Композиции многотипных пептидов hpv и способы лечения или предотвращения папилломавирусной инфекции у человека
Формула / Реферат
1. Выделенная полипептидная композиция, содержащая по меньшей мере два иммуногенных пептида папилломавируса L2 по меньшей мере из двух изолятов папилломавируса, в которой первый иммуногенный пептид является функционально связанным со вторым иммуногенным пептидом из второго изолята папилломавируса.
2. Полипептидная композиция по п.1, в которой иммуногенные пептиды создают линейную конфигурацию.
3. Полипептидная композиция по п.1, в которой иммуногенные пептиды функционально связаны через линкерную часть.
4. Полипептидная композиция по п.1, в которой полипептид является гибридным белком.
5. Полипептидная композиция по п.4, в которой гибридный белок содержит пептидный линкер, соединяющий иммуногенные пептиды.
6. Полипептидная композиция по п.1, в которой полипептидная композиция содержит множество копий иммуногенных пептидов.
7. Полипептидная композиция по п.1, в которой папилломавирус является членом рода папилломавирусов, выбранных из α, β, γ, δ, e, z, η, θ, i, k, l, m, n, x, о или p папилломавирусов.
8. Полипептидная композиция по п.1, в которой папилломавирус представляет собой папилломавирус человека (HPV).
9. Полипептидная композиция по п.8, в которой HPV является кожным HPV.
10. Полипептидная композиция по п.8, в которой HPV является слизистым HPV с высоким риском.
11. Полипептидная композиция по п.8, в которой иммуногенные пептиды являются иммуногенными HPV пептидами, выбранными из одного или более из числа
12. Полипептидная композиция по п.8, в которой иммуногенные пептиды выбирают из одного или более из числа HPV1, HPV2, HPV5, HPV6, HPV8, HPV11, HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, HPV51, HPV52, HPV56, HPV58, HPV59, HPV68, HPV73 или HPV82 полипептида.
13. Полипептидная композиция по п.8, в которой иммуногенные пептиды выбирают из одного или более из числа HPV6, HPV16, HPV18, HPV31, HPV39, HPV51, HPV56 и/или HPV73 полипептида.
14. Полипептидная композиция по п.8, в которой иммуногенные пептиды выбирают из числа HPV1, HPV5, HPV6, HPV16 и/или HPV18 полипептида.
15. Полипептидная композиция по п.8, в которой иммуногенные пептиды выбирают из одного или более из числа HPV6, HPV16, HPV18, HPV31 или HPV39 пептида.
16. Полипептидная композиция по п.11, в которой HPV L2 пептидные сегменты соответствуют аминокислотным положениям 13-45, 17-36, 1-88, 11-88 или 11-200 SEQ ID NO:1.
17. Полипептидная композиция по п.8, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV16 L2 пептид.
18. Полипептидная композиция по п.8, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV18 L2 пептид.
19. Полипептидная композиция по п.8, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV6 L2 пептид.
20. Полипептидная композиция по п.8, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV45 L2 пептид.
21. Полипептидная композиция по п.8, содержащая по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 или более иммуногенных пептидов.
22. Полипептидная композиция по п.8, содержащая по меньшей мере три иммуногенных пептида.
23. Полипептидная композиция по п.8, содержащая по меньшей мере пять иммуногенных пептидов.
24. Полипептидная композиция по п.8, содержащая по меньшей мере двадцать иммуногенных пептидов.
25. Полипептидная композиция по п.22, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV16 L2 пептид.
26. Полипептидная композиция по п.22, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV18 L2 пептид.
27. Полипептидная композиция по п.22, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV6 L2 пептид.
28. Полипептидная композиция по п.22, в которой по меньшей мере один HPV L2 пептид представляет собой HPV45 L2 пептид.
29. Полипептидная композиция по п.22, в которой первый HPV L2 пептид является HPV16 L2 пептидом и второй HPV L2 пептид является HPV18 L2 пептидом.
30. Полипептидная композиция по п.22, в которой первый HPV L2 пептид является HPV16 L2 пептидом и второй HPV L2 пептид является HPV6 L2 пептидом.
31. Полипептидная композиция по п.22, в которой первый HPV L2 пептид является HPV18 L2 пептидом и второй HPV L2 пептид является HPV6 L2 пептидом.
32. Полипептидная композиция по п.22, в которой первый HPV L2 пептид является HPV16 L2 пептидом, второй HPV L2 пептид является HPV18 L2 и третий HPV L2 пептид является HPV6 L2 пептидом.
33. Полипептидная композиция по п.8, в которой HPV L2 пептид имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:71-92, и/или SEQ ID NO:94-106, и/или SEQ ID NO:110-112.
34. Полипептидная композиция по п.8, в которой в HPV L2 пептиде содержится аминокислотная последовательность, которая является по меньшей мере на 60% идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:93, или SEQ ID NO:107, или SEQ ID NO:108, или SEQ ID NO:109, или SEQ ID NO:113, или SEQ ID NO:114.
35. Полипептидная композиция по п.8, в которой в HPV L2 пептиде содержится аминокислотная последовательность, которая является по меньшей мере на 70% идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:93, или SEQ ID NO:107, или SEQ ID NO:108, или SEQ ID NO:109, или SEQ ID NO:113, или SEQ ID NO:114.
36. Полипептидная композиция по п.8, в которой в HPV L2 пептиде содержится аминокислотная последовательность, которая является по меньшей мере на 80% идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:93, или SEQ ID NO:107, или SEQ ID NO:108, или SEQ ID NO:109, или SEQ ID NO:113, или SEQ ID NO:114.
37. Полипептидная композиция по п.8, в которой в HPV L2 пептиде содержится аминокислотная последовательность SEQ ID NO:93, или SEQ ID NO:107, или SEQ ID NO:108, или SEQ ID NO:109, или SEQ ID NO:113, или SEQ ID NO:114.
38. Полипептидная композиция по п.8, которая дополнительно содержит не-HPV L2 пептид.
39. Полипептидная композиция по п.38, в которой не-HPV L2 пептид является HPV L1 пептидом или HPVL1 протеином.
40. Полипептидная композиция по п.38, в которой не-HPV L2 пептид является Th-активирующим эпитопом, белком-переносчиком или адъювантом.
41. Набор, содержащий сосуд, содержащий полипептидную композицию по п.1 и необязательно содержащий вкладыш с инструкцией по применению.
42. Нуклеиновая кислота, кодирующая иммуногенный пептид папилломавируса L2, имеющий аминокислотную последовательность, охарактеризованную в пп.33-37.
43. Композиция частиц, содержащая полипептидную композицию по п.1, где частица представляет собой вирусную частицу.
44. Композиция частиц по п.43, где частица представляет собой вирусный капсид.
45. Композиция частиц по п.43, где частица представляет собой вирусоподобную частицу.
46. Композиция частиц по п.43, где частица представляет собой олигомер или мультимер полипептидной композиции.
47. Способ получения иммунного ответа на папилломавирус, включающий введение эффективного количества полипептидной композиции по п.1.
48. Способ по п.47, в котором иммунный ответ является гуморальным иммунным ответом.
49. Способ предотвращения папилломавирусной инфекции, включающий введение эффективного количества полипептидной композиции по п.1.
50. Набор, содержащий сосуд, содержащий антитело, которое связывается с полипептидной композицией по п.1, и необязательно содержащий вкладыш с инструкцией по применению.
Текст
КОМПОЗИЦИИ МНОГОТИПНЫХ ПЕПТИДОВ HPV И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ЧЕЛОВЕКА Варианты осуществления данного изобретения касаются способов и композиций многотипных(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ТЕ ДЖОНС ХОПКИНС ЮНИВЕРСИТИ (US) Область техники, к которой относится изобретение Варианты осуществления данного изобретения относятся в целом к биологии и медицине. В определенных вариантах осуществления изобретение относится к композициям и способам применения многотипных полипептидов HPV. Предшествующий уровень техники Генитально-тропные папилломавирусные инфекции человека (HPV) считаются наиболее распространенной инфекцией, передающейся половым путем, в Соединенных Штатах (CDC Report to Congress,Prevention of Genital Human Papillomavirus Infection, January 2004). Основные проявления аногенитального HPV включают генитальные бородавки (остроконечные кондиломы) и интраэпителиальную неоплазию наружных половых органов, шейки матки, ануса или пениса. Небольшая часть хронических HPV инфекций с высоким риском, если они остаются нелечеными, развивается в рак (например, рак шейки матки, в отдельных случаях рак головы и шеи, и некоторые типы немеланомного рака кожи). Сообщается о наличии ДНК HPV в 99,7% цервикальных карцином по всему миру, наводя на мысль, что инфекцияHPV является необходимой причиной этого вида рака и что это заболевание можно предотвратить с помощью профилактической вакцинации HPV (Walboomers et al., 1999). Кроме генитальных бородавок инфекция HPV может приводить к бородавкам вообще, подошвенным бородавкам или плоским бородавкам. Бородавки могут быть в разных формах в зависимости от ответственного типа HPV и затронутого эпителия. Простые бородавки (verruca vulgaris) обычно появляются на руках как экзофитные и гиперкератотические кондиломы (узелки), от телесного цвета до бурого. Подошвенные бородавки (verruca plantaris) появляются на подошвах ступней и могут быть весьма болезненными. Их можно отличить от мозолей путем удаления поверхностного слоя с целью обнаружить тромбированные капилляры. Юношеские или плоские бородавки (verruca plana) наиболее распространены среди детей и могут появляться на лице, шее, груди и сгибательных поверхностях предплечий и ног. Приблизительно 35, больше чем из 100, подтипов HPV являются характерными для аногенитального эпителия и обладают различными потенциалами для злокачественной трансформации (Munoz et al.,2003). Из 15 онкогенных генитальных типов HPV, HPV 16 является самым распространенным, за которым следует HPV 18 и HPV 45 (способствуя 50%, 20% и 10% случаев рака шейки матки, соответственно). Несмотря на усилия здравоохранения снизить число случаев и смертность от рака шейки матки путем проведения массовых обследований цитологии шейки матки, в большинстве случаев женщины,которые не подвергаются регулярной скрининговой проверке, являются причиной появления пациентов с инвазивными формами рака (Hoffman и Cavanagh, 1995), при этом рак шейки матки остается второй по распространенности причиной смерти от рака среди женщин во всем мире и наиболее распространенным видом рака у женщин в странах Африки южнее Сахары, Центральной Америке, Юго-Центральной Азии и Меланезии (субрегион Океании, простирающийся от западной стороны Западного Тихого океана до Индийского океана, север и северо-восток Австралии; термин впервые использовали для обозначения этнической и географической группы островов в отличие от Полинезии и Микронезии) (Parkin, 2001). Ежегодно диагностируется приблизительно 471000 случаев инвазивной карциномы шейки матки (Parkin,2001). Геном HPV окружен 60-нм безоболочечным икосаэдрическим капсидом (Baker et al., 1991), который содержит два генетически неродственных белка - основной капсидный белок L1 и минорный капсидный белок L2. Рекомбинантный L1 самособирается в вирусоподобные частицы (VLP), которые морфологически и иммунологически подобны природным вирионам (Kirnbauer et al., 1992). Вакцины на основе L1 VLP являются высоко протективными против инфекции, соответствующей папиломавирусному типу, которую используют для получения иммуногена (гомологичная вакцина), но являются неэффективными против чуть ли не всех наиболее близкородственных типов HPV (Roden et al., 2000). Лицензированные HPV-вакцины преодолевают это ограничение путем разработки препаратов поливалентных вакцин; CERVARIX содержит L1 VLP, полученный от HPV16 и HPV18, тогда как GARDASIL также содержит HPV6 и HPV11 L1 VLP для предотвращения доброкачественных генитальных бородавок. К сожалению, затраты и необходимость замораживания этих L1 VLP вакцин в настоящее время делает их непрактичными для применения в областях с низкими ресурсами и отдаленных районах, где они наиболее необходимы. Кроме того, так как эти вакцины являются неэффективными против значительной части онкогенных типов HPV, остаются необходимыми дорогостоящие цитологические скрининговые программы. Чтобы глобально реализовать полный потенциал предотвращения HPV, вакцина должна быть безопасной и эффективной, стабильной при температуре окружающей среды для облегчения доставки в отдаленные пункты, недорогой для производства и должна вводиться без иголок, предпочтительно в виде композиции с однократной дозой. Тяжесть болезни, обусловленная избытком типов HPV, наводит на мысль, что необходима протективная вакцина широкого действия. Таким образом, существует необходимость дополнительных перекрестно-нейтрализующих HPV вакцин. Краткое изложение изобретения Варианты осуществления настоящего изобретения направлены на многотипные пептидные композиции. Другие варианты осуществления изобретения направлены на применение этих многотипных пеп-1 019836 тидных композиций как иммуногенов или вакцин. Многотипные пептидные композиции изобретения включают два или больше пептидов (иммуногенные пептиды, т.е. пептиды, которые вызывают иммунный ответ у субъекта), представляющих изотипы или типы патогенного организма(ов) или различные иммуногенные пептиды организма. Организмы могут быть типами (типичными представителями) или вариантами организма-мишени, родом организмов или семейством организмов. В других аспектах пептиды могут происходить из различных патогенных организмов (например, HPV и HSV). В некоторых аспектах различные патогенные организмы являются связанными способами передачи (например, болезни, передающиеся половым путем (STD, или зараженным органом или системой органов (например,репродуктивная система, кожа или тому подобное). В одном аспекте, многотипная пептидная композиция может содержать некоторое количество пептидов, полученных от различных разновидностей или типов организмов, давая широкий перекрестно-нейтрализующий иммунный ответ. Перекрестная нейтрализация типов HPV может быть примером такой перекрестно-нейтрализующей многотипной пептидной композиции. В других аспектах, многотипная пептидная композиция может включать пептиды, полученные из различных патогенов, таких как передающиеся половым путем вирусы, бактерии или грибы,включая, но не ограничиваясь этим, папилломавирус (PV), HPV, цитомегаловирус (CMV), вирус герпеса,гепатита В, вирус иммунодефицита человека (HIV/AIDS), вирус герпеса, ассоциированный с саркомой Капоши (KSHV/HHV8), шанкроид (Haemophilus ducreyi), донованоз (Granuloma inguinale или Calymmatobacterium granulomatis), гонорею (Neisseria gonorrhoeae), венерическую лимфогранулему (LGV) (Chlamydia trachomatis), негонококковые уретриты (NGU) (Ureaplasma urealyticum или Mycoplasma hominis),Staphylococcus aureus, сифилис (Treponema pallidum) и тому подобное.HPV является одним примером организма, который может стать мишенью, при использовании многотипной пептидной композиции, описанной здесь. HPV инфекция вызывает 5% случаев рака у людей по всему миру. Цитологический скрининг (Рар) устанавливает предраковое заболевание шейки матки, которое можно удалить. Предотвращение инфекции HPV будет исключать виды рака, связанные с HPV, и предшествующие раку заболевания, как описано для лицензированных вакцин GARDASIL (Merck) иCERVAPIX (GSK). Однако, лицензированные вакцины получают из L1 капсидного белка и нацелены только на подгруппу онкогенных HPV типов (следовательно, Рар-скрининговые программы попрежнему нужны). Изобретатели описывают композиции и способы широкого предотвращения доброкачественных и онкогенных инфекций HPV и их последствий на основе введения многотипной HPV L2 пептидной композиции. Многотипная HPV L2 пептидная композиция будет содержать множество полипептидных сегментов, полученных от двух или более типов HPV. Сегменты или пептиды могут происходить из соответствующих областей гомологичных полипептидов (т.е. полипептида из другого типа или разновидности организма, который является функциональным эквивалентом первого полипептида) или может происходить из другого сегмента гомологичного полипептида или может быть из другого полипептида из другого типа. Сегменты полипептидов (или пептиды) скомпонованы в виде многотипной пиптидной композиции путем соединения или получения как гибридного белка, липосомы, наночастицы,полимера или пептидного дендримера (разветвленного полипептида). В определенных вариантах осуществления отдельные полипептидные композиции содержат, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29,30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200 или более иммуногенных пептидов соответствующих или гомологичных полипептидов по меньшей мере от 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200 или более различных изолятов или типов или инфекционных организмов, в которых первый иммуногенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность первого пептида первого полипептида, является функционально связанным со вторым соответствующим или гомологичным иммуногенным пептидом из второго полипептида. "Функционально связанный" относится к соединению пептида прямо или непрямо со вторым пептидом. Например,возможно, что функциональная группа является непосредственно прикрепленной к первому пептиду или поверхности с помощью части функциональной группы, которая также присоединяется ко второму полипептиду (например, пептидная связь). Альтернативно, возможно, что функциональная группа присоединяется к пептиду или поверхности через промежуточный компонент, который связывает функциональную группу с пептидом или поверхностью. Такие промежуточные компоненты часто называются линкерами. Линкеры представляют собой бифункциональные молекулы, которые могут иметь одну часть, которая химически присоединяется к первому пептиду, и вторую часть, которая химически присоединяется к функциональной группе. Настоящее изобретение включает любое количество промежуточных компонентов, известных специалистам в данной области техники. В одном варианте осуществления изобретатели описали многотипную PV пептидную композицию для предотвращения инфекции различными типами PV. В определенных аспектах, многотипная PV пептидная композиция является неприродным полипептидом, содержащим два или больше сегментов протеина PV или иммуногенные пептиды из разных PV типов, сконфигурированные как линейная (конкатемер) или разветвленная полипептидная структура, многотипный PV L2 полипептид. Пептид PV L2 может содержать всю или часть аминокислотной последовательности протеина L2 вируса из семейства па-2 019836 и/или папилломавирусов животных: папилломавируса крупного рогатого скота типа 1 (BPV1), папилломавируса крупного рогатого скота типа 2 (BPV2), папилломавируса крупного рогатого скота типа 4 (BPV4), папилломавируса американского кролика (CRPV), папилломавируса оленей (DPV), папилломавируса лосей (EEPV), собачьего орального папилломавируса (COPV), папилломавируса макак-резусов (RhPV) и орального папилломавируса кроликов (ROPV). Антиген или эпитоп PV или пептид или полипептидный сегмент изобретения может содержать 5, 6,7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100,125, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 смежных аминокислот, включая все значения и пределы между,полипептида L2 папилломавируса (например, SEQ ID NO: 1-70). В дополнительном аспекте полипептидный сегмент может содержать аминокислотное положение максимально по меньшей мере или приблизительно от 1, 2,В еще одном дополнительном аспекте пептид L2 включает полипептидный сегмент, который включает максимально, по меньшей мере, или примерно аминокислоты 17-36, 13-45, 11-88 или 11-200 полипептида L2, раскрытого в SEQ ID NO:1 здесь, или соответствующую область SEQ ID NO:2-70, или консенсусную последовательность. Каждое из положений может быть примерным положением аминокислоты и может изменяться 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более положений аминокислоты. Установленные положения аминокислот основываются на нумерации протеина HPV16 L2 (SEQ ID NO:1). Аминокислотные положения из протеинов L2 других типов HPV могут изменяться, но специалист в данной области техники сможет выровнять любую L2 аминокислотную последовательность с HPV 16 и установить пептидную последовательность, которая соответствует аминокислотным положениям HPV16 L2. В определенных вариантах осуществления пептид L2 является сегментом протеина HPV 16 L2HPV58 L2 (SEQ ID NO:57), протеина HPV59 L2 (SEQ ID NO:58), протеина HPV68 L2 (SEQ ID NO:66),протеина HPV73 L2 (SEQ ID NO:69) и/или протеина HPV82 L2 (SEQ ID NO:70). В определенных аспектах многотипный полипептид имеет общую формулу: [эпитоп X (a)-L-эпитоп Х+1 (b)-L-эпитоп Х+ n (с)] (d),в которой а и/или b и/или с и/или d представляют собой независимо 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25; и n представляет собой независимо от 1 до 98; и пептид X,пептид Х + 1, пептид X + n представляют собой различные иммуногенные эпитопы, выбранные из одного или более организмов, передающихся половым путем; и (L) может представлять линкер, химическую связь (связывание), пептидную связь. Пептиды формулы можно получить из того же самого протеина или другого протеина из того же самого организма или патогена, или эти пептиды можно получить из гомологичного или гетерологичного протеина от другого патогенного организма. В одном варианте осуществления пептид X представляет собой HPV полипептид; и пептид X + 1 представляет собой другой пептид HPV или пептид из другого патогенного организма, и пептид X + n представляет собой один или более различных пептидов из любого HPV типа или другого патогенного организма. "-L-" представляет линкер, химический линкер, пептидный линкер, химическую связь или пептидную связь в случае слияния полипептидов, или другие способы связи или присоединения пептидов к пептидам или пептидов к субстратам, которые известны в данной области. Варианты осуществления изобретения включают максимально, по меньшей мере, или приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 50, 100, 150, 200, 250,500 или более из двух или более пептидных последовательностей SEQ ID NO:71-92, 94-106, и/или 110112. В других аспектах пептиды изобретения включают соответствующие последовательности SEQ IDNO:1-70 и других HPV L2 полипептидов. В определенных аспектах L2 полипептидный сегмент является по меньшей мере или более чем на 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентичным SEQ ID NO:71-92, 94-106, 110-112, и/или соответствующим последовательностямSEQ ID NO:1-70, и/или сегментам SEQ ID NO:1-70, и/или другим PV L2 полипептидам или их сегментам. Один или более из полипептидов могут быть пригодными как вакцинная композиция для профилактики, лечения или предотвращения папилломавирусной инфекции. В определенных аспектах композиция может быть объединена с фармацевтическим переносчиком. Вакцинную композицию вводят индивидууму до воздействия папилломавируса, чтобы свести к минимуму или предотвратить папилломавирусную инфекцию, или вводят после того, как пациент был инфицирован, чтобы уменьшить тяжесть инфекции и замедлить/остановить прогрессирование болезни, или предотвратить передачу папилломавируса от инфицированного хозяина к другому индивидууму, у которого нет папилломавирусной инфекции. При использовании здесь термин "антиген" или "иммуногенный пептид" представляет собой молекулу, которая способна к связыванию с антителом или Т-клеточным рецептором. Кроме того, антиген способен вызвать гуморальный иммунный ответ и/или клеточный иммунный ответ, приводящий к выработке В- и/или Т-лимфоцитов. Структурный аспект антигена, который вызывает биологический ответ,называется здесь "антигенной детерминантой." В-лимфоциты реагируют на чужеродные антигенные детерминанты посредством выработки антител, тогда как Т-лимфоциты являются медиаторами клеточного иммунитета. Таким образом, антигенные детерминанты или эпитопы представляют собой те части антигена, которые распознаются антителами, или в контексте МНС, Т-клеточными рецепторами. Как правило, антиген может быть пептидом, полученным из протеина, выработанного патогенным организмом(например, HPV). Антигенная детерминанта может и не быть смежной последовательностью или сегментом протеина и может включать разные последовательности, которые не являются непосредственно соседними друг другу. В определенных аспектах антигенная детерминанта представляет собой PV полипептидный сегмент, PV пептид. Что касается отдельной аминокислотной последовательности, "эпитоп" представляет собой набор аминокислотных остатков, который участвует в узнавании конкретным иммуноглобулином, или в контексте Т-клеток, тех остатков, которые необходимы для узнавания протеинами Т-клеточных рецепторов и/или рецепторов главного комплекса гистосовместимости (МНС). Аминокислотные остатки эпитопа могут и не быть смежными. В ситуации с иммунной системой in vivo или in vitro эпитоп является общим признаком молекулы, например первичной, вторичной, третичной структуры пептида, и заряд, которые вместе формируют сайт, узнаваемый иммуноглобулином, Т-клеточным рецептором или молекулой HLA. На всем протяжении этого раскрытия "эпитоп" и "пептид" часто используются взаимозаменяемым образом. При использовании здесь "В-клеточный эпитоп" или "целевой эпитоп" относится к особенности пептида или протеина, который узнается В-клеточным рецептором при иммуногенном ответе на пептид,содержащий такой антиген (например, HPV L2 сегмент или его подобласть). При использовании здесь "HPV" и "папилломавирус человека" относится к членам рода папилломавирусов (PV), которые способны заразить человека. Существует две основных группы HPV (генитальная и кожная группы), каждая из которых содержит разнообразные вирусные "типы" или "штаммы" (например, HPV 16, HPV 18, HPV 31, HPV 32 и т.д.) Особый интерес в настоящем изобретении представляютHPV типы, которые связаны с генитальной инфекцией и злокачественностью. Термин "вакцина" относится к композиции, которая содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более многотипных HPV пептидных композиций настоящего изобретения. Многотипные HPV пептидные композиции обычно находятся в форме, которую можно ввести субъекту, и вызывают защитный или терапевтический иммунный ответ, достаточный, чтобы стимулировать иммунитет для того, чтобы предотвратить и/или облегчить инфекцию и/или уменьшить по меньшей мере один симптом инфекции и/или усилить эффективность другой анти-HPV терапии и/или ослабить HPV инфекцию и/или ослабить передаваемость HPV. Типично, вакцина содержит обычный физиологический раствор или забуференный водный раствор среды, в которой композиция настоящего изобретения суспендирована или растворена. В других аспектах вакцина может быть твердой (например, порошкообразной или лиофилизированной композицией). Композицию настоящего изобретения можно удобно использовать для того, чтобы предотвратить, облегчить или иначе лечить инфекцию. После введения хозяину композиция способна стимулировать иммунный ответ, включая, но не ограничиваясь этим, выработку антител и/или цитокинов и/или активацию цитотоксических Т клеток, антиген презентирующих клеток, хелперных Т-клеток, дендритных клеток и/или других клеточных ответов. При использовании здесь "профилактические" и "превентивные" вакцины или композиции являются композициями, разработанными и применяемыми для того, чтобы предотвратить инфекцию, болезнь и/или любое связанное с этим осложнение, вызванное или связанное с патогенным организмом, в частности HPV. При использовании здесь "терапевтические" вакцины или композиции являются композициями, которые разработаны для пациентов и вводятся пациентам, уже инфицированным патогенным организмом,таким как по меньшей мере один штамм HPV. Терапевтические вакцины (например, терапевтическиеHPV вакцины) используют для предотвращения и/или лечения развития доброкачественных или злокачественных опухолей у этих инфицированных индивидуумов. Термины "ингибирование", "уменьшение" или "предотвращение" или любой вариант этих терминов при использовании в пунктах формулы изобретения и/или подробном описании включают любое заметное снижение или полное ингибирование до достижения желаемого результата. Использование слова "а" или "an" при применении в сочетании с термином "содержащий" в пунктах формулы изобретения и/или подробном описании может означать "один", но также согласуется со значением "один или более," "по меньшей мере один" и "один или более чем один". На протяжении данной заявки термин "приблизительно" используется, чтобы установить, что значение включает среднеквадратичное отклонение ошибки для устройства или способа, который используют для определения значения. Применение термина "или" в пунктах формулы изобретения используется для того, чтобы обозначать "и/или", если ясно не указана ссылка только на альтернативы, или альтернативы являются взаимно исключающими, хотя раскрытие поддерживает определение, которое относится только к альтернативам и "и/или". Также предполагается, что что-либо перечисленное с использованием термина "или" также может быть специально исключено. При использовании в данном подробном описании и пункте(ах) формулы изобретения слова"включают") или "содержащий в себе, включающий" (и любая его форма, такая как "содержит" и "содержат") являются включающими и неограничивающими и не исключают дополнительные, неперечисленные элементы или стадии способа. Предполагается, что один или более членов предоставленного здесь списка могут быть специально исключены из или включены в заявленное изобретение. Другие варианты осуществления изобретения обсуждаются на всем протяжении данной заявки. Любой вариант осуществления, обсужденный в отношении одного аспекта изобретения, используют для других аспектов изобретения, также наоборот. Понятно, что варианты осуществления в разделе Примеры являются вариантами осуществления изобретения, которые применимы ко всем аспектам изобретения. Другие предметы, признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из следующего подробного описания. Следует понимать, однако, что подробное описание и отдельные примеры, хотя и показывают конкретные варианты осуществления изобретения, даны только с целью иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в рамках объема и сущности изобретения станут очевидными специалистам в данной области техники из этого подробного описания. Описание фигур Следующие фигуры составляют часть настоящего подробного описания и включены, чтобы дополнительно продемонстрировать определенные аспекты настоящего изобретения. Изобретение можно лучше понять, исходя из одного или более из этих чертежей в комбинации с подробным описанием отдельных вариантов осуществления, представленных здесь. Фиг. 1. Вакцинация мыши многотипными L2 вакцинами стимулирует более широко перекреснонейтрализующие антитела, чем мономерные L2 вакцины или L1 VLP. Мышей BALB/c вакцинировали подкожно на 0, 15, 30 дни PBS или другими L2 мономерными и многотипными конструктами (25 мкг) в адъюванте GPI-0100 (50 мкг) или HPV16 L1 VLP или HPV45 L1 VLP без адьюванта. Исследования нейтрализации in vitro были проведены с использованием HPV псевдовируса для генотипов, указанных в двукратных разведениях антисыворотки, собранной у мышей через две недели после заключительной иммунизации. Конечная точка титрования, достигающая 50% нейтрализации, нанесена на график. Фиг. 2. Один многотипный L2 протеин является иммуногенным, так что особого адъюванта не требуется для ответа широко нейтрализующих антител. Мышей BALB/c вакцинировали на 0, 15 и 30 дни подкожно только alum (1,3 мг), или только ISS1018 (10 мкг/мышь), или PBS, или 25 мкг 11-2003 (SEQISS1018 (10 мкг/мышь). Титры нейтрализации in vitro были проведены с серией двукратных разведений антисыворотки мышей, собранной через две недели после заключительной иммунизации с использованием HPV псевдовируса для указанных генотипов. Конечная точка титрования, достигающая 50% нейтрализации, нанесена на график. Фиг. 3. Заражение мышей in vivo HPV16 псевдовирусом через четыре месяца после вакцинации L2 11-2003 (SEQ ID NO:113) в разных комбинациях адъювантов. Мышей вакцинировали три раза с двухнедельными интервалами PBS или 25 мкг L2 11-200x3 (SEQ ID NO:113) в разных адъювантах и только адъюванте. Отдельные группы были, как перечислено ниже слева направо, только PBS, только alum (1,3 мг), только ISS1018 (10 мкг/мышь), только 11-2003 (SEQ ID NO:113), 11-2003 (SEQ ID NO:113) +GPI-0100 (50 (мкг/мышь) + Твин 40 (1 мг/мышь), 11-2003 (SEQ ID NO:113) alum + 1018 (10 (мкг/мышь). Приблизительно через 4 месяца иммунизирующий пластырь на брюшке каждой BALB/c мыши (при обезболивании) сбрили с помощью электрической бритвы, не травмируя эпителий. Затем мышей заражали 3109 HPVI6 псевдовирионами (100 нг) в 10 мкл 0,6% карбоксиметилцеллюлозы, несущей люциферазную конструкцию-репортер (luciferase reporter construct). Через три дня мышей обезболивали и впрыскивали люциферин, при этом изображения получали в течение 10 мин с помощью детектора биолюминесценции Xenogen IVIS 200. Одинаково отмерянные области, окружающие место инокуляции, анализировали с помощью программного обеспечения Living Image 2.20, и единицы относительной люминесценции наносили на график относительно мышей, вакцинированных HPV16 L1 до заражения. Фиг. 4. Вакцинация мышей L2 11-2003 (SEQ ID NO:113) или 11-885 (SEQ ID NO:108) вызывает более низкие, но более широко нейтрализующие антитела по сравнению с GARDASIL. Мышей вакцинировали три раза на 0, 15, и 30 дни с GARDASIL в дозе одна пятая от человеческой дозы или 25 мкгL2 11-2003 (SEQ ID NO:113) или 11-885 (SEQ ID NO:108) в адъюванте GPI-0100 (50 мкг). Титры нейтрализации in vitro были проведены с серией двукратных разведений антисыворотки мышей, собранной через две недели после заключительной иммунизации с использованием HPV псевдовируса для указанных генотипов. Конечная точка титрования, достигающая 50% нейтрализации, нанесена на график. Подробное описание изобретения Высокая стоимость и защита, ограниченная типом, с помощью вакцин первого поколения с HPV L1 вирусоподобными частицами делают необходимым развитие дополнительного широко протективного второго поколения композиций и вакцин. Минорный капсидный белок L2 защищает животных от заражения папилломавирусом при помощи индуцирования нейтрализующих антител. Изобретатели заметили, что в то время как L2 индуцирует антитела, которые перекрестно нейтрализуют разные папилломавирусные типы, L2-специфические антитела обычно нейтрализуют родственные типы более эффективно,чем эволюционно менее связанные типы. Для усиления перекрестной защиты были сделаны L2 гибрид-7 019836 ные белки, состоящие из известных перекрестно нейтрализующих эпитопов дивергентных типов HPV. Вакцинацию HPV16 L2 полипептидами, содержащими остатки 17-36, 1-88 или 11-200, сравнили с тремя многотипными L2 гибридными протеинами: 11-2003 (SEQ ID NO: 113) типы (HPV 6, 16, 18), 11-885(SEQ ID NO:108) типы (HPV 1, 5, 6, 16, 18), 17-3622 типы (5 кожных, 2 слизистых с низким риском и 15 онкогенных типов). Мышей вакцинировали три раза подкожно 25 мкг антигена в адъюванте GPI-0100. Из числа всех монотипных полипептидов 11-200 вызывал самый высокий титр нейтрализации HPV 16. Однако, 11-2003 вызывал самый высокий титр нейтрализации против HPV45 и HPV58, а также с HPV 16, HPV 18, HPV6 по сравнению с другими многотипными и монотипными гибридными белками. Иммунизированных мышей заражали HPV16 псевдовирусом, экспрессирующим люциферазу. Вакцинация 112003 (SEQ ID NO:113) защищала мышей против заражения HPV16, а также HPV16 L1 VLP. Сравнили индукцию HPV-нейтрализующих антител после вакцинации 25 мкг 11-2003 (SEQ ID NO:113) одним протеином или с alum или 50 мкг или 200 мкг GPI-0100, или 50 мкг GPI-0100 с Твином-40. Присутствие адъюванта значительно повышало гуморальный ответ на 11-2003, но не наблюдалось значимого различия между адьювантами. Изобретатели заключают, что вакцинация одним гибридным белком, содержащим HPV6 L2 11-200 (SEQ ID NO:96), HPV16 L2 11-200 (SEQ ID NO:100) и HPV18 L2 11-200 (SEQ IDNO:101), полученным в Е. coli и заключенным в состав с адъювантом, является протективной и индуцирует широко перекрестно-нейтрализующие антитела. Также предполагается, что такие многотипные HPV композиции можно использовать в соединении с или в качестве модели для других патогенных организмов, в частности тех, которые связаны с болезнями, передающимися таким же образом, как HPV, например, болезни, передающиеся половым путем. Таким образом, идеи данной заявки в отношении HPV могут распространяться на другой патогенный организм или отдельно или в соединении с многотипными HPV L2 пептидами.I. Терапевтические и профилактические композиции Варианты осуществления изобретения включают HPV пептидные композиции, содержащие два или больше HPV полипептидных сегментов от двух или более типов HPV. В определенных аспектах типыHPV включают все или некоторые из типов HPV, которые являются патогенными в отношении отдельного организма или животного или человека при введении композиции. В определенных вариантах осуществления полипептид HPV содержит по меньшей мере два L2 эпитопа или пептида. В еще одном аспекте полипептид HPV содержит L2 эпитоп по меньшей мере из двух типов HPV. Здесь подробно описаны полипептидные сегменты HPV. Способы настоящего изобретения включают лечение болезни или состояния, вызванного или связанного с папилломавирусной инфекцией (например, HPV инфекцией). Иммуногенные многотипныеHPV пептидные композиции и/или антитела, которые связывают то же самое, могут быть даны, чтобы вызвать или обеспечить терапевтический ответ у человека, инфицированного, или подозреваемого в том,что он подвергался воздействию, или находящегося под угрозой заражения, или подвергнутого воздействию HPV. Способы можно использовать в отношении индивидуумов, которые были позитивными при проверке на HPV или другие болезни, передающиеся половым путем, или которые считаются находящимися под угрозой инфекции, исходя из возможного воздействия или будущего воздействия. В частности изобретение включает способы лечения инфекций HPV. В некоторых вариантах лечение проводится в присутствии адъювантов или переносчиков или других антигенов, или HPV-антигенов или антигенов от других патогенов, которые несут риск, связанный или соответствующий риску воздействия HPV. Кроме того, в некоторых случаях лечение включает введение других средств, обычно применяемых против вирусной инфекции, например, одного или более противовирусных препаратов. В определенных аспектах изобретения пептиды изобретения сконфигурированы так, что многотипные пептиды презентируются компонентам иммунной системы в непосредственной близости друг к другу. Каждый пептид может стимулировать многотипные компоненты иммунной системы (две или более эффекторных клеток) или один компонент иммунной системы (эффекторную клетку с предрасположенностью к узнаванию многотипных типов или вариантов пептидов). Пептиды могут быть сконфигурированы как линейный конкатемер, как разветвленный конкатемер (дендример), как предполагается из основы или основания (например, наночастица, липосома, полимер и т.д.). Число сайтов узнавания или пептидов, представляющих объект (частицу), и их расположение будет определяться степенью олигомеризации пептидов. Например, четырехвалентный объект, такой как стрептавидин, будет давать в результате тетрамер. Однако, возможны более высокие валентности. Предпочтительно число пептидов будет находиться в пределах от 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 до 10, 20, 25, 50 или более, включая все интервалы между значениями. В определенных вариантах осуществления многотипная пептидная композиция представляет собой природный полимер или его производное, такое как протеин, разветвленный полипептид (дендример),мультимерный протеин или нуклеиновая кислота, кодирующая то же самое. Некоторое количество пептидов может быть присоединено к полисахариду, такому как декстран, крахмал, целлюлоза, гиалуроновая кислота, хитин или альгиновая кислота или производное этих полисахаридов; синтетический поли-8 019836 мер, такой как полипропиленгликоль, полиэтиленгликоль (PEG); фосфолипидная мембрана, такая как везикула или липосома, неорганическая частица, такая как полистрол или акриловые шарики или магнитные шарики. В определенных аспектах многотипный полипептид является дендримером. Эти дендримеры, например, могут быть сделаны согласно протоколу, как раскрыто в 11 главе "Chemoselective and orthogonalOxford University Press (2000), и Патентной публикации США 20080207485, которая включена в данное описание путем отсылки. Некоторые другие методы синтеза разветвленных полипептидов хорошо известны практикующим специалистам в данной области техники. Разветвленный полипептид имеет полипептиды, введенные в заранее определенные сайты в двух или более из его ветвей. Каждая ветвь пептида может иметь желательную длину. Предпочтительно длина каждой ветви составляет менее чем 24 аминокислоты. Разветвление пептида может осуществляться путем разветвления пептида во время синтеза на остатках лизина (Lys) с помощью известных методов. Таким способом пептид разветвляется на первом остатке лизина на две ветви и дополнительно разветвляется на следующих остатках лизина, чтобы впоследствии образовать четырехвалентную частицу. Другие валентности, такие как октамеры, можно осуществить с помощью проведения некоторого количества шагов разветвления. Добавочные (нечетные) валентности также достигаются путем только частичного разветвления синтетического пептида. В определенных вариантах осуществления один или более концов полипептида присоединяется к основе или основанию, например, в одном аспекте образуя полипептидные петли, выдающиеся из основы. Пептиды изобретения можно включить в разные формы или носители для доставки, такие как вирусоподобные частицы (VLP) или липосомы, или нанести на поверхность биодеградируемой частицы, или на поверхность шариков или микрочастиц или наночастиц. А. Инфекционные агенты"Инфекция" или "инфекционная болезнь" при использовании здесь относится к расстройству, возникающему в результате инвазии хозяина, поверхностно, локально или системно инфекционным организмом. Инфекционные организмы включают бактерии, вирусы, паразитов, грибы и простейшие организмы. Бактерии включают грамотрицательные и грамположительные бактерии. Примеры грамположительных бактерий включают, но не ограничиваются этим, виды Pasteurella, виды Staphylococcus, включаяdifficile. Грамотрицательные бактерии включают, но не ограничиваются этим, виды Neisseria, включая NeisseriaFusobacterium nucleatum; Calymmatobacterium granulomatis; виды Streptobacillus, включая Streptobacillus moniliformis; виды Legionella, включая Legionella pneumophila. Другие типы бактерий включают кислотоустойчивые бациллы, спирохеты и актиномицеты. Примеры кислотоустойчивых бацилл включают виды Mycobacterium, включая Mycobacterium tuberculosis иMycobacterium leprae. Примеры спирохет включают виды Treponema, включая Treponema pallidum, Treponema pertenue, виды Borrelia, включая Borrelia burgdorferi (болезнь Лима) и Borrelia recurrentis, и видыLeptospira. Примеры актиномицетов включают виды Actinomyces, включая Actinomyces israelii, и видыNocardia, включая Nocardia asteroides. Примеры вирусов включают, но не ограничиваются этим, ретровирусы, вирусы иммунодефицита человека, включая HIV-1, HDTV-III, LAVE, HTLV-III/LAV, HIV-III, HIV-LP, цитомегаловирусы (CMV),пикорнавирусы, полиовирусы, вирус гепатита А, энтеровирусы, человеческие Коксаки вирусы, риновирусы, эховирусы, калицивирусы, тогавирусы, вирус энцефалита лошадей, вирус краснухи, флавивирусы,вирус тропической лихорадки, вирус энцефалита, вирус желтой лихорадки, коронавирусы, рабдовирусы,вирусы везикулярного стоматита, вирусы бешенства, филовирусы, вирус Эбола, парамиксовирусы, вирусы парагриппа, вирус свинки, вирус кори, респираторносинцитиальный вирус (RSV), ортомиксовирусы,вирусы гриппа, Bungaviruses, хантавирусы, флебовирусы и найровирусы, Arena viruses, вирусы геморрагической лихорадки, реовирусы, орбивирусы, ротавирусы, бимавирусы буньявирусы, гепаднавирусы,-9 019836 вирус гепатита В, парвовирусы, паповавирусы, папилломавирусы, полиомавирусы, аденовирусы, герпесвирусы, включая вирус простого герпеса 1 и 2, вирус ветряной оспы, поксвирусы, вирусы оспы, вирусы коровьей оспы, иридовирусы, вирус африканской лихорадки свиней, вирус гепатита дельта, вирусы гепатита не-А, не-В, гепатита С, норовирусы, астровирусы и неклассифицированные вирусы. Примеры грибов включают, но не ограничиваются этим, виды Cryptococcus, включая Crytococcusimmitis; виды Paracoccidioides, включая Paracoccidioides brasiliensis; виды Blastomyces, включая Blastomyces dermatitidis; виды Chlamydia, включая Chlamydia trachomatis; виды Candida, включая Candida albicans; виды Sporothrix, включая Sporothrix schenckii; виды Aspergillus и грибы мукоромикоза. Другие инфекционные организмы включают паразитов. Паразиты включают виды Plasmodium, такие как виды Plasmodium, включая Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovate и Plasmodium vivax и Toxoplasma gondii. Переносимые с кровью и/или тканевые паразиты включают видыgambiense, Trypanosoma rhodesiense (летаргический энцефалит или Африканский трипаносомоз) и Trypanosoma cruzi (болень Шагаса). Другие имеющие отношение к медицине микроорганизмы широко описаны в литературе, например, см. работу Thomas, Medical Microbiology, Bailliere Tindall, Great Britain 1983 и Murray, Medical Microbiology (ISBN 0323033032), 2005, полное содержание которой включено в данное описание путем отсылки. В. HPV вакцины Настоящее изобретение включает композиции для предотвращения или облегчения HPV инфекций. По существу, изобретение рассматривает вакцины для применения в осуществлении и активной и пассивной иммунизации. Предложенные иммуногенные композиции, подходящие для применения в качестве вакцины, можно приготовить из многотипного HPV полипептида(ов), содержащего сегменты протеина HPV L2. В других вариантах осуществления многотипные HPV L2 полипептиды можно использовать в комбинации с другими HPV протеинами или их сегментами, такими как Е 1, Е 2, Е 3, Е 4, Е 5, Е 6, Е 7, Е 8 и/или L1 протеин. См., например, Патенты США 7425438, 7416846, 7416732, 7407807, 7374767, 7201908,7189513 и 7288258, каждый из которых полностью включен в данное описание путем отсылки. Как правило, вакцины вводят способом, совместимым с композицией вакцины, и в таком количестве, которое будет терапевтически эффективным или иммуногенным. Вводимое количество зависит от субъекта, которого нужно лечить, включая способность иммунной системы индивидуума синтезировать антитела и степень желательной защиты. Точные количества активного ингредиента, необходимого для введения, зависит от решения практикующего специалиста. Как правило, 0, 1, 1,5, 10, 20, 30, 40, 50, 60,70, 80, 90 до 100 нг, мкг, или мг может быть введено на вакцинацию или введение. Подходящие режимы для первоначального введения и повторных иммунизаций также изменяются, но служат типичным примером первоначального введения, за которым следуют более поздние инокуляции или другие введения. 1. HPV полипептиды и полипептидные сегменты В определенных аспектах изобретения различные сегменты полипептидов HPV используются какHPV петидный компонент многотипной HPV полипептидной вакцины. В отдельных аспектах HPV полипептид представляет собой L2 полипептид. В дополнительном аспекте L2 полипептид представляет собой и папилломавирусы животных: папилломавирус крупного рогатого скота типа (BPV1), папилломавирус крупного рогатого скота типа 2 (BPV2), папилломавирус крупного рогатого скота типа 4 (BPV4),папилломавирус американского кролика (папилломавирус (CRPV), папилломавирус оленей (DPV), папилломавирус лосей (EEPV), собачий оральный папилломавирус (COPV), папилломавирус макакрезусов (RhPV) и оральный папилломавирус кроликов (ROPV). Он-лайн справочник данных о папилломавирусах человека собирает и публикует важные молекулярные данные, касающиеся папилломавирусов человека (HPV) и родственных папилломавирусов животных. Справочник доступен в интернете по адресу (hpv-web.lanl.gov/stdgen/viras/hpv/compendium/htdocs/HTMLFILES/HP Vcompintro4.html), который включен в данное описание путем ссылки на дату приоритета и дату подачи данной заявки. Примеры L2 полипептидов можно найти в открыто доступных базах данных протеинов, таких какGenBank (gb), SwissPro (sp), EMBL и тому подобных. Характерные входные данные в базах данных, перечисленные по HPV-типу с инвентарным номером в скобках, включают, но не ограничиваются этим: Каждая аминокислотная последовательность, представленная инвентарным номером, включена сюда путем ссылки на дату подачи этой заявки. В определенных аспектах по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,9, 10 или более L2 пептидов по меньшей мере из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20,21, 22 или более типов HPV соединены вместе, чтобы образовать многотипный HPV-полипептид (см.SEQ ID NO: 94, 108, 109 и 113). Соединение сегментов может происходить в результате экспрессии или синтеза гибридного белка, или при химическом соединении пептидов друг с другом или химическом соединении пептидов с общим субстратом или полимером. Пептид изобретения может включать 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, ПО, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310,320 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480 или 490 последовательных аминокислот, включая все значения и интервалы между ними, начиная от аминокислоты 1,5, 10, 15, 20,25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, ПО, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200,210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 43,440, 450, 460, 470, 480 или 490, включая все значения между ними, полипептида HPV L2. В определенных вариантах осуществления HPV L2 полипептид включает, но не ограничивается этим, от SEQ IDNO:1 до SEQ ID NO:70. В определенных аспектах многотипный HPV полипептид содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 60,70, 80, 90, 100, 200 или более 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более пептидов, выбранных из HPV L2 17-36 - DIYPSCKISNTCPPDIQNKI (SEQ ID NO:72), HPV L2 17-36 - DLYRTCKQAGTCPPDIIPRV (SEQ В еще одном аспекте многотипный HPV полипептид содержит аминопоследовательность HPV L2 17-3622 В еще одном аспекте многотипный HPV полипептид содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 60, 70, 80, 90, 100, 200 или более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более пептидов, выбранных из В определенных вариантах осуществления многотипный HPV полипептид содержит аминокислоту В еще одном варианте осуществления многотипный HPV полипептид содержит аминокислоту HPV В еще одном варианте осуществления многотипный HPV полипептид содержит гомологичные области из L2 HPV6b, HPV16, HPV18, HPV31, HPV39, HPV51, HPV56 и HPV73. Аминокислота HPV L2 11-888 представляет собой В еще одном варианте осуществления многотипный HPV полипептид содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 60, 70, 80, 90, 100, 200 или более из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более пептидов, выбранных из HPV L2 11-200 В определенных вариантах осуществления многотипный полипептид "FurinDKILKl5" содержит L2 протеиновые последовательности из HPV6b, HPV11, HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39,HPV45, HPV51, HPV52, HPV56, HPV58, HPV59 и HPV73. Аминокислотная последовательность FurinDKILKl5 представляет собой Как правило, пептиды изобретения синтезируют с помощью способов синтеза пептидов, известных специалистам в данной области техники, и/или соединяют, используя химию пептидов, известную специалистам в данной области техники. В других аспектах пептиды и полипептиды изобретения можно экспрессировать и очистить с использованием рекомбинантных методов, известных специалистам в данной области. 2. Линкер В данное изобретение включаются олигомеры и гибридные белки, которые содержат некоторое количество пептидов. Такие олигомеры могут быть в форме ковалентно-связанных или нековалентносвязанных мультимеров, включая димеры, тримеры или высшие олигомеры. В одном аспекте изобретения олигомеры сохраняют способность стимулировать иммунный ответ. Один вариант осуществления изобретения касается олигомеров, содержащих многочисленные пептиды, присоединенные через ковалентные или нековалентные линкеры между пептидами. Такие линкеры могут быть пептидными линкерами (спейсерами), или пептидами, которые имеют свойство активировать олигомеризацию. Лейциновые"молнии" и определенные полипептиды, полученные из антител, принадлежат к числу пептидов, которые могут способствовать олигомеризации пептидов, присоединенных сюда. В числе подходящих пептидных линкеров находятся линкеры, описанные в Патентах США 4751180 и 4935233, которые таким образом включены путем отсылки. В определенных вариантах осуществления пептиды изобретения связаны пептидными связями без различимых линкеров между пептидами. 3. Средства доставки Известные композиции для вакцин использовали целый ряд средств доставки для представления таких антигенов иммунной системе млекопитающих с целью вызвать протективный или терапевтический иммунный ответ против патогена. Такие "средства доставки" включают в качестве вакцинного фактора (агента) инактивированный нагреванием или химически инактивированный целый вирус, белковые частицы целого вируса, вирусные векторы, такие как аденовирус и коровья оспа, в числе других, и векторы или плазмиды на основе ДНК. Вирусоподобные частицы (VLP) были изучены как вакцинные агенты. Вообще, заключенные в белковую оболочку (инкапсулированные) вирусы содержат белковую оболочку или "капсид", который собран, чтобы содержать вирусную нуклеиновую кислоту. Многие вирусы имеют капсиды, которые могут"само-собираться" из отдельно экспрессированных капсидных белков, чтобы образовать VLP, капсид экспрессируется и внутри клетки ("in vivo сборка") и вне клетки после выделения и очистки ("in vitro сборка"). Вирусоподобные частицы копируют общую структуру вирусных частиц без условия содержания инфекционного материала. VLP могут не иметь вирусный ДНК или РНК геном, но сохраняют трехмерную структуру настоящих вирусов. VLP обладают способностью стимулировать ответы, опосредованные В-клетками, CD4 пролиферативные ответы и ответы цитотоксических Т-лимфоцитов. См. Schirmbeck etal. (2000) PNAS USA 100, 6753-6758. Также смотри патентную публикацию США 20070041999, которая полностью включена путем отсылки.VLP вырабатывают более чем 30 различных вирусов, которые заражают людей и других животных,включая норовирус, вирусы гепатитов В и С, папилломавирус, парвовирус и вирус гриппа А. Вирусоподобными частицами также можно манипулировать, чтобы они действовали как носители молекул для доставки эпитопов от других патогенных агентов. Смотри работы Noad et al. (2003) Trendsin Microbiology 11(9), 438-444; Sadeyen et al. (2003) Virology 309:32-40; PCT публикацию WO 2005/005614; Патентные публикации США 2004/0033585 и 2005/0048082; Патенты США 6448070; 6110466: 6171591; Brinkman et al. (2004) Lett. Drug Des.Disc. 1:137-147. Капсидный белок может быть модифицирован для того, чтобы содержать антигенный пептид, производящий слияние рекомбинантного вирусного капсидного протеина с антигенным пептидом. Затем этот продукт слияния капсидный белокантигенный пептид может быть экспрессирован в клетке-хозяине, собран in vivo или in vitro для того,- 15019836 чтобы образовать рекомбинантные вирусные или вирусоподобные частицы, и введен хозяину с целью вызвать иммунный ответ. Наночастицы В одном аспекте пептид может быть соединен с небелковыми материалами, такими как, например,наночастицы и другие субстраты. Наночастицы обычно имеют примерно от 1 нм до 200 нм в диаметре и могут быть использованы для обеспечения доставки иммуногенных пептидов субъекту. Один или более пептидов можно присоединить к наночастице с помощью ковалентных или нековалентных химических взаимодействий. Нековалентные химические взаимодействия могут включать сродство (аффинность)(например, авидин/биотин, антиген/антитело, рецептор/лиганд), ионное взаимодействие и/или гидрофобное взаимодействие. Способы присоединения пептидов к твердым основам (подложкам), таким как наночастицы, описаны, например, в Патентной публикации США 2004/0258698. Наночастицы, имеющие диаметр примерно от 50 до около 200 нм, могут быть доставлены системно. При использовании здесь термин "наночастица" означает полимерную сферу или сфероид, который может быть создан так, чтобы иметь регулярную упорядоченную поверхность из определенных, "привязанных" молекул в нанометровом интервале размеров (от около 1 до 500 нм). Предпочтительно для образования наночастиц используют самособирающиеся мономеры. Более того, термин наночастица включает применение и полимеризованных и неполимеризованных липосом, бицелл и мицелл, а также структур вирусных капсид. Хотя наночастицы являются предпочтительными для композиций и способов настоящего изобретения, могут быть использованы другие остовы, каркасные структуры и другие "предъявители", такие как дендримеры, как может быть известно квалифицированным специалистам в данной области техники, как подходящие для представления лигандов согласно настоящему изобретению. Публикация США Polyvalent nanoparticles 20030223938. Пептиды изобретения можно вводить в липосомальной композиции. Липосома настоящего изобретения может быть многослойной везикулой (MLV). Липосома содержит липиды, образующие липосому,имеющие гидрофильную хвостовую часть и полярную или химически реакционно-способную часть, которая, в свою очередь, содержит кислоту, спирт, альдегид, амин или сложный эфир. Липосомы дополнительно могут отличаться углеводородными цепочками или стероидной хвостовой группой и полярной головкой. Липиды, образующие липосомы, включают фосфолипид. Примеры пригодных фосфолипидов включают, но не ограничиваются этим, фосфатидную кислоту, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилглицерин, фосфатидилинозитол и сфингомиелин. Вещества, которые могут быть инкапсулированы в или соединены с липосомами настоящего изобретения, включают протеины и пептиды. В некоторых вариантах осуществления вещество содержит больше чем одно соединение. Пептиды изобретения могут содержать или быть присоединены к липофильной части, которая локализует (сосредоточивает в одном месте) пептиды на поверхности липида. Многотипные пептиды могут быть локализованы на поверхности липосомы. См. Патентную публикацию США 20060035853. С. Адъюванты и другие иммуностимулирующие или усиливающие компоненты Иммуногенность полипептида или пептида или многотипных HPV пептидных композиций можно увеличить путем использования дополнительных неспецифических стимуляторов иммунного ответа,известных как адьюванты. Подходящие адьюванты включают все приемлемые иммуностимулирующие соединения, такие как цитокины, токсины или синтетические композиции. Некоторое количество адъювантов можно использовать для того, чтобы усилить ответ антител против многотипной HPV полипептидной или любой другой композиции, описанной здесь. Адъюванты можно использовать для того, чтобы (1) поймать антиген в организме, чтобы вызвать медленное высвобождение; (2) привлечь клетки, вовлеченные в иммунный ответ к месту введения; (3) вызвать пролиферацию и активацию клеток иммунной системы или (4) улучшить распространение антигена по всему организму субъекта. Композиции адъювантов включают, но не ограничиваются этим, эмульсии масло-в-воде, эмульсии вода-в-масле, минеральные соли, полинуклеотиды и природные вещества. Специфические адъюванты, которые можно исползовать, включают IL-1, IL-2, IL-4, IL-7, IL-12, интерферон, GMCSP, БЦЖ, соли алюминия, такие как гидроксид алюминия или другие соединения алюминия, MDP соединения, такие как thur-MDP и nor-MDP, CGP (МТР-РЕ), липид А и монофосфориллипид A (MPL). RIBI, который содержит три компонета, выделенные из бактерий, MPL, трегалоза димиколат (TDM), и скелет клеточной стенки (CWS) в 2% эмульсии сквален/Твин 80, CpG1018, и/или GPI0100, включая различные комбинации этого. В определенных аспектах адъювант представляет собойCpG1018 или GPI-0100, скомбинированный с одним или более из числа TWEEN или alum, или их комбинацией. Можно использовать даже МНС-антигены. Другие адьюванты или способы приведены в Патентах США 6814971, 5084269, 6656462, каждый из которых включен в данное описание путем отсылки. Различные способы достижения адъювантного действия вакцин включают применение агентов, таких как гидроксид алюминия или фосфат алюминия (alum), как правило, используемых в виде раствора примерно от 0,05 до около 0,1% в забуференном фосфатом солевом растворе, смесь с синтетическими- 16019836 полимерами сахаров (CARBOPOL), используемая примерно как 0,25% раствор, агрегацию протеина в вакцине путем тепловой обработки с температурами в пределах примерно от 70 до около 101 С в течение периода времени от 30 с до 2 мин соответственно. Для того, чтобы вызвать адьювантный эффект,также можно использовать агрегацию с альбумином посредством реактивирования антителами, обработанными пепсином (Fab); смесь с бактериальными клетками (например, C parvum), эндотоксинами или липополисахаридными компонентами грамотрицательных бактерий; эмульсию в физиологически премлемых масляных носителях (например, маннид моноолеат (Aracel А; или эмульсию с 20% раствором перфторуглерода (FLUOSOL-DA ), используемым как блок-заместитель. Типичным адъювантом является полный адъювант Фрейнда (содержащий убитые Mycobacterium tuberculosis), неполные адьюванты Фрейнда и гидроксид алюминия. В дополнение к адъювантам может быть желательно совместное введение модификаторов биологического ответа (BRM) с целью усилить иммунные ответы. Было показано, что BRM повышают Тклеточный иммунитет или понижают супрессорную клеточную активность. Такие BRM включают, но не ограничиваются этим, циметидин (CIM; 1200 мг/д) (Smith/Kline, PA); или циклофосфамид в низких дозах(CYP; 300 мг/м 2) (Johnson/Mead, NJ) и цитокины, такие как -интерферон, IL-2 или IL-12 или гены, кодирующие протеины, вовлеченные в иммуно-хелперные функции, такие как В-7. Эпитопы Т-хелперных клеток. Было описано два типа основных Т лимфоцитов, CD8+ цитотоксические лимфоциты (CTL) и CD4 хелперные клетки (Th клетки). CD8+Т клетки являются эффекторными клетками, которые через Т-клеточный рецептор (TCR) узнают чужие антигены, презентированные молекулами МНС класса I, например, на клетках, инфицированных вирусами или бактериями. После узнавания чужых антигенов CD8+ клетки подвергаются процессу активации, созревания и пролиферации. Этот процесс дифференцировки дает в результате клоны CTL, которые обладают способностью разрушать клетки-мишени, демонстрирующие чужие антигены. С другой стороны, Т-хелперные клетки вовлечены и в гуморальные, и в опосредованные клетками формы эффекторных иммунных ответов. Что касается гуморального или иммунного ответа с помощью антител, антитела вырабатываются В-лимоцитами при взаимодействии с Th клетками. Более точно, внеклеточные антигены, такие как циркулирующие микробы, поглощаются специализированными антиген-презентирующими клетками (АРС), перерабатываются и презентируются совместно с молекулами II класса главного комплекса гистосовместимости (МНС) клеткам CD4+Th. Эти Th клетки, в свою очередь, активируют В-лимфоциты, приводя к выработке антител. Опосредованный клетками или клеточный иммунный ответ, в отличие от этого, действует, чтобы нейтрализовать микробы, которые заселили внутриклеточные участки, например, после успешного заражения клетки-мишени. Чужие антигены, такие как, например, микробные антигены, синтезируются в инфицированных клетках и презентируются на поверхности таких клеток вместе с молекулами МНС класса I. Презентирование таких эпитопов приводит к вышеописанной стимуляции CD8+CTL, процессу,который, в свою очередь, также стимулируется CD4+Th клетками. Th клетки состоят по меньшей мере из двух различных субпопуляций, называемых Th1 и Th2-клетками. Подтипы Th1 и Th2 представляют поляризованные популяции Th клеток, которые дифференцируются из общих предшественников после экспозиции с антигеном. В некоторых аспектах многотипный HPV полипептид также может содержать предпочтительный индуктор ответа или Th1-, или Th2-типа. Высокие уровни цитокинов Th1-типа имеют тенденцию поддерживать индукцию клеточно-опосредованных иммунных ответов на данный антиген, тогда как высокие уровни цитокинов Th2-типа имеют тенденцию поддерживать индукцию гуморальных иммунных ответов на антиген. Различие между иммунным ответом Th1 и Th2-типа не является абсолютным. На самом деле индивидуум будет давать иммунный ответ, который характеризуется как являющийся преимущественно Th1 или преимущественно Th2. Однако часто удобно рассматривать семейства цитокинов на примере, который описан Mosmann и Coffman для мышиных клонов клеток CD4+Т (Mosmann и Coffman, 1989). Обычно, ответы Th1-типа связаны с выработкой Т-лимфоцитами цитокинов INF-7 и IL-2. Другие цитокины,часто прямо связанные с индукцией иммунных ответов Th1-типа, не вырабатываются Т-клетками, например IL-12. Наоборот, ответы Th2-типа связаны с секрецией IL-4, IL-5, IL-6, IL-10. В определенных аспектах Th-эпитопы включают, но не ограничиваются этим, Т-клеточные эпитопы, происходящие из бактериальных белков и токсинов, таких как столбнячный и дифтерийный токсины. Например, Р 2 и Р 30 эпитопы от столбнячного токсина, внутренний антиген вируса гепатита В, туберкулеза, Mycobacterium tuberculosis RA12 (суб-последовательность (аминокислоты с 192 до 323) МТВ 32 А (Skeiky et al. 1999, р 25 протеин морбилливируса/вируса собачьей чумы: KLIPNASLIENCTKAEL (SEQ ID NO:117) PV (полиовирус) последовательность 103-115: KLFAVWKITYKDTNO:129. Агонисты Toll-подобного рецептора. В настоящее время широко известно, что генерирование защитного иммунитета зависит не только от экспозиции к антигену, но также окружения, в котором антиген встречается. Существуют многочисленные примеры, в которых введение нового антигена хозяину в ситуации воспаления генерирует иммунологическую толерантность, а не долговременный иммунитет,тогда как экспозиция к антигену в присутствии воспалительного агента (адьюванта) вызывает иммунитет. (Mondino et al., 1996; Pulendran et al., 1998; Jenkins et al., 1994 и Kearney et al., Immunity 1:327, 1994). Так как это может означать различие между толерантностью и иммунитетом, много усилий затрачивается на обнаружение "адъювантов", присутствующих в инфекционных агентах, которые активизируют молекулярные пути, вовлеченные в создание соответствующего иммуногенного "контекста" презентирования антигена. В настоящее время известно, что значительное количество адъювантной активности является следствием взаимодействия микробных и вирусных продуктов с различными членами Tollподобных рецепторов (TLR), экспрессированных на иммунных клетках (Beutler et al., 2004; Kaisho, 2002;Akira et al., 2003; и Takeda и Akira, 2004). TLR названы за их гомологию с молекулой Drosophila, названной Toll, которая выполняет функции при их развитии и участвует в противомикробном иммунитете(Lernaitre et al., 1996 и Hashimoto et al., 1988). Ранние работы показали, что Toll-гомологи млекопитающих и молекулы Toll-пути имели решающее значение для способности клеток врожденной иммунной системы отвечать на заражение микробами и побочными микробными продуктами (Medzhitov et al., 1997; Medzhitov et al., 1998; Medzhitov et al.,2000; Medzhitov et al., 2000 и Janeway et al., 2002). После идентификации LPS как TLR4-агониста (Poltorok et al., 1998) были описаны многочисленные другие TLR-агонисты, такие как триацил-многотипныеHPV полипептиды (TLR1), пептидогликан, липотейхоевая кислота и Pam3Cys (TLR2), dsPHK (TLM),флагеллин (TLRS), диацил-многотипные HPV полипептиды, такие как Маlр-2 (TLR6), имидазохинолины и одноцепочечные РНК (TLR7,8), бактериальная ДНК, неметилированные CpG ДНК последовательности, и даже человеческие геномные ДНК-комплексы антител (TLR9). Takeuchi et al., 2001; Edwards et al.,2002; Hayashi et al., 2003; Nagase et al., 2003). В определенных аспектах TLR2 лиганды включают, но не ограничиваются этим, липотейхоевую кислоту, маннуроновую кислоту, пептидогликаны, атипичные LPS, MALP-2 и MALP-404(LPG), гликофосфатидилинозитол (GPI), зимозан, гемаглютинин и их аналоги или производные. В дополнительном аспекте TLR2 агонист включает бактериальный липопептид из М. tuberculosis, В. burgdorferi, Т. pallidum; пептидогликаны из видов, включая Staphylococcus aureus; порины Нейссерии, бактериальные фимбрии, факторы вирулентности Yersina, вирионы CMV, коревой гемагглютинин и зимозан из дрожжей. В определенных аспектах агонист TLR представляет собой липидный фрагмент. Липидные фрагменты включают, но не ограничиваются этим, жирные кислоты, такие как группы палмитоил, миристоил, стеароил и деканоил или, в общем, любую С 2-С 30 насыщенную, мононепредельную или полиненасыщенную жирную ацильную группу. В определенных аспектах липидная часть представляет собой[N-палмитоил-S-[2,3 бис(палмитоилокси)пропил]цистеин] часть. Pam3Cys или Pam3Cys-OH (Wiesmuller et al., 1983) является синтетическим вариантом N-концевой части липопротеина Брауна, который соединяет внутреннюю и внешнюю мембраны грамотрицательных бактерий (например, Патент США 5700910, который полностью включен сюда путем отсылки). Дополнительный агонист TLR описан в патентной публикации США 20080145375, которая полностью включена в данное описание путем отсылки.D. Липидные компоненты и части В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение касается композиций, содержащих один или более липидов, нековалентно связанных с многотипным HPV пептидом. Липид представляет собой вещество, которое нерастворимо в воде и экстрагируется органическим растворителем. Соединения, отличные от соединений, специально описанных здесь, которые воспринимаются специалистом в данной области как липиды, включаются композициями и способами настоящего изобретения. Липид может быть природным липидом или синтетическим липидом. Однако, обычно липид является биологическим веществом. Биологические липиды хорошо известны в данной области техники и включают, например, нейтральные жиры, фосфолипиды, фосфоглицериды, стероиды, терпены, лизолипиды, гликосфинголипиды, гликолипиды, сульфатиды, липиды, связанные с жирными кислотами эфирной и сложной эфирной связью, и полимеризуемые липиды, и их комбинации. Многотипный HPV пептид, связанный с липидом, может быть диспергированным в растворе, содержащем липид, растворенным с липидом, эмульгированным с липидом, смешанным с липидом, скомбинированным с липидом, может содержаться в виде суспензии в липиде или иначе быть связанным с липидом. Липид-ассоциированная композиция настоящего изобретения не ограничивается какой-либо определенной структурой. Например, они также могут быть просто рассеяны в растворе, возможно образуя агрегаты, которые не являются одинаковыми ни по размеру, ни по форме. В другом примере они мо- 18019836 гут быть представлены в двухслойной структуре, как мицеллы, или быть со "свернутой" структурой. В других неограничивающих примерах комплекс липофектамина (Gibco BRL) или Suprefect (Qiagen) также включается. В отдельных вариантах осуществления композиция содержит около 1 вес.% липида, или нелипидного компонента, такого как адъювант, сахар, нуклеиновая кислота или другое вещество, раскрытое здесь, или как должно быть известно специалисту в данной области. Таким образом, предполагается, что композиции настоящего изобретения могут содержать любой из липидов, типов липидов или другие компоненты в любой комбинации или процентном интервале.II. Получение полипептидов и их фрагментов А. Синтез и/или соединение полипептидов В определенных аспектах полипептиды можно синтезировать с помощью обычных методов, модифицированных для определенных аминокислотных последовательностей. Такие методы включают, но не ограничиваются этим, хорошо известные специалистам в данной области методы синтеза пептидов, например, синтез в жидкой фазе (см. Finn и Hoffman, 1976), или твердофазный синтез (см. Barany и Merrifield, 1979), или ступенчатый твердофазный синтез, как сообщается Merrifield (1963), содержания каждой из работ включены в данное описание путем отсылки. Другие ссылки на методы синтеза пептидов включают пептиды, синтезированные при помощи способа твердофазного синтеза пептидов на Fmocполиамиде, как раскрыто в работе Lu et al. (1981), пептиды, синтезированные с использованием методаFmoc/tBu (Atherton и Sheppard, 1989). Fmoc аминокислоты можно получить от разных продавцов, например, Chem-Impex International (Wood Dale, Ill., США), Merck Biosciences (Nottingham, Великобритания) иBachem UK Ltd. (St, Helens, Великобритания). После или во время синтеза пептид может быть соединен со спейсером, аминокислотой, полимером или липидом. В определенных аспектах концевая группа боковой цепи лизина или аналога лизина (например, эпсилон аминогруппа внутреннего лизина) защищена одной из нескольких защитных групп. Блокирующие группы или защитные группы или маскирующие группы используют, чтобы защитить аминогруппу аминокислоты, имеющей активированную карбоксильную группу, которая участвует в реакции связывания, или чтобы защитить карбоксильную группу аминокислоты, имеющей ацилированную аминогруппу, которая вовлечена в реакцию связывания. Чтобы связывание произошло, блокирующая группа должна быть удалена без разрушения пептидной связи, или какой-либо защитной группы, присоединенной к другой части пептида. Пептиды могут быть lipidated с помощью способов, известных в данной области техники. Стандартные реакции конденсации, добавления, замещения или окисления (например, образование дисульфидного мостика или образование амидной связи между концевой аминогруппой на внутреннем лизине или аналоге лизина с карбокси-концевой группой следующей аминокислоты или пептида или липоаминокислоты) дают в результате добавление липида к пептиду. В. Системы экспрессии Экспрессию, выделение и очистку полипептидов и их фрагментов можно осуществить с помощью любой подходящей методики. Настоящее изобретение также предоставляет рекомбинантные клонирующие векторы и экспрессирующие векторы, содержащие ДНК, а также клетки-хозяева, содержащие рекомбинантные векторы. Векторы экспрессии, содержащие ДНК, можно использовать для получения полипептидов или фрагментов изобретения, кодируемых ДНК. Способ получения полипептидов включает культивирование клетокхозяев, трансформированных рекомбинантным вектором экспрессии, кодирующим полипептид, при условиях, которые способствуют экспрессии полипептида, затем восстановление экспрессированных полипептидов из культуры. Специалистам в данной области техники понятно, что методы очистки экспрессированных полипептидов будут изменяться в соответствии с такими факторами, как использованный тип клетки-хозяина, и является ли полипептид, который секретируется из клетки-хозяина, мембраносвязанным или представляет собой растворимую форму. Полипептиды изобретения могут включать различные лидерные последовательности, которые управляют прямым trafficking или способствуют очистке. Можно использовать любую подходящую систему экспрессии. Векторы включают ДНКкодирующий полипептид или фрагмент изобретения, функционально связанный с подходящими транскрипционными или трансляционными регуляторными нуклеотидными последовательностями, такими как полученные из гена млекопитающих, микробов, вирусов или насекомых. Примеры регуляторных последовательностей включают транскрипционные промоторы, операторы или энхансеры, рибосомный сайт связывания мРНК и соответствующие последовательности, которые контролируют инициацию транскрипции и трансляции и терминацию. Нуклеотидные последовательности являются функционально связанными, когда регуляторная последовательность функционально относится к ДНКпоследовательности. Таким образом, промоторная нуклеотидная последовательность функционально связана с ДНК-последовательностью, если промоторная нуклеотидная последовательность контролирует транскипцию ДНК-последовательности. Начало репликации, которое дает возможность реплицироваться в желательных клетках-хозяевах, и ген отбора (selection gene), с помощью которого идентифицируют трансформанты, как правило, включаются в вектор экспрессии. Кроме того, последовательность, кодирующая соответствующий сигнальный пептид (нативный или гетерологичный), может быть включена в векторы экспрессии. Последовательность ДНК для сигнального пептида (секреторный лидер) может быть соединена внутри рамки с нуклеиновокислотной последовательностью изобретения, так что вначале транскрибируется ДНК, а мРНК транслируется в гибридный белок, содержащий сигнальный пептид. Сигнальный пептид, который является функциональным в предназначенных клетках-хозяевах, способствует внеклеточной секреции полипептида. Сигнальный пептид выщепляется из полипептида после секреции полипептида из клетки. Специалисту в данной области также понятно, что положение(я), при котором раскалывается сигнальный пептид, может отличаться от положения, предсказанного компьютерной программой, и может изменяться в соответствиис такими факторами, как тип клетки-хозяина, использованной в процессе экспрессии рекомбинантного полипептида. Получение пептида может включать смешивание белковых молекул, имеющих разные N-концевые аминокислоты, полученные в результате расщепления сигнального пептида более чем в одном месте. Подходящие клетки-хозяева для экспрессии полипептидов включают прокариотические, дрожжевые или высшие эукариотические клетки. Особенно предпочтительными для использования в качестве клеток-хозяев являются клетки млекопитающих и насекомых. Подходящие клонирующие векторы и векторы экспрессии для применения с бактериальными, грибковыми, дрожжевыми и клетками-хозяевами млекопитающих описаны, например, в работе Pouwels et al. (1985). Для выработки полипептидов также можно применять бесклеточные системы трансляции, используя РНК, полученные из ДНК-конструктов,раскрытых здесь. 1. Прокариотические системы Прокариоты включают грамотрицательные и грамположительные организмы. Подходящие для трансформации прокариотические клетки-хозяева включают, например, Е. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium и различные другие виды внутри родов Pseudomonas, Streptomyces и Staphylococcus. В прокариотических клетках-хозяевах, таких как Е. coli, полипептид может включать N-концевой остаток метионина, чтобы способствовать экспрессии рекомбинантного полипептида в прокариотической клетке-хозяине. N-концевой метионин может выщепляться из экспрессированного рекомбинантного полипептида. Векторы экспрессии для применения в прокариотической клетке-хозяине, как правило, содержат один или более фенотипически селектируемых маркерных генов. Фенотипически селектируемый маркерный ген представляет собой, например, ген, кодирующий белок, который придает устойчивость к антибиотикам или который обеспечивает аутотрофную потребность. Примеры подходящих векторов экспрессии для прокариотической клетки-хозяина включают векторы, полученные от коммерчески доступных плазмид, такие как клонирующий вектор pBR322 (ATCC 37017). pBR322 содержит гены устойчивости к ампициллину и тетрациклину, и таким образом, обеспечивает простой способ для идентификации трансформированных клеток. Подходящий промотор и ДНК-последовательность вставляют в векторpBR322. Другие коммерчески доступные векторы включают, например, pKK223-3 (Pharmacia FineChemicals, Uppsala, Швеция) и pGEMl (Promega Biotec, Madison, Wis., США). Промоторные последовательности, обычно используемые для экспрессирующих векторов рекомбинантных прокариотических клеток-хозяев, включают (-лактамазную (пенициллиназную), лактозную промоторную систему (Chang et al., 1978; и Goeddel et al., 1979), триптофановую (trp) промоторную систему (Goeddel et al., 1980; и ЕР-А-36776) и tac-промотор (Maniatis, 1982). В особенно удобной прокариотической экспрессирующей системе клетки-хозяина применяется фаговый PL промотор и cI857ts термолабильная репрессорная последовательность. Плазмидные векторы, доступные от Американской коллекции типовых культур, которые охватывают производные PL промотора, включают плазмиду pHUB2(резидентная в штамме Е. coli JMB9, АТСС 37092) и pPLc28 (резидентная в Е. coli RR1, АТСС 53082). 2. Дрожжевые системы Альтернативно, полипептиды могут быть экспрессированы в дрожжевых клетках-хозяевах, предпочтительно из рода Saccharomyces (например, S. cerevisiae). Также можно использовать другие роды дрожжей, такие как Pichia или Kluyveromyces. Часто дрожжевые векторы будут содержать начало репликативной последовательности из 2 дрожжевой плазмиды, автономно реплицирующуюся последовательность (ARS), промоторную область, последовательности для полиаденилирования, последовательности для терминации транскрипции и селектируемый маркерный ген. Подходящие промоторные последовательности для дрожжевых векторов включают, в числе других, промоторы для металлотионеина, 3 фосфоглицераткиназы (Hitzeman et al., 1980) или других гликолитических ферментов (Hess et al., 1968 иHolland et al., 1978), таких как енолаза, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, гексокиназа, пируватдекарбоксилаза, фосфофруктокиназа, глюкозо-6-фосфатизомераза, 3-фосфоглицератмутаза, пируваткиназа,триозофосфатизомераза, фосфоглюкозоизомераза и гликокиназа. Другие подходящие векторы и промоторы для применения в дрожжевой экспрессии дополнительно описаны в Европейской Патентной заявке 73657. Другой альтернативой является глюкозо-репрессируемый ADH2 промотор, описанный Russell etal. (1982) и Beier et al. (1982). "Челночные векторы", воспроизводимые и в клетках дрожжей, и Е. coli,могут быть созданы путем вставки ДНК-последовательностей из pBR322 для селекции и репликации в Е.coli (Ampr ген и начало репликации) в вышеописанные дрожжевые векторы. Дрожжевую -факторную лидерную последовательность можно использовать для прямой секреции полипептида. Часто -факторную лидерную последовательность вставляют между промоторной последовательностью и структурной генной последовательностью. См., например, Kurjan et al., 1982 и Bitter etal., 1984. Другие лидерные последовательности, подходящие для способствования секреции рекомбинантных полипептидов из дрожжей-хозяев, известны специалистам в данной области техники. Лидерная последовательность может быть изменена около ее 3' конца, для того чтобы содержать один или более сайтов рестрикции. Это будет облегчать присоединение лидерной последовательности к структурному гену. Протоколы трансформации дрожжей известны специалистам в данной области. Один такой протокол описан Hirmen et al., 1978. По протоколу Hinnen et al. проводят отбор Trp+ трансформантов в селективной среде, при этом селективная среда состоит из 0,67% азотистых оснований дрожжей, 0,5% казаминовых кислот, 2% глюкозы, 10 мг/мл аденина и 20 мг/мл урацила. Дрожжевые клетки-хозяева, трансформированные векторами, содержащими промоторную последовательность ADH2, можно вырастить с целью стимулирования экспрессии в "богатой" среде. Примером"богатой" среды является среда, состоящая из 1% экстракта дрожжей, 2% пептона и 1% глюкозы с добавлением 80 мг/мл аденина и 80 мг/мл урацила. Дерепрессия ADH2 промотора происходит, когда в среде истощается глюкоза. 3. Системы клеток млекопитающих и насекомых Для экспрессии рекомбинантных полипептидов также можно использовать культуральные системы клеток-хозяев млекопитающих и насекомых. Бакуловирусные системы производства гетерологичных протеинов в клетках насекомых представлены в обзоре Luckow и Summers, Bio/Technology 6:47 (1988). Также можно использовать принятые клеточные линии, происходящие от млекопитающих. Примеры подходящих линий клеток-хозяев млекопитающих включают линию клеток почки обезьяны COS-7(АТСС CRL 1651) (Gluzman et al., 1981), L клетки, С 127 клетки, 3 Т 3 клетки (АТСС CCL 163), клетки яичников китайских хомячков (СНО), клетки HeLa и линии клеток BHK (АТСС CRL 10) и линию клетокCV1/EBNA, полученных от линии клеток почки африканской зеленой мартышки CV1 (АТСС CCL 70),как описано McMahan et al. (1991). Принятые способы введения ДНК в клетки млекопитающих описаны (Kaufman, 1990). Для трансфицирования клеток можно использовать дополнительные протоколы, применяющие коммерчески доступные реагенты, такие как липидный реагент липофектамин (Gibco/BRL) или липидный реагент Lipofectamine-Plus (Feigner et al., 1987). Кроме того, для трансфекции клеток млекопитающих можно применять электрополяцию с помощью традиционных методик, таких как в работе Sambrook et al. (1989). Отбор стабильных трансформантов можно проводить с помощью методов, известных в данной области,например, таких как метод устойчивости к цитотоксическим лекарственным препаратам. Kaufman et al.,1990, описывает некоторые схемы отбора, например по устойчивости к дигидрофолатредуктазе (DHFR). Пригодным штаммом-хозяином для отбора DHFR может быть штамм СНО DX-B11, который является дефицитным по DHFR (Urlaub и Chasin, 1980). Плазмиду, экспрессирующую DHFR сДНК, можно ввести в штамм DX-B11, при этом в соответствующей селективной среде могут расти только клетки, которые содержат плазмиду. Другие примеры селектируемых маркеров, которые можно ввести в экспрессирующий вектор, включают сДНК, придающие устойчивость к антибиотикам, например G418 и гидромицину В. Клетки, содержащие вектор, можно отобрать, исходя из устойчивости к этим соединениям. Транскрипционные и трансляционные контрольные последовательности для векторов экспрессии клеток-хозяев млекопитающих можно вырезать из вирусных геномов. Обычно используемые промоторные последовательности и энхансерные последовательности получают из полиомавируса, аденовируса 2,вируса обезьян 40 (SV40) и цитомегаловируса человека. ДНК-последовательности, полученные из вирусного генома SV40, например, SV40 начало (точку начала репликации), ранний и поздний промотор,энхансер, сплайс и сайты полиаденилирования, можно использовать для обеспечения других генетических элементов для экспрессии структурной генной последовательности в клетках-хозяевах млекопитающих. В частности, используются вирусные ранний и поздний промоторы, так как оба легко получить из вирусного генома как фрагмент, который также содержит вирусное начало репликации (Fiers et al.,1978; Kaufman, 1990). Дополнительные контрольные последовательности для улучшения экспрессии гетерологичных генов из векторов экспрессии млекопитающих включают такие элементы, как элемент последовательности, усиливающий экспрессию (EASE), полученный из СНО клеток (Morris et al., Animal Cell Technology,1997, pp. 529-534 и Заявка РСТ WO 97/25420), и трехчленный лидер (TPL) и VA ген РНК из аденовируса 2 (Gingeras et al., J. Biol. Chem. 257:13475-13491, 1982). Последовательности сайта внутренней посадки рибосом (IRES) вирусной природы дают возможность bi-cistronic мРНК эффективно транслироваться(Oh and Sarnow, 1993; Ramesh et al., 1996). Было показано, что экспрессия гетерологичной сДНК как части bi-cistronic мРНК, а затем гена селектируемого маркера (например, DHFR) улучшает трансфецируемость хозяина и экспрессию гетерологичной сДНК (Kaufman, 1990). Примерами экспрессирующих век- 21019836 торов, которые используют bi-cistronic мРНК, являются pTR-DC/GFP, описанные Mosser et al. (1997), и р 2 А 51, описанные Morris et al. (1997). Подходящий высоко экспрессирующий вектор, pCAVNOT, описан Mosley et al. (1989). Были созданы другие экспрессирующие векторы для применения в клетках-хозяевах млекопитающих, как раскрывается Okayama и Berg (1983). Подходящая система для стабильной экспрессии высокого уровня сДНК млекопитающих в С 127 эпителиальных клетках молочной железы мыши может быть создана практически, как описано Cosman ei al. (1986). Подходящий высоко экспрессирующий вектор, PMLSV N1/N4,описанный Cosman et al. (1984), зарегистрирован как АТСС 39890. Дополнительные подходящие экспрессирующие векторы млекопитающих описаны в ЕР-А-0367566 и в WO 91/18982, включенных путем отсылки. В еще одном альтернативном варианте векторы можно получить из ретровирусов. Также можно использовать дополнительные подходящие экспрессирующие векторы, pFLAG иpDC311. Технология FLAG сосредоточена на слиянии низкомолекулярного (1 kD), гидрофильного,FLAG маркерного пептида с N-концом рекомбинантного протеина, экспрессируемого pFLAG векторами экспрессии. pDC311 представляет собой другой специализированный вектор, используемый для экспрессии протеинов в клетках СНО. pDC311 отличается bi-cistronic последовательностью, содержащей ген, представляющий интерес, и геном дигидрофолатредуктазы (DHFR) с внутренним рибосомным сайтом связывания для трансляции DHFR, элементом последовательности, усиливающим экспрессию(EASE), человеческим промотором CMV, трехчленной лидерной последовательностью и сайтом полиаденилирования. В отношении сигнальных пептидов, которые можно использовать, нативный сигнальный пептид можно заменить гетерологичным сигнальным пептидом или лидерной последовательностью, если желательно. Выбор сигнального пептида или лидера может зависеть от таких факторов, как тип клетокхозяев, в которых будет продуцироваться рекомбинантный полипептид. Для иллюстрации, примеры гетерологичных сигнальных пептидов, которые являются функциональными в клетках-хозяевах млекопитающих, включают сигнальную последовательность для интерлейкина-7 (IL-7), описанную в Патенте США 4965195; сигнальную последовательность для рецептора интерлейкина-2, описанную в работеCosman et al., Nature 312:768 (1984); сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в ЕР 367566; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 I типа, описанный в Патенте США 4968607; и сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 II типа, описанный в ЕР 460846. С. Выделение и очистка Изобретение также включает способы выделения и очистки полипептидов и их фрагментов. В одном варианте осуществления очистку рекомбинантных полипептидов или фрагментов можно осуществить с использованием слияний полипептидов или фрагментов изобретения с другим полипептидом, для того, чтобы способствовать очистке полипептидов или фрагментов изобретения. Такие партнеры для слияния могут включать поли-His или другие антигенные идентификационные пептиды, описанные выше, а также Fc фрагменты. Что касается какого-либо типа клеток-хозяев, как известно квалифицированным специалистам, методы очистки рекомбинантных полипептидов или фрагментов будут варьировать в соответствии с такими факторами, как тип клеток-хозяев и секретируется ли или нет рекомбинантный полипептид или фрагмент в культуральную среду. В общем, рекомбинантный полипептид или фрагмент можно выделить из клеток-хозяев, если он не секретируется, или из среды или супернатанта, если он является растворимым и секретируется, с последующими стадиями одной или более концентрации, высаливания, ионообмена, гидрофобного взаимодействия, аффинной очистки или гель-хроматографии. Что касается конкретных путей выполнения этих стадий, сначала культуральную среду можно концентрировать, используя коммерчески доступные концентрационные белковые фильтры, например, фильтры для ультрафильтрования Amicon или MilliporePellicon. После стадии фильтрования концентрат можно нанести на матрицу для очистки, такую как среда для гель-фильтрации. Альтернативно, можно использовать ионообменную смолу, например, матрицу или субстрат, имеющий пендантные диэтиламиноэтильные (DEAE) группы. Матрицы могут быть акриламидом, агарозой, декстраном, целлюлозой или другими типами, которые обычно используют для очистки белков. Альтернативно, можно провести катионобменную стадию. Подходящие катионо-обменники включают различные нерастворимые матрицы, содержащие сульфопропиловые или карбоксиметиловые группы. Кроме того, можно провести стадию хроматофокусирования. Альтернативно, можно провести стадию хроматографии с гидрофобным взаимодействием. Подходящими матрицами могут быть фенильные или октальные фрагменты, связанные со смолой. Кроме того, можно выполнить аффинную хроматографию с матрицей, которая селективно связывается с рекомбинантным белком. Примерами таких применяемых смол являются колонки с лектином, колонки с красителем и металл-хелатирующие колонки. Наконец, для окончательной очистки полипептидов можно провести одну или более стадий обратнофазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (RP-HPLC) с использованием гидрофобной среды для RP-HPLC (например, силикагеля или полимерной смолы, имеющей пендантные метальные, октальные, октилдецильные или другие алифатические группы). Некоторые или все из вышеперечислен- 22019836 ных стадий очистки, в разных комбинациях, хорошо известны и могут использоваться для получения выделенного и очищенного рекомбинантного белка. Также возможно использование аффинной колонки, содержащей полипептид-связанный белок, такой как моноклональное антитело, производимое к полипептидам изобретения, для аффинной очистки экспрессированных полипептидов. Эти полипептиды можно удалить из аффинной колонки с помощью обычных методов, например, в высоко солевом буфере для элюирования и затем диализировать в низко солевой буфер или путем изменения рН или других компонентов, в зависимости от аффинности использованной матрицы, или можно удалить на конкурентной основе с использованием природных субстратов аффинной части, например, полипептида, вытекающего из изобретения. В этом аспекте изобретения полипептид-связанные белки, такие как антиполипептидные антитела изобретения или другие протеины, которые могут взаимодействовать с полипептидом изобретения, могут быть связаны с твердофазной подложкой, такой как матрица для колоночной хроматографии или подобный субстрат, подходящий для идентификации, отделения или очистки клеток, которые экспрессируют полипептид изобретения на своей поверхности. Прикрепление (адгезия) полипептид-связанных белков изобретения к поверхности, содержащей твердую фазу, можно осуществить любыми способами. Методы высвобождения положительно селектированных клеток из твердой фазы известны в данной области и включают, например, применение ферментов. Такие ферменты предпочтительно являются нетоксичными и невредными для клеток и предпочтительно являются направленными на раскалывание области поверхностного связывания клетки. Желательная степень очистки зависит от предполагаемого использования белка. Относительно высокая степень чистоты желательна, например, когда полипептид предназначается для введения in vivo. В таком случае полипептиды очищают так, что не определяются белковые дорожки, соответствующие другим протеинам, после анализа путем SDS-полиакриламидного гель-электрофореза (SDS-PAGE). Специалисту в подходящей области будет понятно, что многочисленные дорожки, соответствующие полипептиду, можно визуализировать с помощью SDS-PAGE, вследствие дифференциального гликозилирования, дифференциального посттрансляционного процессинга и тому подобного. Наиболее предпочтительно полипептид изобретения очищают до значительной гомогенности, на что указывает одна протеиновая дорожка после анализа с помощью SDS-PAGE. Протеиновую дорожку можно визуализировать путем окрашивания серебром, окрашивания Кумасси синим или (если протеин помечен радиоактивным изотопом) с помощью радиоавтографии.III. Композиция и введение Способ введения композиций, описанных здесь, может варьировать. Применимы любые из традиционных способов введения вакцины. Полагают, что это включает оральное применение на твердой физиологически приемлемой основе или в физиологически приемлемой дисперсии, парентерально путем инъекции, вдыханием порошка, посредством чрескожного пластыря, посредством вагинального вливания и тому подобного. Дозировка вакцины зависит от пути введения и будет изменяться в соответствии с размером и здоровьем субъекта. Приготовление вакцин, которые содержат полипептидную или пептидную последовательность(и) в качестве активных ингредиентов, в основном хорошо известно в данной области, примерами чего являются Патенты США 4608251; 4601903; 4599231; 4599230; 4596792 и 4578770, все из которых включены в данное описание путем отсылки. Обычно такие вакцины готовят как инъецируемые или как жидкие растворы или суспензии: твердые формы, подходящие для растворения в или суспензии в жидкости также можно приготовить до инъекции. Также препарат может быть эмульгированным. Часто активный иммуногенный ингредиент смешивают с эксципиентами, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом. Подходящими эксципиентами являются, например, вода, солевой раствор, декстроза, глицерин, этанол или тому подобное и их комбинации. Кроме того, если желательно, вакцина может содержать некоторые количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие вещества, буферные вещества для регулирования рН или адъюванты, которые усиливают эффективность вакцин. В отдельных вариантах осуществления вакцины заключают в состав вместе с комбинацией веществ, как описано в Патентах США 6793923 и 6733754, которые включены в данное описание путем отсылки. Вакцины можно ввести с помощью ингаляции. В отдельных вариантах осуществления вакцину можно применять в виде аэрозоля. При использовании здесь термин "аэрозоль" или "аэрозольная композиция" относится к суспензии твердых или жидких частиц в газе. Данные термины можно использовать чтобы, как правило, упоминать композицию, которая испаряется, распыляется или иным образом превращается из твердой или жидкой формы в ингалируемую форму, включая суспендированные твердые или жидкие частицы лекарственных препаратов. Такие аэрозоли можно использовать для доставки вакцины через дыхательную систему. При использовании здесь "дыхательная система" относится к системе органов в организме, отвечающих за потребление кислорода и выдыхание углекислого газа. Система обычно включает все дыхательные пути от носа до легочных альвеол. У млекопитающих обычно принято включать легкие, бронхи, бронхиолы, трахеи, носовые ходы и диафрагму. Для целей настоящего раскрытия доставка вакцины в дыхательную систему означает, что лекарственное средство доставлено в один или более из дыхательных путей дыхательной системы, в частности в легкие. Дополнительные композиции, которые пригодны для других способов введения, включают суппозитории (для анального или вагинального применения) и, в некоторых случаях, оральные композиции. Что касается суппозиториев, можно включить традиционные связующие вещества и переносчики, например, полиалкаленгликоли или триглицериды: такие суппозитории могут быть образованы из смесей,содержащих активный ингредиент в интервале от около 0,5 до около 10%, предпочтительно от около 1 до около 2%. Оральные композиции включают такие обычно употребляемые эксципиенты, как, например, фармацевтические категории маннитола, лактозы, крахмала, стеарата магния, натрийсахарина, целлюлозы, карбоната магния и тому подобного. Эти композиции создаются в форме растворов, суспензий,таблеток, пилюль, капсул, формулировок с замедленным высвобождением или порошков и содержат от около 10 до около 95% активного ингредиента, предпочтительно от около 25 до около 70%. Полипептидные, пептидные и липопептидные композиции могут быть включены в состав вакцины как нейтральные или солевые формы. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (образованные со свободными аминогруппами пептида) и соли, которые образованы с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или ортофосфорная кислота, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, виннокаменная, миндальная и тому подобными. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, также можно получить из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и тому подобные. Во многих случаях будет желательно пользоваться многократными введениями вакцины, обычно самое большее по меньшей мере или не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или более вакцинаций, включая все интервалы между значениями. Вакцинации обычно будут осуществляться с интервалами от 1, 2, 3, 4, 5, 6 до 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 до 12 недель/месяцев/лет, включая все значения и пределы между значениями, по большей части с интервалами от трех до пяти недель. Обычно периодические ревакцинации с интервалами 1-15 лет, обычно десять лет, будут желательны для сохранения протективных уровней антибиотиков. Ход иммунизации может сопровождаться проверками антител против антигенов,как описано ранее, Патенты США 3791932; 4174384 и 3949064, которые иллюстрируют эти типы исследований. А. Комбинированная терапия Композиции и связанные с этим способы настоящего изобретения, в частности введение HPV эпитопа, включая полипептид или пептид HPV L2 протеина, пациенту/субъекту, также можно использовать в комбинации с введением традиционных HPV скрининг (screening) и/или других вакцин, включая, но не ограничиваясь этим, антитела или фрагменты антител, мазки из шейки матки (Рар), ПЦР, саузернблоттинг, введение CERVARIX, GARDASIL, вакцины от HPV или других инфекционных агентов,аблативную терапию HPV поражений и тому подобное. В одном аспекте предполагается, что HPV пептидную композицию и/или терапию используют в сочетании с HPV скринингом и/или другим лечением. Альтернативно, терапия может предварять или следовать за другим лечением с интервалами в пределах от минут до недель. В вариантах осуществления,когда дополнительные средства применяют отдельно, в большинстве случаев можно обеспечить, что не истечет значительный период времени между временем каждой доставки, так что средство или антигенная композиция была бы еще способна оказать преимущественно совместное действие на субъект. В таких случаях, полагают, что можно ввести оба средства в пределах 12-24 ч друг от друга и более предпочтительно в течение около 6-12 ч друг от друга. Однако в некоторых ситуациях может быть желательно значительно расширить период времени для введения, до разрыва от нескольких дней (2, 3, 4, 5, 6 или 7) до нескольких месяцев (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12) или лет (2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12) между соответствующими введениями. Можно применять различные комбинации, например, терапия многотипным HPV пептидом обозначена "А", а другая вакцина или антитело или обработка, назначенная как лечение, обозначена "В": Введение иммуногенных композиций настоящего изобретения пациенту/субъекту будет придерживаться общих протоколов для введения таких соединений, принимая во внимание токсичность, если это имеет место, многотипной HPV полипептидной композиции, или композиция любого другого антигена или антигенной комбинации, описанной здесь. Ожидается, что циклы лечения при необходимости можно будет повторить. Также предполагается, что различные стандартные методы лечения, такие как гидратация, можно применять в комбинации с описанной терапией. В. Превентивные и/или терапевтические способы В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят субъекту. Разные ас- 24019836 пекты настоящего изобретения предполагают введение эффективного количества композиции субъекту. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения композиции многотипных HPV пептидов вводят пациенту для защиты от или лечения заражения по меньшей мере одним или более патогенами HPV. Такие композиции, как правило, будут растворяться или диспергироваться в фармацевтически приемлемом переносчике или водной среде. При использовании здесь "фармацевтически приемлемый" или "фармакологически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые являются, в рамках медицинского заключения, пригодными для контакта с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергического ответа или других проблемных осложнений, соразмерно с обоснованным соотношением польза/риск. Термин "фармацевтически приемлемый переносчик" означает фармацевтически приемлемый метариал, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или герметизирующий материал, участвующий в переносе или транспортировке химического средства. Фармацевтически приемлемый переносчик включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрывающие вещества, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и задерживающие абсорбцию вещества и тому подобное. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением случаев когда какая-либо обычная среда или агент является несовместимым с активными ингредиентами, тогда обдумывают возможность его применения в иммунологических и терапевтических композициях. Активные соединения настоящего изобретения можно заключить в состав для парентерального введения, например, в состав для инъекции посредством внутривенного, внутримышечного, подкожного или даже внутрибрюшинного введения. В дополнение к соединениям, заключенным в состав для введения в виде аэрозоля или парентерального введения, таким как составы для внутривенной или внутримышечной инъекции, другие фармацевтически приемлемые формы включают, например, таблетки или другие твердые формы для перорального применения, а также капсулы с высвобождением по времени. Растворы активных соединений в виде свободных оснований или фармакологически приемлемых солей можно приготовить в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Также можно приготовить дисперсии в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях и в масле. При обычных условиях хранения и применения эти препараты содержат предохраняющее средство для предотвращения роста микроорганизмов. Фармацевтические формы, пригодные для использования с помощью инъекций, включают стерильные водные растворы или дисперсии; композиции, содержащие кунжутное масло, арахисовое масло или водный пропиленгликоль; и стерильные порошки для незапланированного приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы ее можно было легко ввести. Также она должна быть стабильной при условиях производства и хранения и должна быть защищена от заражения микроорганизмами, например бактериями или грибками. Многотипные HPV полипептидные композиции можно заключить в состав в нейтральной или солевой форме. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (образованные со свободными аминогруппами протеина) и соли, которые образованы с неорганическими кислотами,такими как, например, соляной или фосфорной кислотами, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, виннокаменная, миндальная и тому подобные. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, также можно получить из неорганических оснований, таких как, например,гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и тому подобных. Переносчик также может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например,воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно сохранить, например, путем использования покрытия, такого как лецитин, путем сохранения нужного размера частиц в случае дисперсии и с помощью применения поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов можно осуществить с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабенов, хлоробутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и тому подобного. Во многих случаях будет предпочтительно включить изотонические вещества, например, сахара и хлорид натрия. Продолжительную абсорбцию инъецируемых композиций можно осуществить путем использования в композициях веществ, задерживающих абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина. Стерильные инъецируемые растворы готовят путем введения активных соединений в необходимом количестве в подходящий растворитель с различными ингредиентами, перечисленными выше, как требуется, с последующей стерилизацией фильтрованием. В большинстве случаев дисперсии готовят путем введения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный переносчик, который содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из числа перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов, пред- 25019836 почтительными способами приготовления являются способы вакуумной и сублимационной сушки, которые дают порошок активного ингредиента, плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из раствора, ранее стерилизованного фильтрованием. Введение композиций согласно настоящему изобретению, как правило, будет осуществляться общим путем. Это включает, но не ограничивается этим, пероральное, носовое или щечное применение. Альтернативно, применение может происходить с помощью ортотопического, внутрикожного, подкожного, внутримышечного, внутрибрюшинного, анального с помощью суппозиториев, внутривагинального, респираторного или внутривенного введения. В определенных вариантах осуществления вакцинную композицию можно вдыхать (например, патент США 6651655, который специально включен путем отсылки). Такие композиции, как правило, можно вводить как фармацевтически приемлемые композиции,которые включают физиологически приемлемые переносчики, буферы или другие эксципиенты. Для парентерального введения в водном растворе, например, раствор должен быть соответствующим образом забуферизованным, если необходимо, при этом жидкий растворитель сначала приводят в состояние изотонического с помощью достаточного количества солевого раствора или глюкозы. Эти специфические водные растворы особенно пригодны для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В этой связи стерильные водные среды, которые можно использовать,известны специалистам в данной области в свете настоящего раскрытия. Например, одну дозировку можно растворить в изотоническом растворе NaCl и или добавить к жидкости для введения в подкожную клетчатку, или инъецировать в предполагаемом месте вливания(см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 1990). Некоторые изменения в дозировке обязательно будут происходить в зависимости от состояния субъекта. Лицо, ответственное за введение, в любом случае будет определять подходящую дозу для отдельного субъекта. Эффективное количество терапевтической или профилактической композиции определяют, исходя из предполагаемой цели. Термин "стандартная доза" или "дозировка" относится к физически отделенным единицам, пригодным для использования субъектом, каждая единица содержит предопределенное количество композиции, рассчитанное для получения желательных ответов, обсужденных выше, в связи с его введением, т.е. соответствующий способ введения и режим. Количество, которое должно быть введено,на основании и числа применений и стандартной дозы, зависит от желательной защиты. Определенное количество композиции также зависит от решения практикующего врача и является индивидуальным для каждого индивидуума. Факторы, влияющие на дозу, включают физическое и клиническое состояние субъекта, способ введения, предполагаемую цель лечения (облегчение симптомов против лечения) и эффективности, стабильности и токсичности конкретной композиции. Исходя из композиции, растворы будут вводиться способом, совместимым с лекарственной формой и в таком количестве, которое является терапевтически или профилактически эффективным. Композиции легко вводить в целом ряде лекарственных форм, таких как тип инъецируемых растворов, описанный выше. 1. Введение in vitro, ex vivo или in vivo При использовании здесь термин введение in vitro относится к манипуляциям, выполняемым на клетках, удаленных из животного или вне животного, включая, но не ограничиваясь этим, клетки в культуре. Термин введение ex vivo относится к клеткам, которыми манипулировали in vitro, и которые потом вводят живому животному. Термин введение in vivo включает все манипуляции внутри животного. В определенных аспектах настоящего изобретения композиции можно вводить или in vitro, ex vivo,или in vivo. В отдельных вариантах осуществления in vitro аутологичные линии клеток В-лимфоцитов или дендритные клетки инкубируют с композицией многотипных HPV. Активированные клетки затем можно использовать для исследований in vitro или, альтернативно, для введения ex vivo. 2. Антитела и пассивная иммунизация Другой аспект изобретения представляет собой способ получения иммуноглобулина для применения в целях предотвращения или лечения инфекции HPV, включающий стадии иммунизации реципиента вакциной изобретения и выделения иммуноглобулина или антител из реципиента, и/или рекомбинантного получения таких иммуноглобулинов или их фрагментов. Иммуноглобулин, полученный этим способом, является дополнительным аспектом данного изобретения. Фармацевтическая композиция, содержащая иммуноглобулин изобретения и фармацевтически приемлемый переносчик является дополнительным аспектом данного изобретения, которое можно использовать в производстве медикамента для лечения или предотвращения инфекции HPV. Способ лечения или предотвращения инфекции HPV,включающий стадию введения пациенту эффективного количества фармацевтического препарата изобретения является дополнительным аспектом данного изобретения. Инокулум для выработки поликлональных антител обычно получают посредством диспергирования антигенной композиции в физиологически приемлемом растворителе, таком как солевой раствор или другие адьюванты, подходящие для применения человеком, для образования водной композиции. Иммуностимулирующее количество инокулума вводят млекопитающему, например, человеку, и тогда субъект,получивший инокулум, является защищенным в течение времени, достаточного для того, чтобы антигенная композиция стимулировала защитные антитела. Антитела можно выделить в желательных преде- 26019836 лах с помощью хорошо известных методов, таких как аффинная хроматография (Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual. 1988). Антитела могут включать препараты антисыворотки из целого ряда обычно используемых животных, например коз, приматов, ослов, свиней, лошадей, морских свинок, кошек или человека. Кровь и сыворотка у животных восстанавливаются. Иммуноглобулин, полученный в соответствии с настоящим изобретением, может включать целые антитела, фрагменты антител или субфрагменты. Антитела могут быть целыми иммуноглобулинами любого класса, например, IgG, IgM, IgA, IgD или IgE, химерными антителами или гибридными антителами с двойственной специфичностью к двум или более антигенам изобретения. Они также могут быть фрагментами, например, F(ab')2, Fab', Fab, Fv и тому подобным, включая гибридные фрагменты. Иммуноглобулин также может включать природные синтетические или генетически сконструированные протеины,которые действуют подобно антителу при связывании со специфическими антигенами с образованием комплекса. Композицию HPV или вакцину настоящего изобретения можно ввести реципиенту, который служит источником иммуноглобулина, который вырабатывается в ответ на стимул со стороны композиции HPV. Обработанный таким образом субъект дает плазму, из которой можно получить гипериммунный глобулин с помощью обычной методики фракционирования плазмы. Гипериммунный глобулин можно ввести другому субъекту, для того чтобы обеспечить устойчивость к инфекции или лечить инфекцию HPV. Гипериммунные глобулины изобретения, в частности, пригодны для лечения или предотвращения инфекции HPV у детей, индивидуумам с ослабленным иммунитетом или, когда требуется лечение, но нет времени для того, чтобы индивидуально получить антитела в ответ на вакцинацию. Дополнительным аспектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая одно или больше моноклональных антител (или их фрагменты; предпочтительно человеческие или гуманизированные), активных против компонентов иммуногенной композиции изобретения, которую можно использовать для лечения или предотвращения инфекции различными типами HPV. Способы получения моноклональных антител хорошо известны в данной области и могут включать слияние спленоцитов с клетками миеломы (Kohler and Milstein, 1975; Harlow and Lane, 1988). Альтернативно, моноклональные Fv фрагменты можно получить с помощью скрининга подходящей библиотеки фаговых дисплеев (Vaughan et al., 1998). Моноклональные антитела могут быть человеческими, гуманизированными или частично гуманизированными с помощью известных методов.IV. Наборы Другим аспектом изобретения является набор для вакцинации или лечения согласно настоящему изобретению. В одном варианте осуществления набор содержит пузырек и необязательно упаковку с вложенными инструкциями по введению, пузырек содержит композицию многотипных HPY полипептидов или вакцину для введения согласно способам настоящего изобретения. Любые из описанных здесь композиций могут быть включены в набор. В неограничивающем примере в набор могут быть включены реагенты для приготовления многотипного HPV полипептида, заключения в состав многотипного HPV полипептида и/или введения многотипного HPV полипептида. Набор может дополнительно включать реагенты для оценки активности липопептида и in vitro и in vivo. Таким образом, наборы будут содержать, в подходящих контейнерах, композицию многотипных HPV полипептидов. В определенных аспектах набор может включать реагенты и/или устройства для введения, например, ингалятор или распылитель. Он также может включать один или более буферов, соединений или устройств для приготовления композиции для введения. Компоненты набора могут быть заключены в водную среду или в лиофилизированную форму. Контейнеры для набора, как правило, включают по меньшей мере один пузырек, пробирку, флакон, колбу,шприц или другие контейнеры, в которые может быть помещен компонент, и предпочтительно, соответствующим образом разделен на аликвоты. Когда в наборе присутствует больше чем один компонент,набор также будет содержать второй, третий или следующий дополнительный контейнер, в который могут быть отдельно помещены дополнительные компоненты. Однако, в пузырьке могут содержаться различные комбинации компонентов. Наборы настоящего изобретения, как правило, также будут включать средства для содержания контейнеров в закрытой оболочке для коммерческой продажи. Такие контейнеры могут включать инъекционные или формованные с раздувом пластиковые контейнеры, в которых удерживаются нужные пузырьки. Когда компоненты набора предоставляются в одном и/или более жидких растворах, жидкий раствор является водным раствором, при этом стерильный водный раствор является особенно предпочтительным. Однако, компоненты набора могут быть предоставлены как сухой порошок(и). Когда реагенты и/или компоненты предоставлены в виде сухого порошка, порошок можно восстановить добавлением подходящего растворителя. Это предполагает, что растворитель также может быть предоставлен в другом контейнере. В других аспектах набор или устройство может включать поликлональные или моноклональные антитела, направленные на полипептиды изобретения. Такой набор или устройство можно использовать для обнаружения или установления или выделения вируса в различных образцах и/или пациентах. Набор также может содержать инструкции по применению компонентов набора, а также использованию любых других реагентов, не включенных в набор. Инструкции могут содержать варианты, которые могут быть осуществлены. Предполагается, что такие реагенты являются вариантами осуществления наборов изобретения. Однако такие наборы не ограничиваются отдельными пунктами, указанными выше, и могут включать любые реагенты, используемые для приготовления и/или введения многотипной HPV полипептидной вакцины. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Следующие примеры даны с целью иллюстрации разных вариантов осуществления изобретения и не означают ограничения изобретения каким-либо образом. Специалисту в данной области понятно, что настоящее изобретение хорошо адаптировано для осуществления цели и получения результатов и упомянутой пользы, а также неотъемлемых целей, результатов и преимуществ. Настоящие примеры, вместе со способами, описанными здесь, являются образцами предпочтительных вариантов осуществления, являются типичными и не предназначаются для ограничения рамок изобретения. Изменения в изобретении и другие варианты использования, которые охвачены сущностью изобретения, как определено рамками пунктов формулы изобретения, будут встречаться специалистам в данной области техники. А. Результаты Использованные в ранних исследованиях Вакцины L2, содержащие остатки 11-200 и 1-88, были отобраны на основе подходящих сайтов рестрикции, а не соображений иммуногенности (Campo and Jarrett, 1994; Roden et al., 1994). Следовательно, они могут не содержать все из релевантных эпитопов нейтрализации, или имеют оптимальную иммуногенность и стабильность. Тем не менее, эти исследования показывают, что присутствия нейтрализующих L2-специфических антител достаточно для защитного иммунитета (Embers et al., 2002; Gambhira et al., 2007). Действительно, вакцинация L2 11-200 стимулирует перекрестно-нейтрализующие антитела и защиту в BPV4, CRPV и ROPV моделях заражения (Gambhira et al., 2007; Campo and Jarrett, 1994). Вакцинация пептидом L2 1-88 также была защитной, но имелось некоторое предположение, что перекрестная нейтрализация и перекрестная защита может не являться эффективной по сравнению с животными, вакцинированными L2 11-200 (Gambhira et al., 2007). В соответствии с этой точкой зрения, вакцинации L2 пептидами из 94-112 и 107-122 обе были защитными против гомологичного заражения (Embers et al., 2002). Поэтому для оценки пользы включения этих областей в L2 вакцину мы создали N-концевые L2 полипептиды, заканчивающиеся на 88, 107 или 200, для исследований вакцин (табл. 1). Таблица 1. Ответы антител кроликов, вакцинированных мономерными или многомерными L2 полипептидами разных размеров. Кроликов вакцинировали четыре раза 300 мкг HPV16 L2 полипептидами(А) или полимерными L2 конструктами (В) с использованием CFA/IFA в качестве адъюванта. Гипериммунные сыворотки собирали через месяц после окончательной иммунизации и проверяли на L2 специфические антитела с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием микротитровальных планшетов, покрытых HPV 16 L2 полной длины (16 L2 ELISA) или псевдовирионами HPV 16 L2/L2 (HPV 16 ELISA). Сыворотки также проверили in vitro на титры нейтрализации(IVN) для указанных псевдовирусных HPV типов. Титры нейтрализации не были определены в предиммунных сыворотках.протеин, показавший значительную деградацию в E.coli. "Rb" отдельный кролик. "Нет" соответствует меньше чем 50% нейтрализации при самом низком проверенном разведении 1:50. "-" не определено. А.L2 является необходимым для заражения (Roden et al., 2001) и может иметь множество различных функций (Richards et al., 2006; Bossis et al., 2005; Kamper et al., 2006). Во время заражения L2 должен быть расколот по фурину, чтобы удалить остатки 1-13 (Richards et al., 2006) и это приводит консервативный нейтрализующий эпитоп (между остатками 17-36) в состояние, более доступное для моноклонального антитела RG-1 (Day et al., 2008). Кроме того, антисыворотка к L2 1-88 или 11-200 полипептидам перекрестно нейтрализует кожные, а также слизистые типы папилломавирусов (Pastrana et al., 2005). Поэтому для исследования вакцин мы создали N-концевые L2 полипептиды, инициирующие при остатках 1, 11,13 или 89 (табл. 1). Ответы у кроликов, вакцинированных мономерными и многотипными L2 полипептидами Для картирования перекрестно-нейтрализующих эпитопов семь HPV16 L2 полипептидов (табл. 1) были экспрессированы в Е. coli с 6-His метками и аффинно очищены для исследований вакцинации. Поскольку все полипептиды были быстро очищены, HPV16 L2 13-88 и 89-200 были нестабильны при хранении. Кроликов иммунизировали пять раз 300 мкг каждого полипептида, первоначально в CFA и в IFA для бустерных иммунизаций. Успех каждой иммунизации был сначала подтвержден путем тестирования гипериммунной сыворотки в HPV16 L2 полной длины ELISA и на псевдовирионе HPV16 L1/L2 ELISA. Высокие титры сывороточных антител были установлены для каждого HPV16 L2 полипептида, хотя титры против псевдовирионов HPV16 были более низкими для антисыворотки к двум нестабильным антигенам L2 13-88 и 89-200. Затем были определены нейтрализующие титры HPV16 и перекрестно нейтрализующие титры HPV6, HPV18, HPV31, HPV45 и HPV58 для каждой антисыворотки кролика, вызванныеL2 полипептидами. В соответствии с более ранними исследованиями (Gambhira et al., 2007), HPV16 L2 11-200 и 1-88 пептиды вызывали сильные титры HPV16 нейтрализующих антител. Сходные сильные титры HPV16 нейтрализующих антител наблюдались для антисыворотки к HPV16 L2 13-200, 1-107, 13107. Вакцинация HPV16 L2 89-200 вызывала значительно более слабые нейтрализующие ответы, хотя она стимулировала антитела с высокими титрами L2 ELISA у одного из двух кроликов. L2 специфическая антисыворотка, вызванная различными HPV16 L2 пептидами, нейтрализовала не толькоHPV16, но также разнообразный ряд гетерологичных типов папилломавирусов, включая онкогенные типы HPV18, HPV31, HPV45 и HPV58, которые были проверены (табл. 2). Однако, титры нейтрализующих антител против HPV16 были значительно выше, чем против других типов, хотя не было явной взаимосвязи между титрами и эволюционной дистанцией от HPV16. Таблица 2. Краткое изложение многотипных L2 конструктов обозначения остатков основаны на нумерации HPV16 аминокислот, текущая нумерация остатков для гомологичных пептидов может варьировать, но может быть определена путем выравнивания последовательностей с HPV16 пептидами. Так как ни один из альтернативных HPV 16 L2 пептидов существенно не увеличивал нейтрализующие титры к гетерологичным вирусам, мы проверили связанные гибридные протеины, состоящие из нескольких гомологичных L2 пептидов, полученных из разных значимых в медицинском отношении HPV генотипов. На основе этих результатов и предварительных исследований для гибридных конструктов были выбраны L2 полипептиды, соответствующие HPV16 L2 17-36, 11-88 и 11-200. Так как рекомбинантные протеины большего размера часто менее эффективно продуцируют в бактериях, мы проверили
МПК / Метки
МПК: A61K 39/00
Метки: инфекции, композиции, папилломавирусной, многотипных, лечения, предотвращения, пептидов, способы, человека
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-19836-kompozicii-mnogotipnyh-peptidov-hpv-i-sposoby-lecheniya-ili-predotvrashheniya-papillomavirusnojj-infekcii-u-cheloveka.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Композиции многотипных пептидов hpv и способы лечения или предотвращения папилломавирусной инфекции у человека</a>
Композиции и способы для усовершенствованной доставки пептидов, связывающихся с y2-рецепторами, которую осуществляют через слизистые оболочки, и способы лечения и предотвращения ожирения
Номер патента: 8829
Опубликовано: 31.08.2007
Авторы: Макевилли Конор Дж., Квей Стивен К., Клипп Мэри С., Брэндт Гордон
МПК: A61P 43/00, A61K 38/00
Метки: оболочки, осуществляют, слизистые, ожирения, y2-рецепторами, предотвращения, связывающихся, которую, лечения, пептидов, композиции, усовершенствованной, способы, доставки
Формула / Реферат:
1. Применение пептида PYY(3-36) для изготовления медикамента для лечения ожирения или контроля потребления пищи у пациента, причем введение через слизистые оболочки по меньшей мере 50 мкг указанного пептида в указанном медикаменте повышает концентрацию указанного пептида в плазме субъекта по меньшей мере на 5 пмоль/л. 2. Применение по п.1, причем введение медикамента вызывает чувство сытости. 3. Применение по п.1, причем введение медикамента...
Применение сложных эфиров гидроксибензойной кислоты для получения лекарственного средства для предупреждения и лечения папилломавирусной инфекции человека
Номер патента: 16576
Опубликовано: 30.06.2012
Автор: Кин Вейхуа
МПК: A61K 9/02, A61K 31/215, A61K 9/06...
Метки: кислоты, сложных, гидроксибензойной, предупреждения, применение, лекарственного, папилломавирусной, средства, эфиров, лечения, получения, инфекции, человека
Формула / Реферат:
1. Применение сложного эфира гидроксибензойной кислоты формулы (I) в получении лекарственного средства для предупреждения и лечения вирусной инфекции HPV у человека или животного, где R представляет собой C1-11алкильную группу; R1, R2, R3, R4 и R5 независимо являются OH или H; причем по меньшей мере два из R1, R2, R3, R4 и R5 являются OH; при этом сложный эфир формулы (I) не является эфиром салициловой кислоты2. Применение по п.1, где вирусной...
Способ лечения или профилактики респираторной коронавирусной инфекции с использованием пептидов альфа-тимозина
Номер патента: 9945
Опубликовано: 28.04.2008
Авторы: Татхилл Синтия У., Рудолф Алфред Р.
МПК: A61P 31/12, A61K 38/00
Метки: профилактики, пептидов, инфекции, использованием, альфа-тимозина, лечения, респираторной, способ, коронавирусной
Формула / Реферат:
1. Способ лечения или профилактики респираторной коронавирусной инфекции у больного, включающий введение указанному больному эффективного количества пептида альфа-тимозина. 2. Способ по п.1, в котором указанная респираторная вирусная инфекция представляет собой тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС). 3. Способ по п.1, в котором указанное количество пептида альфа-тимозина находится в диапазоне примерно 0,1-20 мг при введении более одного...
Способы предотвращения и лечения амилоидогенного заболевания и используемые в них фармацевтические композиции
Номер патента: 6630
Опубликовано: 24.02.2006
Авторы: Шенк Дэйл Б., Бард Фредерик, Васкуэз Ники Дж., Еднок Тэд
МПК: A61K 39/39, A61K 38/17, A61K 39/00...
Метки: амилоидогенного, используемые, предотвращения, композиции, фармацевтические, способы, заболевания, лечения, них
Формула / Реферат:
1. Способ предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с отложениями амилоида Ab в головном мозге пациента, включающий введение пациенту эффективной дозы фармацевтической композиции, содержащей антитело, имеющее изотип IgG1, которое специфически связывается с эпитопом в пределах аминокислотных остатков 1-7 Ab. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное заболевание характеризуется когнитивной недостаточностью. 3. Способ...
Способ лечения или предотвращения бактериальной респираторной или кишечной инфекции домашнего скота
Номер патента: 1530
Опубликовано: 23.04.2001
Авторы: Кропп Хельмут, Кларк Джеффри Н., Вилкенинг Роберт Д., Фэррингтон Дэниэл О., Рэтклифф Рональд В.
МПК: A61K 31/395, A61P 1/00
Метки: домашнего, кишечной, бактериальной, предотвращения, скота, лечения, способ, респираторной, инфекции
Формула / Реферат:
1. Способ лечения или предотвращения бактериальной респираторной или кишечной инфекции домашнего скота, который включает введение нуждающемуся в таком лечении или предотвращении животному терапевтически или профилактически эффективного количества 8а-азалида, причём организмом, вызывающим респираторную или кишечную инфекцию, является Раsteurellа spp., Actinibacillus spp., Haemophilus somnus, Mycoplasma spp., Treponema hyodysenterae или Salmonella...
Предыдущий патент: Способ подачи потоков материала из печи предварительного нагрева в плавильную печь и система предварительного нагрева
Следующий патент: Применение 25-oh d3 для воздействия на физиологию мышц человека
Случайный патент: Устройство и способ для изготовления конструкции многоканального кабелепровода