Аналоги морфолинила и пирролидинила

Настоящее изобретение относится к морфолинилу и аналогам пирролидинила, содержащим их фармацевтическим композициям и их применению в качестве антагонистов уротензина II.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: СМИТКЛАЙН БИЧАМ КОРПОРЕЙШН (US) 017528 Область изобретения Настоящее изобретение относится к аналогам морфолинила и пирролидинила, содержащим их фармацевтическим композициям и их применению в качестве антагонистов уротензина II. Уровень техники Интегральный контроль гомеостаза сердечно-сосудистой системы достигается посредством комбинации как прямого нейронного контроля, так и системной нейрогормональной активации. Хотя происходящее в результате высвобождение как контрактильных, так и релаксирующих факторов обычно строго регулируется, аберрация в этом статус-кво может привести к кардиогемодинамической дисфункции с патологическими последствиями. Основные вазоактивные факторы млекопитающих, которые включены в эту нейрогуморальную ось,а именно ангиотензин II, эндотелин 1 и норэпинефрин, все функционируют через взаимодействие со специфическими соединенными с G-белком рецепторами (GPCR). Система рецептора уротензина II/UT(прежде известного как GPR14) представляет собой новый член этой нейрогуморальной оси. Также ингибиторы этой системы потенциально полезны при лечении широкого диапазона разнообразных заболеваний. В исследованиях с человеческим уротензином II [Ames et. al., Nature 1999, 401, 282-286; Behm et al.,2004, Naunyn-Schmeid. Arch. Pharmacol., 369; 274-280] было обнаружено, что он является чрезвычайно мощным и эффективным вазоконстриктором in vitro и in vivo; демонстрирует стойкую контрактильную активность, которая чрезвычайно резистентна к вымыванию; и оказывает вредные воздействия на работу сердца (сократимость миокарда). Человеческий уротензин II оценивали в отношении контрактильной активности в выделенной аорте крысы, и было показано, что он является самым мощным контрактильным агонистом, идентифицированным до настоящего времени. На основании фармакологических данных in vitro и гемодинамического профиля in vivo человеческого уротензина II на модели кошки [Behm et al., 2004, Naunyn-Schmeid. Arch.Pharmacol., 369; 274-280], обезьяны [Ames et al., Nature 1999, 401, 282-286] и человека [Lim et al., 2004,Circulation, 109; 1212-1214] было показано, что он играет патологическую роль в сердечно-сосудистых заболеваниях, характеризующихся чрезмерной или патологической вазоконстрикцией и дисфункцией миокарда [Douglas et al., 2004, Trends Pharmacol. Sci, 25; 76-85]. Соединения, которые являются антагонистами рецептора уротензина II, могут быть использованы при лечении воспалительной сердечной недостаточности, инсульта, ишемической болезни сердца (стенокардия, миокардиальная ишемия), аритмии сердца, артериальной гипертензии (эссенциальной и легочной), COPD, фиброза (например, легочного фиброза), рестеноза, атеросклероза, дислипидемии, астмы[Hay DWP, Luttmann MA, Douglas SA: 2000, Br J Pharmacol: 131; 10-12, Gilbert et al 2004, Curr Opin Investig Drugs, 5; 276-282 и Douglas et al., 2004, Trends Pharmacol. Sci, 25; 76-85], нейрогенного воспаления и метаболических васкулопатий, которые все характеризуются патологической вазоконстрикцией и/или дисфункцией миокарда. Антагонисты уротензина могут обеспечить защиту концевого органа у сверхчувствительных групп людей в дополнение к понижению кровяного давления. Поскольку уротензин II (U-II) экспрессируется в ЦНС млекопитающих [Ames et. al., Nature 1999,401, 282; Chartrel et al., 2004; J. Neurochem., 91; 110-118], антагонисты U-II могут быть использованы при лечении зависимости, шизофрении, когнитивных нарушений/болезни Альцгеймера [Gartlon J. Psychopharmacology (Berl) 2001 June; 155(4):426-33], импульсивности, состояния тревоги, стресса, депрессии, боли, мигрени, нарушений нервно-мышечной функции, паркинсонизма, нарушений движения, цикла сна-бодрствования и побудительной мотивации [Clark et al., Brain Research 923 (2001) 120-127]. Функциональные рецепторы U-II экспрессируются на линиях клеток рабдомиосаркомы, и поэтому антагонисты U-II могут быть использованы по онкологическим показаниям [Takahashi et al., 2003, Peptides, 24; 301-306; Matsushita et al., 2003, Endocrinology, 144; 1825-1831; Yoshimoto et al., 2004, Peptides,25; 1775-1781]. Уротензин II может также участвовать в различных метаболических нарушениях, таких как диабет [Ames et al., Nature 1999, 401, 282; Wenyi et al., 2003, Diabetologia, 46; 972-976], в различных желудочно-кишечных расстройствах [Horie et al., 2003, Neuropharmacology, 45; 1019-1027], нарушениях/воспалении костей, хрящей и суставов (например, артрите и остеопорозе) [Bottrill et al., 2000; Br. J.Pharmacol, 130; 1865-1870; Horie et al., 2003, Neuropharmacology, 45; 1019-1027; Suga et al., 2004, J. Biochem., 135; 605-613] и мочеполовых расстройствах, включая гиперактивность мочевого пузыря [Yano etal., 1994, Gen. Comp. Endocrinol., 96; 412-419]. Поэтому эти соединения могут быть использованы для профилактики (лечения) гастроэзофагального рефлюкса, перистальтики желудка, язв, артрита, остеопороза и недержания мочи [Yano et al., 1994, Gen. Comp. Endocrinol., 96; 412-419] и ожирения [Takahashi K.,Endocr. J. 2004 Feb; 51(1): 1-17]. Сущность изобретения В одном аспекте это изобретение относится к аналогам морфолинила и пирролидинила и к содержащим их фармацевтическим композициям. Во втором аспекте это изобретение относится к применению соединений по изобретению в качестве антагонистов уротензина II и в качестве ингибиторов уротензина II. В другом аспекте это изобретение относится к применению соединений по изобретению для лече-1 017528 ния и профилактики состояний, связанных с дисбалансом уротензина II. В еще одном аспекте это изобретение относится к применению соединений по изобретению для лечения или профилактики воспалительной сердечной недостаточности, инсульта, ишемической болезни сердца (например, стенокардии, миокардиальной ишемии), аритмии сердца, артериальной гипертензии(например, эссенциальной и легочной), заболевания почек (острый и хронический отказ почек/конечная стадия заболевания почек, нефротоксичность), заболевания периферических сосудов (например, мужская эректильная дисфункция, диабетическая ретинопатия, перемежающаяся хромота/ишемическое заболевание конечностей) и ишемического/геморрагического инсульта, COPD, рестеноза, астмы, нейрогенного воспаления, мигрени, метаболических васкулопатий, заболеваний кости/хряща/сустава (например, остеопороз, артрит), артрита, других воспалительных заболеваний, фиброза (например, легочного фиброза), сепсиса, атеросклероза, тромбоэмболических нарушений, дислипидемии, зависимости, шизофрении,когнитивных нарушений/болезни Альцгеймера, импульсивности, состояния тревоги, стресса, депрессии,паркинсонизма, нарушений движения, цикла сна-бодрствования, побудительной мотивации, боли (например, воспалительной и висцеральной боли), нервно-мышечной функции, диабета, диабета/метаболического синдрома, расстройств пищевого поведения, гастроэзофагального рефлюкса, нарушений перистальтики желудка, IBS, колита, язв, ожирения, гиперактивности мочевого пузыря и мочеполовых заболеваний. Антагонист уротензина можно вводить индивидуально или в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими средствами, например средствами, выбранными из группы, состоящей из антагонистов рецептора эндотелина, ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ), антагонистов рецептора A-II, ингибиторов вазопептидазы, диуретиков, дигоксина и неселективных антагонистов двойного действия -адренорецептора и 1-адренорецептора. Другие аспекты и преимущества настоящего изобретения описаны далее в следующем подробном описании предпочтительных вариантов осуществления. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к соединениям, выбранным из следующих соединений, а также их фармацевтически приемлемых солей:N-[1-(4-бифенилил)-2-(4-морфолинил)этил]-2-(5,6-диметил-2-оксо-1(2 Н)-хинолинил)-N-метилацетамид; 4'-[(1R)-1-(6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)ацетил](метил)амино]-2-(4 морфолинил)этил]-4-бифенилкарбоновая кислота; 4'-[(1R)-1-(6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)ацетил](метил)амино]-2-(1 пирролидинил)этил]-3-бифенилкарбоксамид; 4'-[(1R)-1-(6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)ацетил](метил)амино]-2-(1 пирролидинил)этил]-4-бифенилкарбоксамид; 4'-[(1R)-1-(6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)ацетил](метил)амино]-2-(4 морфолинил)этил]-4-бифенилкарбоновой кислоты соль HCl; 4'-[(1R)-1-(6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)ацетил](метил)амино]-2-(4 морфолинил)этил]-4-бифенилкарбоновой кислоты трифторацетат и 4'-[(1R)-1-(6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)ацетил](метил)амино]-2-(1 пирролидинил)этил]-3-бифенилкарбоксамида трифторацетат. Используемый в настоящем описании термин "фармацевтически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и лекарственным формам, которые в рамках нормального медицинского суждения подходят для использования в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения или другой проблемы или осложнения и имеют приемлемое отношение выгоды/риска. Специалисту понятно, что могут быть получены фармацевтически приемлемые соли соединений согласно изобретению. Эти фармацевтически приемлемые соли могут быть получены in situ в ходе конечного выделения и очистки соединения или отдельным взаимодействием очищенного соединения в его форме свободной кислоты или свободного основания с подходящим основанием или кислотой соответственно. В некоторых вариантах осуществления соединения согласно изобретению могут содержать кислотную функциональную группу и поэтому могут образовывать фармацевтически приемлемые основноаддитивные соли при обработке подходящим основанием. Примеры таких оснований включают а) гидроксиды, карбонаты и бикарбонаты натрия, калия, лития, кальция, магния, алюминия и цинка; и b) первичные, вторичные и третичные амины, включая алифатические амины, ароматические амины, алифатические диамины и гидроксиалкиламины, такие как метиламин, этиламин, 2-гидроксиэтиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин и циклогексиламин. В некоторых вариантах осуществления соединения согласно изобретению могут содержать основную функциональную группу и поэтому могут образовывать фармацевтически приемлемые кислотноаддитивные соли при обработке подходящей кислотой. Подходящие кислоты включают фармацевтически приемлемые неорганические кислоты и органические кислоты. Репрезентативные фармацевтически приемлемые кислоты включают хлорид водорода, бромид водорода, азотную кислоту, серную кислоту,сульфоновую кислоту, фосфорную кислоту, уксусную кислоту, гидроксиуксусную кислоту, фенилуксусную кислоту, пропионовую кислоту, масляную кислоту, валериановую кислоту, малеиновую кислоту,- 10017528 акриловую кислоту, фумаровую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, салициловую кислоту, бензойную кислоту, дубильную кислоту, муравьиную кислоту,стеариновую кислоту, молочную кислоту, аскорбиновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту и т.п. В рамках изобретения термин "соединение по изобретению " относится к одному или нескольким соединениям согласно изобретению. Соединение по изобретению может находиться в твердой или жидкой форме. В твердом состоянии оно может существовать в кристаллической или некристаллической форме или в виде их смеси. Специалисту понятно, что для кристаллических соединений можно получить фармацевтически приемлемые сольваты, в которых молекулы растворителя включаются в кристаллическую решетку в процессе кристаллизации. Сольваты могут включать неводные растворители, такие как,но не ограничиваясь ими, этанол, изопропанол, ДМСО, уксусная кислота, этаноламин или этилацетат,или они могут включать воду в качестве растворителя, включенного в кристаллическую решетку. Сольваты, в которых растворителем, включенным в кристаллическую решетку, является вода, обычно называют "гидратами". Гидраты включают стехиометрические гидраты, а также композиции, содержащие переменные количества воды. Изобретение включает все такие сольваты. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые производные и соли могут быть получены способами, описанными в дальнейшем, причем указанные способы составляют следующий аспект изобретения. В следующем описании группы имеют значения, определенные выше для соединений формулы (I), если не указано иное. Когда R1 обозначает фенил, целевые молекулы могут быть получены из бромметилкетона (схема 1). Бром вытесняют морфолином или пирролидином с последующим восстановительным аминированием,получая бензиламин. Ацилирование обеспечивает желаемые соединения. Схема 1 Условия: а) морфолин или пирролидин, простой эфир; b) MeNH2, NaCNBH3, HOAc, МеОН; с) реагент ВОР, NEt3, ДМФА. Когда R1 обозначает замещенный фенил, целевые молекулы могут быть получены из 2-бром-1(бромфенил)этанона (схема 2). Бром вытесняют морфолином или пирролидином с последующим восстановительным аминированием, получая бензиламины. Ацилирование обеспечивает амиды, и катализируемая палладием реакция перекрестного сочетания приводит к целевым молекулам. Схема 2 Условия: а) морфолин или пирролидин, простой эфир; b) MeNH2, NaCNBH3, HOAc, МеОН; с) источник Pd, ArB(OH)2, K2CO3, микроволновое или обычное нагревание; d) реагент ВОР, NEt3, ДМФА. Когда R2 отличается от Н, соединения получают исходя из замещенных бензойных кислот (схема 3). Преобразование в морфолинамид сопровождается реакцией с метилмагнийбромидом с получением метилфенилкетонов. Бромирование приводит к бромметилкетону. Целевые молекулы получают, как представлено на схеме 2. Условия: а) морфолин, EDC, CH2Cl2; b) MeMgBr, ТГФ; с) Br2, CHCl3. Когда R4 обозначает метил, соединения получают исходя из 1-(бромфенил)этанамина (схема 4). После первоначального введения защитной группы Boc осуществляют катализируемое палладием перекрестное сочетание с получением бифенильного соединения. После введения второй защитной группы Boc с получением бис-Вос-соединения осуществляют промотируемую основанием перегруппировку, получая сложный трет-бутиловый эфир. Удаление защитной группы Boc наряду с гидролизом сложного третбутилового эфира немедленно сопровождается переэтерификацией в кислом метаноле. Двухступенчатая манипуляция функциональной группы приводит к Вос-защищенной аминокислоте. Образование амида с последующим восстановлением дает диамин, и затем амидирование приводит к целевой молекуле. Схема 4n-BuLi, t-BuOK, (i-Pr)2NH, ТГФ, -78 С; е) HCl, диоксан, затем МеОН, HCl; f) (Boc)2O, CHCl3; g) LiOH,ТГФ; h) реагент ВОР, амин, NEt3, ДМФА; i) LAH, ТГФ, нагревание; j) реагент ВОР, кислотный NEt3,ДМФА. Карбоновые кислоты, соответствующие группам В, получают различными способами. 2 Анилинокислоты получают, исходя из подходящего анилина и алкилируя 2-бромзамещенными сложными эфирами (схема 5). Второе алкилирование обеспечивает третичный анилин. Гидролиз дает желаемую кислоту. Схема 5 Условия: а) основание, BrC (R5R6)CO2Et; b) основание, диметилсульфат или R12Br; с) LiOH, ТГФ. Альтернативные группы В и их соответствующие карбоновые кислоты, если они не являются коммерчески доступными, могут быть получены из аминофенолов конденсацией с бромацетилбромидом(схема 6). Алкилирование алкилбромацетатом с последующим гидролизом дает желаемые кислоты. Схема 6(R=Me, Et) или кислота (R=t-Bu). Гетероциклическая группа может также быть получена исходя из замещенных фторнитробензолов(схема 7). Нуклеофильное присоединение этилгликолята дает ариловый эфир. Восстановление нитрогруппы до анилина сопровождается замыканием кольца с получением бензоксазинона. Схема 7 Условия: а) этилгликолят, NaF, диоксан; b) SnCl22H2O, EtOH, 85C. Другие карбоновые кислоты В-группы получают исходя из фенилендиаминов (схема 8). Конденсация с этилглиоксилатом дает гетероцикл. Алкилирование алкилбромацетатом с последующим гидролизом дает желаемые кислоты. Схема 8 Условия: a) HCOCO2Et, толуол, EtOH; b) BrCH2COOR, NaH, ДМФА; с) LiOH, ТГФ (R=Me, Et) или кислота (R=t-Bu). Путем подходящих манипуляций, включая использование альтернативной защитной группы(групп) для атома азота, синтез остальных соединений формулы (I) может быть осуществлен способами, аналогичными описанным выше и описанным в экспериментальном разделе. Разделение диастереоизомеров или цис- и транс-изомеров может быть осуществлено обычными методами, например фракционной кристаллизацией, хроматографией или ВЭЖХ, или стереоизомерная смесь средства может также быть получена из соответствующего оптически чистого промежуточного соединения или разделением, таким как ВЭЖХ, соответствующего рацемата с использованием подходящей хиральной подложки, или фракционной кристаллизацией диастереоизомерных солей, полученных реакцией соответствующего рацемата с подходящей оптически активной кислотой или основанием, при необходимости. Для использования соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения человека и других млекопитающих его обычно составляют в соответствии с обычной фармацевтической практикой в форме фармацевтической композиции. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно вводить обычным путем для лечения указанных заболеваний, например, перорально, парентерально, подъязычно, чрескожно,ректально, ингаляцией или буккальным введением. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли, которые являются активными при пероральном введении, могут быть составлены в форме сиропов, таблеток, капсул и таблеток для рассасывания. Лекарственная форма в виде сиропа обычно состоит из суспензии или раствора соединения или его соли в жидком носителе, например этаноле, арахисовом масле, оливковом масле, глицерине или воде с ароматизатором или красящим веществом. Если композиция находится в форме таблетки,может быть использован любой фармацевтический носитель, обычно используемый для получения твердых лекарственных форм. Примеры таких носителей включают стеарат магния, белую глину, тальк, желатин, агар-агар, пектин, гуммиарабик, стеариновую кислоту, крахмал, лактозу и сахарозу. Если композиция находится в форме капсулы, подходящим является любое обычное инкапсулирование, например, с использованием вышеуказанных носителей в твердой желатиновой капсуле. Если композиция находится в форме мягкой желатиновой капсулы, можно использовать любой фармацевтический носитель, обычно используемый для получения дисперсии или суспензии, например водные смолы, целлюлозу, силикаты или масла, которые включают в мягкие желатиновые капсулы. Типичные парентеральные композиции состоят из раствора или суспензии соединения или соли в стерильном водном или неводном носителе, например полиэтиленгликоле и поливинилпирролидоне; необязательно содержащих парентерально приемлемое масло, такое как лецитин, арахисовое масло или кунжутное масло. Типичные композиции для ингаляции находятся в форме раствора, суспензии или эмульсии, которая может быть введена в форме сухого порошка или в форме аэрозоля с использованием обычного пропеллента, такого как дихлордифторметан или трихлорфторметан.- 13017528 Типичный состав суппозитория включает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, которая является активной при введении таким образом, со связывающим агентом и/или лубрикантом, например полимерными гликолями, желатином, маслом какао или другими растительными восками или жирами с низкой температурой плавления или их синтетическими аналогами. Типичные трансдермальные составы включают обычный водный или неводный носитель, например крем, мазь, лосьон или пасту, или находятся в форме содержащего лекарственное вещество пластыря,повязки или мембраны. Предпочтительно композиция находится в стандартной лекарственной форме, например в форме таблетки, капсулы или аэрозоля с отмеренными дозами, так что пациент может сам вводить отдельную дозу. Каждая лекарственная форма для перорального введения содержит предпочтительно от 0,1 до 500 мг/кг и предпочтительно от 1 до 200 мг/кг, и каждая лекарственная форма для парентерального введения содержит предпочтительно от 0,1 до 200 мг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в расчете на свободную кислоту или основание. Каждая лекарственная форма для внутриносового введения содержит предпочтительно 1-400 мг и более предпочтительно 10-200 мг на человека. Состав для местного применения содержит предпочтительно от 0,01 до 1,0% соединения формулы (I). Суточная доза для перорального введения предпочтительно составляет приблизительно от 0,01 до 40 мг/кг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в расчете на свободную кислоту. Суточная доза для парентерального введения предпочтительно составляет приблизительно от 0,001 до 100 мг/кг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в расчете на свободную кислоту. Суточная доза для внутриносового введения и пероральной ингаляции предпочтительно составляет от приблизительно 10 до приблизительно 500 мг/человек. Активный ингредиент можно вводить от 1 до 6 раз в сутки при условии, что этого достаточно, чтобы показать желаемую активность. Эти соединения могут быть использованы для лечения или профилактики воспалительной сердечной недостаточности, инсульта, ишемической болезни сердца (например, стенокардии, миокардиальной ишемии), аритмии сердца, гипертензии (например, эссенциальной и легочной), заболевания почек (острый и хронический отказ почек/конечная стадия заболевания почек, нефротоксичность), заболевания периферических сосудов (например, мужская эректильная дисфункция, диабетическая ретинопатия, перемежающаяся хромота/ишемическое заболевание конечностей) и ишемического/геморрагического инсульта, COPD, рестеноза, астмы, нейрогенного воспаления, мигрени, метаболических васкулопатий, заболеваний кости/хряща/сустава (например, остеопороз, артрит), артрита, других воспалительных заболеваний, фиброза (например, легочного фиброза), сепсиса, атеросклероза, тромбоэмболических нарушений, дислипидемии, зависимости, шизофрении, когнитивных нарушений/болезни Альцгеймера, импульсивности, состояния тревоги, стресса, депрессии, паркинсонизма, нарушений движения, цикла снабодрствования, побудительной мотивации, боли, (например, воспалительной и висцеральной боли) нервно-мышечной функции, диабета, диабета/метаболического синдрома, расстройств пищевого поведения,гастроэзофагального рефлюкса, нарушений перистальтики желудка, IBS, колита, язв, ожирения, гиперактивности мочевого пузыря и мочеполовых заболеваний. Антагонист уротензина может быть введен индивидуально или в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими средствами, причем указанные средства выбирают из группы, состоящей из антагонистов рецептора эндотелина, ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ),антагонистов рецептора A-II, ингибиторов вазопептидазы, диуретиков, дигоксина и неселективных антагонистов двойного действия -адренорецептора и 1-адренорецептора. Биологическая активность соединений формулы (I) демонстрируется следующими тестами. Соединения примеров имели Ki 0,1-30 нМ на человеческой линии клеток рабдомиосаркомы. Определение Ki для антагонистов UT в навивных клетках. Человеческую линию клеток рабдомиосаркомы (SJRH30), полученную от American Type CultureCollection (ATCC; Manassas, VA), культивируют в соответствии со специфическими рекомендациями поставщика. Связывание [125I]hU-II с клетками SJRH30 измеряли, используя тест связывания для целых клеток. Клетки распределяли по 6-луночным планшетам и инкубировали 48 ч при 37 С. Среду для выращивания аспирировали и клетки промывали связывающим буфером DPBS+ (забуференный фосфатом солевой раствор Дульбекко с 10 мМ MgCl2, 0,7 мМ CaCl2, 1,4 мМ глюкозы и 0,2% бычьего сывороточного альбумина). Связывание [125I]hU-II с клетками SJRH30 проводили при 37 С в течение 30 мин в 1 мл DPBS+. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 1 мкМ немеченого hU-II. Тест проводили в двух повторах. Конкурентное связывание осуществляли, используя 200 пМ [125I]hU-II и различные концентрации конкурирующих лигандов. Лекарственное средство (от 0,1 нМ до 10 мкМ) получали в ДМСО в 50 кратной избыточной концентрации. После инкубации клетки промывали холодным DPBS+ (41 мл) и затем солюбилизировали с 1 мл 1 М NaOH и переносили в стеклянные пробирки 1275 мм. Радиоактивность затем измеряли в -счетчикеPackard (85% эффективности). Эксперимент повторяли по меньшей мере три раза.- 14017528 Константу сродства (KiS) из экспериментов на конкурентное связывание вычисляли, используя интерактивную нелинейную программу вычерчивания эмпирической кривой GRAPHPAD Prism (San Diego,CA). Са 2+-мобилизация. Соединения по изобретению дополнительно характеризовали в функциональном тесте, используя технологию FLIPR для определения их способности ингибировать внутриклеточное увеличение кальция,индуцированное уротензином II. В этих исследованиях использовали линию клеток HEK 293 со стабильно экспрессируемым рецептором человеческого уротензина (GPR14). 20K клеток/лунка высевали в 384 луночные планшеты Greiner Bio-one, покрытые поли-D-лизином, в культуральной среде (ЕМЕМ с 10%FBS) и инкубировали в течение ночи в CO2 при 37 С. После аспирации среды клетки загружали 4 мкМ индикатора цитоплазматического кальция Fluor 3 dye (Molecular Devices Co.) в 50 мкл/лунка ЕМЕМ и инкубировали в СО 2 при 37 С в течение 60 мин. После инкубации краситель отсасывали и клетки промывали один раз 50 мкл/лунка тестового буфера (10 Х Раствора Креба-Хенселяйта-Рингера с 15 мМHepes, 1 мМ MgCl2 и 1 мМ CaCl2). К клеткам добавляли 50 мкл/лунка тестового буфера, а затем к клеткам добавляли 25 мкл/лунка тестового буфера, содержащего различные концентрации соединений, для другой инкубации в течение 30 мин при 37 С. Наконец, к клеткам добавляли 25 мкл/лунка уротензина II в тестовом буфере, содержащем 0,1% BSA, и сигнал флуоресценции считывали в системе FLIPR. Значения IC50 каждого соединения определяли 11-точечной кривой ингибирования для 3 Х-разведения. Потенциал антагониста (значение fpKi или значение pKB) вычисляли из pIC50 по уравнению Cheng-Prusoff или вычисляли по анализу Шильда. Определение рА 2 антагонистов рецептора UT на выделенной грудной аорте крысы. Самцов крыс Sprague-Dawley (350-500 г) анестезировали ингаляцией изофлурана (5% в О 2) и умерщвляли сворачиванием шейных позвонков. Грудную аорту выделяли, очищали от прилегающей ткани и рассекали на кольца по 3 мм. После денудации с помощью тонкого пинцета каждое кольцо суспендировали в органных ваннах на 10 мл, содержащих раствор Кребса следующего состава (мМ): NaCl - 112,0;KCl - 4,7; KH2PO4 - 1,2; MgSO4 - 1,2; CaCl2 - 2,5; NaHCO3 - 25,0; декстроза - 11,0; индометацин - 0,01. Раствор Кребса поддерживали при температуре 371 С и аэрировали смесью 95%O2:5%CO2 (рН 7,4). Изменения изометрической силы измеряли изометрически под оптимальным напряжением в покое 1,0 г, используя датчики сила-перемещение (MLT02Q1/D; Letica Scientific Instruments), и регистрировали с использованием программного обеспечения Chart 5.0 (ADInstruments). После периода приведения в равновесие длительностью 60 мин артерии обрабатывали стандартными концентрациями KCl (60 мМ) и фенилэфрина (1 мкМ), к которым нормализовали последующие индуцированные агонистом ответы. Как только контрактильный ответ на фенилэфрин выходил на плато, к сосудам добавляли карбахол (10 мкМ),чтобы оценить целостность эндотелия. После предварительной обработки в течение 30 мин носителем(0,1 нМ-10 мкМ) получали для каждого сосуда, добавляя спазмоген к тканевой ванне с полулогарифмическим увеличением. Дожидались выхода каждого ответа на плато перед добавлением последующих концентраций агониста. Определение Kb антагонистов рецептора UT на выделенной грудной аорте крысы. Самцов крыс Sprague-Dawley (350-500 г) анестезировали ингаляцией изофлурана (5% в О 2) и умерщвляли сворачиванием шейных позвонков. Грудную аорту выделяли, очищали от прилегающей ткани и рассекали на кольца по 3 мм. После денудации с помощью тонкого пинцета каждое кольцо суспендировали в органных ваннах на 10 мл, содержащих раствор Кребса следующего состава (мМ): NaCl - 112,0;KCl - 4,7; KH2PO4 - 1,2; MgSO4 - 1,2; CaCl2 - 2,5; NaHCO3 - 25,0; декстроза - 11,0; индометацин - 0,01. Раствор Кребса поддерживали при температуре 371 С и аэрировали смесью 95%О 2:5%СО 2 (рН 7,4). Изменения изометрической силы измеряли изометрически под оптимальным напряжением в покое 1,0 г, используя датчики сила-перемещение (MLT0201/D; Letica Scientific Instruments), и регистрировали с использованием программного обеспечения Chart 5.0 (ADInstruments). После периода приведения в равновесие длительностью 60 мин артерии обрабатывали стандартными концентрациями KCl (60 мМ) и фенилэфрина (1 мкМ), к которым нормализовали последующие индуцированные агонистом ответы. Как только контрактильный ответ на фенилэфрин выходил на плато, к сосудам добавляли карбахол (10 мкМ),чтобы оценить целостность эндотелия. После предварительной обработки в течение 30 мин носителем(ДМСО) или антагонистом (обычно 1 или 10 мкМ в зависимости от связывающего сродства соединений) кумулятивные кривые концентрация-ответ на hU-II (0,1 нМ-10 мкМ) получали для каждого сосуда, добавляя спазмоген к тканевой ванне с полулогарифмическим увеличением. Дожидались выхода каждого ответа на плато перед добавлением последующих концентраций агониста. Определение Kb антагонистов рецептора UT на выделенной бедренной артерии и грудной аорте кошки. После передозировки пентобарбиталом натрия выделяли грудную аорту и левую бедренную артерию взрослых котов (3-5 кг; Liberty Research Inc., Waverly, NY). Сосуды очищали от прилегающей ткани,рассекали на кольца по 3 мм и очищали от эндотелия тонким пинцетом. Каждое кольцо суспендировали- 15017528 в органных ваннах на 10 мл, содержащих раствор Кребса следующего состава (мМ): NaCl - 112,0; KCl 4,7; KH2PO4 - 1,2; MgSO4 - 1,2; CaCl2 - 2,5; NaHCO3 - 25,0; декстроза - 11,0; индометацин - 0,01. Раствор Кребса поддерживали при температуре 371 С и аэрировали смесью 95%О 2:5%СО 2 (рН 7,4). Изменения изометрической силы измеряли изометрически под оптимальным напряжением в покое 2,0 г, используя датчики сила-перемещение (MLT0201/D; Letica Scientific Instruments), и регистрировали с использованием программного обеспечения Chart 5.0 (ADInstruments). После периода приведения в равновесие длительностью 60 мин артерии обрабатывали стандартными концентрациями KCl (60 мМ) и фенилэфрина (1 мкМ), к которым нормализовали последующие индуцированные агонистом ответы. Как только контрактильный ответ на фенилэфрин выходил на плато, к сосудам добавляли карбахол (10 мкМ), чтобы оценить целостность эндотелия. После предварительной обработки в течение 30 мин носителем (ДМСО) или антагонистом (обычно 1 или 10 мкМ в зависимости от связывающего сродства соединений) кумулятивные кривые концентрация-ответ на hU-II (0,1 нМ-10 мкМ) получали для каждого сосуда, добавляя спазмоген к тканевой ванне с полулогарифмическим увеличением. Дожидались выхода каждого ответа на плато перед добавлением последующих концентраций агониста. Следующие примеры являются иллюстративными, но не ограничивающими варианты осуществления настоящего изобретения. В этих примерах спектры 1 Н-ЯМР регистрировали на ЯМР спектрометре Bruker Avance 400 МГц. Химические сдвиги выражали в частях на миллион (ppm, единицы). Константы связывания (J) представлены в единицах герц (Гц). Структуры расщепления описывают кажущуюся мультиплетность и определяются как с (синглет), д (дублет), т (триплет), кв (квартет), дд (дублет дублетов), дт (дублет триплетов),м (мультиплет), (уш.) уширенный.MS и жидкостную хроматографию с MS регистрировали на системе жидкостная хроматография/масс-спектроскопия MDS Sciex. Все масс-спектры получали при ионизации с электрораспылением(ESI), химической ионизации (CI), ионизации электронным ударом (EI) или способом бомбардировки быстрыми атомами (FAB). Данные ВЭЖХ регистрировали на системе ВЭЖХ серии Agilent 1100 с колонкой С-18 с обращенной фазой (Eclipse XDB-C 18, 4,6250 мм, 5 мкм) с градиентом MeCN/H2O 1-99% (+0,1% ТФУК) за 12 мин. Все реакции проверяли методом тонкослойной хроматографии на 0,25 мм планшетах с силикагелем Е. Merck (60F-254), визуализировали УФ-светом, 5% фосфорно-молибденовой кислотой в этаноле, раствором п-анизальдегида, водным раствором перманганата калия или раствором йодида калия/хлорида платины в воде. Колоночную флэш-хроматографию осуществляли на силикагеле. Используемая программа для наименований - ACD Name Pro 6.02. Диамины получали из метилфенилкетонов или более перспективных промежуточных соединений бромированием и вытеснением полученного бромида амином с получением аминокетона. Пример 1. N-(3,4-дихлорфенил)-N-метилглицин, литиевая соль. 3,4-Дихлоранилин (100 г, 0,617 моль), этилбромацетат (68,4 мл, 0,617 моль) и диизопропилэтиламин (129,0 мл, 0,740 моль) объединяли в 300 мл сухого NMP и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. ВЭЖХ (Eclipse XDB-C 18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) через 18 ч при комнатной температуре показала, что наибольшая часть исходного материала (Rt=5,2 мин) была израсходована и что образовался новый пик (Rt=7,9 мин). Реакционную смесь нагревали при 90 С в течение 1 ч, после чего ВЭЖХ показала, что преобразование завершилось. Реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры и затем выливали на 2,5 л льда, 1,5 л воды и 240 г NaHCO3. Сразу образовывался желто-коричневый осадок, суспензию энергично перемешивали в течение 10 мин и затем фильтровали через стеклянный фильтр. Твердое вещество желто-коричневого цвета высушивали на воздухе в течение 20 ч в кристаллизаторе и затем переносили в колбу на 1 л и высушивали на роторном испарителе, чтобы удалить оставшуюся воду. Твердое вещество желтокоричневого цвета затем высушивали в высоком вакууме, получая 148 г (97%) указанного в заголовке соединения. LC/MS (APCl) m/e 248 [М+Н]+. Продукт со стадии а) (20 г, 80,6 ммоль) растворяли в 20 мл N-метилпирролидинона и обрабатывали диметилсульфатом (15,3 мл, 161 ммоль) и бикарбонатом натрия (13,5 г, 161 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 68 ч при комнатной температуре, после чего ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что реакционная смесь состояла приблизительно на две трети из продукта (Rt=8,4 мин) и на одну треть из исходного материала(Rt=7,8 мин). Реакционную смесь нагревали до 100 С и проверяли периодически методом ВЭЖХ. При необходимости добавляли дополнительный диметилсульфат и бикарбонат натрия. В этом случае дополнительные 3 экв. (23 мл, 242 ммоль) диметилсульфата и 0,5 экв. (3,5 г, 40,3 ммоль) бикарбоната натрия добавляли в течение 24 ч, поддерживая температуру 100 С, что приводит реакцию приблизительно к 90% завершению. Реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры и выливали в 500 мл воды. Водную фазу экстрагировали простым эфиром (3250 мл). Объединенные органические слои промывали водой (3250 мл) и насыщенным NaCl (1300 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла коричневого цвета, которое очищали хроматографией на силикагеле(330 г силикагеля 60, изократическое элюирование смесью 10% этилацетат/90% гексан за 75 мин), получая N-(3,4-дихлорфенил)-N-метилэтилглицинат (9,18 г, 35,0 ммоль, 43%) в виде бесцветного масла.CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что весь исходный материал (Rt=8,4 мин) был преобразован в желаемый продукт (Rt=6,7 мин). Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении и затем помещали в высокий вакуум на 24 ч, получая литиевую соль N-(3,4-дихлорфенил)-Nметилглицина (8,4 г, количественный выход) в виде твердого вещества белого цвета. LC/MS (APCl) m/e 234 [M+Н]+. Пример 2. 3,4-Дихлорфенил)2-оксо-2-[(цис)-3-фенил-2-(1-пирролидинилметил)-1-пиперидинил] этиламино)ацетонитрил.NMP и нагревали до 120 С. Через 20 ч ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что приблизительно половина исходного материала (Rt=7,8 мин) была израсходована и что образовался новый пик (Rt=7,6 мин). Реакцию проверяли периодически методом ВЭЖХ и дополнительный бромацетонитрил добавляли, при необходимости, для достижения полного преобразования. В этом случае добавляли дополнительные 1,5 экв. (1,68 мл, 24,1 ммоль) бромацетонитрила и реакционную смесь нагревали в течение дополнительных 28 ч, после чего ВЭЖХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выливали в 400 мл 50% насыщенного раствора хлорида аммония и экстрагировали 500 мл этилацетата. Слои разделяли и органический слой промывали 50% насыщенным раствором бикарбоната натрия (400 мл), водой (400 мл) и насыщенным NaCl (400 мл). Органические экстракты высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла черного цвета, которое адсорбировали приблизительно на 15 г силикагеля. Сырой остаток очищали колоночной хроматографией (300 г силикагеля 40, градиентное элюирование смесью 30-70-100%EtOAc/гексаны за 40 мин), получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества желтогоN-(цианометил)-N-(3,4-дихлорфенил)этилглицинат (1,00 г, 3,48 ммоль) растворяли в 10 мл ТГФ и обрабатывали LiOH (83,4 мг, 3,48 ммоль), растворенным в 2 мл воды. Через 2 ч ВЭЖХ (Eclipse XDBC18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что весь исходный материал (Rt=7,6 мин) израсходован и что образовался единственный новый пик (Rt=6,2 мин). Реакционную смесь обрабатывали 4,0 М раствором HCl в диоксане (1,74 мл, 6,96 ммоль), затем растворитель удаляли с использованием роторного испарителя, затем высокого вакуума, получая 870 мг (3,36 ммоль,96%) N-(цианометил)-N-(3,4-дихлорфенил)глицина в виде твердого вещества белого цвета, которое использовали в последующих химических реакциях без дополнительной очистки. LC/MS (APCI) m/e 232 1,2-Дихлор-4-фтор-5-нитробензол (50 г, 0,238 моль), этилгликолят (90,1 мл, 0,952 моль) и фторид калия (76,1 г, 1,31 моль) добавляли в круглодонную колбу на 1 л, содержащую 200 мл безводного диоксана. Смесь перемешивали магнитным способом и нагревали до 100 С на масляной бане. Через 2 ч ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что весь исходный материал (Rt=7,5 мин) израсходован и что образовался один главный пик (Rt=7,8 мин). Реакционную смесь выливали в 4 л воды, что приводило к осаждению продукта. Твердое вещество отфильтровывали и высушивали в вакууме, получая [(4,5-дихлор-2-нитрофенил)окси]этилацетат (67,4 г,0,229 моль, 96%) в виде твердого вещества желто-коричневого цвета. MS (ES) m/e 294 [М+Н]+.[(4,5-Дихлор-2-нитрофенил)окси]этилацетат (36,0 г, 0,122 моль) растворяли в 400 мл этанола и обрабатывали SnCl22H2O (138,0 г, 0,612 моль). Эту смесь перемешивали магнитным способом и нагревали до 85 С на масляной бане. Через 20 ч ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что весь исходный материал (Rt=7,8 мин) израсходован и что образовались два новых соединения: желаемый продукт (Rt=6,2 мин) и гидроксамовая кислота желаемого продукта (Rt=5,9 мин). Добавляли дополнительные 138,0 г SnCl22H2O (0,612 моль) и 90 мл концентрированной HCl и перемешивали при 85 С в течение 7 ч, после чего ВЭЖХ показала, что остался только желаемый продукт. Реакционную смесь выливали в 5,5 л 5% водного раствора HCl и перемешивали в течение 20 мин, приводя к осаждению продукта. Твердое вещество отфильтровывали и высушивали на воздухе на вакуумном раструбе в течение 1 ч. Твердое вещество помещали в круглодонную колбу на 1 л и суспендировали в 500 мл абсолютного этанола. Растворитель удаляли на роторном испарителе для удаления последних следов воды и полученное твердое вещество белого цвета высушивали в высоком вакууме, получая 6,7-дихлор-2 Н-1,4-бензоксазин-3(4 Н)-он (22,2 г, 0,102 моль, 83%) в виде тонкодисперсного белого порошка. MS (ES) m/e 218 [М+Н]+. с) (6,7-Дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4H-1,4-бензоксазин-4-ил)этилацетат Круглодонную колбу на 1 л продували аргоном и загружали гидрид натрия (6,94 г 60% дисперсияNaH в минеральном масле, 0,174 моль) и 60 мл безводного ДМФА. Эту суспензию перемешивали магнитным способом и охлаждали до 0 С в ванне со льдом и затем медленно обрабатывали суспензией 6,7 дихлор-2 Н-1,4-бензоксазин-3(4 Н)-она (22,2 г, 0,102 моль) в 140 мл безводного ДМФА. Реакционную смесь поддерживали при температуре 0 С в течение 1 ч и затем медленно обрабатывали этилбромацетатом (29,4 мл, 0,265 моль) в течение 5-10 мин. Эту реакционную смесь поддерживали при температуре 0 С в течение 30 мин, давали нагреться до комнатной температуры и затем поддерживали при комнатной температуре в течение 30 мин. ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что весь исходный материал (Rt=6,2 мин) израсходован и что образовалось новое соединение (Rt=7,5 мин). Реакционную смесь выливали в 5,5 л 5% водного раствора HCl,и продукт сразу осаждался в виде твердого вещества желтого цвета. Суспензию перемешивали в течение 10 мин и твердое вещество отфильтровывали, получая желтую корку на фильтре. Твердое вещество промывали ледяным этанолом (3200 мл) и гексанами (3200 мл) и затем высушивали в высоком вакууме,получая (6,7-дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4-ил)этилацетат (26,0 г, 0,085 моль, 84%) в виде порошка белого цвета. MS (ES) m/e 304 [M+H]+.(6,7-Дихлор-3-оксо-2,3-дигидро-4H-1,4-бензоксазин-4-ил)этилацетат (22,0 г, 0,072 моль) суспендировали в 400 мл ТГФ и обрабатывали LiOH (3,46 г, 0,144 моль), растворенным в 80 мл воды при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали магнитным способом и поддерживали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь затем гасили 30 мл концентрированной HCl и перемешивали в течение 20 мин. ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6250 мм, 5 мкм, 1-99% CH3CN/H2O с 0,1% трифторуксусной кислоты) показала, что весь исходный материал (Rt=7,5 мин) израсходован и что образовался единственный продукт (Rt=6,0 мин). Растворитель удаляли на роторном испарителе, получая твердое вещество грязно-белого цвета, которое затем высушивали в высоком вакууме, получая 24,5 г смеси указанного в заголовке соединения (77 мас.%) и LiCl (23 мас.%), которую использовали в последующих реакциях без дополнительной очистки. Фактический выход продукта составляет 18,9 г (0,068 моль, 95%). MS (ES) m/e 276 [М+Н]+. Пример 4. (6,7-Дибром-3-оксо-2,3-дигидро-4H-1,4-бензоксазин-4-ил)уксусная кислота. Согласно методике, описанной в примере 3 с и 3d, за исключением замены 6,7-дихлор-2 Н-1,4 бензоксазин-3(4 Н)-она 6,7-бром-2 Н-1,4-бензоксазин-3(4 Н)-оном, получали указанное в заголовке соединение. Пример 5. (6,7-Диметил-3-оксо-2,3-дигидро-4H-1,4-бензоксазин-4-ил)уксусная кислота. Раствор 4,5-диметил-2-аминофенола (1,73 г, 12,6 ммоль) в хлороформе (50 мл) добавляли к быстроперемешиваемому насыщенному раствору бикарбоната натрия. К быстроперемешиваемой смеси добавляли по каплям бромацетилбромид (1,1 мл, 2,54 г, 12,6 ммоль) в хлороформе (15 мл). Перемешивание продолжали в течение 2 ч. Добавляли EtOAc. Слои разделяли и раствор EtOAc промывали H2O (1X), насыщенным раствором соли (1X), высушивали (MgSO4) и концентрировали, получая твердое вещество коричневого цвета, которое растворяли в ДМФА (85 мл). Добавляли CSCO3 (4,1 г, 12,6 ммоль) и смесь нагревали при 80 С в течение 1 ч, затем выливали в ледяную Н 2 О (200 мл). Кристаллизованный продукт собирали, промывали Н 2 О и высушивали, получая твердое вещество желто-коричневого цвета (1,78 г,80%). MS (ES) m/e 178 [М+Н]+. Следуя методике, описанной в примере 3 с и 3d, за исключением замены 6,7-дихлор-2 Н-1,4 бензоксазин-3(4 Н)-она 6,7-диметил-2 Н-1,4-бензоксазин-3(4 Н)-оном, получали указанное в заголовке соединение. Пример 6. (6,7-Дихлор-2-оксо-1(2 Н)-хиноксалинил)уксусная кислота. 4,5-Дихлорфенилендиамин (26,0 г, 147 ммоль) и 50% этилглиоксилат в толуоле (32 мл, 161 ммоль) в этаноле (250 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали и кристаллизованный продукт коричневого цвета собирали фильтрованием, затем промывали этанолом (50 мл). Полученный продукт (25,5 г, 81%) был на 96% чистым по данным LC/MS. MS (ES) m/e 215 [М+Н]+. Следуя методике, описанной в примере 3 с и 3d, за исключением замены 6,7-дихлор-2 Н-1,4 бензоксазин-3(4H)-она 6,7-дихлор-2(1 Н)-хиноксалиноном, получали указанное в заголовке соединение. Пример 7. (2-Оксо-1,3-бензоксазол-3(2 Н)-ил)уксусная кислота. Раствор 1,3-бензоксазол-2(3 Н)-она (676 мг, 5,0 ммоль) в (5 мл) добавляли к суспензии NaH (220 мг,5,5 ммоль) в ДМФА (5 мл) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивали в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляли зтилбромацетат (0,55 мл, 5,0 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили водой (10 мл) и экстрагировали EtOAc (220 мл). Органические экстракты объединяли, промывали водой, насыщенным раствором соли и высушивали (Na2SO4). Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (1,14 г 100%) в виде твердого вещества коричневого цвета. MS (ES) m/e 222 [M+Н]+. Продукт со стадии а) (94 мг, 0,43 ммоль) растворяли в ТГФ (4 мл) и добавляли раствор LiOHH2O(20 мг, 0,47 ммоль) в ТГФ (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, подкисляли до рН 1 с помощью 2 н. HCl и экстрагировали EtOAc (210 мл). Органические экстракты объединяли, промывали водой, насыщенным раствором соли и высушивали (Na2SO4). Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (81 мг, 98%) в виде твердого вещества коричневого цвета. MS (ES) m/e 194 [М+Н]+. Примеры 8 и 9. Следуя методике, описанной в примере G, за исключением замены 1,3-бензоксазол-2(3 Н)-она 5 хлор-1,3-бензотиазол-2(3 Н)-оном или 5-хлор-1,3-бензоксазол-2(3 Н)-оном, получали следующие соединения: 3,4-Дихлоранилин (5,41 г, 33,6 ммоль) и триэтиламин (1,5 мл) растворяли в 160 мл ТГФ и обрабатывали транс-циннамоилхлоридом (6,71 г, 40,3 ммоль) с энергичным перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем гасили 10 мл Н 2 О. Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (3100 мл). Объединенные органические фракции промывали насыщенным раствором Na2CO3, насыщенным раствором соли, высушивали над MgSO4 и затем концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение в виде кристаллического твердого вещества белого цвета (6,2 г, 63%), MS (ES) m/e 293 Смесь (2 Е)-N-(3,4-дихлорфенил)-3-фенил-2-пропенамида (4,0 г, 13,7 ммоль) и AlCl3 (9,1 г, 68,5 ммоль) медленно нагревали, пока смесь не превращалась в жидкость, и затем замораживали, получая твердую корку. Медленно добавляли лед, чтобы разбить затвердевший продукт. Смесь энергично перемешивали в течение 2 ч. Осадок собирали и промывали 2 н. раствором HCl, водой и простым эфиром,получая смесь белого цвета продуктов А и В, указанных выше (2,8 г, 96%), MS (ES) m/e 215 [М+Н]+. с) (6,7-Дихлор-2-оксо-1(2 Н)-хинолинил)метилацетат (А), (5,6-дихлор-2-оксо-1(2 Н)-хинолинил)метилацетат (В) Суспензию NaH (1,20 г, 29,9 ммоль) в минеральном масле (60%) добавляли к смеси 6,7-дихлор 2(1 Н)-хинолинона (А) и 5,6-дихлор-2(1 Н)-хинолинона (В) (3,2 г, 14,9 ммоль) в ТГФ. Смесь перемешивали в течение 0,5 ч и добавляли раствор метилбромацетата (2,74 г, 17,9 ммоль). Реакционную смесь продолжали перемешивать в течение 3 ч, гасили Н 2 О и затем концентрировали в вакууме. Остаток экстрагировали EtOAc (2100 мл), промывали насыщенным раствором Na2CO3, насыщенным раствором соли,высушивали над MgSO4 и затем концентрировали в вакууме, получая указанные в заголовке соединения в виде кристаллического твердого вещества белого цвета (3,5 г, 82%), MS (ES) m/e 287 [М+Н]+.LiOHН 2 О (1,5 г, 61 ммоль) добавляли к раствору (6,7-дихлор-2-оксо-1(2 Н)-хинолинил)уксусной кислоты (А) и (5,6-дихлор-2-оксо-1(2 Н)-хинолинил)уксусной кислоты (В) (3,5 г, 12 ммоль) в MeOH. Полученную реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч и затем концентрировали в вакууме. Остаток промывали Н 2 О несколько раз и очищали препаративной ВЭЖХ (YMC CombiPrep ODS-A, 5020 мм, 20 мл/мин, А: ацетонитрил В: вода, А: 10-90% за 10 мин, УФ-детекция при 214 нм), получая указанное в заголовке соединение А (0,8 г 24%), В (0,3 г, 9%), MS (ES) m/e 272 [М+Н]+. Пример 11. N1-[1-(4-бифенилил)-2-(1-пирролидинил)этил]-N2-(3,4-дихлорфенил)-N1,N2-диметилглицинамид.[1-(4-Бифенилил)-2-(1-пирролидинил)этил]метиламин (50 мг, 0,18 ммоль) добавляли к раствору N(3,4-дихлорфенил)-N-метилглицина, (49 мг, 0,21 ммоль), (бензотриазол-1-илокси)трис(диметиламино)фосфоний-гексафторфосфата (ВОР) (118 мг, 0,27 ммоль) и триэтиламина (TEA) (54 мг, 0,54 ммоль) в дихлорметане (DCM) (2,0 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали в вакууме. К остатку добавляли 4 мл насыщенного раствора Na2CO3 и затем экстрагировали этилацетатом (23 мл). Объединенные органические слои концентрировали в вакууме, получая твердое вещество коричневого цвета, которое очищали с использованием препаративной системы ВЭЖХ Gilson (колонка Phenomenex 7530 мм, объемная скорость потока 40 мл/мин., А: 0,1% ТФУК в ацетонитриле В: 0,1% ТФУК в воде, А: 10-100% за 15 мин, УФ-детекция при 215 нм), получая указанное в заголовке соединение (52 мг, 58%). MS (ES) m/е 496 [М+Н]+.- 22017528 Примеры 12-19. Действуя, как в примере 11, но заменяя N-(3,4-дихлорфенил)-N-метилглицин подходящими карбоновыми кислотами, получали соединения, перечисленные в табл. 1. Как понятно специалисту, эти аналогичные примеры могут включать изменения в методике синтеза. Таблица 1N-[1-(4-бифенилил)-2-(1-пирролидинил)этил]-2-(5-хлор-2-оксо-1,3 бензоксазол-3(2 Н)-ил)-N-метилацетамида разделяли на энантиомеры N-[(1R)-1-(4-бифенилил)-2-(1 пирролидинил)этил]-2-(5-хлор-2-оксо-1,3-бензоксазол-3(2 Н)-ил)-N-метилацетамид и N-[(1S)-1-(4-бифенилил)-2-(1-пирролидинил)этил]-2-(5-хлор-2-оксо-1,3-бензоксазол-3(2 Н)-ил)-N-метилацетамид путем использования хиральной ВЭЖХ на колонке chiralpak AD-H (2504,6 мм), с мобильной фазой гептан/изопропанол/триэтиламин-50/50/0,1, объемной скоростью потока 8,0 мл/мин, и УФ-детекцией при 254 нм при 25 С. Получали 36 мг каждого изомера. MS (ES) m/e 490 [М+Н]+. Пример 22. (N-[1-(4-бифенилил)-2-(4-морфолинил)этил]-2-(6,7-дибром-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4 бензоксазин-4-ил)-N-метилацетамид. Морфолин (1,67 г, 19,1 ммоль) в безводном эфире (20 мл) добавляли по каплям к раствору 1-(4 бифенилил)-2-бромэтанона (2,63 г, 9,56 ммоль) и триэтиламина (TEA) (2,90 г, 28,68 ммоль) в безводном эфире (50 мл) при 0 С за 30 мин. Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры. После перемешивания в течение 2 ч добавляли воду (80 мл) и водный слой экстрагировали этилацетатом (260 мл). Объединенный органический слой высушивали над MgSO4 и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества светло-желтого цвета (2,52 г, 93%), которое использовали без дополнительной очистки. MS (ES) m/e 281 [М+Н]+. Раствор 2,0 М метиламина в ТГФ (18 мл, 36,0 ммоль) добавляли к раствору 1-(4-бифенилил)-2-(4 морфолинил)этанона (2,52 г, 8,93 ммоль) в безводном ТГФ (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем добавляли цианоборгидрид натрия (1,68 г, 26,79 ммоль) и уксусную кислоту (1 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, пока исходный материал не был полностью израсходован. В этот момент добавляли насыщенный раствор K2CO3 (40 мл) и после перемешивания в течение 15 мин раствор экстрагировали этилацетатом (250 мл). Объединенный органический слой высушивали над Na2SO4 и концентрировали. Полученный остаток выделяли колоночной хроматографией на силикагеле (MeOH/EtOAc, 1:10), получая [1- 24017528(4-бифенилил)-2-(4-морфолинил)этил]метиламин в виде твердого вещества грязно-белого цвета (1,40 г,53%), MS (ES) m/e 296 [М+Н]+. с) Указанное в заголовке соединение получали согласно методике, описанной в примере 11, заменяяN-(3,4-дихлорфенил)-N-метилглицин (6,7-дибром-3-оксо-2,3-дигидро-4H-1, 4-бензоксазин-4-ил)уксусной кислотой и [1-(4-бифенилил)-2-(1-пирролидинил)этил]метиламин продуктом со стадии b) выше, с получением указанного в заголовке соединения (52 мг, 58%). MS (ES) m/e 643 [М+Н]+. Примеры 23-30. Действуя, как в примере 22, но заменяя (6,7-дибром-3-оксо-2,3-дигидро-4 Н-1,4-бензоксазин-4 ил)уксусную кислоту подходящими карбоновыми кислотами, получали соединения, перечисленные в табл. 2. Как понятно специалисту, эти аналогичные примеры могут включать изменения в методике синтеза. Таблица 2 2-Бром-1-(4-бромфенил)этанон (5,0 г, 18 ммоль) растворяли в 10 мл диэтилового эфира и добавляли по каплям за 15 мин к раствору пирролидина (3,0 мл, 3 6 ммоль) в 20 мл диэтилового эфира, охлажденного до 0 С в ванне со льдом. Полученный раствор нагревали до комнатной температуры и поддерживали в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 100 мл EtOAc и промывали бикарбонатом натрия (100 мл) и затем насыщенным раствором соли (100 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 4,6 г(96%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества желтого/оранжевого цвета. MS (ES) 1-(4-Бромфенил)-2-(1-пирролидинил)этанон (4,45 г, 16,6 ммоль) и метиламин (33 мл, 66,4 ммоль 2 М раствора в ТГФ) растворяли в 75 мл ТГФ и поддерживали в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли NaBH3CN (3,13 г, 49,8 ммоль) и реакционную смесь обрабатывали 1 мл уксусной кислоты и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 100 мл EtOAc и промывали бикарбонатом натрия (100 мл) и затем насыщенным раствором соли (100 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 4,7 г (99%) указанного в заголовке соединения в виде масла желтого цвета. MS (ES) m/e 284 [М+Н]+. Пример 32. 1-(4-Бромфенил)-N-метил-2-(1-пирролидинил)этанамин (4,7 г, 17 ммоль) растворяли в 150 мл метиленхлорида и обрабатывали N-(3,4-дихлорфенил)-N-метилглицином (4,02 г, 16,6 ммоль), EDC (3,5 г, 18 ммоль), HOBt (2,47 г, 18,2 ммоль) и триэтиламином (2,55 мл, 18,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 18 ч. Добавляли метиленхлорид (50 мл) и реакционную смесь промывали бикарбонатом натрия (100 мл) и затем насыщенным раствором соли (100 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в 15 мл ДМСО и очищали препаративной ВЭЖХ (колонка Phenomenex 7530 мм, 15 инъекций, объемная скорость потока 40 мл/мин, А: 0,1% ТФУК в ацетонитриле В: 0,1% ТФУК в воде, А: 10-100% за 15 мин, УФ-детекция при 215 нм), получая 4,01 г (48%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества светло-желтого цвета. MS (ES) m/e 500 [М+Н]+. Пример 33.(0,5-2,0 мл Smith Process Vial), оборудованной магнитной мешалкой. Пробирка была оснащена резиновой перегородкой и герметично закрыта гофрируемой металлической фольгой. Используя микроволновой реактор Personal Chemistry Emrys Optimizer, реакционную смесь перемешивали магнитным способом и облучали микроволновой энергией динамически регулируемой мощности, чтобы поддерживать температуру 185 С в течение 360 с. Добавляли этилацетат (2 мл) и насыщенный раствор соли (2 мл) и реакционную смесь фильтровали. Органический слой отделяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 1,0 мл ДМСО и очищали препаративной ВЭЖХ (колонка Phenomenex 7530 мм, объемная скорость потока 40 мл/мин, А: 0,1% ТФУК в ацетонитриле В: 0,1% ТФУК в воде, A: 10100% за 15 мин, УФ-детекция при 215 нм), получая 25 мг (47%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества желто-коричневого цвета. MS (ES) m/e 530/532 [М+Н]+. Примеры 34-84. Действуя, как в примере 33, но заменяя (4-хлорфенил)бороновую кислоту подходящими бороновыми кислотами или сложными эфирами, получали соединения, перечисленные в табл. 3. Как понятно специалисту, эти аналогичные примеры могут включать изменения в методике синтеза.