Доставка таксанов к ангиогенным кровеносным сосудам с помощью катионных липосом

005923 Перекрестные ссылки на родственные заявки Настоящая заявка является частичным продолжением заявки 09/127,177, поданной 31 июля 1998 года, которая является продолжением заявки 08/820,337, поданной 12 марта 1997 года, которая в настоящее время является патентом США 5,837,283; обе заявки включены в настоящее описание в полном объеме в качестве ссылки; мы претендуем на приоритет упомянутых заявок согласно Разделу 35 Кодекса законов США '120. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к области доставки с помощью липосом и, в частности, к доставке таксанов к кровеносным сосудам с помощью катионных липосом. Предпосылки создания изобретения Настоящее изобретение может применяться для лечения и диагностирования целого ряда различных заболеваний и патологий. Несмотря на то, что настоящее изобретение таковыми заболеваниями и патологиями не ограничивается, оно может использоваться для лечения рака, заживления ран и лечения целого ряда хронических воспалительных заболеваний. В общем, каждое из этих заболеваний в настоящее время подвергается непосредственному лечению физическими средствами, например, путем хирургического удаления раковой ткани, наложением швов на раны и хирургическим удалением воспаленных суставов. В дополнение к этому, для лечения каждого из упомянутых заболеваний могут использоваться химические средства. Химиотерапия применяется в случае раковых заболеваний, гормоны роста применяются для заживления ран, противовоспалительные лекарственные средства применяются для лечения хронических воспалительных состояний. Упомянутые и родственные методы лечения направлены, в общем, на непосредственное лечение раковых, поврежденных либо воспаленных тканей. С целью обеспечения понимания того, каким образом настоящее изобретение отличается от традиционных лечебных воздействий, приводится общее описание современных методов лечения в этих областях. Методы лечения рака Термином "рак" обозначают целый ряд заболеваний, различающихся по лечению, прогнозу и излечимости. Варианты подхода к диагностированию и лечению зависят от места происхождения опухоли,степени метастазирования, участков, вовлеченных в патологический процесс, физиологического состояния пациента и прогноза. После диагностирования определяется, как правило, стадия заболевания; этот процесс включает применение хирургической техники, проведение объективного обследования, гистопатологические исследования, визуализацию и лабораторные исследования для определения степени развития заболевания и подразделения раковых больных на группы в порядке снижения вероятности излечения. Подобные системы используются как для планирования лечения, так и для определения прогноза для пациента (Стокдейл (Stockdale) (1996), "Principles of Cancer Patient Management", в: Scientific American Medicine, том 3, Дейл Д.К. (Dale D.C.) и Федерман Д.Д. (Federman D.D.) (редакторы). ScientificAmerican Press, Нью-Йорк). Типом или стадией рака может определяться, какое лечение из трех общих типов будет использоваться: хирургия, лучевая терапия и химиотерапия. Выбираться может также план агрессивного, комбинированного лечебного воздействия. С этой целью хирургия может использоваться для удаления первичной опухоли, в то время как для лечения оставшихся клеток используется лучевая терапия либо химиотерапия. Розенберг (Rosenberg) (1985) New Engl. J. Med. Хирургия играет центральную роль при диагностировании и лечении рака. В общем, вариант оперативного вмешательства необходим для биопсии, и оперативное вмешательство может быть радикальным лечением для большинства раковых больных. Оперативное вмешательство применяется также для уменьшения массы опухоли, иссечения метастаз, оказания неотложной помощи, временного облегчения проявлений болезни и реабилитации. Несмотря на то, что первичная оперативная техника для лечения рака включает обработку операционного поля, где опухоли иссекаются в условиях непосредственного визуального наблюдения, современные методы позволяют осуществление некоторых резекций с использованием эндоскопических средств. Первостепенной проблемой при лечении рака являются соображения оперативного риска (Стокдейл Ф. (Stockdale F.), смотри ранее). Лучевая терапия играет важную роль как при первичном лечении рака, так и при лечении, осуществляемом для временного облегчения проявлений рака. Распространенными являются как дистанционная лучевая терапия (мегавольтная лучевая терапия), так и контактная лучевая терапия (внутритканевое и внутриполостное облучение). В случае дистанционной лучевой терапии для лечения обычных злокачественных опухолей чаще всего прибегают к электромагнитному облучению в виде рентгеновских лучей,однако используются и гамма-лучи, форма электромагнитного излучения, подобная рентгеновским лучам, но излучаемого радиоактивными изотопами радия, кобальта и других элементов. В случае лучевой терапии преобразованная энергия попадает на ткани в виде дискретных пучков энергии, называемых фотонами, которые поражают как злокачественные, так и нормальные ткани посредством наведения ионизации в клетках. Мишенью для ионов чаще всего оказывается ДНК; лучевая терапия основана на том,что лучевому поражению злокачественные и незлокачественные ткани подвергаются в различной степенибыстро делящиеся клетки более чувствительны к повреждению ДНК, нежели "дремлющие" клетки(Пасс (Pass) (1993), J. Natl. Cancer Instit 85:443-56). Лучевая терапия связана как с уникальными преимуществами, так и с серьезным токсичным воздействием.-1 005923 Облучению отдается предпочтение на некоторых анатомических участках (например, в области средостения), где облучение может быть единственным приемлемым локальным методом лечения; облучение также может быть единственным приемлемым методом локального воздействия в случае слишком обширного вовлечения в опухолевый патологический процесс. Облучение может применяться также в том случае, когда пациент находит оперативное вмешательство неприемлемым, либо в том случае, когда медицинское состояние больного не позволяет осуществление оперативного вмешательства. Лучевая терапия вызывает поражение тканей с ранними и отдаленными пострадиационными эффектами. К числу ранних эффектов (острая токсичность лучевой терапии) относится эритема кожи, шелушение, эзофагит,тошнота, алопеция и миелосупрессия, в то время как к отдаленным пострадиационным эффектам относится некроз тканей и фиброз, которые, как правило, и определяют ограниченную токсичность лучевой терапии (Стокдейл Ф. (Stockdale F.), см. ранее). Почти все применяемые в настоящее время химиотерапевтические средства нарушают синтез ДНК,препятствуют образованию предшественников для синтеза ДНК и РНК, подавляют митоз и, тем самым,поражают размножающиеся клетки (Стокдейл Ф. (Stockdale F.), "Cancer growth and chemotherapy", смотри ранее). Результаты исследований опухолей на животных и клинические испытания на людях показали, что комбинации лекарственных средств обеспечивают более высокую степень объективной реакции и более продолжительную выживаемость, нежели отдельные лекарственные средства (Фрей (Frei) (1972),Cancer Res., 32:2593-2607). В случае комбинированных способов фармакотерапии используются различные механизмы действия и цитотоксический потенциал многочисленных лекарственных средств, включая алкилирующие агенты, антиметаболиты и антибиотики (Девита (Devita) и другие (1975), Cancer,35:98-110). Эффективность химиотерапии зависит от физиологического состояния больного, характеристик роста опухоли, гетерогенности популяции опухолевых клеток и статуса множественной лекарственной устойчивости опухоли. В общем, химиотерапия не относится к числу прицельных методов лечения (хотя такие методы и разрабатываются, например, Пастан (Pastan) (1986), Cell, 47:641-648), следствием чего может быть возникновение побочных эффектов, например, подавление деятельности костного мозга, гастроэнтерит, тошнота, алопеция, повреждение печени либо легких или бесплодие. Заживление ран Заживление ран представляет собой сложный и длительный процесс восстановления и реконструкции ткани, включающий множество различных клеточных типов, который требует тонко настроенного регулирования каскадов различных биохимических реакций для уравновешивания регенеративных процессов. Заживление ран, в общем, подразделяется на три фазы: воспаление, пролиферация и созревание(Уолдорф (Waldorf) и другие (1995), Adv. Dermatol., 10:77-96). Упомянутый процесс включает миграцию клеток различных типов в район раны, стимулирование роста эпителиальных клеток и фибробластов,образование новых кровеносных сосудов и образование внеклеточного матрикса. Правильное функционирование этих процессов зависит от биологической активации различных цитокинов (Беннетт (Bennett) и другие (1993), Am. J. Surg., 165:728-37). Важными факторами при заживлении ран являются питание,иммунная система, кислород, объем крови, инфекция, иммуносупрессия и снижение количества эритроцитов (Уитни (Witney) (1989), Heart Lung, 18:466-474). Как качество, так и скорость заживления ран зависят, как правило, от типа и обширности исходного повреждения. При лечении ран используются процессы трех общих типов, каждый из которых направлен на заживление поврежденной ткани. Закрытие ран чаще всего осуществляется посредством наложения шва, хотя использоваться могут также лейкопластыри, скобы либо электрокаустика (Уилисс К.Р.Surg., 9 (5):683-92). Как кожные пластыри, так и различные швы обладают определенными преимуществами и недостатками при первичном закрытии ран. Кожные лейкопластыри вызывают более слабую воспалительную реакцию, однако они не могут закрыть субэпителиальное раневое пространство, в то время как воспалительная реакция и последующее рубцевание раны, вызванные различными швами, зависят от размера хирургической иглы, диаметра шовного материала и от того, является ли шовный материал мононитью либо плетеным материалом (Симпсон (Simpson), (1977), Laryngoscope, 87:792-816). Развитие инфекции в ране будет определяться величиной инокулята микроорганизмов, вирулентностью микроорганизмов и механизмами противомикробной защиты хозяина. Таким образом, терапевтическую ценность при лечении ран могут иметь также антибиотики (Эдлих (Edlich), (1986), EmergencyMedical Clinics of North America, 4 (3):561-80). Фармакологическое действие каждого антибиотика должно пониматься для выбора соответствующего антибиотика, пути его введения и во избежание побочных явлений (Симпсон (Simpson), смотри выше). Недавно полученные результаты позволяют предположить,что антибиотикотерапия обеспечивает возможность ускорения пролиферации и дифференциации клеток и, тем самым, может быть полезной для стимулирования процесса заживления ран (Барроу (Barrow) и другие (1994), Respiration, 61:231-5; Медер (Maeder) и другие (1993), Paraplegia, 31:639-44). В качестве вспомогательных средств при антибиотикотерапии инфицированных ран использовались также протеолитические ферменты (Роудхивер (Rodeheaver) и другие (1978), Am. J. Surg., 136 (3):379-82). Местное введение различных цитокинов, в том числе bFGF (фактор роста фибробластов (основной, EGF (эпидермальный фактор роста), PDGF (тромбоцитарный фактор роста) и TGF-beta (трансфор-2 005923 мирующий фактор роста), самостоятельно либо в сочетании, может значительно ускорить заживление ран (Мулин (Moulin), (1995), Eur. J. Cell. Biol., 68:1-7). Факторы роста привлекают клетки в рану, стимулируют их пролиферацию и оказывают глубокое воздействие на осаждение внеклеточного матрикса. С момента разработки возможности массового продуцирования этих цитокинов методами генной инженерии, результатами многих исследований было продемонстрировано, что факторы роста могут стимулировать все аспекты восстановления ткани на моделях нормального и нарушенного заживления (например, Шульц (Schultz) и другие, (1987), Science, 235:350-2; Доел (Deuel) и другие, (1991), Annu. Rev. Med.,42:567-84). Несмотря на то, что результаты предварительных клинических исследований показали, что лечение с помощью факторов роста иногда обеспечивает получение статистически значимого улучшения при восстановлении ткани, не совсем ясным остается, имеют ли эти результаты клиническое значение, и было предложено, что новые клинические исследования должны быть сосредоточены на целевом использовании факторов роста при нарушенном заживлении определенных типов (Гриналг (Greenhalgh),(1996), J. Trauma, 41:159-67). Хроническое воспаление Предполагается, что в патогенезе хронических воспалительных заболеваний задействованы все иммунные механизмы: природный, гуморальный и клеточный (Сеймур (Seymour) и другие, (1979), J. OralPathol., 8:249-65). Автоиммунные заболевания являются следствием нарушения функционирования лимфоцитов. Нарушение функционирования Т-клеток может вызывать возникновение заболевания через механизм клеточно-опосредованного иммунитета, в то время как активность Т-клеток-хелперов при продуцировании антител может способствовать образованию аутоантител. Центральная роль Т-клетокхелперов в автоиммунном заболевании поддерживается связью многих из этих заболеваний с определенными молекулами главного комплекса гистосовместимости человека. Следствием нарушения одного либо нескольких этапов сохранения толерантности может явиться аутоиммунитет (Робинсон (Robinson)(1996), "Immunologic Tolerance and Autoimmunity", в: Scientific American Medicine, том 2, раздел VI, Scientific American Press, Нью-Йорк, стр. 1-11). При аутоиммунном заболевании применяется лечение нескольких типов. Все они направлены на ослабление иммунной реакции в пораженной ткани. Например, при лечении такого аутоиммунного заболевания, как ревматоидный артрит, могут использоваться противовоспалительные средства, например,средства нестероидной противовоспалительной терапии либо глюкокортикостероиды, средства, индуцирующие ремиссию, такие как соли золота, и/или иммуносупрессорные лекарственные препараты, такие как циклофосфамид. Хирургическая ортопедия может применяться также для замены суставов, поврежденных в ходе воспалительного процесса (смотри Гиллиленд Б.К. (Gilliland B.C.) и Манник М. (Mannik М.), 1983, "Rheumatoid Arthritis" в: Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw Hill, Нью-Йорк, стр. 1977-1984). В недавнем сообщении выдвинуто предположение о возможности лечения новых типов,также направленных на пораженную ткань, таких как использование TNF (некротический опухолевый фактор) при лечении ревматоидного артрита (Бреннан (Вrеnnan) и другие, (1995), Вr. Med. Bull., 51:368384). Аллергия относится к состояниям, при которых иммунная реакция на антигены окружающей среды вызывает воспаление органов и нарушение их функционирования. Как и в случае аутоиммунных заболеваний, при аллергических заболеваниях данные позволяют предположить взаимодействие нескольких компонентов иммунной системы. Разнообразное проявление аллергических заболеваний является следствием различных иммунологических эффекторных механизмов, которые вызывают определенные типы повреждения ткани (Бир (Beer) и другие (1996), "Allergy" в: Scientific American Medicine, том 2, разделVII, Scientific American Press, Нью-Йорк, стр. 1-29). Клинические признаки каждого аллергического заболевания отражают иммунологически опосредованную воспалительную реакцию в пораженных органах либо тканях (например, астма отражает воспалительную реакцию в дыхательных путях). Для лечения иммуно-опосредованных аллергических заболеваний применяется несколько стратегий лечения. Все они направлены на ослабление иммунной реакции в воспаленной ткани. При лечении астмы, например, лечение может включать контролирование окружающей среды, фармакотерапию и иммунотерапию аллергенами (Бир (Beer) и другие (1996), "Allergy" в: Scientific American Medicine, том 2,раздел VII, Scientific American Press, Нью-Йорк, стр. 1-29). При лечении астмы ликвидация этиологического фактора является наиболее успешным средством предотвращения воспаления. Однако часто это оказывается невозможным, и вследствие этого используются лекарственные средства нескольких классов. К их числу относятся метилксантины (для расширения бронхов), адренергические стимуляторы(стимуляция -адренергических рецепторов, бронходилататоры), глюкокортикоиды (ослабление воспаления в легких), хромоны (регуляция тучных клеток по типу обратной связи, ослабление воспаления в легких) и антихолинергики (бронходилататоры) (Макфадден (McFadden) и другие, "Lung disease causedby immunologic and environmental injury", в: Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw Hill, НьюЙорк, стр. 1512-1519). Для ослабления воспаления при астме была предложена также десенсибилизация либо иммунотерапия с помощью экстрактов предполагаемых аллергенов (Макфадден (McFadden) и Ос-3 005923 тин (Austen), упомянутая работа; Жакмин (Jacquemin) и Сен-Реми (Saint-Remy) (1995), Ther. Immunol.,2:41-52). Атеросклеротические бляшки Атеросклероз представляет собой прогрессирующее сужение просвета (внутреннего прохода) артериальных кровеносных сосудов слоями бляшек (жировая и волокнистая соединительная ткань). Основные осложнения при атеросклерозе, включая ишемическую болезнь сердца, инфаркт миокарда, апоплексию и гангрену конечностей, являются причиной более половины от уровня ежегодной смертности в Соединенных Штатах. Артерии состоят из трех слоев: интимы (внутренней оболочки), которая включает эндотелий и соединительную ткань на просветной стороне внутренней эластичной пластинки; средней оболочки, которая включает гладкие мышечные клетки (в эластичных артериях, эластичные волокна, в крупных сосудах, сосуды сосудов); и адвентициальной оболочки, которая представляет собой наружный слой стенки сосуда, соединительнотканную оболочку, включающую фибробласты, мелкие сосуды и нервы. Атеросклероз может происходить в любой артерии. Следствием атеросклероза коронарных артерий могут быть сердечные приступы; следствием атеросклероза артерий головного мозга может быть апоплексия; следствием атеросклероза периферических артерий может быть гангрена конечностей. Атеросклероз является сложным процессом, и как он начинается и что является его причиной, точно неизвестно. Полагают,однако, что повреждение эндотелия является начальным этапом образования атеросклеротических повреждений. Оно может быть вызвано гемодинамическим напряжением, гиперхолестеринемией, гипертензией либо заболеванием иммунного комплекса. Следствием повреждения эндотелия является накопление холестерина и липидов, утолщение интимы, пролиферация гладких мышечных клеток и образование соединительнотканных волокон. Постепенно, накопление отложений жировой ткани и пролиферация гладких мышечных клеток приводят к образованию бляшек, которые, в конечном счете, сужают и блокируют артерию. Было приведено описание образования новых сосудов в интиме в случае атеросклеротических поражений сосудов человека, однако его роль в развитии атеросклероза неясна. Малтон (Moulton) и другие(1996), Catheterization and Cardiovascular Diagnosis, 39:215-220. Коэффициент смертности вследствие атеросклероза и родственных патологий свидетельствует о неадекватности современных методов лечения. Наиболее важным фактором, вызывающим атеросклеротические явления, представляется высокая концентрация в плазме крови холестерина в форме липопротеинов низкой плотности. Современные методы лечения включают применение лекарственных средств,которые угнетают ферментативную систему печени, осуществляющую синтез холестерина. Современные методы лечения - иммунология Описанные лечебные схемы применяются с различной степенью успеха. Поскольку степень успешности применения во многих случаях оказывается далекой от совершенства, продолжаются исследования, направленные на разработку лучших методов лечения. Одно из перспективных направлений связано с воздействием на иммунную систему. Посредством применения методов генной инженерии и/или химического стимулирования иммунные реакции возможно модифицировать и/или стимулировать таким образом, чтобы лечением заболевания занималась собственная иммунная система организма, например,чтобы антитела уничтожали раковые клетки. Лечение подобного типа отличается от методов лечения,описание которых было представлено ранее, тем, что в нем для борьбы с заболеванием используется биологический процесс. Упомянутое лечение, однако, по-прежнему остается методом непосредственного лечения, смысл которого заключается в том, что образовавшиеся антитела непосредственно воздействуют на раковые клетки. Настоящее изобретение может использоваться для лечения, которое включает радикальный отход от нормальных методов лечения, заключающийся в том, что данное изобретение не включает непосредственное воздействие на раковые, поврежденные либо воспаленные клетки. Другие исследователи признали, что по крайней мере теоретически, рак или воспаление, связанное с ангиогенезом, можно лечить посредством ингибирования ангиогенеза. Типичный пример современного мышления, относящийся к упомянутому, обсуждается в публикации WO 95/25543, опубликованной 28 сентября 1995 года. В этой опубликованной заявке описывается угнетение ангиогенеза путем введения антитела, которое связывается с антигеном, который, как полагают, присутствует на поверхности ангиогенных эндотелиальных клеток. В частности, в заявке описано введение антитела, которое связывается с 3, представляющим собой мембранный рецептор, который, как полагают, опосредует межклеточные взаимодействия либо взаимодействия между клеткой и внеклеточным матриксом. Подобные взаимодействия упоминаются, в общем, как явления клеточной адгезии. Посредством блокирования этого рецептора в процессе лечения надеются добиться угнетения развития кровеносных сосудов и, тем самым, излечивать раковые заболевания и воспалительный процесс. Краткое изложение сущности изобретения Раскрывается способ избирательной доставки лекарственных средств к ангиогенным эндотелиальным клеткам. Упомянутый способ включает впрыскивание, предпочтительно в систему кровообращения-4 005923 либо более предпочтительно внутриартериально, катионных липосом (или полинуклеотидно-липидных комплексов), которые включают катионные липиды и соединение, которое стимулирует или ингибирует ангиогенез и/или включает обнаружимую метку. После введения катионные липосомы избирательно связываются с ангиогенными эндотелиальными клетками. Это означает, что степень их связывания с ангиогенными эндотелиальными клетками в два или более раз (предпочтительно в десять или более раз) превышает степень связывания с соответствующими "дремлющими" эндотелиальными клетками, не участвующими в процессе развития кровеносных сосудов. Когда липосомы (либо полинуклеотиднолипидные комплексы) связываются с ангиогенными эндотелиальными клетками, они поглощаются эндотелиальной клеткой и оказывают желаемый эффект. Вещество может уничтожать эндотелиальную клетку, стимулировать дальнейшее развитие кровеносных сосудов, стимулировать свертывание крови и/или метить эндотелиальную клетку таким образом, что она может обнаруживаться с помощью соответствующих средств. Веществом, оказывающим воздействие на ангиогенную эндотелиальную клетку, может быть нуклеотидная последовательность, такая как ДНК, кодирующая белок, который, будучи экспрессированным, стимулирует либо ингибирует процесс развития кровеносных сосудов. Упомянутая нуклеотидная последовательность предпочтительно включена в состав вектора, функционально связанного с промотором, причем промотор предпочтительно обладает активностью лишь в ангиогенных эндотелиальных клетках и может быть активирован в этих клетках посредством введения соединения, благодаря чему оказывается возможным включение либо выключение гена путем активации промотора. Цель настоящего изобретения заключается в предоставлении способа избирательного воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки, тем самым ингибирования либо стимулирования процесса развития кровеносных сосудов. Следующая цель настоящего изобретения заключается в предоставлении способа выявления участка развития кровеносных сосудов посредством введения катионных липосом, включающих обнаружимую метку, причем упомянутые липосомы сконструированы таким образом, чтобы избирательно связываться с ангиогенными эндотелиальными клетками и не связываться с соответствующими эндотелиальными клетками, не участвующими в процессе развития кровеносных сосудов. Следующая цель настоящего изобретения заключается в предоставлении катионных липосом, причем в состав упомянутых липосом входят катионные жидкости и соединения, которые специально предназначены и разработаны для ингибирования либо стимулирования процесса развития кровеносных сосудов, причем упомянутые соединения могут быть водорастворимыми либо легко диспергируемыми в воде или жидкости, совместимой с и включенной в липидные слои. Следующая цель настоящего изобретения заключается в предоставлении катионных композиций, в состав которых входят катионные липиды и таксан. Следующая цель настоящего изобретения заключается в предоставлении способа прицельной доставки таксана, связанного с катионным липидом, в ангиогенные эндотелиальные клетки. Следующая цель настоящего изобретения заключается в предоставлении способа такого избирательного воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки, который бы вызывал местное внутрисосудистое свертывание крови, которое бы препятствовало или полностью блокировало протекание крови в кровеносном сосуде. Следующая цель заключается в предоставлении способа анализирования ангиогенных эндотелиальных клеток посредством мечения клеток обнаружимой меткой, и обеспечения тем самым возможности отделения ангиогенных эндотелиальных клеток от окружающих клеток для последующего культивирования и/или анализа. Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление способа уничтожения нежелательной опухоли посредством доставки токсического соединения в ангиогенные эндотелиальные клетки опухоли, причем соединение уничтожает ангиогенные эндотелиальные клетки и тем самым уничтожает опухолевые клетки. Следующая цель настоящего изобретения заключается в предоставлении способа избирательного воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки посредством доставки комплекса катионного липида/ДНК в ангиогенные эндотелиальные клетки, где ДНК связана с промотором, который избирательно активируется в среде, которая предпочтительно связана исключительно с ангиогенными эндотелиальными клетками, т.е. промотор не активируется в "дремлющих" эндотелиальных клетках. Дополнительная цель настоящего изобретения заключается в предоставлении способа уменьшения образования атеросклеротических бляшек в кровеносном сосуде посредством доставки катионнолипидного комплекса, в состав которого входит вещество, замедляющее процесс развития кровеносных сосудов, и, тем самым, уменьшения образование бляшек. Отличительная особенность настоящего изобретения заключается в том, что катионные липосомы,соответствующие настоящему изобретению, избирательно связываются с ангиогенными эндотелиальными клетками с гораздо более высоким предпочтением (в два или более раз и предпочтительно в десять или более раз), нежели они связываются с соответствующими эндотелиальными клетками, не вовлеченными в процесс развития кровеносных сосудов.-5 005923 Преимущество настоящего изобретения заключается в том, что катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут использоваться для точной доставки небольших количеств токсических соединений в эндотелиальные клетки, причем упомянутые клетки подвергаются такому воздействию (например, убиваются), что кровеносный сосуд уничтожается либо его функционирование прекращается, например, сгустком крови и прекращается подача питательных веществ к окружающим тканям (например, опухолевым клеткам), вследствие чего упомянутая ткань уничтожается (например,уничтожается солидная опухоль). Следующее преимущество настоящего изобретения заключается в том, что катионные липосомы,соответствующие настоящему изобретению, могут использоваться для ингибирования процесса развития кровеносных сосудов, связанного со злокачественными или доброкачественными опухолями, связанными с происходящим процессом развития кровеносных сосудов. Еще одно преимущество настоящего изобретения заключается в том, что катионные липосомы могут использоваться для обеспечения ориентированной на определенный участок доставки соединений,которые стимулируют развитие кровеносных сосудов и, тем самым, стимулируют заживление ран. Важная отличительная особенность настоящего изобретения заключается в том, что лечению подвергаются заболевания и/или патологии нескольких классов без непосредственного лечения ткани, вовлеченной в патологический процесс, например, посредством ингибирования развития кровеносных сосудов кровоснабжение опухоли прекращается и опухоль убивается без какого-либо непосредственного лечения опухолевых клеток. Эти и другие цели, преимущества и отличительные особенности настоящего изобретения станут очевидны для специалистов в данной области после прочтения раскрытия сущности настоящего изобретения, приведенного здесь в сочетании с прилагаемыми рисунками. Краткое описание фигур Фиг. 1 - флуоресцентная микрофотография, на которой показано поглощение комплексовDDАВ:холестерина-ДНК, меченных CM-DiI, в ангиогенных кровеносных сосудах фолликула нормального мышиного яичника (масштаб: 60 мкм); фиг. 2 - флуоресцентная микрофотография, на которой показано поглощение комплексовDDАВ:холестерина-ДНК, меченных красным флуоресцентным красителем CM-DiI, в ангиогенных кровеносных сосудах среза опухоли поджелудочной железы мышей RIP1-Tag5 - сосуды окрашены в зеленый цвет флуоресцентным лектином (масштаб: 40 мкм); фиг. 3 - флуоресцентная микрофотография с небольшим увеличением, на которой показано незначительное поглощение либо отсутствие поглощения комплексов DОТАР:холестерина-ДНК (желтооранжевого цвета), меченных Техасом красным, в кровеносных сосудах нормального мышиного панкреатического островка (масштаб: 150 мкм); фиг. 4 - флуоресцентная микрофотография с небольшим увеличением, на которой показано поглощение комплексов DОТАР:холестерина-ДНК (желто-оранжевого цвета), меченных Техасом красным, в кровеносных сосудах опухоли поджелудочной железы мыши RIP1-Tag2 (масштаб: 150 мкм); Фиг. 5 - конфокальная микрофотография, на которой показано незначительное поглощение либо отсутствие поглощения комплексов DОТАР:холестерина-ДНК (красно-оранжевого цвета), меченных Техасом красным, в кровеносных сосудах нормального панкреатического островка, которые были окрашены (зеленый цвет) флуоресцентным лектином (масштаб: 50 мкм); фиг. 6 - конфокальная микрофотография, на которой показано поглощение липосом DОТАР:холестерина (красно-оранжевого цвета), меченных техасом красным, в опухоли поджелудочной железы мыши RIP1-Tag2. Сосуды окрашивались пропусканием флуоресцентного лектина (зеленый цвет)Lycopersicon esculentum после внутривенного введения липосом (масштаб: 50 мкм); фиг. 7 - конфокальная микрофотография, на которой показано поглощение липосом DОТАР:холестерина (красно-оранжевого цвета), меченных Техасом красным, в опухоли поджелудочной железы мыши RIP1-Tag2. Сосуды окрашивались пропусканием флуоресцентного лектина (зеленый цвет)Lycopersicon esculentum после внутривенного введения липосом (масштаб: 50 мкм); фиг. 8 - конфокальная микрофотография, на которой показано поглощение липосом DОТАР:холестерина (красно-оранжевого цвета), меченных техасом красным, в опухоли поджелудочной железы мыши RIP1-Tag2. Сосуды окрашивались пропусканием флуоресцентного лектина (зеленый цвет)Lycopersicon esculentum после внутривенного введения липосом. На участках возможного роста сосудов наблюдается интенсивное поглощение (масштаб: 50 мкм); фиг. 9 - конфокальная микрофотография, на которой показано незначительное поглощение липосомDОТАР:холестерина (красно-оранжевого цвета), меченных техасом красным, в нормальных кровеносных сосудах трахеи апатогенной мыши; сосуды окрашивались в зеленый цвет флуоресцентным лектином(масштаб: 50 мкм); фиг. 10 - конфокальная микрофотография, на которой показано поглощение липосом ВОТАР:холестерина (красно-оранжевого цвета), меченных техасом красным, в ангиогенных кровеносных сосудах трахеи мыши, инфицированной Mycoplasma pulmonis; (масштаб: 50 мкм);-6 005923 фиг. 11 - график, на котором показано количество липосом DOTAP-холестерина, меченных техасом красным, поглощенное кровеносными сосудами апатогенных (нормальных) и инфицированных Mycoplasma pulmonis мышиных трахей, определявшееся посредством измерения флуоресценции липосом через 4 ч после внутривенного впрыскивания. Измерения производились с помощью конфокального микроскопа Zeiss LSM 410. Инфицированным мышам интраназально вводили микроорганизмы М. pulmonis с проверкой через 4 недели. Звездочкой обозначено статистически значимое различие (Р 0,05, средняя квадратическая ошибка, n=4 мыши на группу); фиг. 12 - электронная микрофотография в проходящем пучке, на которой показаны липосомы(масштаб: 50 мкм); фиг. 13 - электронная микрофотография в проходящем пучке, на которой показаны липосомыDOTAP-холестерина, поглощенные эндотелиальной клеткой в трахее мыши, инфицированной М. pulmonis (масштаб: 80 мкм). фиг. 14 - флуоресцентная микрофотография, на которой показана связь катионных липосом, включающих паклитаксел, с образованной эндотелиальными клетками выстилкой трахеи апатогенной мыши(панель А) и трахеи мыши, инфицированной М. pulmonis (панель В). Подробное описание предпочтительного варианта осуществления изобретения Перед описанием настоящего способа избирательного воздействия на мечения ангиогенных эндотелиальных клеток и липосом, использованных в настоящем способе, следует понять, что это изобретение не ограничивается конкретными описанными липосомами, способами или активными веществами,поскольку таковые могут, естественно, изменяться. Следует понимать также, что использованная терминология предназначена лишь для целей описания конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения и не предназначена для ограничения объема, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничиваться лишь пунктами прилагаемой формулы изобретения. Следует обратить внимание на то, что форма единственного лица, использованная в этом описании и пунктах прилагаемой формулы изобретения, включает и ссылку на форму множественного числа, если только в контексте четко не указано иное. Так, например, упоминание "липосомы" включает смеси и большие количества таких липосом, упоминание "агента" включает большие количества агентов и их смесей, а упоминание "способа" включает один или несколько способов или этапов описанного здесь типа. Публикации, обсуждаемые в настоящем описании, представлены исключительно с целью их раскрытия перед датой подачи настоящей заявки. В данной заявке ничто не должно рассматриваться в качестве признания того, что настоящее изобретение не дает права датирования такой публикации задним числом в силу предшествующего изобретения. При отсутствии иного определения, все технические и научные термины, использованные в настоящем описании, имеют то же самое значение, которое обычно понимается средним специалистом в той области, к которой относится настоящее изобретение. Несмотря на то, что при практическом осуществлении либо испытании настоящего изобретения могут использоваться любые способы и материалы,подобные либо эквивалентные описанным, в настоящем описании представлено описание предпочтительных способов и материалов. Все публикации, упомянутые в данном описании, включены в него как ссылки с целью раскрытия и описания особых аспектов изобретения, для которых данная публикация упоминается. Определения Термины "лечить", "лечение" и т.п. использованы в данном описании для общего обозначения достижения необходимого фармакологического и/или физиологического эффекта. Упомянутый эффект может быть профилактическим с точки зрения полного либо частичного предотвращения заболевания либо его симптома и/или может быть терапевтическим с точки зрения обеспечения частичной либо полной устойчивости или лечения заболевания и/или отрицательного эффекта, связанного с данным заболеванием. Термин "лечение", использованный в настоящем описании, обозначает любое лечение заболевания млекопитающего, в частности, человека, и включает:(a) предотвращение появления заболевания либо симптома у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию или симптому, но у которого они пока что не диагностированы;(c) облегчение симптома заболевания, т.е. обеспечение регресса заболевания или симптома. Термин "фармацевтически приемлемая соль", использованный в настоящем описании, обозначает соль, сохраняющую необходимую биологическую активность исходного соединения и не вызывающую каких-либо нежелательных токсикологических эффектов. Примерами таких солей являются, однако ими не ограничиваются, (а) соли, получаемые добавлением неорганических кислот, например, хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты и т.п.; и соли, получаемые добавлением органических кислот, таких как, например, уксусная кислота, щавелевая кислота, винная кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, глюконовая-7 005923 кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, аскорбиновая кислота, бензойная кислота, дубильная кислота, памовая кислота, альгиновая кислота, полиглутаминовая кислота, нафталинсульфоновые кислоты,нафталиндисульфоновые кислоты, полигалактуроновая кислота; (b) соли с катионами поливалентных металлов, таких как цинк, кальций, висмут, барий, магний, алюминий, медь, кобальт, никель, кадмий и т.п.; и (с) соли с органическим катионом, полученные из N,N'-дибензилэтилендиамина либо этилендиамина; и (d) сочетания (а) и (b) или (с), например, таннат цинка и т.п. Термин "ангиогенез" обозначает процесс васкуляризации ткани, который включает развитие новых сосудов. Ангиогенез происходит одним из трех механизмов: (1) неоваскуляризация, когда эндотелиальные клетки мигрируют из ранее существовавших сосудов, начиная образование новых сосудов; (2) образование и развитие сосудов, когда сосуды возникают из клеток-предшественников de novo; либо (3) утолщение сосудов, когда диаметр существующих мелких сосудов увеличивается с образованием более крупных сосудов (Блад (Blood) и другие (1990), Biochem. Biophys. Acta, 1032:89-118). Ангиогенез является важным процессом в ходе нормального развития новорожденного и в женской половой системе в течение цикла развития желтого тела (смотри Мозес (Moses) и другие (1990), Science 248:1408-10). При нормальных условиях все процессы, включающие образование новых или реконструкцию существующих или новых кровеносных сосудов, являются самоограничивающимся процессом,и увеличение количества клеток определенных типов регулируется и согласуется. Ангиогенез вовлечен также в заживление ран и в патогенез значительного числа клинических заболеваний, в том числе воспаления тканей, артрита, астмы, роста опухолей, диабетической ретинопатии и других состояний. Клинические проявления, связанные с ангиогенезом, упоминаются как ангиогенные заболевания (Фолкмен (Folkman) и другие (1987), Science, 235:442-7). Результаты многих экспериментов позволяют предположить, что ткани могут продуцировать ангиогенные факторы, которые стимулируют ангиогенез при условии плохого кровоснабжения как при нормальных, так и при патологических состояниях. Эти факторы и соединения различаются по клеточной специфичности и механизмам, посредством которых они индуцируют рост новых кровеносных сосудов. Эти факторы функционируют через посредство разнообразных механизмов. Например, они могут индуцировать миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток или стимулировать продуцирование коллагеназы (смотри Клагсбарн (Klagsburn) и другие (1991), Ann. Rev. Physiol., 53:217-39). Существует ряд биопроб, которые позволяют производить непосредственное определение ангиогенной активности(Уилтинг (Wilting) и другие (1991), Anat. Embrol. (Berl), 183:259-71). Было выдвинуто предположение, что ангиогенные ингибиторы могут быть полезными при лечении заболеваний. Например, посредством подавления ангиогенеза можно ограничивать рост опухолей. Было предложено несколько средств подавления ангиогенеза, в том числе: (1) подавление выделения ангиогенных факторов, (2) нейтрализация ангиогенных факторов, используя такие средства, как моноклональные антитела, и (3) подавление реакции эндотелиальных клеток (Фолкмен (Folkman) и другие (1992),Seminars in Cancer Biology, 3:89-96) с помощью антиангиогенных факторов, молекул, которые, как известно, подавляют ангиогенез. Было описано несколько таких ингибиторов эндотелиальных клеток, например, ингибитор коллагеназы, ингибиторы метаболизма базальной мембраны, ангиостатические стероиды, ингибиторы, полученные из грибов, тромбоцитарный фактор 4, тромбоспондин, средства для лечения артрита, такие как пенициламин, а также, наряду с прочими, альфа-интерферон (смотри Фолкмен(1996), J. Endocrinol., 150:99-106; Майон (Maione) другие (1990), Science, 247:77-9). Термин "эндотелиальные клетки" означает те клетки, которые образуют эндотелий, монослой простых плоских клеток, который выстилает внутреннюю поверхность системы кровообращения. Эти клетки сохраняют способность к делению несмотря на то, что их пролиферация в нормальных условиях проходит очень медленно. Клетки подвергаются делению, возможно, всего один раз в течение года. Пролиферация эндотелиальных клеток может быть продемонстрирована посредством использования [3 Н] тимидина для мечения клеток в S-фазе. В нормальных сосудах пропорция эндотелиальных клеток, принимающих метку, оказывается особенно высокой в точках разветвления артерий, где турбулентность и износ, по всей видимости, стимулируют метаболизм. (Госс (Goss) (1978), The Physiology of Growth, Academic Press, Нью-Йорк, стр. 120-137). Нормальные эндотелиальные клетки являются "дремлющими", т.е. они не делятся и как таковые отличаются от ангиогенных эндотелиальных клеток, как обсуждается далее. Эндотелиальные клетки обладают также способностью мигрировать. Этот процесс играет важную роль в ангиогенезе. Эндотелиальные клетки образуют новые капилляры in vivo. в случае возникновения в них необходимости, например, во время заживления ран, либо тогда, когда в них предполагается необходимость, например, при образовании опухоли. Процесс образования новых сосудов именуется ангиогенезом и в него вовлекаются молекулы (ангиогенные факторы), которые могут быть митогенными либо хематрактантами для эндотелиальных клеток (Клагсбарн (Klagsburn), смотри ранее). Во время ангиогенеза эндотелиальные клетки могут мигрировать из существующего капилляра для того, чтобы начать образование нового сосуда, т.е. клетки одного сосуда мигрируют таким образом, что этим обеспечивается удлинение этого сосуда (Спайдел (Speidel), Am. J. Anat., 52:1-79). Исследования in vitro документаль-8 005923 но подтвердили как пролиферацию, так и миграцию эндотелиальных клеток; эндотелиальные клетки в культуре могут размножаться и спонтанно образовывать капиллярные трубки (Фолкмен (Folkman) и другие (1980), Nature, 288:551-56). Термины "ангиогенные эндотелиальные клетки", "эндотелиальные клетки, подвергающиеся ангиогенезу" и т.п. используются в описании взаимозаменяемо для обозначения эндотелиальных клеток (в соответствии с определением, приведенным ранее), участвующих в процессе ангиогенеза (в соответствии с определением, приведенным ранее). Таким образом, ангиогенные эндотелиальные клетки представляют собой эндотелиальные клетки, которые размножаются со скоростью, намного превосходящей нормальные условия деления клеток, приблизительно один раз в течение года. Скорость пролиферации эндотелиальных клеток при этом может в 2, 5, 10 или более раз превышать скорость нормальной пролиферации и может существенно изменяться в зависимости от таких факторов, как возраст и состояние пациента, тип вовлеченной опухоли, тип раны и т.п. Принимая во внимание то, что различия в степени пролиферации между нормальными эндотелиальными клетками и ангиогенными эндотелиальными клетками поддаются измерению и считаются биологически значимыми, клетки этих двух типов различаются с помощью настоящего изобретения, т.е. ангиогенные эндотелиальные клетки отличаются от соответствующих, нормальных, "дремлющих" эндотелиальных клеток по предпочтительному связыванию катионных липосом. Термины "соответствующие эндотелиальные клетки", "нормальные или дремлющие эндотелиальные клетки" и т.п. используются для указания на нормальные, "дремлющие" эндотелиальные клетки,содержащиеся в ткани того же самого типа (при нормальных условиях), когда некоторые эндотелиальные клетки подвергаются ангиогенезу, а некоторые эндотелиальные клетки являются "дремлющими". В соответствии с настоящим изобретением, ангиогенные эндотелиальные клетки предпочтительно оказываются мишенью, которой отдается предпочтение в пять, а предпочтительно в десять раз большее, нежели предпочтение, оказываемое соответствующим "дремлющим" эндотелиальным клеткам. Термин "липид" используется в традиционном смысле, как видовой термин, обозначающий жиры,липиды, т.е. растворимые в спиртах и эфирах составляющие протоплазмы, которые нерастворимы в воде. Липиды образуют жиры, жирные масла, эфирные масла, воски, стероиды, стерины, фосфолипиды,гликолипиды, сульфолипиды, аминолипиды, хромолипиды (липохромы) и жирные кислоты. Упомянутый термин обозначает как естественные липиды, так и липиды, полученные синтетическим путем. Предпочтительными липидами, в связи с настоящим изобретением, являются: холестерин, фосфолипиды, в том числе фосфатидилхолины и фосфатидилэтаноламины, и сфингомиелины. Жирные кислоты могут иметь в длину до 12-24 атомов углерода, включать до 6 ненасыщенных (двойных) связей и связываться с основой ацильными либо эфирными связями. В случае более одной жирной кислоты, связанной с основой, эти жирные кислоты могут быть различными (асимметричными) или же может присутствовать лишь 1 жирнокислотная цепь, например, лизолецитины. Возможны также смешанные лекарственные формы, в частности, когда некатионные липиды получены из природных источников, такие как лецитины (фосфатидилхолины), очищенные из желтка куриного яйца, бычьего сердца, мозгов, печени или сои. Интерес представляют также стероиды и стерины, в частности, холестерин, и стерины, замещенные в 3-положении. Термин "катионный липид" используется в данном описании для обозначения любого липида, соответствующего изобретению (в соответствии с определением, приведенным ранее), и являющегося катионным. Липид будет определяться как катионный, если он имеет положительный заряд (при физиологическом значении рН), измеряемый приборным оборудованием, используемым на момент измерения. При наличии в катионном липиде жирных кислот, они могут иметь в длину до 12-24 атомов углерода,включать до 6 ненасыщенных (двойных) связей и связываться с основой ацильными либо эфирными связями; с основой может также быть связана лишь одна жирнокислотная цепь. В случае более одной жирной кислоты, связанной с основой, эти жирные кислоты могут быть различными (асимметричными). Возможны также смешанные лекарственные формы. Термин "липосома" обозначает любой компартмент, образованный двойным липидным слоем. Липосомы называют также липидными пузырьками. Для получения липосомы используют липидные молекулы, которые имеют удлиненные неполярные (гидрофобные) участки и полярные (гидрофильные) участки. Гидрофобные и гидрофильные участки молекулы предпочтительно располагаются на двух концах удлиненной молекулярной структуры. Когда такие липиды диспергируют в воде, они самопроизвольно образуют двухслойные мембраны, называемые ламеллами. Ламеллы состоят из двух монослойных пленок липидных молекул, неполярные (гидрофобные) поверхности которых повернуты друг к другу, а полярные (гидрофильные) поверхности повернуты в сторону водной среды. Мембраны, образованные липидами, заключают часть водной фазы подобно клеточной мембране, заключающей содержимое клетки. Таким образом, двухслойная оболочка липосомы имеет сходство с клеточной мембраной, за исключением наличия белковых компонентов, которые имеются лишь в клеточной мембране. Термин "липосома",использованный в связи с настоящим изобретением, обозначает мультиламеллярные липосомы, которые,как правило, имеют диаметр в интервале 1-10 мкм и в состав которых входит от приблизительно двух до сотен концентрических двухслойных липидных мембран, перемежающихся слоями водной фазы, и к-9 005923 числу которых относятся также униламеллярные пузырьки, которые имеют один липидный слой и диаметр, как правило, в пределах от приблизительно 20 нм (нанометров) до приблизительно 400 нм, от приблизительно 50 нм до приблизительно 300 нм, от приблизительно 300 нм до приблизительно 400 нм, от приблизительно 100 нм до приблизительно 200 нм, причем эти пузырьки можно получать подвергая мультиламеллярные липосомы обработке ультразвуком, экструзией под давлением через мембраны,имеющие поры определенного размера или же гомогенизацией под высоким давлением. Предпочтительными липосомами, включающими таксаны, являются униламеллярные пузырьки,имеющими одну двухслойную липидную мембрану и диаметр в пределах 25-400 нм. Предпочтение отдается также мультиламеллярным пузырькам, содержащим таксан и имеющим диаметр в пределах от приблизительно 25 нм до приблизительно 400 нм. Предпочтительные полинуклеотидно- (включающие ДНК, РНК и синтетические аналоги полинуклеотидов) липосомные комплексы получают из предпочтительных липосом. Комплексы получают таким образом, что на каждые 1-50 нмоль катионного липида приходится 1 мкг полинуклеотида. Когда необходимым конечным продуктом является экспрессия кассеты гена ДНК, оптимальное соотношение между полинуклеотидом и катионным липидом определяется эмпирическим путем посредством получения ряда лекарственных форм, в которых стандартное количество ДНК смешивается с различными количествами катионной липосомы в пределах описанного ранее диапазона. После этого полученные лекарственные формы вводятся in vivo и определяется лекарственная форма, дающая максимальную экспрессию. Катионные липосомы могут быть функционально определены как имеющие дзета-потенциал, превышающий 0 мВ. Термин "катионная липосома", использованный в данном описании, предназначен для обозначения любой липосомы, соответствующей определению, приведенному ранее, и являющейся катионной. Липосома определяется как катионная в случае ее существования при физиологическом значении рН. Следует обратить внимание на то, что сама липосома представляет собой частицу, которая определяется как катионная в том смысле, что липосома, имеющая поддающийся измерению положительный заряд в пределах ее физиологического значения рН, может, в среде in vivo, присоединяться к другим веществам. Другие вещества могут иметь отрицательный заряд, следствием чего является образование структуры, не имеющей положительного заряда. Заряд и/или структура липосомы, соответствующей настоящему изобретению и существующей в среде in vivo, точно не определялись. Однако в соответствии с настоящим изобретением катионная липосома, соответствующая настоящему изобретению, может быть получена с использованием как минимум некоторых липидов, которые сами являются катионными. Липосома не обязательно должна полностью состоять из катионных липидов, однако в ее состав должно входить достаточное количество катионного липида с тем, чтобы в случае ее получения и внесения в среду in vivo при физиологическом значении рН такая липосома первоначально имела положительный заряд. Термин "нуклеотидная последовательность/катионный липид" обозначает комбинацию нуклеотидной последовательности, которой может быть последовательность РНК или ДНК, сочетающаяся с как минимум катионными липидами, соответствующими определению, приведенному ранее, и могущая включать нейтральные липиды. В случае сочетания последовательностей ДНК и катионных липидов,они будут самопроизвольно образовывать комплексы, которые не являются классическими липосомами. Настоящее изобретение направлено, в частности, на получение специфических комплексов нуклеотидных последовательностей/катионных липидов, в которых упомянутая нуклеотидная последовательность предназначена, в частности, для воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки. Нуклеотидная последовательность, например, может кодировать белок, который убивает ангиогенные эндотелиальные клетки. Упомянутая последовательность предпочтительно функционально связана с промотором, который избирательно активируется лишь в среде ангиогенных эндотелиальных клеток, т.е. не активируется в среде соответствующих, "дремлющих" эндотелиальных клеток. В дополнение к этому, упомянутый комплекс может включать последовательность, которая является антисмысловой последовательностью,блокирующей экспрессию генетического материала в ангиогенной эндотелиальной клетке и тем самым сильно нарушающей функционирование и/или убивающей ангиогенную эндотелиальную клетку. ДНК может быть кольцевой или линейной плазмидой. Когда требуется генный продукт (сам транскрипт РНК или транслированный в виде белка), необходим полигенный экспрессирующий кластер, в состав которого входит промоторная последовательность ДНК и последовательность ДНК, кодирующая генный продукт. В антисмысловых вариантах, в частности, используются нуклеотиды с иными, кроме фосфодисложноэфирных, связями. Термин "связывается с" обозначает действие катионных липосом, соответствующих настоящему изобретению, которые остаются на достаточно близком расстоянии от ангиогенных эндотелиальных клеток в течение достаточно долгих периодов времени, благодаря чему сама липосома и/или ее содержимое попадает в эндотелиальную клетку. Липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут связываться с ангиогенными эндотелиальными клетками при различных обстоятельствах, однако наиболее предпочтительно связываются с ангиогенной эндотелиальной клеткой, находясь в условиях in vivo. Так,липосома может модифицироваться посредством присоединения, соединения либо связывания с другими молекулами либо материалами, присутствующими в кровотоке, перед связыванием с ангиогенной эндо- 10005923 телиальной клеткой. Различные силы могут обусловливать связь липосом с ангиогенными эндотелиальными клетками, например, неспецифические взаимодействия, происходящие между двумя неродственными молекулами, т.е. другими макромолекулами, например, человеческого сывороточного альбумина либо человеческого трансферрина. Упомянутые межмолекулярные силы могут подразделяться на четыре общих класса, а именно: (1) электростатические; (2) образования водородной связи; (3) гидрофобные; и(4) ван-дер-ваальсовы. Электростатические силы обусловлены притяжением между противоположно заряженными ионными группами, например, между противоположно заряженными группами на катионной липосоме и группами, присутствующими на или в ангиогенной эндотелиальной клетке. Сила притяжения (F) обратно пропорциональна квадрату расстояния (d) между зарядами. Силы образования водородной связи предоставляются образованием обратимых водородных мостиковых связей между гидрофильными группами. Липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут включать гидрофильные группы, например, -СООН, и подобные же группы могут присутствовать на поверхности эндотелиальных клеток, как, например, группы -ОН, -NH2. Эти силы в значительной степени зависят от близкого взаимного расположения двух молекул, несущих эти группы. Гидрофобные силы действуют таким образом, что капли масла в воде сливаются с образованием одной большой капли. Соответственно, неполярные гидрофобные группы, например, присутствующие на липосомах, соответствующих настоящему изобретению, имеют склонность к соединению в водной среде и могут иметь склонность к соединению с гидрофобными группами, присутствующими на поверхности эндотелиальных клеток. И, наконец, вандер-ваальсовы силы возникают между молекулами и зависят от взаимодействия между наружными электронными облаками. Термины "избирательно связывается" или "избирательно направляется" и т.п. используются здесь для описания свойства катионных липосом, соответствующих настоящему изобретению, которое заставляет катионные липосомы связываться с ангиогенными эндотелиальными клетками в большей степени,нежели катионные липосомы связываются с соответствующими нормальными эндотелиальными клетками, не вовлеченными в процесс ангиогенеза. В соответствии с настоящим изобретением, избирательное либо предпочтительное связывание означает, что липосома будет связываться с эндотелиальными клетками, подвергающимися ангиогенезу, в пять или более раз активнее, нежели с соответствующими нормальными эндотелиальными клетками, не подвергающимися ангиогенезу. В более предпочтительном варианте, предпочтительная или избирательная связь указывает на десятикратную или более высокую избирательность между ангиогенными эндотелиальными клетками и соответствующими нормальными эндотелиальными клетками. Термин "рак" обозначает заболевание с несоответствующей пролиферацией клеток. Это расстройство приобретает наиболее явную клиническую форму, когда объем опухолевой ткани нарушает функционирование жизненно важных органов. Концепции, описывающие рост нормальной ткани, применимы к злокачественной ткани, поскольку нормальная и злокачественная ткани могут иметь одинаковые ростовые характеристики как на уровне отдельной клетки, так и на уровне ткани. Рак является в такой же степени заболеванием беспорядочного регулирования роста ткани, как и беспорядочного регулирования роста клеток. Термин "время удвоения" обозначает время, необходимое для того, чтобы величина или количество клеток ткани или опухоли увеличились в два раза. Время удвоения клинически явной опухоли, как правило, значительно превосходит время клеточного цикла клеток, из которых состоит опухоль. Однако, в отличие от опухоли, нормальная печень, сердце или легкие у взрослого человека не имеют времени удвоения, поскольку органы находятся в устойчивом состоянии, в котором скорости образования и гибели клеток одинаковы (Стокдейл (Stockdale), (1996), "Cancer growth and chemotherapy", в: Scientific American Medicine, том 3, Scientific American Press, Нью-Йорк, стр. 12-18). Ростовые характеристики опухолей таковы, что количество новых образовавшихся клеток превосходит количество погибших клеток; неоплазия стремится вызвать увеличение доли стволовых клеток, подвергающихся самообновлению,и соответствующее снижение количества клеток, развивающихся до стадии зрелости (Маккаллох(McCulloch) и другие, (1982), Blood, 59:601-608). Для каждой популяции опухолевых клеток существует время удвоения и можно определить конкретную кривую роста (Стокдейл (Stockdale), смотри ранее). Картина роста опухолей может описываться кривой Гомперца (Стил (Steel), (1977), Growth kinetics oftumors, Oxford University Press, Inc., Нью-Йорк, стр. 40), которая показывает, что в процессе развития опухоли скорость роста вначале очень высока, а затем, по мере увеличения размера опухоли, постепенно снижается. Общие аспекты изобретения Прилагаемые фигуры позволяют получить четкое визуальное представление о высокой степени избирательности, с которой катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, прицельно направляются к ангиогенным эндотелиальным клеткам. Основной вариант осуществления настоящего изобретения включает в себя способ избирательного воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки посредством введения (предпочтительно посредством внутрисосудистого впрыскивания, более предпочтительно посредством внутриартериального впрыскивания) лекарственной формы, в состав которой входит фармацевтически приемлемый носитель и катионные липосомы, которые содержат вещество либо ДНК-катионные комплексы. Упомянутым веществом может быть соединение, игибирующее ангиогенез,- 11005923 соединение, стимулирующее ангиогенез и/или обнаружимая метка. После этого катионные липосомы,входящие в состав впрыснутой лекарственной формы, получают возможность проникновения в ангиогенные эндотелиальные клетки (посредством эндоцитоза), выстилающие стенки ангиогенных кровеносных сосудов. Катионные липосомы связываются с ангиогенными эндотелиальными клетками на достаточный период времени и таким образом, что сами липосомы и/или их содержимое попадает в ангиогенную эндотелиальную клетку. В последующем, соединение, попавшее в клетку, может ингибировать или стимулировать ангиогенез либо же попросту предоставлять метку, обеспечивающую обнаружение участка ангиогенеза. Избирательность прицельного попадания в ангиогенные эндотелиальные клетки может быть лучше понята при обращении к прилагаемым рисункам. На фиг. 1 показана часть мышиного яичника, имеющего находящийся в нем большой круглый фолликул (желтого цвета). Поскольку ангиогенез происходит в нормальном мышином яичнике, катионные липосомы, содержащие обнаружимую метку, связываются с ангиогенными эндотелиальными клетками растущих кровеносных сосудов фолликула (красно-оранжевый цвет). С помощью фиг. 1, однако, невозможно точно определить связывается ли метка только с ангиогенными эндотелиальными клетками или же она связывается со всей тканью в пределах яичника и фолликула. Фиг. 2 представляет собой флуоресцентную микрофотографию, на которой показан срез опухоли поджелудочной железы мыши, которой внутривенно были введены катионные липосомы (краснооранжевый цвет), соответствующие настоящему изобретению, содержащие обнаружимую метку. Ангеогенез легко протекает в опухолях. Таким образом, эта фотография предоставляет некоторое свидетельство того, что катионные липосомы (красно-оранжевого цвета), соответствующие настоящему изобретению, связываются непосредственно с ангиогенными эндотелиальными клетками (зеленого цвета). Эти результаты, однако, недостаточно наглядно демонстрируют специфику настоящего изобретения. Сравнение фиг. 3 и 4 демонстрирует способность настоящего изобретения к обнаружению участка ангиогенеза. Фиг. 3 представляет собой фотографию, на которой показаны кровеносные сосуды нормальной ткани поджелудочной железы мыши. Уровень мечения нормальных эндотелиальных клеток намного меньший, нежели уровень мечения соответствующих ангиогенных эндотелиальных клеток. Это ясно видно при сравнении фиг. 3 с фиг. 4, которая представляет собой фотографию опухоли поджелудочной железы мыши. Фиг. 4 четко показывает высокую степень накопления метки (желто-оранжевый цвет), находящейся в катионных липосомах, на участке опухоли. Существенное различие между фиг. 3 и фиг. 4 показывает пригодность настоящего изобретения для четкого и точного обозначения участка опухоли. Однако, поскольку на фиг. 4 с ангиогенными кровеносными сосудами связано такое большое количество метки, невозможно будет в полной мере оценить специфичность катионных липосом в отношении предпочтительного прицельного попадания в ангиогенные эндотелиальные клетки. Фиг. 5 представляет собой фотографию кровеносных сосудов (зеленый цвет) островка нормальной мышиной поджелудочной железы. Небольшое количество красно-оранжевой окраски указывает на ограниченную связь катионных липосом с нормальными эндотелиальными клетками, выстилающими кровеносные сосуды ткани поджелудочной железы. Специфичность катионных липосом, содержащих обнаружимую метку, нагляднее демонстрируется при сравнении фиг. 5 с фиг. 6. Фиг. 6 четко показывает гораздо более высокую степень накопления метки в эндотелиальных клетках ангиогенных кровеносных сосудах опухоли поджелудочной железы мыши. Точная способность катионных липосом к прицельному попаданию в ангиогенные эндотелиальные клетки весьма наглядно показана на фиг. 7 и 8. На фиг. 7 четко показано, что флуоресцентная метка связана только с кровеносными сосудами, т.е. метка не просочилась и не мигрировала в окружающую ткань. Специфичность наиболее наглядно показана на фиг. 8, на которой четко изображены меченые катионные липосомы, обнаруженные в пределах ангиогенных эндотелиальных клеток, что свидетельствует о специфичности метки по отношению к этим клеткам и что метка не просачивается и не мигрирует в окружающую ткань. Фиг. 9 и 10 демонстрируют тот же самый вышеописанный эффект, однако, на иной модели ангиогенеза. На фиг. 1-8 показана нормальная либо раковая ткань. На фиг. 9 и 10, соответственно, показана нормальная либо воспаленная ткань трахеи мыши. Конкретнее, на фиг. 9 показаны нормальные кровеносные сосуды трахеи, например, трахеи апатогенной мыши. На фиг. 10 показаны кровеносные сосуды трахеи с явлениями ангиогенеза, индуцированного инфекцией. Более высокая концентрация обнаружимой метки на фиг. 10 явно указывает на то, что катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, избирательно связываются с ангиогенными эндотелиальными клетками - специфически связываются с эндотелиальными клетками трахеи, ангиогенез которых был индуцирован инфекцией. На фиг. 11 представлен график, отображающий различия в специфичности катионных липосом между их способностью связываться с ангиогенными эндотелиальными клетками и соответствующими нормальными эндотелиальными клетками, не подвергающимися ангиогенезу. Как показано на фиг. 11,катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению (в ходе этого эксперимента), продемонстрировали сродство к ангиогенным эндотелиальным клеткам в приблизительно десять раз превосходящее сродство к соответствующим эндотелиальным клеткам, не подвергающимся ангиогенезу.- 12005923 Фиг. 12 и фиг. 13 показывают, каким образом катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, проникают в ангиогенные эндотелиальные клетки. На фиг. 12 показаны катионные липосомы, контактирующие с поверхностью ангиогенной эндотелиальной клетки. На фиг. 13 показано, что катионные липосомы проникли в ангиогенную эндотелиальную клетку посредством эндоцитоза и находятся в упомянутой клетке. На фиг. 14 показано поглощение липосомной лекарственной формы, в состав которой входит паклитаксел, в трахеях апатогенных мышей и мышей, инфицированных Mycoplasma pulmonis, а также показано, что катионные липосомы предпочтительно связываются с и поглощаются ангиогенными эндотелиальными клетками, по сравнению с эндотелиальными клетками, не подвергающимися ангиогенезу. При наличии словесного описания и представленной посредством рисунков специфичности катионных липосом, соответствующих настоящему изобретению, специалисты в данной области смогут получить множество разнообразных катионных липосом, включающих множество различных веществ, с целью использования настоящего изобретения. Однако для полноты, далее представлено описание катионных липосом и способов их получения с последующим описанием веществ, которые ингибируют или стимулируют ангиогенез. Липосомы Липосомы можно легко получить, помещая липиды (в соответствии с определением, приведенным ранее), в состав которых входят катионные липиды (в соответствии с определением, приведенным ранее), в водный раствор и перемешивая упомянутый раствор в течение периода времени от нескольких секунд до нескольких часов. Посредством простой процедуры самопроизвольно получают крупные,мультиламеллярные липосомы либо пузырьки с диаметром в пределах от приблизительно 1 до 10 мкм. Эти липосомы включают от двух до нескольких сотен концентрических двухслойных липидных оболочек, которые могут перемежаться слоями водной фазы, в которой находились липиды. В состав водной фазы может включаться вещество, например, соединение, ингибирующее ангиогенез, стимулирующее ангиогенез либо предоставляющее обнаружимую метку. Упомянутое вещество может быть водорастворимым или же, по крайней мере, может легко диспергироваться в воде. В соответствии с альтернативным вариантом, такие вещества могут включаться в двухслойную липидную мембрану. Вещества, включенные в двухслойную липидную мембрану, могут быть гидрофобными. Толщина водного слоя, а, следовательно, и общее количество водной фазы, заключенное в липосоме, зависит от равновесия электростатических сил отталкивания между заряженными липидами и вандер-ваальсовыми силами притяжения между двойными слоями как единым целым. Таким образом, водный промежуток (и, следовательно, объем заключенного водного материала) возрастает при увеличении пропорции заряженных липидов в мембране и при снижении концентраций электролитов (заряженных ионов) в водной фазе. Могут быть получены липосомы различных размеров. Небольшие образующиеся липосомы или пузырьки униламеллярны и имеют размер в пределах от приблизительно 20 нм до 400 нм и могут быть получены посредством обработки мультиламеллярных пузырьков ультразвуком, экструзией под давлением через мембраны, имеющие поры разного размера или же гомогенизацией под высоким давлением. Более крупные униламеллярные липосомы, имеющие размер в пределах от приблизительно 0,1 до 1 мкм в диаметре, могут быть получены, если липид солюбилизируют в органическом растворителе или детергенте и солюбилизированное вещество удаляют посредством выпаривания или диализа, соответственно. Посредством слияния более мелких униламеллярных липосом способами, требующими определенных липидов либо выдерживания жестких условий дегидратации-гидратации, можно получить униламеллярные пузырьки такой же величины либо крупнее, чем клетки. С целью получения катионных липосом, соответствующих настоящему изобретению, необходимо,чтобы липосомы получали с использованием как минимум некоторого количества катионного липида. Однако катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, не обязательно должны полностью состоят из катионных липидов. Например, используя нейтральные липиды в количестве приблизительно 45% и катионные липиды в количестве приблизительно 55%, получают катионные липиды,пригодные для использования в связи с настоящим изобретением и предпочтительно прицельно попадающие в ангиогенные эндотелиальные клетки. Катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут включать вещество,влияющее на ангиогенез, и могут дополнительно содержать флуорофор или другую метку и/или растворимое соединение в водном компартменте. Катионные липосомы, включающие вещество, влияющее на ангиогенез и/или метку, могут быть получены с помощью любого из нескольких стандартных способов,применяющихся в данной области, согласно которому, например, растворы 1,2-диолеоил-3-триметиламмонийпропана (DOTAP), холестерина и меченого техасом красным DHPE (N-(5-диметиламинонафталин-1-сульфонил)-1,2-дигексадеканоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин) смешивают, выпаривают до сухости и липидную пленку в последующем регидратируют в 5% растворе декстрозы с получением мультиламеллярных пузырьков. Эти пузырьки экструдируют через поликарбонатные мембранные фильтры с получением униламеллярных пузырьков. Липосомы и вещество, предназначенное для соединения, например, плазмидная ДНК, смешивают в определенных соотношениях в 5% растворе дек- 13005923 строзы или другом физиологически приемлемом наполнителе. К числу пригодных катионных липидов относятся:N,N,N',N'-тетраметил-N,N'-бис(2-гидроксилэтил)2,3-диолеоилокси-1,4-бутандиаммония йодид; производные 1-[2-ацилокси)этил]2-алкил(алкенил)-3-(2 гидроксиэтил)имидазолиния хлорида, такие как 1-[2-(9(Z)-октадеценоилокси)этил]-2-(8(Z)-гептадеценил 3-(2-гидроксиэтил)имидазолиния хлорид (DOTIM), 1-[2-(гексадеканоилокси)этил]-2-пентадецил-3-(2 гидроксиэтил)имидазолиния хлорид (DPTIM); 1-[2-тетрадеканоилокси)этил]-2-тридецил-3-(2-гидроксиэтил)имидазолиния хлорид (DMTIM) - как описано у Солодина (Solodin) и других, (1995), Biochem.,43:13537-13544; производные соединений 2,3-диалкилоксипропилчетвертичного аммония, включающие гидроксиалкильную составляющую на четвертичном амине, такие как 1,2-диолеоил-3-диметилгидроксиэтиламмонийбромид (DORI); 1,2-диолеилоксипропил-3-диметилгидроксиэтиламмонийбромид (DORIE); 1,2-диолеилоксипропил-3-диметилгидроксипропиламмонийбромид (DORIE-HP); 1,2-диолеилоксипропил-3-диметилгидроксибутиламмонийбромид (DORIE-HB); 1,2-диолеилоксипропил-3-диметилгидроксипентиламмонийбромид (DORIE-HPe); 1,2-димиристилоксипропил-3-диметилгидроксилэтиламмонийбромид (DMRIE); 1,2-дипальмитилоксипропил-3-диметилгидроксиэтиламмонийбромид (DPRIE); 1,2-дистерилоксипропил-3-диметилгидроксиэтиламмонийбромид (DSRIE) - как описано, например,у Фелгнера (Felgner) и других, (1994), J. Biol. Chem., 269:2550-2561. Многие из вышеупомянутых липидов доступны коммерческим путем, например, от компаний Avanti Polar Lipids, Inc.; Sigma Chemical Co.;Molecular Probes, Inc.; Northerm Lipids, Inc.; Roche Molecular Biochemicals; и Promega Corp. Катионные липосомы получают из самих катионных липидов или в смеси с другими липидами, в частности, нейтральными липидами, такими как холестерин; 1,2-диацил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламины (включая, однако не ограничиваясь, диолеоил (DOPE), 1,2-диацил-sn-глицеро-3-фосфохолины; природный фосфатидилхолин (PC) желтка куриного яйца и т.п.; синтетическими моно- и диацилфосфохолинами (например, моноацилфосфатидилхолином (МОРС и фосфоэтаноламинами. В смешанные лекарственные формы могут включаться также асимметричные жирные кислоты, как синтетические, так и природные, и вышеупомянутые диацильные производные. Липосомы вышеописанного типа и других типов, известные специалистам в данной области, могут использоваться в настоящем изобретении с липосомами, содержащими вещество, которое стимулирует либо ингибирует ангиогенез и/или включает обнаружимую метку. Одним из примеров липосом, соответствующих настоящему изобретению, являются катионные липосомы, содержащие липидорастворимое или водорастворимое вещество, ингибирующее ангиогенез. Липидорастворимые соединения, однако,могут находиться в двухслойной липидной оболочке. Далее приведено описание ингибиторов ангиогенеза. Следует заметить, что специалистам в данной области известны другие ингибиторы и/или они могут быть разработаны после настоящего изобретения, и что такие ингибиторы ангиогенеза могут легко использоваться в сочетании с настоящим изобретением. Ингибиторы ангиогенеза Гепарин является средством, потенцирующим ангиогенез; антагонисты гепарина могут блокировать ангиогенную реакцию. Протамин, гепаринсвязывающий белок, демонстрирует антиангиогенные свойства (Тейлор (Taylor) и другие, (1982), Nature, 297:307-312), однако он клинически непригоден, поскольку,как известно, вызывает анафилактические реакции при воздействии на людей. Другим антиангиогенным агентом является еще один гепаринсвязывающий белок, главный основной белок, который также обладает высокой токсичностью и, следовательно, не может использоваться при лечении людей. Однако благодаря высокой степени прицельной избирательности, получаемой в соответствии с настоящим изобретением, упомянутые и другие соединения, которые ингибируют ангиогенез, но которые, как полагают,являются слишком токсичными для терапевтического применения на людях, тем не менее могут быть пригодными, поскольку их можно использоваться в очень малых количествах. Тромбоцитарный фактор 4 (PF4) демонстрирует как гепаринсвязывающую активность, так и антиангиогенные свойства, и поскольку он не столь токсичен, как другие антагонисты гепарина, его можно использовать в клинических условиях. Химические модификации PF4, как раскрывается в патенте США- 140059235,112,946, стимулируют антиангиогенные свойства PF4. К числу этих модификаций относятся аналогиPF4, модифицированные флуоресцеин-изотиоцианатом на свободных аминогруппах, мутанты PF4 с определенным образом измененной структурной композицией белка и фрагменты PF4, сохраняющие его антиангиогенные свойства. В частности, синтетический пептид из 13 аминокислот, соответствующий Сконцевой области PF4, демонстрирует очень сильную ангиостатическую активность. Было показано, что ангиогенез ингибируется различными стероидами. Подобная антиангиогенная активность потенцируется добавлением гепарина или родственных молекул (Фолкмен (Folkman) и другие, (1989), Science, 243:1490-3). Так называемые "ангиостатические стероиды", такие как тетрагидрокортизон, обладают способностью блокировать ангиогенез in vivo. В частности, 6-фторо-17,21 дигидрокси-16-метил-прегна-4,9-(11)-диен-3,20-дион используется в качестве сильнодействующего ангиостатического стероида. Установлено, что лекарственные средства, модулирующие метаболизм коллагена, ингибируют ангиогенез. Аналоги аминокислоты пролина, в частности, ингибируют синтез коллагена и ингибируют ангиогенез in vivo. В частности, L-азетидин-2-карбоновая кислота (LACA), цис-гидроксипролин (СНР),D,L-3,4-дегидропролин (DHP) и тиопролин (ТР) проявляют антиангиогенную активность в порядке убывания (Ингбер (Ingber) и другие, (1988), Lab. Invest., 59:44-51). Каждый из этих аналогов также потенцирует антиангиогенные эффекты ангиостатических стероидов и гепарина. Человеческий тромбоспондин, гликопротеин, обнаруживаемый в альфа-гранулах тромбоцитов, ингибирует ангиогенез в тримерной, мономерной либо фрагментарной форме, как раскрывается в патенте США 5,192,744. Каждая из них демонстрирует активность в гликозилированном виде и, как полагают,они сохранят ее и будучи негликозилированными. Ангиогенез-ингибирующие свойства сохраняются и после делеции гепаринсвязывающей области, связанной с N-концевой областью, и тромбоцитосвязывающей области, обнаруженной в С-концевой области мономерного белка. Пептиды, демонстрирующие ламининовую активность, блокируют ангиогенез и предотвращают образование избытка кровеносных сосудов в тканях. К числу конкретных пептидов с подобной активностью относятся: 1) тирозин-изолейцин-глицин-серин-аргинин; 2) пролин-аспартин-серин-глицинаргинин; и 3) цистеин-аспартат-пролин-глицин-тирозин-изолейцин-глицин-серин-аргинин. Полагают,что эти пептиды сохраняют свою антиангиогенную активность в циклической форме. Другими примерами ангиогенезингибирующих веществ являются экстракты хрящевой ткани, демонстрирующие коллагеназную активность, белок, полученный из эндотелиальных клеток сетчаточного пигмента 1985), Arch. Ophthalmol., 103:1870-1875), противораковый фактор, полученный из культивируемых клеток хрящевой ткани (Такигава (Takigawa) и другие, (1988), Protein, Nucleic Acid and Enzyme,33:1803-7), противовоспалительные лекарственные средства, например, индометацин (Петерсон(1988)-119500), препараты золота для лечения артрита, гербимицин А (JPA-S63 (1988)-295509); белки МЕТН-1 и МЕТН-2 (Васкес (Vazquez) и другие, (1999), J. Biol. Chem., 274:23349-23357) и производные фумагиллина или фумагиллола. Целый ряд производных фумагиллола обладает ангиогенезингибирующими свойствами, как раскрыто в патенте США 5,202,352. Вышеупомянутые ссылки включены в настоящее описание как ссылки для описания и раскрытия ингибиторов ангиогенеза. Таксаны Настоящее изобретение дополнительно предоставляет катионные липосомы, содержащие таксан как антиангиогенный агент. Такие липосомы могут ингибировать ангиогенез и, таким образом, пригодны для лечения опухолей, хронического воспаления и других заболеваний, связанных с ангиогенезом. Термин "таксаны" включает паклитаксел, а также любое активное производное таксана или пролекарство, до тех пор, пока наблюдается необходимая активность, т.е. ангиогенез в кровеносном сосуде ингибируется в 2 раза, более предпочтительно как минимум приблизительно в 5 раз, более предпочтительно как минимум приблизительно в 10 раз, еще более предпочтительно как минимум приблизительно в 50 или более раз, по сравнению с ангиогенезом в кровеносном сосуде, не контактирующем с содержащей таксан катионнолипидной лекарственной формой. Специалисты в данной области могут легко определить, используя различные известные способы,ингибируется ли ангиогенез. К числу таких способов относятся, однако ими не ограничиваются, способы, включающие прорастание синтетического матрикса, in vitro либо in vivo, кровеносными сосудами в ответ на вещество, являющееся промотором ангиогенеза (т.е. проангиогенное вещество), например, испытание на хорионаллантоисной мембране; испытание на роговичном кармане; и испытания по ингибированию пролиферации эндотелиальных клеток. В литературе имеется описание многочисленных подобных способов, включая, inter alia. описание Васкеса (Vazquez) и других, (1999), J. Biol. Chem.,274:23349-23357; и Белотти (Belotti) и других, (1996), Clin. Cancer. Res., 2:1843-1849. Таксан может включаться в двойную липидную оболочку липосомы, может присутствовать в водном компартменте липосомы или же находиться и в оболочке, и в компартменте. Соответственно, в некоторых вариантах воплощения, настоящее изобретение предоставляет катионную липосому, содержа- 15005923 щую катионные липиды и таксан в двухслойной липидной оболочке. В некоторых из этих вариантов осуществления, катионная липосома дополнительно содержит таксан в водном компартменте. В других вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет катионные липосомы, содержащие катионные липиды и таксан в водном компартменте. К числу таксанов, которые могут включаться в водный компартмент, относятся водорастворимые таксаны (например, гидрофильное производное). К числу таксанов, которые могут включаться в двухслойную липидную оболочку катионной липосомы, относятся гидрофобные таксаны и производные гидрофобных таксанов. В общем, пропорция таксана в катионнолипосомных лекарственных формах, соответствующих настоящему изобретению, составляет менее приблизительно 20 мол.%. В некоторых вариантах осуществления катионнолипосомная лекарственная форма включает таксан в пропорции от приблизительно 0,5 мол.% до приблизительно 20 мол.%, в других вариантах осуществления от приблизительно 2 мол.% до приблизительно 10 мол.%. В других вариантах осуществления таксан присутствует в пропорции от приблизительно 1 мол.% до приблизительно 5 мол.%, а в еще других вариантах осуществления от приблизительно 1 мол.% до приблизительно 3 мол.%. В случае, если таксан включается в состав катионной липосомы в пропорции от приблизительно 0,5 мол.% до приблизительно 20 мол.%, от приблизительно 2 мол.% до приблизительно 10 мол.%, от приблизительно 1 мол.% до приблизительно 5 мол.%, от приблизительно 1 мол.% до приблизительно 3 мол.%, таксан по существу не выходит за пределы двухслойной липосомной оболочки и/или не образует по существу таксановых кристаллов в течение периода времени,составляющего по крайней мере приблизительно 0,5 ч, как правило по крайней мере приблизительно 1 ч,как правило по крайней мере приблизительно 2 ч, как правило по крайней мере приблизительно 24 ч, как правило по крайней мере приблизительно 48 ч, при температуре в пределах от приблизительно 4 С до приблизительно 25 С. Таксан может включаться в более высоких пропорциях до тех пор, пока он по существу не выделяется за пределы двухслойной липосомной оболочки и/или не содержит по существу таксановых кристаллов. Катионные липосомы, включающие таксан, "по существу не содержат таксановых кристаллов", т.е. как правило менее приблизительно 10%, обычно менее приблизительно 5%, обычно менее приблизительно 2%, как правило менее приблизительно 1% и предпочтительно менее приблизительно 0,5% таксана, присутствующего в катионной липосоме, находится в форме кристаллов. К числу катионных липосом, в которых таксан по существу не выходит за пределы двухслойной липидной оболочки, относятся те катионные липосомы, в которых за пределы двухслойной липосомной оболочки выходит как правило менее приблизительно 20%, обычно менее 10%, обычно менее приблизительно 5%,как правило менее приблизительно 1% и предпочтительно менее приблизительно 0,5%. Пропорция катионного липида в липосомно-таксановой лекарственной форме составляет как правило более приблизительно 5 мол.%, в большинстве случаев более приблизительно 10 мол.%, в более типичном случае более приблизительно 20 мол.%. В некоторых вариантах осуществления количество катионного липида в липосомно-таксановой лекарственной форме составляет от приблизительно 20 мол.% до приблизительно 99 мол.%. В других вариантах осуществления количество катионного липида составляет от приблизительно 30 мол.% до приблизительно 80 мол.%, в других вариантах осуществления, от приблизительно 40 мол.% до приблизительно 98 мол.%, и в других вариантах осуществления, от приблизительно 40 мол.% до приблизительно 60 мол.%. Ранее было приведено описание липосомных композиций, пригодных для использования с целью доставки таксана. Таксан может также связываться с гидрофобной органической составляющей, например, жирной кислотой, фосфолипидом и т.п., и включаться в состав липосомы. Описание таких таксановых производных приводилось, и они пригодны для использования в данном изобретении. См., например, патент США 5,580,899. Описывались фосфатидилхолиновые лекарственные формы, включающие таксол (патент США 5,683,715). Катионнолипосомные лекарственные формы, включающие таксан, имеют большее сродство к,предпочтительно связываются с и поглощаются эндотелиальными клетками в кровеносных сосудах, подвергающихся ангиогенезу (т.е. ангиогенных эндотелиальных клетках), т.е. катионные липосомы, включающие таксаны, поглощаются (таким образом, что таксан попадает в клетку) ангиогенными эндотелиальными клетками в количестве, превышающем как минимум приблизительно в 2 раза, предпочтительнее как минимум приблизительно в 5 раз, предпочтительнее как минимум приблизительно в 10 или более раз количество, поглощаемое неангиогенными эндотелиальными клетками. Это сравнение производится,как правило, на межклеточной основе, т.е. осуществляется прямое сравнение поглощения ангиогенной эндотелиальной клетки и неангиогенной эндотелиальной клетки. В качестве примера для определения соотношения поглощения ангиогенными и неангиогенными эндотелиальными клетками производится испытание ex vivo, например, клетки метятся в организме животного in vivo, удаляются из организма животного и испытываются ех vivo на поглощение катионнолипосомной лекарственной формы. Пример подходящего испытательного способа приведен в примере 5. В этом испытании животное обрабатывают таким веществом, которое, как известно, индуцирует ангиогенез. Эндотелиальные клетки контактируют с катионнолипосомной/таксановой лекарственной формой, которая включает в себя метку, которую можно отличить от метки, использованной для мечения всех эндотелиальных клеток. По истечение определенного периода времени все эндотелиальные клетки метят флуоресцентной меткой. Через организм животного перед, одновременно с либо после мечения эндотелиальных клеток пропускают фиксатив.- 16005923 Через определенный промежуток времени (например, через промежуток времени, составляющий от приблизительно 1 мин до приблизительно 2 ч) эндотелиальные клетки удаляют из организма животного, и,посредством прямой визуализации с помощью конфокального микроскопа, пропорцию эндотелиальных клеток, содержащих метку, связанную с катионнолипосомно-таксановой лекарственной формой, сравнивают с пропорцией эндотелиальных клеток, не имеющих метки, связанной с катионнолипосомнотаксановой лекарственной формой. Подобным образом можно осуществлять непосредственное межклеточное сравнение поглощения ангиогенными эндотелиальными клетками и неангиогенными эндотелиальными клетками. Осуществляется ли данной клеткой предпочтительное поглощение катионной липосомы, можно определить с помощью любого известного способа, включая применение меченых липидов и прибегая к использованию флуоресцентного микроскопирования, как описано в примерах. Способы,включающие, например, определение поглощения в гомогенатах цельных тканей, не относятся, обычно,к числу предпочтительных, поскольку присутствие значительной пропорции неэндотелиальных клеток может снизить отношение сигнал-фон и, тем самым, неточно отразить различие между поглощением ангиогенными эндотелиальными клетками и неангиогенными эндотелиальными клетками. В состав катионнолипосомной лекарственной формы может включаться нейтральный липид. В случае включения, он может присутствовать в пропорциях от приблизительно 1 мол.% до приблизительно 80 мол.%, как правило от приблизительно 2 мол.% до приблизительно 50 мол.%, в большинстве случаев от приблизительно 40 мол.% до приблизительно 50 мол.%. Может включаться любой нейтральный липид, в том числе, однако без ограничения, фосфатидилэтаноламин, включая, однако не ограничиваясь,DOPE; и фосфатидилхолин, включая, однако не ограничиваясь, яичный PC, DOPC и МОРС. Включаться могут также смеси фосфатидилэтаноламина и фосфатидилхолина. Катионные липосомы, включающие таксан, могут дополнительно включать в себя обнаружимую метку, большое количество которых известно в данной области, как подробно представлено в данном описании. В примере 5 представлены экспериментальные данные, показывающие прицельную доставку катионных липосом, содержащих паклитаксел, в ангиогенные эндотелиальные клетки. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления, настоящим изобретением предоставляются катионные липосомы,содержащие паклитаксел. В некоторых из этих вариантов осуществления содержание 1,2-диолеоил-3 триметиламмонийпропана (DOTAP) в катионной липосоме составляет от приблизительно 20 мол.% до приблизительно 99 мол.%, от приблизительно 40 мол.% до приблизительно 70 мол.%, от приблизительно 50 мол.% до приблизительно 60 мол.%. В некоторых из этих вариантов осуществления катионная липосома включает DОТАР:яичный фосфатидилхолин (РС):родамин:DНРЕ:паклитаксел в молярном соотношении 50:47:1:2. В других вариантах осуществления катионная липосома включает в себя DОТАР:яичный РС:паклитаксел в молярном соотношении 50:48:2. В других вариантах осуществления катионная липосома включает в себя DOTAP:DОРС:паклитаксел в молярном соотношении 50:47:3. В других вариантах осуществления катионная липосома включает DOTAP:DОРЕ:паклитаксел в молярном соотношении 50:47:3. В других вариантах осуществления катионная липосома включает DOTAP:МОРС: паклитаксел в молярном соотношении 50:47:3. Функция паклитаксела заключается в стабилизировании микротрубочных структур посредством связывания тубулина. В делящихся клетках это может привести к образованию аномальных митотических веретен. В дополнение к этому, таксаны могут иметь также антиангиогенную активность (Белотти(Belotti) и другие, (1996), Clin. Cancer Res., 2:1843-1849; и Клубер (Klаubеr) и другие, (1997), Cancer Res.,57:81-86). Катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут включать любое вещество, ингибирующее ангиогенез, включая, но не ограничиваясь, таксан, включая, но не ограничиваясь, паклитаксел; и любой из вышеописанных ингибиторов ангиогенеза. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления, предоставляются катионнолипосомные композиции, в состав которых входит таксан и одно или несколько других антиангиогенных веществ. Паклитаксел представляет собой высокодериватизованный дитерпеноид (Уони (Wani) и другие,(1971), J. Am. Chem. Soc., 93:2325-2327), который был получен из собранной и высушенной коры Taxusbrevifolia (тис коротколистный) и Taxomyces andreanae, эндофитного гриба тиса коротколистного (Стирл(Stierle) и другие, (1993), Science, 60:214-216). "Паклитаксел" (который, как следует понимать в данном описании, включает аналоги, лекарственные формы и такие производные, например, как доцетаксел,TAXOLJ, TAXOTEREJ (лекарственная форма доцетаксела), 10-деацетиловые аналоги паклитаксела и 3'N-дебензоил-3'N-t-бутоксикарбонильные аналоги паклитаксела) может быть легко получен посредством способов, известных специалистам в данной области (см. также WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076; патенты США 5,294,637;5,283,253;5,279,949;5,274,137;5,202,448;5,200,534;5,229,529; и ЕР 590,267), или из различных коммерческих источников, включая, например, компанию Sigma Chemical Co., Сент-Луис, шт. Миссури (Т 7402 из Taxus brevifolia; либо Т-1912 из Taxus yannanensis). Следует понимать, что паклитаксел обозначает не только обычную химически доступную форму паклитаксела, но и аналоги (например, таксотер, как указывалось ранее) и конъюгаты паклитаксела (например, паклитаксел-PEG (полиэтиленгликоль), паклитаксел-декстран либо паклитаксел-ксилоза).- 17005923 Термин "таксан" также обозначает различные известные производные, как гидрофильные, так и гидрофобные. К числу производных таксана относятся, однако ими не ограничиваются, производные галактозы и маннозы, описанные в заявке WO 99/18113; пиперазиновые и другие производные, описанные в заявке WO 99/14209; производные таксана, описанные в заявках WO 99/09021 и WO 98/22451 и патенте США 5,869,680; 6-тиопроизводные, описанные в заявке WO 98/28288; сульфенамидные производные, описанные в патенте США 5,821,263; и производные таксола, описанные в патенте США 5,415,869. К ним дополнительно относятся пролекарства паклитаксела, включая, но не ограничиваясь,пролекарства, описанные в заявках WO 98/58927 и WO 98/13059; и патенте США 5,824,701. Термином "таксан" дополнительно обозначаются фармацевтически приемлемые соли таксана. В состав катионных липосом могут включаться смеси таксанов. Кроме того, в состав катионной липосомы, включающей таксан, может дополнительно входить одно или несколько дополнительных фармацевтически активных соединений, включая (однако не ограничиваясь) агент (например, кроме таксана), ингибирующий ангиогенез и противораковый агент. Таксаны могут выделяться из природных источников, могут синтезироваться химическим путем или закупаться из коммерческих источников. Способы химического синтеза известны в данной области техники, см., например, патент США 5,580,899. Ангиогенные факторы Ангиогенез стимулируется целым рядом биологических соединений. На куриной хорионаллантоисной мембране и роговице кроликов было показано, что ангиогенин является сильнодействующим ангиогенным фактором. Ангиотропин, фактор, выделенный из моноцитов периферической крови, является еще одним ангиогенным соединением, которое, как предполагают, играет роль в нормальном заживлении ран (Biochemistry, 27:6282 (1988. Другие факторы, вовлеченные в заживление ран, например, фибрин, также индуцируют васкуляризацию. Другим классом медиаторов ангиогенеза являются полипептидные ангиогенные факторы, такие как факторы роста, к числу которых относятся кислые и основные факторы роста фибробластов (FGF),трансформирующий фактор роста альфа (TGF-) и фактор роста, полученный из тромбоцитов (PDGF). Было показано, что каждая из этих молекул индуцирует ангиогенез in vivo. Другими подобными молекулами, демонстрирующими ангиогенную активность, являются: фактор роста эндотелия кровеносных сосудов (VEGF), некротический опухолевый фактор альфа (TNF-), трансформирующий фактор роста бета(TGF-) и гепаринсвязывающие факторы роста (HBGF). Наряду с полипептидными ангиогенными факторами были описаны другие ангиогенные факторы. Простагландины E1 и Е 2, представляющие собой ангиогенные факторы, полученные из липидов, являются хорошо известными атрактантами воспалительных клеток с ангиогенными свойствами 1982), J. Natl.Cancer Inst., 69:475-482). При испытаниях на куриной роговице либо на куриной хорионаллантоисной мембране никотинамид вызывает ангиогенную реакцию (Science, 236:843-845 (1987. Обнаружимые метки Катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут использоваться для доставки обнаружимых меток любого вида. Метки либо растворимы в липиде, использованном для получения липосом, либо же они растворимы или, по крайней мере, диспергируются в воде или водном растворе, например, водном солевом растворе или водном растворе декстрозы. Метка может быть радиоактивной меткой, флуоресцентной меткой, гистохимически либо иммуногистохимически обнаружимым веществом, обнаружимым красителем или любым веществом, обнаружимым посредством магнитнорезонансной визуализации. Метка может присутствовать в любом приемлемом количестве и может включаться в или входить в комплекс с самой липосомой или вместе с веществом, которое ингибирует или стимулирует ангиогенез. Дозирование Количество ангиогенного ингибитора или промотора, введенное пациенту (которым может быть любое животное с системой кровообращения и эндотелиальными клетками, которые подвергаются ангиогенезу), будет изменяться в зависимости от целого ряда факторов. Например, людям необходимо будет вводить значительно большие дозы, нежели мелким животным. Количество ангиогенного ингибитора или промотора будет зависеть от размера, возраста, пола, массы и состояния пациента, а также от сильнодействия вводимого вещества. Указав на значительную изменчивость дозировки, полагают, что специалисты в данной области, используя приведенное описание сущности изобретения, легко определят соответствующую дозу, вводя вначале крайне малые количества и постепенно увеличивая дозу до получения необходимых результатов. Несмотря на то, что величина дозы будет сильно изменяться, исходя из вышеописанных факторов, настоящее изобретение, в общем, позволяет вводить значительно меньшие количества любого вещества по сравнению с системами доставки, которые обеспечивают прицельную доставку в окружающие ткани, поскольку обеспечивает прицельную доставку в сами опухолевые клетки. Комплексы нуклеотидной последовательности/катионного липида В случае, когда нуклеотидные последовательности, включающие в себя последовательности ДНК и РНК, комбинируются с липидами, они образуют комплексы. Посредством подбора определенных коли- 18005923 честв нуклеотидных последовательностей и липидов, а также путем подбора конкретных липидов, можно получать комплексы, которые не образуют агрегатов in vitro. Общая информация, касающаяся получения таких комплексов, приведена в публикации WO 93/12240, опубликованной 24 июня 1993 года, которая включена в настоящее описание как ссылка с целью конкретного раскрытия и описания получения комплексов нуклеотидных последовательностей/липидов. В связи с настоящим изобретением, нуклеотидные последовательности разрабатываются для оказания конкретного воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки, а не на другие клетки и, в частности, не для воздействия на другие соответствующие эндотелиальные клетки, т.е. "дремлющие" эндотелиальные клетки. Последовательности ДНК,используемые в связи с настоящим изобретением, функционально связаны с промоторами и упомянутые промоторы конкретно разрабатываются таким образом, чтобы экспрессия нуклеотидной последовательности происходила лишь в среде ангиогенных эндотелиальных клеток. Во-первых, промотор может быть активируемым промотором, который может активироваться после того как последовательность была доставлена в ангиогенную эндотелиальную клетку. В соответствии с более предпочтительным вариантом промотор разрабатывается таким образом, чтобы он активировался в конкретной среде ангиогенной эндотелиальной клетки. В среде ангиогенной эндотелиальной клетки происходит ряд естественных явлений, которые не происходят в среде "дремлющей" эндотелиальной клетки. Пользуясь различиями между клетками двух упомянутых типов, промотор конкретно разрабатывается таким образом, чтобы он активировался лишь в присутствии ангиогенной эндотелиальной клетки. Транскрипция с экспрессирующих кластеров ДНК с помощью специфического промотора гена может быть ограничена простым или узким диапазоном типов клеток. Эндотелиальные клетки избирательно экспрессируют несколько белков, гены и промоторы которых были установлены. Было показано, что промоторы генов flt-1 и flk-1 рецепторов фактора роста эндотелия кровеносных сосудов (VEGF), промотор гена фактора фон Виллебранда (VWF) и промоторы семейства сцепленных генов управляют избирательной экспрессией в эндотелиальных клетках, будучи сцепленными с генно-инженерными конструкциями на основе репортерного гена. Перечисленные далее публикации приведены с целью раскрытия и описания промоторов, которые активируются в ангиогенных эндотелиальных клетках. Гатва (Hatva) и другие, (1996), Am. J. Path., 148:763-75; Строн (Strawn) и другие, (1996), Cancer Res.,56:3540-5; Миллуэр (Millauer) и другие, (1996), Cancer Res., 56:1615-20; Сато (Sato) и другие, (1996), Nature, 376:70-4; Озаки (Ozaki) и другие, (1996), Human Gene Therapy, 13:1483-90; Роник (Ronicke) и другие,(1996), Circulation Res., 79:277-85; Шима (Shima) и другие, (1996), J. Biol. Chem., 271:3877-8; МоришитаChem., 270:23111-8; Коронен (Korhonen) и другие, (1995), Blood, 86:1828-35. Другой полезный вариант подхода вовлекает экспрессию в эндотелиальных клетках тимидинкиназы (ТK) вируса простого герпеса с последующим лечением с помощью пролекарства ганцикловира (ganciclovir) (Озаки (Ozaki) (1996. В соответствии с альтернативным вариантом, нуклеотидная последовательность может быть антисмысловой последовательностью, которая будет связываться с последовательностями, которые должны быть экспрессированы в ангиогенной эндотелиальной клетке, блокируя тем самым экспрессию естественных последовательностей ангиогенной эндотелиальной клетки, которые необходимы для выживания этой клетки. Образование сгустка Еще одним аспектом настоящего изобретения, который может быть осуществлен с использованием липосом либо комплексов нуклеотидная последовательность/липид, является образование сгустков крови. В частности, липосома или комплекс, соответствующие настоящему изобретению, разрабатываются таким образом, чтобы они оказывали воздействие на ангиогенные эндотелиальные клетки, следствием которого является образование сгустков крови в ангиогенных кровеносных сосудах. Сгустки крови препятствуют прохождению потока питательных веществ и кислорода в остальную часть сосуда, следствием чего является гибель сосуда и окружающей ткани. Основная концепция образования сгустков в системе кровеносных сосудов опухоли с целью ликвидации нежелательной опухоли была реализована с помощью целенаправленной доставки антител в сосудистую сеть опухоли. Настоящее изобретение может обеспечить достижение лучших результатов с помощью катионных липидов, которые включают агент, стимулирующий тромбогенные каскады. Например, катионные липосомы, соответствующие настоящему изобретению, могут конструироваться таким образом, чтобы включать человеческий тканевый фактор (TF), который является основным инициирующим белком тромбообразовательных каскадов (каскадов свертывания крови). Клетки опухоли зависят от кровоснабжения. Местное нарушение сосудистой сети опухоли повлечет за собой лавиноподобную гибель клеток опухоли. Эндотелий сосудов опухоли находится в непосредственном контакте с кровью. Сами опухолевые клетки, однако, находятся вне кровотока и оказываются большей частью, почти недоступными для многих материалов, введенных в систему кровообращения. Этот аспект, а также другие аспекты настоящего изобретения срабатывают особенно хорошо в том смысле, что клетками-мишенями оказываются ангиогенные эндотелиальные клетки, которые сами не трансформируются, т.е. являются теми клетками, которые не подвергаются мутациям, наделяющим их устойчивостью к лечебному воздействию. Опухолевые клетки подвергаются значительным мутациям и- 19005923 такие мутации часто наделяют эти клетки устойчивостью к лечебному воздействию. Результаты, достигнутые в отношении уменьшения размеров опухолей посредством прицельной доставки антител, сообщаются в работах следующих авторов: Барроуз (Burrows) и Торп (Thorpe), (1993), Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 90:8996-9000; и Хуанг (Huang) и другие, (1997), Science, 275:547-550. С целью осуществления образования сгустков в связи с настоящим изобретением, предпочтение отдается образованию комплекса ДНК/катионный липид. В состав упомянутого комплекса будет входить ДНК, кодирующая белок, например, человеческий тканевый фактор, который является основным инициирующим рецептором тромбообразовательных каскадов (каскадов свертывания крови). Ген, кодирующий тканевый фактор предпочтительно функционально связан с промотором, который активируется в среде ангиогенной эндотелиальной клетки и не активируется в среде "дремлющей" эндотелиальной клетки. Таким образом, катионные липиды комплекса обеспечат его соединение с ангиогенными эндотелиальными клетками. В последующем комплекс попадет в ангиогенную эндотелиальную клетку с дальнейшей экспрессией ДНК комплекса. Экспрессированный белок инициирует каскад свертывания крови. После образования в кровеносном сосуде сгустков крови дальнейшая подача кислорода и питательных веществ к окружающим опухолевым клетками прекратится. В дальнейшем опухолевые клетки погибнут. Для инициирования процесса образования сгустков могут также использоваться разновидности человеческого тканевого фактора, например, усеченный человеческий тканевый фактор (tTF). Генетический материал, кодирующий tTF и другие факторы, известен (смотри упоминавшуюся ранее работу Хуанга(Huang) и других, а также ссылки на публикации, приведенные в этой работе). Способы уменьшения атеросклеротических бляшек Настоящим изобретением дополнительно предоставляются способы уменьшения атеросклеротических бляшек у млекопитающего посредством введения упомянутому млекопитающему композиции, в состав которой входят катионные липиды и вещество, уменьшающее ангиогенез, и предоставления упомянутой композиции возможности соединения с ангиогенными эндотелиальными клетками ангиогенного кровеносного сосуда в течение периода времени и таким образом, что упомянутая композиция проникает в ангиогенные эндотелиальные клетки, где упомянутое вещество осуществляет уменьшение ангиогенеза и где следствием уменьшения ангиогенеза оказывается уменьшение образования атеросклеротических бляшек. Вещества, ингибирующие ангиогенез, подробно обсуждаются в этом описании. Термин "атеросклероз" относится к числу хорошо понимаемых в данной области и обозначает заболевание крупных и средних артерий, следствием которого является прогрессирующее накопление в интиме гладких мышечных клеток и липидов. Постоянно растущие поражения (бляшки) распространяются на другие слои стенки артерии и сужают просвет. Термин "уменьшение атеросклеротических бляшек", использованный в настоящем описании, обозначает, что размер атеросклеротической бляшки или поражения уменьшается на как минимум приблизительно 10%, более предпочтительно на как минимум приблизительно 25%, более предпочтительно на как минимум приблизительно 50%, еще более предпочтительно на как минимум приблизительно 75%, еще более предпочтительно на как минимум приблизительно 90% или более, в случае введения соответствующей настоящему изобретению катионной липосомы, содержащей ингибитор ангиогенеза, млекопитающему, имеющему такое поражение, по сравнению с размером атеросклеротической бляшки у контрольного млекопитающего, которому была введена катионная липосома, не содержащая антиангиогенного агента. В некоторых вариантах осуществления, атеросклеротические бляшки полностью исчезают. Соответственно, для использования в способах уменьшения атеросклеротических бляшек у особи, "терапевтически эффективным количеством" или "эффективным количеством" вещества, ингибирующего или уменьшающего ангиогенез, является количество, которое, при введении особи, уменьшает размер атеросклеротической бляшки на как минимум приблизительно 10%, более предпочтительно на как минимум приблизительно 25%, более предпочтительно на как минимум приблизительно 50%, еще более предпочтительно на как минимум приблизительно 75%, еще более предпочтительно на как минимум приблизительно 90% или более, по сравнению с размером атеросклеротической бляшки, образовавшейся у контрольного субъекта, которому упомянутое вещество не вводилось. Уменьшилась ли атеросклеротическая бляшка, можно определить рентгенографическим путем, используя любой известный способ, включая способы, описание которых приведено в патенте США 5,807,536; посредством вазографии, когда катетер вводится в кровеносный сосуд, а для визуализации упомянутого кровеносного сосуда используют контрастное вещество, например, краситель на основе йода; и визуализацией, используя внутрисосудистый ультразвуковой зонд. В экспериментах на животных для определения уменьшения размера бляшек визуально проверяли срезы кровеносного сосуда. См.,например, Мултон (Moulton) и другие, (1999), Circulation, 99:1726-1732. В некоторых вариантах осуществления результатом применения способов, соответствующих настоящему изобретению, является ослабление одного или нескольких последствий атеросклероза. Соответственно, настоящее изобретение предоставляет способ ослабления болезненного состояния, связанного с атеросклерозом, включая, однако не ограничиваясь, ишемическую болезнь сердца, инфаркт миокарда, рестеноз, апоплексию и заболевание периферических кровеносных сосудов. Было ли ослаблено одно или несколько из упомянутых болезненных состояний, может определяться посредством обычных спо- 20005923 собов оценки, включая, однако не ограничиваясь, электрокардиографическое определение и другие способы, традиционно применяемые в данной области техники. Способы уменьшения атеросклеротических бляшек, соответствующие настоящему изобретению,пригодны для предотвращения, ингибирования или снижения вероятности повторного появления (повторного образования) бляшек, которые были удалены с помощью способа, соответствующего настоящему изобретению, или другим способом, например, посредством пластической операции на сосудах с помощью баллонного катетера либо коронарного шунтирования. Соответствующим образом, в некоторых вариантах осуществления, упомянутые способы включают этапы удаления склеротических бляшек из кровеносных сосудов пациента и введения пациенту терапевтически эффективного количества композиции, в состав которой входит катионная липосома и активный ингредиент, ингибирующий ангиогенез. Упомянутая композиция, в состав которой входит катионная липосома и активный ингредиент, ингибирующий ангиогенез, может вводиться перед, во время либо после удаления бляшек у пациента. Любая из катионных липосом или лекарственная форма, в состав которой входит катионная липосома, описанная ранее, в сочетании с любых известным ингибитором(-ами) ангиогенеза, включая описанные в этом описании, могут использоваться в способах уменьшения атеросклеротических бляшек. Ингибитор ангиогенеза-катионный липид могут вводиться в состав лекарственной формы вместе с фармацевтически приемлемым наполнителем. Фармацевтически приемлемые наполнители известны в данной области техники и достаточно полно описаны, например, в Ремингтон (Remington): The Science andPractice of Pharmacy, (1995) или самое последнее издание, Mack Publishing Co., Easton, Пенсильвания. Экспериментальные модели ангиогенеза Настоящее изобретение было облегчено использованием грызунов для моделирования ангиогенеза. Хронические воспалительные заболевания, например, астма и бронхит, индуцируют реконструкцию тканей и сосудов в слизистой дыхательных путей. Для изучения патогенеза хронических воспалительных заболеваний дыхательных путей была использована модель, где хроническое воспаление и тканевая реконструкция происходят в трахеях крыс и мышей. Ангиогенез развивается в слизистой дыхательных путей как результат инфицирования Mycoplasma pulmonis. На этой модели микроорганизмы Mycoplasmapulmonis вызывают хроническую инфекцию эпителия трахеи и бронхов. Слизистая дыхательных путей крыс, инфицированных М. pulmonis, имеет несколько четко выраженных патологических изменений: 1) утолщение эпителия и собственной пластинки; 2) изменения в клеточном составе эпителия; 3) ангиогенез; 4) повышенная чувствительность ангиогенных сосудов к медиатору воспаления Р в отношении просачивания плазмы; 5) индуцированное веществом Р просачивание из капилляров, а также из венул; и 6) повышенное число рецепторов вещества Р (рецепторы NK1) на эндотелиальных клетках капилляров. На этой модели ангиогенез стимулируется хроническим воспалением и кровеносные сосуды более восприимчивы к медиаторам воспаления. Исследования с перфузией лектинов для окрашивания поверхности эндотелиальных клеток просвета сосудов позволили установить степень ангиогенеза у крыс после инфицирования М. pulmonis. В слизистой трахеи инфицированных крыс наблюдаются многочисленные капилляроподобные сосуды, и в этих сосудах наблюдается просачивание после интравенозного введения медиатора воспаления Р. У мышей М. pulmonis вызывает острое воспаление легких, достигающее максимума через 6-9 дней после инокуляции с последующим хроническим инфицированием дыхательных путей. Реакция мышей на инфицирование М. pulmonis находится в сильной зависимости от линии: например, у мышей линии С 3 Н наблюдается более высокая смертность и большее снижение цитокинного некротического опухолевого фактора-, нежели у мышей линий C57BL. В дыхательных путях мышей, инфицированных М. pulmonis, описывались некоторые аспекты реконструкции слизистой, например, гиперплазия эпителия. У мышей линии C57BL/6, инфицированных посредством интраназальной инокуляции М. pulmonis, резко возрастает количество кровеносных сосудов в трахее, явно благодаря росту новых капилляров. У мышей этой линии сосудистая сеть слизистой трахеи более не является плоской; мелкие сосуды растут перпендикулярно плоскости слизистой. На участках повышенного наличия кровеносных сосудов обнаруживаются многочисленные, явно сосудистые, отростки. Таким образом, инфицирование мышей линииC57BL/6 М. pulmonis вызывает хроническое воспаление дыхательных путей с пролиферацией эндотелия,реконструкцией сети кровеносных сосудов и ангиогенезом. В противоположность этому, у мышей линии С 3 Н/HeN, инфицированных М. pulmonis посредством интраназальной инокуляции, увеличивается число эндотелиальных клеток кровеносных сосудов в слизистой трахеи, в то время как количество кровеносных сосудов не изменяется. Увеличение кровеносных сосудов обусловлено не увеличением длины или ростом числа сосудов, но увеличением диаметра сосудов и это увеличение размера сосудов обусловлено удвоением количества эндотелиальных клеток. Размер отдельных эндотелиальных клеток в инфицированных трахеях существенно не увеличивается. Уровень циркулирующих антител к М. pulmonis у мышей двух упомянутых линий остается одинаковым. Таким образом, инфицирование мышей линии СЗН/HeN М. pulmonis вызывает хроническое инфицирование дыхательных путей с реконструкцией сети кровеносных сосудов и пролиферацией эндотелия, однако без значительного увеличения количества сосудов, в то время как у мышей линии C57BL/6 вызывает пролиферацию эндотелиальных клеток и образование новых кровеносных сосудов.- 21005923 На второй модели, ангиогенез происходит в опухолях, возникающих вследствие трансгенной экспрессии онкогенного вируса SV40. Модель трансгенных мышей "Rip-Tag" предоставляет возможность изучения фенотипических изменений в ангиогенных эндотелиальных клетках в ходе четко охарактеризованного процесса развития ткани от нормального состояния до опухоли. На модели трансгенных мышей"RIP-Tag" онкоген вируса SV-40, супер-Т-антиген (Tag), стимулируется областью промотора инсулина крыс (RIP). При введении в геном грызунов, эта генно-инженерная конструкция индуцирует экспрессиюTag, в частности, в островковых -клетках поджелудочной железы, которые находятся на приблизительно 400 островках, рассеянных в объеме поджелудочной железы. Все островки поджелудочной железы у этих мышей экспрессируют Tag, однако нормальное развитие этих островков продолжается до достижения приблизительно 6-недельного возраста. После этого приблизительно 50% этих островков становятся гиперпластическими. Однако из числа этих гиперпластических островков к приблизительно 10 недельному возрасту небольшая их доля (5%) превращается в опухоли. Это узкое место онкогенеза, повидимому, преодолевается, когда островок приобретает способность к индуцированию ангиогенеза: в связи с этим упомянутая фаза онкогенеза получила название "ангиогенного переключателя". Подобный ангиогенный выключатель существует, по-видимому, также и в других моделях онкогенеза у грызунов, а также у некоторых опухолей человека. Таким образом, модель "RIP-Tag" предоставляет четко охарактеризованные рамки для изучения развития ангиогенеза в опухолях. Примеры Приведенные далее примеры предназначены для того, чтобы предоставить рядовым специалистам в данной области полное раскрытие и описание того, каким образом получать катионные липосомы и осуществлять методику использования этих липосом, и не предназначены для ограничения объема того, что считается изобретением. Были предприняты усилия для обеспечения точности относительно использованных цифр (т.е. количества, температуры и т.д.), однако следует учитывать вероятность экспериментальных погрешностей и отклонений. Если не указано иное, части являются массовыми частями, молекулярная масса является взвешенным средним значением молекулярной массы; температура указана в градусах Цельсия; давление равно либо близко к атмосферному. Следует обратить внимание на то, что каждый из нижеследующих Примеров представляет ряд экспериментов, которые осуществлялись с использованием упомянутых процедур и обобщением результатов. Специалистам в данной области техники будет понятно, что не каждый эксперимент давал положительные результаты. Однако представленное далее, как полагают, точно отображает полученные результаты. Пример 1. Распределение катионных липосом в организме нормальных мышей. Липосомы и/или плазмидную ДНК метили и определяли клеточное распределение меченых комплексов в разное время после внутривенного впрыскивания. Эксперименты осуществляли на апатогенных мышах (масса тела 20-25 г) обоих полов. Небольшие униламеллярные катионные липосомы-пузырьки получали из катионного липида,DDAB или DOTAP и нейтрального липида, DOPE или холестерина, меченых техасом красным или красным флуоресцентным карбоцианиновым красителем DiI или CM-DiI, и, в некоторых случаях, объединяли с плазмидной ДНК, в состав которой входил репортерный ген, например, люцифераза или галактозидаза. Эндотелиальные клетки метили с помощью флуоресцентного растительного лектина флуоресцеина - Lycopersicon essculentum. Моноциты/макрофаги метили с помощью флуоресцентных гранул (компания Duke, 500 нм). Ядра клеток метили с помощью красителей DAPI, YO-PRO или Hoechst 33342. Флуоресцентные липосомы или комплексы липосома/ДНК, включавшие 10-60 мкг ДНК в объеме до 300 мкл, вводили ненаркотизированным мышам через хвостовую вену. В ходе некоторых экспериментов, после упомянутых комплексов впрыскивали 500 нм флуоресцентных гранул. Через определенный промежуток времени (от 5 мин до 24 ч) животных наркотизировали пентобарбиталом натрия, после чего через левый желудочек пропускали вначале фиксатив (1% параформальдегида в забуференном фосфатом физиологическом растворе), затем флуоресцентный лектин для мечения эндотелиальной поверхности сосудистой сети. После завершения перфузии ткани удаляли и препарировали в целом или же с помощью вибратома или микротома готовили гистологические срезы. Наряду с этим, некоторые образцы обрабатывали для электронного микроскопирования. Ткани исследовались с помощью эпифлуоресцентного либо конфокального микроскопа. Некоторые образцы, кроме того, исследовались с помощью просвечивающего электронного микроскопа. Результаты. У мышей, проверявшихся через 5 мин-24 ч после инъекции, наибольшее количество липосом либо комплексов липосома/ДНК, меченных CM-DiI или DiI, обнаруживали в легких. Далее они были наиболее многочисленными в эндотелиальных клетках альвеолярных капилляров. Флуоресценция в альвеолярных капиллярах равномерно распределялась во всех долях легких. Наряду с этим, некотораяCM-DiI или DiI флуоресценция наблюдалась во внутрисосудистых моноцитах/макрофагах. Наряду с легкими, печень и селезенка имели наибольшее количество меченных липосом или комплексов. В этих органах участки CM-DiI или DiI флуоресценции совпадали с местонахождением флуо- 22005923 ресцентных гранул. В печени CM-DiI или DiI флуоресценция и гранулы находились в клетках Купфера. В селезенке они находились в макрофагах. В яичнике также имелись кровеносные сосуды, интенсивно меченные CM-DiI или DiI-меченными липосомами или комплексами. В частности, наблюдалось, что эндотелиальные клетки в ангиогенных кровеносных сосудах крупных фолликул и желтого тела мышиного яичника жадно поглощали CM-DiI или DiI-меченные DDAB:xoлестериновые липосомы или комплексы липосома/ДНК после интравенозного впрыскивания. Эти наблюдения документально подтверждены фотографиями (фиг. 1). Другие кровеносные сосуды яичника включали в себя относительно небольшое количество меченых комплексов. На основании этих результатов был сделан вывод о том, что ангиогенные эндотелиальные клетки предпочтительно поглощают липосомы и комплексы липосома/ДНК, т.е., что катионные липосомы, использованные в этих экспериментах, с намного большей вероятностью связываются с эндотелиальными клетками, подвергающимися ангиогенезу, по сравнению с соответствующими эндотелиальными клетками, не подвергающимися ангиогенезу. Меченные липосомы или комплексы присутствовали также в очень больших количествах в эндотелиальных клетках высоких эндотелиальных венул (HEV) лимфатических узлов и пейеровых бляшек тонкого отдела кишечника, в то время как в эндотелиальных клетках капилляров этих лимфоидных органов их число было довольно незначительным. Меченные липосомы или комплексы были также многочисленны в эндотелиальных клетках капилляров передней доли гипофиза, миокарда, диафрагмы, коркового вещества надпочечника и жировой ткани. Меченные липосомы или комплексы были обильно представлены в моноцитах/макрофагах, прикрепленных к венулам мочевого пузыря, матки и фаллопиевой трубы. В некоторых венах находилось большое количество меченных моноцитов/макрофагов. Наряду с этим, меченной была небольшая часть эндотелиальных клеток артериол, капилляров и венул в этих органах. Относительно небольшое количество меченых липосом или комплексов связывалось с капиллярными эндотелиальными клетками задней доли гипофиза, мозгового вещества почек, ворсинок кишечника(подвздошная кишка), поджелудочной железы и мозгового вещества надпочечника. Меченые липосомы или комплексы почти отсутствовали в эндотелиальных клетках головного мозга, щитовидной железы,коркового вещества почек, островков поджелудочной железы, трахеи или бронхов, за исключением отдельных моноцитов/макрофагов. Выводы. Лекарственная форма, представлявшая собой CM-DiI или DiI-меченные DDАВ:холестериновые липосомы или комплексы липосома/ДНК, использованные в этих исследованиях, целенаправленно попадала в клетки трех основных типов: эндотелиальные клетки, макрофаги и моноциты. Поглощение липосом или комплексов было органо- либо сосудо-специфичным. Большинство из них поглощалось капиллярными эндотелиальными клетками легких и макрофагами печени и селезенки. Прицельная доставка осуществлялась также в капиллярные эндотелиальные клетки яичника, передней доли гипофиза, сердца, диафрагмы, коркового вещества надпочечника и жировой ткани. Кровеносные сосуды, поглощавшие липосомы или комплексы в яичниках, являлись областями ангиогенеза. Наряду с этим, целенаправленная доставка осуществлялась в высокие эндотелиальные венулы лимфатических узлов и пейеровы бляшки кишечника. Целенаправленная доставка в эндотелиальные клетки или макрофаги других органов была не столь частой и более вариабельной. Кровеносные сосуды головного мозга, щитовидной железы, коркового вещества почек, трахеи и бронхов целенаправленной доставке не подвергались. Наряду с этим, эксперименты документально подтвердили то, что липосомы или комплексы не просачивались из сосудистой сети в большинство органов. Несмотря на то, что они обнаруживались во внесосудистых клетках селезенки, имеющей кровеносные сосуды с прерывистым эндотелием, они не проникали в другие органы. И, наконец, жадное поглощение катионных липосом и комплексов липосома/ДНК кровеносными сосудами крупных фолликул яичника и желтого тела указывает на то, что эндотелиальные клетки ангиогенных кровеносных сосудов были участками предпочтительного поглощения. Пример 2. Поглощение DDАВ:холестериновых липосом или комплексов липосома/ДНК в организме RIP-Tag5 мышей. Результаты экспериментов примера 1 показали, что ангиогенные кровеносные сосуды фолликул и желтого тела яичника жадно поглощают катионные липосомы и комплексы липосома/ДНК. Соответственно, был проведен эксперимент по определению, жадно ли поглощают катионные липосомы или комплексы липосома/ДНК эндотелиальные клетки ангиогенных кровеносных сосудов опухолей. Использовались модели опухолей на трансгенных мышах RIP-Tag5. См., Ганахан (Hanahan), (1985),Nature, 315:115-22; и Ганахан (Hanahan) и Фолкмен (Folkman), (1996), Cell, 86:353-64. На этой модели,обозначенной RIP-Tag, онкоген вируса SV-40, супер-Т-антиген (Tag), стимулируется областью промотора инсулина крыс (RIP). При введении в геном грызунов, эта генно-инженерная конструкция индуцирует экспрессию Т-антигена, в частности, в -клетках островков поджелудочной железы. Одна важная особенность этой модели заключается в том, что одновременно в каждой RIP-Tag5 мыши присутствуют различные стадии развития опухоли, и, следовательно, различные стадии ангиоге- 23005923 неза. Несмотря на то, что все 300-400 островков экспрессируют Т-антиген, вначале все островки развиваются нормально. Однако в возрасте 6 недель почти половина из них оказывается гиперпластичной, и из этого числа к возрасту 10 недель небольшая часть превращается в опухоли. Онкогенез, по-видимому,совпадает с началом ангиогенеза. Это превращение было обозначено как "ангиогенный переключатель". Фолкмен (Folkman) и другие, (1989), Nature, 339:58-61; и Ганахан (Hanahan) и Фолкмен (Folkman),(1996), Cell, 86:353-64. Подобный ангиогенный выключатель существует, по-видимому, также и в других моделях онкогенеза у грызунов, а также у некоторых опухолей человека. Ганахан (Hanahan) и ФолкменDDАВ:холестериновые липосомы вводились внутривенно одной RIP-Tag5 мыши, имеющей опухоль, в то время как другой RIP-Tag5 мыши вводили CM-DiI или DiI-меченые DDАВ:холестериновые:ДНК комплексы. Распределение липосом или комплексов в ангиогенных кровеносных сосудах опухолевых клеток островков поджелудочной железы исследовали через 24 ч после впрыскивания и сравнивали с распределением в сосудах островков поджелудочной железы нормальных мышей. Результаты. Было сделано два новых наблюдения: (1) липосомы или комплексы поглощались эндотелиальными клетками ангиогенных кровеносных сосудов без просачивания через эндотелий, и (2) поглощение липосом или комплексов эндосомами было большим в эндотелиальных клетках ангиогенных кровеносных сосудов, нежели в эндотелиальных клетках нормальных кровеносных сосудов островков поджелудочной железы. (На фиг. 2 представлен образец ткани). Выводы. Этот эксперимент дал результаты, соответствующие предпочтительному поглощениюDDАВ:холестериновых липосом или комплексов липосома/ДНК ангиогенными кровеносными сосудами опухоли. Перед повторным проведением эксперимента (1) была усилена интенсивность флуоресценции комплексов липосома/ДНК, (2) были усовершенствованы методы локализации областей поглощения катионных липосом и комплексов липосома/ДНК в опухолях RIP-Tag мышей; и (3) было проведено более подробное изучение структуры и функционирования ангиогенных кровеносных сосудов в опухолевых клетках островков поджелудочной железы RIP-Tag5 мышей. Пример 3. Поглощение комплексов DОТАР:холестериновые липосомы:ДНК в организме RIP-Tag2 мышей. Цель. Интенсивность флуоресцирования комплексов липосома/ДНК усиливали посредством использования техаса красного-DHPE вместо DiI; был усовершенствован способ получения поджелудочных желез RIP-Tag2 мышей для определения мест поглощения флуоресцентных комплексов катионная липосома/ДНК; были изучены структура и функции ангиогенных кровеносных сосудов в опухолевых клетках островков поджелудочной железы RIP-Tag2 мышей. С этими усовершенствованиями были осуществлены эксперименты типа, описанного в примере 2, по определению, каким образом поглощались катионные липосомы и комплексы липид/ДНК. Методы. Получали катионные DOTAP-холестериновые небольшие униламеллярные липосомыпузырьки, меченные техасом красным-DHPE. Комплексы липосома/ДНК получали с общим соотношением липид:ДНК 24:1 (нмоль/мкг) в 5% растворе глюкозы, используя 60 мкг плазмидной ДНК в объеме 300 мкл. Комплексы (300 мкл) впрыскивали в хвостовые вены ненаркотизированных трансгенных RIP1Tag2 C57BL/6 мышей и ненаркотизированных нормальных C57BL/6 мышей. Через 4 ч после впрыскивания комплексов мышей наркотизировали посредством внутрибрюшинного впрыскивания нембутала в дозе 50 мг/кг. Сосудистую сеть фиксировали пропусканием 1% раствора параформальдегида через восходящую аорту, а поверхность просвета сосудистой сети окрашивали пропусканием зеленого флуоресцентного лектина, Тарстон (Thurston) и другие, (1996), Am. J. Physiol,271:H2547-2562. Тканевые препараты в целом или гистологические срезы заливали векташилдом (Vectashield), и сосуды исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа Zeiss Axiophot либо конфокального микроскопа Zeiss LSM 410, снабженных криптоново-аргонным лазером и оптимизированными фотоэлектронными умножителями. Изображение регистрировалось на пленке Kodak Ektachrome (ASA 400) либо в виде цифровых конфокальных видеофайлов. Результаты. Эксперимент четко показал жадное поглощение меченых техасом красным комплексовDОТАР:холестерин:ДНК ангиогенными эндотелиальными клетками в опухолях поджелудочной железыRIP1-Tag2 мышей. Поглощение кровеносными сосудами опухолей намного превышало поглощение этих комплексов соответствующими эндотелиальными клетками нормальных островков поджелудочной железы (сравни фиг. 3 и 4). Опухоли легко отличались от прилегающей ткани, поскольку их кровеносные сосуды были интенсивно мечены флуоресцентными липосомными комплексами красного цвета. Геометрия сосудистой сети опухолей была изменчива и колебалась в пределах от типичной для нормальных островков до плотной,извилистой, анастомозной сети синусоидальных кровеносных сосудов, заметно больших и плотнее упакованных, нежели в нормальных островках. В последнем случае сосудистая сеть напоминала сосудистую сеть желтого тела. Интенсивность мечения кровеносных сосудов опухоли грубо соотносилась с размером опухоли. Наибольшие опухоли имели наиболее интенсивное мечение.- 24005923 Некоторые кровеносные сосуды в опухолях от малого до среднего размера имели короткие и толстые, фокусные, аневризмоподобные выступы. Эти участки были особенно заметными благодаря присутствию необычайно многочисленных точек, меченых техасом красным, которые, предположительно,были эндосомами. Мечение этих участков техасом красным было более интенсивным, нежели мечение прилегающих кровеносных сосудов. Эти структуры могли быть капиллярными отростками. Подобные структуры не обнаруживались в крупных опухолях, имевших плотную сложную сосудистую сеть, где кровеносные сосуды были однообразно интенсивно мечены. Признаков проникновения меченых техасом красным комплексов в опухоли обнаружено не было. Комплексов, меченых техасом красным, не наблюдалось также в скоплениях внесосудистых эритроцитов в опухолях. Интенсивное мечение опухолевой сосудистой сети напоминало мечение желтых тел яичника на начальном этапе их развития. Пример 4. Поглощение катионных липосом и комплексов липосома/ДНК ангиогенными кровеносными сосудами в опухолях и на участках хронического воспаления. Цель. Эксперименты такого типа, которые описаны в Примере 3, проводились для расширения объема наблюдений на другие модели ангиогенеза. Эти эксперименты также были направлены на разрешение вопроса о том, обязательно ли присутствие ДНК для целенаправленного попадания катионных липосом в ангиогенные кровеносные сосуды. Для определения предпочтительности поглощения ангиогенными кровеносными сосудами DОТАР:холестериновых липосом либо комплексов липосома:ДНК использовали четыре модели ангиогенеза на животных. Модели. Опухолевая модель RIP1-Tag2. Полученные C57BL/6 мыши были фенотипированы при рождении посредством проведения анализа с использованием полимеразно-цепьевой реакции. Описание мышиной модели было приведено ранее. Опухолевая модель HPV. Полученные трансгенные HPV (вирус папилломы человека) мыши были фенотипированы при рождении посредством проведения анализа с использованием полимеразноцепьевой реакции. В качестве контроля использовали нетрансгенных однопометных животных. На этой модели онкоген вируса папилломы человека стимулируется областью промотора кератина 14. При введении в геном грызунов эта генно-инженерная конструкция индуцирует экспрессию HPV непосредственно в эпидермальных клетках. У всех трансгенных мышей на коже верхней части грудной клетки и ушей развивается дисплазия, сопровождающаяся ангиогенезом; у небольшой части развиваются опухоли. Модель инфекции Mycoplasma pulmonis на мышах. Результатом этой инфекции является хроническое воспаление дыхательных путей, сопровождающееся ангиогенезом слизистой дыхательных путей. После наркотизирования (внутрибрюшинная инъекция 87 мг/кг кетамина и 13 мг/кг ксилазина) апатогенным 8-недельным мышам (самцам и самкам) линий С 3 Н/HeN или C57BL/6 (обе линии от компанииCharles River) интраназально вводили 3 х 104 колониеобразующих единиц Mycoplasma pulmonis (штамм 5782 С-UAB CT7) в объеме 50 мкл. Апатогенные мыши служили в качестве контроля и им вводили стерильную питательную среду. Инфицированных и контрольных мышей содержали в раздельных клетках в барьерных условиях. Сывороточные уровни антител к М. pulmonis определяли в конце эксперимента. Мышей исследовали через 1-8 недель после инфицирования. Модель инфекции Mycoplasma pulmonis на крысах. Как и в случае с мышами, эта инфекция вызывает хроническое заболевание дыхательных путей, одной из отличительных особенностей которого является ангиогенез в слизистой дыхательных путей. После наркотизирования (внутрибрюшинная инъекция 40 мг/кг кетамина и 8 мг/кг ксилазина) апатогенным 8-недельным крысам-самцам линии Wistar (от компании Charles River) в течение трех последовательных дней интраназально вводили Mycoplasma pulmonis(штамм 5782 С 4) в объеме 200 мкл. Апатогенные крысы, которым была введена питательная среда, служили в качестве контроля. Инфицированных и контрольных крыс содержали в раздельных клетках в барьерных условиях. Сывороточные уровни антител к М. pulmonis и другим патогенам определяли в конце эксперимента (Microbiological Associates, Bethesda, шт. Мериленд). Методы. Катионные DОТАР:холестериновые липосомы, меченные техасом красным:DНРЕ, получали, как описано в примере 3. Липосомы впрыскивали в хвостовую вену мышей в дозе 360 нмоль общего липида в объеме 100 мкл в 5% растворе глюкозы. Крысам впрыскивание производили в бедренную вену. Комплексы липосома/ДНК получали при общем соотношении липид:ДНК 24:1 в 5% растворе глюкозы, используя 60 мкг плазмидной ДНК в 200-300 мкл. Липосомы или комплексы (200-300 мкл) вводили в хвостовую вену ненаркотизированных RIP-Tag2, HPV либо М. pulmonis-инфицированных мышей. В качестве контроля, в зависимости от потребности, использовали нетрансгенных либо апатогенных животных. Через 20 мин или 4 ч после впрыскивания, мышей или крыс наркотизировали посредством внутрибрюшинной инъекции нембутала в дозе 50 мг/кг. Сосудистую сеть фиксировали пропусканием 1% раствора параформальдегида через восходящую аорту, а поверхность просвета сосудистой сети окрашивали пропусканием зеленого флуоресцентного лектина, Тарстон (Thurston) и другие, (1996), Am. J. Physiol.,271:H2547-2562. Тканевые препараты в целом или гистологические срезы, полученные с помощью виб- 25005923 ратома, заливали векташилдом (Vectashield), и сосуды исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа компании Zeiss либо конфокального микроскопа. Количественное определение поглощения флуоресцентных липосом или комплексов осуществляли с помощью конфокального микроскопа. Вкратце, ряд из 12 конфокальных изображений, размещенных с интервалом 2,5 мкм по фокусной (z) оси, собирали в ростральной области трахеи в каналах флуоресцеина и техаса красного с помощью 20xNA 0,6 линз (компания Zeiss) при стандартных настройках размера конфокального узкодиафрагменного коллиматора, коэффициента усиления фотоэлектронного умножителя и мощности лазера. Из ряда изображений получали проекции, на которых были отдельно показаны сосуды (флуоресцеин-Z. esculentum) и липосомы (техас красный). С помощью программного обеспечения конфокального микроскопа на изображениях сосудов определяли участки площадью приблизительно 200 мкм 2, после чего определяли средний уровень флуоресценции соответствующих участков на изображениях липосом. Фоновую интенсивность определяли посредством измерения флуоресценции на отдельных участках, прилегающих к сосудам. Измерения осуществляли на 25 сосудах на трахею и 4 трахеях на группу (n=4). Статистическую значимость различий определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Ткани, приготовленные для просвечивающего электронного микроскопирования, обрабатывали, как описывалось ранее, Макдональд (McDonald), (1994), Am. J. Physiol., 266:L61-L83. Вкратце, после перфузии первичного фиксатива (3% раствор глутаральдегида в 75 мМ какодилатного буфера, рН 7,1, плюс 1% раствор сахарозы, 4% раствор PVP (поливинилпирролидон), 0,05% раствор СаСl2 и 0,075% раствор Н 2 О 2) в течение 5 мин при комнатной температуре осуществляли перфузию вторичного фиксатива (3% раствор глутаральдегида в какодилатном буфере (75 мМ), в состав которого входил 0,05% раствор CaCl2, 1% раствор сахарозы и 4% раствор PVP) в течение 5 мин. Ткани фиксировались in situ в течение 1 ч при комнатной температуре, затем извлекались и выдерживались в течение ночи во вторичном фиксативе при температуре 4 С. Ткани нарезали с помощью бритвенного лезвия или же гистологические срезы получали с помощью микротома, подвергали постфиксированию в осмии (2% раствор OsO4 в 100 мМ какодилатного буфера, рН 7,4, в течение 18 ч при температуре 4 С), промывали в Н 2 О (18 ч при температуре 4 С) и окрашивали en bloc уранилацетатом (водный раствор, 37 С в течение 48 ч). После этого ткань обезвоживали ацетоном, инфильтровали и заливали эпоксидной смолой. С помощью ультрамикротома получали срезы, размещали их в однопазных решетках для образцов и исследовали с помощью электронного микроскопа Zeiss ЕМ-10. Результаты. Эксперименты показали, что меченные техасом красным DОТАР:холестериновые липосомы, при отсутствии ДНК, избирательно и прицельно попадали в ангиогенные эндотелиальные клетки опухолей RIP1-Tag2 мышей, подобно ранее полученным данным с мечеными техасом красным комплексама ООТАР:холестерин-ДНК и мечеными DiI комплексами DDАВ:холестерин-ДНК. Этот и последующие эксперименты на трансгенных RIP1-Tag2 мышах подтвердили, что поглощение катионных липосом ангиогеннымикровеносными сосудами гиперпластических островков и опухолей намного превосходило поглощение соответствующих нормальных кровеносных сосудов (фиг. 5, 6, 7 и 8). В некоторых кровеносных сосудах гиперпластических островков и небольших опухолей липосомы поглощались эндотелиальными клетками лишь на фокусных участках (фиг. 8), в то время как в более крупных опухолях поглощение было более генерализованным (фиг. 6). Полагают, что фокусные участки поглощения являются возможными областями роста новых кровеносных сосудов (фиг. 8). Благодаря этому свойству, катионные липосомы или комплексы липосома/ДНК обладают потенциалом практического применения по избирательной доставке веществ в ангиогенные эндотелиальные клетки. Желательно определить, обладают ли подобным свойством ангиогенных эндотелиальных клеток в опухолях эндотелиальные клетки на других участках патологического ангиогенеза. Для решения этого вопроса были поставлены эксперименты, в которых поглощение меченых техасом красным DОТАР:холестериновых липосом ангиогенными эндотелиальными клетками исследовали в трахеях мышей с инфекцией Mycoplasma pulmonis, которая вызывает хроническое воспаление дыхательных путей, одной из отличительных особенностей которого является ангиогенез (сравни фиг. 9 и 10). Было установлено,что ангиогенные эндотелиальные клетки на участках хронического воспаления являлись местами необычайно высокого поглощения катионных липосом (фиг. 10). В частности, кровеносные сосуды в трахеях мышей, инфицированных М. pulmonis, имели необычайно высокий уровень поглощения. Измерения,проведенные на ангиогенных кровеносных сосудах с помощью конфокального микроскопа показали, что поглощение у инфицированных мышей в 20-30 раз превышало поглощение у контрольных животных(фиг. 11). Уровень поглощения у некоторых ангиогенных кровеносных сосудов был в 100 раз большим. Результаты конфокальных и электронномикроскопических исследований ангиогенных эндотелиальных клеток мышей, инфицированных М. pulmonis, позволяют предположить, что катионные липосомы вначале связывались с (фиг. 12), а затем проникали внутрь эндосом (фиг. 13). Подобным же образом катионные липосомы жадно поглощались ангиогенными кровеносными сосудами в фолликулах и желтых телах яичников мышей, диспластической коже трансгенных HPV мышей и трахеях крыс с ангиогенезом, обусловленным инфицированием М. pulmonis.- 26005923 Выводы. Результаты этих экспериментов подтвердили, что катионные липосомы и комплексы липосома/ДНК предпочтительно и целенаправленно попадают в ангиогенные эндотелиальные клетки опухолей и участков хронического воспаления. Пример 5. Поглощение катионных липосом, содержащих паклитаксел, ангиогенными кровеносными сосудами на участках хронического воспаления. Мышей линии С 3 Н/HeN инфицировали Mycoplasma pulmonis, как описано в примере 4. Контролем служили апатогенные мыши. Инфицированных и контрольных мышей содержали в раздельных клетках в барьерных условиях. Через семь дней после инфицирования мышам внутривенно впрыскивали лекарственную форму, представлявшую собой небольшие униламеллярные липосомы, состоявшие из DOTAP: яичного РС:родамина DНРЕ:паклитаксела (молярное соотношение 50:47:1:2), в объеме 150 мкл (150 мкл инъекция в хвостовую вену 10 мМ раствора общего липида (включающего паклитаксел); общая доза 26 мкг паклитаксела на мышь). Через 20 мин после впрыскивания липосом, мышам внутривенно впрыскивали меченый флуоресцеином лектин Lycopersicon esculentum для окрашивания эндотелиальных клеток во всем теле. Сразу же после этого через сосудистую сеть мышей пропускали фиксатив, как описывалось в примере 4. Подобным образом катионные липосомы могли быть идентифицированы по флуоресценции красного цвета, а кровеносные сосуды могли быть идентифицированы по флуоресценции зеленого цвета. Количественное определение поглощения флуоресцентных липосом, содержащих паклитаксел, осуществляли посредством конфокального микроскопирования гистологических срезов, как описано в примере 4. Результаты. Исследование тканей апатогенных мышей показало, что катионные липосомы, содержащие паклитаксел, жадно поглощались эндотелиальными клетками кровеносных сосудов дыхательных путей в трахеях инфицированных мышей. Как показано на фиг. 14, в кровеносных сосудах трахей неинфицированных мышей наблюдалось незначительное поглощение. Результаты этих наблюдений подтвердили, что катионные липосомы, содержащие паклитаксел, обладают такими же самыми свойствами прицельной направленности, что и катионные липосомы без паклитаксела. Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано со ссылкой на конкретные варианты осуществления, специалистам в данной области техники следует понимать, что оно может подвергаться различным изменениям и могут вводиться различные эквивалентные замены без отступления от истинной сущности и объема изобретения. Наряду с этим, может осуществляться множество модификаций для приспособления конкретной ситуации, материала, композиции веществ, процесса, поэтапного процесса к предмету, сущности и объему настоящего изобретения. Все подобные модификации предполагаются в пределах объема настоящего изобретения, представленного в пунктах прилагаемой формулы изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ избирательного воздействия на ангиогенные эндотелиальные клетки, включающий этапы введения млекопитающему композиции, содержащей катионные липиды и таксан; и обеспечения упомянутой композиции возможности взаимодействия с ангиогенными эндотелиальными клетками ангиогенного кровеносного сосуда в течение такого периода времени и таким образом,что упомянутая композиция проникает внутрь ангиогенных эндотелиальных клеток. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что композицию вводят посредством впрыскивания в кровеносную систему, а также тем, что композиция обладает в крови двукратным или большим сродством к ангиогенным эндотелиальным клеткам по сравнению с соответствующими нормальными эндотелиальными клетками. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что сродство определяют на основании сравнения ангиогенной эндотелиальной клетки с неангиогенной эндотелиальной клеткой. 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что сродство определяют ex vivo. 5. Способ по п.2, отличающийся тем, что впрыснутая композиция обладает в крови десятикратным или большим сродством к ангиогенным эндотелиальным клеткам по сравнению с соответствующими нормальными эндотелиальными клетками, а также тем, что композиция содержит 5 мол.% или более катионных липидов, причем композицию впрыскивают интраартериально. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что композиция, содержащая катионные липиды и таксан,связана с липосомой. 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что таксан выбран из группы, включающей паклитаксел, доцетаксел, 10-деацетиловый аналог паклитаксела, 3'N-дебензоил-3'N-t-бутоксикарбонильный аналог паклитаксела, галактозное или маннозное производное таксана, пиперазиновое производное таксана, 6-тио или сульфенамидное производное таксана и таксан, связанный с гидрофобной составляющей. 8. Способ по п.1, отличающийся тем, что упомянутым таксаном является паклитаксел. 9. Катионная липосома, содержащая катионные липиды и- 27005923 таксан в двойном липидном слое липосомы, причем липосома, по существу, не содержит кристаллов таксана, и таксан, по существу, не выходит за пределы двойного липидного слоя. 10. Катионная липосома по п.9, дополнительно содержащая обнаружимую метку. 11. Катионная липосома по п.9, дополнительно содержащая водорастворимый таксан в водном компартменте липосомы. 12. Катионная липосома по п.9, отличающаяся тем, что таксаном является фармацевтически приемлемое производное. 13. Катионная липосома по п.9, отличающаяся тем, что таксаном является паклитаксел. 14. Катионная липосома по п.9, отличающаяся тем, что таксаном является доцетаксел. 15. Катионная липосома по п.9, отличающаяся тем, что липосома содержит менее чем приблизительно 20 мол.% таксана или производного таксана и больше чем приблизительно 20 мол.% катионного липида. 16. Катионная липосома по п.15, отличающаяся тем, что липосома содержит от приблизительно 2 мол.% до приблизительно 10 мол.% таксана и от приблизительно 40 мол.% до приблизительно 98 мол.% катионного липида. 17. Катионная липосома по п.9, отличающаяся тем, что упомянутая катионная липосома дополнительно содержит нейтральный липид. 18. Катионная липосома по п.17, отличающаяся тем, что липосома содержит от приблизительно 2 мол.% до приблизительно 10 мол.% таксана, от приблизительно 40 мол.% до приблизительно 98 мол.% катионного липида и от приблизительно 2 мол.% до приблизительно 50 мол.% нейтрального липида. 19. Катионная липосома по п.18, отличающаяся тем, что нейтральный липид выбран из группы,включающей фосфатидилхолин (PC), фосфатидилэтаноламин (РЕ) и смесь PC и РЕ. 20. Катионная липосома по п.19, отличающаяся тем, что липосома содержит DOTAP, яичный фосфатидилхолин и паклитаксел в молярном соотношении 50:48:2. 21. Катионная липосома по п.19, отличающаяся тем, что липосома содержит DOTAP, DOPC и паклитаксел в молярном соотношении 50:47:3. 22. Катионная липосома по п.19, отличающаяся тем, что липосома содержит DOTAP, DOPE и паклитаксел в молярном соотношении 50:47:3. 23. Катионная липосома по п.19, отличающаяся тем, что липосома содержит DOTAP, МОРС и паклитаксел в молярном соотношении 50:47:3. 24. Катионная липосома, содержащая катионные липиды и таксан в водном компартменте липосомы, причем липосома, по существу, не включает кристаллов таксана. 25. Способ снижения образования атеросклеротических бляшек, включающий введение млекопитающему композиции, содержащей катионные липиды и таксан, и обеспечение упомянутой композиции возможности взаимодействия с ангиогенными эндотелиальными клетками ангиогенного кровеносного сосуда в течение такого периода времени и таким образом,что упомянутая композиция проникает внутрь ангиогенных эндотелиальных клеток, где следствием ослабления ангиогенеза является снижение образования атеросклеротических бляшек. 26. Способ по п.25, отличающийся тем, что композицию вводят впрыскиванием в кровеносную систему, а также тем, что композиция обладает в крови двукратным или большим сродством к ангиогенным эндотелиальным клеткам по сравнению с соответствующими нормальными эндотелиальными клетками. 27. Способ по п.25, отличающийся тем, что впрыснутая композиция обладает в крови десятикратным или большим сродством к ангиогенным эндотелиальным клеткам по сравнению с соответствующими нормальными эндотелиальными клетками, а также тем, что композиция содержит 5 мол.% или более катионных липидов, причем композицию впрыскивают интраартериально. 28. Способ по п.25, отличающийся тем, что композиция связана с липосомой. 29. Способ уменьшения образования атеросклеротических бляшек у пациента, включающий этапы удаления атеросклеротической бляшки из кровеносного сосуда пациента и введения пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей катионную липосому и таксан.