил]-L-рибогексопиранозил]окси]-2-этил-3,4,10 тригидрокси-3,5,8,10,12,14-гексаметил-11-3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)D-ксилогексопиранозил]окси]-1-окса-6-азациклопентадекан-15-она (здесь и далее соль дифосфат), которая полезна в качестве противобактериального и противопротозойного агента у млекопитающих. Это изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим свободное основание соли дифосфата, и к способам лечения бактериальных и протозойных инфекций у млекопитающих, при которых млекопитающим,нуждающимся в таком лечении, вводят свободное основание соли дифосфата. Свободное основание соли дифосфата по настоящему изобретению обладает мощной активностью против различных бактериальных и протозойных инфекций при парентеральном употреблении у млекопитающих. Известно, что антибиотики макролиды полезны при лечении широкого спектра бактериальных и протозойных инфекций у млекопитающих, рыб и птиц. Такие антибиотики включают в себя различные производные эритромицина А, такие как азитромицин, который имеется в продаже и на который ссылаются в Патентах США 4474768 и 4517359, оба включены сюда полностью путем ссылки. Краткое изложение сущности изобретения Настоящее изобретение относится к двум полиморфным модификациям дифосфата (2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-2,6-дидезокси-3-С-метил-3-O-метил-4-С-[(пропиламино)метил]L-рибогексопиранозил]окси]-2-этил-3,4,10 тригидрокси-3,5,8,10,12,14-гексаметил-11-[(3,4,6 тридезокси-3-(диметиламино)D-ксилогексопиранозил]окси]-1-окса-6-азациклопента-декан 15-она (здесь и далее соль дифосфат), показанным ниже где n равно числу от 0 до 8. В одном воплощении изобретения соль дифосфат является жидким кристаллом, который имеет тонкопластинчатый габитус и проявляет продольную слоистость, но не поперечную слоистость. Дифракция рентгеновских лучей на порошке показывает слабую упорядоченность или отсутствие упорядоченности. В другом воплощении соль дифосфат является кристаллической. Микроскопия соли 2 дифосфата показывает пластинчатый или призматический габитус, оба имеют высокое двойное лучепреломление. Соль дифосфат представляет собой хорошо упорядоченный кристалл,характеризующийся картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке, приведенной ниже Пик 1 2 3 4 Расстоя- 16,2 12,4 10,8 9,0 ние d Кристаллическая соль дифосфат постепенно поглощает воду до приблизительно 13% при 87%-ной относительной влажности с быстрым захватом воды до приблизительно 48%, происходящим при приблизительно 90%-ной относительной влажности. Термогравиметрический анализ соли дифосфата показывает, что три молекулы воды теряются при приблизительно 75 С, четвертая молекула воды теряется при приблизительно 120 С, пятая молекула воды теряется при приблизительно 170 С и три последних молекулы воды теряются при приблизительно 200 С. Максимальное число молекул воды, необходимых для стабилизации кристаллической решетки, составляет приблизительно восемь. Сушка соли дифосфата при приблизительно 70 С на воздухе или при приблизительно 45 С в вакууме удалила воду, оставляя псевдоморфозу. Кристаллическая соль дифосфат имеет растворимость в воде приблизительно 280 мг/мл. Способ получения соли дифосфата включает в себя растворение безводного свободного основания в абсолютном этаноле при перемешивании с помощью магнитной мешалки при температуре окружающей среды, добавление раствора фосфорной кислоты в абсолютном этаноле в течение приблизительно от 2 до 5 мин до получения осадка, затем частично растворение полученного твердого вещества в небольшой части воды. Перемешивание в течение нескольких часов при температуре окружающей среды дает кристаллическую массу, которую собирают путем фильтрации, затем промывают несколькими небольшими порциями смеси этанол-вода, имеющей соотношение приблизительно 10/1 (об/об). После синтезирования соли дифосфата ее преобразуют в фармацевтически приемлемое свободное основание способом, при котором ее растворяют в воде, добавляют метиленхлорид, повышают рН до значения приблизительно от 8,5 до 10, собирают и концентрируют органическую фазу, и кристаллизуют аморфное свободное основание из углеводородного растворителя. Фармацевтическая композиция, обладающая противобактериальной и противопротозойной активностью у млекопитающих, содержит свободное основание соли дифосфата в количестве, эффективном при лечении бактериальных и протозойных заболеваний, и фармацевтически приемлемый носитель. Способ лечения бактериальных и протозойных инфекций заключается в том, что млекопитающим, нуждающимся в таком лечении, вводят противобактериальное количество свободного основания соли дифосфата. Противобактериальное количество свободного основания вводят млекопитающим путем парентерального употребления. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к двум полиморфным модификациям дифосфата (2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-2,6-дидезокси-3-С-метил-3-O-метил-4-С-[(пропиламино)метил]L-рибогексопиранозил]окси]-2 этил-3,4,10-тригидрокси-3,5,8,10,12,14-гексаметил-11-[(3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-D-ксилогексопиранозил]окси]-1-окса-6 азациклопентадекан-15-она, показанным ниже где n равно числу от 0 до 8. В одном воплощении изобретения соль дифосфат является жидким кристаллом, который имеет тонкопластинчатый габитус и проявляет продольную слоистость, но не поперечную слоистость. Дифракция рентгеновских лучей на порошке показывает слабую упорядоченность или отсутствие упорядоченности. В другом воплощении соль дифосфат является кристаллической. Микроскопия соли дифосфата показывает пластинчатый или призматический габитус, оба имеют высокое двойное лучепреломление. Соль дифосфат представляет собой хорошо упорядоченный кристалл, характеризующийся картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке,приведенной ниже: Изобретение также относится к способам получения жидкого кристалла и кристаллической соли дифосфата, а также к фармацевтической композиции свободного основания соли дифосфата, как показано ниже на схеме 1. где n равно числу от 0 до 8. Дифференциальная сканирующая калориметрия кристаллической соли дифосфата показывает единичный акт при приблизительно 119 С, который соответствует потере воды, а также растворению соли в высвобожденной воде. За этим актом не следует кристаллизация. Сушка в VTI при 20-25 С указывает на потерю массы 10%, высушенная соль постепенно поглощает воду до 15% при 85%-ной ОВ (относительной влажности), с последующим быстрым захватом до 48% при 90%-ной OВ. При 90%-ной OВ соединение расплывается. Соль дифосфат также изучали с помощью термогравиметрического анализа (ТГА). Для образцов, регидратированных при 87%-ной OВ[13% воды при титровании по Карлу Фишеру(КФ)], отмечалось четыре отдельных точки перелома. При приблизительно 75 С терялись 3 молекулы воды; при приблизительно 120 С 4 молекулы, при приблизительно 170 С 5 молекул и при приблизительно 200 С 8 молекул. Максимальное число молекул воды, необходимых для стабилизации кристаллической решетки, составляет восемь. Снижение уровня воды в гидрате не вызывало изменений в данных дифракции рентгеновских лучей на порошке, что указывает на образование псевдоморфозы гидрата. Подвижность молекул воды в кристаллической решетке непосредственно связана с относительной влажностью окружения, с которым вступает в контакт соль дифосфат. Например,при приблизительно 87%-ной относительной влажности соединение содержит приблизительно 13% воды, при 60%-ной относительной влажности соединение содержит приблизительно 8% воды, а при 40%-ной относительной влажности соль дифосфат содержит приблизительно 5% воды (все расчеты по КФ). Сушка соли дифосфата при 70 С на воздухе или при 45 С в вакууме удалила всю воду,оставляя псевдоморфозу. Регидратация соли при приблизительно 87%-ной относительной влажности привела к получению формы октагидрата. Следующие примеры иллюстрируют способы и соединения по настоящему изобретению. Должно быть понятно, что изобретение не ограничено конкретными примерами. 5 Пример 1. Жидкие кристаллы соли дифосфата.(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-132,6-дидезокси-3-С-метил-3-O-метил-4-С-[(пропиламино)метил]L-рибогексопиранозил]окси]-2-этил-3,4,10-тригидрокси-3,5,8,10,12,14 гексаметил-11-3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)D-ксилогексопиранозил]окси]-1-окса 6-азациклопентадекан-15-он (7,5 г, 97%, 9,0 ммоль) растворили в абсолютном этаноле (190 мл) при температуре окружающей среды. Затем добавили порцию 15 мл раствора фосфорной кислоты в абсолютном этаноле (7,15 г имеющейся в продаже Н 3 РO4, разведенной до 100 мл,9,3 ммоль, 1,03 экв.). Немедленно образовался белый осадок. После перемешивания суспензии при температуре окружающей среды в течение 1 ч добавили воду (10 мл). Смесь затем перемешивали в течение 6 суток, после чего твердое вещество собирали на воронке Бюхнера и дважды промывали небольшими порциями абсолютного этанола. Влажный осадок на фильтре высушивали под высоким вакуумом при температуре окружающей среды. Полученное твердое вещество проявляло двойное лучепреломление при перекрестно поляризованном свете, но не показывало картину дифракции рентгеновских лучей на порошке. КФ-анализ жидких кристаллов показал,что они содержат 5,5% воды. Рассчитанные и фактические значения элементного анализа показаны ниже:N 3,96 4,11 Р 5,84 5,83 Также проводили ВЭЖХ. Ожидаемая эффективность соли дифосфата, содержащей 5,5% воды, составила 76,4%; наблюдаемое значение составило 76,9%. Последующие партии, которые высушивали только на воздухе, также не показывали картины дифракции рентгеновских лучей на порошке. Небольшую порцию жидких кристаллов помещали в пробирку для тестирования и растворяли (при нагревании) в 1-пропаноле (содержащем небольшую часть воды), затем оставляли в вытяжном шкафу для медленного испарения. Твердое вещество, полученное при этом опыте, использовали как затравку кристаллов в примере 2. Пример 2. Кристаллическая соль октагидрат дифосфата. Свободное основание (10 г, 98,8%, 12,3 ммоль) растворяли в абсолютном этаноле (180 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки при температуре окружающей среды. В течение 3 мин добавляли раствор фосфорной кислоты в абсолютном этаноле [18 мл, 11,2 6 ммоль, 0,9 экв. (7,15 г Н 3 РO4, разведенной до 100 мл)], что вызывало образование белого липкого осадка. Добавляли воду (10 мл) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Кристаллическую массу собирали на воронке Бюхнера и твердое вещество промывали тремя небольшими порциями смеси этанол-вода, имеющей соотношение 10/1(об/об). Выделенный, высушенный на воздухе твердый осадок весил 2,09 г. Рентгеновский анализ твердого вещества показал присутствие жидкокристаллической формы. 500 мг образец жидких кристаллов растворяли (при нагревании) в 2 мл смеси этанолвода, имеющей соотношение 10:1 (об/об). Полученный раствор охлаждали до температуры окружающей среды и вносили затравку твердых частиц из маломасштабного опыта, включая влажный 1-пропанол. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Полученные твердые частицы собирали на воронке Бюхнера и промывали небольшим количеством смеси этанол-вода, имеющей соотношение 10:1 (об/об), и сушили на воздухе до веса 370 мг. Рентгеновский анализ показал, что материал был теперь хорошо упорядоченным и показывал четко определенную картину дифракции на порошке, как показано ниже: Жидкие кристаллы и кристаллическая форма дифосфата были гигроскопичными. Когда проводили попытки в гидрофильных растворителях, добавление от 4 до 5% (об/об) воды к аморфной суспензии вызывало кристаллизацию соединения в виде октагидрата. Кристаллизация в смеси этанол/вода показала, что может образоваться метастабильный этанольный сольват. Пример 3. Очищенный кристаллический октагидрат дифосфата. Порцию 1,18 г аморфного октагидрата дифосфата смешивали с 18,5 мл абсолютного этанола и 1,05 мл воды. Смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение 15 мин с получением мутного раствора. Нагревание прекращали и перемешиваемую смесь охлаждали до температуры окружающей среды для активирования процесса кристаллизации. После 2 ч гранулирования продукт охлаждали, фильтровали и сушили на воздухе при условиях окружающей среды с получением чистой соли октагидрата дифосфата. Пример 4. Свободное основание (2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-132,6-дидезокси-3-С-метил-3-O-метил-4-С-[(пропиламино) метил]L-рибогексопиранозил]окси]-2-этил 3,4,10-тригидрокси-3,5,8,10,12,14-гексаметил 7 11-[(3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)Dксилогексопиранозил]окси]-1-окса-6-азациклопентадекан-15-она. Соль дифосфат (225 г) распределяли между водой (1200 мл) и метиленхлоридом (500 мл). рН водной фазы повышали от 5,9 до 8,6 путем добавления твердого карбоната калия. Органическую фазу собирали, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением сухой аморфной пены (170 г). Пример 5. Аморфное свободное основание (170 г) кристаллизовали из гептана (700 мл) с образованием чистого кристаллического свободного основания (115 г), которое затем вводили в состав лекарственного препарата в виде частично водного раствора для парентерального использования у домашнего скота. Вышеуказанный процесс и полученная соль дифосфат обладают чрезвычайно полезными и неочевидными свойствами. Образование соли дифосфата дает возможность удалить большое количество примесей в полученной маточной жидкости. При преобразовании в свободное основание это дает лекарственное вещество, которое образует очень низкие уровни помутнения при введении в состав препарата в частично водной среде. Это приводит к получению фармацевтически лучшего раствора для парентерального использования. Активные соединения могут быть введены отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями ранее указанными путями, и такое введение может быть осуществлено в однократной или множественных дозах. Более конкретно, активные соединения могут быть введены в широком разнообразии различных форм дозировки, то есть они могут быть комбинированы с различными фармацевтически приемлемыми инертными носителями в форме таблеток, капсул,лепешек, пастилок, твердых леденцов, порошков, спреев, кремов, целебных мазей, суппозиториев, желе, гелей, паст, лосьонов, мазей, водных суспензий, инъекционных растворов, эликсиров, сиропов и тому подобное. Такие носители включают в себя твердые разбавители или наполнители, стерильную водную среду и различные нетоксичные органические растворители и так далее. Более того, пероральные фармацевтические композиции могут быть подходящим образом подслащены и/или у них может быть изменен запах и цвет. В общем, активные соединения присутствуют в таких формах дозировки с уровнями концентраций, изменяющихся от приблизительно 5,0% до приблизительно 70% по массе. Для парентерального введения могут быть использованы растворы активного соединения в масле, частично водном носителе или водном носителе. Масло будет выбрано из таких масел,которые являются фармацевтически приемле 004235 8 мыми; например, может быть использовано кунжутное или арахисовое масло. Неводный компонент частично водного носителя будет выбран из таких, которые являются фармацевтически приемлемыми; например, может быть использован пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Водные растворы должны быть подходящим образом забуферены (предпочтительно рН менее 8) при необходимости. Водные и частично водные растворы пригодны для целей внутривенных инъекций. Водные, частично водные и масляные растворы пригодны для целей внутрисуставных, внутримышечных и подкожных инъекций. Приготовление всех таких растворов в стерильных условиях легко осуществляется с помощью стандартных фармацевтических методик, хорошо известных специалистам в данной области. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Две полиморфные модификации дифосфата (2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-132,6-дидезокси-3-С-метил-3-O-метил-4-С-[(пропиламино)метил]L-рибогексопиранозил]окси]-2-этил-3,4,10-тригидрокси-3,5,8,10,12,14 гексаметил-11-3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)D-ксилогексопиранозил]окси]-1-окса 6-азациклопентадекан-15-она, имеющего формулу где n равно числу от 0 до 8 и полиморфные модификации выбраны из группы, состоящей из а) смектической кристаллической мезофазы жидкого кристалла и б) кристаллического дифосфата, имеющего картину дифракции рентгеновских лучей на порошке 2. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой указанный жидкий кристалл, имеющий тонкопластинчатый габитус и проявляющий продольную слоистость. 3. Полиморфные модификации по п.2, где указанный жидкий кристалл имеет приращение около 15% по массе с последующей потерей двойного лучепреломления при приблизительно 87%-ной относительной влажности. 4. Полиморфные модификации по п.2, где указанный жидкий кристалл имеет приблизительно от 5 до 6% воды. 5. Полиморфные модификации по п.1, где указанный жидкий кристалл имеет около 48% С, около 9% Н, около 4% N, около 6% Р и около 5,5% Н 2 О. 6. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой указанный кристаллический дифосфат, имеющий хорошо упорядоченный пластинчатый или призматический габитус кристаллов. 7. Полиморфные модификации по п.6, где пластинчатый или призматический габитус указанного кристаллического дифосфата имеет высокое двойное лучепреломление. 8. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой указанный кристаллический дифосфат и постепенно поглощает воду до приблизительно 13% при приблизительно 87%-ной относительной влажности. 9. Полиморфные модификации по п.8, где указанный кристаллический дифосфат проявляет быстрый захват воды до приблизительно 48%, и это происходит при приблизительно 90%-ной относительной влажности. 10. Полиморфные модификации по п.9, где указанный кристаллический дифосфат становится расплывающимся при приблизительно 90%-ной относительной влажности. 11. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой указанный кристаллический дифосфат и термогравиметрический анализ показывает, что три молекулы воды теряются при приблизительно 75 С, четвертая молекула воды теряется при приблизительно 120 С, пятая молекула воды теряется при приблизительно 170 С и три последних молекулы воды теряются при приблизительно 200 С. 12. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой указанный кристаллический дифосфат и максимальное число молекул воды, необходимых для стабилизации кристаллической решетки, равно восьми. 13. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой 10 указанный кристаллический дифосфат и сушка при приблизительно 70 С на воздухе или при приблизительно 45 С в вакууме удалила воду,оставляя псевдоморфозу. 14. Полиморфные модификации по п.1, где полиморфная модификация представляет собой указанный кристаллический дифосфат и растворимость в воде равна приблизительно 280 мг/мл. 15. Способ получения дифосфата где n равно числу от 0 до 8, при котором осуществляют стадии, на которых безводное свободное основание указанного дифосфата растворяют в абсолютном этаноле при перемешивании с помощью магнитной мешалки при температуре окружающей среды; добавляют раствор фосфорной кислоты в абсолютном этаноле в течение приблизительно от 2 до 5 мин; частично растворяют полученное твердое вещество в воде; собирают кристаллическую массу при температуре окружающей среды и промывают несколькими небольшими порциями смеси этанолвода, имеющей соотношение приблизительно 10/1 (об/об). 16. Способ по п.15, при котором указанное свободное основание дифосфата получают путем распределения этого дифосфата между метиленхлоридом и водой; повышения рН до значения приблизительно от 8 до 10 и собирания и упаривания органической фазы.