Применение 2-амино-6-трифторметоксибензотиазола для профилактики или лечения дисфункции мозжечка

1 Настоящее изобретение касается нового терапевтического применения 2-амино-6-трифторметоксибензотиазола, известного под общим международным названием "рилузол"("Riluzole"), или фармацевтически приемлемой соли этого соединения. Рилузол поставляется в продажу для лечения бокового амиотрофического склероза. Это соединение используют также в качестве противосудорожного средства,транквилизатора и снотворного (европейский патент 50551), при лечении шизофрении (европейский патент 305276), при лечении расстройств сна и депрессии (европейский патент 305277), при лечении церебро-васкулярных нарушений и в качестве анестезирующего средства (европейский патент 282971), при лечении травм позвоночника, черепно-мозговых и спинно-мозговых травм (международный патент 94/13288), в качестве восстанавливающего средства после воздействия излучения (международный патент 94/15600), при лечении болезни Паркинсона (международный патент 94/15601),при лечении невроза (международный патент 94/20103), при лечении митохондриальных заболеваний (международный патент 95/19170). Глутамат представляет собой один из наиболее широко распространенных и наиболее важных медиаторов нервной системы. Его воздействия на нейроны модулируются транспортными протеинами, которые заставляют проникать глутамат внутрь клеток. Молекулярная структура четырех переносчиков глутамата хорошо известна (G. Gegelashvili et A. Schousboe,J. Pharmacol. Exp. Ther., 52: 6-15, 1997; M. Takahashi et al., J. Exp. Biol., 200: 401-409, 1997) и недавно был идентифицирован пятый переносчик (J.L. Arriza et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA,94: 4155-4160). Методы гистологической локализации указывают, что эти переносчики не все одинаково присутствуют в клетках различных типов, встречающихся в нервной системе. Два из первых идентифицированных переносчиков,называемые GLAST (или ЕААТ 1) и GLT-1 (или ЕААТ-2), локализованы преимущественно в глиальных клетках. Переносчик ЕААС-1 (ЕААТ-3) выделяется нейронами головного мозга в целом. Переносчик ЕААТ-4, идентифицированный недавно, выделяется, главным образом,особым типом нейронов мозжечка, называемым клетки Пуркинье (S. Nagao et al., Neuro-sciences,78: 929-933,1997). Переносчик, идентифицированный совсем недавно, называется ЕААТ-5 и обнаруживается на уровне сетчатой оболочки глаза. Клетки Пуркинье используют в качестве нейротрансмиттера гамма-аминомасляную кислоту (ГАМК). Так как глутамат является метаболическим предшественником ГАМК (Biochemistry and the Central Nervous System, H.M.Livingston, Londres, 1971, p. 193), одной из функций переносчика ЕААТ-4 является участие 2 в снабжении глутаматом клеток Пуркинье мозжечка, чтобы обеспечить синтез их нейротрансмиттера. Это подтверждено недавними исследованиями, которые показывают, что потеря переносчика ЕААТ-4, в противоположность потере переносчиков ЕААТ-1, ЕААТ-2 и ЕААТ-3, вызывает дисфункцию мозжечка, сопровождающуюся у грызунов поведенческими симптомами типа атаксии (N. Maragakis et al., Soc. Neurosci.Abstr., 23: 1484, 1997). Теперь неожиданно обнаружено, что рилузол стимулирует транспорт глутамата в препаратах мозжечка крысы. Следовательно, рилузол может быть использован для профилактики или лечения дисфункций мозжечка, особенно дисфункций, вызванных плохим снабжением клеток мозжечка глутаматом. Среди этих дисфункций можно назвать мозжечковые атаксии. Этот результат является специфическим для мозжечка, так как он не наблюдается с аналогичными препаратами, полученными исходя из других структур головного мозга, таких как кора головного мозга и полосатое тело, а также исходя из спинного мозга. Кроме того, увеличение рилузолом захвата глутамата в мозжечке возрастает с возрастом крыс, начиная от рождения до зрелого возраста со стабилизацией при возрасте больше приблизительно 10 недель, то есть при массе больше 350 г. Увеличение захвата глутамата оценивают в суспензии синаптосом, полученных исходя из клеток мозжечка крысы. Этот тип препарата известен как позволяющий проведение исследования in vitro транспорта глутамата через стенку клетки (Kanai et al., Trends Neurosci., 16: 365370, 1993). В синаптосомах мозжечка крысы захват радиоактивного глутамата увеличивается при добавлении рилузола к этим препаратам концентрационно зависимым образом (фиг. 1). Синаптосомы были получены согласно адаптации способа, описанного в работе: М.В.Robinson et al., Brain Res., 544: 196-202, 1991. Ткани мозжечка или другой области головного мозга самцов крыс породы Спрейга-Даули гомогенизируют в растворе сахарозы (0,32 М) при 4 С, затем центрифугируют при 800 g в течение 10 мин. Жидкость над осадком вновь центрифугируют при 20000 g в течение 20 мин. Осадок,полученный в результате центрифугирования,суспензируют в идентичном растворе сахарозы,затем вновь центрифугируют при 20000 g в течение 20 мин. Синаптосомы содержатся в этом втором осадке, образующемся при центрифугировании. Их переводят в суспензию и немедленно используют для измерения захвата глутамата. За ним следят при помощи глутамата, меченного тритием ([3H] глутамат), разбавленного раствором нерадиоактивного глутамата. После 3 мин инкубации при 37 С синаптосомы выделяют из инкубационной среды путем фильтрования. Действие продукта оценивают, сравнивая 3 радиоактивность, удерживаемую фильтрами, в отсутствие и в присутствии возрастающих концентраций рилузола при рН 7,3. Эта радиоактивность пропорциональна захвату глутамата. Результаты выражены в виде специфического захвата, то есть захвата, который зависит от присутствия ионов натрия в инкубационной среде. Он отличается от неспецифического захвата, который соответствует радиоактивности,измеренной после эквимолярного замещения хлорида натрия инкубационной среды холинхлоридом. Специфический захват соответствует общей радиоактивности за вычетом радиоактивности, измеренной в присутствии холинхлорида. Краткое описание фиг. 1 (увеличение рилузолом транспорта глутамата в мозжечке): график представляет захват глутамата, меченого радиоактивным изотопом, в синаптосомах мозжечка крысы (ось ординат) в зависимости от возрастающих концентраций рилузола (ось абсцисс). Данные представляют собой средние значенияESM (средняя статистическая ошибка) по n=8 независимым измерениям. Максимальное увеличение захвата, наблюдаемое в присутствии рилузола, достигает, приблизительно,40% от контрольных значений. Эффективная концентрация рилузола (ЭK50), соответствующая половине максимального увеличения, в этой экспериментальной серии, вычисленная методом сигмоидальной регрессии, составляет 24,5 мкМ. В качестве фармацевтически приемлемых солей рилузола могут быть названы, в частности, соли присоединения с неорганическими кислотами, такие как хлоргидрат, сульфат, нитрат, фосфат, или с органическими кислотами,такие как ацетат, пропионат, сукцинат, оксалат,бензоат, фумарат, малеат, метансульфонат, изетионат, теофиллинацетат, салицилат, фенолфталинат, метилен-бисоксинафтоат или замещенные производные этих последних. Лекарства представляют собой, по меньшей мере, рилузол в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли присоединения с кислотой, в чистом состоянии или в форме композиции, в которой он ассоциирован с любым другим фармацевтически совместимым продуктом, который может быть инертным или физиологически активным. Лекарства согласно изобретению могут быть введены оральным, парентеральным или ректальным путем. В качестве твердых композиций для перорального приема могут быть использованы таблетки, пилюли, порошки (желатиновые капсулы, крахмальные капсулы) или гранулы. В этих композициях действующее начало согласно изобретению смешано с одним или несколькими инертными разбавителями, такими как крахмал,целлюлоза, сахароза, лактоза или диоксид кремния, в токе аргона. Эти композиции могут, кро 002676 4 ме того, содержать вещества, отличные от разбавителей, например, одно или несколько смазывающих веществ, таких как стеарат магния или тальк, краситель, защитную оболочку (драже) или глазурь. В качестве жидких композиций для перорального приема можно использовать фармацевтически приемлемые растворы, суспензии,эмульсии, сиропы и эликсиры, содержащие инертные разбавители, такие как вода, этанол,глицерин, растительные масла или парафиновое масло. Эти композиции могут содержать вещества, отличные от разбавителей, например, увлажнители, подсластители, загустители, ароматизаторы или стабилизаторы. Стерильные композиции для парентерального введения могут представлять собой, предпочтительно, водные или неводные растворы,суспензии или эмульсии. В качестве растворителя или носителя можно использовать воду,пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, в частности, оливковое масло,пригодные для инъекций сложные органические эфиры, например, этилолеат или другие подходящие органические растворители. Эти композиции могут также содержать добавки, в частности, увлажняющие вещества, вещества для поддержания изотоничности, эмульгаторы, диспергаторы и стабилизаторы. Стерилизация может осуществляться несколькими способами,например, стерилизующим фильтрованием,вводя в композицию стерилизующие агенты, с использованием облучения или нагрева. Равным образом, они могут быть приготовлены в форме твердых стерильных композиций, которые могут быть растворены в момент применения в стерильной воде или в любой другой пригодной для инъецирования стерильной среде. Композиции для ректального введения представляют собой свечи или ректальные капсулы, которые содержат, помимо действующего вещества, эксципиенты, такие как масло какао,полусинтетические глицериды или полиэтиленгликоли. Дозы зависят от желаемого воздействия,продолжительности лечения и используемого пути введения; обычно, для взрослых при пероральном приеме они составляют от 50 до 400 мг в день при разовых дозах в интервале от 25 до 200 мг действующего начала. Вообще, врач определит соответствующую дозу в зависимости от возраста, веса и всех других факторов, присущих пациенту, проходящему лечение. Следующие примеры иллюстрируют лекарства согласно изобретению. Пример А. Обычным способом готовят таблетки, содержащие 50 мг действующего начала, имеющие следующий состав: 2-Амино-6-трифторметоксибензотиазол Маннит Микрокристаллическая целлюлоза Поливидоновый эксципиент Натриевая соль карбоксиметилкрахмала Тальк Стеарат магния Безводный коллоидный диоксид кремния Смесь метилгидроксипропилцеллюлозы,полиэтиленгликоля 6000, диоксида титана (72-3,5-24, 5) количество, достаточное для 1 таблетки,покрытой тонкой пленкой, с конечной массой 245 мг. Пример Б. Обычным способом готовят таблетки, содержащие 50 мг действующего начала, имеющие следующий состав: 2-Амино-6-трифторметоксибензотиазол Целлюлоза Лактоза Коллоидный диоксид кремния Натриевая соль карбоксиметилкрахмала Тальк Стеарат магния Пример В. Готовят раствор, пригодный для инъецирования, содержащий 10 мг действующего начала, имеющий следующий состав: 2-Амино-6-трифторметоксибензотиазол 10 мг Бензойная кислота 80 мг Бензиловый спирт 0,06 см 3 Бензоат натрия 80 мг Этанол, 95 %-ный 0,4 см 3 Гидроксид натрия 24 мг Пропиленгликоль 1,6 см 3 Вода Количество, достаточное для 4 см 3 Изобретение касается также способа получения лекарств, используемых для профилактики или лечения дисфункций мозжечка, особенно, дисфункций, возникающих вследствие плохого снабжения клеток мозжечка глутаматом, и,в частности, профилактики или лечения мозжечковых атаксий, заключающегося в смешива 6 нии рилузола или фармацевтически приемлемых солей этого соединения с одним или несколькими разбавителями и/или одной или несколькими добавками, совместимыми и фармацевтически приемлемыми. Изобретение касается также способа профилактики или лечения дисфункций мозжечка,особенно, дисфункций, возникающих вследствие плохого снабжения клеток мозжечка глутаматом, и, в частности, профилактики или лечения мозжечковых атаксий у людей, заключающийся во введении пациенту рилузола или одной из его фармацевтически приемлемых солей. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение рилузола или фармацевтически приемлемых солей этого соединения для получения лекарств для профилактики или лечения дисфункций мозжечка. 2. Применение по п.1 для профилактики или лечения дисфункций мозжечка, возникающих вследствие плохого снабжения клеток мозжечка глутаматом. 3. Применение по одному из пп.1 и 2 для профилактики или лечения мозжечковых атаксий. 4. Применение по одному из пп.1-3 для получения лекарства, содержащего от 25 до 200 мг рилузола.