Комбинированная терапия ингибитором ангиотензинпревращающего фермента и эпоксистероидным антагонистом альдостерона для лечения сердечно-сосудистого заболевания

1 Отношение к родственным заявкам Настоящая заявка заявляет приоритет предварительной заявки США 60/122997,поданной 5 марта 1999 г., и предварительной заявки США 60/122998, поданной 5 марта 1999 г. Область изобретения Комбинации ингибитора ангиотензинпревращающего фермента и эпоксистероидного антагониста рецепторов альдостерона описаны для применения при лечении расстройств кровообращения, включая сердечно-сосудистые заболевания, такие как сердечная недостаточность,гипертензия и застойная сердечная недостаточность. Особый интерес представляют способы лечения, использующие антагонист рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа, эплеренон, в комбинации с ингибитором ангиотензинпревращающего фермента. Предпосылки к созданию изобретения Миокардиальная (или сердечная) недостаточность, независимо от того, является ли она следствием предыдущего инфаркта (инфарктов) миокарда, заболевания сердца, связанного с гипертензией, или первичной миопатии, является главной проблемой здоровья людей во всем мире. Частота клинически выраженной сердечной недостаточности устойчиво повышалась в течение нескольких последних десятилетий. С точки зрения клиники, декомпенсированная сердечная недостаточность состоит из совокупности признаков и симптомов, которые происходят из застойных органов и гипоперфузируемых тканей, формируя синдром застойной сердечной недостаточности (ЗСН). Застой вызывается, главным образом, повышенным венозным давлением и неадекватной экскрецией натрия (Na+) относительно поступления Na+ с пищей, и имеет важную связь с уровнями альдостерона (ALDO) в крови. Патологическая задержка Na+ наблюдается через клетки эпителия канальцев по всему нефрону, включая последнюю часть дистального канальца и кортикальные собирательные протоки, где имеются участки рецепторов ALDO.ALDO представляет собой наиболее активный минералокортикоидный гормон организма. Как видно из самого термина "минералокортикоид", указанный стероидный гормон обладает активностью, регулирующей обмен минеральных веществ. Он способствует реабсорбции Na+ не только в почке, но также и из нижних отделов желудочно-кишечного тракта и слюнных и потовых желез, которые представляют собой классические ALDO-чувствительные ткани. ALDO регулирует резорбцию Na+ и воды за счет экскреции калия (К+) и магния(Мg2+). Альдостерон играет важную роль в патофизиологии сердечной недостаточности (СН)Circulation 1981; 63 (3):645-651). Альдостерон способствует задержке натрия, потере магния и калия (что вносит свой вклад в аритмии и внезапную сердечную смерть), активации симпатической нервной системы и подавлению парасимпатической нервной системы, фиброзу миокарда и сосудов, дисфункции барорецепторов,нарушению эластичности артерий и повреждению сосудов. (Wang W. Chronic administration ofin the dog. Hypertension 1994; 24(5):571-575). Постоянные повышения уровней альдостерона в крови приводят к образованию фиброзной ткани в сердце и сосудах, что вносит свой вклад в прогрессирование СН. (Weber KT, et al. Collagen inthe hypertrophied pressure-overloaded myocardium. Cir. 1987; 75:140-147). Увеличение выработки коллагена в миокарде и последующая гипертрофия левого желудочка (ЛЖ) приводят к жесткости миокарда, уменьшению эластичности желудочков и сосудов, нарушению диастолического наполнения, диастолической и систолической дисфункции, ишемии и, в конце концов, к СН. Фиброз миокарда также может вызывать аритмии и внезапную смерть. Альдостерон блокирует поглощение норэпинефрина миокардом,повышает уровень норэпинефрина в плазме и способствует эктопической активности желудочков. (Struthers AD. Aldosterone escape during АСЕ inhibitor therapy in chronic heart failure. Eur.Cardiac Failure 1996; 2(1):47-54). Альдостерон влияет на функцию барорецепторов и вызывает повреждение сосудов головного мозга и почек, а также дисфункцию эндотелия. (Struthers AD.N):103-106). Альдостерон также, как было показано, повышает уровни ингибитора активатора плазминогена и, таким образом, может препятствовать фибринолизу.ALDO может также вызывать реакции в не эпителиальных клетках. Вызванные хроническим повышением уровня ALDO в плазме, который не соответствует поступлению Na+ с пищей, такие реакции могут иметь неблагоприятные последствия в отношении структуры сердечно-сосудистой системы. Следовательно,ALDO может вносить вклад в прогрессирующий характер миокардиальной недостаточности в силу множества причин. Синтез и метаболизм ALDO регулируют многочисленные факторы, многие из которых действуют у пациента с недостаточностью миокарда. Указанные факторы включают ренин, а также факторы, не зависящие от ренина (такие как К+, АКТГ), которые способствуют синтезуALDO. Кровоток через печень, путем регулирования клиренса циркулирующего ALDO, помо 3 гает определить его концентрацию в плазме,важный фактор при сердечной недостаточности,которая характеризуется уменьшением минутного объема сердца и кровотока через печень. Ренин-ангиотензин-альдостероновая система ("RAAS") представляет один из гормональных механизмов, участвующих в регуляции гомеостаза давление/объем, а также в развитии гипертензии, состояния, предшествующего развитию более серьезных сердечно-сосудистых заболеваний, таких как застойная сердечная недостаточность. Активация ренин-ангиотензин-альдостероновой системы начинается с секреции фермента ренина юкстагломерулярными клетками в почке. Фермент ренин действует на имеющийся в естественных условиях субстрат,ангиотензиноген, с высвобождением декапептида, ангиотензина I. Указанный декапептид расщепляется ангиотензинпревращающим ферментом ("АПФ" - англ. аббревиатура "АСЕ") с образованием октапептида, ангиотензина II, главного активного агента этой системы. Указанный октапептид, ангиотензин II, представляет собой мощный вазоконстриктор, а также вызывает другие физиологические эффекты, такие как стимуляция секреции альдостерона, задержка натрия и жидкости, ингибирование секреции ренина, повышение активности симпатической нервной системы, стимуляция секреции вазопрессина, положительный инотропный эффект со стороны сердца и модулирование других гормональных систем. Делается акцент на минимизации гиперальдостеронизма как основе для оптимизации лечения пациента. Многие клиницисты пришли к выводу о том, что ингибирование ренинангиотензин-альдостероновой системы (RAAS) ингибитором ангиотензинпревращающего фермента (И-АПФ) предотвращает образование альдостерона. Однако все возрастающее количество данных свидетельствует о том, что И-АПФ только временно подавляет уровни альдостерона (Struthers AD. Aldosterone escape during angiotensin-converting enzyme inhibitor therapy in chronic heart failure. J Cardiac Failure 1996; 2(1):47-54). При лечении И-АПФ уровни альдостерона в плазме сначала снижаются, однако через три-шесть месяцев лечения И-АПФ возвращаются к тем уровням, которые были до лечения, несмотря на тщательное выполнение пациентом продолжительной медикаментозной терапии. (Staessen J, Lijnen P, Fagard R, Verschueren LJ, Amery A. Rise in plasma concentration of aldosterone during long-term angiotensin IIsupression. J. Endocr. 1981; 91:457-465). Данный феномен известен как "бегство" альдостерона,поскольку существуют другие важные детерминанты высвобождения альдостерона, такие как сывороточный калий. (Pitt В. "Escape" of aldosterone production in patients with left ventricularenzyme inhibitor: implications for therapy. Cardiovascular Drugs and Therapy 1995; 9:145-149). Предпринимались попытки уменьшить антагонизм ALDO рецепторов как у пациентов,леченных по обычным диуретическим программам, так и у пациентов, леченных ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента (АПФ),которые часто ограничиваются малыми дозами ингибитора АПФ из-за ортостатической гипотензии. У таких пациентов может наблюдаться рецидив симптомов сердечной недостаточности,вероятно связанных с подъемами уровнейALDO в плазме. Блокада альдостерона с помощью И-АПФ,как было показано, оказывает благоприятный эффект на выживание и госпитализацию пациентов с СН. В испытании CONSENSUS (Cooperative North Scandinavian Enalapril SurvivalStudy) смертность за один год среди пациентов с тяжелой СН (класс IV по классификацииNYHA), леченных эналаприлом (И-АПФ) и диуретиками, снизилась на 31% по сравнению с пациентами, леченными плацебо и диуретиками. В исследовании CONSENSUS среди пациентов с высокими исходными уровнями альдостерона в плазме наблюдалась более высокая смертность по сравнению с пациентами с низкими исходными уровнями. В группе, леченной эналаприлом, смертность снизилась только в группе с исходными уровнями альдостерона в плазме выше медианы. В группе, в которой исходные уровни альдостерона в плазме были ниже медианы, разницы в смертности по сравнению с плацебо не наблюдалось. (Swedberg K,Eneroth P, Kjekshus J, Wilhelmsen L. Hormonesmortality. CONSENSUS Trial Study Group. Circulation 1990; 82(5):1730-1736). Антагонисты рецепторов альдостерона действуют путем прямого блокирования участка действия альдостерона. Агенты, блокирующие рецепторы альдостерона, широко не использовались в сочетании с И-АПФ из-за потенциального развития тяжелой гиперкалиемии. Однако в исследовании Randomized ALdactone Evaluation Study (RALES), добавление спиронолактона 25 мг ежедневно, дозы, которая не является ни диуретической, ни гемодинамической, к обычной терапии (И-АПФ и петлевой диуретик, с дигоксином или без него) при лечении пациентов с тяжелой СН (класс III или IV по классификации NYHA), приводило к 30-процентному снижению риска общей смертности, по сравнению с пациентами, получавшими обычную терапию плюс плацебо (р 0,001). Среди пациентов, леченных спиронолактоном, также наблюдалась частота госпитализации в связи с ухудшением СН ниже на 35 процентов, по сравнению с пациентами, получавшими плацебо. (Pitt В, Zannad F, Remme WJ, Cody R, Castaigne A,Perez A, Palensky J, Wittes J for the Randomizedpatients with severe heart failure. N. Engl. J. Med. 1999; 341 (10):709-717). Следует подчеркнуть, что такие улучшения показателей заболеваемости и смертности наблюдались при добавлении спиронолактона к обычному лечению, которое включало И-АПФ. У пациентов, леченных спиронолактоном, наблюдалось увеличение медианы концентрации калия в сыворотке крови, которое было статистически, но не клинически, значимым по сравнению с пациентами, получавшими плацебо. У пациентов, переживших острый инфаркт миокарда (ОИМ), часто продолжает развиваться СН, которая впоследствии приводит к смерти. Блокада RAAS с помощью И-АПФ, как было показано, снижает общую смертность среди таких пациентов. В исследовании Acute Infarction Ramipril Efficacy Study (AIRE) введение ИАПФ пациентам с клиническими проявлениями СН в любое время после ОИМ приводило к снижению риска общей смертности на 27% по сравнению с плацебо (р=0,002). (The Acute Infarction Ramipril Efficacy Study (AIRE) Studymorbidity of survivors of acute myocardial infarction with clinical evidence of heart failure. Lancet 1993; 342:821-828). Более того, наблюдалось 23% снижение риска развития тяжелой резистентной СН у леченых пациентов по сравнению с плацебо (р=0,017). (Cleland JGF, Erhardtof heart failure: a report from AIRE Study Investigators. Eur. Heart J 1997; 18:41-51). В результате длительного (три года) наблюдения за пациентами AIRE (AIREX) Hall et al. установили, что пациенты, леченные И-АПФ, имели 36% снижение риска общей смертности по сравнению с плацебо (р=0,002), что наводит на мысль о том,что ингибирование RAAS после ОИМ оказывает не только значимое влияние на выживание, но и на отдаленное выживание. (Hall AS, Murray GD,Ball SG on behalf of the AIREX Study Investigators. Follow-up study of patients randomly allocated ramipril or placebo for heart failure after(AIREX) Study. Lancet 1997; 349(9064):14931497). В другом исследовании с участием пациентов после ИМ (Trandolapril Cardiac Evaluationstudy, TRACE) у пациентов с дисфункцией ЛЖ от 2 до 6 дней после ИМ, леченных И-АПФ,относительное снижение риска смерти составляло 18% по сравнению с плацебо (р=0,001), а снижение риска прогрессирования до тяжелой СН по сравнению с плацебо - на 29% (р=0,003).Am. Heart J. 1996; 132:235-243). В сравнительном исследовании рамиприла и спиронолактонаRodriguez et al. установили, что оба препарата предотвращают дилятацию желудочков и дальнейшее ухудшение систолической дисфункции у пациентов с нарушенной фракцией выброса после OHM. Результаты данных исследований предполагают, что добавление антагониста рецепторов альдостерона к И-АПФ при лечении пациентов после ОИМ будет дополнительно снижать смертность. (Rodriguez JA, Godoy I,Castro P, Quintana JC, Chavez E, Corbalan R. Aremodeling after acute myocardial infarction. JACC 1997; abstract 947-9:133A). Известны многие лекарственные средства,блокирующие рецепторы альдостерона, и их эффекты у человека. Например, спиронолактон представляет собой лекарственное средство,которое действует на уровне рецепторов минералокортикоидов путем конкурентного ингибирования связывания альдостерона. Данное стероидное соединение использовалось для блокирования альдостеронзависимого транспорта натрия в дистальном канальце почки с целью уменьшения отека и лечения эссенциальной гипертензии и первичного гиперальдостеронизма [F. Mantero et al., Clin. Sci. Mol. Med., 45(Suppl. 1), 219s-224s (1973)]. Спиронолактон также широко используется для лечения других заболеваний, связанных с повышенными уровнями альдостерона, таких как цирроз печени и застойная сердечная недостаточность [F.J. Saunders et al., Aldactone; Spironolactone: A Comprehensive Review, Searle, New York (1978)]. Прогрессивно возрастающие дозы спиронолактона от 1 мг до 400 мг в день [т.е., 1 мг/день, 5 мг/день, 20 мг/день] вводили пациентам с непереносимостью спиронолактона для лечения асцита цирротического происхождения [Р.A.Greenberger et al., N. Eng. Reg. Allergy Proc.,7(4), 343-345 (июль-август, 1986)]. Было установлено, что развитие фиброза миокарда чувствительно к уровням в крови как ангиотензина II,так и альдостерона, и что антагонист альдостерона спиронолактон предотвращает фиброз миокарда у экспериментальных животных, связывая, таким образом, альдостерон с избыточным отложением коллагена (D. Klug et al., Am.J. Cardiol., 71 (3), 46 А-54 А (1993)]. Было показано, что спиронолактон предотвращает фиброз у экспериментальных животных безотносительно к развитию гипертрофии левого желудочка и наличия гипертензии [C.G. Brilla et al., J. Mol. 7 используется для лечения индуцированной диуретиками гипокалиемии, когда вводимые перорально калиевые добавки или другие калийсберегающие схемы лечения признаны недейственными [Physician's Desk Reference, 46th Edn., p. 2153, Medical Economics Company Inc.,Montvale, N.J. (1992)]. Предыдущие исследования показали, что ингибирование АПФ ингибирует ренин-ангиотензиновую систему путем практически полной блокады образования ангиотензина II. Для контроля гипертензии в клинической практике используется множество ингибиторов АПФ. В то время как ингибиторы АПФ могут эффективно контролировать гипертензию, часто встречаются побочные эффекты, включая хронический кашель, кожную сыпь, снижение вкусовых ощущений, протеинурию и нейтропению. Помимо этого, несмотря на то, что ингибиторы АПФ эффективно блокируют образование ангиотензина II, уровни альдостерона у некоторых пациентов, имеющих сердечно-сосудистые заболевания, контролируются плохо. Например,несмотря на непрерывное ингибирование АПФ у пациентов с гипертензией, получавших каптоприл, наблюдалось постепенное возвращение альдостерона в плазме к исходным уровням (J.Staessen et al., J. Endocrinol., 91, 457-465 (1981)]. Подобный эффект наблюдался у пациентов с инфарктом миокарда, получавших зофеноприл(1993)]. Пациентов, страдающих сердечнососудистыми заболеваниями, также часто переводят на диету с низким содержанием натрия. Такой режим может индуцировать повышение выработки альдостерона и увеличение количества рецепторов ангиотензина, которые стимулируют синтез альдостерона. Таким образом, у пациента, применяющего диету с низким содержанием натрия, может развиться состояние гиперальдостеронизма даже в присутствии ингибитора АПФ. Данный феномен был назван"бегством" альдостерона. При параллельном лечении двух групп крыс, при котором одна группа получала спиронолактон подкожно, а другая группа получала каптоприл, спиронолактон, как было установлено, предотвращал фиброз в группе крыс с гипертензией [C.G. Brilla etal., J. Mol. Cell. Cardiol., 25, 563-575 (1993)]. Примером другого ряда антагонистов рецепторов альдостерона стероидного типа могут служить эпоксисодержащие производные спиронолактона. Например, патент США 4559332, выданный Grob и соавторам, описывает 9 а,11 а-эпоксисодержащие производные спиронолактона как антагонисты альдостерона,пригодные в качестве диуретиков. Данные 9 а,11a-эпоксистероиды оценивали на эндокринные эффекты по сравнению со спиронолактоном 8 Комбинации антагониста альдостерона и ингибитора АПФ изучали при лечении сердечной недостаточности. Известно, что смертность выше у пациентов с повышенными уровнями альдостерона в плазме, и что уровни альдостерона повышаются по мере прогрессирования ЗСН из-за активации RAAS. Обычное применение диуретиков может дополнительно повышать уровни альдостерона. Ингибиторы АПФ стойко ингибируют выработку ангиотензина II,но вызывают только слабый и преходящий антиальдостероновый эффект. Комбинирование ингибитора АПФ и спиронолактона было предложено для обеспечения значительного ингибирования RAAS в целом. Например, комбинацию эналаприла и спиронолактона вводили амбулаторным пациентам с мониторингом артериального давления [Р. Poncelet et al., Am. J. Cardiol., 65(2), 33K-35K(1990)]. В исследовании с участием 90 пациентов вводили комбинацию каптоприла и спиронолактона и установили ее эффективность для контроля рефракторной ЗСН без серьезных случаев гиперкалиемии. [U. Dahlstrom et al., Am. J.Cardiol., 71, 29 А-33 А (21 января 1993)]. Спиронолактон, введенный совместно с ингибитором АПФ, как сообщается, был высокоэффективным у 13 из 16 пациентов, страдающих застойной сердечной недостаточностью [A.A. van Vliet etal., Am. J. Cardiol., 71, 21A-28A (21 января 1993)]. Сообщается о клинических улучшениях у пациентов, получавших комбинированную терапию спиронолактоном и ингибитором АПФ эналаприлом, хотя в этом сообщении упоминается о том, что требуются контролируемые испытания для определения наименьших эффективных доз и того, для каких пациентов комбинированная терапия будет наиболее благоприятной [F. Zannad, Am. J. Cardiol., 71(3), 34 А-39 А(1993)]. Заявка РСТUS 96/01969, опубликованная 15 августа 1996 г., описывает комбинированную терапию ингибитором АПФ и антагонистом альдостерона, а именно, спиронолактоном, в количестве, уменьшающем побочные эффекты, для лечения застойной сердечной недостаточности. Заявка РСТUS 96/01764,опубликованная 15 августа 1996 г., описывает комбинированную терапию ингибитором АПФ и антагонистом альдостерона, а именно, спиронолактоном, в количестве, уменьшающем побочные эффекты, и диуретиком, таким как петлевой диуретик, для лечения застойной сердечной недостаточности. Комбинации антагониста рецепторов ангиотензина II и антагониста рецепторов альдостерона известны. Например, заявка РСТUS 91/09362, опубликованная 25 июня 1992 г., описывает лечение гипертензии с использованием комбинации имидазолсодержащего антагониста ангиотензина II и диуретика, такого как спиронолактон. Заявка РСТUS 96/09342, опубликованная 19 декабря 1996 г., описывает лечение 9 застойной сердечной недостаточности комбинацией антагониста ангиотензина II и антагониста рецепторов альдостерона спиронолактона. Заявка РСТUS 96/08823, опубликованная 19 декабря 1996 г., описывает лечение фиброза миокарда комбинацией антагониста ангиотензина II и антагониста рецепторов альдостерона спиронолактона. Заявка РСТUS 96/09335, опубликованная 19 декабря 1996 г., описывает лечение застойной сердечной недостаточности комбинацией антагониста ангиотензина II и эпоксистероидного антагониста альдостерона эпоксимексренона. Заявка РСТUS 96/08709, опубликованная 19 декабря 1996 г., описывает лечение кардиофиброза комбинацией антагониста ангиотензина II и эпоксистероидного антагониста рецепторов альдостерона эпоксимексренона. Краткое описание рисунков Фиг. 1-А показывает порошковую рентгенограмму формы Н эплеренона. Фиг. 1-В показывает порошковую рентгенограмму формы L эплеренона. Фиг. 1-С показывает порошковую рентгенограмму метилэтилкетонового сольвата эплеренона. Фиг. 2-А показывает термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) неизмельченной формы L, непосредственно кристаллизованной из метилэтилкетона. Фиг. 2-В показывает термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) неизмельченной формы L, полученной десольватацией сольвата, полученного кристаллизацией эплеренона высокой чистоты из метилэтилкетона. Фиг. 2-С показывает термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) формы L, полученной кристаллизацией сольвата из раствора эплеренона высокой чистоты в метилэтилкетоне, десольватацией сольвата с получением формы L и измельчением полученной формы L. Фиг. 2-D показывает термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) неизмельченной формы Н, полученной десольватацией сольвата, полученного варкой эплеренона низкой чистоты из подходящих растворителей. Фиг. 3-А показывает инфракрасные спектры (диффузная отражательная способность,DRIFTS) формы Н эплеренона. Фиг. 3-В показывает инфракрасные спектры (диффузная отражательная способность,DRIFTS) формы L эплеренона. Фиг. 3-С показывает инфракрасные спектры (диффузная отражательная способность,DRIFTS) метилэтилкетонового сольвата эплеренона. Фиг. 3-D показывает инфракрасные спектры (диффузная отражательная способность,DRIFTS) эплеренона в растворе хлороформа. 10 Фиг. 4 показывает 13 С ЯМР спектры формы Н эплеренона. Фиг. 5 показывает 13 С ЯМР спектры формы L эплеренона. Фиг. 6-А показывает профиль термогравиметрического анализа метилэтилкетонового сольвата. Фиг. 7 показывает порошковую рентгенограмму кристаллической формы 7-метил водород 4,5:9,11-диэпокси-17-гидрокси-3-оксо-17-прегнан-7,21-дикарбоксилата, -лактона, выделенного из метилэтилкетона. Фиг. 8 показывает порошковую рентгенограмму кристаллической формы 7-метил водород 11,12-эпокси-17-гидрокси-3-оксо-17 прегн-4-ен-7,21-дикарбоксилата,-лактона,выделенного из изопропанола. Фиг. 9 показывает порошковую рентгенограмму кристаллической формы 7-метил водород 17-гидрокси-3-оксо-17-прегна-4,9(11)диен-7,21-дикарбоксилата, -лактона, выделенного из н-бутанола. Фиг. 10 показывает порошковую рентгенограмму влажного отжатого осадка на фильтре(метилэтилкетонового сольвата), полученного кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой диэпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 3% и (d) 5%. Фиг. 11 показывает порошковую рентгенограмму высушенных твердых веществ, полученных кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой диэпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 3% и(d) 5%. Фиг. 12 показывает порошковую рентгенограмму высушенных твердых веществ, полученных кристаллизацией из метилэтилкетона с 3% присадкой диэпоксида (а) без размалывания сольвата перед сушкой и (b) с размалыванием сольвата перед сушкой. Фиг. 13 показывает порошковую рентгенограмму влажного отжатого осадка на фильтре(метилэтилкетонового сольвата), полученного кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой 11,12-эпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 5% и(d) 10%. Фиг. 14 показывает порошковую рентгенограмму высушенных твердых веществ, полученных кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой 11,12-эпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 5% и (d) 10%. Фиг. 15 показывает кубическую диаграмму чистоты продукта, чистоты исходного материала, скорости охлаждения и конечной температуры, на основе данных, представленных в таблице 7 А. Фиг. 16 показывает полунормальную диаграмму, полученную с использованием кубической диаграммы фиг. 15, для определения переменных, оказывающих статистически значимое влияние на чистоту конечного материала. 11 Фиг. 17 представляет график взаимодействия, основанный на результатах, приведенных в табл. 7 А, который показывает взаимодействие между чистотой исходного материала и скоростью охлаждения и чистотой конечного материала. Фиг. 18 показывает кубическую диаграмму массовой фракции формы Н, чистоты исходного материала, скорости охлаждения и конечной температуры, на основе данных, представленных в таблице 7 А. Фиг. 19 показывает полунормальную диаграмму, полученную с использованием кубической диаграммы фиг. 18, для определения переменных, оказывающих статистически значимое влияние на чистоту конечного материала. Фиг. 20 представляет график взаимодействия, основанный на результатах, приведенных в таблице 7 А, который показывает взаимодействие между чистотой исходного материала и конечной температурой и чистотой конечного материала. Фиг. 21 показывает порошковую рентгенограмму аморфного эплеренона. Фиг. 22 показывает DSC термограмму аморфного эплеренона. Фиг. 23 суммирует план клинических испытаний. Фиг. 24 показывает исходные параметры для различных экспериментальных групп. Фиг. 25 показывает сопутствующие лекарственные средства у пациентов, участвующих в исследовании с комбинированной терапией. Фиг. 26 показывает изменения диастолического артериального давления в группах, получавших эплеренон (50 мг в день) и спиронолактон (25 мг в день), по сравнению с плацебо. Фиг. 27 показывает уровни альдостерона в моче при различной частоте введения эплеренона (25 мг четыре раза в день, 25 мг два раза в день, 50 мг четыре раза в день, 100 мг четыре раза в день) и спиронолактона (25 мг четыре раза в день) по сравнению с плацебо. Фиг. 28 показывает активность ренина в плазме и экскрецию альдостерона в группах,получавших эплеренон (50 мг в день) и спиронолактон (25 мг в день), по сравнению с плацебо. Фиг. 29 показывает изменения уровней АД для всех пациентов при различной частоте введения эплеренона и спиронолактона, по сравнению с плацебо. Фиг. 30 показывает изменения уровней АД для пациентов с исходным высоким АД при различной частоте введения эплеренона и спиронолактона, по сравнению с плацебо. Фиг. 31 показывает исследование, схематичное для биологической оценки II: мультицентровое, рандомизированное, двойное слепое,с контролем плацебо, двумя подгруппами, параллельное групповое испытание. 12 Описание изобретения Лечение расстройств кровообращения,включая сердечно-сосудистые заболевания, такие как сердечная недостаточность, цирроз, гипертензия и застойная сердечная недостаточность, обеспечивается комбинированной терапией, включающей применение терапевтически эффективного количества ингибитора ангиотензинпревращающего фермента ("АПФ") в сочетании с применением терапевтически эффективного количества антагониста рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа и, необязательно, диуретика, не относящегося к антагонистам рецепторов альдостерона, или дигоксина. Предпочтительно, указанным диуретиком является петлевой диуретик. Термин "ингибитор ангиотензинпревращающего фермента" ("ингибитор АПФ") охватывает агент или соединение или комбинацию двух или более агентов или соединений, обладающих способностью блокировать, частично или полностью, быстрое ферментативное превращение физиологически неактивной декапептидной формы ангиотензина ("ангиотензина I") в сосудосуживающую октапептидную форму ангиотензина ("ангиотензин II"). Блокирование ангиотензина II может быстро влиять на регуляцию жидкостного и электролитного баланса,артериальное давление и объем крови, путем устранения главных эффектов ангиотензина II. К главным эффектам ангиотензина II относят стимуляцию синтеза и секреции альдостерона корой надпочечников и повышение артериального давления путем прямой констрикции гладкой мускулатуры артериол. Термин "антагонист рецепторов альдостерона" охватывает агент или соединение или комбинацию двух или более указанных агентов или соединений, которые связываются с рецептором альдостерона в качестве конкурентного ингибитора действия самого альдостерона на сайте рецепторов в почечных канальцах, таким образом, что модулируют опосредованную рецепторами активность альдостерона. Типичными среди указанных антагонистов рецепторов альдостерона являются соединения эпоксистероидного типа. Термин "антагонист рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа" охватывает один или более агентов или соединений, характеризующихся наличием ядра стероидного типа и имеющих эпокси-фрагмент, соединенный с ядром; указанный агент или соединение связываются с рецептором альдостерона в качестве конкурентного ингибитора действия самого альдостерона на сайте рецепторов, таким образом, что модулируют опосредованную рецепторами активность альдостерона. Термин "комбинированная терапия" (или"совместная терапия"), при определении пригодности ингибитора АПФ и антагониста рецепторов альдостерона и, необязательно, диурети 13 ка, не относящегося к антагонистам рецепторов альдостерона, или дигоксина, охватывает введение каждого агента в последовательном порядке по схеме, которая будет обеспечивать благоприятные эффекты комбинации лекарственных средств, а также охватывает практически одновременное совместное введение указанных агентов, такое как введение в одной капсуле,содержащей фиксированное соотношение указанных активных агентов, или в нескольких,отдельных для каждого агента, капсулах. Термин "терапевтически эффективное" означает количество каждого агента для применения в комбинированной терапии, которое будет достигать цели улучшения достаточной функции сердца путем уменьшения или предотвращения, например, прогрессирования застойной сердечной недостаточности, в то же время избегая неблагоприятных побочных эффектов,обычно связанных с каждым агентом. Термин "количество, уменьшающее побочные эффекты" при описании терапевтически эффективного количества антагониста рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа в комбинированной терапии, определяет количество указанного агента или количественные пределы указанного агента, которые способны улучшать достаточную функцию сердца, в то же время уменьшая или избегая одного или более побочных эффектов, индуцированных антагонистом альдостерона, таких как гиперкалиемия. Дозировка антагониста рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа, которая должна выполнять терапевтическую цель благоприятного усиления достаточной функции сердца, в то же время уменьшая или избегая побочных эффектов, должна представлять собой дозировку,которая практически не индуцирует диурез, т.е. практически не оказывающую диуретического действия дозировку. Термин "не оказывающее диуретического действия" количество, особенно в отношении количества антагониста рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа, определяет количество указанного агента или количественные пределы указанного агента, которые не вызывают значительного повышения диуретического эффекта, т.е. повышения экскреции натрия и воды. Предпочтительная комбинированная терапия должна состоять, главным образом, из двух или трех активных агентов, а именно, ингибитора АПФ, антагониста рецепторов альдостерона эпоксистероидного типа, и, необязательно, диуретика, не относящегося к антагонистам рецепторов альдостерона, или дигоксина. Для комбинации ингибитора АПФ и антагониста ALDO,агенты следует использовать в комбинации в массовом соотношении приблизительно 0,5 один к двадцати-одному ингибитора ангиотензинпревращающего фермента к антагонисту рецепторов альдостерона. Предпочтительные 14 пределы этих двух агентов (ингибитор АПФ к антагонисту ALDO) будут составлять приблизительно один-один к пятнадцати-одному, в то время как более предпочтительные пределы будут составлять приблизительно один-один к пяти-одному, в зависимости, в конечном итоге,от выбора ингибитора АПФ и антагонистаALDO. Необязательный диуретик может быть представлен в пределах приблизительно от 1 до 200 мг, предпочтительно от 5 до 150 мг, в зависимости от выбранного диуретика и болезненного состояния, по поводу которого осуществляется лечение. Примеры ингибиторов АПФ, которые могут использоваться в комбинированной терапии,показаны в следующих четырех категориях. Первая группа ингибиторов АПФ состоит из следующих соединений: АВ-103, анковенин,беназеприлат, BRL-36378, BW-А 575 С, CGS13928C, CL-242817, CV-5975, экватен, EU-4865,EU-4867, EU-5476, фороксимитин, FPL 66564,FR-900456, Ное-065, I5B2, индолаприл, кетометилмочевина, KRI-1177, KRI-1230, L-681176,либензаприл, MCD, MDL-27088, MDL-27467A,мовелтиприл, MS-41, никотианамин, пентоприл,фенацеин, пивоприл, рентиаприл, RG-5975, RG6134, RG-6207, RGH-0399, ROO-911, RS-10085197, RS-2039, RS 5139, RS 86127, RU-44403, S8308, SA-291, спираприлат, SQ-26900, SQ28084, SQ-28370, SQ-28940, SQ-31440, синекор,утибаприл, WF-10129, Wy-44221, Wy-44655, Y23785, Yissum P-0154, забициприл и зофеноприл. Вторая группа ингибиторов АПФ, представляющих интерес, состоит из следующих соединений: Asahi Brewery AB-47, алатриоприл,BMS 182657, Asahi Chemical C-111, AsahiChemical C-112, Dainippon DU-1777, миксанприл, прентил, зофеноприлат и 1-(-(1-карбокси 6-(4-пиперидинил)гексил)амино)-1-оксопропилоктагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота. Третья группа ингибиторов АПФ, представляющих больший интерес, состоит из следующих соединений: Bioproject BP1.137, ChiesiMerrell Dow MDL-100240, периндоприлат и Servier S-5590. Четвертая группа ингибиторов АПФ, представляющих наибольший интерес, состоит из следующих соединений: алацеприл, беназеприл,каптоприл, цилазаприл, делаприл, эналаприл,эналаприлат, фозиноприл, фозиноприлат, имидаприл, лизиноприл, периндоприл, хинаприл,рамиприл, саралазинацетата, темокаприл, трандолаприл, церанаприл, моэксиприл, хинаприлат и спираприл. Многие из указанных ингибиторов АПФ имеются в продаже, особенно те, которые перечислены в четвертой группе, выше. Например,весьма предпочтительный ингибитор АПФ каптоприл продается компанией E.R. Squibb'"CAPOTEN" ("КАПОТЕН"), в таблеточной дозированной форме с дозами 12,5, 50 и 100 мг на таблетку. Эналаприл или эналаприлмалеата и лизиноприл являются двумя более предпочтительными ингибиторами АПФ, которые продаются компанией MerckCo., West Point, Pa. Эналаприл продается под товарным знаком"VASOTEC" ("ВАЗОТЕК") в таблеточной дозированной форме с дозами 2,5, 5, 10 и 20 мг на таблетку. Лизиноприл продается под товарным знаком '"PRINIVIL" ("ПРИНИВИЛ") в таблеточной дозированной форме с дозами 5, 10, 20 и 40 мг на таблетку. Диуретик, не относящийся к антагонистам рецепторов альдостерона, который используется в комбинации ингибитора АПФ и антагониста рецепторов альдостерона, можно выбрать из нескольких известных классов, таких как тиазиды и родственные им сульфонамиды, калийсберегающие диуретики, петлевые диуретики и ртутьорганические диуретики. Примерами тиазидов являются бендрофлуметиазид, бензтиазид, хлортиазид, циклотиазид, гидрохлортиазид, гидрофлуметиазид, метиклотиазид, политиазид и трихлорметиазид. Примерами сульфонамидов, родственных тиазидам, являются хлорталидон, хинетазон и метолазон. Примерами калийсберегающих диуретиков являются триаметерен и амилорид. Примерами петлевых диуретиков, т.е.,диуретиков, действующих в восходящей части петли Генле почек, являются фуросемид и этинакриловая кислота. Примерами ртутьорганических диуретиков являются меркаптомерин-натрий, меретоксиллин, прокаин и мерзалил с теофиллином. Эпоксистероидные антагонисты рецепторов альдостерона, подходящие для применения в комбинированной терапии, состоят из соединений, имеющих стероидное ядро, замещенное фрагментом эпокси-типа. Термин фрагмент"эпокси-типа" охватывает любой фрагмент, характеризующийся наличием атома кислорода как мостика между двумя атомами углерода,примеры которого включают следующие фрагменты: Термин '"стероидный", используемый в термине "эпоксистероидный", обозначает ядро,имеющее циклопентенфенантреновый фрагмент с обычными кольцами "А", "В", "С" и "D". Фрагмент эпокси-типа может быть связан с циклопентенфенантреновым ядром в любом возможном для присоединения или замещения положении, т.е. конденсирован с одним из колец стероидного ядра, или фрагмент может быть замещен на кольцевом члене кольцевой системы. Термин "эпоксистероидный" охватывает 16 стероидное ядро, имеющее один или более фрагментов эпокси-типа, соединенных с ним. Эпоксистероидные антагонисты рецепторов альдостерона, пригодные для использования в комбинированной терапии, включают семейство соединений, имеющих эпокси-фрагмент,конденсированный с кольцом "С" стероидного ядра. Особенно предпочтительными являются 20-спироксановые соединения, характеризующиеся наличием 9,11-замещенного эпоксифрагмента. Таблица 1, ниже, описывает ряд 9,11-эпоксистероидных соединений, которые можно использовать в комбинированной терапии. Особенно предпочтительным среди указанных соединений табл. 1, является соединение 1, которое известно под обычным названием эпоксимексренон, а также под обозначениемUSAN эплеренона. Указанные эпоксистероиды можно получить с помощью способов, описанных в патенте США 4559332, выданном Grob Введение ингибитора АПФ, антагониста рецепторов альдостерона и, необязательно, диуретика, не относящегося к антагонистам рецепторов альдостерона, или дигоксина, можно осуществлять последовательно, отдельными композициями, или можно осуществлять одновременным введением единой композиции или отдельных композиций. Введение можно осуществлять пероральным путем или внутривенными, внутримышечными или подкожными инъекциями. Композиция может иметь форму болюса или форму водных или неводных изотонических стерильных растворов или суспензий для инъекций. Такие растворы и суспензии можно приготовить из стерильных порошков или гранул, имеющих один или более фармацевтически приемлемых носителей или разбавителей, или связывающих агентов, таких как желатин или гидроксипропилметилцеллюлоза, с одним или более смазывающих агентов, консервантов, поверхностно-активных или диспергирующих агентов. Для перорального введения фармацевтическая композиция может быть в форме, например, таблетки, капсулы, суспензии или жидкости. Фармацевтическую композицию предпочтительно приготавливают в форме дозированной единицы, содержащей конкретное количество активного ингредиента. Примерами таких дозированных единиц являются таблетки или капсулы. Ингибитор АПФ может присутствовать в количестве приблизительно от 1 до 200 мг, предпочтительно, приблизительно от 2 до 150 мг, в зависимости от конкретного выбранного ингибитора АПФ. Подходящая суточная доза для млекопитающего может варьировать в широких пределах в зависимости от состояния пациента и других факторов. Антагонист ALDO 18 может присутствовать в количестве приблизительно от 1 до 400 мг, предпочтительно, приблизительно от 2 до 150 мг, в зависимости от конкретного выбранного антагониста ALDO и конкретного болезненного состояния, по поводу которого осуществляется комбинированная терапия. Для болезненных состояний, которые требуют предотвращения, уменьшения или лечения сердечно-сосудистого болезненного состояния без появления гиперкалиемии, например антагонист ALDO, обычно эплеренон, будет присутствовать в комбинированной терапии в количестве в пределах приблизительно от 5 до 200 мг на дозу. Предпочтительные пределы для эплеренона будут составлять приблизительно от 25 до 50 мг на дозу. Более предпочтительно, указанные пределы будут составлять приблизительно от 10 до 15 мг на дозу в день. Активные ингредиенты могут также вводиться путем инъекции в виде композиции, в которой в качестве подходящего носителя может использоваться, например, физиологический раствор, декстроза или вода. Схему дозирования для лечения болезненного состояния с помощью комбинированной терапии по настоящему изобретению выбирают в соответствии с рядом факторов, включая тип,возраст, массу, пол и состояние здоровья пациента, тяжесть заболевания, путь введения и конкретное применяемое соединение, и, таким образом, она может варьировать в широких пределах. Для терапевтических целей активные компоненты комбинированной терапии по настоящему изобретению обычно объединяют с одним или более вспомогательных веществ, подходящих для указанного пути введения. При пероральном введении компоненты можно смешивать с лактозой, сахарозой, порошком крахмала,сложными эфирами целлюлозы и алкановых кислот, алкиловыми эфирами целлюлозы, тальком, стеариновой кислотой, стеаратом магния,оксидом магния, натриевыми и кальциевыми солями фосфорной и серной кислот, желатином,аравийской камедью, альгинатом натрия, поливинилпирролидоном и/или поливиниловым спиртом, а затем таблетировать или инкапсулировать для удобного введения. Композиции для парентерального введения могут быть в форме водных или неводных изотонических стерильных растворов или суспензий для инъекций. Такие растворы и суспензии можно приготавливать из стерильных порошков или гранул,имеющих один или более фармацевтически приемлемых носителей или разбавителей, упомянутых для использования в композициях для перорального введения. Компоненты можно растворять в воде, полиэтиленгликоле, пропиленгликоле, этаноле, кукурузном масле, масле семян хлопка, арахисовом масле, кунжутном масле, бензиловом спирте, хлориде натрия 19 и/или различных буферах. Другие вспомогательные вещества и способы введения хорошо известны в области фармацевтики. Фармацевтические композиции для применения в способах лечения по настоящему изобретению можно вводить в пероральной форме или путем внутривенного введения. Пероральное введение комбинированной терапии является предпочтительным. Дозирование при пероральном введении можно осуществлять по схеме с однократной суточной дозой или с однократной дозой через день или множеством разделенных доз в течение дня. Активные агенты, которые составляют комбинированную терапию, можно вводить одновременно, как в виде объединенной дозированной формы, так и в виде отдельных дозированных форм, предназначенных для практически одновременного перорального введения. Активные агенты, которые составляют комбинированную терапию,можно также вводить последовательно, по схеме, предусматривающей многоэтапный прием внутрь одного из активных компонентов. Таким образом, схема может предусматривать последовательное введение активных агентов с разделенным по времени приемом внутрь отдельных активных агентов. Период времени между множественными этапами приема внутрь может варьировать от нескольких минут до нескольких часов, в зависимости от свойств каждого активного агента, таких как эффективность, растворимость, биодоступность, полупериод существования в плазме и кинетический профиль агента, а также в зависимости от возраста и состояния пациента. Активные агенты комбинированной терапии, вводятся ли они одновременно,практически одновременно или последовательно, могут включать режим, предусматривающий введение одного активного агента пероральным путем, а другого активного агента - внутривенным путем. Независимо от того, вводятся ли активные агенты комбинированной терапии пероральным или внутривенным путем, раздельно или вместе, каждый такой активный агент будет содержаться в подходящей фармацевтической композиции фармацевтически приемлемых наполнителей, разбавителей и других компонентов композиции. Примеры подходящих фармацевтически приемлемых композиций,содержащих активные компоненты, для перорального введения приводятся ниже. Несмотря на то, что в таких композициях перечисляются оба активных агента вместе в одной прописи,такую пропись можно использовать для композиции, содержащей один из активных компонентов. Пример 1. Пероральную дозу можно приготовить просеиванием и последующим смешиванием следующих перечисленных ингредиентов в указанных количествах. Указанную дозу затем можно поместить в твердую желатиновую капсулу. 20 Ингредиенты Каптоприл Эплеренон Стеарат магния Лактоза Пример 1 А. Пероральную дозу можно приготовить просеиванием и последующим смешиванием следующих перечисленных ингредиентов в указанных количествах. Указанную дозу затем можно поместить в твердую желатиновую капсулу. Ингредиенты Количество, мг Каптоприл 62,0 Эплеренон 12,5 Фуросемид 73,9 Стеарат магния 10 Лактоза 100 Пример 2. Пероральную дозу можно приготовить смешиванием и гранулированием с 10% раствором желатина. Влажные гранулы просеивают, сушат, смешивают с крахмалом,тальком и стеариновой кислотой, просеивают и прессуют в таблетку. Ингредиенты Количество, мг Каптоприл 62,0 Эплеренон 12,5 Дигидрат сульфата кальция 100 Сахароза 15 Крахмал 8 Тальк 4 Стеариновая кислота 2 Пример 2 А. Пероральную дозу можно приготовить смешиванием и гранулированием с 10% раствором желатина. Влажные гранулы просеивают, сушат, смешивают с крахмалом,тальком и стеариновой кислотой, просеивают и прессуют в таблетку. Ингредиенты Количество, мг Каптоприл 62,0 Эплеренон 12,5 Фуросемид 73,9 Дигидрат сульфата кальция 100 Сахароза 15 Крахмал 8 Тальк 4 Стеариновая кислота 2 Пример 3. Пероральную дозу можно приготовить просеиванием и последующим смешиванием следующих перечисленных ингредиентов в указанных количествах. Указанную дозу затем можно поместить в твердую желатиновую капсулу. Ингредиенты Количество, мг Эналаприл 14,3 Эплеренон 12,5 Стеарат магния 10 Лактоза 100 21 Пример 3 А. Пероральную дозу можно приготовить просеиванием и последующим смешиванием следующих перечисленных ингредиентов в указанных количествах. Указанную дозу затем можно поместить в твердую желатиновую капсулу. Ингредиенты Количество, мг Эналаприл 14,3 Эплеренон 12,5 Фуросемид 73,9 Стеарат магния 10 Лактоза 100 Пример 4. Пероральную дозу можно приготовить смешиванием и гранулированием с 10% раствором желатина. Влажные гранулы просеивают, сушат, смешивают с крахмалом,тальком и стеариновой кислотой, просеивают и прессуют в таблетку. Ингредиенты Количество, мг Эналаприл 14,3 Эплеренон 12,5 Дигидрат сульфата кальция 100 Сахароза 15 Крахмал 8 Тальк 4 Стеариновая кислота 2 Пример 4 А. Пероральную дозу можно приготовить смешиванием и гранулированием с 10% раствором желатина. Влажные гранулы просеивают, сушат, смешивают с крахмалом,тальком и стеариновой кислотой, просеивают и прессуют в таблетку. Ингредиенты Количество, мг Эналаприл 14,3 Эплеренон 12,5 Фуросемид 73,9 г Дигидрат сульфата кальция 100 Сахароза 15 Крахмал 8 Тальк 4 Стеариновая кислота 2 Лечение конкретных состояний и нарушений Фармацевтические композиции по настоящему изобретению полезны в случаях, когда показано введение блокатора рецепторов альдостерона. Было установлено, что данные композиции являются особенно эффективными для лечения сердечно-сосудистых заболеваний,таких как сердечная недостаточность; гипертензия (особенно для лечения гипертензии от легкой до средней степени тяжести); отек, связанный с печеночной недостаточностью; состояние после инфаркта миокарда; цирроз печени, профилактика инсульта и снижение частоты сердечных сокращений (ЧСС) у лиц с повышенной частотой сердечных сокращений. Для лечения сердечной недостаточности фармацевтическая композиция предпочтительно обеспечивает суточную дозу эплеренона в коли 004064 22 честве приблизительно от 25 до 200 мг, более предпочтительно приблизительно от 25 до 75 мг и еще более предпочтительно около 50 мг. Подходящей может быть суточная доза приблизительно от 0,33 до 2,67 мг/кг массы тела (на основе средней массы тела около 75 кг), предпочтительно приблизительно от 0,33 до 1,00 кг/кг массы тела и наиболее предпочтительно 0,67 мг/кг массы тела. Суточную дозу можно вводить одной-четырьмя дозами в день, предпочтительно одной дозой в день. Для лечения гипертензии фармацевтическая композиция предпочтительно обеспечивает суточную дозу эплеренона в количестве приблизительно от 50 до 300 мг, более предпочтительно приблизительно от 50 до 150 мг и еще более предпочтительно около 100 мг. Подходящей может быть суточная доза приблизительно от 0,67 до 4,00 мг/кг массы тела, предпочтительно приблизительно от 0,67 до 2,00 кг/кг массы тела и наиболее предпочтительно 1,33 мг/кг массы тела. Суточную дозу можно вводить одной-четырьмя дозами в день, предпочтительно одной дозой в день. Для лечения отека, связанного с печеночной недостаточностью, фармацевтическая композиция предпочтительно обеспечивает суточную дозу эплеренона в количестве приблизительно от 50 до 500 мг, более предпочтительно приблизительно от 100 до 400 мг и еще более предпочтительно около 300 мг. Подходящей может быть суточная доза приблизительно от 0,67 до 6,67 мг/кг массы тела, предпочтительно приблизительно от 1,33 до 5,33 кг/кг массы тела и наиболее предпочтительно 4,00 мг/кг массы тела. Суточную дозу можно вводить однойчетырьмя дозами в день, предпочтительно одной дозой в день. Было установлено, что фармацевтические композиции по настоящему изобретению обеспечивают терапевтический эффект в качестве блокаторов рецепторов альдостерона у человека через интервал времени приблизительно от 12 до 24 ч, предпочтительно около 24 ч, после перорального введения. В общем, фармацевтические композиции по настоящему изобретению обеспечивают суточную дозу эплеренона, достаточную для повышения концентраций ренина и альдостерона в сыворотке крови человека через интервал времени приблизительно от 12 до 24 ч, предпочтительно, около 24 ч, после перорального введения. Конкретно, данные композиции обеспечивают суточную дозу эплеренона, достаточную для среднего повышения концентрации ренина в сыворотке крови человека через интервал времени приблизительно от 12 до 24 ч, предпочтительно около 24 ч, после приема композиции внутрь по меньшей мере приблизительно на 10%. Подобно этому, указанные композиции обеспечивают суточную дозу эплеренона, достаточную для среднего повышения концентра 23 ций альдостерона в сыворотке крови человека через интервал времени приблизительно от 12 до 24 ч, предпочтительно около 24 ч, после приема композиции внутрь по меньшей мере приблизительно на 50%. Было установлено также, что фармацевтические композиции по настоящему изобретению обеспечивают суточную дозу эплеренона, достаточную для среднего повышения log10 отношения (натрий/калий) в моче человека через интервал времени приблизительно от 12 до 24 ч,предпочтительно около 24 ч, после приема композиции внутрь. Было установлено также, что фармацевтические композиции по настоящему изобретению обеспечивают суточную дозу эплеренона, достаточную для среднего понижения диастолического артериального давления у человека через интервал времени приблизительно от 12 до 24 ч,предпочтительно около 24 ч, после приема композиции внутрь, по меньшей мере приблизительно на 5%. Стандартные дозы Дозированные единицы лекарственных форм фармацевтических композиций могут в обычном случае содержать, например, 10, 20,25, 37,5, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300,350 или 400 мг эплеренона. Предпочтительные дозированные единицы содержат около 25, 50,100 или 150 мг эплеренона. Соответствующую дозированную единицу можно выбирать, чтобы она соответствовала желательной частоте введения, которая используется до достижения необходимой суточной дозы. Количество дозированных единиц вводимой фармацевтической композиции и схема дозирования для лечения состояния или заболевания будет зависеть от различных факторов, включая возраст, массу,пол и состояние здоровья субъекта, тяжесть состояния или заболевания, путь и частоту введения, и, таким образом, может варьировать в широких пределах. Однако, было установлено, что эффективность требующейся суточной дозы фармацевтической композиции по настоящему изобретению, как оказалось, при введении один раз в день фактически не отличается от эффективности при введении два раза в день, что касается композиций, описанных в настоящей заявке. Было высказано предположение, что композиции по настоящему изобретению доставляют количество эплеренона, достаточное для ингибирования длительного геномного ответа, вызванного связыванием альдостерона с сайтом рецепторов альдостерона. Прерывание связывания альдостерона эплереноном предотвращает индуцированный альдостероном синтез генного продукта, что приводит к продолжительному периоду функциональной блокады рецепторов альдостерона, при которой не требуется поддержания концентрации эплеренона в плазме крови. Соответственно, при использовании та 004064 24 ких таблеток для удобства введения предпочтительным является введение один раз в день. Форма фармацевтических композиций Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают эплеренон в сочетании с одним или более нетоксичных фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей и/или вспомогательных веществ (в настоящем описании собирательно называются"материалами-носителями"). Материалы-носители должны быть приемлемыми с точки зрения совместимости с другими ингредиентами композиции и не должны причинять вред реципиенту. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть адаптированы для введения любым удобным путем выбора подходящих материалов-носителей и дозы эплеренона, эффективной для целей намеченного лечения. Например, данные композиции могут быть приготовлены в форме, удобной для введения пероральным, внутрисосудистым, интраперитонеальным, подкожным, внутримышечным (в/м) или ректальным путем. Соответственно, применяемый материалноситель может представлять собой твердое вещество или жидкость, или и то, и другое, и предпочтительно приготавливается в сочетании с соединением в виде композиции с дозированными единицами, например, в виде таблетки,которая может содержать приблизительно от 1 до 95%, предпочтительно приблизительно от 10 до 75%, более предпочтительно приблизительно от 20 до 60% и еще более предпочтительно приблизительно от 20 до 40 мас.% эплеренона. Такие фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть приготовлены любым, хорошо известным в фармации способом, который заключается, главным образом, в смешивании компонентов. Твердые формы эпоксистероидных антагонистов рецепторов альдостерона Способы по настоящему изобретению охватывают введение терапевтически эффективного количества эпоксистероидных антагонистов рецепторов альдостерона, особенно эплеренона, в любой из его твердых форм, как в виде одной или более твердых форм в чистом виде, так и в форме фармацевтической композиции, включающей одну или более твердых форм эплеренона. Такие новые твердые формы включают, без ограничения, сольватированный кристаллический эплеренон, несольватированный кристаллический эплеренон и аморфный эплеренон, а также их смеси в любом полезном соотношении. В одном варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон, который вводится в соответствии со способами по настоящему изобретению, представляет несольватированную кристаллическую форму эплеренона,имеющую порошковую рентгенограмму, представленную в таблице 1 А, ниже (в настоящем 25 описании обозначается как "полиморф с более высокой температурой плавления" или "форма Н"). В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон, который вводится в соответствии со способами по настоящему изобретению, представляет несольватированную кристаллическую форму эплеренона,имеющую порошковую рентгенограмму, представленную в табл. 1 В, ниже (в настоящем описании обозначается как "полиморф с более низкой температурой плавления" или "форма L"). Не включенная в композицию форма Н демонстрирует более высокую скорость растворения (приблизительно на 30% выше) при более низких температурах (т.е., при температурах ниже температуры энантиотропного перехода,как будет обсуждено позже), чем, например, не включенная в композицию форма L. В случае,когда растворение эплеренона в желудочнокишечном тракте представляет стадию контролирования скорости при доставке эплеренона к клеткам-мишеням, более быстрое растворение обычно приводит к улучшению биодоступности. Таким образом, форма Н может улучшать профиль биодоступности по сравнению с формой L. Помимо этого, выбор твердой формы эплеренона, имеющей более высокую скорость растворения, по всей вероятности, обеспечивает более высокую гибкость в выборе наполнителей и приготовлении фармацевтических композиций с немедленным высвобождением активного ингредиента, по сравнению с другими твердыми формами, имеющими более низкую скорость растворения. Форма L обладает более высокой физической стабильностью при более низких температурах (т.е., при температурах ниже температуры энантиотропного перехода, как будет обсуждено позже), чем, например, форма Н. Твердые формы эплеренона, такие как форма L, которые не требуют использования специальной обработки или условий хранения, и которые не требуют частой инвентарной замены, являются желательными. Например, выбор твердой формы эплеренона, которая является физически стабильной во время процесса приготовления(например, во время размалывания эплеренона для получения материала с уменьшенным размером частиц и увеличенной площадью поверхности), может устранить необходимость особых условий обработки и повышенных расходов,обычно связанных с такими особыми условиями обработки. Подобно этому, выбор твердой формы эплеренона, которая является физически стабильной при различных условиях хранения(особенно при различных возможных условиях хранения готового продукта эплеренона), может помочь избежать полиморфных или других деградационных изменений эплеренона, которые могут привести к порче продукта или ухудшению его эффективности. Таким образом, выбор 26 твердой формы эплеренона, такой как форма L,имеющая более высокую физическую стабильность, обеспечивает значительные преимущества по сравнению с менее стабильными формами эплеренона. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон, который вводится в соответствии со способами по настоящему изобретению, представляет сольватированную кристаллическую форму эплеренона. Предпочтительно, сольватированные кристаллические формы практически не содержат растворителей,которые не являются фармацевтически приемлемыми. Поскольку форма Н и форма L обычно являются более физически стабильными при комнатной температуре и атмосферном давлении по сравнению с кристаллическими сольватами, сольватированные кристаллические формы, используемые в таких композициях, обычно включают фармацевтически приемлемый, кипящий при более высоких температурах и/или образующий водородные связи растворитель,такой как, без ограничения, бутанол. Полагают,что сольватированные кристаллические формы вместе могут предложить ряд различных скоростей растворения и в случаях, когда растворение эплеренона в желудочно-кишечном тракте представляет стадию контролирования скорости при доставке эплеренона к клеткам-мишеням,показатели биодоступности, соответствующие форме Н и форме L. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон, который вводится в соответствии со способами по настоящему изобретению, представляет аморфный эплеренон. Полагают, что аморфный эплеренон имеет различные скорости растворения, и в случаях,когда растворение эплеренона в желудочнокишечном тракте представляет стадию контролирования скорости при доставке эплеренона к клеткам-мишеням, показатели биодоступности,соответствующие форме Н и форме L. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон, который вводится в соответствии со способами по настоящему изобретению, представляет комбинацию, включающую первую твердую форму эплеренона и вторую твердую форму эплеренона. Обычно первую и вторую твердые формы эплеренона выбирают из формы Н, формы L, сольватированного эплеренона и аморфного эплеренона. В целом, массовое соотношение указанной первой твердой формы эплеренона и указанной второй твердой формы эплеренона предпочтительно составляет по меньшей мере приблизительно 1:9, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 1:1, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 2:1, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 5:1 и еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 9:1. 27 В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон вводят в форме фармацевтической композиции, в которой общее количество эплеренона, содержащегося в композиции, представлено в виде чистой фазы формы Н. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон вводят в форме фармацевтической композиции, в которой общее количество эплеренона, содержащегося в композиции, представлено в виде чистой фазы формы L. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон вводят в форме фармацевтической композиции, в которой общее количество эплеренона, содержащегося в композиции, представлено в виде чистой фазы сольватированного кристаллического эплеренона. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон вводят в форме фармацевтической композиции, в которой общее количество эплеренона, содержащегося в композиции, представлено в виде аморфного эплеренона. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон вводят в форме фармацевтической композиции, включающей первую твердую форму эплеренона и вторую твердую форму эплеренона, и первую и вторую твердые формы эплеренона выбирают из формы Н, формы L, сольватированного эплеренона и аморфного эплеренона. В целом, массовое соотношение указанной первой твердой формы эплеренона и указанной второй твердой формы эплеренона предпочтительно составляет по меньшей мере приблизительно 1:9, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 1:1,более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 2;1, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 5:1 и еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 9:1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эплеренон вводят в форме фармацевтической композиции, включающей форму Н и форму L. Соотношение количества формы Н и формы L в композиции обычно составляет приблизительно от 1:20 до 20:1. В других вариантах осуществления, например, это соотношение составляет приблизительно от 10:1 до 1:10; приблизительно от 5:1 до 1:5; приблизительно от 2:1 до 1:2 или около 1:1. Хотя каждый из описанных выше вариантов осуществления может охватывать введение твердой формы эплеренона с широкими пределами размеров частиц эплеренона, было установлено, что сочетание выбора твердой формы эплеренона с уменьшением размеров частиц эплеренона может улучшить биодоступность не включенного в композицию эплеренона и фар 004064 28 мацевтических композиций, включающих твердую форму эплеренона. В одном таком варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 не включенного в композицию эплеренона или эплеренона, используемого в качестве исходного материала в фармацевтической композиции,обычно составляет менее приблизительно 400 микрон, предпочтительно менее приблизительно 200 мкм, более предпочтительно, менее приблизительно 150 мкм, еще более предпочтительно, менее приблизительно 100 мкм и, еще более предпочтительно менее приблизительно 90 мкм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 40 до 100 мкм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 30 до 50 мкм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 50 до 150 мкм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 75 мкм до 125. В другом таком варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 не включенного в композицию эплеренона или эплеренона, используемого в качестве исходного материала в фармацевтической композиции,обычно составляет менее приблизительно 15 мкм, предпочтительно менее приблизительно 1 мкм, более предпочтительно менее приблизительно 800 нм, еще более предпочтительно менее приблизительно 600 нм и еще более предпочтительно менее приблизительно 400 нм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 10 нм до 1 мкм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 100 нм до 800 нм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частицD90 составляет приблизительно от 200 до 600 нм. В другом варианте осуществления настоящего изобретения размер частиц D90 составляет приблизительно от 400 до 800 нм. Твердые формы эплеренона с размером частиц менее приблизительно 15 мкм могут быть приготовлены в соответствии с применимыми для этого случая методиками уменьшения размеров частиц, известными в данной области. Такие методики включают, без ограничения,методики, описанные в патентах США 5145684, 5318767, 5384124 и 5747001. Патенты США 5145684, 5318767, 5384124 и 5747001 полностью включены в настоящее описание в качестве ссылок. В соответствии со способом патента США 5145684, например, частицы удобного размера приготавливают диспергированием эплеренона в жидкой дисперсионной среде влажным размалыванием смеси в присутствии размалывающей среды для уменьшения 29 частиц до желаемого размера. Если это необходимо или выгодно, частицы можно уменьшать в размерах в присутствии поверхностного модификатора. Определения Термин "аморфный", применяемый к эплеренону, относится к твердому состоянию, при котором молекулы эплеренона располагаются беспорядочно и не образуют различимой кристаллической решетки или элементарной ячейки. При проведении порошковой рентгенографии аморфный эплеренон не дает никаких характерных кристаллических пиков. В случае, когда в настоящей заявке ссылаются на "температуру кипения" вещества или раствора, термин "температура кипения" означает температуру кипения вещества или раствора в подходящих условиях процесса. Термин "кристаллическая форма", применяемый к эплеренону, относится к твердой форме, в которой молекулы эплеренона образуют различимую кристаллическую решетку (i),включающую различимые элементарные ячейки, и (ii) дающую пики дифракции при облучении рентгеновскими лучами. Термин "кристаллизация", используемый в настоящей заявке, может относиться к кристаллизации и/или перекристаллизации, в зависимости от применимых обстоятельств, относящихся к получению исходного материала эплеренона. Термин "варка" означает процесс, при котором взвесь твердого эплеренона в растворителе или смеси растворителей нагревают до температуры кипения растворителя или смеси растворителей в условиях, применимых к указанному процессу. Термин "прямая кристаллизация", используемый в настоящей заявке, относится к кристаллизации эплеренона непосредственно из подходящего растворителя без образования и десольватации промежуточной сольватированной кристаллической твердой формы эплеренона. Термин "размер частиц", используемый в настоящей заявке, относится к размеру частиц,измеренному с помощью обычных методик измерения размера частиц, известных в данной области, таких как рассеяние лазерного луча,фракционирование седиментацией полевого потока, фотонная корреляционная спектроскопия или дисковое центрифугирование. Термин "размер частиц D90" означает размер по меньшей мере 90% частиц, измеренный с помощью указанных обычных методик измерения размера частиц. Термин "чистота" означает химическую чистоту эплеренона, согласно обычному анализу ВЭЖХ. Используемый в настоящем описании термин "эплеренон низкой чистоты" обычно означает эплеренон, который содержит эффективное количество промотора роста формы Н и/или ингибитора роста формы L. Используе 004064 30 мый в настоящем описании термин "эплеренон высокой чистоты" обычно означает эплеренон,который не содержит или содержит менее эффективного количества промотора роста формы Н и/или ингибитора роста формы L. Термин "фазовая чистота" означает чистоту твердого состояния эплеренона с учетом конкретной кристаллической или аморфной формы эплеренона, по результатам аналитических методов инфракрасной спектроскопии, описанных в настоящей заявке. Термин "ПР" (XPRD) означает порошковую рентгенографию. Термин "Тпл" означает температуру плавления. Описание твердой формы 1. Молекулярная структура. Рентгеновский анализ монокристалла показывает, что молекулярная структура эплеренона формы Н и формы L различается, особенно с точки зрения ориентации сложноэфирной группы в положении 7 стероидного кольца. Ориентацию сложноэфирной группы можно определить углом кручения С 8-С 7-С 23-02. В кристаллической решетке формы Н молекула эплеренона принимает форму, при которой метоксигруппа сложного эфира находится почти на одной линии со связью С-Н в положении 7, а карбонильная группа находится почти над центром В-стероидного кольца. Угол кручения С 8-С 7-С 23-02 в данной структуре составляет приблизительно -73,0. При такой ориентации атом кислорода карбонила сложноэфирной группы (01) находится в тесном контакте с атомом кислорода 9,11-эпоксидного кольца (04). Расстояние 01-04 составляет около 2,97 , что меньше расстояния контакта ван дер Вааля 3,0(допуская, что радиус ван дер Вааля для кислорода составляет 1,5 ). В кристаллической решетке формы L молекула эплеренона принимает форму, при которой сложноэфирная группа повернута приблизительно на 150 относительно данной группы у формы Н и имеет угол кручения С 8-С 7-С 23-02 приблизительно +76,9. При такой ориентации метоксигруппа сложного эфира направлена на 4,5-алкеновый сегмент А-стероидного кольца. При такой ориентации расстояние между атомом кислорода сложноэфирной группы (01, 02) и атомом кислорода 9,11-эпоксидного кольца увеличивается относительно данного расстояния для формы Н. Расстояние 02-04 составляет около 3,04 , что незначительно превышает расстояние контакта ван дер Вааля. Расстояние 01-04 составляет около 3,45 . Молекула эплеренона, как оказалось, принимает структурные свойства формы L в сольватированных кристаллических формах, по результатам рентгеновского анализа монокристалла, полученным к настоящему времени. 2. Порошковая рентгенография. Различные кристаллические формы эплеренона были проанализированы с помощью порошкового дифрактометра Siemens D5000 или многоцелевого дифрактометра Inel. Для порошкового дифрактометра Siemens D5000 необработанные данные были получены для величин 2q от 2 до 50, с шагом 0,020 и шаговым периодом две секунды. Для многоцелевого дифрактометраInel образцы помещали в алюминиевый держатель образцов и необработанные данные собирали в течение 30 мин при всех двух тетавеличинах одновременно. В табл. 1 А, 1 В и 1 С представлены значимые параметры главных пиков с точки зрения величин 2q и интенсивностей для формы Н (полученной десольватацией этанолового сольвата,полученного варкой эплеренона низкой чистоты), формы L (полученной десольватацией метилэтилкетонового сольвата, полученного перекристаллизацией эплеренона высокой чистоты) и метилэтилкетоновых сольватов (полученных конверсией взвеси эплеренона высокой чистоты в метилэтилкетоне при комнатной температуре) кристаллических форм эплеренона, соответственно (рентгеновское облучение при длине волны 1,54056 ). Малые сдвиги в расположении пиков могут иметь место в образцах дифракции формы Н и формы L в результате несовершенства в расположении плоскостей дифракции кристаллов,из-за способа производства формы Н и формы L(т.е., десольватации сольвата). Помимо этого,форма Н выделена из сольвата, полученного варкой сырого эплеренона. Данный способ дает более низкую общую химическую чистоту(приблизительно 90%) формы Н. И наконец,сольватированные формы эплеренона, как ожидается, покажут некоторый сдвиг в расположении дифракционных пиков из-за повышенной подвижности молекул растворителя внутри каналов растворителя в кристаллической решетке. Таблица 1 А. Данные формы Н ИнтенсивУгол 2-тета Интервал dность 6,994 12,628 1188 8,291 10,655 2137 10,012 8,827 577 11,264 7,849 1854 12,04 7,344 7707 14,115 6,269 3121 14,438 6,13 15935 15,524 5,703 637 16,169 5,477 1349 16,699 5,305 1663 16,94 5,23 1692 17,147 5,167 2139 17,66 5,018 6883 17,91 4,949 16455 18,379 4,823 3106 18,658 4,752 1216 19,799 4,48 1499 20,235 4,385 383 21,707 4,091 1267 33 Таблица 1 С. Данные метлэтилкетона Угол 2-тета Интервал dИнтенсивИнтенсивность чис. ность % имп. в сек 7,584 11,648 5629 32,6 7,753 11,393 15929 92,3 10,151 8,707 2877 16,7 11,31 7,817 701 4,1 12,646 6,994 1027 5,9 13,193 6,705 15188 88 13,556 6,526 14225 82,4 14,074 6,287 1966 11,4 14,746 6,002 2759 16 15,165 5,837 801 4,6 15,548 5,694 1896 11 17,031 5,202 7980 46,2 17,28 5,127 17267 100 17,706 5,005 6873 39,8 18,555 4,778 545 3,2 18,871 4,699 1112 6,4 19,766 4,488 1704 9,9 20,158 4,401 1396 8,1 20,725 4,282 2644 15,3 21,787 4,076 1127 6,5 22,06 4,026 451 2,6 22,864 3,886 1542 8,9 23,412 3,796 14185 82,2 23,75 3,743 1154 6,7 24,288 3,662 3063 17,7 25,253 3,524 1318 7,6 25,503 3,49 1736 10,1 25,761 3,455 1225 7,1 26,176 3,402 1346 7,8 26,548 3,355 1098 6,4 27,357 3,257 1944 11,3 27,605 3,229 2116 12,3 27,9 3,195 858 5 28,378 3,142 583 3,4 28,749 3,103 763 4,4 29,3 3,046 1182 6,8 29,679 3,008 2606 15,1 30,402 2,9377 2184 12,6 30,739 2,9063 648 3,8 Графические примеры рентгенограмм формы Н, формы L и метилэтилкетоновых сольватов кристаллических форм эплеренона показаны на фиг. 1-А, 1-В и 1-С, соответственно. Форма Н демонстрирует различимые пики при 7,00,2, 8,30,2 и 12,00,2 градусах двух тета. Форма L демонстрирует различимые пики при 8,00,2, 12,40,2, 12,80,2 и 13,30,2 градусах двух тета. Метилэтилкетоновая сольватная кристаллическая форма демонстрирует различимые пики при 7,60,2, 7,80,2 и 13,60,2 градусах двух тета. 3. Температура плавления/разложения. Температуры плавления и/или разложения несольватированных кристаллических форм эплеренона определяли с помощью дифференциального сканирующего калориметра ТА Instruments 2920. Каждый образец (1-2 мг) помещали в алюминиевый лоток, герметично закрытый или не закрытый, и нагревали со скоростью 10 С в минуту. Пределы плавления/разложения определяли от экстраполированного начала до максимума эндотермы плавления/разложения. 34 Плавление несольватированных кристаллических форм эплеренона (формы Н и формыL) было связано с химическим разложением и потерей улавливаемого кристаллической решеткой растворителя. На температуру плавления/разложения также влияли манипуляции с твердым веществом перед анализом. Например,неразмолотая форма L (приблизительный размер частиц D90 около 180-450 мкм), полученная прямой кристаллизацией из подходящего растворителя или десольватацией сольвата, полученного кристаллизацией эплеренона высокой чистоты в подходящем растворителе или смеси растворителей, обычно имела пределы температур плавления около 237-242 С. Размолотая форма L (приблизительный размер частиц D90 около 80-100 микрон) (форма L, полученная кристаллизацией сольвата из раствора эплеренона высокой чистоты в подходящем растворителе или смеси растворителей, десольватацией сольвата с получением формы L и размалыванием полученной формы L), обычно имела более низкие и широкие пределы температур плавления/разложения около 223-234 С. Неразмолотая форма Н (приблизительный размер частиц D90 около 180-450 мкм), полученная десольватацией сольвата, полученного варкой эплеренона низкой чистоты, обычно имела более высокие пределы температур плавления/разложения около 247-251 С. Примеры DSC термограмм (а) неразмолотой формы L, прямо кристаллизованной из метилэтилкетона, (b) неразмолотой формы L, полученной десольватацией сольвата, полученного кристаллизацией эплеренона высокой чистоты из метилэтилкетона, (с) формы L, полученной размалыванием десольватированного сольвата, полученного кристаллизацией эплеренона высокой чистоты из метилэтилкетона, и (d) неразмолотой формы Н, полученной десольватацией сольвата, полученного варкой эплеренона низкой чистоты из метилэтилкетона, представлены на фиг. 2-А, 2-В, 2-С и 2-D, соответственно.DSC термограммы сольватированных форм эплеренона определяли с использованием дифференциального сканирующего калориметра Perkin Elmer Pyris 1. Каждый образец (1-10 мг) помещали в незапечатанный алюминиевый лоток и нагревали со скоростью 10 С в минуту. Одно или более эндотермальных явлений при более низких температурах были связаны с изменениями энтальпии, которые имели место в результате потери растворителя кристаллической решеткой. Эндотерма или эндотермы наивысшей температуры были связаны с плавлением/разложением формы L или формы Н эплеренона. 4. Спектрометрия инфракрасного поглощения. Спектры инфракрасного поглощения несольватированных форм эплеренона (формы Н и формы L) были получены на спектрофотометреNicolet DRIFT (диффузное отражательное инфракрасное преобразование fourier) Magna System 550. Использовали коллекторную системуSpectra-Tech и чашку для микрообразцов. Образцы (5%) анализировали в бромиде калия и сканировали от 400-4000 см-1. Инфракрасные спектры поглощения эплеренона в разбавленном растворе хлороформа (3%) или в сольватированных кристаллических формах были получены на спектрофотометре Bio-rad FTS-45. Образцы раствора хлороформа анализировали с использованием ячейки раствора с длиной оптического пути 0,22 мм с планшетами с хлоридом натрия. FTIR спектры сольватов собирали с использованием вспомогательного устройстваIBM micro-MIR (множественная внутренняя отражательная способность). Образцы сканировали от 400-4000 см-1. Примеры спектров инфракрасного поглощения (а) формы Н, (b) формы L, (с) метилэтилкетонового сольвата и (d) эплеренона в растворе хлороформа представлены на фиг. 3-А, 3-В, 3-С и 3-D, соответственно. Табл. 2 представляет показательные полосы поглощения для эплеренона в форме Н, форме L и метилэтилкетоновых сольватных кристаллических формах. Показательные полосы поглощения для эплеренона в растворе хлороформа также представлены для сравнения. Наблюдались различия между формой Н и формойL или метилэтилкетоновым сольватом, например, в карбонильной части спектра. Форма Н имеет отрезок для карбонила сложного эфира около 1739 см-1, в то время как форма L и метилэтилкетоновый сольват имеют соответствующий отрезок около 1724 и 1722 см-1, соответственно. Отрезок для карбонила сложного эфира эплеренона в растворе хлороформа наблюдается в размере около 1727 см-1. Изменение в частоте отрезка для карбонила сложного эфира между формой Н и формой L отражает изменение ориентации сложноэфирной группы между двумя кристаллическими формами. Помимо этого,отрезок для сложного эфира конъюгированного кетона в А-стероидном кольце сдвигается приблизительно с 1664-1667 см-1, как для формы Н,так и для метилэтилкетонового сольвата, до приблизительно 1655 см-1 для формы L. Соответствующий отрезок для карбонила наблюдается приблизительно на 1665 см-1 в разбавленном растворе. Другое различие между формой Н и формой L наблюдалось в участке изгиба С-Н. Форма Н имеет поглощение приблизительно на 1399 см-1, что не наблюдалось у формы L, метилэтилкетонового сольвата или эплеренона в растворе хлороформа. Отрезок 1399 см-1 наблюдается на участке расщепления СН 2 на С 2 и С 21 метиленовые группы, прилегающие к карбонильным группам. 5. Ядерный магнитный резонанс. Спектры 13 С ЯМР были получены в области 31,94 МГц. Примеры спектров 13 С ЯМР формы Н и формы L эплеренона показаны на фиг. 4 и 5, соответственно. Форма Н эплеренона, проанализированная с получением данных, отраженных на фиг. 4, не обладала фазовой чистотой и включала малое количество формы L эплеренона. Форма Н наиболее четко различалась по углеродным резонансам приблизительно на 64,8 миллионных долях, 24,7 миллионных долях и 19,2 миллионных долях. Форма L наиболее четко различалась по углеродным резонансам приблизительно на 67,1 миллионных долях и 16,0 миллионных долях. 6. Термогравиметрия. Термогравиметрический анализ сольватов выполняли с использованием термогравиметрического анализатора ТА Instruments TGA 2950. Образцы помещали на незапечатанный алюминиевый лоток с продувкой азотом. Исходная температура составляла 25 С и повышалась со скоростью около 10 С в минуту. Пример профиля термогравиметрического анализа для метилэтилкетонового сольвата показан на фиг. 6 А. 7. Параметры элементарной ячейки. Табл. 3 А, 3 В и 3 С, ниже, суммируют параметры элементарной ячейки, определенные для формы Н, формы L и нескольких сольватированных кристаллических форм. Параметр Система криОрторомсталла бическая ПространстP212121 венная группа а 21,22R 0,058 0,089 0,093 1 Молекулы сольвата не были полностью очищены из-за беспорядочного расположения молекул растворителя в каналах.R 0,098 0,152 0,067 1 Молекулы сольватов не были полностью очищены из-за беспорядочного расположения молекул растворителя в каналах. Дополнительная информация о выбранных сольватированных кристаллических формах эплеренона представлена в табл. 4 ниже. Данные об элементарных ячейках, представленные в табл. 3 А, выше, для метилэтилкетонового сольвата также являются показательными для параметров элементарных ячеек многих таких дополнительных кристаллических сольватов эплеренона. Большинство изученных кристаллических сольватов эплеренона имеют практически идентичную структуру. В то время как могут иметь место некоторые минимальные сдвиги в пиках порошковой рентгенографии от одной сольватированной кристаллической формы до следующей из-за размера инкорпорированной молекулы растворителя, в целом образцы дифракции практически одинаковы, а параметры элементарной ячейки и молекулярные позиции практически идентичны для большинства изученных сольватов. 38 Таблица 4 СтехиоОдинаковая Температура метрия структура с десольватаРастворитель(раствори- сольватом ции 1 (С) тель:эплер метилэтиленон) кетона Метилэтилкетон 1:1 нет данных 89 2-Пентанон Уксусная кислота 1:2 Да 203 Ацетон 1:1 Да 117 Бутилацетат 1:2 Да 108 Хлороформ Да 125 Этанол 1:1 Да 166 Изобутанол Изобутилацетат 1:2 Да 112 Изопропанол 1:1 Да 121 Метилацетат 1:1 Да 103 Этилпропионат 1:1 Да 122 н-Бутанол 1:1 Да 103 н-Октанол Да 116 н-Пропанол 1:1 Да 129 Пропилацетат 1:1 Да 130 Пропиленгликоль Да 188 трет-Бутанол Тетрагидрофуран 1:1 Да 136 Толуол 1:1 Да 83 трет-Бутилацетат Да 109 1 Определено как экстраполированная температура десольватации от конечного этапа потери веса растворителя,по результатам термогравиметрического анализа при скорости нагревания 10 С в минуту при продувке азотом. На температуры десольватации, однако,может влиять способ получения сольвата. Различные способы могут приводить к образованию различных количеств центров кристаллизации, способных инициировать десольватацию в сольвате при более низких температурах. Элементарная ячейка сольвата составлена из четырех молекул эплеренона. Стехиометрия молекул эплеренона и молекул растворителя в элементарной ячейке для ряда сольватов также представлена в табл. 4, выше. Элементарная ячейка формы Н составлена из четырех молекул эплеренона. Элементарная ячейка формы L составлена из двух молекул эплеренона. Элементарные ячейки сольвата во время десольватации превращаются в элементарные ячейки формы Н и/или формы L, когда молекулы эплеренона претерпевают трансляцию и ротацию для заполнения пространств, оставленных молекулами растворителя. Табл. 4 представляет также температуры десольватации для ряда различных сольватов. 8. Кристаллические свойства молекул примесей. Некоторые примеси в эплереноне могут индуцировать образование формы Н во время десольватации сольвата. В частности, оценивали эффект следующих двух молекул примесей: 7 метил водород 4,5:9,11-диэпокси-17 гидрокси-3-оксо-17-прегнан-7,21-дикарбоксилат, -лактон 3 ("диэпоксид") и 7-метил водород 11,12-эпокси-17-гидрокси-3-оксо-17 прегн-4-ен-7,21-дикарбоксилат, -лактон 4 Влияние таких молекул примесей на кристаллическую форму эплеренона, получаемую после десольватации, описано более подробно в примерах настоящей заявки. В силу сходства структуры монокристалла 7-метил водород 17-гидрокси-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-7,21-дикарбоксилата, -лактона 5 ("9,11-олефина") и формы Н, было сделано предположение о том, что 9,11-олефин также может индуцировать образование формы Н во время десольватации сольвата. Диэпоксид, 11,12-олефин и 9,11-олефин можно получить как описано, например, в примерах 47 С/ 47 В и 37 Н, в Ng et al., WO 98/25948,соответственно. Монокристаллическая форма была выделена для каждого соединения-примеси. Показательные порошковые рентгенограммы кристаллических форм, выделенных для диэпоксида,11,12-эпоксида и 9,11-олефина, представлены на фиг. 7, 8 и 10, соответственно. Порошковая рентгенограмма каждой молекулы примеси аналогична порошковой рентгенограмме формы Н,что наводит на мысль о том, что форма Н и три соединения-примеси имеют сходные монокристалические структуры. Монокристаллы каждого соединенияпримеси также были выделены и подвергнуты рентгеновскому определению структуры, чтобы убедиться, что указанные три соединения имеют монокристаллические структуры, подобные форме Н. Монокристаллы диэпоксида были выделены из метилэтилкетона. Монокристаллы 11,12-эпоксида были выделены из изопропанола. Монокристаллы 9,11-олефина были выделены из н-бутанола. Данные о структуре кристаллов, определенные для каждой кристаллической формы каждого соединения-примеси,представлены в таблице 5. Полученная кристаллическая система и параметры ячейки были практически одинаковы для кристаллических форм формы Н, диэпоксида, 11,12-эпоксида и 9,11-олефина.(а) Таблица 5 11,129,11 Форма Н Диэпоксид Эпоксид Олефин Ортором- Ортором- Ортором- Орторомбическая бическая бическая бическая Четыре соединения, представленные в табл. 5, кристаллизуются в одну и ту же пространственную группу и имеют сходные параметры ячейки (т.е., являются изоструктурными). Было высказано предположение, что диэпоксид,11,12-эпоксид и 9,11-олефин имеют строение формы Н. Относительная легкость выделения пространственной организации формы Н (непосредственно из раствора) для каждого соединения-примеси указывает на то, что решетка формы Н является стабильной формой пространственной организации данного ряда структурно сходных соединений. Получение эплеренона Исходный материал эплеренона, используемый для получения новых кристаллических форм по настоящему изобретению, можно получить с использованием способов, описанных вNg et al., WO 97/21720 и Ng et al., WO 98/25948,в частности, на схеме 1, приведенной в WО 97/21720 и WО 98/25948. Получение кристаллических форм 1. Получение сольватированной кристаллической формы. Сольватированные кристаллические формы эплеренона можно получить кристаллизацией эплеренона из подходящего растворителя или смеси подходящих растворителей. Подходящий растворитель или смесь подходящих растворителей обычно включает органический растворитель или смесь органических растворителей, которые растворяют эплеренон вместе со всеми примесями при повышенной температуре,но при охлаждении предпочтительно кристаллизуется сольват. Растворимость эплеренона в таких растворителях или смесях растворителей обычно составляет от 5 до 200 мг/мл при комнатной температуре. Растворитель или смесь растворителей предпочтительно выбирают из тех растворителей, которые использовались ранее в процессе получения исходного материала эплеренона, в частности, из тех растворителей,которые являются фармацевтически приемлемыми, если они содержатся в конечной фармацевтической композиции, включающей кри 41 сталлическую форму эплеренона. Например,система растворителя, включающая метиленхлорид, дающая сольват, включающий метиленхлорид, обычно нежелательна. Каждый используемый растворитель предпочтительно является фармацевтически приемлемым растворителем, особенно растворитель класса 2 или класса 3, как определено в "Impurities: Guideline For Residual Solvents", International Conference On Harmonisation Of TechnicalFor Human Use (Рекомендовано для принятия на 4 стадии процесса ICH 17 июля 1997 г. комиссией по выработке регламента ICH). Еще более предпочтительно, растворитель или смесь растворителей выбирают из группы, состоящей из метилэтилкетона, 1-пропанола, 2-пентанона,уксусной кислоты, ацетона, бутилацетата, хлороформа, этанола, изобутанола, изобутилацетата, метилацетата, этилпропионата, н-бутанола,н-октанола, изопропанола, пропилацетата, пропиленгликоля, трет-бутанола, тетрагидрофурана, толуола, метанола и трет-бутилацетата. Еще более предпочтительно растворитель выбирают из группы, состоящей из метилэтилкетона и этанола. Для получения сольватированной кристаллической формы эплеренона, количество исходного материала эплеренона растворяют в объеме растворителя и охлаждают до образования кристаллов. Температуру растворителя, при которой к растворителю добавляют эплеренон,обычно будут выбирать на основе кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке, например, такая температура растворителя обычно составляет по меньшей мере около 25 С, предпочтительно при приблизительно от 30 С до температуры кипения растворителя и более предпочтительно приблизительно от 25 С ниже температуры кипения растворителя до температуры кипения растворителя. Альтернативно, горячий растворитель можно добавлять к эплеренону, и смесь можно охлаждать до образования кристаллов. Температуру растворителя в то время, когда его добавляют к эплеренону, обычно будут выбирать на основе кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке, например, температура растворителя обычно составляет по меньшей мере около 25 С, предпочтительно приблизительно от 50 С до температуры кипения растворителя и более предпочтительно приблизительно от 15 С ниже температуры кипения растворителя до температуры кипения растворителя. Количество исходного материала эплеренона, смешиваемого с данным объемом растворителя, по всей вероятности, будет зависеть от кривой растворимости растворителя или смеси 42 растворителей. Обычно количество эплеренона,добавляемого к растворителю, не будет полностью растворяться в этом объеме растворителя при комнатной температуре. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке,например, количество исходного материала эплеренона, смешиваемого с данным объемом растворителя, обычно превышает приблизительно в 1,5-4,0 раза, предпочтительно приблизительно в 2,0-3,5 раза и более предпочтительно приблизительно в 2,5 раза, количество эплеренона, которое растворяется в этом объеме растворителя при комнатной температуре. После полного растворения исходного материала эплеренона в растворителе раствор обычно медленно охлаждают для кристаллизации сольватированной кристаллической формы эплеренона. Для большинства растворителей,описанных в настоящей заявке, например, раствор охлаждают со скоростью менее приблизительно 20 С в минуту, предпочтительно со скоростью около 10 С в минуту или медленнее,более предпочтительно, со скоростью около 5 С в минуту или медленнее, и еще более предпочтительно, со скоростью около 1 С в минуту или медленнее. Конечная температура, при которой собирают сольватированную кристаллическую форму, будет зависеть от кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке, например, конечная температура обычно составляет менее приблизительно 25 С, предпочтительно менее приблизительно 5 С и более предпочтительно менее приблизительно -5 С. Понижение конечной температуры обычно благоприятствует образованию сольватированной кристаллической формы. Альтернативно можно использовать другие способы получения сольвата. Примеры таких способов включают без ограничения (i) растворение исходного материала эплеренона в одном растворителе и добавление сорастворителя для облегчения кристаллизации сольватированной кристаллической формы, (ii) паровой диффузионный рост сольвата, (iii) выделение сольвата выпариванием, таким как ротационное выпаривание и (iv) конверсию взвеси. Кристаллы сольватированной кристаллической формы, полученные, как описано выше,можно отделять от растворителя любым подходящим обычным способом, таким как фильтрование или центрифугирование. Усиленное перемешивание системы растворителя во время кристаллизации обычно приводит к образованию кристаллических частиц меньших размеров. 2. Получение формы L из сольвата. Форму L эплеренона можно получать непосредственно из сольватированной кристаллической формы путем десольватации. Десольватацию можно осуществлять любым подходя 43 щим способом десольватации, таким как, без ограничения, нагревание сольвата, понижение давления среды, окружающей сольват, или их комбинация. Если сольват нагревают для удаления растворителя, например, в печи, температура сольвата во время этого процесса не превышает температуру энантиотропного перехода для формы Н и формы L. Эта температура предпочтительно не превышает приблизительно 150 С. Давление десольватации и время десольватации не являются принципиально важными. Давление десольватации предпочтительно, составляет около одной атмосферы или менее. Однако, если давление десольватации понижается, температура, при которой может осуществляться десольватация, и/или время десольватации, по всей вероятности, уменьшаются. В частности, для сольватов, имеющих более высокие температуры десольватации, сушка в вакууме позволит использовать более низкие температуры сушки. Время десольватации только должно быть достаточным для десольватации, и, следовательно, образования формы L, для завершения процесса. Чтобы гарантировать получение продукта,содержащего практически только форму L, исходным материалом эплеренона обычно является эплеренон высокой чистоты, предпочтительно практически чистый эплеренон. Исходный материал эплеренона, используемый для получения формы L эплеренона, обычно является по меньшей мере на 90% чистым, предпочтительно по меньшей мере на 95% чистым и более предпочтительно по меньшей мере на 99% чистым. Как более подробно обсуждается в других местах настоящей заявки, определенные примеси в исходном материале эплеренона могут неблагоприятно влиять на выход и содержание формы L в продукте, полученном в результате этого процесса. Кристаллизованный продукт эплеренона,полученный указанным способом из исходного материала эплеренона высокой чистоты, обычно включает по меньшей мере 10% формы L, предпочтительно, по меньшей мере 50% формы L,более предпочтительно, по меньшей мере 75% формы L, еще более предпочтительно, по меньшей мере 90% формы L, еще более предпочтительно, по меньшей мере около 95% формы L,и, еще более предпочтительно, практически чистую фазу формы L. 2. Получение формы Н из сольвата. Продукт, включающий форму Н, можно получать практически так же, как описано выше для получения формы L, (i) использованием исходного материала эплеренона низкой чистоты вместо исходного материала эплеренона высокой чистоты, (ii) затравливанием системы растворителя кристаллами чистой фазы формы Н или (iii) комбинацией (i) и (ii). 44 А. Использование примесей как промоторов и ингибиторов роста. Наличие и количество выбранных примесей в исходном материале эплеренона, в большей степени, чем общее количество всех примесей в исходном материале эплеренона, влияет на потенциал образования кристаллов формы Н во время десольватации сольвата. Выбранная примесь обычно является промотором роста формы Н или ингибитором роста формы L. Она может содержаться в исходном материале эплеренона, содержаться в растворителе или смеси растворителей перед добавлением исходного материала эплеренона, и/или может добавляться к растворителю или смеси растворителей после добавления исходного материала эплеренона. Bonafede et al., "Selective Nucleation and Growth of an Organic Polymorph bySubstate", J. Amer. Chem. Soc., Vol. 117,30 (2 августа 1995 г.), обсуждает использование промоторов роста и ингибиторов роста в полиморфных системах и включается в настоящее описание в качестве ссылки. Для настоящего изобретения примесь обычно включает соединение, имеющее структуру монокристалла,практически идентичную структуре монокристалла формы Н. Примесь предпочтительно представляет соединение, имеющее порошковую рентгенограмму, практически идентичную порошковой рентгенограмме формы Н и более предпочтительно выбирается из группы, состоящей из диэпоксида, 11,12-эпоксида, 9,11 олефина и их комбинаций. Количество примеси, необходимое для получения кристаллов формы Н, обычно может зависеть частично от растворителя или смеси растворителей, и растворимости примеси относительно эплеренона. При кристаллизации формы Н из растворителя метилэтилкетона, например, массовое соотношение диэпоксида и исходного материала эплеренона низкой чистоты обычно составляет по меньшей мере приблизительно 1:100, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 3:100, более предпочтительно приблизительно от 3:100 до 1:5 и еще более предпочтительно приблизительно от 3:100 до 1:10. 11,12-Эпоксид имеет более высокую растворимость в метилэтилкетоне, чем диэпоксид,и обычно требуется большее количество 11,12 эпоксида, необходимое для получения кристаллов формы Н. В случае, если примесь включает 11,12-эпоксид, массовое соотношение диэпоксида и исходного материала эплеренона низкой чистоты обычно составляет по меньшей мере приблизительно 1:5, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 3:25 и еще более предпочтительно приблизительно от 3:25 до 1:5. В случае, если для получения кристаллов формы Н используются примеси и диэпоксида и 11,12-эпоксида, массовое соотношение каждой примеси и исходного материала эплеренона 45 может быть ниже соответствующего соотношения при использовании для получения кристаллов формы Н только одной примеси. Смесь формы Н и формы L обычно получают, когда сольват, включающий выбранную примесь, десольватируется. Масса фракции формы Н в продукте, который получают первоначальной десольватацией сольвата, обычно составляет менее приблизительно 50%. Дальнейшая обработка данного продукта кристаллизацией или варкой, как обсуждается ниже,обычно будет увеличивать массу фракции формы L в продукте. Затравливание Кристаллы формы Н также могут быть получены затравливанием системы растворителя кристаллами чистой фазы формы Н (или промотором роста формы Н и/или ингибитором роста формы L, как обсуждалось выше) перед кристаллизацией эплеренона. Исходный материал эплеренона может представлять как эплеренон низкой чистоты, так и эплеренон высокой чистоты. Когда полученный сольват, полученный из одного из исходных материалов, десольватируют, масса фракции формы Н в продукте обычно составляет по меньшей мере приблизительно 70% и может составлять около 100%. Массовое соотношение затравочных кристаллов формы Н, добавляемых к системе растворителя, и исходного материала эплеренона,добавляемого в систему растворителя, обычно составляет по меньшей мере приблизительно 0,75:100, предпочтительно приблизительно от 0,75:100 до 1:20 и более предпочтительно приблизительно от 1:100 до 1:50. Затравочные кристаллы формы Н могут быть получены любым из способов, обсуждаемых в настоящей заявке,для получения кристаллов формы Н, особенно для получения кристаллов формы Н варкой, как обсуждается ниже. Затравочные кристаллы формы Н можно добавлять единовременно, за несколько раз или практически непрерывно в течение периода времени. Добавление затравочных кристаллов формы Н, однако, обычно завершают до того,как эплеренон начинает кристаллизоваться из раствора, т.е. затравливание завершают до достижения температуры помутнения (нижней границы метастабильной зоны). Затравливание обычно осуществляют, когда температура раствора находится в пределах приблизительно от 0,5 С выше температуры помутнения до 10 С выше температуры помутнения, предпочтительно в пределах приблизительно от 2 С до 3 С выше температуры помутнения. Если температура свыше температуры помутнения, при которой добавляются затравочные кристаллы, повышается, количество затравки, необходимое для кристаллизации кристаллов формы Н,обычно увеличивается. Затравливание предпочтительно наблюдается не только свыше температуры помутнения, 004064 46 но и в пределах метастабильной зоны. Как температура помутнения, так и метастабильная зона, зависят от растворимости и концентрации эплеренона в растворителе или смеси растворителей. При 12-кратном по объему разбавлении метилэтилкетона, например, верхняя граница метастабильной зоны обычно находится в пределах приблизительно от 70 до 73 С, а нижняя граница метастабильной зоны (т.е. температура помутнения) находится в пределах приблизительно от 57 до 63 С. Для концентрации 8 объемов метилэтилкетона, метастабильная зона является даже более узкой, поскольку раствор перенасыщен. При такой концентрации температура помутнения раствора наблюдается в пределах приблизительно от 75 до 76 С. Поскольку температура кипения метилэтилкетона составляет приблизительно 80 С при нормальных условиях, затравливание для данного раствора обычно наблюдается в пределах приблизительно от 76,5 С до температуры кипения. Показательный неограничивающий пример затравливания формой Н представлен ниже в примере 11. Кристаллизованный продукт эплеренона,полученный с использованием промотора роста формы Н или ингибитора роста формы L, и/или с использованием затравливания формой Н,включает по меньшей мере 2% формы Н, предпочтительно по меньшей мере 5% формы Н,более предпочтительно по меньшей мере 7% формы Н и еще более предпочтительно по меньшей мере около 10% формы Н. Оставшийся кристаллизованный продукт эплеренона представляет форму L. Форма Н, полученная размалыванием эплеренона В качестве еще одной альтернативы было установлено, что небольшое количество формы Н можно получить подходящим размалыванием эплеренона. Концентрации формы Н в размолотом эплереноне достигали приблизительно 3%. 4. Получение формы L из сольвата, полученного из эплеренона низкой чистоты. Как обсуждалось выше, кристаллизация эплеренона низкой чистоты для образования сольвата с последующей десольватацией сольвата обычно дает продукт, включающий и форму Н, и форму L. Продукт, имеющий большее содержание формы L, можно получить из эплеренона низкой чистоты практически так же, как описано выше для получения формы Н, затравливанием системы растворителя кристаллами чистой фазы формы L или использованием промотора роста формы L и/или ингибитора роста формы Н. Схема затравливания и массовые соотношения количества затравочных кристаллов формы L, добавляемых в систему растворителя,и количества исходного материала эплеренона,добавляемого в систему растворителя, обычно те же, что и соотношения, обсуждавшиеся выше 47 для получения формы Н эплеренона затравливанием кристаллами чистой фазы формы Н. Кристаллизованный продукт эплеренона,полученный данным способом, обычно включает по меньшей мере 10% формы L, предпочтительно по меньшей мере 50% формы L, более предпочтительно по меньшей мере 75% формыL, более предпочтительно по меньшей мере 90% формы L, еще более предпочтительно по меньшей мере около 95% формы L и еще более предпочтительно практически чистую фазу формы L. Схемы затравливания, описанные в данном разделе и в предыдущем разделе, относящемся к получению формы Н эплеренона, также могут позволить улучшить контроль за размером частиц кристаллизованного эплеренона. 5. Кристаллизация формы L непосредственно из раствора. Форма L эплеренона также может быть получена прямой кристаллизацией эплеренона из подходящего растворителя или смеси растворителей без образования промежуточного сольвата и сопутствующей потребности в десольватации. Обычно (i) растворитель имеет размер молекул, который несовместим с имеющимся пространством каналов в кристаллической решетке сольвата, (ii) эплеренон и любые примеси являются растворимыми в растворителе при повышенных температурах и (iii) при охлаждении происходит кристаллизация несольватированной формы L эплеренона. Растворимость эплеренона в растворителе или смеси растворителей обычно составляет приблизительно от 5 до 200 мг/мл при комнатной температуре. Растворитель или смесь растворителей предпочтительно включает один или более растворителей,выбранных из группы, состоящей из метанола,этилацетата, изопропилацетата, ацетонитрила,нитробензола, воды и этилбензола. Для кристаллизации формы L эплеренона непосредственно из раствора количество исходного материала эплеренона растворяют в объеме растворителя и охлаждают до образования кристаллов. Температуру растворителя, при которой эплеренон добавляют к растворителю,обычно следует выбирать на основе кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке, например, данная температура растворителя обычно составляет по меньшей мере около 25 С, при приблизительно от 30 С до температуры кипения растворителя и более предпочтительно приблизительно от 25 С ниже температуры кипения растворителя до температуры кипения растворителя. Альтернативно, горячий растворитель можно добавлять к эплеренону, и смесь можно охлаждать до образования кристаллов. Температуру растворителя в то время, когда его добавляют к эплеренону, обычно будут выбирать на основе кривой растворимости растворителя или 48 смеси растворителей. Для большинства растворителей, описанных в настоящем описании, например, температура растворителя обычно составляет по меньшей мере около 25 С, предпочтительно приблизительно от 50 С до температуры кипения растворителя и более предпочтительно приблизительно от 15 С ниже температуры кипения растворителя до температуры кипения растворителя. Количество исходного материала эплеренона, смешиваемого с данным объемом растворителя, по всей вероятности, будет зависеть от кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Обычно количество эплеренона,добавляемого к растворителю, не будет полностью растворяться в данном объеме растворителя при комнатной температуре. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке, например, количество исходного материала эплеренона, смешиваемого с данным объемом растворителя, обычно превышает приблизительно в 1,5-4,0 раза, предпочтительно приблизительно в 2,0-3,5 раза и более предпочтительно приблизительно в 2,5 раза, количество эплеренона, которое растворяется в указанном объеме растворителя при комнатной температуре. Чтобы гарантировать получение продукта,содержащего практически чистую фазу формыL, исходным материалом эплеренона обычно является эплеренон высокой чистоты. Исходный материал эплеренона предпочтительно является по меньшей мере на 65% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 90% чистым, еще более предпочтительно по меньшей мере на 98% чистым и еще более предпочтительно по меньшей мере на 99% чистым. После полного растворения исходного материала эплеренона в растворителе раствор обычно медленно охлаждают для кристаллизации сольватированной кристаллической формы эплеренона. Для большинства растворителей,описанных в настоящей заявке, например, раствор охлаждают со скоростью менее приблизительно 1,0 С в мин, предпочтительно со скоростью около 0,2 С в мин или медленнее и более предпочтительно со скоростью приблизительно от 5 С в мин до 0,1 С в мин. Конечная температура, при которой собирают кристаллы формы L, будет зависеть от кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Для большинства растворителей,описанных в настоящей заявке, например, конечная температура обычно составляет менее приблизительно 25 С, предпочтительно менее приблизительно 5 С и более предпочтительно менее приблизительно -5 С. Альтернативно можно использовать другие способы получения кристаллов формы L. Примеры таких способов включают, без ограничения, (i) растворение исходного материала эплеренона в одном растворителе и добавление сорастворителя для облегчения кристаллизации 49 формы L эплеренона, (ii) паровой диффузионный рост формы L эплеренона, (iii) выделение формы L эплеренона выпариванием, таким как ротационное выпаривание и (iv) конверсию взвеси. Кристаллы сольватированной кристаллической формы, полученные, как описано выше,можно отделять от растворителя любым подходящим обычным способом, таким как фильтрование или центрифугирование. Помимо этого, форму L эплеренона можно также получать варкой (как описано ниже) взвеси эплеренона высокой чистоты в метилэтилкетоне и фильтрованием эплеренона при температуре кипения взвеси. 6. Получение формы Н непосредственно из раствора. Было высказано предположение о том, что если кристаллизацию осуществляют при температуре выше температуры энантиотропного перехода (Тt) для формы Н и формы L, особенно если присутствуют промоторы роста формы Н или ингибиторы роста формы L, или растворитель затравлен кристаллами чистой фазы формы Н, форма Н должна кристаллизоваться непосредственно из раствора, поскольку форма Н является более стабильной при таких более высоких температурах. Используемая система растворителя предпочтительно включает растворитель с высокой температурой кипения, такой как нитробензол. Подходящие промоторы роста формы Н должны включать, без ограничения,диэпоксид и 11,12-олефин. 7. Варка эплеренона с растворителем. Сольватированные кристаллические формы, форма Н и форма L эплеренона также могут быть получены варкой исходного материала эплеренона в подходящем растворителе или смеси растворителей. В процессе варки взвесь эплеренона нагревают до температуры кипения растворителя или смеси растворителей. Например, количество исходного материала эплеренона объединяют с объемом растворителя или смеси растворителей, нагретых до кипения с обратным холодильником, и дистиллят удаляют, в то время как добавляют дополнительное количество растворителя одновременно с удалением дистиллята. Альтернативно дистиллят можно конденсировать и отправлять на повторный цикл без дополнительного добавления растворителя во время процесса варки. Обычно после удаления оригинального объема растворителя или его конденсации и прохождения повторного цикла взвесь охлаждают, и образуются сольватированные кристаллы. Сольватированные кристаллы можно отделить от растворителя любыми подходящими известными способами,такими как фильтрование или центрифугирование. Десольватация сольвата, как было описано ранее, дает форму Н или форму L эплеренона, в зависимости от наличия или отсутствия вы 004064 50 бранных примесей в сольватированных кристаллах. Подходящий растворитель или смесь растворителей обычно включает один или более растворителей, описанных в настоящей заявке выше. Растворитель можно выбрать, например,из группы, состоящей из метилэтилкетона и этанола. Количества исходного материала эплеренона, добавляемого к растворителю, который используется в процессе варки, обычно достаточно для поддержания взвеси (т.е., эплеренон в растворителе или смеси растворителей не растворен полностью) при температуре кипения растворителя или смеси растворителей. Показательные величины включают, без ограничения,около одного грамма эплеренона на четыре мл метилэтилкетона или около одного грамма эплеренона на восемь мл этанола. Раствор обычно медленно охлаждают после завершения оборота растворителя для кристаллизации сольватированной кристаллической формы эплеренона. Для изученных растворителей, например, раствор охлаждают со скоростью менее приблизительно 20 С в мин,предпочтительно, со скоростью около 10 С в минуту или медленнее, более предпочтительно,со скоростью около 5 С в мин или медленнее, и,еще более предпочтительно, со скоростью около 1 С в мин или медленнее. Конечная температура, при которой собирают сольватированную кристаллическую форму, будет зависеть от кривой растворимости растворителя или смеси растворителей. Для большинства растворителей, описанных в настоящей заявке, например, конечная температура обычно составляет менее приблизительно 25 С, предпочтительно менее приблизительно 5 С и более предпочтительно менее приблизительно -5 С. Если желательно получение продукта,включающего преимущественно или исключительно форму L, обычно подвергают варке исходный материал эплеренона высокой чистоты. Исходный материал эплеренона высокой чистоты предпочтительно является по меньшей мере на 98% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 99% чистым и еще более предпочтительно по меньшей мере на 99,5% чистым. Вываренный продукт эплеренона, полученный данным способом, обычно включает по меньшей мере 10% формы L, предпочтительно по меньшей мере 50% формы L, более предпочтительно по меньшей мере 75% формы L,более предпочтительно по меньшей мере 90% формы L, еще более предпочтительно по меньшей мере около 95% формы L и еще более предпочтительно практически чистую фазу формы L. Если желательно получение продукта,включающего преимущественно или исключительно форму Н, обычно подвергают варке ис 51 ходный материал эплеренона низкой чистоты. Исходный материал эплеренона низкой чистоты предпочтительно содержит лишь столько промотора роста формы Н и/или ингибитора роста формы L, сколько нужно для получения формы Н. Предпочтительно, исходный материал эплеренона низкой чистоты является по меньшей мере на 65% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 75% чистым и еще более предпочтительно по меньшей мере на 80% чистым. Вываренный продукт эплеренона, полученный этим способом, обычно включает по меньшей мере 10% формы Н, предпочтительно по меньшей мере 50% формы Н, более предпочтительно по меньшей мере 75% формы Н, более предпочтительно по меньшей мере 90% формы Н, еще более предпочтительно по меньшей мере около 95% формы Н и еще более предпочтительно практически чистую фазу формы Н. 8. Получение аморфного эплеренона. Аморфный эплеренон можно получить в малых количествах подходящим размельчением твердого эплеренона, таким как дробление, размалывание и/или микронизация. Чистую фазу аморфного эплеренона можно получить, например, лиофилизацией раствора эплеренона, особенно водного раствора эплеренона. Указанные процессы проиллюстрированы в примерах 17 и 18, ниже. Рабочие примеры Следующие примеры содержат подробные описания способов получения различных твердых форм эплеренона, описанных в настоящей заявке. Данные подробные описания входят в объем настоящего изобретения и служат для его иллюстрации. Данные подробные описания представлены только в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Все части приводятся по массе, а температуры в градусах Цельсия, если не указано иное. Исходный материл эплеренона,используемый в каждом из следующих примеров, был получен в соответствии со схемой 1,представленной Ng et al., WO 98/25948. Пример 5. Получение (а) сольвата метилэтилкетона из исходного материала эплеренона высокой чистоты и (b) формы L кристаллического эплеренона из полученного сольвата. А. Получение сольвата метилэтилкетона. Эплеренон высокой чистоты (437 мг; чистота более 99%, менее 0,2% диэпоксида и 11,12 эпоксида) растворяли в 10 мл метилэтилкетона нагреванием до кипения на нагревательной пластинке при магнитном перемешивании со скоростью 900 об./мин. Полученный раствор оставляли охлаждаться до комнатной температуры при непрерывном перемешивании магнитной мешалкой. После достижения комнатной температуры раствор помещали на баню с температурой 1 С при продолжающемся перемешивании в течение одного часа. Через час твердый сольват 52 метилэтилкетона собирали вакуумной фильтрацией. В. Получение формы L кристаллического эплеренона. Твердый сольват метилэтилкетона, полученный на стадии А, выше сушили в печи при температуре 100 С в течение четырех часов при атмосферном давлении. Высушенное твердое вещество определяли как чистую форму L с помощью анализов DSC и ПР. Пример 6. Получение дополнительных сольватов из исходного материала эплеренона высокой чистоты. Дополнительные кристаллические формы получали заменой метилэтилкетона одним из следующих растворителей: н-пропанол, 2 пентанон, уксусная кислота, ацетон, бутилацетат, хлороформ, этанол, изобутанол, изобутилацетат, изопропанол, метилацетат, этилпропионат, н-бутанол, н-октанол, пропилацетат, пропиленгликоль, трет-бутанол, тетрагидрофуран и толуол, и выполнением кристаллизации, практически так, как описано выше на стадии А примера 5. Форма L эплеренона образовывалась из каждого из сольватов практически так, как описано выше на стадии В примера 5. Пример 7. Получение солъвата метилэтилкетона паровым диффузионным ростом. Эплеренон (400 мг; чистота более 99,9%) растворяли в 20 мл метилэтилкетона нагреванием на нагревательной пластинке, с получением маточного раствора. 8 мл маточного раствора переносили в первый 20 мл сцинтилляционный флакон и разбавляли до 10 мл метилэтилкетоном (80%). 10 мл маточного раствора переносили во второй 20 мл сцинтилляционный флакон и разбавляли до 10 мл метилэтилкетоном (40%). Оставшиеся 2 мл маточного раствора разбавляли до 10 мл метилэтилкетоном (20%). Четыре флакона, содержавшие разбавленные растворы,переносили в эксикатор, содержавший небольшое количество гексана в качестве антирастворителя. Эксикатор герметично закрывали и позволяли парам гексана диффундировать в растворы метилэтилкетона. Кристаллы сольвата метилэтилкетона вырастали в образце 80% разбавления на следующий день. Пример 8. Получение сольвата метилэтилкетона ротационным выпариванием. Приблизительно 400 мг эплеренона (чистота более 99,9%) отвешивали в 250 мл круглодонную колбу. В колбу добавляли растворитель(150 мл) и, если необходимо, слегка нагревали до растворения твердого вещества. Полученный прозрачный раствор помещали в роторный испаритель Buchi с температурой бани около 85 С и растворитель удаляли под вакуумом. Удаление растворителя прекращали, когда в круглодонной колбе оставалось приблизительно 10 мл растворителя. Полученные твердые вещества анализировали подходящим способом (ПР, 53DSC, TGA, микроскопией и т.п.) для определения формы. Пример 9. Конверсия взвеси. Приблизительно 150 мг формы L эплеренона и 150 мг формы Н эплеренона добавляли к 5 мл этилацетата. Полученную взвесь оставляли перемешиваться со скоростью 300 об./мин (магнитная мешалка) в течение ночи. На следующий день образец твердого вещества собирали фильтрованием. Анализ образца с помощью ПР показал, что образец полностью состоял из формы L эплеренона. Пример 10. Получение (а) сольвата из исходного материала эплеренона низкой чистоты и (b) формы Н кристаллического эплеренона из полученного сольвата. Образцы, содержавшие различные количества примеси 7-метил водород 4,5:9,11 диэпокси-17-гидрокси-3-оксо-17-прегнан 7,21-дикарбоксилат, -лактон ("диэпоксид") или примеси 7-метил водород 11, 12-эпокси 17-гидрокси-3-оксо-17-прегн-4-ен-7,21-дикарбоксилат, -лактон ("11,12-эпоксид"), получали добавлением желаемого количества примеси в 10 мл сцинтилляционный флакон вместе с количеством эплеренона, достаточным для получения общей массы образца 100 мг. Процент массы диэпоксида или 11,12-эпоксида в каждом образце представлен в табл. 6 А и 6 В,соответственно. Микрочастицы для магнитного перемешивания добавляли в каждый сцинтилляционный флакон вместе с 1 мл метилэтилкетона. Флаконы плотно закрывали и твердое вещество растворяли нагреванием до кипения с обратным холодильником на нагревательной пластинке при магнитном перемешивании. После растворения твердых веществ растворы оставляли охлаждаться до комнатной температуры на нагревательной пластинке. Магнитное перемешивание продолжали во время периода охлаждения. По достижении растворами комнатной температуры твердые вещества собирали вакуумной фильтрацией и немедленно анализировали с помощью порошковой рентгенографии(ПР). Твердые вещества затем помещали в печь при 100 С и сушили в течение одного часа при атмосферном давлении. Высушенные твердые вещества анализировали с помощью ПР на содержание формы Н путем мониторинга площади пика дифракции формы Н приблизительно на 12,1 градуса два тета. Все образцы ПР записывали с помощью многоцелевого дифрактометраInel. Процент массы диэпоксида 0% 1% 2% 3% 5% А. Результаты по диэпоксиду. Фиг. 10 показывает порошковые рентгенограммы влажного отжатого осадка на фильтре(сольвата метилэтилкетона), полученного кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой диэпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 3% и (d) 5%. Интенсивность пиков стандартизована для простоты сравнения. В рентгенограммах не было пиков, характерных для формы Н или диэпоксида. Образцы были характерны для метилэтилкетонового сольвата эплеренона. Фиг. 11 показывает порошковые рентгенограммы высушенных твердых веществ, полученных кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой диэпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 3% и(d) 5%. Интенсивность пиков стандартизована для простоты сравнения. Форма Н не была выявлена в сухих образцах, соответствующих кристаллизациям из метилэтилкетона с присадкой 0 и 1%. Форма Н была выявлена в сухих образцах,соответствующих кристаллизациям из метилэтилкетона с присадкой 3 и 5%. Площадь пика дифракции формы Н приблизительно на 12,1 градуса два тета и установленное содержание формы Н для каждого образца приведены в таблице 6 С, ниже. Мас.% диэпоксида в исходной смеси эплеренона 0% 1% 3% 5% Таблица 6 С Мас.% диэпокПлощадь сида в полуУстановленпика формы ный мас.% ченных криН 12 два сталлах формы Н тета(ВЭЖХ) Не выявлено Не выявлено 0,29% Не выявлено Не выявлено 0,58% 1168 10% 1,05% 4175 30% Результаты, представленные в табл. 6 С,подтверждают, что присутствие диэпоксида влияет на образование формы Н во время десольватации. Эти результаты показывают, что диэпоксид является эффективным в индуцировании образования формы Н эплеренона, когда он включается и/или адсорбируется в кристаллы сольвата метилэтилкетона. Эксперимент с присадкой 3% диэпоксида повторяли для анализа влияния способа получения на количество формы Н, образующейся во время десольватации. В этом эксперименте сольват метилэтилкетона, полученный в результате кристаллизации с присадкой, разделяли на две части. Первую часть оставляли без воздействия, в то время как вторую часть слегка измельчали в ступе и толкли пестиком, чтобы индуцировать высокую степень разрушения кристаллов. Обе части сушили при 100 С в течение одного часа при атмосферном давлении. Высушенные твердые вещества анализировали с помощью ПР. Образцы ПР представлены на фиг. 12 для высушенных твердых веществ, полученных кристаллизацией из метилэтилкетона с 3% присадкой диэпоксида, (а) без размалывания сольвата перед сушкой и (b) с размалыванием сольвата перед сушкой. Порошковые рентгенограммы показывают большее количество формы Н в размолотом образце по сравнению с неразмолотым образцом. Такие результаты предполагают, что условия, при которых выделяется и обрабатывается сольват метилэтилкетона, могут влиять на кристаллическую форму, которая получается в результате десольватации. В. Результаты по 11,12-эпоксиду. Фиг. 13 показывает порошковые рентгенограммы отжатого осадка на фильтре (сольвата метилэтилкетона), полученного кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой 11,12 эпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 5% и (d) 10%. Интенсивность пиков стандартизована для простоты сравнения. В образцах дифракции не было пиков, характерных для формы Н или 11,12 эпоксида. Образцы были характерны для метилэтилкетонового сольвата эплеренона. Фиг. 14 показывает порошковые рентгенограммы высушенных твердых веществ, полученных кристаллизациями из метилэтилкетона с присадкой 11,12-эпоксида (а) 0%, (b) 1%, (с) 5% и (d) 10%. Интенсивность пиков стандартизована для простоты сравнения. Форма Н не была выявлена в сухих образцах, соответствующих кристаллизациям из метилэтилкетона с присадкой 0, 1% и 5%. Форма Н была выявлена в сухих образцах, соответствующих кристаллизации из метилэтилкетона с присадкой 10%. Площадь пика дифракции формы Н на 12,1 градуса два тета и установленное содержание формы Н для каждого образца приведены в табл. 6D, ниже. Таблица 6D Мас.% 11,12- Мас.% 11,12 Площадь эпоксида в эпоксида в исходной полученных пика формы смеси эплере- кристаллах Н 12 два тета нона(ВЭЖХ) 0% Данных нет Не выявлено 1% Данных нет Не выявлено 5% Данных нет Не выявлено 10% Данных нет 1541 Установленный мас.% формы Н Не выявлено Не выявлено Не выявлено 10-15% Результаты, представленные в табл. 6D,подтверждают, что присутствие 11,12-эпоксида влияет на образование формы Н во время десольватации. Процентная доля примеси при кристаллизации из метилэтилкетона, которая требуется для индуцирования образования формы Н эплеренона, как представляется, больше для 11,12-эпоксида, чем для диэпоксида. Пример 11. Влияние кристаллизации и сушки на конечную кристаллическую форму. Были проведены следующие четыре эксперимента, анализирующие влияние кристаллиза 56 ции и сушки на конечную кристаллическую форму: (i) кристаллизация эплеренона из метилэтилкетона (статистический план эксперимента 23 + 3), (ii) кристаллизация остатка маточного раствора низкого качества, (iii) кристаллизация эплеренона высокой чистоты с затравливанием формой Н и (iv) кристаллизация эплеренона низкой чистоты с затравливанием формой L. Переменные параметры в плане эксперимента включали скорость охлаждения, уровень чистоты исходного материала и конечную температуру кристаллизации. Для целей данного примера эплеренон высокой чистоты был определен как сверхчистый измельченный эплеренон (анализ ВЭЖХ показал, что этот материал был на 100,8% чистым), а эплеренон низкой чистоты был определен как эплеренон с чистотой 89%. Для получения эплеренона низкой чистоты десорбированные маточные растворы из процесса получения эплеренона анализировали и смешивали с получением материала, который содержал 61,1% эплеренона, 12,8% диэпоксида и 7,6% 11,12-эпоксида. Данный материал затем смешивали с достаточным количеством эплеренона высокой чистоты с получением 89% эплеренона. А. Кристаллизация из метилэтилкетона. В эксперименте по кристаллизации из метилэтилкетона все этапы выполняли с использованием 60 г эплеренона высокой чистоты. Высокая конечная температура была определена как 45 С, а нижняя конечная температура была определена как 5 С. Высокая скорость охлаждения была определена как 3 С в мин, а низкая скорость охлаждения была определена как 0,1 С в мин. Центральные параметры составляли: охлаждение 1,5 С, эплеренон с чистотой 94,5% и конечная температура 25 С. После фонового считывания FTIR 250 мл метилэтилкетона помещали в реактор 1L Mettler RC-1, MP10 и перемешивали при 100 об./мин. После нескольких сканирований в реактор помещали эплеренон, а затем еще 470 мл метилэтилкетона. Перемешивание усиливали до 500 об./мин для суспендирования твердых веществ и температуру загрузки повышали до 80 С. Температуру загрузки поддерживали на уровне 80 С, чтобы гарантировать растворение эплеренона. Обычно в полученном прозрачном растворе были видны черные или белые частицы. Температуру загрузки затем постепенно понижали с желательной скоростью до желательной конечной температуры,которую затем поддерживали в течение одного часа перед помещением в переносную колбу и фильтрованием. Реактор, переносную колбу и отжатый осадок на фильтре затем промывали 120 мл метилэтилкетона. После прохождения отжатого осадка промывание прекращали. Около 10 г каждого влажного осадка на фильтре сушили в вакуумной печи при номинальных условиях 75 С со слабой продувкой азотом. Для низких" экспериментов, описанных ниже, сушку в псевдоожиженном слое осуществляли при"высоких" и "низких" условиях. Сушку в псевдоожиженном слое при высоких условиях определяли как 100 С и режимом продувки "4", в то время как сушку в псевдоожиженном слое при низких условиях определяли как 40 С и режимом продувки "1". В. Кристаллизация остатка маточного раствора низкого качества. В эксперименте по кристаллизации остатка маточного раствора низкого качества 60 г материала с чистотой 61,1% и 720 мл метилэтилкетона помещали непосредственно в реактор 1LMettler RC-1, MP10. Материал с чистотой 61,1% не смешивали с эплереноном высокой чистоты перед загрузкой в реактор. Полученную смесь нагревали до 80 С; при указанной температуре получали непрозрачную взвесь. Кристаллизация продолжалась, и смесь фильтровали при 45 С в условиях быстрого охлаждения. С. Затравливание формой Н. В эксперименте по затравливанию формой Н 60 г чистого (100,8%) эплеренона и 720 мл метилэтилкетона помещали в реактор 1L MettlerRC-1, MP10. Смесь нагревали до 80 С, а затем охлаждали до 25 С со скоростью 1,5 С в мин. После охлаждения раствора до 62 С производили затравливание 3 г кристаллов чистой фазы формы Н для запуска кристаллизации. Затравочные кристаллы формы Н получали с помощью процесса варки, описанного в примере 13,ниже.D. Затравливание формой L. В эксперименте по затравливанию формойL 66,6 г эплеренона с чистотой 89,3% (полученного смешиванием 48,3 г 100% эплеренона с 18,3 г 61,1% эплеренона) и 720 мл метилэтилкетона помещали в реактор 1L Mettler RC-1,MP10. Смесь нагревали до 80 С, а затем охлаждали до 25 С со скоростью 1,5 С в мин. После охлаждения раствора до 63 С производили за 58 травливание 3 г кристаллов чистой фазы формыL для запуска кристаллизации. Затравочные кристаллы формы L получали с помощью процесса кристаллизации и десольватации, описанного в примере 5 выше. Результаты данных экспериментов представлены в таблице 7 А. В эксперименте кристаллизации n+1 форму Н выявили только в эксперименте с использованием эплеренона низкой чистоты, когда продукт содержал диэпоксид. Повышенные уровни диэпоксида в конечном продукте также наблюдались при более высоких скоростях охлаждения. В эксперименте по кристаллизации остатка маточного раствора низкого качества получали материал низкого качества, который оказался смесью диэпоксида и формы Н, по результатам порошковой рентгенографии. В эксперименте по затравливанию формой Н (когда эплеренон высокой чистоты затравливали формой Н) получали продукт, который представлял собой 77% форму Н по результатам порошковой рентгенографии, но полностью форму Н по результатам анализа DSC. Модель порошковой рентгенографии, однако, не испытывали на линейность при содержании формы Н ниже приблизительно 15%. Данный эксперимент был единственным из четырех экспериментов указанного примера, в котором форму Н получали в отсутствии диэпоксида. В эксперименте по затравливанию формойL (когда эплеренон низкой чистоты затравливали формой L) получали продукт, который целиком представлял собой форму L. Данные, полученные для сушки эплеренона в псевдоожиженном слое при высоких условиях, как оказалось, соответствовали данным,полученным для сушки в вакуумной печи. Сушка в псевдоожиженном слое при низких условиях дала результаты, которые отличались от результатов, полученных при сушке в вакуумной печи. Таблица 7 А Конечная темУровень примепература охласей 3 ждения 2 Т-ра образоваАнализ десольМас.% Мас.% ния центров 11,124 ватированного диэпоксида кристаллизакристалла эпоксида 4 ции (С) 57,0 Не опред. Не опред. 100,3 54,9 Не опред. Не опред. 100,3 60,9 Не опред. Не опред. 100,3 63,4 Не опред. Не опред. 100,5 Данных нет 4,8 36,6 43,3 52,2 0,49 0,88 98,3 53,3 0,56 1,0 98,1 59,0 0,18 0,36 99,4 63,3 0,20 0,44 99,4 61,4 0,18 0,40 99,5 60,6 0,18 0,36 99,5 55,9 0,38 0,80 98,6 Конечная температура охлаждения: (+) = 45 С; (0) = 25 С и (-) = 5 С. Уровень примесей: (+) = исходный материал эплеренона с чистотой 89,3%;= исходный материал эплеренона с чистотой 61,1%; (0) = исходный материал эплеренона с чистотой 100,8%; и (-) = исходный материал эплеренона с чистотой 94,5%. 4 Процент массы после сушки сольвата в вакуумной печи при 75 С. 5 Как представляется, смесь формы Н и диэпоксида по результатам анализа ПР. 6 Как представляется, 77% форма Н по результатам анализа ПР и 100% форма Н по результатам анализа DSC. 3 А. Чистота материала. Кубическая диаграмма чистоты продукта,чистоты исходного материала, скорости охлаждения и конечной температуры, на основе данных, представленных в табл. 7 А, показана на фиг. 15. Кубическая диаграмма предполагает,что использование материала более высокой чистоты в начале кристаллизации будет давать продукт более высокой чистоты. Конечная температура кристаллизации, как представляется,не оказывает сильного влияния на чистоту продукта. Скорость охлаждения, однако, как представляется, оказывает влияние в виде получения слегка менее чистого продукта при более высокой скорости охлаждения. Фактически уровень диэпоксида обычно был выше при более высоких скоростях охлаждения. Фиг. 16 показывает полунормальную диаграмму, полученную с использованием результатов кубической диаграммы, для определения переменных, если они существуют, оказывающих статистически значимое влияние на чистоту продукта. Чистота исходного материала имела более сильное статистически значимое влияние на чистоту продукта, хотя скорость охлаждения и взаимодействие между скоростью охлаждения и чистотой исходного материала также наблюдались как статистически значимые эффекты. Фиг. 17 представляет график взаимодействия, основанный на данных результатах и показывающий взаимодействие между чистотой исходного материала и скоростью охлаждения и чистотой продукта. При использовании эплеренона высокой чистоты (исходный материал эплеренона с чистотой 100,8%) скорость охлаждения, как представляется, не оказывает или оказывает незначительное влияние на конечную чистоту. При использовании эплеренона низкой чистоты (исходный материал эплеренона с чистотой 89,3%), однако, чистота продукта понижается по мере возрастания скорости охлаждения. Такой результат наводит на мысль о том,что при кристаллизациях эплеренона, проводимых при более высоких скоростях охлаждения,кристаллизуется больше примесей. В. Содержание формы Н. Кубическая диаграмма массовой фракции формы Н, чистоты исходного материала, скорости охлаждения и конечной температуры, на основе данных, представленных в таблице 7 А,показана на фиг. 18. Кубическая диаграмма предполагает, что использование эплеренона более высокой чистоты в начале кристаллизации будет давать меньшее количество формы Н. Конечная температура кристаллизации, как представляется, также оказывает влияние на форму конечного продукта. Скорость охлаждения, как представляется, не оказывает сильного влияния на образование формы Н, хотя некоторое количество формы Н может образовываться в результате более быстрого охлаждения при низкой конечной температуре в присутствии примесей. Фиг. 19 показывает полунормальную диаграмму, полученную с использованием результатов кубической диаграммы, для определения переменных, если они существуют, оказывающих статистически значимое влияние на количество формы Н в конечном материале. Чистота исходного материала, конечная температура кристаллизации и взаимодействие между этими двумя переменными наблюдались как статистически значимые эффекты. Фиг. 20 представляет график взаимодействия, основанный на данных результатах и показывающий взаимодействие между чистотой исходного материала и конечной температурой и конечным содержанием формы Н. При использовании эплеренона высокой чистоты (исходный материал эплеренона с чистотой 100,8%) конечная температура, как представляется, оказывает незначительное влияние на содержание формы Н. Ни в одном случае с использованием чистого эплеренона форма Н не получалась. При использовании эплеренона низкой чистоты(исходный материал эплеренона с чистотой 89,3%), однако, форма Н присутствовала в обоих случаях; при этом формы Н было значительно больше при более высоких конечных температурах. Табл. 7 В представляет массовую фракцию формы Н, определенную в материалах, высушенных с использованием сушки в псевдоожиженном слое (LAB-LINE/P.R.L. Hi-Speed FluidVacuum Drying Oven, Model DP-32). Подобное содержание формы Н наблюдалось в сравнимых материалах, высушенных с использованием сушки в псевдоожиженном слое при высоких условиях или сушки в вакуумной печи. Различие наблюдалось, однако, в сравнимых материалах, высушенных с использованием сушки в псевдоожиженном слое при низких условиях, по сравнению с сушкой в вакуумной печи.