Антигенсвязывающие белки для il-18 рецептора и их применение
Номер патента: 16783
Опубликовано: 30.07.2012
Авторы: Смит Дирк Е., Макгрю Джеффри Т., Симз Джон Е., Кубин Марек З., Конрой Луиз, Кочрейн Дункан
Формула / Реферат
1. Выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает человеческий IL-18 рецептор, содержащий
аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая включает по меньшей мере одну область CDR, выбранную из группы, состоящей из: (а) области CDRH1 с любой из SEQ ID NO: 89, 92, 95, 98, 101, 104, 107, 110, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137; (б) области CDRH2 с любой из SEQ ID NO: 90, 93, 96, 99, 102, 105, 108, 111, 114, 117, 120, 123, 126, 129, 132, 135, 138; (в) области CDRH3 с любой из SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139; или
аминокислотную последовательность легкой цепи, которая включает по меньшей мере одну область CDR, выбранную из группы, состоящей из: (а) области CDRL1 с любой из SEQ ID NO: 140, 143, 146, 149, 152, 155, 158, 161, 164, 167, 170, 173, 176, 179, 182, 185, 188; (б) области CDRL2 с любой из SEQ ID NO: 141, 144, 147, 150, 153, 156, 159, 162, 165, 168, 171, 174, 177, 180, 183, 186, 189; (в) области CDRL3 с любой из SEQ ID NO: 142, 145, 148, 151, 154, 157, 160, 163, 166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190.
2. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит
аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая включает по меньшей мере одну область CDR, выбранную из группы, состоящей из: (а) области CDRH1 с любой из SEQ ID NO: 89, 92, 95, 98, 101, 104, 107, 110, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137; (б) области CDRH2 с любой из SEQ ID NO: 90, 93, 96, 99, 102, 105, 108, 111, 114, 117, 120, 123, 126, 129, 132, 135, 138; (в) области CDRH3 с любой из SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139; и
аминокислотную последовательность легкой цепи, которая включает по меньшей мере одну область CDR, выбранную из группы, состоящей из: (а) области CDRL1 с любой из SEQ ID NO: 140, 143, 146, 149, 152, 155, 158, 161, 164, 167, 170, 173, 176, 179, 182, 185, 188; (б) области CDRL2 с любой из SEQ ID NO: 141, 144, 147, 150, 153, 156, 159, 162, 165, 168, 171, 174, 177, 180, 183, 186, 189; (в) области CDRL3 с любой из SEQ ID NO: 142, 145, 148, 151, 154, 157, 160, 163, 166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190.
3. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая включает области CDRH1, CDRH2 и CDRH3 с любой из SEQ ID NO: 89-139, или аминокислотную последовательность легкой цепи, которая включает области CDRL1, CDRL2 и CDRL3 с любой из SEQ ID NO: 140-190.
4. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая включает области CDRH1, CDRH2 и CDRH3 с любой из SEQ ID NO: 89-139, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая включает области CDRL1, CDRL2 и CDRL3 с любой из SEQ ID NO: 140-190.
5. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-17, или аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-34.
6. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-17, и аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-34.
7. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит область CDRH3 с любой из SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139.
8. Антигенсвязывающий белок по п.1, отличающийся тем, что содержит область CDRH3 с любой из SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139 и область CDRL3 с любой из SEQ ID NO: 142, 145, 148, 151, 154, 157, 160, 163, 166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190.
9. Выделенный антигенсвязывающий белок, содержащий тяжелую цепь IgG с SEQ ID NO: 73, 77, 81 или 85, или легкую цепь IgG с SEQ ID NO: 75, 79, 83 или 87.
10. Антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что представляет собой моноклональное антитело, человеческое антитело, рекомбинантное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, биспецифическое антитело или его фрагмент.
11. Антигенсвязывающий белок по п.10, отличающийся тем, что указанный фрагмент антитела представляет собой миниантитело, доменное антитело, фрагмент F(ab), фрагмент F(ab'), фрагмент F(ab')2, фрагмент Fv, фрагмент scFv, фрагмент Fd, диатело или молекулу одноцепочечного антитела.
12. Антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что является антигенсвязывающим белком IgG1-, IgG2-, IgG3- или IgG4-типа.
13. Антигенсвязывающий белок по п.12, отличающийся тем, что указанный антигенсвязывающий белок является антигенсвязывающим белком IgG2-типа.
14. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-9.
15. Молекула по п.14, отличающаяся тем, что функционально связана с регуляторной последовательностью.
16. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.14.
17. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.15.
18. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.16.
19. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.17.
20. Способ получения выделенного антигенсвязывающего белка по любому из пп.1-9, включающий стадию культивирования клетки-хозяина по любому из пп.18 или 19 и стадию выделения белка из среды.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
22. Способ предупреждения или лечения состояния, ассоциированного с IL-18 рецептором, у пациента, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту фармацевтической композиции по п.21.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что данное состояние выбирают из группы, состоящей из аутоиммунного заболевания, заболевания печени, заболевания поджелудочной железы и сердечно-сосудистого заболевания.
24. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное аутоиммунное заболевание выбирают из группы, состоящей из псориаза, ревматоидного артрита, диабета I типа, болезни Крона, воспалительного кишечного заболевания, рассеянного склероза, аутоиммунного гепатита, ВИЧ, атопического дерматита, тяжелой псевдопаралитической миастении и саркоидоза.
25. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное заболевание печени представляет собой гепатит.
26. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное заболевание поджелудочной железы представляет собой хронический панкреатит или острый панкреатит.
27. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное сердечно-сосудистое заболевание выбирают из группы, состоящей из болезни сердца, включающей острые сердечные приступы, разрыв атеросклеротической бляшки, постишемическую сердечную недостаточность, реперфузионное повреждение, сосудистое воспаление и атерогенез.
28. Способ ингибирования связывания IL-18 с IL-18 рецептором, включающий контактирование IL-18 рецептора с антигенсвязывающим белком по любому из пп.1-9, при этом антигенсвязывающий белок связывает указанный IL-18 рецептор и предупреждает связывание IL-18 рецептора с IL-18.
29. Выделенный антигенсвязывающий белок, который связывается с трехмерной структурой, образованной аминокислотными остатками 250-253 и 267-271 зрелого IL-18 рецептора (SEQ ID NO: 69).
30. Антигенсвязывающий белок по п.29, отличающийся тем, что представляет собой моноклональное антитело, человеческое антитело, рекомбинантное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, биспецифическое антитело или его фрагмент.
31. Антигенсвязывающий белок по п.30, отличающийся тем, что указанный фрагмент антитела представляет собой миниантитело, доменное антитело, фрагмент F(ab), фрагмент F(ab'), фрагмент F(ab')2, фрагмент Fv, фрагмент scFv, фрагмент Fd, диатело или молекулу одноцепочечного антитела.
32. Антигенсвязывающий белок по п.29, отличающийся тем, что является антигенсвязывающим белком IgG1-, IgG2-, IgG3- или IgG4-типа.
33. Антигенсвязывающий белок по п.32, отличающийся тем, что является антигенсвязывающим белком IgG2-типа.
34. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антигенсвязывающий белок по любому из пп.29-33.
35. Молекула по п.34, отличающаяся тем, что функционально связана с регуляторной последовательностью.
36. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.34.
37. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.35.
38. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.36.
39. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.37.
40. Способ получения выделенного антигенсвязывающего белка по любому из пп.29-33, включающий стадию культивирования клетки-хозяина по любому из пп.38 или 39 и стадию выделения белка из среды.
41. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один антигенсвязывающий белок по любому из пп.29-33 и фармацевтически приемлемый носитель.
42. Способ предупреждения или лечения состояния, ассоциированного с IL-18 рецептором, у пациента, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту фармацевтической композиции по п.41.
43. Способ по п.42, отличающийся тем, что данное состояние выбирают из группы, состоящей из аутоиммунного заболевания, заболевания печени, заболевания поджелудочной железы и сердечно-сосудистого заболевания.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что указанное аутоиммунное заболевание выбирают из группы, состоящей из псориаза, ревматоидного артрита, диабета I типа, болезни Крона, воспалительного кишечного заболевания, рассеянного склероза, аутоиммунного гепатита, ВИЧ, атопического дерматита, тяжелой псевдопаралитической миастении и саркоидоза.
45. Способ по п.42, отличающийся тем, что указанное заболевание печени представляет собой гепатит.
46. Способ по п.42, отличающийся тем, что указанное заболевание поджелудочной железы представляет собой хронический панкреатит или острый панкреатит.
47. Способ по п.42, отличающийся тем, что указанное сердечно-сосудистое заболевание выбирают из группы, состоящей из болезни сердца, включающей острые сердечные приступы, разрыв атеросклеротической бляшки, постишемическую сердечную недостаточность, реперфузионное повреждение, сосудистое воспаление и атерогенез.
48. Способ ингибирования связывания IL-18 с IL-18 рецептором, включающий контактирование IL-18 рецептора с антигенсвязывающим белком по любому из пп.29-33, при этом антигенсвязывающий белок связывает IL-18 рецептор и предупреждает связывание IL-18 рецептора с IL-18.
Текст
АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ДЛЯ IL-18 РЕЦЕПТОРА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Изобретение включает антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецептора и кодирующие их полинуклеотиды. Также включаются векторы экспрессии и содержащие их клетки-хозяева для продуцирования антигенсвязывающих белков. Кроме того, включаются композиции и способы диагностики и лечения заболеваний, опосредуемых IL-18 рецептором.I. Область, к которой относится изобретение Данное изобретение включает антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецептора и кодирующие их полинуклеотиды, а также экспрессирующие векторы и содержащие их клетки-хозяева для продуцирования антигенсвязывающих белков. Кроме того, изобретение включает композиции и способы диагностики и лечения заболеваний, опосредуемых IL-18 рецептором.IL-18 представляет собой провоспалительный цитокин, который относится к IL-1 семейству лигандов. Okamura et al., 1995, Nature 378: 88-91. Известный также как IFNиндуцирующий фактор, IL-18 является цитокином, который играет важную роль в ТН 1 ответе, прежде всего благодаря его способности индуцировать продукцию IFN- в Т клетках и естественных киллерных клетках. Как по структуре, так и по функции IL-18 относится к IL-1 семейству. Что касается структуры, IL-18 и IL-1 имеют значительные общие первичные аминокислотные последовательности и оба укладываются в виде -складчатых полипептидов. Что касается функции, IL-18 индуцирует генную экспрессию и синтез IL-1, TNF, Fas лиганда и некоторых цитокинов. Активность IL-18 передатся путм сигнальной трансдукции, инициируемой образованием им комплекса с IL-18 рецептором (IL-18R). IL-18R включает связывающую цепь, называемую -IL-18 рецептор(-IL-18R), член семейства IL-IR, ранее идентифицированный как IL-1R-родственный белок (IL-1Rrp), и-IL-18 рецептор (-IL-18R), также являющийся членом семейства IL-1R и идентифицированный ранее как AcPL; для передачи сигнала требуются обе цепи. Born et al., 1998, J. Biol. Chem. 273: 29445-50. Комплекс IL-18/IL-18R рекрутирует IL-1R-активирующую киназу и ассоциированный с TNF рецептором фактор-6, который фосфорилирует киназу, индуцирующую ядерный фактор каппаВ (NF-каппаВ), с последующей активацией NF-каппаВ. IL-18 участвует как во врожднном, так и в приобретнном иммунитете, Dinarello, 1999, J. Allergy Clin. Immun. 103: 11-24. Повышенные уровни IL-18 и/или вовлечнность опосредованных IL-18 сигналов в патогенез были продемонстрированы на различных болезненных состояниях человека, включая аутоиммунные заболевания (международные патентные заявки WO 2004/002519; WO 2005/063290; WO 2004/034988; Mallat etal., 2002, Circ. Res. 91: 441-448), заболевания печени (Finitto et al., 2004, Liver 52: 392-400; Tsutsui et al.,2000, Immunological Reviews 174: 192-209, Ludwiczek et al., 2002, J. Clinical Immunology 22: 331-337), заболевания поджелудочной железы и сердечно-сосудистые заболевания (Gerdes et al., 2002, J. Exp. Med. 195: 245-257; международные патентные заявки WO 03/080104; WO 02/060479; WO 01/85201; Raeburn etal., 2002, Am. J. Physiol Heart Cite. Physiol. 283: H650-H657). Поэтому необходимо разработать новые агенты, способные модулировать взаимодействие IL-18/IL-18 рецептор.III. Сущность изобретения Данное изобретение включает антигенсвязывающие белки для - и -IL-18 рецептора (также в целом называемого в данном описании "IL-18 рецептор" или "IL-18R") и кодирующие их полинуклеотиды. Антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецептора ингибируют, затрагивают (мешают) или модулируют по меньшей мере одну из биологических реакций, опосредуемых IL-18, и по этой причине могут применяться для ослабления воздействия опосредованных IL-18 заболеваний или расстройств. Также охватываются системы экспрессии, включая линии клеток, для продуцирования антигенсвязывающих белков для - и -IL-18 рецепторов и способы диагностики и лечения заболеваний ассоциированных с аберрантной активностью IL-18. В одном варианте изобретения антигенсвязывающие белки связывают - и -IL-18 рецептор и содержат: (а) каркасную структуру (скаффолд, неизменную часть молекулы) и (б) по меньшей мере одну гипервариабельную область (CDR), выбранную из одной из CDRH областей любой из последовательностей SEQ ID NO: 89-139 или из CDRL областей любой из последовательностей SEQ ID NO: 140-190. В данном варианте изобретения особенно применимы антигенсвязывающие белки с CDRH3 или CDRL3 областью с SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139 или сSEQ ID NO: 142, 145, 148, 151, 154, 157, 160, 163, 166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190 соответственно. В других вариантах изобретения применяются антигенсвязывающие белки с одной CDR, выбранной из CDRH областей любой из последовательностей SEQ ID NO: 89-139 и из CDRL областей из SEQ IDNO: 140-190 (например, антигенсвязывающие белки имеют две CDR области, одну тяжлую и одну лгкую; опять же, в конкретном варианте изобретения антигенсвязывающие белки содержат как областьCDRH3, так и область CDRL3). Антигенсвязывающие белки могут связываться с - или -цепью IL-18 рецептора, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69 или SEQ ID NO: 71 соответственно. В данном описании представлены антигенсвязывающие белки, которые содержат аминокислотную последовательность тяжлой цепи, включающую по меньшей мере одну область CDR, выбранную из группы, состоящей из: (a) CDRH1 любой из последовательностей SEQ ID NO: 89, 92, 95, 98, 101, 104,107, 110, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137; (б) CDRH2 любой из последовательностей SEQ IDNO: 90, 93, 96, 99, 102, 105, 108, 111, 114, 117, 120, 123, 126, 129, 132, 135, 138 и (в) CDRH3 любой из последовательностей SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136,-1 016783 139; и/или аминокислотную последовательность лгкой цепи, включающую по меньшей мере одну область CDR, выбранную из группы, состоящей из: (a) CDRL1 любой из последовательностей SEQ ID NO: 140, 143, 146, 149, 152, 155, 158, 161, 164, 167, 170, 173, 176, 179, 182, 185, 188; (б) CDRL2 любой из последовательностей SEQ ID NO: 141, 144, 147, 150, 153, 156, 159, 162, 165, 168, 171, 174, 177, 180, 183,186, 189 и (в) CDRL3 любой из последовательностей SEQ ID NO: 142, 145, 148, 151, 154, 157, 160, 163,166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190. В некоторых аспектах антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность тяжлой цепи, имеющую области CDRH1, CDRH2 и CDRH3 с любой из последовательностей SEQ IDNO: 89-139, и/или аминокислотную последовательность лгкой цепи, имеющую области CDRL1, CDRL2 и CDRL3 с любой из последовательностей SEQ ID NO: 140-190. Предпочтительные антигенсвязывающие белки содержат аминокислотную последовательность тяжлой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-17, и/или аминокислотную последовательность лгкой цепи, выбранную из группы,состоящей из SEQ ID NO: 18-34. Предпочтительные области CDRH3 включают области, представленные в любой из SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139. Предпочтительные области CDRL3 включают области, представленные в любой из SEQ ID NO: 142, 145,148, 151, 154, 157, 160, 163, 166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190. В некоторых аспектах антигенсвязывающий белок содержит одну или более IgG тяжлых или лгких цепей, включая тяжлые или лгкие цепи IgG1-, IgG2-, IgG3- или IgG4-типа. Предпочтительные IgG тяжлые цепи включают, но без ограничения, цепи, представленные в SEQ ID NO: 73, 77, 81 и 85. Предпочтительные IgG лгкие цепи включают, но без ограничения, цепи, представленные в SEQ ID NO: 75,79, 83 и 87. Антигенсвязывающие белки по данному описанию, которые связываются с аминокислотными остатками 250-253 и 267-271 трхмерной структуры, образованной зрелым -IL-18 рецептором (SEQ IDNO: 69), особенно применимы для блокады взаимодействия IL-18 с IL-18 рецептором. Антигенсвязывающий белок может представлять собой моноклональное антитело, человеческое антитело, рекомбинантное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, биспецифическое антитело или его фрагмент. Фрагменты антитела включают, но без ограничения, миниантитело, доменное антитело, фрагмент F(ab), фрагмент F(ab'), фрагмент F(ab')2, фрагмент Fv, фрагмент scFv, фрагментFd, диатело или молекулу одноцепочечного антитела. В других аспектах по данному описанию представлены выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие один или более антигенсвязывающих белков IL-18 рецептора. Такие нуклеиновые кислоты могут находиться внутри вектора и могут быть функционально связаны с контрольной последовательностью. Также данное описание (изобретение) включает клетки-хозяева, трансформированные такими выделенными нуклеиновыми кислотами. Кроме того, данное изобретение (описание) включает фармацевтические композиции, содержащие антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора и фармацевтически приемлемый носитель. Такие фармацевтические композиции применимы в методах предупреждения или лечения состояния,ассоциированного с IL-18 рецептором у пациента, который заключается во введении пациенту эффективного количества такой фармацевтической композиции. Заболевания и состояния, ассоциированные сIL-18 рецептором, включают воспалительные и аутоиммунные заболевания (такие как псориаз, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, болезнь Стилла, анкилоизирующий спондилит, остеоартрит, артрит при язвенном колите, заболевание брюшной полости, псориатический артрит, хроническое обструктивное заболевание лгких, астма, в частности хроническая тяжлая астма, острый респираторный дистресс-синдром, сепсис, болезнь Альцгеймера, волчанка, аллергический ринит, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, трансплантация, атопический дерматит, типа II диабет, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника, рассеянный склероз, аутоиммунный гепатит, ВИЧ, тяжлая псевдопаралитическая миастения, саркоидоз), заболевание печени (такое как гепатит), заболевание поджелудочной железы (такое как хронический панкреатит или острый панкреатит) и сердечнососудистое заболевание (такое как острые сердечные приступы, разрыв атеросклеротической бляшки,постишемическая сердечная недостаточность, реперфузионное повреждение, сосудистое воспаление,хроническая сердечная недостаточность, атеросклероз, сердечно-сосудистые осложнения при ревматоидном артрите и атерогенез). Помимо этого, данное изобретение включает способы ингибирования связывания IL-18 с IL-18 рецептором, заключающиеся в контактировании IL-18 рецептора с антигенсвязывающим белком для связывания IL-18 рецептора. Связываясь с IL-18 рецептором, антигенсвязывающий белок для связыванияIL-18 рецептора предупреждает или блокирует связывание рецептора с IL-18.IV. Описание чертежей На фиг. 1 А-1Q изображены нуклеотидные и аминокислотные последовательности VH и VL вариабельных доменов антигенсвязывающих белков для - и -IL-18 рецепторов. На фиг. 2 А-2 Е показаны области CDR1, CDR2 и CDR3 различных вариабельных областей тяжлой и лгкой цепи антигенсвязывающих белков. Аминокислотные последовательности различных областей-2 016783 тяжлой и лгкой цепи идентифицируются в SEQ ID NO: 1-34. Последовательности отдельных CDR областей идентифицированы в SEQ ID NO: 89-190. На фиг. 3 А и 3 В изображено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельных областей тяжлой и лгкой цепи антигенсвязывающих белков - и -IL-18 рецептора. Области CDR1,CDR2 и CDR3 выделены серым цветом. На фиг. 4 изображена таблица, показывающая различные возможные комбинации последовательностей вариабельных областей тяжлой и лгкой цепей. Показаны димеры каждой вариабельной области тяжлой и лгкой цепи. Так как естественные антитела обычно являются тетрамерами, антитело может содержать комбинацию из двух изображнных димеров. На фиг. 5 изображены участки аминокислотных последовательностей -IL-18 рецептора, которые образуют эпитоп для варианта специфического антигенсвязывающего белка. На фиг. 6 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности тяжлой цепиAMH6 (SEQ ID NO: 74 и 73 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 7 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности лгкой цепиAML12 (SEQ ID NO: 76 и 75 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 8 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности тяжлой цепиAMH4 (SEQ ID NO:78 и 77 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 9 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности лгкой цепиAML14 (SEQ ID NO: 80 и 79 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 10 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности тяжлой цепиAMH9 (SEQ ID NO: 82 и 81 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 11 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности лгкой цепиAML9 (SEQ ID NO: 84 и 83 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 12 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности тяжлой цепиAMH11 (SEQ ID NO: 86 и 85 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности. На фиг. 13 изображены полные нуклеотидная и аминокислотная последовательности лгкой цепиAML7 (SEQ ID NO: 88 и 87 соответственно). Стрелкой показан сайт отщепления лидерной последовательности.V. Подробное описание предпочтительных вариантов изобретения Заголовки разделов в данном описании используются только для организационных целей, а не для ограничения описываемого предмета изобретения. Для получения рекомбинантной ДНК, синтеза олигонуклеотидов, культивирования и трансформации тканей, очистки белков и т.д. можно применять стандартные методы. Ферментативные реакции и методы очистки можно осуществлять в соответствии с описаниями производителя, или в соответствии с общепринятой практикой, или по данному описанию. Нижеприведнные процедуры и методы обычно можно осуществлять традиционными методами, общеизвестными в уровне техники и описанными в различных общих и более конкретных ссылочных материалах, цитируемых и обсуждаемых по ходу описания. См., например, лабораторный справочник Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A LaboratoryManual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., который вводится в данное описание ссылкой для любых целей. Если не приводятся конкретные определения, конкретная используемая номенклатура, лабораторные методики и технические примы аналитической химии, органической химии и медицинской и фармацевтической химии, представленные в данном описании, являются общеизвестными и общеупотребительными в уровне техники. Стандартные методы можно применять для химического синтеза, химических анализов, приготовления и доставки фармацевтических препаратов и лечения пациентов. А. Общие сведения. Данное описание включает антигенсвязывающие белки, которые связывают - или -IL-18 рецептор; аминокислотная последовательность человеческого - и -IL-18 рецептора изображена в SEQ IDNO: 69 и 71 соответственно. Антигенсвязывающие белки по изобретению содержат каркасную (скаффолд) структуру с одной или более гипервариабельных областей (CDR), изображнных на фиг. 2 А-2 Е,3 А и 3 В, а именно CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3 участок SEQ ID NO: 1-34 (см. также SEQ ID NO: 89-292, изображающие аминокислотные последовательности различных CDR). В некоторых вариантах изобретения каркасная (скаффолд) структура антигенсвязывающих белков, в основе которых лежат антитела (включая, но без ограничения, моноклональные антитела, человеческие антите-3 016783 ла, мышиные антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела, биспецифические антитела),фрагменты антител (таких как миниантитела, доменные антитела, фрагменты F(ab), фрагменты F(ab'),фрагменты F(ab')2, фрагменты Fv, фрагменты scFv, фрагменты Fd), синтетические антитела (иногда в данном описании называемые "миметиками антител"), слияния антител (иногда называемые "конъюгаты антител"), включая Fc слияния. Различные структуры подробнее описаны и определены ниже в данном описании. Антигенсвязывающие белки для - и -IL-18 рецепторов применимы для лечения состояний, ассоциированных с активностью IL-18, включая ТН 1-управляемые аутоиммунные заболевания (международные патентные заявки WO 2004/002519; WO 2005/063290; WO 2004/034988; Mallat et al., 2002, Circ. Res. 91: 441-448), заболевания печени (Finitto et al., 2004, Liver 52: 392-400; Tsutsui et al., 2000, ImmunologicalReviews 174: 192-209: Ludwiczek et al., 2002, J. Clinical Immunology 22: 331-337), заболевания поджелудочной железы (Yoshida et al., 1998, Anticancer Res. 18: 333-5) и сердечно-сосудистые заболевания(Gerdes et al., 2002, J. Exp. Med. 195: 245-257; международные патентные заявки WO 03/080104; WO 02/060479; WO 01/85201; Raeburn et al., 2002, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 283: H650-H657), как подробнее описано ниже. Другие применения антигенсвязывающих белков включают, например, диагностику заболеваний или состояний, ассоциированных с IL-18, и скрининг на присутствие или отсутствие - или -IL-18 рецептора. Также предусматриваются антигенсвязывающие белки для - или -IL-18 рецептора, в особенности антигенсвязывающие белки, которые включают по меньшей мере одну гипервариабельную область (CDR), включая CDR тяжлой и/или лгкой цепи, как более подробно описано ниже, и их комбинации. Антигенсвязывающие белки по изобретению вмешиваются в, блокируют или модулируют взаимодействие между IL-18 и IL-18 рецептором. В некоторых вариантах изобретения антигенсвязывающие белки прерывают IL-18 путь, тем самым снижая по меньшей мере одну биологическую активность IL-18,включая, но без ограничения, индукцию продуцирования IFN-, индукцию образования киллерных клеток и повышение цитотоксичности киллерных клеток. Как показано в примерах по данному описанию,антигенсвязывающие белки, которые снижают индуцированное IL-18 продуцирование IFN- клеткамиAML15, AMH6 и AML12, AMH6 и AML13, AMH5 и AML12 и АМН 5 и AML13. Таким образом, антигенсвязывающие белки по изобретению могут служить для определения состояний, связанных с иммунными реакциями, вызванными IL-18 или IL-18 рецептором. Кроме того, антигенсвязывающие белки можно применять для регуляции и/или подавления иммунных реакций (ответов), опосредованных IL-18 или IL-18 рецептором, и по этой причине они являются эффективными при лечении и предупреждении различных заболеваний, вызванных повышенным иммунным ответом, например, воспалительных заболеваний. Соответственно антигенсвязывающие белки для - и -IL-18 рецептора по настоящему изобретению можно применять для диагностики, предупреждения или лечения заболеваний или состояний, ассоциированных с путм сигнальной трансдукции, опосредуемым IL-18 иIL-18 рецептором. Б. Антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецептора. Один аспект изобретения включает антигенсвязывающие белки, которые связывают - или -IL-18 рецептор. Под "антигенсвязывающим белком" по данному описанию понимают белок, который специфически связывает заданный антиген. В специфических вариантах изобретения антигеном является человеческий - или -IL-18 рецептор. Под "белком" по данному описанию понимают по меньшей мере две ковалентно связанные аминокислоты, которые включают белки, полипептиды, олигопептиды и пептиды. В некоторых вариантах изобретения две или более ковалентно связанные аминокислоты связаны пептидной связью. Белок может состоять из естественных аминокислот и пептидных связей, например, когда белок получают методами рекомбинантной ДНК с использованием систем экспрессии и клеток-хозяев, как указано ниже. Или же,белок может включать синтетические аминокислоты (например, гомофенилаланин, цитруллин, омитин и норлейцин) или пептидомиметические структуры, т.е. "аналоги пептида или белка", такие как пептоиды(см. статью Simon et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89: 9367, вводимую в данное описание в качестве ссылки), которые могут быть устойчивы к протеазам или другим условиям и/или условиям хранения. Такие синтетические аминокислоты можно включать, в частности, когда антигенсвязывающий белок синтезируется in vitro традиционными методами, хорошо известными в уровне техники. Помимо этого,можно использовать любую комбинацию пептидомиметических, синтетических и естественных остатков/структур. Термин "аминокислота" включает также остатки иминокислот, таких как пролин и гидроксипролин. "R-группа" или "боковая цепь" аминокислоты может иметь либо (L)-, либо (D)конфигурацию. В конкретном варианте изобретения аминокислоты имеют (L)- или (D)-конфигурацию. В некоторых аспектах изобретение включает рекомбинантные антигенсвязывающие белки, которые связывают IL-18 рецептор, в некоторых вариантах изобретения человеческий IL-18 рецептор. В этом-4 016783 контексте "рекомбинантный белок" представляет собой белок, полученный рекомбинантными методами,т.е. с помощью экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты по данному описанию. Методы и технические примы получения рекомбинантных белков общеизвестны в уровне техники. В некоторых вариантах изобретения антигенсвязывающие белки представляют собой выделенные белки или практически чистые белки. "Выделенный" белок не содержит по меньшей мере части материала, с которым он обычно ассоциирован в естественном состоянии, предпочтительно составляя по меньшей мере около 5%, более предпочтительно по меньшей мере около 50 вес.% тотального белка в данном образце. "Практически чистый" белок содержит по меньшей мере 75 вес.% тотального белка,предпочтительно по меньшей мере около 80 вес.% и особенно предпочтительно по меньшей мере около 90 вес.%. Определение включает продуцирование антигенсвязывающего белка из одного организма в другом организме или клетке-хозяине. Или же, белок можно получать в значительно более высокой концентрации, чем обычная, используя индуцибельный промотор или высокоэкспрессирующий промотор,так что белок получают с повышенными уровнями концентрации. Антигенсвязывающие белки могут специфически связываться с IL-18 рецептором, предпочтительно человеческим IL-рецептором. Выражение "специфически связывается" по данному описанию означает,что константа равновесной диссоциации равна по меньшей мере 10-6 М, предпочтительно 10-7-10-10 М,более предпочтительно от 10-8 до 10-10 М, ещ более предпочтительно от 10-9 до 10-10 М. В конкретном варианте изобретения антигенсвязывающий белок связывается с человеческим IL-18 рецептором,имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69 или 71. Эпитоп в - или -IL-18 рецепторе, с которым специфически связываются предпочтительные антигенсвязывающие белки, подробно описан ниже. В вариантах изобретения, в которых антигенсвязывающий белок используют для терапевтического применения, важной характеристикой антигенсвязывающего белка для связывания IL-18 рецептора является, может ли он ингибировать, влиять на или модулировать одну из биологических активностей IL-18 рецептора. В таком случае антигенсвязывающий белок специфически связывает и/или специфически ингибирует связывание IL-18 с его рецептором, когда избыток антитела снижает количество IL-18, связанного с IL-18 рецептором, или, наоборот, по меньшей мере на 20, 40, 60, 80, 85% или более (например,по определению связывания в in vitro анализе конкурентного связывания). IL-18 рецептор проявляет множество различных биологических эффектов, которые можно определять (измерять) многими различными анализами на различных типах клеток. Способность антигенсвязывающего белка для связыванияIL-18 рецептора ингибировать, влиять на или модулировать биологическую активность IL-18 можно определять, например, измеряя ингибирование высвобождения IFN- в клетках KG1, как описано в примере 4, или используя аналогичный анализ, в котором измеряется способность антигенсвязывающего белка ингибировать высвобождение IFN-. Не каждый антигенсвязывающий белок, который специфически связывается с антигеном, может блокировать связывание антигена с его обычным лигандом и тем самым ингибировать или модулировать биологические эффекты антигена. Как известно в уровне техники, такой эффект может зависеть от того,с каким участком антигена связывается антигенсвязывающий белок, и как от абсолютной, так и от относительной концентраций антигена и антигенсвязывающего белка, в данном случае IL-18 рецептора и антигенсвязывающего белка для связывания 1L-18 рецептора. Для того чтобы можно было считать, что антигенсвязывающий белок способен ингибировать или модулировать биологическую активность IL-18 рецептора в том смысле, как это понимается в данном описании, антигенсвязывающий белок способен,например, ингибировать высвобождение IFN-, наблюдаемое в присутствии IL-18, определяемое в клеточном анализе на клетках KG1 в примере 4 или в аналогичном анализе по меньшей мере на 20, 40, 60,80, 85, 90, 95, 99% или более, когда концентрация IL-18 находится в интервале, например, около EC80 или ЕС 90, когда влияние агента, который ингибирует его биологическую активность, явно выражено.EC80 по данному описанию означает количество IL-18, необходимое для того, чтобы наблюдаемый эффект составлял 80% от максимального эффекта IL-18. Если концентрация IL-18 значительно выше ЕС 90,влияние ингибирующего агента может быть менее очевидным вследствие избытка IL-18. Концентрация антигенсвязывающего белка, необходимая для ингибирования, препятствования или модулирования биологической активности IL-18 рецептора, может меняться в широких пределах и может зависеть от того, насколько прочно антитело связывается с IL-18 рецептором. Например, одной молекулы или менее антигенсвязывающего белка на молекулу IL-18 может быть достаточно для ингибирования, препятствования или модулирования биологической активности в анализе на KG1 клетках. В некоторых вариантах изобретения соотношение IL-18 рецептор/антитело примерно от 1000:1, примерно до 1:1000, включая около 2:1, 1:1, 1:2, 1:4, 1:6, 1:8, 1:10, 1:20, 1:40, 1:60, 1:100, 1:500, 1:1000 или более может потребоваться для ингибирования, препятствования или модулирования биологической активности IL-18 рецептора,когда концентрация IL-18 составляет примерно ЕС 50-EC90. Также возможны соотношения антигенсвязывающего белка для связывания IL-18 в пределах этих значений. Обычно структура антигенсвязывающих белков по изобретению содержит: (а) каркас (скаффолд,остов) и (б) одну или несколько областей CDR, которые являются определяющими для специфичности и-5 016783 аффинности связывания с антигеном. "Гипервариабельная область", или "CDR", по данному описанию относится к области связывающего белка, которая составляет основные точки контакта поверхностей для связывания антигена. Одна или более CDR заключены в каркасную структуру (скаффолд) антигенсвязывающего белка. Каркасная (скаффолд) структура антигенсвязывающего белка может представлять собой каркас антитела или его фрагмента либо варианта или может быть по природе полностью синтетической. Каркасные структуры антигенсвязывающих белков подробно описываются далее. 1. CDR. Антигенсвязывающий белок может иметь шесть CDR (как их обычно имеет каждое "плечо" природного антитела), например одну область CDR1 тяжлой цепи ("CDRH1"), одну область CDR2 тяжлой цепи ("CDRH2"), одну область CDR3 тяжлой цепи ("CDRH3"), одну область CDR1 лгкой цепи("CDRL1"), одну область CDR2 лгкой цепи ("CDRL2"), одну область CDR3 лгкой цепи ("CDRL3"). Термин "природный" ("естественный"), применяемый в ходе описания в связи с биологическими материалами, такими как полипептиды, нуклеиновые кислоты, клетки-хозяева и т.п., относится к материалам,которые имеются в природе. В природных антителах CDRH1 обычно содержит около пяти (5)-семи (7) аминокислот, CDRH2 обычно содержит около шестнадцати (16)-девятнадцати (19) аминокислот иCDRH3 обычно содержит около трх (3)-двадцати пяти (25) аминокислот. CDRL1 обычно содержит около десяти (10)-семнадцати (17) аминокислот, CDRL2 обычно содержит около семи (7) аминокислот иCDRL3 обычно содержит около семи (7)-десяти (10) аминокислот. Предпочтительные CDR изображены на фиг. 2 А-2 Е, 3 А и 3 В. Структура и свойства CDR в природном антителе описаны подробнее далее в данном разделе. Коротко говоря, в традиционном каркасе (скаффолде, неизменной части молекулы) антитела CDR включены в каркас в вариабельные области тяжлой и лгкой цепей, где они составляют области, отвечающие за связывание и распознавание (узнавание) антигена. Вариабельная область содержит по меньшей мере триBiol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 242: 877-883), в каркасной области (обозначенной как каркасные области 1-4, FR1, FR2, FR3, FR4, по Kabat et al., 1991, supra; см. также Chothia and Lesk, 1987, supra), см. infra. Однако области CDR, предусматриваемые в настоящем изобретении, можно использовать не только для определения антигенсвязывающего домена традиционной структуры антитела, но их также можно включать в другие каркасные структуры по определению в данном описании. В некоторых вариантах изобретения одну или более областей CDR антигенсвязывающего белка,каждую независимо, выбирают из CDRH областей любой из SEQ ID NO: 89-139 и из CDRL областей любой из SEQ ID NO: 140-190. Так, в одном варианте изобретение включает антигенсвязывающий белок,который связывает - и -IL-18 рецептор, причм указанный антигенсвязывающий белок содержит: (а) каркасную (скаффолд) структуру (неизменную часть молекулы по описанию ниже) и (б) по меньшей мере одну область CDR, выбранную из CDRH областей любой из SEQ ID NO: 89-139 и из CDRL областей любой из SEQ ID NO: 140-190. В данном варианте изобретения конкретно применяются антигенсвязывающие белки с областью CDRH3 или CDRL3. В других вариантах изобретения используются антигенсвязывающие белки с одной областью CDR, выбранной из CDRH областей любой из SEQ ID NO: 89-139 и CDRL областью любой из SEQ ID NO: 140-190 (например, антигенсвязывающий белок имеет две CDR области, одну CDRH и одну CDHL, конкретный вариант изобретения представляют собой антигенсвязывающие белки как с областью CDRH3, так и с областью CDRL3). Специалисты в данной области поймут, что особенно применимые варианты изобретения могут содержать одну, две, три, четыре, пять или шесть независимо выбранных CDR из SEQ ID NO: 89-190. Впрочем, как понимают специалисты в данной области техники, в конкретных вариантах изобретения обычно используются комбинации неповторяющихся CDR, например антигенсвязывающие белки обычно не содержат две области CDRH2 и т.д. В некоторых вариантах изобретения получают антигенсвязывающие белки, которые содержатCDRH3 область и CDRL3 область, при этом, в частности, область CDRH3 выбирают из CDRH3 области любой из SEQ ID NO: 91, 94, 97, 100, 103, 106, 109, 112, 115, 118, 121, 124, 127, 130, 133, 136, 139, а область CDRL3 выбирают из CDRL3 области любой из SEQ ID NO: 142, 145, 148, 151, 154, 157, 160, 163,166, 169, 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190. Конкретные комбинации представлены на фиг. 4. В других вариантах изобретения применяют антигенсвязывающие белки, которые содержат области CDRH1, CDRH2 и CDRH3, независимо выбранные из SEQ ID NO: 89-139. В более конкретных вариантах изобретения особенно применимы антигенсвязывающие белки такого типа, которые содержат все три CDRH области, выбранные из одной и той же вариабельной области любой из SEQ ID NO: 1-17. В других вариантах изобретения применяют антигенсвязывающие белки, которые содержат области CDRL1, CDRL2 и CDRL3, независимо выбранные из SEQ ID NO: 140-190. В более конкретных вариантах изобретения особенно применимы антигенсвязывающие белки такого типа, которые содержат все три CDRL области, выбранные из одной и той же вариабельной области любой из SEQ ID NO: 18-34. В дополнительном варианте изобретения антигенсвязывающие белки содержат области CDRH1,CDRH2 и CDRH3, независимо выбранные из SEQ ID NO: 89-139, опять же, в одном варианте изобрете-6 016783 ния все три области выбраны из одной и той же SEQ ID NO, и области CDRL1, CDRL2 и CDRL3, независимо выбранные из SEQ ID NO: 140-190, опять же, в одном варианте изобретения все три области выбраны из одной и той же вариабельной области любой из SEQ ID NO: 1-34. Ещ в одном аспекте изобретение включает антигенсвязывающий белок, который связывает - или-IL-18 рецептор, причм выделенный антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность тяжлой цепи, которая включает области CDRH1, CDRH2 или CDRH3, каждую из которых выбирают из SEQ ID NO: 89-139, или их фрагмент, или аминокислотную последовательность лгкой цепи, которая включает области CDRL1, CDRL2 или CDRL3, каждую из которых выбирают из SEQ ID NO: 140-190, или их фрагмент. "Фрагмент" вариабельной области тяжлой или лгкой цепи по данному описанию включает по меньшей мере одну область CDR и, по меньшей мере, участок каркасной области антитела SEQ ID NO: 1-34, причм указанный участок содержит по меньшей мере одну аминокислоту. Ещ в одном аспекте изобретение включает антигенсвязывающий белок, который связывает - или-IL-18 рецептор, причм выделенный антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность тяжлой цепи, которая включает области CDRH1, CDRH2 или CDRH3, каждую из которых выбирают из SEQ ID NO: 89-139, или аминокислотную последовательность лгкой цепи, которая включает области CDRL1, CDRL2 или CDRL3, каждую из которых выбирают из SEQ ID NO: 140-190. В конкретном варианте изобретения области CDR выбирают из одной и той же непрерывной аминокислотной последовательности тяжлой цепи SEQ ID NO: 1-17 или из одной и той же непрерывной аминокислотной последовательности лгкой цепи SEQ ID NO: 18-34. Другой аспект изобретения включает выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает- или -IL-18 рецептор, причм выделенный антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность тяжлой цепи, которая включает области CDRH1, CDRH2 или CDRH3, каждую из которых выбирают из SEQ ID NO: 89-139, и аминокислотную последовательность лгкой цепи, которая включает области CDRL1, CDRL2 или CDRL3, каждую из которых выбирают из SEQ ID NO: 140-190. В конкретном варианте изобретения области CDR тяжлой цепи выбирают из одной и той же непрерывной аминокислотной последовательности тяжлой цепи SEQ ID NO: 1-17, а области CDR лгкой цепи выбирают или из одной и той же непрерывной аминокислотной последовательности лгкой цепи SEQ ID NO: 18-34. Дополнительный аспект изобретения включает выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает - или -IL-18 рецептор, причм выделенный антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность тяжлой цепи любой из SEQ ID NO: 1-17 или аминокислотную последовательность лгкой цепи любой из SEQ ID NO: 18-34. Дополнительный аспект изобретения включает выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает - или -IL-18 рецептор, причм выделенный антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность тяжлой цепи любой из SEQ ID NO: 1-17 и аминокислотную последовательность лгкой цепи любой из SEQ ID NO: 18-34. Следует отметить, что любые последовательности тяжлой цепи SEQ ID NO: 1-17 можно объединять и совместить с любыми аминокислотными последовательностями лгкой цепи SEQ ID NO: 18-34. Полученные в результате возможные комбинации изображены на фиг. 4. Показаны димеры комбинации каждой вариабельной области тяжлой цепи и каждой вариабельной области лгкой цепи. Так как большинство антител представляют собой тетрамеры, антигенсвязывающий белок по изобретению может содержать любую комбинацию любых двух изображнных димеров, таким образом включая как гетеро-, так и гомотетрамеры, причм специфическими являются гомотетрамеры (например, из двух идентичных димеров). Ещ в одном дополнительном аспекте антигенсвязывающий белок по изобретению содержит любую из изображнных последовательностей SEQ ID NO: 73-88. В табл. 1 приводится краткое описание последовательностей совместно с регистрационными номерами этих последовательностей. CDR в вариабельных областях по изобретению определяются в фиг. 2 А 2 Е, 3 А и 3 В. Таблица 1 Краткое описание последовательностей 2. Каркасы. По данному описанию антигенсвязывающие белки могут содержать каркасную структуру, к которой привиты CDR. Каркасная структура может быть на основе антител (включая, но без ограничения,моноклональные антитела, человеческие антитела, мышиные антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела, биспецифические антитела), фрагментов антител (таких как миниантитела, доменные антитела, F(ab) фрагменты, F(ab') фрагменты, F(ab)2 фрагменты, F(ab')2 фрагменты, Fv фрагменты, scFv фрагменты, Fd фрагменты), синтетических антител (иногда в данном описании называемых "миметики антител"), слияний антител (иногда называемых в данном описании "конъюгаты антител"), включая Fc слияния. Некоторые варианты изобретения включают компоненты человеческого каркаса. Соответственно изобретение охватывает по меньшей мере одну или несколько областей CDR, определяемых в SEQ IDNO: 89-190, предпочтительно SEQ ID NO: 89-189, которые могут связываться с IL-18 рецептором и/или ингибировать его биологическую активность. В некоторых вариантах изобретения каркас (скаффолд) содержит одну или несколько вариабельных областей тяжлых цепей, определяемых любой из SEQ IDNO: 1-17, и/или одну или несколько вариабельных областей лгких цепей, определяемых любой из SEQID NO: 18-34. В некоторых вариантах изобретения каркас содержит IgG цепь по определению в любой изSEQ ID NO: 77-88. В одном варианте изобретения каркас, к которому прививают одну или несколько областей CDR,представляет собой антитело. Термин "антитело" по данному описанию относится к мультимерному белку, имеющему традиционную структуру антитела, содержащую по меньшей мере две, более часто четыре полипептидных цепи. Антитело специфически связывается с антигеном и, возможно, способно ингибировать или модулировать биологическую активность антигена. В некоторых документах антитела получают методами рекомбинантной ДНК. В других вариантах изобретения антитела получают фермента- 13016783 тивным или химическим расщеплением природных антител. Структурной единицей традиционного антитела является обычно тетрамер. Обычно каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причм каждая пара имеет одну "лгкую"(обычно имеющую молекулярную массу около 25 кДа) и одну "тяжлую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу около 50-70 кДа). Аминоконцевой участок каждой цепи включает вариабельную область примерно из 100-110 или более аминокислот, главным образом отвечающих за узнавание антигена. Карбоксиконцевой участок каждой цепи определяет константную область, главным образом отвечающую за эффекторную функцию. Человеческие лгкие цепи классифицируют как каппа и лямбда лгкие цепи. Тяжлые цепи классифицируются как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. IgG имеет несколько подклассов, включая, но без ограничения, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. IgM имеет подклассы, включая, но без ограничения, IgM1 и IgM2. Внутри лгких и тяжлых цепей вариабельные и константные области соединяются с помощью "J" области, примерно, из двенадцати (12) или более аминокислот, причм тяжлая цепь включает область"D" примерно из десяти (10) или более аминокислот, см. в целом Paul, W., ed., 1989, Fundamental Immunology Ch. 7, 2nd ed. Raven Press, N.Y. Вариабельные области каждой пары лгкая/тяжлая цепь образуют сайт связывания антитела. Некоторые природные антитела, например, обнаруженные у верблюдов и лам, представляют собой димеры из двух тяжлых цепей, не содержащих лгких цепей, Muyldermans et al., 2001, J. Biotechnol. 74: 277-302; Desmyter et al., 2001, J. Biol Chem. 276: 26285-26290. Кристаллографические исследования антитела верблюда показало, что области CDR3 образуют поверхность, которая взаимодействует с антигеном и поэтому является ключевой (важнейшей) для связывания антигенов, подобно более типичным тетрамерным антителам. Вариабельная область тяжлой и лгкой цепей обычно имеет одну и ту же общую структуру относительно консервативных каркасных областей (FR), соединнных тремя гипервариабельными областями,также называемыми областями, определяющими комплементарность, или CDR. CDR представляют собой гипервариабельные области антитела (или антигенсвязывающего белка, как указано в данном описании), которые отвечают за узнавание и связывание антигена. Области CDR двух цепей каждой пары выравниваются по каркасным областям, способствующим связыванию со специфическим эпитопом. От Nконца до С-конца как лгкая, так и тяжлая цепи содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 иFR4. Отнесение аминокислот к каждому домену проводят в соответствии с определениями Kabat последовательностей белков, представляющих иммунологический интерес (Sequences of Proteins of Immunological Interest), Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 878-883.CDR составляют основные точки контакта на поверхности для связывания антигена. См., например,Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917. Кроме того, CDR3 лгкой цепи и в особенности CDR3 тяжлой цепи могут составлять наиболее важные детерминанты при связывании антигена в вариабельных областях лгкой и тяжлой цепей, см., например, Chothia and Lesk, 1987, supra; Desiderio et al., 2001,J. Mol. Biol. 310: 603-615: Xu and Davis, 2000, Immunity 13: 37-45; Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem. 276: 26285-26290 и Muyldermans, 2001, J. Biotechnol. 74: 277-302. В некоторых антителах CDR3 тяжлой цепи,по-видимому, составляет основную область контакта между антигеном и антителом, Desmyter et al.,2001, supra. Схемы in vitro селекции, в которых изменяется только CDR3, можно применять для изменения связывающих свойств антитела, Muyldermans, 2001, supra; Desiderio et al., 2001, supra. Цепи природного антитела обычно включают сигнальную последовательность, которая направляет цепь антитела по клеточному пути секреции белка и которая отсутствует в зрелом антителе. Полинуклеотид, кодирующий цепь антитела, может кодировать естественную сигнальную последовательность или гетерологичную сигнальную последовательность, как описано ниже. В одном варианте изобретения антигенсвязывающий белок представляет собой моноклональное антитело, содержащее от одного (1) до шести (6) изображнных CDR любой из SEQ ID NO: 89-190, как указано далее. Антитела по изобретению могут быть любого типа, включая антитело IgM, IgG (в том числе IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgD, IgA или IgE. В конкретном варианте изобретения антигенсвязывающий белок представляет собой антитело IgG типа. В другом конкретном варианте изобретения антигенсвязывающий белок представляет собой антитело IgG2 типа. В некоторых вариантах изобретения, например, когда антигенсвязывающий белок представляет собой антитело с полными тяжлой и лгкой цепями, все CDR относятся к одному и тому же виду антител,например к человеческому антителу. Однако в некоторых вариантах изобретения компоненты каркаса(скаффолда) могут представлять собой смесь, полученную из различных видов. Соответственно если антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, такое антитело может являться химерным антителом и/или гуманизированным антителом. В общем, "химерных антитела" относятся к антителам,которые объединяют области более чем одного вида. Например, "химерные антитела" традиционно содержат вариабельную(ые) область(и) мыши (или, в некоторых случаях, крысы) и константную(ые) область(и) человека. Например, в вариантах изобретения, в которых антигенсвязывающий белок содержит менее шестиCDR из указанных выше последовательностей, дополнительные CDR могут быть из других видов (на- 14016783 пример, мышиные CDR) или могут представлять собой другие человеческие CDR, отличные от изображнных в последовательностях. Например, можно использовать человеческие области CDRH3 и CDRL3 из соответствующих последовательностей по данному описанию, при этом области CDRH1, CDRH2,CDRL1 и CDRL2, необязательно, можно выбирать из последовательностей из другого вида, или из последовательностей другого человеческого антитела, или из их комбинаций. Например, CDR по изобретению можно заменить на области CDR технически релевантных химерных или гуманизированных антител. В специфических вариантах изобретения используются компоненты каркаса (скаффолда) антигенсвязывающего белка, которые являются компонентами каркаса человеческого происхождения. Термин "гуманизированные антитела" обычно относится к нечеловеческим антителам, в которых каркасные области вариабельных доменов заменены на последовательности, имеющиеся в человеческих антителах. Обычно в случае гуманизированного антитела полное антитело, за исключением областейCDR, кодируется полинуклеотидом человеческого происхождения или идентично такому антителу, за исключением областей CDR. Области CDR, часть или все из которых кодируются нуклеиновыми кислотами, имеющими "нечеловеческое" происхождение, прививают в "бета-складчатый каркас" (структуру бета-складок) вариабельной области человеческого антитела, чтобы создать антитело, специфичность которого определяется привитыми областями CDR. Получение таких антител описано, например, в международной патентной заявке WO 92/11018; Jones, 1986, Nature 321: 522-525, Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534-1536. Гуманизированные антитела можно также получать, используя мышей с иммунной системой, созданной методами генетической инженерии, Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20: 639-654. В настоящем изобретении идентифицированные области CDR являются областями CDR человеческого происхождения, и, следовательно, как гуманизированные так и химерные антитела в данном контексте включают некоторые области CDR нечеловеческого происхождения; например, можно получать гуманизированные антитела, которые содержат области CDRH3 и CDRL3, с одной или более других областейCDR, имеющих отличное конкретное происхождения. В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок (белок, связывающий IL-18 антиген) представляет собой мультиспецифическое антитело, в частности биспецифическое антитело, также иногда называемое "диатело". Они являются антителами, которые связываются с двумя (или более) различными антигенами. Диатела можно получать различными методами, известными в уровне техники(Holliger and Winter, 1993, Current Opinion Biotechnol. 4: 446-449), например химическими методами или при использовании гибридом. В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок представляет собой полностью человеческое антитело, т.е. антитело, целиком состоящее из компонентов человеческого происхождения. В данном варианте изобретения, как указано выше, специфические структуры содержат полные тяжлые и лгкие цепи, включающие области CDR, изображнные на фиг. 2 А-2 Е, 3 А и 3 В. В других вариантах изобретения используются одна или более областей CDR по изобретению с другими областями CDR,каркасными областями, областями J и D, константными областями и т.д. из других человеческих антител. Например, области CDR по изобретению могут заменять CDR любого числа человеческих антител, в частности технически релевантных антител. В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок (белок, связывающий IL-18 антиген) представляет собой фрагмент антитела, который является фрагментом любого из антител по данному описанию, которое сохраняет специфичность связывания с - или -IL-18 рецептором. Конкретный фрагмент антитела включает, но без ограничения, (i) фрагмент Fab, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1, (ii) фрагмент Fab', состоящий из доменов VL, VH, CL и СН 1 плюс шарнирная область тяжлой цепи; (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и CHI, (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH единичного антитела; (v) фрагмент dAb (Ward et al., 1989, Nature 341: 544-546), состоящий из единичной вариабельной области, (vi) выделенные области CDR, (vii) фрагмент F(ab')2, бивалентный фрагмент, содержащий два связанных фрагмента Fab', (viii) одноцепочечные Fv молекулы(scFv), в которых VH домен и VL домен связаны пептидным линкером, который позволяет двум доменам ассоциироваться с образованием антигенсвязывающего сайта (Bird et al., 1988, Science 242: 423-426,Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 25: 5879-5883), (ix) биспецифические димеры одноцепочечного Fv (опубликованная международная заявка PCT/US 92/09965) и (ix) "диатела" или "триатела",мультивалентные или мультиспецифические фрагменты, конструированные с помощью генного слияния(Tomlinson et al., 2000, Methods Enzymol. 326: 461-479; международная патентная заявка WO 94/13804;Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6444-6448). Фрагменты антител можно модифицировать. Например, молекулы можно стабилизировать, включая дисульфидные мостики, связывая доменыVH и VL (Reiter et al., 1996, Nature Biotech. 14: 1239-1245). Опять же, как указывается в данном описании, не-CDR компоненты этих фрагментов предпочтительно являются последовательностями нечеловеческого происхождения. В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок представляет собой миниантитело. Миниантитела представляют собой предельно уменьшенные (минимизированные) антителоподобные белки, содержащие фрагмент scFv, связанный с СН 3 доменом, Hu et al., 1996, Cancer Res. 56: 3055-3061.- 15016783 В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок представляет собой доменное антитело; см., например, патент США No. 6248516. Доменные антитела (dAbs) представляют собой функциональные связывающие домены антител, соответствующие вариабельным областям либо тяжлой(VH), либо лгкой (VL) цепей человеческих антител. dAB имеют молекулярную массу около 13 кДа, или менее одной десятой длины антитела. dAB хорошо экспрессируются в различных хозяевах, включая системы бактеральных клеток, клеток дрожжей и клеток млекопитающих. Кроме того, dAb высокоустойчивы и сохраняют активность даже после выдерживания в жстких условиях, таких как лиофилизация или термическая денатурация, см., например, патенты США No. 6291158; 6582915; 6593081; 6172197; патентную заявку США регистрационный номер 2004/0110941; Европейский патент 0368684; патент США 6696245, международные патентные заявки WO 04/058821, WO 04/003019 и WO 03/002609. В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок представляет собой слитый белок антитела или слияние фрагмента антитела, такое как слияние Fc (иногда в данном описании их совместно называют "конъюгат антитела"). Партнр по конъюгату может быть белковым или небелковым, последний обычно получают, используя функциональные группы на антигенсвязывающем белке (см. обсуждение ковалентных модификаций антигенсвязывающего белка) или на партнре по конъюгату. Например, линкеры известны в уровне техники; например, гомо- или гетеробифункциональные линкеры хорошо известны (см., например, каталог Химической Компании Pierce 1994, специальный раздел о кросс-линкерах, с. 155-200, вводится в данное описание в качестве ссылки). Подходящие конъюгаты включают, но без ограничения, метки (маркеры) по описанию ниже, лекарства и цитотоксические агенты, включая, но без ограничения, цитотоксические лекарства (например,химиотерапевтические агенты) или токсины либо активные фрагменты таких токсинов. Подходящие токсины и их соответствующие фрагменты включают А цепь дифтерийного токсина, А цепь экзотоксина, А цепь рицина, А цепь абрина, курцин, кротин, феномицин, эномицин и т.п. Цитотоксические агенты включают также радиохимические агенты, получаемые конъюгацией радиоизотопов с антигенсвязывающими белками или связыванием радионуклида с хелатирующим агентом, который ковалентной связью соединн с антигенсвязывающим белком. В дополнительных вариантах изобретения используют калихеамицин, ауристатины, гелданамицин и мейтанзин. В одном варианте изобретения IL-18 антигенсвязывающий белок представляет собой аналог антитела, иногда называемый в данном описании "синтетическим антителом". Например, в ряде последних работ используются либо альтернативные белковые каркасы (скаффолды), либо каркасы (скаффолды) с привитыми областями CDR. Такие каркасы включают, но без ограничения, мутации, введнные для стабилизации трхмерной структуры связывающего белка, а также полностью синтетические каркасы(скаффолды), состоящие, например, из биосовместимых полимеров, см., например, Korndorfer et al.,2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, vol. 53, Issue 1: 121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20: 639-654. Помимо этого, можно применять пептидные миметики антител ("РАМ"), а также каркасы (скаффолды) на основе миметиков антител, использующих в качестве каркаса фибронектиновые компоненты. Обзоры, посвященные альтернативным каркасам (скаффолдам), которые можно использовать для получения IL-18 антигенсвязывающих белков, представлены в Hey et al., 2005, TrendsBiotechnol. 22: 514-22 и Binz et al., Nature Biotechnology 23: 1257-68 (оба ссылочных материала вводятся в данной описание ссылкой во всей полноте). 3. Варианты CDR. Данное изобретение включает также варианты аминокислотных последовательностей CDRH1,CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, показанных в SEQ ID NO: 89-190. Таким образом вариантыCDR включены в определение CDR по данному описанию. Эти варианты относятся к одному или более из трх классов: варианты замены, инсерционные варианты (инсерции) и делеционные варианты (делеции), причм первые являются специфическими, характерными. Как известно в уровне техники, для идентификации степени идентичности или подобия белковой или нуклеотидной последовательности известной последовательности можно использовать ряд различных программ. В случае аминокислотных последовательностей идентичность и/или подобие последовательностей определяют, используя стандартные методы, известные в уровне техники, включая, но без ограничения,алгоритм идентичности локальной последовательности Смита-Ватермана (Smith and Waterman, 1981,Adv. Appl. Math. 2: 482,) алгоритм Нидельмана-Вунша для выравнивания последовательностей (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443), поиск по методу подобия Пирсона и Липмана (Pearson andLipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 85; 2444), компьютерные воплощения этих алгоритмов (GAP,BESTFIT, FASTA и TFASTA в Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 ScienceDrive, Madison, Wis.), программу Best Fit для наиболее подходящей последовательности, описаннуюDevereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12: 387-395, предпочтительно используя параметры по умолчанию,или с помощью подбора. Предпочтительно процент идентичности рассчитывают с помощью системы баз данных FastDB по следующим параметрам: штраф за несоответствие 1; штраф за гэп 1; штраф за размер гэпа 0,33 и штраф за соединение 30, "Current Methods in Sequence Comparison and Analysis", Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, p. 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc.- 16016783 Примером подходящего алгоритма является PILEUP. PILEUP позволяет проводить выравнивание множества последовательностей из группы родственных последовательностей, используя прогрессивное попарное выравнивание. Также можно вычертить графическое дерево, показывающее группирование по связям (родству), используемым для выравнивания. PILEUP использует упрощение метода прогрессивного выравнивания FengDoolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35: 351-360; метод подобен методу, описанномуHiggins and Sharp, 1989, CABIOS 5: 151-153. Подходящие параметры PILEUP включают средневзвешенный (вес) гэп по умолчанию 3,00, средневзвешенная длина гэпа по умолчанию - 0,10 и взвешенные концевые гэпы. Другим примером подходящего алгоритма является алгоритм BLAST, описанный в Altschul et al.,1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402; и Karin et al., 1993,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 20: 5873-5787. Особенно применимой программой BLAST является программа WU-BLAST-2 из Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266: 460-480. WU-BLAST-2 использует несколько параметров поиска, значения большинства из которых устанавливаются по умолчанию. Устанавливаются следующие значения корректируемых параметров: интервал перекрывания=1, доля перекрывания=0.125, предельные размеры "слова" (участка) (Т)=11. Параметры HSP S и HSP S2 являются динамическими величинами и устанавливаются с помощью самой программы в зависимости от состава конкретной последовательности и состава базы данных, по сравнению (и в соответствии) с которой идт поиск интересующей последовательности; однако значения можно корректировать для повышения чувствительности. Другим подходящим алгоритмом является gapped BLAST, описанный Altschul et al., 1993, Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402. В Gapped BLAST (BLAST с гэпами) используют показатели замен BLOSUM-62; пороговый Т параметр 9; двухсобытийный метод запуска расширений без гэпов, потери из-за длины гэпаk и затраты 10+k; величина Xu 16 и величина Xg 40 на стадии поиска в базе данных и 67 на выходной стадии алгоритмов. Выравнивание с гэпами запускают на отметке, соответствующей примерно 22 бит. Обычно гомология, подобие или идентичность между аминокислотными последовательностями отдельных вариантных CDR составляют по меньшей мере 80% для последовательностей, показанных в данном описании, и, более часто, с предпочтительно увеличивающейся степенью гомологии или идентичности по меньшей мере 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и почти 100%. Аналогичным образом, "процент (%) идентичности нуклеотидной последовательности" по отношению к нуклеотидной последовательности для связывающих белков, идентифицированных в данном описании, определяется как процентное содержание нуклеотидных остатков в предполагаемой последовательности (кандидате), которые идентичны нуклеотидным остаткам в кодирующей последовательности антигенсвязывающего белка. В конкретном методе используется BLASTN модуль программы WUBLAST-2 с параметрами по умолчанию, с overlap span и overlap fraction 1 и 0.125 соответственно. Обычно гомология, подобие или идентичность между нуклеотидными последовательностями, кодирующими отдельные вариантные CDR, и нуклеотидными последовательностями, приведнными в данном описании, составляет по меньшей мере 60% и, более часто, с предпочтительно увеличивающейся степенью гомологии или идентичности по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97,98, 99 и почти 100%. Гомологию между нуклеотидными последовательностями часто определяют их способностью гибридизоваться друг с другом. Выражение "селективно гибридизуются" по данному описанию означает детектируемо и специфически связываются. Полинуклеотиды, олигонуклеотиды и их фрагменты по изобретению селективно гибридизуются с нуклеотидными нитями в условиях гибридизации и отмывки, которые снижают до минимума заметные количества детектируемого связывания с неспецифическими нуклеиновыми кислотами. Для достижения селективной гибридизации можно использовать условия высокой жсткости, известные в уровне техники и обсуждаемые в данном описании. Условия "высокой жсткости" (очень строгие условия) известны в уровне техники, см., например,Sambrook et al., 2001, supra, и Short Protocols in Molecular Biology, Second Edition, Ausubel et al. eds., JohnWileySons, 1992, каждый из этих материалов вводится в данное описание в качестве ссылки. Строгие условия зависят от последовательности и различны в различных обстоятельствах. Более длинные последовательности гибридизуются специфически при более высоких температурах. Подробным руководством по гибридизации нуклеиновых кислот является Tijssen, Techniques In Biochemistiy and Molecularnucleic acid assays" (1993). Обычно строгие условия выбирают таким образом, чтобы температура была примерно на 5-10 С ниже точки плавления (Tm) конкретной последовательности при определнном значении ионной силы и рН. Tm обозначает температуру (при определнной ионной силе, рН и концентрации нуклеиновой кислоты), при которой 50% зондов, комплементарных к мишени, гибридизуется с целевой последовательностью в равновесном состоянии (так как последовательности-мишени присутствуют в избытке, при Tm,50% зондов участвуют в равновесии). Строгие условия представляют собой такие условия, в которых концентрация соли ниже примерно 1,0 М ионов натрия, обычно около 0,01-1,0 М ионов натрия (или других солей) при рН 7,0-8,3 и температуре по меньшей мере около 30 С для коротких зондов (например,- 17016783 10-50 нуклеотидов) и по меньшей мере около 60 С для длинных зондов (например, более 50 нуклеотидов). Строгих условий можно также достичь, добавляя дестабилизирующие агенты, такие как формамид. В другом варианте изобретения применяются менее строгие условия; например, можно применять умеренно строгие условия и условия низкой строгости, известные в уровне техники; см., Sambrook et al.,2001, supra; Ausubel et al., 1992, supra и Tijssen, 1993, supra. Варианты по изобретению обычно получают сайт-специфическим мутагенезом нуклеотидов в ДНК,кодирующей антигенсвязывающий белок, с применением кассетного или ПЦР мутагенеза или других методов, хорошо известных в уровне техники, получая ДНК, кодирующую вариант, а затем экспрессируя рекомбинантную ДНК в клеточной культуре, указанной в данном описании. Однако фрагменты антигенсвязывающего белка, содержащие вариантные CDR, имеющие до 100-150 остатков, можно получать invitro синтезом известными методами. Варианты обычно проявляют ту же качественную биологическую активность, что и природный (естественный) аналог, например связывание с IL-18 рецептором и ингибирование передачи сигнала, хотя можно также выбрать варианты с модифицированными характеристиками, как более подробно описано ниже. Таким образом, "вариантная CDR" ("вариант CDR") представляет собой вариант CDR с определнными гомологией, подобием или идентичностью биологической функции, включая, но без ограничения,по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% специфичности и/или активности исходнойCDR. Например, варианты обычно связываются с тем же самым эпитопом IL-18 рецептора, описанным ниже, с аналогичным ингибированием передачи сигнала IL-18. Хотя сайт или участок для введения варианта аминокислотной последовательности является предопределнным (заданным), сама мутация не обязательно должна быть заданной. Например, чтобы оптимизировать осуществление мутации в данном сайте, можно провести случайный мутагенез в целевом кодоне или в целевой области и экспрессированные CDR варианты антигенсвязывающего белка подвергнуть скринингу на оптимальную комбинацию заданной активности. Методы осуществления мутаций-замен в определнных сайтах в ДНК с известной последовательностью хорошо известны, например сайт-направленный мутагенез с использованием фага М 13 или полимеразной цепной реакции (ПЦР). Скрининг мутантов проводят, используя анализы антигенсвязывающей активности, такой как связывание IL-18 рецептора. Аминокислотные замены обычно состоят из единичных остатков; инсерции обычно содержат, примерно, от одного (1) до двадцати (20) аминокислотных остатков, хотя допустимы значительно большие по размеру инсерции. Размеры делеций находятся в примерном интервале от одного (1) до двадцати (20) аминокислотных остатков, хотя в некоторых случаях делеций может быть намного больше по размеру. Замены, делеции, инсерции или их комбинации можно использовать для получения конечного(окончательного) производного или варианта. Обычно эти изменения проводят на немногих аминокислотах, чтобы свести к минимуму изменение молекулы, в частности иммуногенность и специфичность антигенсвязывающего белка. Однако в некоторых обстоятельствах допустимы более значительные изменения. Когда требуются небольшие изменения характеристик CDR антигенсвязывающего белка, замены обычно осуществляют в соответствии с нижеприведнной табл. 2. Таблица 2 Значительные изменения функциональной или иммунологической идентичности осуществляют,выбирая замены, менее консервативные, чем замены, приведнные в табл. 2. Например, можно вводить замены, которые заметно влияют на структуру полипептидного скелета в области изменения, например на структуру альфа-спирали или бета-складки; на заряд или гидрофобность молекулы в сайте-мишени или на размер (объм) боковой цепи. Замены, которые, как предполагают, обычно вызывают наибольшие изменения свойств полипептидов, представляют собой такие замены, в которых: (а) гидрофильный остаток, например серил или треонил, заменяется на гидрофобный остаток, например лецил, изолейцил, фе- 18016783 нилаланил, валил или аланил; (б) цистеин или пролин заменяется на любой другой остаток; (в) остаток,содержащий электроположительную боковую цепь, например лизил, аргинил или гистидил, заменяется на остаток с электроотрицательной боковой цепью, например глутамил или аспарагил; или (г) остаток с объмной боковой цепи, например фенилаланин, заменяется на остаток, не имеющий боковой цепи, например глицин. Варианты обычно проявляют такую же качественную биологическую активность и выявляют такой же иммунный ответ, что и природный (естественный) аналог, хотя при необходимости также выбирают варианты с целью модифицировать характеристики антигенсвязывающих белков. Или же, вариант можно создать таким образом, чтобы изменить биологическую активность антигенсвязывающего белка. Например, можно изменить или удалить сайт гликозилирования, как обсуждается в данном описании. 4. VH и VL варианты. Как указывается выше, в некоторых вариантах изобретение включает антигенсвязывающие белки,содержащие вариабельную область или состоящие из вариабельной области тяжлой цепи SEQ ID NO: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или 17 и/или содержащие вариабельную область или состоящие из вариабельной области лгкой цепи SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33 или 34 соответственно, или содержащие их фрагменты или состоящие из их фрагментов по определению выше. Так, в этих вариантах изобретения антигенсвязывающий белок содержит не только по меньшей мере одну область CDR или е вариант, представленный в SEQ ID NO: 1-34, но также участок приведнной каркасной последовательности. Кроме того, изобретение охватывает варианты таких вариабельных последовательностей тяжлой цепи или вариабельных последовательностей лгкой цепи. Выражения "вариант (вариантная) VH" или "вариантная (вариант) вариабельная(ой) область(и) тяжлой цепи" и "вариант (вариантная) VL" или " вариантная (вариант) вариабельная(ой) область(и) лгкой цепи" обычно означают гомологию, подобие или идентичность аминокислот по меньшей мере 80% с аминокислотами по данному описанию и, более часто, с предпочтительно увеличивающейся гомологией или идентичностью по меньшей мере 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и почти 100%. Гомология,подобие или идентичность между нуклеотидными последовательностями, кодирующими отдельные вариантные VH и VL, и нуклеотидными последовательностями, приведнными в данном описании, составляет по меньшей мере 60% и, более часто, с предпочтительно увеличивающейся степенью гомологии или идентичности по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и почти 100%. Кроме того, "вариант (вариантная) VH" или "вариантная (вариант) вариабельная(ой) область(и) тяжлой цепи" и"вариант (вариантная) VL" или "вариантная (вариант) вариабельная(ой) область(и) лгкой цепи" означают общую биологическую функцию, включая, но без ограничения, по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95,96, 97, 98 или 99% специфичности и/или активности исходной области CDR. Например, варианты обычно связываются с теми же самыми эпитопами на IL-18 рецепторе, указанными ниже, с аналогичным ингибированием передачи сигнала IL-18 рецептора. Методы получения вариантов, а также методы определения гомологии, подобия или идентичности последовательностей приводятся выше, см. раздел V.Б.1. Некоторые варианты изобретения могут также включать варианты константных областей. Предпочтительные варианты константных областей включают варианты, которые изменяют функцию антитела, содержащего вариант. Например, антитело может включать вариант, который изменяет способность антитела активировать комплемент или индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность(ADCC). Такие варианты могут включать варианты, которые приводят к изменению гликозилирования антитела. В. IL-18 рецептор и эпитопы IL-18 рецептора. Под "IL-18 рецептором" или "IL-18R" по данному описанию понимают рецептор клеточной поверхности, который связывается с лигандом, включая, но без ограничения, IL-18, и в результате инициирует путь сигнальной трансдукции в клетке. Комплекс IL-18 рецептора состоит из IL-18 связывающей цепи, называемой "-IL-18 рецептор" (-IL-18R) или "IL-18R цепь", и сигнальной цепи, называемой "IL-18 рецептором" ("-IL-18R) или "IL-18R цепь". Применяемый в данном описании общий термин "IL18 рецептор" относится как к -, так и к -IL-18 рецептору. Антигенсвязывающие белки, раскрываемые в данном описании, связываются с IL-18R цепью, человеческая аминокислотная последовательность которой представлена SEQ ID NO: 69 (его нуклеотидная последовательность представлена SEQ ID NO: 70), или IL-18RP цепью, человеческая аминокислотная последовательность которой представлена SEQ ID NO: 71 (его нуклеотидная последовательность представлена SEQ ID NO: 72). В конкретном варианте изобретения IL-18 рецептор является человеческим рецептором, хотя в некоторых случаях можно применять IL-18 рецептор другого вида. Кроме того, IL-18 рецепторные белки могут также включать фрагменты. Как описывается ниже, связывание антигенсвязывающих белков с конкретными (со специфическими) эпитопами является специфическим. Под "эпитопом", "антигенной детерминантой" и грамматическими эквивалентами по данному описанию понимают участок антигена, например IL-18 рецептора, который может специфически связывать- 19016783 ся с антигенсвязывающим белком. Специалист в данной области техники понимает, что эпитоп может быть линейным или конформационным. Термин "линейный эпитоп" относится к эпитопу, содержащему последовательность по меньшей мере примерно из пяти (5) и не более чем примерно из двадцати (20) аминокислот, связанных (соединнных) линейно, причт эти аминокислоты, сами по себе или как часть большей последовательности, связываются с антигенсвязывающим белком по изобретению. Выражение"конформационный эпитоп" относится к эпитопу, трхмерная, вторичная и/или третичная структура которого может являться важным аспектом связывания антитела. Обычно, но не всегда, аминокислоты,которые содержат конформационный эпитоп, не представляют собой линейную последовательность первичной структуры белка. Так, конформационный эпитоп может быть общим у белков, имеющих негомологичные линейные аминокислотные последовательности. Без связи с теорией можно сказать, что конформационный эпитоп может быть общим (одинаковым), потому что третичная структура, узнаваемая антителом, может быть общей для двух или более аминокислотных последовательностей. В одном варианте изобретения подходящие эпитопы IL-18 рецептора включают любые эпитопы, которые узнаются(распознаются) антигенсвязывающими белками по настоящему изобретению. Изобретение включает антигенсвязывающие белки, распознающие и связывающие конформационный эпитоп в третьем домене Ig человеческого IL-18R, в частности область, определяемую аминокислотными остатками 243-271, составленную аминокислотными остатками 250-253 (т.е. остатками MFGE) и аминокислотными остатками 267-271 (т.е. остатками MRIMT) последовательности SEQ ID NO: 69. Аминокислотная структура этого эпитопа изображена на фиг. 5. Антигенсвязывающие белки, которые связываются с этим эпитопом, особенно эффективно блокируют взаимодействие IL-18 с IL-18R. Методы определения эпитопа, связывающегося с антигенсвязывающим белком, хорошо известны в уровне техники, и один такой метод описан в примере 4 по данному описанию. В примере 4 показано, что некоторые человеческие IL-18R антигенсвязывающие белки проявляют значительно пониженную способность связывать человеческий IL-18R, когда остатки в эпитопе, определяемом аминокислотами 243-271, например 250-253 или 267-271, заменяют на соответствующие остатки мышиной последовательности. Так, данное описание включает антигенсвязывающие белки, которые связывают человеческий IL-18R, но это связывание снижается (ослабляется), когда остатки 250-253 человеческой IL-18R цепи заменяются на соответствующие аминокислотные остатки мышиной последовательности. Также данное описание включает антигенсвязывающие белки, которые связывают человеческий IL-18R, но это связывание снижается (ослабляется), когда остатки 267-271 человеческой IL18R цепи заменяются на соответствующие аминокислотные остатки мышиной последовательности. Г. Ковалентные модификации антигенсвязывающего белка. В объм данного изобретения входят ковалентные модификации антигенсвязывающих белков,обычно, но не всегда, являющиеся посттрансляционными. Например, несколько типов ковалентных модификаций антигенсвязывающего белка вводят в молекулу по реакции специфических аминокислотных остатков антигенсвязывающего белка с органическим дериватизирующим агентом, который способен реагировать с выбранными боковыми цепями или с N- или С-концевыми остатками. Остатки цистеина (цистеинил) чаще всего реагируют с -галогенацетатами (и соответствующими амидами, такими как хлоруксусная кислота или хлорацетамид), давая карбоксиметильные или карбоксиамидометильные производные. Цистеинильные остатки также дериватизируют по реакции с бромтрифторацетоном,-бром(5-имидазоил)пропионовой кислотой,хлорацетилфосфатом,Nалкилмалеимидами,3-нитро-2-пиридилдисульфидом,метил-2-пиридилдисульфидом,пхлормеркурибензоатом, 2-хлормеркури-4-нитрофенолом или хлор-7-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом. Остатки гистидина (гистидил) дериватизируют по реакции с диэтилпирокарбонатом при рН 5,5-7,0,так как этот агент относительно специфичен к гистидильной боковой цепи. Также применим парабромфенацилбромид; реакцию предпочтительно проводят в 0,1 М растворе какодилата натрия при рН 6,0. Остаток лизина и аминоконцевые остатки реагируют с ангидридами янтарной или других карбоновых кислот. Дериватизация этими агентами приводит к обращению (реверсии) заряда лизинильных остатков. Другие реагенты, подходящие для дериватизации альфа-аминосодержащих кислот, включают имидоэфиры, такие как метил пиколинимидат; пиридоксальфосфат; пиридоксаль; хлорборогидрид; тринитробензолсульфокислота; О-метилизомочевина; 2,4-пентандион и катализируемая трансаминазой реакция с глиоксилатом. Аргинильные остатки модифицируют по реакции с одним или несколькими обычными реагентами,среди которых фенилглиоксаль, 2,3-бутандион, 1,2-циклогександион и нингидрин. Для дериватизации аргининовых остатков необходимо проводить реакцию в щелочной среде из-за высокого значения pKa функциональной гуанидиновой группы. Кроме того, эти реагенты могут реагировать с группами лизина,а также с эпсилон-аминогруппой аргинина. Можно проводить специфическую модификацию тирозильных остатков, причм особый интерес представляет введение спектральных меток в тирозильные остатки по реакции с ароматическими диазониевыми соединениями или тетранитрометаном. Чаще всего получают О-ацетилтирозильные и 3- 20016783 нитропроизводные по реакции с N-ацетилимидазолом и тетранитрометаном соответственно. Тирозильные остатки йодируют с помощью 128I или 131I, получая меченые белки для применения в радиоиммунном анализе (РИА), подходящим является описанный выше метод с хлорамином Т. Боковые карбоксильные группы (аспартил или глутамил) селективно модифицируют по реакции с карбоксидиимидами (R'-N=C=N-R'), где R и R' обозначают необязательно разные алкильные группы,такие как 1-циклогексил-3-(2-морфолинил-4-этил)карбодиимид или 1-этил-3-(4-азониа-4,4 диметилпентил)карбодиимид. Кроме того, аспартильный и глутамильный остатки переводят в остатки аспарагинил и глутаминил по реакции с аммониевыми ионами. Дериватизацию бифункциональными агентами применяют для перекрстного связывания антигенсвязывающих белков с нерастворимой в воде подложкой (матрицей) или поверхностью для применения в различных методах. Применяемые обычно перекрстно связывающие (сшивающие) агенты включают,например,1,1-бис-(диазоацетил)-2-фенилэтан,глутаровый альдегид,сложные эфирыNгидроксисукцинимида, например сложные эфиры с 4-азидосалициловой кислотой, гомобифункциональные имидоэфиры,включая дисукцинимидиловые эфиры,такие как 3,3'-дитио-бис(сукцинимидилпропионат), и бифункциональные малеимиды, такие как бис-N-малеимидо-1,8-октан. Дериватизирующие агенты, такие как метил-3-[(п-азидофенил)дитио]пропиоимидат, дают фотоактивируемые интермедиаты, способные образовывать перекрстные связи (сшиваться) на свету. Или же, реактивные (реакционноспособные) нерастворимые в воде матрицы, такие как углеводы, активированные цианогенбромидом, и реактивные субстраты, описанные в патентах США No. 3969287; 3691016; 4195128; 4247642; 4229537 и 4330440, применяют для иммобилизации белков. Остатки глутаминил и аспарагинил часто деамидируют в соответствующие остатки глутамил и аспартил соответственно. Или же, эти остатки деамидируют в слабокислой среде. Любая форма этих остатков входит в объм настоящего изобретения. Другие модификации включают гидроксилирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп остатков серила или треонила, метилирование -аминогрупп боковых цепей лизина,аргинина и гистидина (Т.Е. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. FreemanCo.,San Francisco, p. 79-86 [1983]), ацетилирование N-концевого амина и амидирование какой-либо Сконцевой карбоксильной группы. 1. Гликозилирование. Другой тип ковалентной модификации антигенсвязывающего белка, входящего в объм настоящего изобретения, включает изменение паттерна гликозилирования белка. Как известно в уровне техники,паттерны гликозилирования могут зависеть как от последовательности белка (например, от присутствия или отсутствия конкретных гликозилируемых аминокислотных остатков, обсуждаемых ниже), так и от клетки-хозяина или организма-хозяина, в которых продуцируется белок. Конкретные системы экспрессии обсуждаются ниже. Гликозилирование полипептидов обычно является либо N-связанным, либо О-связанным. Nсвязанное гликозилирование относится к присоединению углеводного фрагмента к боковой цепи аспарагинового остатка. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где X обозначает любую аминокислоту, кроме пролина, представляют собой последовательности распознавания для ферментативного связывания углеводного фрагмента с боковой цепью аспарагина. Таким образом, присутствие этих трипептидных последовательностей создат потенциальный сайт гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к связыванию одного из сахаров, N-ацетилгалактозамина,галактозы или ксилозы, с гидроксиаминокислотой, чаще всего серином или треонином, хотя могут также применяться 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин. Добавление сайтов гликозилирования к антигенсвязывающему белку осуществляют обычно, изменяя аминокислотную последовательность таким образом, чтобы она содержала одну или более вышеописанных трипептидных последовательностей (для сайтов N-связанного гликозилирования). Изменение можно осуществлять путм добавления одного или более или замены на один или более остатков серина или треонина к исходной последовательности (для сайтов О-связанного гликозилирования). Для простоты аминокислотные последовательности антигенсвязывающего белка предпочтительно изменяют с помощью изменений на уровне ДНК, в частности, осуществляя мутации ДНК, кодирующей целевой полипептид в заранее выбранных основаниях, так что образуются кодоны, которые транслируются в заданные аминокислоты. Другим способом увеличения числа углеводных фрагментов на антигенсвязывающем белке является химическая или ферментативная конденсация гликозидов с белком. Эти методы являются предпочтительными, так как они не требуют получения белка в клетке-хозяине со способностью к N- и Освязанному гликозилированию. В зависимости от используемого метода конденсации сахар(а) может связываться с: (а) аргинином и гистидином, (б) свободными карбоксильными группами, (в) свободными сульфгидрильными группами, такими как сульфгидрильные группы цистеина, (г) свободными гидроксильными группами, такими как гидроксильные группы серина, треонина или гидроксипролина, (д) ароматическими остатками, такими как фенилаланин, тирозин или триптофан, или (е) амидной группой глутамина. Эти методы описаны в международной патентной заявке WO 87/05330, опубликованной 11- 21016783 сентября 1987 года, и в обзоре Alpin and Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochemist., p. 259-306. Снятие (удаление) углеводных частиц (фрагментов), имеющихся в исходном антигенсвязывающем белке, можно осуществлять химическими или ферментативными методами. Для химического дегликозилирования требуется экспозиция белка с трифторметансульфоновой кислотой (триметансульфокислотой) или с аналогичным соединением. Такая обработка приводит к отщеплению большинства или всех сахаров, за исключением связывающего сахара (N-ацетилглюкозамина или N-ацетилгалактозамина), в то же время полипептид остатся незатронутым (интактным). Химическое дегликозилирование описано Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259: 52 и Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118: 131. Ферментативное отщепление углеводных частиц в полипептидах можно проводить с помощью различных эндо- и экзогликозидаз, как описано Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138: 350. Гликозилирование в потенциальных сайтах гликозилирования можно предотвратить, применяя туникамицин, как описано Duskin etal., 1982, J. Biol. Chem. 257: 3105. Туникамицин блокирует образование белок-N-гликозидных связей. 2. Пегилирование (пэгилирование, ПЭГилирование). Другой тип ковалентной модификации антигенсвязывающего белка включает связывание антигенсвязывающего белка с различными небелковыми полимерами, включая, но без ограничения, различные полиолы, такие как полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль или полиоксиалкилены, так как это представлено в патентах США No. 4640835; 4496689; 4301144; 4670417; 4791192 или 4179337. Кроме того,как известно из уровня техники, для того чтобы легче было добавлять полимеры, такие как ПЭГ, можно осуществлять аминокислотные замены в различных положениях антигенсвязывающего белка. 3. Метки и эффекторные группы. В некоторых вариантах изобретения ковалентная модификация антигенсвязывающих белков по изобретению включает добавление одной или более меток. Термин "группа, вводящая метку (группа для мечения)" означает любую детектируемую метку. Примеры подходящих меток включают, но без ограничения, следующие группы: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3 Н, 14 С, 15N, 35S, 90Y, 99 Тс, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные группы (например,FITC, родамин, люминесцентные лантанидные маркеры), ферментные группы (например, пироксидазу хрена, -галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные группы, биотинильные группы или заданные эпитопы полипептидной цепи, распознаваемые вторичным репортром (например, последовательности пары "лещиновая застжка-молния", сайты связывания со вторичными антителами, домены связывания с металлами, эпитопные метки (тэги. В некоторых вариантах изобретения группа, вводящая метку, связывается с антигенсвязывающим белком с помощью спейсерных ножек различной длины для уменьшения возможных стерических затруднений. Различные методы мечения белков известны в уровне техники и могут применяться для осуществления настоящего изобретения. Термин "эффекторная группа" означает любую группу, связанную с антигенсвязывающим белком,которая ведт себя как цитотоксический агент. Примерами подходящих эффекторных групп являются радиоизотопы или радионуклиды (например, 3 Н, 14 С, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I). Другие подходящие группы включают токсины, терапевтические группы или химиотерапевтические группы. Примеры подходящих групп включают калихеамицин, ауристатины, гелданамицин и мейтанзин. В некоторых вариантах изобретения эффекторная группа связывается с антигенсвязывающим белком с помощью спейсерных ножек различной длины для уменьшения возможных стерических затруднений. Обычно метки относят к различным классам в зависимости от анализа, в котором их детектируют: а) изотопные метки, которые могут представлять собой радиоактивные или тяжлые изотопы; б) магнитные частицы; в) редокс-активные частицы; г) оптические красители; ферментные группы (например, пироксидаза хрена, -галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза); д) биотинилированные группы; и е) заданные эпитопы полипептидной цепи, распознаваемые вторичным репортром (например, последовательности пары "лейциновая застжка-молния", сайты связывания со вторичными антителами, домены связывания с металлами, эпитопные метки (тэги) и т.д.). В некоторых вариантах изобретения группа,вводящая метку, связывается с антигенсвязывающим белком с помощью спейсерных ножек различной длины для уменьшения возможных пространственных (стерических) затруднений. Различные методы мечения белков известны в уровне техники и могут применяться для осуществления настоящего изобретения. Специфические метки включают оптические красители, в том числе, но без ограничения, хромофоры, люминофоры и флуорофоры, причм последние являются специфическими во многих случаях. Флуорофоры представляют собой либо "низкомолекулярные" флуоресцирующие агенты, либо белковые флуоресцирующие агенты. Под "флуоресцентной меткой" понимают любую молекулу, которую можно обнаружить благодаря е собственным флуоресцентным свойствам. Подходящие флуоресцентные метки включают, но без ограничения, флуоресцеин, родамин, тетраметилродамин, эозин, эритрозин, кумарин, метилкумарины, пирен, малахитовый зелный, стильбен, люцифер жлтый (Lucifer Yellow), Cascade BlueJ., техас красныйAlexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), каскад голубой (Cascade Blue), каскад жлтый (Cascade Yellow) и R-фикоэритрин (РЕ) (Molecular Probes, Eugene, OR), FITC,родамин и Texas Red (Pierce, Rockford, IL), Cy5, Cy5.5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA). Подходящие оптические красители, включая флуорофоры, описаны в справочнике Molecular Probes Handbook by Richard P. Haugland, специально вводимом в данное описание в качестве ссылки. Подходящие белковые флуоресцентные метки также включают, но без ограничения, зелный флуоресцентный белок (GFP), в том числе Renilla, Ptilosarcus или Aequorea вид GFP (Chalfie et al., 1994, Science 263: 802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., Genbank регистрационный номер U55762), голубой флуоресцентный белок (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Blvd. West, 8th Floor,Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24: 462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6: 178-182), улучшенный жлтый флуоресцентный белок (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), люциферазаU.S.A. 85: 2603-2607) и Renilla (международные патентные заявки WO 92/15673, WO 95/07463, WO 98/14605, WO 98/26277, WO 99/49019, патенты США No. 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079,5804387, 5874304, 5876995, 5925558). Все приведнные выше ссылочные материалы специально вводятся в данное описание в качестве ссылки. Д. Полинуклеотиды, кодирующие антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецепторов. В некоторых аспектах изобретение включает нуклеотидные молекулы, кодирующие IgG, вариабельные области и CDR с SEQ ID NO: 1-34, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89-190. В одном варианте изобретения нуклеотиды имеют нуклеотидную последовательность по любой SEQ ID NO: 35-68, 74, 76, 78,80, 82, 84, 86, 88 и 191-292. Как представлено в данном описании нуклеиновая кислота для вариабельной области или CDR кодирует вариабельную область или CDR белок соответственно. Под "нуклеиновой кислотой" в данном описании понимают любую нуклеиновую кислоту, включая как ДНК, так и РНК. Нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению обычно являются полинуклеиновыми кислотами, т.е. полимерами индивидуальных нуклеотидов, которые ковалентно связаны 3',5'-фосфодиэфирными связями. В зависимости от применения нуклеиновая кислота может быть двухтяжевой (двухнитевой, двухцепочечной), однотяжевой (однонитевой, одноцепочечной) или может содержать участки как двухнитевой, так и однонитевой последовательности. Как понятно специалистам в данной области техники, изображение одной нити ("Уотсон") также определяет последовательность другой нити ("Крик"); таким образом, нуклеотидные последовательности, изображнные в SEQ ID NO: 35-68, также включают комплемент этих последовательностей. Под термином "рекомбинантная нуклеиновая кислота" по данному описанию подразумевается нуклеиновая кислота, первоначально полученная in vitro, как правило, обработкой нуклеиновой кислоты эндонуклеазами, в такой форме, которая обычно не встречается в естественном состоянии (в природе). Так, выделенная нуклеиновая кислота для антигенсвязывающего белка в линейной форме или экспрессирующий вектор, образованный in vitro лигированием молекул ДНК, которые обычно не соединяются, оба, для целей настоящего изобретения считаются рекомбинантными. Понятно,что когда рекомбинантная нуклеиновая кислота получена и е интродуцируют в клетку-хозяина или в организм-хозяин, она будет реплицироваться не методами рекомбинантной ДНК, а именно с применением скорее клеточных механизмов клетки-хозяина, нежели in vitro манипуляций; однако такие нуклеиновые кислоты, будучи получены рекомбинантными методами, несмотря на то что затем они реплицируются не методами рекомбинантной ДНК, по-прежнему считаются рекомбинантными для целей настоящего изобретения. Как понятно специалистам в данной области техники, вследствие вырожденности генетического кода можно получать чрезвычайно большое число нуклеиновых кислот, каждая из которых кодирует области CDR (и тяжлую, и лгкую цепи или другие компоненты антигенсвязывающего белка) по настоящему изобретению. Так, идентифицировав конкретную аминокислотную последовательность, такую как SEQ ID NO: 1-34, специалисты в данной области техники могут получать любое число различных нуклеотидных кислот, просто модифицируя последовательность одного или более кодонов так, чтобы не изменялась аминокислотная последовательность кодированного белка. Е. Способы получения антигенсвязывающих белков. Настоящее изобретение включает также экспрессионные системы и конструкции в виде плазмид,экспрессирующих векторов, транскрипционных или экспрессионных кассет, которые содержат по меньшей мере один вышеуказанный полинуклеотид. Кроме того, изобретение включает клетки-хозяева, содержащие такие экспрессионные системы или конструкции. Обычно экспрессирующие векторы используют в любых клетках-хозяевах, которые содержат последовательности для сохранения плазмиды и для клонирования и экспрессии экзогенных нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности, носящие общее название "фланкирующие последовательности", в некоторых вариантах изобретения обычно включают одну или более следующих нуклеотидных последовательностей: промотор, одну или более энхансерных последовательностей, ориджин репликации, последовательность терминации транскрипции, полную интронную последовательность,содержащую донорный и акцепторный сайт сплайсинга, последовательность, кодирующую лидерную- 23016783 последовательность для секреции полипептида, сайт связывания рибосом, полилинкерную область для введения нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и селективный маркерный элемент. Каждая из этих последовательностей обсуждается ниже. Необязательно, вектор может содержать "тэг"-кодирующую последовательность, т.е. олигонуклеотидную молекулу, локализованную на 3'- или 5'-конце последовательности, кодирующей антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора; олигонуклеотидная последовательность кодирует полиHis (такой как гекса-His) или другой "тэг", такой как FLAG, НА (гемагглютинин вируса гриппа) или myc,для которого существуют продажные антитела. Этот тэг обычно сливается с полипептидом при экспрессии полипептида и может служить в методе аффинной очистки или обнаружения антигенсвязывающего белка для связывания IL-18-рецептора от (или из) клетки-хозяина. Аффинную очистку можно осуществлять, например, колоночной хроматографией, в качестве аффинной матрицы используя антитела против этого тэга (метки). Необязательно тэг (метку) можно затем удалять из очищенного антигенсвязывающего белка для связывания IL-18-рецептора различными методами, такими как использование некоторых пептидаз для отщепления. Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (т.е. из того же вида и/или штамма, что и клетка-хозяин), гетерологичными (т.е. из вида, отличного от вида или штамма клетки-хозяина),гибридными (т.е. комбинацией фланкирующих последовательностей из более чем одного источника),синтетическими или нативными. Действительно, источником фланкирующей последовательности может являться любой прокариотический или эукариотический организм, любой позвоночный или беспозвоночный организм или любое растение при условии, что фланкирующая последовательность является функциональной в механизмах клетки-хозяина и может ими активироваться. Фланкирующие последовательности в векторах по данному изобретению можно получать любым из известных в уровне техники методов. Как правило, фланкирующие последовательности, применимые в данном описании, предварительно идентифицируют картированием и/или расщеплением рестриктазами, и их можно таким образом выделять из соответствующего источника ткани, используя подходящие рестриктазы. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность фланкирующей последовательности. В данной работе фланкирующую последовательность можно синтезировать методами, описанными для синтеза или клонирования нуклеиновых кислот. Если известна вся фланкирующая последовательность или е часть, е можно получать полимеразной цепной реакцией (ПЦР) и/или скринингом геномной библиотеки с применением подходящего зонда,такого как олигонуклеотид и/или фрагмент фланкирующей последовательности из того же самого или другого вида. Если фланкирующая последовательность неизвестна, фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, можно выделить из большего по размеру отрезка ДНК, который может содержать, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или другие гены. Выделение можно осуществлять расщеплением рестриктазами, получая соответствующий фрагмент ДНК, с последующим выделением, используя очистку на агарозном геле, хроматографию на колонке Qiagen(Chatsworth, СА) или другие методы, известные специалистам в данной области техники. Отбор подходящих ферментов для этой цели совершенно очевиден для рядового специалиста в данной области техники. Ориджин репликации обычно представляет собой участок продажных (выпускаемых промышленно) векторов экспрессии и ориджин способствует амплификации вектора в клетке-хозяине. Если выбранный вектор не содержит сайт ориджина репликации, его можно синтезировать химическими методами, исходя из известной последовательности, и лигировать в вектор. Например, ориджин репликации из плазмиды pBR322 (New England Biolabs, MA) подходит для большинства грамотрицательных бактерий, а различные вирусные ориджины репликации (например, SV40, полиомы, аденовирусов, вируса везикулярного стоматита (VSV) или папилломавирусов, таких как HPV или BPV) применимы для клонирующих векторов в клетках млекопитающих. Обычно компонент ориджина репликации не является необходимым для векторов экспрессии в клетках млекопитающих (например, ориджин SV40 часто применяют только потому, что он содержит также ранний промотор вируса). Последовательность терминации транскрипции, как правило, локализована 3' к концу области, кодирующей полипептид, и служит для терминации (прекращения) транскрипции. Обычно последовательность терминации транскрипции в прокариотических клетках представляет собой богатый G-C фрагмент с последующей поли-Т последовательностью. Хотя эту последовательность просто клонировать при использовании библиотеки или даже приобрести готовую как часть вектора, е можно также легко синтезировать методами синтеза нуклеотидов, такими как представленные в данном описании. Селективный маркерный ген кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки-хозяина,выращиваемой в селективной культуральной среде. Типичные селективные маркерные гены кодируют белки, которые: (а) придают резистентность (устойчивость) к антибиотикам или другим токсинам, например ампициллину, тетрациклину или канамицину, прокариотическим клеткам-хозяевам; (б) восполняют ауксотрофный дефицит клеток или (в) снабжают важнейшими питательными веществами, отсутствующими в комплексной питательной среде или в питательной среде определнного состава. Специфическими селективными маркерами являются ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампи- 24016783 циллину и ген устойчивости к тетрациклину. Предпочтительно ген устойчивости к неомицину также можно использовать для селекции как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах. Другие селективные гены можно применять для амплификации гена, который следует экспрессировать. Амплификация представляет собой процесс, в котором реитерация генов, необходимых для продуцирования белка, критически важного для роста или выживания клетки, происходит совместно с хромосомами последовательных генераций рекомбинантных клеток. Примеры подходящих селективных маркеров для клеток млекопитающих включают дигидрофолатредуктазу (DHFR) и беспромоторные гены тимидинкиназы. Трансформанты клеток млекопитающих помещают под давление отбора, когда только трансформанты однозначно адаптированы к выживанию благодаря селективному маркерному гену, присутствующему в векторе. Давление отбора вводится путм культивирования трансформированных клеток в условиях, при которых концентрация селекционного агента в среде последовательно повышается,что приводит к амплификации как селективного гена, так и ДНК, которая кодирует, например, антитело к антигенсвязывающему белку, которое связывается с полипептидом для IL-18 рецептора. В результате повышенные количества полипептида, такого как антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора, синтезируются при использовании амплифицированной ДНК. Сайт связывания рибосом обычно необходим для инициации трансляции мРНК и характеризуется последовательностью Шайна-Дальгарно (прокариоты) или последовательностью Козака (эукариоты). Этот элемент обычно локализован 3' к промотору и 5' к кодирующей последовательности экспрессируемого полипептида. В некоторых случаях, таких, где желательно гликозилирование в экспрессионной системе эукариотической клетки-хозяина, можно варьировать различные пре- или пропоследовательности для повышения гликозилирования или выхода. Конечный белковый продукт может иметь в -1 положении (относительно первой аминокислоты зрелого белка) одну или более дополнительных аминокислот, инцидентных для экспрессии, которые не удалось полностью удалить. Например, конечный белковый продукт может иметь один или два аминокислотных остатка, находившихся в сайте расщепления пептидазой, связанных с аминоконцом. Или же, использование некоторых сайтов расщепления ферментом может привести к немного усечнной (процессированной) форме заданного полипептида, если фермент разрезает в такой области зрелого белка. Экспрессирующие и клонирующие векторы по изобретению обычно содержат промотор, который распознатся организмом-хозяином и функционально связан с молекулой, кодирующей антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора. Промоторы представляют собой нетранскрибируемые последовательности, локализованные выше (т.е. 5') стартового кодона структурного гена (обычно в пределах примерно 100-1000 п.о.), которые контролируют транскрипцию структурного гена. Промоторы обычно относят к одному из двух классов: индуцибельные промоторы и конститутивные промоторы. Индуцибельные промоторы инициируют повышенные уровни транскрипции при использовании ДНК под их контролем в ответ на некоторое изменение условий культивирования, таких как присутствие или отсутствие питательного вещества или изменение температуры. С другой стороны, конститутивные промоторы равномерно тринскрибируют ген, с которым они функционально связаны, т.е. при незначительной или при отсутствии регуляции экспрессии гена. Известно большое число промоторов, узнаваемых различными возможными клетками-хозяевами. Подходящий промотор функционально связывается с ДНК, кодирующей тяжлую цепь или лгкую цепь, содержащую антигенсвязывающий белок IL-18 рецептора по изобретению за счт удаления промотора из исходной ДНК путм расщепления рестриктазой и инсерции заданной промоторной последовательности в вектор. Подходящие промоторы для применении в дрожжевых клетках-хозяевах также хорошо известны в уровне техники. Дрожжевые энхансеры используют предпочтительно с дрожжевыми промоторами. Подходящие промоторы для применения с клетками-хозяевами млекопитающих также известны и включают, но без ограничения, промоторы, полученные из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы кур, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус бычьей папилломы, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита В и наиболее предпочтительно вирус симиан-40 (SV40). Другие подходящие промоторы у млекопитающих включают гетерологичные промоторы млекопитающих, например промоторы теплового шока и промотор актина. Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают, но без ограничения: ранний промотор SV40 (Benoist and Chambon, 1981, Nature 290: 304-310): промотор CMV (Thornsen et al.,1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. 21: 659-663); промотор, содержащийся в 3' длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса (Yamamoto et al., 1980, Cell 22: 787-797); промотор тимидинкиназного гена вируса герпеса (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 72: 1444-1445); промоторную и регуляторную последовательности гена металлотионина (Printers et al., 1982, Nature 296: 39-42) и промоторы прокариотических генов, такие как промотор гена бета-лактамазы (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 75: 3727-3731); или tac промотор (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80: 21-25). Также представляют интерес следующие области регуляции (область контроля, регуляторная область) транскрипции генов животных, которые проявляют тканеспецифичность и использовались в трансгенных животных: регуляторная область гена эластазы I, активная в ациноцитах поджелудочной железы (Swift etal., 1984, Cell 38: 639-646; Omitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7: 425-515); область контроля гена инсулина, активная в панкреатических бетаклетках (Hanahan, 1985, Nature 315: 115-122); область контроля гена иммуноглобулина, активная в лимфоидных клетках (Grosschedl et al., 1984, Cell 22: 647-658; Adames et al., 1985, Nature 212: 533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7: 1436-1444); регуляторная область мышиного вируса рака молочной железы, активная в клетках яичек, лимфоидной ткани, молочной железы и тучных клетках (Leder et al.,1986, Cell 45: 485-495); регуляторная область гена альбумина, активная в печени (Pinkert et al., 1987,Genes and Devel. 1: 268-276); регуляторная область гена альфа-фетопротеина, активная в печени (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5: 1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 252: 53-58); регуляторная область гена альфа-1-антитрипсина, активная в печени (Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1: 161-171); регуляторная область гена бета-глобина, активная в миелоидных клетках (Mogran et al., 1985, Nature 315: 338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46: 84-94); регуляторная область основного белка миелина, активная в олигодендроцитных клетках головного мозга (Readhead et al., 1987, Cell 48: 703-712); регуляторная область гена лгкой цепи-2 миозина, активная в скелетной мышце (Sani, 1985, Nature 314: 283-286; и регуляторная область гена гонадотропин-рилизинг гормона, активная в гипоталамусе (Mason et al., 1986, Science 234: 1372-1378). Энхансерную последовательность можно ввести в вектор для повышения транскрипции ДНК, кодирующей лгкую цепь или тяжлую цепь, содержащую антигенсвязывающую последовательность для связывания IL-18 рецептора по изобретению, с применением высших эукариот. Энхансеры представляют собой цис-действующие элементы ДНК, обычно имеющие длину около 10-300 п.о., которые влияют на промотор, повышая транскрипцию. Энхансеры относительно независимо от ориентации и положения находятся в положениях как 5', так и 3' к транскрипционной единице. Известны некоторые энхансерные последовательности, имеющиеся в генах млекопитающих (например, глобина, эластазы, альбумина, альфа-фетопротеина и инсулина). Обычно, однако, используют энхансер вируса. Энхансер SV40, энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер вируса полиомы и энхансеры аденовирусов, известные в уровне техники, являются типичными энхансерными элементами для активации эукариотических промоторов. Хотя энхансер может позиционироваться в векторе либо 5', либо 3' к кодирующей последовательности, обычно он располагается в сайте 5' от промотора. Последовательность, кодирующая нативную или гетерологичную сигнальную последовательность (лидерную последовательность или сигнальный пептид), можно включать в экспрессирующий вектор с целью промотировать (инициировать) внеклеточную секрецию антитела. Выбор сигнального пептида или лидерной последовательности зависит от типа клеток-хозяев, в которых должно продуцироваться антитело, а гетерологичная сигнальная последовательность может заменять нативную сигнальную последовательность. Примеры сигнальных пептидов,функциональных в клетках-хозяевах млекопитающих, включают следующие: сигнальную последовательность интерлейкина-7 (IL-7), описанную в патенте США No. 4965195; сигнальную последовательность рецептора интерлейкина-2, описанную в Cosman et al., 1984, Nature 312: 768; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в Европейском патенте No. ЕР 0367566; сигнальный пептид рецептора типа I интерлейкина-1, описанный в патенте США No. 4968607; сигнальный пептид рецептора типа II интерлейкина-1, описанный в Европейском патенте No. ЕР 0460846. Векторы экспрессии по изобретению можно конструировать исходя из начального вектора, такого как продажный вектор. Такие векторы могут содержать или могут не содержать все нужные фланкирующие последовательности. Если вектор ещ не содержит одну или более фланкирующих последовательностей по данному описанию, их можно получать отдельно и лигировать в вектор. Методы, используемые для получения каждой из фланкирующих последовательностей, хорошо известны специалисту в данной области техники. После того как сконструирован вектор и нуклеотидная молекула, кодирующая лгкую цепь, тяжлую цепь или лгкую цепь и тяжлую цепь, содержащую антигенсвязывающую последовательность для связывания IL-18 рецептора, встроена (вставка, инсерция) в соответствующий сайт вектора, готовый вектор можно ввести в клетку-хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Трансформацию вектора экспрессии для антигенсвязывающего белка для связывания IL-18 рецептора в выбранную клетку-хозяина можно осуществлять общеизвестными методами, включая трансфекцию, инфекцию (инфицирование, заражение), копреципитацию, электропорацию, микроинъекцию, липофекцию, DEAEдекстранопосредованную трансфекцию или другие известные методы. Выбранный метод частично зависит от типа используемой клетки-хозяина. Эти методы и другие подходящие методы общеизвестны опытным специалистам и представлены, например, в Sambrook et al., 2002, supra. В клетке-хозяине при культивировании в подходящих условиях синтезируется антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора, который можно затем собрать из культуральной среды (если клетка-хозяин секретирует его в среду) или непосредственно из продуцирующей его клетки-хозяина (если клетка-хозяин его не секретирует). Выбор соответствующей клетки-хозяина зависит от различных факторов, таких как требуемые уровни экспрессии, модификации полипептида, желательные или необходимые для активности (такой как гликозилирование или фосфорилирование) и лгкость фолдинга (укладки) в биологически активную молекулу.- 26016783 Линии клеток млекопитающих, подходящих для экспрессии в качестве хозяев, общеизвестны в уровне техники и включают, но без ограничения, иммортализованные линии клеток из Американской Коллекции Типовых Культур (АТСС), включая, но без ограничения, клетки яичника китайского хомячка(СНО), клетки HeLa, клетки почки детныша хомяка (BHK), клетки почки обезьян (COS), человеческие клетки почечноклеточного рака (например, Hep G2) и ряд других клеточных линий. В некоторых вариантах изобретения линии клеток можно отбирать, определяя, какие линии клеток имеют высокие уровни экспрессии и конститутивно продуцируют антигенсвязывающие белки со свойствами связывания IL-18 рецептора. В другом варианте изобретения может быть выбрана линия клеток В-клеточной линии дифференцировки, которая не вырабатывает своего собственного антитела, но обладает способностью продуцировать и секретировать гетерологичное антитело. Ж. Применение антигенсвязывающих белков для связывания IL-18 рецептора для диагностических и терапевтических целей Антигенсвязывающие белки по изобретению применимы для детекции IL-18 рецептора в биологических образцах и идентификации клеток или тканей, которые продуцируют IL-18 рецепторный белок. Антигенсвязывающие белки по изобретению, которые специфически связываются с IL-18 рецептором,можно применять при лечении заболеваний, опосредованных IL-18 рецептором, у нуждающегося в этом пациента. Например, антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора по изобретению можно применять в диагностических анализах, например анализах связывания, для обнаружения и/или количественного определения IL-18 рецептора, экспрессируемого в ткани или клетке. Кроме того, белок, связывающий антиген-IL-18 рецептор (антигенсвязывающий белок для связывания IL-18 рецептора) по изобретению, можно использовать для ингибирования образования комплекса между рецептором IL-18 и его лигандом, например IL-18, тем самым модулируя биологическую активность IL-18 рецептора в клетке или ткани. Таким образом, антигенсвязывающие белки, которые связываются с IL-18 рецептором, могут модулировать и/или блокировать взаимодействие с другими связывающими соединениями и соответственно могут иметь терапевтическое применение для уменьшения интенсивности заболеваний, опосредованных IL-18 рецептором. В конкретных вариантах изобретения антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецептора (белки, связывающие IL-18 рецепторный антиген), могут блокировать связывание IL-18 с его рецептором, что может привести к нарушению каскада сигнальной трансдукции, индуцируемого IL-18 рецептором. 1. Показания. Повышенные уровни IL-18 и/или участие сигналов, опосредованных IL-18, в патогенезе заболеваний было продемонстрировано при различных состояниях и заболеваниях. Таким образом, антигенсвязывающие белки по настоящему изобретению служат для регуляции (контроля) или подавления иммунного ответа и проявляют эффективность при лечении и предупреждении различных заболеваний, вызванных избыточным иммунным ответом (см. международные патентные заявки WO 2004/002519; WO 2005/063290; WO 2004/034988; Mallat et al., 2002, Circ. Res. 91: 441-448). Следовательно, антигенсвязывающие белки для связывания IL-18 рецептора по настоящему изобретению можно применять для диагностики, предупреждения или лечения заболеваний или состояний, ассоциированных с IL-18. Заболевание или состояние, ассоциированное с IL-18, означает любое заболевание или состояние,начало которого у пациента вызывается или предупреждается взаимодействием IL-18 с IL-18 рецептором. Тяжесть заболевания или состояния может также увеличиваться или уменьшаться за счт взаимодействия IL-18 с IL-18 рецептором. Например, IL-18 ассоциируется с аутоиммунными заболеваниями(международные патентные заявки WO 2004/002519; WO 2005/063290; WO 2004/034988; Mallat et al.,2002, Circ. Res. 91: 441-448), заболеванием печени (Finitto et al., 2004, Liver 53: 392-400; Tsutsui et al.,2000, Immunological Reviews 174: 192-209; Ludwiczek et al., 2002, J. Clinical Immunology 22: 331-337), заболеванием поджелудочной железы и сердечно-сосудистыми заболеваниями (Gerdes et al., 2002, J. Exp.Med. 195: 245-257; международные патентные заявки WO 03/080104; WO 02/060479; WO 01/85201; Raeburn et al., 2002, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 283: H650-H657). Примеры аутоиммунных заболеваний, которые ассоциируются с IL-18, включают псориаз, воспалительный артрит, такой как ревматоидный артрит (международная патентная заявка WO 2005/063290;al., 2000, Online J. Rheumatol. 27: 58-63; Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161: 3400-3407), волчанка (Международная патентная заявка WO 2005/063290), типа I диабет, типа II диабет, болезнь Крона (Niederau,1997, Online NLM), воспалительное заболевание кишечника (международная патентная заявка WO 2004/002519), рассеянный склероз, аутоиммунный гепатит (Tsutsui et al., 2000, supra), первичный билиарный цирроз (ПБЦ, РВС), синдром приобретнного иммунодефицита (СПИД, AIDS), атопический дерматит (Konishi et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99: 11340-11345), тяжлую псевдопаралитическую миастению и саркоидоз. При ревматоидном артрите повышенные уровни зрелого IL-18 были продемонстрированы в сыворотке и синовиальной жидкости пациента. В некоторых исследованиях было показано, что уровни IL-18 коррелируют с активностью заболевания и отвечают на лечение, вызывающее уменьшение интенсивности заболевания. Чрезвычайно высокие сывороточные уровни IL-18 постоянно определяли при систем- 27016783 ном ювенильном идиопатическом артрите и близкой ему болезни Стилла у взрослых, см. международную патентную заявку WO 20057063290; Cannetti et al., 2003, J. Immunol. 171: 1009-1015; Charles et al.,1999, J. Immunol. 163: 1521-1528; Cunnane et al., 2000, Online J. Rheumatol. 27: 58-63; Yoshimoto, 1998, J.Immunol. 161: 3400-3407. Другие формы артрита, которые ассоциируются с IL-18, включают, например, анкилозирующий спондилоартрит, боль в спине, синдром запястного канала (вызванный отложением амилоида), синдром Эхлера-Данлоса, подагру, юношеский артрит, системную красную волчанку, миозит, несовершенный остеогенез, остеопороз, полиартрит, полимиозит, псориатический артрит, синдром Рейтера, склеродермию, артрит при заболевании кишечника, болезнь Бехчета, детский артрит, дегенеративное заболевание сустава, фибромиалгию, инфекционный артрит, болезнь Лайма, синдром Марфана, остеоартрит, остеонекроз, болезнь Паджета, ревматическую полимиалгию, псевдоподагру, рефлексную симпатическую дистрофию, ревматоидный артрит, ревматизм, синдром Шгрена, семейный аденоматозный полипоз и т.п., Dai et al., 2004, Arthritis Rheum. 50: 432-443; Kawashima et al., 2004, Online Arthritis Res. Ther. 6: R39R45; Myers et al., 2004, Rheumatology 43: 272-276; Wei et al., 2001, American Association Of Immunologists,p. 517-521. У пациентов с болезнью Крона также обнаружены повышенные уровни IL-18 по сравнению с больными язвенным колитом или пациентами с невоспалительными кишечными патологическими состояниями. Как эпителиальные клетки кишечника, так и мононуклеарные клетки собственной пластины слизистой оболочки кишечника были идентифицированы как источник повышенного продуцирования IL-8in situ. Было показано, что лезии, поражения, вызванные болезнью Крона, инфильтрированы клетками,экспрессирующими IL-18R, Niederau, 1997, Online NLM. Найдено, что IL-18 также ассоциируется с язвенным колитом и целиакией. Показано, что поражения центральной нервной системы (ЦНС, CNS), ликвор и сыворотка больных рассеянным склерозом содержат повышенные уровни транскрипта или белка IL-18. Полагают, что в поврежднных участках, микроглии и макрофагах находится источник IL-18. IL-18 нельзя обнаружить в контрольных биоптатах тканей людей, не страдающих воспалительными заболеваниями ЦНС (CNS). Особенно высокие уровни IL-18 обнаружены в подгруппе пациентов с рецидивирующим-ремитирующим заболеванием; и было найдено, что уровни IL-18 повышаются в периоды рецидивов по сравнению с периодами ремиссии, Huang et al., 2004, Mult. Scler. 10: 482-7; Kami et al., 2002, J. Neuroimmunol. 125: 13440; Losy et al., 2001, Ada Neurol. Scand. 104: 171-3; Nicoletti et al., 2001, Neurology 57: 342-4; Fassbender etal., 1999, Neurology 53: 1104-6. Сообщалось, что у больных псориазом сывороточные уровни IL-18 повышаются, коррелируя со степенью кожных поражений и оценкой PASI. Сверхэкспрессия как IL-18, так и мРНК IL-18R обнаружена в поражнной коже по сравнению с контрольной непоражнной или нормальной кожей. Документально подтвержднная сверхэкспрессия IFN- и TNF- в поражнной псориазом коже согласуется с биологической активностью, проявляемой IL-18, Arican et al., 2005, Mediators Inflamm. 2005: 273-9; Piskinet al., 2004, Exp. Dermatol. 13: 764-72; Companjen et al., 2004 Eur. Cytokine Netw. 15: 210-6; Pietrzak et al.,2003, Acta Derm. Venereol. 83: 262-5. Различные другие аутоиммунные заболевания ассоциированы с повышенными уровнями IL-18 либо в больной ткани, либо в сыворотке. Эти заболевания включают системную красную волчанку, атопический дерматит, тяжлую псевдопаралитическую миастению, диабет типа I и саркоидоз. IL-18 может также быть связан с астмой, болезнью Альцгеймера, аллергическим ринитом, идиопатической тромбоцитопенической пурпурой (ITP), трансплантацией и GvHD.IL-18 также принимает участие в заболеваниях печени или гепатитных заболеваниях и в состояниях, ассоциированных с поражением или повреждением печени. Поражение или повреждение печени могут иметь различные причины. Они могут быть вызваны, например, вирусными или бактериальными инфекциями, злоупотреблением алкоголем, иммунологическими расстройствами или раком. Поражение печени также включает поражение желчных протоков и повреждение печени при таких состояниях, как алкогольный гепатит, цирроз печени, вирусный гепатит, первичный билиарный цирроз печени и алкогольное некровоспаление печени, Finitto et al., 2004, Liver 52: 392-400; Tsutsui et al., 2000, ImmunologicalReviews 174: 192-209: Ludwiczek et al., 2002, J. Clinical Immunology 22: 331-337. Гепатитные заболевания, которые ассоциируются с IL-18, включают гепатит С и гепатит В. IL-18 участвует в патогенезе как иммунного, так и инфекционного гепатита. Полагают, что он способствует гибели гепатоцитов путм позитивной регуляции проапоптотических молекул, включая FasL. Было высказано предположение, что целебное действие интерферона-альфа при гепатите С может опосредоваться пониженными уровнями IL-18. Напротив, введение IL-18 оказывает благотворное действие на трансгенной модели гепатита В, улучшая клиренс вируса за счт повышенной активности NK и CTL, Finitto etal., 2004, Liver 52: 392-400; Tsutsui et al., 2000, Immunological Reviews 174: 192-209; Ludwiczek et al., 2002,J. Clinical Immunology 22:331-337. Помимо вирусов гепатита В и С до настоящего времени открыто по меньшей мере четыре других вируса, вызывающих вирус-ассоциированный гепатит, называемый вирус гепатита A, D, Е и G.IL-18 также ассоциируется с сердечно-сосудистыми заболеваниями, включая разрыв атеросклеро- 28016783 тической бляшки, нарушение реперфузии, атеросклероз, хроническую сердечную недостаточность, сердечно-сосудистые осложнения при ревматоидном артрите и другие сердечно-сосудистые расстройства. Полагают, что IL-18 заметно снижает минутный сердечный выброс при регулировании сепсиса или эндотоксинового шока. IL-18 представляет собой важное связывающее звено между воспалительными процессами и атерогенезом, что особенно актуально, учитывая накапливающиеся свидетельства чрезвычайно высокой смертности по причине сердечно-сосудистых нарушений у пациентов с хроническими воспалительными состояниями, включая PA (RA) и волчанку. Показано, что уровни IL-18 представляют собой чткий независимый прогностический фактор смерти от сердечных событий (с большей прогностической силой (с более высокой точностью прогноза), чем уровни CRP), Gerdes et al., 2002, J. Exp. Med. 195: 245-257; международные патентные заявки WO 03/080104; WO 02/060479; WO 01/85201; Raeburn et al.,2002, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 283: H650-H657.IL-18 может также ассоциироваться с лгочными заболеваниями, такими как, например, хроническая обструктивная болезнь лгких (COPD), хроническая тяжлая астма и острый респираторный дистресс-синдром (ARDS). 2. Методы диагностики. Антигенсвязывающий белок по изобретению можно использовать для диагностических целей для обнаружения, диагностирования или мониторинга заболеваний и/или состояний, ассоциированных с IL18 или IL-18 рецептором. Изобретение включает обнаружение (детекцию присутствия) IL-18 рецептора в образце классическими иммуногистологическими методами, известными специалистам в данной области техники (например, Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, vol. 15 (eds R.H. BurdonCell Biol. 105: 3087-3096). Детекцию (обнаружение) IL-18 рецептора можно осуществлять in vivo или invitro. Диагностические применения по данному описанию включают применение антигенсвязывающих белков для обнаружения экспрессии IL-18 рецептора и связывание лигандов с IL-18 рецептором. Примеры методов, применимых для обнаружения IL-18 рецептора, включают иммуноанализы, такие как твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (РИА, RIA). Для применения в целях диагностики антигенсвязывающий белок обычно метят детектируемой меткой (группой, вводящей метку). Подходящие метки включают, но без ограничения, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3 Н, 14 С, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные группы (например, FITC, родамин, люминесцентные лантанидные маркеры), ферментные группы (например, пироксидазу хрена, -галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные группы, биотинильные группы или заданные эпитопы полипептидной цепи, распознаваемые вторичным репортром (например, последовательности пары "лейциновая застжка-молния", сайты связывания со вторичными антителами, домены связывания с металлами, эпитопные метки (тэги. В некоторых вариантах изобретения группа, вводящая метку, связывается с антигенсвязывающим белком с помощью спейсерных ножек различной длины для уменьшения возможных стерических затруднений. Различные методы мечения белков известны в уровне техники и могут применяться для осуществления настоящего изобретения. Один аспект изобретения включает идентификацию клетки или клеток, которые экспрессируют IL18 рецептор. В специфическом варианте изобретения антигенсвязывающий белок метят группой, вводящей метку, и детектируют связывание меченого антигенсвязывающего белка с IL-18 рецептором. В другом специфическом варианте изобретения связывание антигенсвязывающего белка с IL-18 рецептором детектируют in vivo. В другом специфическом варианте изобретения антигенсвязывающий белок-IL-18 рецептор выделяют и определяют количественно известными в уровне техники методами, см., например,Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 и периодические дополнения); John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John WileySons. Другой аспект изобретения включает обнаружение тестируемой молекулы, которая конкурирует за связывание с IL-18 рецептором с антигенсвязывающими белками по изобретению. Пример одного такого анализа включает детекцию количества свободного антигенсвязывающего белка в растворе, содержащем некоторое количество IL-18 рецептора, в присутствии или в отсутствие тестируемой молекулы. Увеличение количества свободного антигенсвязывающего белка (т.е. антигенсвязывающего белка, не связанного с IL-18 рецептором) показывает, что тестируемая молекула способна конкурировать с антигенсвязывающим белком за связывание с IL-18 рецептором. В одном варианте изобретения антигенсвязывающий белок метят группой, вводящей метку. Или же тестируемую молекулу метят и проверяют количество свободной тестируемой молекулы в присутствии и в отсутствие антигенсвязывающего белка. 3. Методы лечения. Фармацевтические рецептуры, способы применения. В некоторых вариантах изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество одного или нескольких антигенсвязывающих белков по изобретению совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, солюбилизатором, эмульгато- 29
МПК / Метки
МПК: A61K 39/395
Метки: рецептора, il-18, белки, применение, антигенсвязывающие
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-16783-antigensvyazyvayushhie-belki-dlya-il-18-receptora-i-ih-primenenie.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антигенсвязывающие белки для il-18 рецептора и их применение</a>
Гены и белки и их применение
Номер патента: 4444
Опубликовано: 29.04.2004
Авторы: Добсон Ричард Джеймс, Лэйн Джонатан Дуглас, Уилсон Ребекка Керри, Дауган Гордон, Хьюз Мартин Джон Глентон, Фелдман Роберт, Мур Джоанн Кристин, Эверест Пол, Сантанджело Джозеф Дэвид
МПК: A61K 39/09, C07K 16/12, C12N 15/31...
Метки: белки, применение, гены
Формула / Реферат:
1. Пептид, кодируемый геном, обозначенным как pho 1-13, полученный из микроорганизмов Streptococcus группы B, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, или его гомолог, имеющий сходство последовательности более чем на 60%, или его функциональный фрагмент, используемый для лечения или профилактики состояний, связанных с бактериальной инфекцией, вызванной данными микроорганизмами. 2. Пептид, кодируемый геном, обозначенным как pho...
Белки, связывающие интерлейкин-18, их получение и применение
Номер патента: 3675
Опубликовано: 28.08.2003
Авторы: Новик Даниела, Рубинштейн Менахем, Динарелло Чарльз, Ким Соо Хиун
МПК: C07K 14/54
Метки: получение, интерлейкин-18, белки, связывающие, применение
Формула / Реферат:
1. Выделенный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (a) аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из AA1-AA192 SEQ ID NO: 2, AA29-AA192 SEQ ID NO: 2, AA1-AA197 SEQ ID NO: 6 и AA29-AA197 SEQ ID NO: 6, (b) мутеина любой последовательности, указанной в подпункте (a), где аминокислотная последовательность указанного мутеина обладает, по крайней мере, 70% идентичностью, по...
Пептиды и/или белки ,а также их применение для получения терапевтической и/или профилактической фармацевтической композиции
Номер патента: 5576
Опубликовано: 28.04.2005
Автор: Петцельбауер Петер
МПК: C07K 14/75, A61K 38/36
Метки: также, получения, терапевтической, профилактической, пептиды, композиции, фармацевтической, белки, применение
Формула / Реферат:
1. Применение пептидов или белков общей формулы II (SEQ ID NO:3-10) где R1 и R2 могут быть одинаковыми или различными и означают водород, насыщенный или ненасыщенный углеводородный остаток, содержащий 1-3, а в частности до 10 атомов углерода, Z5 означает белковый остаток или пептидный остаток, содержащий, в частности, от 2 до 30 аминокислот, или спиртовой остаток, содержащий от 1 до 3, а в частности до 10 атомов углерода, или остаток...
Химерные вирусы, представляющие неприродные поверхностные белки, и их применение
Номер патента: 16217
Опубликовано: 30.03.2012
Авторы: Гастрия-Састре Адольфо, Пейлиз Питер
МПК: A61K 39/00
Метки: неприродные, химерные, белки, поверхностные, представляющие, вирусы, применение
Формула / Реферат:
1. Химерный вирус птичьего гриппа, содержащий:(а) упакованный сегмент NA вируса гриппа, кодирующий слитый с нейраминидазой (NA) белок, в котором открытая рамка считывания NA модифицирована так, что кодирующие эктодомен NA нуклеотиды заменены нуклеотидами, кодирующими эктодомен антигена, обладающего нейраминидазной активностью, инфекционного агента, отличного от вируса гриппа, который прикрепляется N-концом, так что слитый с нейраминидазой белок...
Гидрофобно-модифицированные белки, способы их получения и их применение
Номер патента: 3739
Опубликовано: 28.08.2003
Авторы: Гэрбер Эллен Э., Бейкер Даррен П., Гэлдес Элфонс, Уилльямс Кевин П., Пепински Р.Блэйк, Вен Дингайи, Портер Джеффри, Тэйлор Фредерик Р.
МПК: A61K 38/00, C07K 14/00, A61P 25/00...
Метки: получения, белки, способы, применение, гидрофобно-модифицированные
Формула / Реферат:
1. Изолированный белок, включающий в себя N-концевую аминокислоту и C-концевую аминокислоту, который выбран из (a) белка с N-концевым цистеином, соединенным, по меньшей мере, с одной гидрофобной структурной единицей; (b) белка с N-концевой аминокислотой, отличной от цистеина, соединенного, по меньшей мере, с одной гидрофобной структурной единицей; и (c) белка, по меньшей мере, с одной гидрофобной структурной единицей, заменяющей N-концевую...
Предыдущий патент: Производные пиридазинона
Следующий патент: Способ и система масштабной ориентированной фотосъемки места происшествия
Случайный патент: Игровая система, соответствующие способы и устройства для ее осуществления