Стабилизированные препараты антител к бета-амилоидному пептиду и их применение

СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ АНТИТЕЛ К БЕТА-АМИЛОИДНОМУ ПЕПТИДУ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Настоящее изобретение предусматривает препараты для поддержания стабильности Асвязывающих полипептидов, например антител против А. Типичные препараты включают агент, регулирующий тоничность, такой как маннит, и буферный агент или аминокислоту, такую как гистидин. Другие типичные препараты включают антиоксидант в количестве, достаточном для ингибирования образования побочных продуктов, например образования высокомолекулярных пептидных агрегатов, низкомолекулярных фрагментов, получающихся в результате деградации полипептида, и их смесей. Препараты по изобретению, необязательно, содержат агент, регулирующий тоничность, такой как маннит, и буферный агент или аминокислоту, такую как гистидин. Препараты пригодны для введения несколькими различными способами.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛАН ФАРМА ИНТЕРНЭШНЛ ЛИМИТЕД (IE); ВАЙЕТ (US) 015147 Предпосылки создания изобретения Болезнь Альцгеймера (AD) является нейродегенеративным заболеванием, характеризующимся наличием амилоидных бляшек, нейрофибриллярных клубков и значительной недостаточности нейронов.-Амилоидный белок (также называемый А-пептид), основной компонент сенильных бляшек, участвует в патогенезе болезни Альцгеймера (Selkoe (1989), Cell. 58: 611-612; Hardy (1997), Trends Neurosci. 20: 154-159). Показано, что -амилоид проявляет как непосредственную токсичность в отношении культивированных нейронов (Lorenzo and Yankner (1996), Ann. NY Acad. Sci. 777: 89-95), так и токсичность,опосредованную различными медиаторами (Koh et al. (1990), Brain Research, 533: 315-320; Mattson et al.(1992), J. Neurosciences, 12: 376-389). Кроме того, исследования на in vivo моделях, включая мышиную модель линии PDAPP и крысиную модель, позволили связать -амилоид с изучением недостаточности,изменнной когнитивной функцией и ингибированием долговременной потенциации в гиппокампе (Chenet al. (2000), Nature, 408: 975-985; Walsh et al. (2002), Nature, 416: 535-539). Поэтому основное внимание сосредоточено на терапевтических средствах, которые изменяют уровни -амилоида, чтобы, теоретически, уменьшить тяжесть или даже аннулировать само заболевание. Одна методология лечения AD, которая недавно появилась в результате успешных исследований на мышах PDAPP и крысах в качестве экспериментальных моделей, заключается в иммунизации индивидуумов для того, чтобы предоставить иммуноглобулины, такие как антитела (как в случае пассивной иммунизации, при которой терапевтические иммуноглобулины вводят субъекту), или для генерации иммуноглобулинов (активная иммунизация, при которой иммунная система субъекта активируется, продуцируя иммуноглобулины к вводимому антигену), специфичных к -амилоиду. В свою очередь, эти антитела способствуют снижению массы бляшек, предупреждая агрегацию -амилоида (Solomon et al. (1997),Neurobiology, 94: 4109-4112) или стимулируя микроглиальные клетки к фагоцитозу и удалению бляшек(Bard et al. (2000), Nature Medicine, 6: 916-919). Кроме того, например, гуманизированное IgG1 моноклональное антитело к A-пептиду (гуманизированное антитело 3D6) может эффективно лечить AD с помощью селективного связывания A-пептида. Для того чтобы белок, и в частности антитело, оставался биологически активным, препарат должен сохранять интактной конформационную целостность, по меньшей мере, коровой последовательности аминокислот белка, в то же время предупреждая расщепление многочисленных функциональных групп белка. Пути деградации белков могут включать химическую нестабильность (т.е. любой процесс, который включает модификацию белка за счт образования или расщепления связи, что приводит к новой химической частице) или физическую нестабильность (т.е. изменения в структуре высшего порядка белка). Химическая нестабильность может являться результатом дезамидирования, рацемизации, гидролиза,окисления, -элиминирования или дисульфидного обмена. Физическая нестабильность может возникать,например, в результате денатурации, агрегации, осаждения (преципитации) или адсорбции. Общий обзор об устойчивости белковых фармацевтических препаратов см., например, Manning, et al. (1989),Pharmaceutical Research, 6: 903-918. Кроме того, желательно поддерживать устойчивость, когда полипептиды-носители не входят в состав препарата. Хотя возможная нестабильность белков встречается часто, невозможно предсказать конкретно результаты нестабильности для конкретного белка. Любая такая нестабильность теоретически может привести к образованию полипептидного побочного продукта или производного, обладающего пониженной активностью, повышенной токсичностью и/или повышенной иммуногенностью. Действительно, преципитация (осаждение) полипептида может привести к тромбозу, негомогенности лекарственной формы и иммунным реакциям. Таким образом, безопасность и эффективность любого фармацевтического препарата полипептида прямо связаны с его стабильностью. Следовательно, продолжает существовать необходимость в препаратах, которые не только сохраняют стабильность и биологическую активность биологических полипептидов, например А-связывающих полипептидов, при хранении и доставке, но также пригодны для терапевтического введения различными способами.-1 015147 Сущность изобретения Настоящее изобретение включает препараты, созданные с целью придать стабильность и сохранить биологическую активность введнного биологически активного белка, в частности белков или полипептидов, связывающих А, таких, например, как антитела к А или их фрагменты или участки. Кроме того,изобретение предусматривает полипептидные препараты, например, такие как стабилизированные жидкие полипептидные препараты, устойчивые к образованию нежелательных полипептидных побочных продуктов. Целостность антигенсвязывающих полипептидов для терапевтического применения особенно важна, так как, если полипептид образует побочные продукты, например полученные при стоянии агрегаты или фрагменты, являющиеся результатом расщепления, биоактивность может быть утрачена, при этом ставится под угрозу терапевтическая активность молекулы на стандартную дозу. Кроме того, существует острая необходимость стабилизировать терапевтические полипептиды, предполагаемые для специализированных функций, для доставки и применения по определнным биологическим показаниям, например для лечения нейродегенеративных состояний, при которых полипептид должен преодолеть гематоэнцефалический барьер (ВВВ) и связать целевой антиген. В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий по меньшей мере один А-связывающий полипептид, по меньшей мере один агент, регулирующий тоничность, причм этот агент присутствует в количестве, достаточном для того, чтобы сделать препарат пригодным для введения, и по меньшей мере один буферный агент в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. Препарат может быть лиофилизированным или жидким препаратом. Некоторые препараты включают по меньшей мере один антиоксидант, например, такой как аминокислотный антиоксидант, например, такой как метионин. В некоторых препаратах агентом, регулирующим тоничность, является маннит или NaCl. В некоторых препаратах по меньшей мере один буферный агент представляет собой сукцинат, фосфат натрия или аминокислоту, такую как гистидин. Предпочтительные препараты включают также по меньшей мере один стабилизатор, например, такой как полисорбат 80. В некоторых препаратах стабилизатор представляет собой полисорбат 80, антиоксидантом является метионин, агентом, регулирующим тоничность, является маннит, сорбит или NaCl, а буферным агентом является гистидин. В некоторых препаратах по меньшей мере один А-связывающий полипептид выбирают из группы, состоящей из антитела к А-пептиду, Fv фрагмента антитела к А-пептиду, Fab фрагмента антитела к А-пептиду, F(ab')2 фрагмента антитела к А-пептиду, Fd фрагмента антитела к А-пептиду, одноцепочечного антитела к А (scFv), фрагмента однодоменного антитела к А (Dab), полипептида со структурой бета-складчатого листа, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела (CDR) из антитела к А, неглобулярного полипептида, включающего по меньшей мере одну CDR область антитела из антитела к А. В некоторых препаратах по меньшей мере один А-связывающий полипептид представляет собой антитело к А, например, такое, которое специфически связывается с эпитопом внутри остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21,19-22, 33-40, 33-42 А, или его фрагмент Fab, F(ab')2 или Fv. Типичные антитела к А специфически связываются с эпитопом внутри остатков 1-10 А, например внутри остатков 1-7, 1-5, 3-7 или 3-6 А. Другие иллюстративные антитела против А специфически связываются с эпитопом внутри остатков 13-28 А, например внутри остатков 16-21 или 19-22 А. Ещ одни типичные антитела против А специфически связываются с С-концевым эпитопом А, например, таким как 33-40 или 33-42 А. Предпочтительные антитела против А включают гуманизированное антитело против А, например гуманизированное 3D6 антитело, гуманизированное 10D5 антитело, гуманизированное 12 В 4 антитело, гуманизированное 266 антитело, гуманизированное 12 А 11 антитело или гуманизированное 15 С 11 антитело. В некоторых препаратах антитело против А связывает непрерывный эпитоп, который включает остатки внутри 1-7 и внутри 13-28 аминокислотных остатков А. В некоторых препаратах антитело является биспецифическим антителом или антителом, полученным по способу, описанному в опубликованной Международной патентной заявке WO 03/070760. В некоторых таких препаратах эпитоп представляет собой непрерывный эпитоп. В предпочтительных препаратах антитело против А представляет собой гуманизированное 3D6 антитело, гуманизированное 10D5 антитело, гуманизированное 12 В 4 антитело, гуманизированное 266 антитело, гуманизированное 12 А 11 антитело или гуманизированное 15 С 11 антитело. Изотип антитела может представлять собой IgM, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или любой другой фармацевтически приемлемый изотип. В предпочтительных препаратах изотип представляет собой человеческий IgG1 или человеческий IgG4. В некоторых жидких препаратах концентрация антитела против А составляет примерно 0,1-60 мг/мл, примерно 40-60 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 17-23 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 17 мг/мл, примерно 10 мг/мл, примерно 5 мг/мл, примерно 2 мг/мл или около 1 мг/мл, предпочтительно около 17-23 мг/мл.-2 015147 В некоторых препаратах по меньшей мере один агент, регулирующий тоничность, представляет собой D-маннит, и он присутствует в концентрации около 1-10% вес./об., около 2-6% вес./об. или предпочтительно около 4% вес./об. В некоторых препаратах по меньшей мере один буферный агент представляет собой гистидин, и он присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ, около 5-15 мМ, предпочтительно около 5 мМ или около 10 мМ. В других препаратах по меньшей мере один буферный агент представляет собой сукцинат, и он присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ, например около 10 мМ. В некоторых препаратах антиоксидантом является метионин, и он присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ, около 5-15 мМ или предпочтительно около 10 мМ. В предпочтительных препаратах стабилизатором является полисорбат 80, и он присутствует в концентрации около 0,001-0,01% вес./об.,около 0,005-0,01% вес./об. или около 0,005% вес./об. рН препарата около 5-7, около 5,5-6,5, около 6,0-6,5,около 6,2, около 6,0 или около 5,5, предпочтительно около 6,0. Предпочтительный препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает антитело против А, которое специфически связывается с эпитопом внутри остатков, выбранных из группы, состоящей из остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42 А, например D-маннит в концентрации около 2-6% вес./об., например гистидин в концентрации около 0,1-25 мМ, метионин в концентрации около 0,1-25 мМ и стабилизатор. Предпочтительно стабилизатор представляет собой полисорбат 80 в концентрации около 0,001-0,01% вес./об. Препарат может представлять собой стабилизированный жидкий полипептидный препарат, созданный таким образом, чтобы обеспечить стабильность и сохранить биологическую активность введнного полипептида. Препарат включает терапевтически активный А-связывающий полипептид и антиоксидант в количестве, достаточном для уменьшения образования побочного продукта полипептида в процессе хранения препарата. Некоторые из жидких полипептидных препаратов стабилизированы против образования нежелательных побочных продуктов, таких как высокомолекулярные полипептидные агрегаты, низкомолекулярные продукты деградации полипептида или их смеси. В препаратах, в которых терапевтический антигенсвязывающий полипептид представляет собой антитело, типичными высокомолекулярными агрегатами, количество которых должно быть сведено к минимуму, являются, например, комплексы антитело:антитело, комплексы антитело:фрагмент антитела,комплексы фрагмент антитела:фрагмент антитела или их смеси. В целом, молекулярная масса высокомолекулярных комплексов или побочных продуктов выше молекулярной массы мономера антигенсвязывающего полипептида, например в случае IgG антитела, более примерно 150 кДа. В таких препаратах антитела типичные низкомолекулярные полипептидные продукты деградации, количество которых должно быть сведено к минимуму, представляют собой, например, комплексы, состоящие из лгкой цепи антитела, тяжлой цепи антитела, комплекса лгкой цепи антитела и тяжлой цепи антитела или их смеси. В целом, молекулярная масса низкомолекулярных комплексов или побочных продуктов ниже молекулярной массы мономера антигенсвязывающего полипептида, например в случае IgG антитела, менее примерно 150 кДа. Предпочтительный стабилизированный препарат антитела против А включает метионин в качестве антиоксиданта в количестве, достаточном для ингибирования образования нежелательных побочных продуктов, агент, регулирующий тоничность, например, в количестве, достаточном для того, чтобы сделать препарат пригодным для введения, и, например, аминокислоту или е производное в количестве,достаточном для поддержания физиологически подходящего рН. Некоторые препараты являются устойчивыми в замороженном состоянии. Препарат может быть пригоден для парентерального, внутривенного, внутримышечного, подкожного, интракраниального или эпидурального введения, предпочтительно для внутривенного или подкожного введения. Некоторые препараты могут быть пригодны для нацеленной доставки в мозг или цереброспинальную жидкость субъекта. Препарат может практически не содержать консервантов. Некоторые препараты устойчивы по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев, по меньшей мере в течение примерно 18 месяцев, по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев или по меньшей мере в течение примерно 30 месяцев. Некоторые препараты устойчивы при температуре примерно от -80 до 40 С, примерно от 0 до 25 С, примерно от 0 до 10 С, предпочтительно примерно от -80 до -50 С или примерно от 2 до 8 С. Некоторые препараты устойчивы по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев при температуре выше температуры замерзания, примерно до 10 С и имеют рН около 5,5-6,5. Такой препарат включает,по меньшей мере одно антитело против А в примерной концентрации 1-30 мг/мл, маннит в примерной концентрации 4% вес./об. или NaCl в примерной концентрации 150 мМ, гистидин или сукцинат в примерной концентрации 5-10 мМ и 10 мМ метионина. Один такой препарат имеет рН около 6,0, содержит 1 мг/мл антитела к А, около 10 мМ гистидина и около 4% вес./об. маннита. Другие препараты устойчивы по меньшей мере в течение 24 месяцев при температуре около 2-8 С и включают полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01 вес./об. Некоторые из таких препаратов имеют рН около 6,0-6,5 и включают около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 1 мг/мл, около 2 мг/мл или около 5 мг/мл А-антитела. Другие такие препараты включают около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. ман-3 015147 нита, около 0,005% вес./об. полисорбата 80 и около 10 мг/мл, около 30 мг/мл или 30 мг/мл антитела к А предпочтительно при рН около 6,0-6,2. В этих препаратах антитело против А предпочтительно представляет собой гуманизированное 3D6 антитело, гуманизированное 10D5 антитело, гуманизированное 12 В 4 антитело, гуманизированное 266 антитело, гуманизированное 12 А 11 антитело или гуманизированное 15 С 11 антитело. Один такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 2-20 мг/мл антитела против А, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 3D6 антитела,гуманизированного 10D5 антитела, гуманизированного 12 В 4 антитела, гуманизированного 12 А 11 антитела. Другой такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает 10 мМ гистидина, около 150 мМ NaCl и около 2-20 мг/мл антитела против А, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 12 В 4 антитела и гуманизированного 12 А 11 антитела. Ещ один такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 2-20 мг/мл антитела против А,выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 266 антитела и гуманизированного 15 А 11 антитела. Предпочтительный препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8 С, имеет рН около 5,5-6,5 и включает примерно 2-23 мг/мл, предпочтительно около 17-23 мг/мл гуманизированного 3D6 антитела, около 10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Предпочтительно препарат дополнительно включает около 4% вес./об. маннита. Препарат предпочтительно включает полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01% вес./об., более предпочтительно около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В таких препаратах гуманизированное 3D6 антитело может присутствовать в примерной концентрации 20-23 мг/мл. Другой препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8 С, имеет рН около 5,5-6,5 и включает примерно 2-23 мг/мл гуманизированного 3D6 антитела, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита и около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В некоторых таких препаратах примерная концентрация гуманизированного 3D6 антитела составляет 20-23 мг/мл. Другой предпочтительный препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8 С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-30 мг/мл гуманизированного 266 антитела, около 10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких препаратов дополнительно включают около 4% вес./об. маннита. Некоторые из таких препаратов включают полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01% вес./об., например около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В некоторых таких препаратах гуманизированное антитело 266 присутствует в примерной концентрации около 17-23 мг/мл или около 20-23 мг/мл. Ещ один препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8 С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-20 мг/мл гуманизированного 266 антитела,около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита и около 0,005% вес./об. полисорбата. Другой предпочтительный препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8 С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-30 мг/мл гуманизированного 12 А 11 антитела, около 10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких препаратов дополнительно включают около 150 мМ NaCl. Такие препараты могут включать полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01% вес./об., например около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В некоторых таких препаратах гуманизированное антитело 12 А 11 присутствует в примерной концентрации около 17-23 мг/мл или около 20-23 мг/мл. Ещ один препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8 С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-20 мг/мл гуманизированного 12 А 11 антитела, около 5 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита и около 0,005% вес./об. полисорбата 80. Изобретение также предусматривает препарат, устойчивый после оттаивания от температуры,примерно -(50-80)С, имеет рН около 6,0 и включает около 40-60 мг/мл антитела против А, около 1-2 мг/мл гистидина, около 1-2 мг/мл метионина и около 0,05 мг/мл полисорбата 80. Предпочтительно маннит исключн. Предпочтительно антитело А является гуманизированным 3D6 антителом или гуманизированным 266 антителом. Настоящее изобретение также предусматривает жидкий препарат, включающий антитело против А, маннит и гистидин. В некоторых из таких препаратов антитело против А присутствует в примерной концентрации 1-30 мг/мл. Предпочтительно маннит присутствует в количестве, достаточном для сохранения изотоничности препарата. Предпочтительно гистидин присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически пригодного рН.-4 015147 Один такой препарат включает около 20 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. Другой такой препарат включает около 30 мг/мл антитела против А, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 6% маннита и имеет рН около 6,2. Ещ один такой препарат включает около 20 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина,около 10 мМ метионина, около 4% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0. Другой такой препарат включает около 10 мг/мл антитела против А, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 10% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,5. Другой такой препарат включает около 5-20 мг/мл антитела против А, около 5-10 мМL-гистидина, около 10 мМ метионина, около 10% маннита, около 4% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0-6,5. Ещ один такой препарат включает около 5-20 мг/мл антитела против А, около 5-10 мМL-гистидина, около 10 мМ метионина, около 150 мМ NaCl, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0-6,5. Настоящее изобретение также предусматривает препарат, пригодный для внутривенного введения,который включает около 20 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. Предпочтительно такой препарат включает около 0,005% полисорбата 80. Изобретение предусматривает способ повышения стабильности антигенсвязывающего полипептида, например антитела, в жидком фармацевтическом препарате, в котором в противном случае при хранении наблюдалось бы образование полипептидного побочного продукта в жидком препарате. Соответственно, способ включает введение в препарат антиоксиданта, например метионина или его аналога, в количестве, достаточном для уменьшения образования побочного продукта. Настоящее изобретение также предусматривает способ поддержания стабильности препарата гуманизированного антитела против А, который должен храниться при температуре около -(50-80)С с последующим хранением при температуре около 2-8 С, включающий:(i) объединение (смешивание) около 40-60 мг/мл гуманизированного антитела против А, около 1-2 мг/мл L-гистидина, около 1-2 мг/мл метионина и около 0,05 мг/мл полисорбата 80;(ii) доведение рН примерно до 6;(v) добавление маннита или NaCl и разбавителя в количествах, достаточных для получения в результате конечной концентрации около 4% маннита или около 150 мМ NaCl, около 2-20 мг/мл гуманизированного антитела к А; около 5-10 мМ гистидина; около 10 мМ метионина и около 0,005% полисорбата 80;(viii) хранение при температуре около 2-8 С. Настоящее изобретение также предусматривает набор, включающий контейнер с препаратом по данному описанию и инструкции по применению. Настоящее изобретение также предусматривает фармацевтическую стандартную лекарственную форму, включающую примерно 10-250 мг антитела против А, около 4% маннита или около 150 мМNaCl, около 5-10 мМ гистидина или сукцината и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких фармацевтических стандартных лекарственных форм включают около 0,001-0,1% полисорбата 80. Некоторые из таких фармацевтических стандартных лекарственных форм включают около 40-60 мг, около 60-80 мг,около 80-120 мг, около 120-160 мг или около 160-240 мг антитела против А. Некоторые из таких препаратов до момента введения пациенту можно хранить в стеклянном флаконе (ампуле) при температуре около 2-8 С. Кроме того, настоящее изобретение предусматривает терапевтический продукт, включающий стеклянный флакон (ампулу) с препаратом, содержащим около 10-250 мг антитела против А, около 4% маннита или около 150 мМ NaCl, около 5-10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких терапевтических продуктов дополнительно включают маркировку для применения, включая инструкции по применению подходящего объма, необходимого для получения дозы около 0,15-5 мг/кг веса пациента. Обычно флакон (ампула, пузырк) представляет собой флакон (ампулу, пузырк) на 1, 2, 5, 10,25 или 50 мл. Доза некоторых из таких терапевтических продуктов составляет около 0,5-3 мг/кг, предпочтительно около 1-2 мг/кг. В некоторых таких терапевтических продуктах концентрация антитела против А равна примерно 10-60 мг/мл, предпочтительно около 20 мг/мл. Терапевтический продукт предпочтительно включает около 0,005% полисорбата 80. Препарат некоторых таких терапевтических продуктов предназначен для подкожного введения или внутривенного введения.-5 015147 Настоящее изобретение также предусматривает способ профилактического или терапевтического лечения заболевания, характеризующегося отложениями А-пептида, которое включает внутривенное или подкожное введение стандартной дозы фармацевтического препарата по данному описанию. Другие признаки и преимущества данного изобретения будут очевидны из нижеприведнного подробного описания и формулы изобретения. Краткое описание чертежей На фиг. 1 дано схематическое изображение теоретически ожидаемой структуры IgG антитела и приблизительных положений внутрицепных и межцепных дисульфидных связей, сайтов гликозилирования (обозначены шестигранником), гипервариабельных областей (CDR), каркасных областей (затеннные) и константных областей. На фиг. 2 изображены полные аминокислотные последовательности лгкой и тяжлой цепей гуманизированного 3D6 антитела против А, вариант 2 (hu3D6.v2), последовательности SEQ ID NO: 1 иCDR3, находятся соответственно в положениях остатков 24-39, 55-61 и 94-102 (верхняя панель). Гипервариабельные области (CDR) тяжлой цепи, т.е. CDR1, CDR2 и CDR3, находятся соответственно в положениях остатков 40-44, 50-65 и 99-108 (нижняя панель). Ожидаемые внутримолекулярные дисульфидные связи иллюстрируются с помощью соединений включнных цистеиновых остатков. Цистеиновые остатки, предположительно образующие внутримолекулярные дисульфидные связи, подчеркнуты и связь показана. Связанный с N-концом консенсусный сайт гликозилирования тяжлой цепи антитела указан курсивом в положениях остатков 299-301 (нижняя панель). Ожидаемый С-концевой лизин в тяжлой цепи показан в скобках. На фиг. 3 графически изображн ожидаемый срок хранения препаратов антитела (в присутствии или в отсутствие полисорбата 80 (PS80, полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 5 С. На фиг. 4 графически изображн ожидаемый срок хранения препаратов антитела (в присутствии или в отсутствие PS80), полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 25 С. На фиг. 5 графически изображн ожидаемый срок хранения препаратов антитела (в присутствии или в отсутствие PS80), полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 40 С. На фиг. 6 графически изображена прогнозированная деградация препаратов с PS80, полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 5 С. На фиг. 7 графически изображн анализ методом эксклюзионной по размеру хроматографии (SEC) препаратов с PS80, полученных по настоящему изобретению, хранящихся при 5 С и повторно обработанных с целью свести к минимуму меру изменчивости анализа. На фиг. 8 графически изображено предсказание расщепления препаратов без PS80, изготовленных в соответствии с настоящим изобретением и хранящихся при 5 С. На фиг. 9 изображена хроматограмма, которая показывает, что присутствие PS80 сдвигает побочные продукты, обнаруживаемые в стабилизированном полипептидном препарате, от высокомолекулярных к низкомолекулярным, не изменяя профиль мономерного антитела. На фиг. 10 графически изображено образование нежелательных побочных продуктов в полипептидном препарате, содержащем IgG4, в частности высокомолекулярных полипептидных агрегатов, при добавлении антиоксиданта, такого как свободный метионин. На фиг. 11 графически изображено ингибирование образования нежелательных побочных продуктов в полипептидном препарате, содержащем IgG2, в частности высокомолекулярных полипептидных агрегатов, при добавлении антиоксиданта, такого как свободный метионин. Подробное описание изобретения Для чткого понимания описания и формулы изобретения ниже представлены следующие определения. Применяемый в данном описании термин "амилоидогенное заболевание" включает любое заболевание, ассоциированное (или вызванное) с образованием или отложением нерастворимых амилоидных фибрилл. Типичные амилоидогенные заболевания включают, но без ограничения, системный амилоидоз,болезнь Альцгеймера, диабет зрелого возраста, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, лобновисочная деменция и прионные трансмиссивные губчатые (спонгиформные) энцефалопатии (куру и болезнь Кройтцфельда-Якоба у людей и почесуха и BSE (коровье бешенство) у овец и крупного рогатого скота соответственно). Различные амилоидогенные заболевания определяются или характеризуются природой полипептидного компонента отложений фибрилл. Например, у субъекта или больного болезнью Альцгеймера -амилоидный белок (например, дикого типа, вариант или усечнный (процессированный) -амилоидный белок) является типичным полипептидным компонентом амилоидного отложения. Соответственно, болезнь Альцгеймера является примером "заболевания, характеризующегося отложениями А", или "заболевания, ассоциированного с отложениями А", например, в мозге субъекта или пациента.-6 015147 Термины "-амилоидный белок", "-амилоидный пептид", "-амилоид", "А" и "А-пептид" применяются в данном описании взаимозаменяемо. Термин "А-связывающий полипептид" включает полипептиды, способные специфически связываться с А-пептидом (пептидами) или с эпитопом (эпитопами) внутри указанных А-пептидов. Как правило, А-связывающие полипептиды содержат, по меньшей мере, функциональный участок иммуноглобулина или иммуноглобулиноподобного домена, например рецептор, который содержит одну или более вариабельных областей или гипервариабельных областей (CDR), которые сообщают полипептиду свойство специфического связывания. Предпочтительные антигенсвязывающие полипептиды включают антитела, например IgM, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Термин "антитело" относится к молекулам иммуноглобулинов и иммунологически активным участкам молекул иммуноглобулинов (молекул, которые содержат сайт связывания антигена, который специфически связывает антиген), включая моноклональные антитела (в том числе полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), химерные антитела, CDR-привитые антитела, гуманизированные антитела, человеческие антитела и одноцепочечные антитела (scFvs). Выражение "моноклональное антитело" или "композиция моноклонального антитела" по данному описанию относится к популяции молекул антитела, которые содержат только один вид антигенсвязывающего сайта, способного распознавать и связываться с конкретным эпитопом целевого антигена, например эпитоп(ы) А. Таким образом, композиция моноклонального антитела, как правило, выявляет специфичность и аффинность единичного связывания с конкретным целевым антигеном, в отношении которого она является иммунореагирующей. Термин "одноцепочечное антитело" относится к белку, имеющему структуру из двух полипептидных цепей, состоящую из тяжлой и лгкой цепей, причм указанные цепи стабилизированы, например,межцепными пептидными линкерами, которые способны специфически связывать антиген. Методы получения одноцепочечных антител, специфических к целевому антигену, описаны, например, в патенте США 4946778. Термин "фрагмент антитела" включает F(ab')2 фрагменты, Fab фрагменты, Fab' фрагменты, Fd фрагменты, Fv фрагменты и фрагменты однодоменного антитела (DAbs). Иммунологически активные участки иммуноглобулинов включают, например, F(ab) и F(ab')2 фрагменты. Методы конструированияFab фрагментов описаны, например, Huse, et al. (1989), Science, 246: 1275-1281). Другие фрагменты антител можно получать методами, известными в уровне техники, включая, но без ограничения:(i) фрагмент F(ab')2, получаемый расщеплением молекулы антитела с помощью пепсина;(ii) фрагмент Fab, получаемый восстановлением дисульфидных мостиков фрагмента F(ab')2;(iii) фрагмент Fab', получаемый обработкой молекулы антитела папаином и восстановителем; и(iv) фрагменты Fv. Различные фрагменты можно также получать известными в уровне техники методами рекомбинантной ДНК (генетической инженерии). Антитела нечеловеческого происхождения можно "гуманизировать" методами, описанными, например, в патенте США 5225539. В одном методе CDR нечеловеческого происхождения вводят в человеческое антитело или в консенсусную последовательность каркаса антитела. Затем для модулирования аффинности или иммуногенности можно ввести дальнейшие изменения в каркас антитела. Термин "домен" относится к глобулярной области полипептида тяжлой или лгкой цепи,содержащей иммуноглобулиновую складку. Иммуноглобулиновая складка состоит из структуры-складчатого листа (вторичная структура) и включает единственную дисульфидную связь. Далее домены называются в данном описании "константные" или "вариабельные", в зависимости от относительного отсутствия разнообразия (изменчивости, вариантов) внутри доменов различных членов класса в случае"константного" домена или заметного разнообразия (изменчивости) внутри доменов различных членов класса в случае "вариабельного" домена. "Домены" антитела или полипептида часто в уровне техники с равным основанием (взаимозаменяемо) называют "области" антитела или полипептида. "Константные" домены лгкой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют "константные области лгкой цепи", "константные домены лгкой цепи", "CL" области или "CL" домены. "Константные" домены тяжлой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют "константные области тяжлой цепи", "константные домены тяжлой цепи", "СН" области или "СН" домены. "Вариабельные" домены лгкой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют "вариабельные области лгкой цепи", "вариабельные домены лгкой цепи", "VL" области или "VL" домены. "Вариабельные " домены тяжлой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют "вариабельные области тяжлой цепи", "вариабельные домены тяжлой цепи", "VH" области или "VH" домены.-7 015147 Термин "область" может также относиться к части или к участку цепи антитела или домена цепи антитела (например, к части или к участку тяжлой или лгкой цепи антитела или к части или участку константного или вариабельного домена по данному описанию), а также к более дискретным частям или участкам указанных цепей или доменов. Например, лгкая и тяжлая цепи или вариабельные домены лгкой и тяжлой цепей включают "гипервариабельные области" или "CDR", вкрапленные среди "каркасных областей" или "FR" по данному описанию. Термин "антитело против А" ("антитело к А") включает антитела (и их фрагменты), способные связывать эпитоп(ы) А-пептида. Антитела против А включают, например, антитела к А, описанные в опубликованной патентной заявке США 20030165496 А 1, опубликованной патентной заявке США 20040087777 A1, опубликованной Международной патентной заявкеWO 02/46237 A3 и опубликованной Международной патентной заявкеWO 04/080419 A2. Другие антитела против А описаны, например, в опубликованных Международных патентных заявкахWO 03/077858 A2 иWO 04/108895 A2, каждая из них озаглавлена "Гуманизированные антитела, которые распознают бетаамилоидный пептид", опубликованной Международной патентной заявкеWO 03/016466 A2, озаглавленной "Антитела против А", опубликованной Международной патентной заявкеWO 0162801 A2,озаглавленной "Гуманизированные антитела, которые блокируют амилоидный бета-пептид", опубликованной Международной патентной заявкеWO 02/088306 A2, озаглавленной "Гуманизированные антитела", и опубликованной Международной патентной заявкеWO 03/070760 A2, озаглавленной "Антитела против А и их применение." Термин "фрагмент" относится к части или к участку антитела или цепи антитела, содержащим меньше аминокислотных остатков, чем интактное или полноразмерное антитело или интактная или полноразмерная цепь антитела. Фрагменты можно получать химической или ферментативной обработкой интактного или полноразмерного антитела или интактной или полноразмерной цепи антитела. Фрагменты можно также получать методами рекомбинантной ДНК. Примеры фрагментов включают Fab, Fab',F(ab')2, Fabc и/или Fv фрагменты. Термин "антигенсвязывающий фрагмент" относится к полипептидному фрагменту иммуноглобулина или антитела, который связывает антиген или конкурирует с интактным антителом, из которого он образован, за специфическое связывание антигена. Термин "конформация" относится к третичной структуре белка или полипептида, такого, например,как антитело, цепь антитела, его домен или область. Например, выражение "конформация лгкой (или тяжлой) цепи" относится к третичной структуре вариабельной области лгкой (или тяжлой) цепи, а выражение "конформация антитела" или "конформация фрагмента антитела" относится к третичной структуре антитела или его фрагмента. Термин "специфическое связывание" антитела означает, что антитело проявляет заметную аффинность к конкретному антигену или эпитопу и, как правило, не проявляет значительной перекрстной реактивности. В типичных вариантах изобретения антитело не проявляет перекрстной реактивности(кросс-реактивности) (например, не реагирует перекрстно с не-А-пептидами или с отдалнными или далкими эпитопами на А). "Заметное (значительное)" или предпочтительное связывание включает связывание с аффинностью по меньшей мере 10-6, 10-7, 10-8, 10-9 или 10-10 М. Предпочтительна аффинность более чем 10-7 М, более предпочтительна аффинность более чем 10-8 М. Предполагается также, что в объм настоящего изобретения входят значения, промежуточные между представленными в данном описании значениями, а предпочтительная аффинность связывания может быть указана как интервал аффинностей, например 10-6-10-10 М, предпочтительно 10-7-10-10 М, более предпочтительно, 10-8-10-10 М. Антитело, которое "не проявляет заметной перекрстной реактивности", представляет собой антитело,которое не связывается заметно с нежелательной частицей (нежелательным объектом) (например, с нежелательньм белком, полипептидом или пептидом). Например, антитело, которое специфически связывается с А, будет заметно связывать А, но не будет в значительной степени реагировать с не-А-белками или пептидами (например, не-А-белками или пептидами, входящими в состав бляшек). Антитело, специфическое к конкретному эпитопу, не будет заметно перекрстно реагировать с удалнными или отличными эпитопами на том же самом белке или пептиде. Специфическое связывание можно определить любым общепризнанным в уровне техники методом определения такого связывания. Предпочтительно специфическое связывание определяют по методу Скетчарда или методами конкурентного связывания. Связывающие фрагменты получают методами рекомбинантной ДНК или ферментативным или химическим расщеплением интактных иммуноглобулинов. Фрагменты для связывания (связывающиеся фрагменты) включают Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv, единичные цепи и одноцепочечные антитела. Под иммуноглобулином или антителом, отличным от "биспецифических" или "бифункциональных" иммуноглобулинов или антител, понимают иммуноглобулин или антитело, имеющие идентичные сайты связывания. "Биспецифическое" или "бифункциональное антитело" представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две различные пары тяжлая/лгкая цепь и два различных сайта связывания. Биспецифические антитела можно получать различными методами, включая слияние гибридом или свя-8 015147 зывание Fab' фрагментов. См., например, SongsivilaiLachmann, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321 (1990);"Антиген" представляет собой молекулу (например, белковую, полипептидную, пептидную молекулу, молекулу углеводорода или малую молекулу), содержащую антигенную детерминанту, с которой специфически связывается антитело. Термин "эпитоп" или "антигенная детерминанта" относится к сайту на антигене, с которой иммуноглобулин или антитело (или их антигенсвязывающий фрагмент) специфически связывается. Эпитопы могут образовываться из соседних аминокислот или несоседних (непрерывных) аминокислот, оказавшихся рядом (наложившихся) за счт третичной структуры-фолдинга белка. Эпитопы, образованные из непрерывных (соседних) аминокислот, обычно сохраняются при экспозиции с денатурирующими растворителями, тогда как эпитопы, образованные за счт "третичного фолдинга", обычно утрачиваются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп, как правило, включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6,7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Методы определения пространственной конформации эпитопов включают, например, рентгеновскую кристаллографию (рентгеноструктурный анализ (РСА и 2-мерный ядерный магнитный резонанс, см., например,Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, vol. 66, G.E. Morris, Ed. (1996). Термин "стабилизированный препарат" или "стабилизированный жидкий полипептидный препарат" включает препараты, находящийся в которых полипептид практически сохраняет свою физическую и химическую природу (идентичность) и целостность при стоянии. Различные аналитические методы измерения стабильности белка доступны в уровне техники и представлены в данном описании (обзор в(1991) и Jones, A. Adv. Drag Delivery Rev. 10: 29-90 (1993. Стабильность можно измерять при выбранной температуре для выделенного периода времени. Для быстрого тестирования препарат можно хранить при более высокой или "прогрессивной" ("ускоряющей") температуре, например при 40 С, в течение от 2 недель до 1 месяца или более, в это время измеряется стабильность. В типичных вариантах изобретения препарат устойчив к образованию побочных продуктов сложного полипептида, например высокомолекулярных продуктов агрегации, низкомолекулярных продуктов деградации (разложения) или фрагментации или их смесей. Термин "стабильность ("устойчивость") относится к промежутку времени, в течение которого молекула данного вида, такого как антитело, сохраняет свою первоначальную химическую природу, например первичную, вторичную и/или третичную структуру. Термин "побочный продукт" включает нежелательные продукты, которые снижают или уменьшают долю терапевтического полипептида в данном препарате. Типичные побочные продукты включают агрегаты терапевтического полипептида, фрагменты терапевтического полипептида (например, получающиеся при деградации полипептида в процессе дезамидирования или гидролиза) или их смеси. Термин "высокомолекулярные полипептидные агрегаты" включает агрегаты терапевтического полипептида, фрагментов терапевтического полипептида (например, полученных при деградации полипептида, например, гидролизом) или их смесей, которые затем подвергаются агрегации. Обычно высокомолекулярные агрегаты представляют собой комплексы, молекулярная масса которых выше молекулярной массы терапевтического мономерного полипептида. В случае антитела, например IgG антитела, молекулярная масса таких агрегатов выше примерно 150 кДа. Однако в случае других терапевтических полипептидов, например одноцепочечных антител, молекулярная масса которых обычно составляет 25 кДа,такие агрегаты обычно имеют молекулярную массу более 25 кДа. Термин "низкомолекулярный продукт деградации (распада, разложения) полипептида" включает,например, фрагменты терапевтического полипептида, например, получающиеся при дезамидировании или гидролизе. Обычно низкомолекулярные продукты деградации представляют собой комплексы с молекулярной массой ниже молекулярной массы терапевтического мономерного полипептида. В случае антитела, например IgG антитела, молекулярная масса таких продуктов деградации ниже примерно 150 кДа. Однако в случае других терапевтических полипептидов, например одноцепочечных антител,молекулярная масса которых обычно составляет 25 кДа, такие агрегаты обычно имеют молекулярную массу ниже 25 кДа. Термин "способ (путь) введения" ("способ применения") включает общепринятые в уровне техники способы применения (введения) для доставки терапевтического полипептида, например, такие как парентеральный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, интракраниальный или эпидуральный. Для введения терапевтического полипептида при лечении нейродегенеративного заболевания могут быть желательны внутривенный, эпидуральный или интракраниальный способы введения. Термин "лечение" ("обработка") по данному описанию определяется как применение или введение терапевтического агента пациенту или применение или введение терапевтического агента в выделенную ткань или клеточную линию пациента, у которого наблюдаются заболевание, симптомы заболевания или предрасположенность к заболеванию, с целью излечения, заживления, облегчения, задержки, ослабления, изменения, ликвидации, смягчения, улучшения состояния или воздействия на заболевание, симптомы заболевания или предрасположенность к заболеванию.-9 015147 Термин "эффективная доза" или "эффективная дозировка" определяется как количество, достаточное для достижения или, по меньшей мере, частичного достижения заданного эффекта. Термин "терапевтически эффективная доза" определяется как количество, достаточное для излечения или, по меньшей мере, частичного подавления заболевания и его осложнений у пациента, уже страдающего этим заболеванием. Количества, эффективные для этого применения, зависят от тяжести инфекции и общего состояния собственной иммунной системы пациента. Термин "пациент" ("больной") включает человека и других млекопитающих субъектов, которые получают либо профилактическое, либо терапевтическое лечение. Термин "стандартная лекарственная форма" (или "унифицированная лекарственная форма") по данному описанию относится к физически дискретной единице (дискретному элементу), пригодной (пригодному) в качестве однократной дозы для прима пациентами, проходящими лечение, причм каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное таким образом, чтобы вызывать нужный терапевтический эффект, вместе с требующимся фармацевтическим носителем, разбавителем или эксципиентом. Характеристика стандартных лекарственных форм по изобретению диктуется уникальными свойствами активного соединения, конкретным ожидаемым терапевтическим эффектом и ограничениями, свойственными технике приготовления лекарственного средства из активного соединения для лечения пациентов, и непосредственно зависит от всех этих факторов. Действительные уровни доз активного ингредиента (например, А-полипептидов) в препаратах по настоящему изобретению могут меняться таким образом, чтобы получать количество активного ингредиента, эффективное для достижения заданного терапевтического ответа для конкретного пациента, конкретной композиции и конкретного способа введения, при этом не будучи токсичным для пациента. Выбранный уровень дозы зависит от различных фармакокинетических факторов, включая активность конкретных используемых композиций по настоящему изобретению, способа введения, времени введения,скорости экскреции конкретного используемого соединения, длительности лечения, другие лекарства,соединения и/или материалы, используемые в комбинации с конкретными применяемыми композициями, возраст, пол, вес, условия, общее состояние здоровья и медицинский анамнез пациента, проходящего лечение, и подобные факторы, общеизвестные в медицине. Термин "разбавитель" по данному описанию относится к раствору, пригодному для изменения или создания типичной или подходящей концентрации или подходящих концентраций по данному описанию. Краткий обзор Настоящее изобретение предусматривает препараты полипептидов, связывающих А-пептид, в частности антитела против А, а также их участки и/или фрагменты. В некоторых аспектах изобретение предусматривает стабилизированные жидкие полипептидные препараты для терапевтического применения. В частности, изобретение предусматривает стабилизацию А-связывающих полипептидов, например антител и их антигенсвязывающих фрагментов, для применения в лечении амилоидогенных заболеваний и/или нарушений. В частности, изобретение предусматривает препараты, стабилизированные таким образом, что активный терапевтический полипептид активен в течение длительного периода времени и его можно вводить различными способами. Это особенно важно в случае тех А-связывающих полипептидов (например, антител), которые предназначены для лечения амилоидогенных заболеваний и/или нарушений. В других аспектах изобретение предусматривает единственно устойчивый препарат антитела, который устойчив к различным стрессам, таким как замерзание, лиофилизация, нагревание и/или реконструкция (реконституция, восстановление). Кроме того, типичные препараты по настоящему изобретению способны сохранять стабильность, биологическую активность, чистоту и качество антитела в течение длительного периода времени (например, в течение времени хранения препарата один год или более) и даже при неблагоприятных температурах. Кроме того, типичные препараты по настоящему изобретению пригодны для введения субъекту или пациенту (например, внутривенного введения субъекту или пациенту), например человеку, страдающему амилоидогенным заболеванием или нарушением, или человеку, у которого прогнозируется амилоидогенное заболевание или нарушение.- 10015147 Препараты. В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий А-связывающий полипептид, агент, регулирующий тоничность, причм этот агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для создания стабилизированного препарата, пригодного для внутривенной инфузии, и аминокислоту или е производное, причм аминокислота или е производное присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. В типичном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий антитело против А-пептида, маннит и гистидин. В одном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий А-связывающий полипептид, агент, регулирующий тоничность, причм этот агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для создания препарата, пригодного для внутривенной инфузии, и аминокислоту или е производное, причм аминокислота или е производное присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. В типичном варианте агентом, регулирующим тоничность, является маннит. В другом типичном варианте аминокислота представляет собой гистидин. В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий А-связывающий полипептид; А-связывающие полипептиды, пригодные для стабилизации в препарате по изобретению, включают антитела и их фрагменты и, в частности, антитела, способные связывать терапевтическую мишень, вовлечнную в амилоидогенное заболевание или нарушение. Соответственно, терапевтические полипептиды стабилизированы по изобретению для того, чтобы избежать образования побочных продуктов, обычно высокомолекулярных агрегатов, низкомолекулярных фрагментов, полученных деградацией, или их смесей с помощью добавления антиоксидантов в достаточном количестве с тем, чтобы ингибировать образование таких побочных продуктов. Антиоксиданты включают метионин и его аналоги в концентрациях, достаточных для получения заданного ингибирования нежелательных побочных продуктов, обсуждаемых ниже. Необязательно, стабилизированные полипептидные препараты по изобретению дополнительно содержат агент, регулирующий тоничность, причм этот агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для создания стабилизированного препарата, пригодного для нескольких различных способов применения, например для внутривенной инфузии, и аминокислоту или е производное, причм аминокислота или е производное присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. В типичном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий антитело против А, метионин, маннит и гистидин. В одном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный жидкий препарат,включающий терапевтически активный А-связывающий полипептид, отличающийся тем, что полипептид при хранении может образовывать побочный продукт, и антиоксидант, причм антиоксидант присутствует в количестве, достаточном для уменьшения образования побочного продукта при стоянии препарата. В типичном варианте изобретения антиоксидант представляет собой метионин или его аналог. В некоторых вариантах изобретения А-связывающий полипептид выбирают из группы, состоящей из антитела, Fv фрагмента антитела, Fab фрагмента антитела, F(ab')2 фрагмента антитела, Fd фрагмента антитела, одноцепочечного антитела к А (scFv), фрагмента однодоменного антитела (Dab), полипептида со структурой -складчатого листа, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела (CDR), и неглобулярного полипептида, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела. В типичных вариантах изобретения А-связывающий полипептид присутствует в концентрации около 0,1-60 мг/мл. В других типичных вариантах препараты по настоящему изобретению включают А-связывающий полипептид в примерной концентрации 30 мг/мл. В других типичных вариантах препараты по настоящему изобретению включают А-связывающий полипептид в примерной концентрации 20 мг/мл. В других примерах осуществления изобретения препараты по изобретению включают А-связывающий полипептид в примерной концентрации 17 мг/мл. В примерах осуществления изобретения А-связывающий полипептид представляет собой антитело к А. В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело к А выбирают из группы, состоящей из гуманизированного 3D6 антитела, гуманизированного 10D5 антитела, гуманизированного 12 В 4 антитела, гуманизированного 266 антитела, гуманизированного 12 А 11 антитела и гуманизированного 15 С 11 антитела. В примерах осуществления настоящего изобретения антитело против А связывает эпитоп, включающий аминокислотные остатки А-пептида, выбранные из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42.- 11015147 В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело против (к) А является антителом субтипа, выбранного из группы, состоящей из человеческого IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. В конкретном варианте настоящего изобретения антитело против А является человеческим иммуноглобулином субтипа IgG1. А-полипептид может образовывать побочный продукт, выбранный из группы, состоящей из высокомолекулярного полипептидного агрегата, низкомолекулярного продукта деградации полипептида и их комбинаций. Высокомолекулярные агрегаты могут включать комплексы антитело:антитело, комплексы антитело:фрагмент антитела, комплексы фрагмент антитела:фрагмент антитела или их комбинации. Низкомолекулярные полипептидные продукты деградации могут включать лгкую цепь антитела, тяжлую цепь антитела, комплекс лгкой и тяжлой цепей антитела, фрагмент антитела и их комбинации. В одном варианте настоящего изобретения жидкий препарат по настоящему изобретению включает А-связывающий полипептид, маннит и гистидин. В типичном варианте настоящего изобретения А-связывающий полипептид представляет собой антитело к (против) А. В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело к А выбирают из группы, состоящей из гуманизированного 3D6 антитела, гуманизированного 10D5 антитела, гуманизированного 12 В 4 антитела, гуманизированного 266 антитела, гуманизированного 12 А 11 антитела и гуманизированного 15 С 11 антитела. В других примерах осуществления настоящего изобретения антитело против А связывает эпитоп, включающий аминокислотные остатки А-пептида, выбранные из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-7, 1-5, 3-7,3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42. В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело против(к) А является антителом субтипа, выбранного из группы, состоящей из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. В конкретном варианте настоящего изобретения антитело против А является иммуноглобулином субтипаIgG1. В типичных вариантах настоящего изобретения антитело против А присутствует в примерной концентрации 0,1-200 мг/мл. В других примерах осуществления настоящего изобретения антитело против А присутствует в примерной концентрации около 20 мг/мл. В некоторых вариантах настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению включают маннит в количестве, достаточном для поддержания изотоничности препарата. В примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 2-10% вес./об. В других примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 4% вес./об. Ещ в одних примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 6% вес./об. В других примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 10% вес./об. В некоторых вариантах настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению включают гистидин в количестве, достаточном для сохранения физиологически приемлемого рН. В примерах вариантов настоящего изобретения гистидин присутствует в примерной концентрации 0,1-25 мМ. В других примерах вариантов настоящего изобретения гистидин присутствует в примерной концентрации 10 мМ. В одном варианте настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению включают сукцинат в концентрации около 0,1-25 мМ. В примере варианта настоящего изобретения сукцинат присутствует в концентрации около 10 мМ. В некоторых вариантах настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению дополнительно включают антиоксидант. В примерах вариантов настоящего изобретения антиоксидант представляет собой метионин или его аналог. В одном варианте настоящего изобретения метионин или его аналог присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ. В другом варианте изобретения метионин или его аналог присутствует в концентрации около 10 мМ. В некоторых вариантах изобретения препарат дополнительно включает стабилизатор. В примерах вариантов настоящего изобретения стабилизатор представляет собой полисорбат 80. В некоторых вариантах изобретения полисорбат 80 присутствует в количестве 0,001-0,01% вес./об. В других вариантах изобретения полисорбат 80 присутствует в количестве около 0,005%. Ещ в одних вариантах настоящего изобретения полисорбат 80 присутствует в примерном количестве около 0,01% вес./об. В некоторых вариантах изобретения препарат имеет рН около 5-7. В примерах вариантов настоящего изобретения препарат имеет рН около 5,5. В другом примере варианта препарат имеет рН около 6,0. Ещ в одном примере варианта изобретения препарат имеет рН около 6,2. В других примерах вариантов изобретения препарат имеет рН около 6,5. В некоторых вариантах изобретения препарат устойчив к замораживанию. В других вариантах настоящего изобретения препарат пригоден для внутривенного введения. В примере варианта настоящего изобретения препарат пригоден для внутримышечного или подкожного введения. В примере варианта изобретения препарат применим для доставки к мозгу субъекта. В некоторых вариантах настоящего изобретения препарат пригоден для доставки в цереброспинальную жидкость субъекта. В других вариантах изобретения препарат практически не содержит консервантов. В некоторых вариантах настоящего изобретения препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев. В некоторых вариантах препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 18 месяцев. В некоторых вариантах препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев.- 12015147 В некоторых вариантах настоящего изобретения препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 30 месяцев. В примерах вариантов настоящего изобретения препарат устойчив при температуре примерно от-80 до 40 С. В некоторых примерах вариантов изобретения препарат устойчив при температуре примерно от 0 до 25 С. Предпочтительно препарат устойчив при температуре примерно от 2 до 8 С. В конкретном варианте настоящего изобретения препарат, пригодный для внутривенного введения,включает около 20 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. В другом конкретном варианте изобретения препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 30 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина, около 10 мМ метионина, около 6% маннита и имеет рН около 6,2. Предпочтительный препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 20 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0. В другом примере варианта настоящего изобретения препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 10 мг/мл антитела против А, около 10 мМ L-гистидина, около 10 мМ метионина, около 10% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,5. В некоторых вариантах вышеуказанных препаратов по настоящему изобретению антитело против А выбирают из группы, состоящей из гуманизированного 3D6 антитела, гуманизированного 10D5 антитела, гуманизированного 12 В 4 антитела, гуманизированного 266 антитела, гуманизированного 12 А 11 антитела или гуманизированного 15 С 11 антитела. Один такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 2-20 мг/мл антитела против А, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 3D6 антитела, гуманизированного 10D5 антитела, гуманизированного 12 В 4 антитела, гуманизированного 12 А 11 антитела. В некоторых препаратах антитело против А связывает эпитоп внутри аминокислотных остатков, выбранных из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42 А-пептида. В некоторых препаратах антитело против А связывает непрерывный эпитоп, который включает остатки внутри остатков 1-7, внутри остатков 13-28 А-пептида. В некоторых таких препаратах антитело является биспецифическим антителом или антителом, полученным по методу, описанному в опубликованной Международной патентной заявке WO 03/070760. В некоторых таких препаратах эпитоп представляет собой непрерывный эпитоп. В другом аспекте настоящего изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма включает эффективное количество препарата по любому из вышеприведенных вариантов изобретения для лечения заболевания у пациента путм введения лекарственной формы пациенту. В одном примере варианта изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма представляет собой контейнер, содержащий препарат по настоящему изобретению. В одном примере варианта изобретения контейнер представляет собой флакон (ампулу, пузырк), содержащий около 1-2000 мг А-связывающего полипептида. В другом варианте изобретения флакон (ампула, пузырк) содержит около 50-1500 мг А-связывающего полипептида. Ещ в одном примере варианта изобретения флакон (ампула, пузырк) содержит около 5-50 мг А-связывающего полипептида. В примерах вариантов настоящего изобретения флакон (пузырк, ампула) имеет объм около 2-100 мл. В других вариантах изобретения объм флакона (пузырька, ампулы) составляет около 2-10 мл. В некоторых вариантах изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма по настоящему изобретению пригодна для внутривенного вливания пациенту. Также в настоящем описании представлены наборы, включающие фармацевтическую стандартную лекарственную форму по данному описанию и инструкцию по применению. В одном варианте настоящего изобретения контейнер, содержащий фармацевтическую стандартную лекарственную форму, представляет собой контейнер с прикреплнной этикеткой с руководством по применению. В одном примере варианта изобретения контейнер снабжн этикеткой с руководством по профилактическому применению. В другом примере варианта изобретения контейнер снабжн этикеткой с руководством по терапевтическому применению. Настоящее изобретение предусматривает способ повышения стабильности А-связывающего полипептида в жидком фармацевтическом препарате, причм полипептид демонстрирует образование побочного продукта при хранении в жидком препарате, этот способ включает введение в препарат антиоксиданта в количестве, достаточном для уменьшения количества образующегося побочного продукта полипептида. В примерах вариантов изобретения А-связывающий полипептидный компонент выбирают из группы, состоящей из антитела, Fv фрагмента антитела, Fab фрагмента антитела, F(ab')2 фрагмента антитела, Fd фрагмента антитела, одноцепочечного антитела (scFv), фрагмента однодоменного антитела(Dab), полипептида со структурой -складчатого листа, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела (CDR), неглобулярного полипептида, включающего по меньшей мере однуCDR область антитела. В одном варианте изобретения побочный продукт выбирают из группы, состоящей из высокомолекулярного полипептидного агрегата, низкомолекулярного продукта деградации полипептида и их комбинаций. В другом варианте изобретения антиоксидант выбирают из группы, состоя- 13015147 щей из метионина и его аналога. В некоторых вариантах изобретения способ получения препарата по любому из вышеприведнных вариантов настоящего изобретения включает объединение (смешение) эксципиентов препарата. В примере варианта изобретения способ приготовления препарата по любому из вышеприведнных вариантов изобретения включает объединение (смешение, комбинирование) А-связывающего полипептида с одним или более разбавителем, причм один или более разбавителей включают эксципиенты препарата. В примере варианта изобретения способ приготовления фармацевтической стандартной лекарственной формы включает объединение препарата по любому из вышеприведнных вариантов изобретения в подходящем контейнере. В другом примере варианта изобретения способ приготовления препарата по любому из вышеприведнных вариантов изобретения включает объединение раствора, содержащего А-связывающий полипептид, и по меньшей мере часть эксципиентов препарата с разбавителем, содержащим остальные эксципиенты. Полипептиды для применения в стабилизированных препаратах по изобретению. Полипептид, из которого готовят препарат по изобретению, представленный в данном описании,получают общепринятыми в уровне техники методами, которые включают, например, синтетические методы (такие как методы рекомбинантной ДНК и пептидный синтез или комбинация этих методов), или их можно выделять из эндогенных источников полипептида. В некоторых вариантах изобретения выбранный полипептид представляет собой антигенсвязывающий полипептид, более предпочтительно антитело и, в частности, антитело против (к) А. Методы получения антигенсвязывающего полипептида и,в частности, антител описаны ниже. Поликлональные антитела. Поликлональные антитела можно получать иммунизацией подходящего субъекта иммуногеном. Титр антитела в иммунизированном субъекте можно контролировать во времени стандартными методами, такими как тврдофазный иммуноферментный анализ (ELISA) с применением иммобилизованного целевого антигена. При желании молекулы антитела, нацеленные на целевой антиген, можно выделять из организма млекопитающего (например, из крови) и очищать далее общепринятыми методами, такими как метод хроматографии на протеин А-сефарозе, при этом получают антитело, например фракцию IgG. Через соответствующее время после иммунизации, когда титры антитела против антигена наиболее высоки, клетки, продуцирующие антитело, можно получать от субъекта и использовать для получения моноклональных антител стандартными методами, такими как метод гибридом, впервые описанный Kohler(1982), Int. J. Cancer, 29: 269-75). О получении химерных поликлональных антител см. Buechler et al., патент США 6420113. Моноклональные антитела. Доя получения моноклонального антитела можно использовать любые протоколы, используемые для слияния лимфоцитов и иммортализованных клеточных линий (см., например, G. Galfre et al. (1977),Nature, 266: 550-52; Gefter et al. Somatic Cell Genet, цитируется выше; Lerner, Yale J. Biol. Med., цитируется выше; Kenneth, Monoclonal Antibodies, цитируется выше). Кроме того, рядовой специалист понимает,что существует множество вариантов таких методов, которые также могут применяться. Обычно бессмертная линия клеток (например, клеточная линия миеломы) происходит из того же вида млекопитающего, что и лимфоциты. Например, мышиные гибридомы можно получать слиянием лимфоцитов мыши,иммунизированной иммуногенным препаратом по настоящему изобретению, с иммортализованной мышиной клеточной линией. Предпочтительные бессмертные клеточные линии представляют собой клеточные линии мышиной миеломы, чувствительные к культуральной среде, содержащей гипоксантин,аминоптерин и тимидин ("HAT среда"). Любую из ряда клеточных линий миеломы можно использовать в качестве партнра по слиянию в соответствии со стандартными методами, например клеточные линии миеломы Р 3-NS1/1-Ag4-1, P3-x63-Ag8.653 или Sp2/O-Ag14. Эти клеточные линии миеломы можно получить из АТСС. Обычно HAT-чувствительные клетки мышиной миеломы сливают с мышиными спленоцитами, используя полиэтиленгликоль ("ПЭГ", "PEG"). Клетки гибридомы, полученные в результате слияния, затем выбирают, используя среду HAT, которая убивает неслитые или непродуктивно слитые клетки миеломы (неслитые спленоциты умирают через несколько дней, так как они не трансформируются). Клетки гибридомы, продуцирующие моноклональное антитело по изобретению, детектируют скринингом супернатантов гибридомных культур на антитела, которые связывают целевой антиген, например А, стандартным методом ELISA.- 14015147 Рекомбинантные антитела. В качестве альтернативы получению гибридом, секретирующих моноклональные антитела,моноклональное антитело можно идентифицировать и выделять скринингом комбинаторной библиотеки рекомбинантных иммуноглобулинов (например, фаг-дисплейной библиотеки антител) с использованием целевого антигена, чтобы тем самым выделить членов библиотеки иммуноглобулина,которые связывают целевой антиген. Наборы для создания и скрининга фаг-дисплейных библиотек выпускаются промышленностью (например, Recombinant Phage Antibody System, от Pharmacia, номер по каталогу 27-9400-01; и SurfZAP Phage Display Kit, от Stratagene, номер по каталогу 240612). Кроме того, примеры методов и реагентов, особенно пригодные для создания и скрининга дисплейной библиотека антител, можно найти, например, в Ladner et al., патент США 5223409; Kang et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 92/18619; Dower et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 91/17271; Winter et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 92/20791; Markland et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 92/15679; Breitling et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 93/01288; McCafferty et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 92/01047; Garrard et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 92/09690; Ladner et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 90/02809; Fuchs et al. (1991), Bio/Technology, 9: 1370-1372;Barbas et al. (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 7978-7982 и McCafferty et al. (1990), Nature, 348: 552554. Химерные и гуманизированные антитела. Кроме того, рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные моноклональные антитела, содержащие участки как человеческого, так и "нечеловеческого" происхождения, которые можно получать стандартными методами рекомбинантной ДНК, входят в объм изобретения. Термин "гуманизированный иммуноглобулин" или "гуманизированное антитело" относится к иммуноглобулину или антителу, которые включают по меньшей мере одну гуманизированную цепь иммуноглобулина или антитела (т.е. по меньшей мере одну гуманизированную лгкую или тяжлую цепь). Термин "гуманизированная цепь иммуноглобулина" или "гуманизированная цепь антитела" (т.е."гуманизированная лгкая цепь иммуноглобулина" или "гуманизированная тяжлая цепь иммуноглобулина") относится к цепи иммуноглобулина или антитела (т.е. лгкой или тяжлой цепи соответственно),имеющей вариабельную область, которая включает вариабельную каркасную область, главным образом(в основном, практически), человеческого иммуноглобулина или антитела и гипервариабельные области(CDR) (например, по меньшей мере одна область CDR, предпочтительно две области CDR, более предпочтительно три области CDR), главным образом, иммуноглобулина или антигена "нечеловеческого" происхождения и дополнительно включает константные области (например, по меньшей мере одну константную область или е участок в случае лгкой цепи и три константные области в случае тяжлой цепи). Выражение "гуманизированная вариабельная область" (например, "гуманизированная вариабельная область лгкой цепи" или "гуманизированная вариабельная область тяжлой цепи") относится к вариабельной области, которая включает вариабельную каркасную область, главным образом, (из) человеческого иммуноглобулина или антитела и гипервариабельные области (CDR), главным образом, иммуноглобулина или антигена "нечеловеческого" происхождения. Выражение "главным образом (практически), (из) человеческого иммуноглобулина или антитела" или "главным образом, (практически) человеческий" означает, что при выравнивании с аминокислотной последовательностью человеческого иммуноглобулина или антитела с целью сравнения область по меньшей мере на 80-90%, 90-95% или на 95-99% идентична (имеет идентичность по меньшей мере 80-90%, 90-95% или 95-99%) (т.е. имеет идентичность локальной последовательности) человеческой последовательности каркасной или константной области, что делает возможными, например, консервативные замены, замены консенсусной последовательности, замены зародышевой линии, обратные мутации и т.п. Введение консервативных замен, замен консенсусной последовательности, замен зародышевой линии, обратных мутаций и т.п. часто называют "оптимизацией" гуманизированного антитела или цепи. Выражение "главным образом (практически, в основном) (из) иммуноглобулина или антитела нечеловеческого происхождения" или "главным образом (практически, в основном) нечеловеческий" означает наличие последовательности иммуноглобулина или антитела по меньшей мере на 80-95%, предпочтительно по меньшей мере на 90-95%, более предпочтительно на 96, 97, 98 или 99% идентичной последовательности иммуноглобулина или антитела организма нечеловеческого происхождения, например отличного от человека млекопитающего.- 15015147 Соответственно, все области или остатки гуманизированного иммуноглобулина или антитела или гуманизированной цепи иммуноглобулина или антитела, за исключением CDR, практически (в основном) идентичны соответствующим областям или остаткам одной или более последовательностей нативного человеческого иммуноглобулина. Выражение "соответствующая область" или "соответствующий остаток" относится к области или остатку на второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, которые занимают то же самое (т.е. эквивалентное) положение, что и область или остаток на первой аминокислотной или нуклеотидной последовательности, когда первая и вторая последовательности оптимально выравниваются с целью сравнения. Термин "значительная (заметная) идентичность" означает, что две полипептидные последовательности при оптимальном выравнивании, таком как с помощью программ GAP или BESTFIT с применением средневзвешенных значений гэпов (пробелов) по умолчанию, имеют идентичность последовательностей по меньшей мере 50-60%, предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 60-70%, более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 70-80%, более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 80-90%, ещ более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 90-95% и ещ более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 95% или более (например, идентичность последовательностей 99% или более). Термин "практическая идентичность (практически идентичный)" означает, что две полипептидные последовательности при оптимальном выравнивании, таком как с помощью программ GAP или BESTFIT с применением средневзвешенных значений гэпов (пробелов) по умолчанию, имеют идентичность последовательностей по меньшей мере 80-90%, предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 90-95% и более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 95% или более (например, идентичность последовательностей 99% или более). Для сравнения последовательностей обычно одна последовательность служит в качестве эталонной последовательности, с которой сравниваются тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей тестируемая и эталонная последовательности вводятся в компьютер, при необходимости задаются координаты последовательностей и устанавливаются параметры программы "Алгоритм последовательности". Затем, используя алгоритм сравнения последовательностей, рассчитывают процент идентичности последовательностей для тестируемой (тестируемых) последовательности (последовательностей) относительно эталонной последовательности, исходя из заданных (установленных) параметров программы. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, используя алгоритм локальной гомологии (алгоритм построения локального выравнивания) СмитаВатермана (SmithWaterman, Adv. Appl. Math. 2: 482 (1981, алгоритм построения глобального выравнивания Нидельмана-Вунша (NeedlemanWunsch, J. Mol. Biol. 48: 443 (1970, поиск подобия методом Пирсона и Липмана (PearsonLipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444 (1988), компьютеризованную реализацию этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в пакете программ Wisconsin GeneticsSoftware Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) или визуальное изучение (см. в общем Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology). Примером алгоритма, пригодного для определения идентичности последовательностей и подобия последовательностей в процентах, является алгоритм BLAST, описанный в Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403 (1990). Программа для осуществленияBLAST анализов общедоступна через National Center for Biotechnology Information (на Интернет-сервереNational Institutes of Health NCBI). Обычно для проведения сравнения последовательностей можно использовать параметры программы по умолчанию, хотя можно также использовать специальные параметры пользователя. Для аминокислотных последовательностей программа BLASTP по умолчанию использует длину слова (W) 3, ожидание (Е) 10 и матрицу BLOSUM62 (см. Henikoff Henikoff, Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 89: 10915 (1989. Предпочтительно положения остатков, не являющихся идентичными, различаются консервативными аминокислотными заменами. С целью классификации аминокислотных замен в качестве консервативных или неконсервативных аминокислоты делят на следующие группы: группа I (гидрофобные боковые цепи): Leu, Met, Ala, Val, Leu, Ile; группа II (нейтральные гидрофильные боковые цепи): Cys, Ser, Thr; группа III (кислые боковые цепи): Asp, Glu; группа IV (основные боковые цепи): Asn, Gln, His, Lys, Arg; группа V (остатки, влияющие на ориентацию цепи): Gly, Pro; группа VI (ароматические боковые цепи): Trp,Tyr, Phe. Консервативные замены включают замены аминокислотами того же класса. Неконсервативные замены представляют собой замену члена одного из этих классов на член другого класса.- 16015147 Предпочтительно гуманизированные иммуноглобулины или антитела связывают антиген с аффинностью, превышающей аффинность соответствующего негуманизированного антитела в 3, 4 или 5 раз. Например, если негуманизированное антитело обладает аффинностью связывания 10-9 М, величина аффинности связывания гуманизированных антител будет равна по меньшей мере 310-8 М, 410-8 М,510-8 М или 10-9 М. При описании связывающих свойств цепи иммуноглобулина или антитела цепь можно описывать на основании е способности "направлять (нацеливает) на связывание антигена (с антигеном), например A". Говорят, что цепь "направляет на связывание антигена", когда она сообщает интактному иммуноглобулину (или его антигенсвязывающему фрагменту) свойство специфического связывания или аффинность связывания. Говорят, что мутация (например, обратная мутация) существенно влияет на способность тяжлой или лгкой цепи направлять связывание с антигеном, если она изменяет (например, понижает) аффинность связывания интактного иммуноглобулина или антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего указанную цепь по меньшей мере на порядок по сравнению с аффинностью антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего эквивалентную цепь, в которой отсутствует указанная мутация. Мутация "несущественно влияет (например,снижает) на способность тяжлой или лгкой цепи "направлять связывание с антигеном", если она изменяет (например, понижает) аффинность связывания интактного иммуноглобулина или антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего указанную цепь, только в 2, 3 или 4 раза по сравнению с аффинностью антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего эквивалентную цепь, в которой отсутствует указанная мутация. Термин "химерный иммуноглобулин" или "химерное антитело" относится к иммуноглобулину или антителу, вариабельные области которого образованы из первого вида, а константные области происходят из второго вида. Химерные иммуноглобулины или антитела можно конструировать, например, генетической инженерией (методами рекомбинантной ДНК) при использовании сегментов гена иммуноглобулина, принадлежащих к различным видам. Не предполагается, что термины "гуманизированный иммуноглобулин" или "гуманизированное антитело" охватывают химерные иммуноглобулины или антитела, определяемые ниже. Хотя гуманизированные иммуноглобулины или антитела являются химерными по своей конструкции (т.е. содержат области более чем из одного вида белка), они включают дополнительные признаки (т.е. вариабельные области, содержащие донорные CDR остатки и акцепторные каркасные остатки), не обнаруживаемые в химерных иммуноглобулинах или антителах по определению в данном описании. Такие химерные и гуманизированные моноклональные антитела можно получать методами рекомбинантной ДНК, известными в уровне техники, например методами, описанными в Robinson et al. Международная патентная заявка PCT/US86/02269; Akira, et al. Европейская патентная заявка 184187;Taniguchi, M., Европейская патентная заявка 171496; Morrison et al. Европейская патентная заявка 173494; Neuberger et al. опубликованная Международная патентная заявка РСТ WO 86/01533;Cabilly et al. Патент США 4816567; Cabilly et al. Европейская патентная заявка 125023;Oi et al. (1986), BioTechniques, 4: 214; Winter патент США 5225539; Jones et al. (1986), Nature, 321: 522525; Verhoeyan et al. (1988), Science, 239: 534 и Beidler et al. (1988), J. Immunol. 141: 4053-4060. Человеческие антитела из трансгенных животных и фаговый дисплей. В настоящее время можно получать трансгенных животных (например, мышей), способных после иммунизации продуцировать полный спектр человеческих антител в отсутствие продуцирования эндогенного иммуноглобулина. Например, было описано, что гомозиготная делеция гена шарнирной области тяжлой цепи антитела (JH) у химерных мышей и мышей с мутацией в зародышевой линии приводит к полному ингибированию продуцирования эндогенного антитела. Перенос набора генов зародышевой линии человеческого иммуноглобулина в таких мышей с мутацией в зародышевой линии приводит к продуцированию человеческих антител при контрольном заражении антигеном. Полностью человеческие антитела могут также быть получены из фаг-дисплейных библиотек(Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991. Химерные поликлональные антитела можно также получать из фаг-дисплейных библиотек (Buechler et al., патент США 6420113).- 17015147 Биспецифические антитела, полипептиды-слитое антитело и одноцепочечные антитела. Биспецифические антитела (BsAbs) представляют собой антитела, обладающие специфичностью связывания по меньшей мере к двум эпитопам. Такие антитела можно получать из полноразмерных антител или фрагментов антител (например, F(ab')2 биспецифических антител). Способы получения биспецифических антител известны в уровне техники. Традиционное получение полноразмерных биспецифических антител основано на коэкспрессии двух пар тяжлая-лгкая цепь иммуноглобулина, где две цепи имеют различные специфичности (Millstein et al., Nature, 305: 537-539 (1983. Вследствие произвольного набора тяжлой и лгкой цепей иммуноглобулина эти гибридомы (квадромы) продуцируют теоретическую смесь молекул различных антител (см. Международную патентную заявку WO 93/08829 иTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655-3659 (1991. Биспецифические антитела также включают сшитые антитела или "гетероконъюгаты" антител ("гетероконъюгатные" антитела). Например, одно из антител в гетероконъюгате может быть связано с авидином, другое с биотином или другой "полезной нагрузкой". "Гетероконъюгатные" антитела можно получать любыми подходящими методами сшивания (перекрстного связывания). Подходящие сшивающие агенты общеизвестны в уровне техники и раскрываются в патенте США 4676980, наряду с различными методами сшивания. Ещ в одном варианте изобретения антитело может быть слито химическими или генетическими методами с полезной нагрузкой, такой как реактивная (реакционноспособная), детектируемая или функциональная частица, например иммунотоксин, для получения полипептида, продукта слияния антитела. Такие полезные нагрузки включают, например, иммунотоксины, химиотерапевтические агенты и радиоизотопы, все они общеизвестны в уровне техники. Одноцепочечные антитела также пригодны для стабилизации по изобретению. Фрагменты содержат вариабельный домен тяжлой цепи (VH), связанный с вариабельным доменом лгкой цепи (VL) линкером, который способствует тому, что каждая вариабельная область связана с другой, и воссоздают антигенсвязывающий карман исходного (родительского) антитела, из которого получают области VL и VH. См. Gruber et al., J. Immunol., 152: 5368 (1994). Понятно, что любые из вышеприведнных полипептидных молекул, индивидуально или в комбинации, пригодны для приготовления в виде стабилизированных препаратов по изобретению. Антитела против А. Как правило, препараты по настоящему изобретению включают ряд антител для лечения амилоидогенных заболеваний, в частности болезни Альцгеймера, с помощью нацеливания на А-пептид. Термины "А-антитело", "антитело против А" и "анти А" ("антитело к А") в данном описании используются взаимозаменяемо в отношении антитела, которое связывается с одним или более эпитопов или антигенных детерминант человеческого амилоидного белка-предшественника (APP), А-белка или обоих. Типичные эпитопы или антигенные детерминанты могут находиться внутри APP, но предпочтительно находятся внутри А-пептида APP. Существует множество изоформ APP, например APP695,APP751 и APP770. Аминокислотам в APP присвоены номера в соответствии с последовательностью изоформы APP770 (см., например, инвентарный номер в GenBank Р 05067). Примерами известных специфических изотипов APP, существующих в настоящее время в организме человека, являются полипептид из 695 аминокислот, описанный Kang et. al. (1987), Nature, 325: 733-736, который назван "нормальным"et al. (1988), Nature, 331: 528-530; и полипептид из 770 аминокислот, описанный Kitaguchi et. al. (1988),Nature, 331: 530-532. В результате протеолитического процессинга APP под действием различных секретаз in vivo или in situ А обнаруживается как в "короткой форме" длиной 40 аминокислот, так и в "длинной форме" протяжнностью 42-43 аминокислоты. Короткая форма, A40, состоит из остатков 672-711APP. Длинная форма, например А 42 или А 43, состоит из остатков 672-713 или 672-714 соответственно. Участок гидрофобного домена APP находится на карбоксиконце А и может быть ответственен за способность А к агрегации, в частности в длинной форме. А-пептид может находиться в жидкостях организма или может выделяться из жидкостей организма человека и других млекопитающих, например цереброспинальной жидкости, включая как здоровых индивидуумов, так и индивидуумов, страдающих амилоидогенными нарушениями. Термины "-амилоидный белок", "-амилоидный пептид", "-амилоид", "А" и "А-пептид" употребляются в данном описании взаимозаменяемо. А-пептид (например, А 39, А 40, А 41, А 42 и А 43) представляет собой внутренний фрагмент 4-кДа из 39-43 аминокислот APP. Например, А 40 состоит из остатков 672-711 APP, а А 42 состоит из остатков 672-713 APP. А-пептиды включают пептиды, получающиеся в результате расщепления секретазой APP и синтетических пептидов, имеющих такую же или практически такую же последовательность, что и продукты расщепления; А-пептиды могут происходить из различных источников, например тканей, клеточных линий или жидкостей организма (например,сыворотки или цереброспинальной жидкости). Например, А может происходить из APPэкспрессирующих клеток, таких как клетки яичников китайского хомячка (СНО), стабильно трансфецируемых с помощью APP717F5, как описано, например, в Walsh et al. (2002), Nature, 416, p. 535-539. Пре- 18015147 парат А можно получать из тканевых источников (см., например, Johnson-Wood et al. (1997), Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 94: 1550) или же А-пептиды можно синтезировать методами, общеизвестными специалистам в данной области техники, см., например, Fields et al., Synthetic Peptides: A User's Guide, ed. Grant,W.H. FreemanCo., New York, NY, 1992, p. 77). Следовательно, пептиды можно синтезировать, используя автоматические методы тврдофазного синтеза по Меррифильду с -аминогруппой, защищенной либо t-Boc, либо F-moc группой, используя защищенные аминогруппы в боковых цепях, например на синтезаторе модели Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model 430A или 431. Более протяжнные пептидные антигены можно синтезировать, используя общеизвестные методы рекомбинантной ДНК. Например, полинуклеотид, кодирующий пептид или слитый пептид, можно синтезировать или молекулярно клонировать и ввести в подходящий вектор экспрессии для трансфекции и гетерологичной экспрессии подходящей клеткой-хозяином. А-пептид также относится к родственным А-последовательностям,которые получаются в результате мутаций в А-области нормального гена. Типичные эпитопы или антигенные детерминанты, с которыми связывается А-антитело, могут находиться внутри человеческого амилоидного белка-предшественника (APP), но предпочтительно находятся в А-пептиде APP. Типичные эпитопы или антигенные детерминанты внутри А локализованы внутри N-конца, центральной области или С-конца А. "N-концевой эпитоп" представляет собой эпитоп,или антигенную детерминанту, локализованный (локализованную) внутри N-конца или включающий(включающую) N-конец А-пептида. Типичные N-концевые эпитопы включают остатки внутри аминокислот 1-10 или 1-12 А, предпочтительно из остатков 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 2-6, 2-7, 3-6 или 3-7 А 42. Другие примеры N-концевых эпитопов начинаются в остатках 1-3 и заканчиваются в остатках 7-11 А. Другие примеры N-концевых эпитопов включают остатки 2-4, 5, 6, 7 или 8 А, остатки 3-5, 6, 7, 8 или 9 А или остатки 4-7, 8, 9 или 10 А 42. "Центральные эпитопы" представляют собой эпитопы, или антигенные детерминанты, содержащие остатки, локализованные внутри центрального или среднего участка А-пептида. Примеры центральных эпитопов включают остатки внутри аминокислот 13-28 А, предпочтительно из остатков 14-27, 15-26, 16-25, 17-24, 18-23 или 19-22 А. Другие примеры центральных эпитопов включают остатки внутри аминокислот 16-24, 16-23, 16-22, 16-21, 18-21, 19-21, 19-22, 19-23 или 19-24 А. "С-концевые" эпитопы, или антигенные детерминанты, локализованы внутри С-конца или включая С-конец А-пептида и включают остатки внутри аминокислот 33-40, 33-41 или 33-42 А."С-Концевые эпитопы" представляют собой эпитопы, или антигенные детерминанты, содержащие остатки внутри С-конца А-пептида (например, примерно внутри аминокислот 30-40 или 30-42 А). Другие примеры С-концевых эпитопов, или антигенных детерминант, включают остатки 33-40 или 33-42 А. Когда говорят, что антитело связывается с эпитопом внутри заданных остатков, таких как А 3-7,это означает, что антитело специфически связывается с полипептидом, содержащим заданные (определнные) остатки (т.е. А 3-7 в данном примере). Данное антитело необязательно контактирует с каждым остатком внутри А 3-7. Не каждая единичная аминокислотная замена или делеция внутри А 3-7 необязательно значительно влияет на аффинность связывания. В различных вариантах изобретения А-антитело является специфическим в отношении концов. Применяемый в данном описании термин"специфический к концу (в отношении конца, конец-специфический)" относится к антителу, которое специфически связывается с N-концевыми или С-концевыми остатками А-пептида, но не распознат те же остатки, присутствующие в более протяжнном варианте А, содержащем эти остатки, или в APP. В различных вариантах изобретения антитело А является "С-конец-специфическим" ("специфическим к С-концу"). Применяемый в данном описании термин "С-конец-специфический" ("специфический к С-концу") означает, что антитело специфически распознат свободный С-конец А-пептида. Примеры А-антител, специфических к С-концу, включают А-антитела, которые распознают А-пептид, заканчивающийся остатком 40, но не распознают А-пептид, заканчивающийся остатком 41, 42 и/или 43; распознают А-пептид, заканчивающийся остатком 42, но не распознают А-пептид, заканчивающийся остатком 40, 41 и/или 43; и т.д. В одном варианте изобретения А-антитело может представлять собой 3D6 антитело или его вариант или 10D5 антитело или его вариант, они оба описаны в опубликованной патентной заявке США 20030165496 A1, в опубликованной патентной заявке США 20040087777 A1, опубликованной в Международной патентной заявкеWO 02/46237 A3 и опубликованной Международной патентной заявкеWO 04/080419 A2. Описание антител 3D6 и 10D5 можно также найти в опубликованной Международной патентной заявкеWO 02/088306 A2 и в опубликованной Международной патентной заявкеWO 02/088307 A2. Дополнительные антитела 3D6 описаны в патентной заявке США 11/303478 и Международной патентной заявкеPCT/US05/45614. 3D6 представляет собой моноклональное антитело (mAb), которое специфически связывается сN-концевым эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 1-5. Для сравнения, 10D5 является mAb, которое специфически связывается с N-концевым эпитопом,локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-6. Клеточная линия,- 19015147 продуцирующая моноклональное антитело 3D6 (RB96 3D6.32.2.4), депонирована в Американской коллекции типовых культур (АТСС), Manassas, VA 20108, USA, 8 апреля 2003 г. согласно Будапештскому договору под номером РТА-5130. Клеточная линия, продуцирующая моноклональное антитело 10D5(RB44 10D5.19.21), депонирована в АТСС 8 апреля 2003 г. согласно Будапештскому договору под номером РТА-5129. Примерами вариантных 3D6 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лгкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 5, и гуманизированную тяжлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 6. Другими примерами вариантных 3D6 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную аминокислотную последовательность лгкой цепи, представленную как SEQ ID NO: 7, и гуманизированную аминокислотную последовательность тяжлой цепи, представленную как SEQ ID NO: 8. Примерами вариантных 10D5 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лгкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 11, и гуманизированную тяжлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 12. Другими примерами вариантных 10D5 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную аминокислотную последовательность лгкой цепи, представленную как SEQ ID NO: 13, и гуманизированную аминокислотную последовательность тяжлой цепи, представленную как SEQ ID NO: 14. Такие вариантные антитела подробнее описаны в Международной патентной заявке WO 02/088306 A2. В другом варианте изобретения антитело может являться 12 В 4 антителом или его вариантом, описанным в опубликованной патентной заявке США 20040082762 A1 и в опубликованной Международной патентной заявкеWO 03/077858 A2. 12 В 4 представляет собой mAb, которое специфически связывается с N-концевым эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-7. Примерами вариантных 12 В 4 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лгкую цепь (или лгкую цепь), содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 15 или SEQ ID NO: 17, и гуманизированную тяжлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 12 А 11 антитело или его вариант, описанные в опубликованной патентной заявке США 20050118651 А 1, в патентной заявке США 11/303478, в опубликованной Международной патентной заявкеWO 04/108895 А 2 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45614. 12 А 11 представляет собой mAb, которое специфически связывается с N-концевым эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-7. Примерами вариантных 12 А 11 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области, представленную как SEQ ID NO: 20, и гуманизированную тяжлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23,SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29,SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35,SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40 или SEQ ID NO: 41. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 6C6 антитело или его вариант, описанные в патентной заявке США 11/304986 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45515, озаглавленной "Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид". 6 С 6 представляет собой mAb, которое специфически связывается с N-концевым эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-7. Клеточная линия, продуцирующая антитело 6 С 6, депонирована 1 ноября 2005 г. в АТСС по условиям Будапештского договора под регистрационным номером РТА-7200. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 2 Н 3 антитело, описанное в патентной заявке США 11/304986 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45515, озаглавленной "Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид." 2H3 представляет собойmAb, которое специфически связывается с N-концевым эпитопом, локализованным в человеческом-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 2-7. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой антитело 15 С 11 или его вариант, описанные в патентной заявке США 11/304986 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45515, озаглавленной "Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид." 15 С 11 представляет собой mAb, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 19-22.- 20015147 Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой антитело 266, описанное в опубликованной патентной заявке США 20050249725 А 1 и в опубликованной Международной патентной заявкеWO 01/62801 A2; антитело 266 представляет собой mAb, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 16-24. Клеточная линия, продуцирующая моноклональное антитело 266, депонирована в АТСС 20 июля 2004 г. по условиям Будапештского договора и имеет регистрационный номер РТА-6123. Примерами вариантных 266 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лгкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленныеSEQ ID NO: 42 или SEQ ID NO: 44, и гуманизированную тяжлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 45. Другими примерами вариантных 266 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную аминокислотную последовательность лгкой цепи, представленную как SEQ ID NO: 46, и гуманизированную аминокислотную последовательность тяжлой цепи, представленную как SEQ ID NO: 47. Такие вариантные антитела подробнее описаны в опубликованной патентной заявке США 20050249725 А 1 и в опубликованной Международной патентной заявке WO 01/62801 A2. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 2 В 1 антитело или его вариант, описанное в патентной заявке США 11/304986 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45515, озаглавленной "Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид"; 2 В 1 представляет собой mAb, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 19-23. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 1 С 2 антитело или его вариант, описанное в патентной заявке США 11/304986 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45515, озаглавленной "Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид"; 1 С 2 представляет собой mAb, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 16-23. Ещ в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 9G8 антитело или его вариант, описанное в патентной заявке США 11/304986 и в Международной патентной заявкеPCT/US05/45515, озаглавленной "Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид"; 9G8 представляет собой mAb, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом -амилоидном пептиде, конкретно с остатками 16-21. Клеточные линии, продуцирующие антитела 2 В 1, 1 С 2 и 9G8, депонированы 1 ноября 2005 г. в АТСС согласно Будапештскому договору под регистрационными номерами РТА-7202, РТА-7199 и РТА-7201 соответственно. Антитела, которые специфически связываются с С-концевыми эпитопами, локализованными в-амилоидном пептиде, для применения по настоящему изобретению включают, но без ограничения,369.2 В, описанное в патенте США 5786180, озаглавленном "Моноклональное антитело 369.2 В, специфическое кА 4 пептиду". Подробное описание антител для применения в настоящем изобретении можно найти, например, в Bussiere et al. (Am. J. Pathol. 165(3): 987-95 (2004; Bard et al. (PNAS, 100(4): 2023-8 (2003; Kajkowski et al. (J. Biol. Chem. 276(22): 18748-56 (2001; Games et al. (Arm. NY Acad. Sci. 920: 274-84 (2000; Bard et al. (Nat. Med. 6(8): 916-9 (2000 и в Международной патентной заявкеWO 03015691 A2, озаглавленной "Обеспечение быстрого улучшения познавательной способности у субъекта с болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна, церебральной амилоидной ангиопатией или умеренным когнитивным нарушением заключается во введении антитела против А бета". Более подробное описание фрагментов антитела для применения в настоящем изобретении можно найти, например, вBales et al. (Abstract P4-396, p. S587, представленном на постерной сессии Р 4: Therapeutics and TherapeuticStrategies-Therapeutic Strategies, Amyloid-Based) и Zameer et al. (Abstract P4-420, p. S593, представленном на постерной сессии Р 4: Therapeutics and Therapeutic Strategies-Therapeutic Strategies, Amyloid-Based). Антитела для применения в настоящем изобретении можно получать методами рекомбинантной ДНК или синтетическими методами. Например, антитело можно получать в культуре рекомбинантных клеток, используя, например, СНО клетки, NIH 3 Т 3 клетки, PER.C6 клетки, NS0 клетки, VERO клетки,фибробласты эмбрионов цыплят или BHK клетки. Кроме того, в настоящем изобретении рассматриваются антитела с минорными модификациями, которые сохраняют первичное функциональное свойство связывать А-пептид. В конкретном варианте изобретения антитело является гуманизированным антителом 3D6 против А-пептида, которое селективно связывает А-пептид. Более конкретно, гуманизированное антитело 3D6 против А-пептида создано для специфического связывания с NH2-концевым эпитопом,например аминокислотными остатками 1-5, локализованными в человеческом -амилоидном 1-40 или 1-42 пептиде, находящемся в бляшечных отложениях в мозге (например, в мозге пациентов, страдающих болезнью Альцгеймера).- 21015147 На фиг. 1 представлено схематическое изображение предсказанной структуры типичного гуманизированного антитела против А-пептида. Полные аминокислотные последовательности лгкой и тяжлой цепей h3D6v2, предсказанные исходя из ДНК последовательности соответствующих экспрессирующих векторов, показаны на фиг. 2 (где остатки нумеруются, начиная с остатка 1, с NH2-конца лгкой и тяжлой цепей) и в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 соответственно. Последний аминокислотный остаток, кодированный последовательностью ДНК тяжлой цепи, Lys449, не наблюдается в зрелой секретированной форме h3D6v2 и, не ограничиваясь какой-либо единственной теорией, следует отметить, что он, повидимому, удаляется во время внутриклеточного процессирования под действием СНО клеточных протеаз. Следовательно, СООН-конец тяжлой цепи h3D6v2, необязательно, представляет собой Gly448. Процессирование СООН-концевого лизина наблюдалось в рекомбинантных антителах и антителах из плазмы и, очевидно, не влияет на их функцию (Harris (1995), J. Chromatogr. A. 705: 129-134). Очищенноеh3D6v2 после трансляции модифицируют, добавляя N-связанные гликаны к Fc участку тяжлой цепи,как известно, содержащему единичный консенсусный сайт N-гликозилирования. СайтN-гликозилирования визуализирует три основные биантенные нейтральные олигосахаридные структуры,наблюдаемые обычно в аналогичном сайте N-гликозилирования IgG белков млекопитающих. Другим примером гуманизированного антитела против А-пептида является вариант 1 гуманизированного антитела 3D6 (hu3D6v1), имеющий последовательность, представленную на фиг. 2, за исключением замены DY в положении 1 лгкой цепи. В различных вариантах настоящего изобретения антитело против А (например, гуманизированное антитело 3D6 против А-пептида) присутствует в концентрации примерно 0,1-100 мг/мл, примерно 0,1-75 мг/мл, примерно 0,1-50 мг/мл, примерно 0,1-40 мг/мл, примерно 0,1-30 мг/мл, примерно 10-20 мг/мл, примерно 20-30 мг/мл или выше, например примерно вплоть до 100 мг/мл, примерно до 200 мг/мл, примерно до 500 мг/мл или около 1000 мг/мл или более. Предпочтительно антитело против А присутствует в концентрации около 17-23 мг/мл. В различных вариантах изобретения антитело против А присутствует в концентрации около 1, 2, 5, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 30 мг/мл. В конкретном варианте изобретения антитело (например, гуманизированное антитело 3D6 против А-пептида) присутствует в концентрации около 17 мг/мл. В другом конкретном варианте изобретения антитело (например, гуманизированное антитело 3D6 против А-пептида) присутствует в концентрации около 20 мг/мл. В другом конкретном варианте изобретения антитело (например, гуманизированное антитело 3D6 против А-пептида) присутствует в концентрации около 30 мг/мл. Предполагаются,что интервалы, промежуточные между вышеприведнными концентрациями, например около 12-17 мг/мл, также входят в объм настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы с комбинациями некоторых из вышеприведнных величин в качестве как верхнего, так и/или нижнего пределов. Эксципиенты. В различных вариантах настоящее изобретение предусматривает препарат, который может включать различные эксципиенты, включая, но без ограничения, буфер, антиоксидант, агент, регулирующий тоничность, и стабилизатор. Кроме того, препараты могут содержать дополнительный агент для корректировки рН (например, HCl) и разбавитель (например, воду). В другом варианте изобретения для корректировки рН можно использовать различные формы гистидина. Частично эксципиенты служат для поддержания стабильности и биологической активности антитела (например, за счт сохранения подходящей конформации белка) и/или для поддержания рН. Буферный агент. В различных аспектах настоящего изобретения препараты включают буферный агент (буфер). Буфер служит для поддержания физиологически приемлемого значения рН. Кроме того, буфер может служить для повышения изотоничности и химической устойчивости (стабильности) препарата. Как правило,препарат должен иметь физиологически приемлемое значение рН. В различных вариантах настоящего изобретения препарат имеет рН около 5-7, около 5,5-6,5, предпочтительно около 6,0-6,5. В конкретном варианте изобретения препарат имеет рН около 6,0. Предполагается также, что в объм изобретения входят интервалы, промежуточные между вышеприведнными уровнями рН, например около рН 5,2-6,3,предпочтительно 6,0 или 6,2. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Значение рН можно, при необходимости, корректировать известными в уровне техники методами. Например, при необходимости, для доведения рН до заданных уровней можно добавлять HCl или различные формы гистидина. Буфер может включать, но без ограничения, сукцинат (натрия или калия), гистидин, фосфат (натрия или калия), трис-(трис-(гидроксиметил)аминометан), диэтаноламин, цитрат, другие органические кислоты и их смеси. В предпочтительном варианте изобретения буфер представляет собой гистидин (например, L-гистидин). В другом конкретном варианте изобретения буфер представляет собой сукцинат. В другом варианте изобретения препарат включает аминокислоту, такую как гистидин, который присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН препарата. Гистидин- 22015147 является примером аминокислоты, обладающей буферной способностью в пределах физиологического значения рН. Буферными свойствами гистидин обязан своей имидазольной группе. В одном примере варианта изобретения буфером является L-гистидин (основание) (например, C6H9N3O2, М.в. 155.15). В другом варианте изобретения буфер представляет собой L-гистидин моногидрохлорид моногидрат (например, C6H9N3O2HClH2O, М.в. 209.63). В другом примере варианта изобретения буфер представляет собой смесь L-гистидина (основания) и L-гистидина моногидрохлорида моногидрата. В одном варианте изобретения концентрация буфера (например, L-гистидина или сукцината) составляет около 0,1-50 мМ, около 0,1-40 мМ, около 0,1-30 мМ, около 0,1-25 мМ, около 0,1-20 мМ или около 5-15 мМ, предпочтительно 5 или 10 мМ. В различных вариантах изобретения буфер может присутствовать в концентрации около 6, 7, 8, 9, 11, 12, 13, 14 или 15 мМ. В конкретном варианте изобретения буфер присутствует в примерной концентрации 10 мМ. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеуказанными концентрациями, например 12-17 мМ, являются частью данного изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. В некоторых вариантах изобретения буфер присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого значения рН. Агент, регулирующий тоничность. В различных аспектах настоящего изобретения препарат включает агент, регулирующий тоничность. Отчасти агент, регулирующий тоничность, способствует поддержанию изотоничности препарата и поддержанию уровней белка. Отчасти агент, регулирующий тоничность, способствует сохранению уровня, соотношения или доли терапевтически активного полипептида, присутствующего в препарате. Применяемый в данном описании термин "тоничность" относится к поведению биологических компонентов в жидкой среде или в растворе. Осмотическое давление изотонических растворов такое же, что и осмотическое давление плазмы крови, и, следовательно, их можно вливать внутривенно субъекту, не изменяя осмотического давления плазмы крови субъекта. Действительно, в одном варианте изобретения агент,регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для того, чтобы сделать препарат пригодным для внутривенного вливания (инфузии). Часто агент, регулирующий тоничность, служит также в качестве наполнителя. Собственно агент может способствовать тому, что белок преодолевает различные воздействия, такие как замораживание и сдвиг. Агент, регулирующий тоничность, может включать, но без ограничения, CaCl2, NaCl, MgCl2, лактозу, сорбит, сахарозу, маннит, трегалозу, раффинозу, полиэтиленгликоль, гидроксиэтил крахмал, глицин и их смеси. В предпочтительном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, представляет собой маннит (например, D-маннит, например, С 6 Н 14 О 6, М.в. 182.17). В одном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 2-6% вес./об. или примерно 3-5% вес./об. В другом варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 3,5-4,5% вес./об. В другом варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 20-60 мг/мл, примерно 30-50 мг/мл или примерно 35-45 мг/мл. Предпочтительно агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 4 или примерно 40 мг/мл. В другом конкретном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в примерной концентрации 6% вес./об. Ещ в одном конкретном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в примерной концентрации 10% вес./об. Также предполагается, что интервалы концентраций, промежуточные между вышеприведнными значениями, например около 3,2-4,3% вес./об. или 32-43 мг/мл, являются частью данного изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Агент, регулирующий тоничность, должен присутствовать в количестве, достаточном для поддержания тоничности препарата. Антиоксидант. В различных аспектах настоящего изобретения препарат включает антиоксидант таким образом,чтобы частично сохранить препарат (например, предупреждая окислением). Антиоксидант может включать, но без ограничения, GLA (гамма-линоленовую кислоту)-липоевую кислоту, DHA (докозагексаеновую кислоту)-липоевую кислоту, GLA-токоферол, ди-GLA-3,3'-тиодипропионовую кислоту и, как правило, любую из кислот, таких как GLA, DGLA (дигомо-гамма-линоленовая кислота), АА (арахидоновая кислота), SA (салициловая кислота), ЕРА (эйкозапентаеновая кислота) илиDHA (докозагексаеновая кислота) с любым природным или синтетическим антиоксидантом, с которым они могут быть связаны химической связью. Эти антиоксиданты включают фенольные антиоксиданты- 23015147 варианте изобретения антиоксидантом является аскорбиновая кислота. Предпочтительно антиоксидантом является метионин или его аналог, например селенометионин, гидроксиметилбутановая кислота,этионин или трифторметионин. В одном варианте изобретения антиоксидант (например, метионин, такой как L-метионин, например CH3SCH2CH2CH(NH2)CO2H, М.в. 149.21) присутствует в концентрации примерно 0,1-50 мМ, примерно 0,1-40 мМ, примерно 0,1-30 мМ, примерно 0,1-20 мМ или примерно 5-15 мМ. В различных вариантах изобретения антиоксидант может присутствовать в концентрации 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 мМ. Предпочтительно концентрация антиоксиданта составляет 10 мМ. В другом предпочтительном варианте изобретения концентрация антиоксиданта составляет 15 мМ. Предполагается, что интервалы,промежуточные между вышеприведнными концентрациями, например около 12-17 мМ, также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. В некоторых вариантах изобретения антиоксидант должен присутствовать в количестве, достаточном для сохранения препарата, частично за счт предупреждения окисления. Стабилизатор. В различных аспектах настоящего изобретения препарат включает стабилизатор, также известный как поверхностно-активное вещество (сурфактант). Стабилизаторы представляют собой химические соединения, которые взаимодействуют с биологическими молекулами и/или основными фармацевтическими эксципиентами в препарате и стабилизируют их. В некоторых вариантах изобретения стабилизаторы можно использовать в сочетании с пониженной температурой хранения. Стабилизаторы обычно защищают белок от влияния поверхности раздела воздух/раствор и раствор/поверхность, которое, иначе, могло вызвать агрегацию белка. Стабилизатор может включать, но без ограничения, глицерин, полисорбаты, такие как полисорбат 80, дикарбоновые кислоты, янтарная кислота, адипиновая кислота, фумаровая кислота, фталевая кислота и их комбинации. В предпочтительном варианте изобретения стабилизатором является полисорбат 80. В одном варианте изобретения концентрация стабилизатора (например, полисорбата 80) равна примерно 0,001-0,01% вес./об., примерно 0,001-0,009% вес./об. или примерно 0,003-0,007% вес./об. Предпочтительно концентрация стабилизатора равна примерно 0,005% вес./об. В другом конкретном варианте изобретения стабилизатор присутствует в примерной концентрации около 0,01% вес./об. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведнными концентрациями, например около 0,002-0,006% вес./об., также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Стабилизатор должен присутствовать в количестве, достаточном для стабилизации А-связывающего полипептида (например, антитела против А). Другие фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы, такие как носители, эксципиенты или стабилизаторы, описанные в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol,A. Ed. (1980), могут быть включены в состав препарата при условии, что они не оказывают вредного воздействия на заданные характеристики препарата. В конкретном варианте изобретения препарат практически не содержит консервантов, в то время как в альтернативных вариантах изобретения консерванты можно добавлять по мере необходимости. Например, криопротектанты или "лиопротектанты" (вещества,защищающие при лиофилизации) можно включать, например, если препарат будет лиофилизированным. В различных аспектах настоящего изобретения препараты, необязательно, включают некоторые или все описанные выше классы эксципиентов. В одном аспекте препараты по настоящему изобретению включают А-связывающий полипептид (например, антитело против А), маннит и гистидин. В конкретных вариантах изобретения препараты могут включать антиоксидант, такой как метионин, и/или стабилизатор, такой как полисорбат 80. В некоторых вариантах изобретения препарат имеет рН около 6,0. В другом аспекте препарат включает А-связывающий полипептид (например, антитело против А),маннит, гистидин и метионин. Ещ в одном аспекте препарат включает А-связывающий полипептид(например, антитело против А), маннит, гистидин, метионин и полисорбат 80. В конкретном аспекте изобретения препарат включает 20 мг/мл А-связывающего полипептида (например, антитела против А), около 10 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. В другом аспекте изобретения препарат включает 20 мг/мл А-связывающего полипептида (например, антитела против А), 10 мМ гистидина, 10 мМ метионина, 4% вес./об. маннита, 0,005% вес./об. полисорбата 80 и имеет рН около 6,0. Предпочтительный препарат включает около 17-23 мг/мл гуманизированного 3D6 антитела, около 10 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 5,5-6,5. Другой предпочтительный препарат включает около 10-30 мг/мл гуманизированного 266 антитела, около 10 мМ гистидина или сукцината, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита или сорбита и имеет рН около 5,5-6,5. Ещ один предпочтительный препарат включает около 10-30 мг/мл гуманизированного 12 А 11 антитела, около 5 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита или 150 мМ NaCl, и имеет рН около 5,5-6,5. Другой препарат стабилен по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев при температуре выше температуры замерзания,- 24015147 примерно до 10 С, имеет рН около 5,5-6,5 и включает по меньшей мере одно антитело против А в концентрации около 1-30 мг/мл, маннит в концентрации около 4% вес./об. или NaCl в концентрации около 150 мМ, около 5-10 мМ гистидина или сукцината и 10 мМ метионина. Предпочтительно препарат также включает полисорбат в концентрации около 0,001-0,01% вес./об. Примеры вариантов настоящего изобретения предусматривают концентрированные препараты А-связывающего полипептида (например, антитела против А), часто пригодного в качестве объмной лекарственной формы. Кроме того, примеры вариантов настоящего изобретения устойчивы к замораживанию, лиофилизации и/или реконституции (восстановлению). Кроме того, примеры вариантов настоящего изобретения стабильны по меньшей мере в течение примерно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17,18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 месяцев. В конкретных вариантах препараты по настоящему изобретению стабильны по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев, по меньшей мере около 18 месяцев, по меньшей мере около 24 месяцев или по меньшей мере около 30 месяцев. Согласно изобретению препарат может храниться при температурах примерно -80-40 С, примерно 0-25 С, примерно 0-15 С или примерно 0-10 С, предпочтительно примерно при 2-8 С. В различных вариантах изобретения препарат может храниться примерно при 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 С. В конкретном варианте изобретения препарат хранится примерно при 5 С. Как правило, препарат устойчив и сохраняет биологическую активность в этих интервалах. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведнными температурами, например около 2-17 С, также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Препараты по настоящему изобретению пригодны для доставки различными методами. В некоторых вариантах изобретения препарат вводят парентерально, например внутривенно или внутримышечно. Кроме того, можно направлять доставку препарата в мозг (например, таким образом, что антитело может проникать через гематоэнцефалический барьер) или цереброспинальную жидкость. В конкретном варианте изобретения препарат вводят внутривенно. Эффективные дозы препаратов по настоящему изобретению варьируются в зависимости от множества различных факторов, включая способы введения, нацеленный сайт, физиологическое состояние пациента, является пациент человеком или животным, другие вводимые лекарства и является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Обычно пациентом является человек, но можно также лечить нечеловеческих млекопитающих, включая трансгенных млекопитающих. Для оптимизации безопасности и эффективности необходимо титровать дозы. Типичные дозы для пассивной иммунизации с помощью антитела составляют примерно 0,0001-100 мг/кг, примерно 0,01-5 мг/кг, примерно 0,15-3 мг/кг, примерно 0,5-2 мг/кг, предпочтительно примерно 1-2 мг/кг массы тела хозяина. В некоторых типичных вариантах изобретения дозы могут быть около 0,5; 0,6; 0,7; 0,75; 0,8; 0,9; 1,0; 1,2; 1,25; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,75; 1,8; 1,9 или 2,0 мг/кг. Другие типичные дозы для пассивной иммунизации равны около 1-20 мг/кг. В некоторых примерах вариантов изобретения дозы могут быть около 5, 10, 15 или 20 мг/кг. Такие дозы можно вводить субъектам ежедневно,через день, еженедельно или по любой другой схеме, определнной эмпирическим анализом. Типичное лечение включает введение многократных доз в течение продолжительного периода, например по меньшей мере в течение 6 месяцев. Другие типичные схемы лечения включают введение один раз в две недели, или один раз в месяц, или один раз в 3-6 месяцев. Типичные схемы применения включают 1-10 мг/кг или 15 мг/кг ежедневно, 30 мг/кг через день или 60 мг/кг еженедельно. В некоторых способах два или более моноклональных антитела с различными специфичностями связывания вводят одновременно, в этом случае доза каждого вводимого антитела находится в указанных пределах. Антитело обычно вводят в виде многократных доз. Интервалы между единичными дозами могут составлять неделю, месяц или год. Интервалы могут также быть нерегулярными по показаниям уровней антитела к А в крови пациента. В некоторых способах дозу корректируют таким образом, чтобы достичь концентрации антитела в плазме 1-1000 мкг/мл, а в некоторых способах 25-300 мкг/мл. Или же, антитело можно вводить в виде препарата пролонгированного действия, в этом случае требуется реже вводить препарат. Доза и частота меняются в зависимости от периода полужизни антитела в организме пациента. Вообще, у человеческих антител наблюдается наиболее продолжительный период полужизни,затем идут гуманизированные антитела, химерные антитела и нечеловеческие антитела. Доза и частота введения могут меняться в зависимости от того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. При профилактическом применении препараты, содержащие настоящие антитела или их "коктейль", вводят пациенту ещ не на стадии заболевания с целью повышения сопротивляемости организма пациента. Такое количество определяется как "профилактически эффективная доза". При таком применении точные количества опять зависят от состояния здоровья пациента и общего иммунитета, но обычно находятся в интервале 0,1-0,25 мг на дозу, в основном 0,5-2,5 мг на дозу. Относительно низкую дозу вводят через относительно нечастые интервалы в течение продолжительного периода времени. Некоторые пациенты продолжают получать лечение всю оставшуюся жизнь.- 25015147 При некоторых терапевтических применениях требуются относительно высокие дозы (например, от около 0,5 или 1 до примерно 200 мг/кг антитела на дозу (например, 0,5, 1, 1,5, 2, 5, 10, 20, 25, 50 или 100 мг/кг), при этом чаще всего применяют дозы 5-25 мг/кг) через относительно короткие интервалы до уменьшения или прекращения прогрессирования заболевания и предпочтительно до тех пор, пока у пациента не будет наблюдаться частичное или полное уменьшение интенсивности симптомов заболевания. Затем пациенту можно назначать профилактический режим. Особенно предпочтительно создавать препараты по изобретению в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки. Препараты по изобретению могут быть в виде капсул, ампул, в лиофилизированном виде или в упаковке для многократного прима. Термин "контейнер" относится к чему-либо, например к держателю, резервуару (мкости) или сосуду, в который объект(изделие) или жидкость могут помещаться или содержаться, например, для хранения. Стандартная лекарственная форма может содержать любой препарат по данному описанию, включая суспензии, растворы и эмульсии активного ингредиента вместе с агентами, составляющими рецептуру, такими как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. В типичном варианте изобретения фармацевтическую стандартную лекарственную форму можно добавлять в мешок для внутривенного вливания(например, мешок на 50, 100, или 250, или 500 мл) с подходящим разбавителем, например стерильной апирогенной водой или физиологическим солевым раствором, перед тем как вводить е пациенту, например внутривенным вливанием. В случае некоторых фармацевтических стандартных лекарственных форм перед добавлением в мешок для внутривенной инфузии может потребоваться реконституция подходящим разбавителем, в особенности в случае лиофилизированных форм. В типичных вариантах изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма представляет собой контейнер, содержащий препарат по данному описанию. Например, контейнер может представлять собой стеклянную, типаI, ампулу (пробирку) на 10 мл. Обычно контейнер должен сохранять стерильность и стабильность препарата. Например, пробирка может быть закрыта латексной пробкой. Кроме того, в различных вариантах изобретения контейнер можно сделать таким образом, чтобы легко было извлечь около 100 мг препарата или активного ингредиента (например, для разового применения). Или же контейнер может применяться для больших количеств препарата или активного ингредиента, например около 10-5000 мг, около 100-1000 мг и около 100-500 мг, около 40-250 мг, около 60-80 мг, около 80-120 мг, около 120-160 мг или интервалы между ними, например около 100-200 мг. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведнными количествами, например около 25-195 мг, также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведнных значений в качестве верхних и/или нижних пределов. В конкретном варианте изобретения препарат часто поступает в виде жидкости в стандартной лекарственной форме. В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает набор, включающий фармацевтическую стандартную лекарственную форму (например, контейнер с препаратом по данному описанию) и инструкции по применению. Соответственно, контейнер и набор можно создать таким образом, чтобы обеспечить достаточное количество препарата для многократного применения. В различных вариантах изобретения набор может дополнительно содержать разбавитель. Разбавитель может включать эксципиенты, по отдельности или вместе. Например, разбавитель может включать модификатор тоничности, такой как маннит, буферный агент, такой как гистидин, стабилизатор, такой как полисорбат 80, антиоксидант,такой как метионин, и/или их комбинации. Разбавитель может содержать другие эксципиенты, например защитное средство при лиофилизации ("лиопротектант"), если специалист в данной области техники сочтт это необходимым. Дополнительные применимые варианты изобретения представлены в разделе "Сущность изобретения". Данное изобретение далее иллюстрируется с помощью примеров, которые не следует рассматривать как ограничивающие. Содержание всех ссылочных материалов, патентов и опубликованных патентных заявок, приводимых на всм протяжении данного описания, а также на фигурах, вводится в данное описание в качестве ссылки.- 26015147 Примеры Как правило, в практике применения настоящего изобретения, если не указано иначе, используют традиционные методы химии, молекулярной биологии, методы рекомбинантной ДНК, иммунологии (в частности, например, методы антител) и стандартные методы получения полипептидов. См., например,Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); AntibodyA Laboratory Manual, Harlow et al., C.S.H.L. Press, Pub. (1999); и Current Protocols in Molecular Biology,eds. Ausubel et al., John WileySons (1992). Пример I. Клонирование и экспрессия гуманизированного антитела против А. Примером антитела для препарата в соответствии со способами настоящего изобретения является 3D6. 3D6 mAb является специфическим к N-концу А-пептида, и было показано, что оно опосредует фагоцитоз (например, индуцируют фагоцитоз) амилоидной бляшки. 3D6 не распознат секретированныйAPP или полноразмерный APP, но детектирует только А вид с аминоконцевой аспарагиновой кислотой. Следовательно, 3D6 является специфическим в отношении конца антителом. Клеточная линия, обозначенная RB96 3D6.32.2.4, продуцирующая антитело 3D6, имеющая в АТСС регистрационный номер РТА-5130, депонирована 8 апреля 2003 г. Клонирование, характеристики и гуманизация 3D6 антитела описаны в опубликованной патентной заявке США 20030165496 A1. Коротко говоря, гуманизацию мышиного моноклонального антитела против А-пептида (обозначенного как m3D6) проводят, выделяя последовательности ДНК вариабельных областей лгкой и тяжлой цепей m3D6 (VL и VH) обратной транскрипцией-полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР, RT-PCR). На основании последовательностей ДНК VL и VH m3D6 идентифицируют гомологичные человеческие каркасные области. Чтобы гарантировать, что гуманизированное антитело сохраняет способность взаимодействовать с А-пептидным антигеном, в гуманизированной 3D6 последовательности сохраняют важные остатки мышиной VL и VH каркасной последовательности, чтобы сохранить общую структуру областей константного домена (CDR) применительно к человеческим последовательностям каппа лгкой цепи и IgG1 тяжлой цепи. Последовательности ДНК, кодирующие гуманизированные 3D6 VL и VH последовательности, идентифицированные этим способом (включая 5'-последовательность сигнального пептида и 3'-интронную последовательность в донорном сайте сплайсинга), получают отжигом синтезированных перекрывающих ДНК олигонуклеотидов с последующими ДНК-полимеразными реакциями достройки. Целостность каждой из гуманизированных последовательностей вариабельной области контролируют секвенированием ДНК. На фиг. 1 схематически представлена предсказанная структура гуманизированного антитела 3D6 против А-пептида, названного h3D6v2. На фиг. 2 определяются полные аминокислотные последовательности лгкой и тяжлой цепей h3D6v2. Гуманизированное антитело 3D6 экспрессируется трансфекцией линии клеток-хозяев яичников китайского хомячка (СНО) при использовании плазмид экспрессии, кодирующих гены лгкой и тяжлой цепей антитела против А. СНО клетки, экспрессирующие антитело, выделяют стандартными методами селекции лекарства с помощью метотрексата/амплификации гена. Отбирают клональную СНО клеточную линию, имеющую фенотипы с заданными продуктивностью и ростом, и применяют для установления экспрессирующей антитело линии клеток, используя химически определнную (с определнным химическим составом) среду, не содержащую компонентов животного или человеческого происхождения. Пример II. Получение лекарственного вещества гуманизированного антитела против A. Процесс получения полипептида начинается с оттаивания исходной культуры клональных клеток,устойчиво экспрессирующих антитело против А-пептида. Клетки культивируют в среде с определнным химическим составом, не содержащей животных или человеческих белков. Затем культуры выращивают и используют для инокуляции (внесения посевного материала) биореактора, который, в свою очередь, используют для инокуляции многократных циклов промышленного биореактора. Промышленный биореактор работает в режиме с периодической подпиткой. В конце производственного цикла "урожай" в кондиционированной среде осветляют микрофильтрацией, получая препарат для последующего процессинга. Процессы очистки состоят из стадий стандартной хроматографии с последующей фильтрацией. Очищенное антитело концентрируют ультрафильтрацией и диафильтрацией переводят в буфер для препарата, не содержащий полисорбат 80. Необязательно, полисорбат 80 (растительного происхождения) добавляют в пул ретентата после ультрафильтрации/диафильтрации с последующей фильтрацией для удерживания бактерий. Лекарственное вещество хранят в замороженном состоянии при -80 С и выдерживают для дальнейшей переработки в лекарственный продукт, включая стабилизированные жидкие препараты по данному описанию.- 27015147 Пример III. Приготовление препарата антитела и плацебо. Получают две партии лекарственного продукта антитела. Начальную партию получают смешением(компаундированием) лекарственного вещества с получением не содержащего животных и человеческих белков препарата, содержащего 20 мг активного вещества антитела против А-пептида на 1 мл, 10 мМ гистидина, 10 мМ метионина, 4% маннита, 0,005% полисорбата 80, рН 6. В асептических условиях пузырьки (ампулы) заполняют лекарственным продуктом, по 100 мг активного вещества антитела против А/пузырк (ампула). Пузырк (ампула) с конечным лекарственным продуктом не содержит консервантов и предполагается только для одноразового пользования. Вторую партию лекарственного продукта получают аналогично с применением буфера для препарата без полисорбата 80. Пример IV. Анализ стабильности препарата, содержащего и не содержащего полисорбат 80. Стабильность и в особенности физико-химическую целостность (такая как агрегация, дезамидирование, гидролиз и/или перегруппировка дисульфидной связи) препарата оценивают следующими общеизвестными в уровне техники методами: внешний вид; рН; концентрация белка (А 280); ELISA, отчасти,в качестве теста на биоактивность; электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата (SDS-PAGE), отчасти, в качестве теста на агрегацию; эксклюзионная (ситовая)-высокоэффективная жидкостная хроматография (SEC-ВЭЖХ), отчасти, в качестве теста на агрегацию и стабильность в целом; катионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография (СЕХ-ВЭЖХ), отчасти, в качестве теста на дезамидирование и стабильность в целом и пептидное картирование. Этими методами оценивают регенерацию и целостность препарата в условиях тестирования при различных температурах. Анализ внешнего вида препарата проводят для того, чтобы определить качество препарата в различные временные точки. Визуально анализируют прозрачность, цвет и присутствие (макро)частиц. Например, анализируют степень опалесценции в сравнении с эталонной суспензией. Анализ внешнего вида препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата являются годными после хранения при температурах -80, 5,25 и 40 С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. Проверку величины рН проводят для определения поддержания рН препарата в приемлемом интервале около 5,5-6,5. Анализ рН препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80,в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40 С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6,9 и 12 месяцев. В целом рН нигде не опускается ниже 5,8 и не превышает 6,2. Анализ концентрации белка с помощью А 280 осуществляют для определения поддержания концентрации белка в препарате в приемлемом интервале около 17-23 мг/мл. Анализ концентрации белка в препаратах, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40 С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением концентраций белка, немного превышающих 23 мг/мл в препарате, не содержащем полисорбата 80, при хранении при 5, 25 и 40 С во временной точке 3 месяца концентрация белка остатся в приемлемых пределах. Соответственно, анализ концентрации белка не показывает заметной потери белка, даже в условиях форсированного (ускоренного) режима, в особенности для препаратов с полисорбатом 80. Кроме того,не удатся продемонстрировать заметное изменение концентрации белка в зависимости от времени или температуры после начальной временной точки. Сохранение биологической активности проверяют, отчасти, методами ELISA. Биологическую активность анализируют в единицах связывания (BU)/мг, причм приемлемой активностью является 2500 BU/мг или 50% (т.е. 5000 BU/мг равно 100%). Анализ методом ELISA препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата в целом являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40 С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением биологической активности немного ниже 50% во временной точке 12 месяцев для обоих препаратов при хранении при 40 С биологическая активность в других случая остатся в приемлемых пределах.SEC-ВЭЖХ анализ проводят в качестве теста на агрегацию, чистоту и стабильность в целом. ЦиклыSEC-ВЭЖХ с применением в качестве подвижной фазы буфера, содержащего двухосновный фосфат натрия, показали, что препарат годен, если SEC-ВЭЖХ анализ определяет содержание IgG мономера 90%,при сравнении с высокомолекулярным продуктом и низкомолекулярным продуктом. SEC-ВЭЖХ анализ препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата в целом являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40 С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением процентного содержания мономера ниже 90% в обоих препаратах, хранившихся при 40 С,в каждой временной точке начиная с 6 месяцев и позже (где анализ выявляет по меньшей мере более 10% низкомолекулярного продукта в обоих препаратах в каждой временной точке) процентное содержание мономера в других случаях находится в приемлемых пределах. В целом SEC-ВЭЖХ анализ показы- 28015147 вает, что профили высокомолекулярных и низкомолекулярных соединений во времени отличаются в образцах, содержащих и не содержащих полисорбат 80, мономерная форма антитела в целом остатся постоянной, например во временной точке 12 месяцев, когда препарат хранится при 5 С. Анализ методом СЕХ-ВЭЖХ проводят в качестве теста на аминирование и стабильность в целом. Циклы СЕХ-ВЭЖХ с применением в качестве подвижной фазы буфера, содержащего NaCl, дают профиль элюции и время удерживания преобладающих пиков, которые анализируют как аналогичные или не аналогичные стандартным профилям эталонов. Анализ СЕХ-ВЭЖХ препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата в целом являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40 С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением профиля элюции и времени удерживания преобладающих пиков, не аналогичных эталонным пикам в обоих препаратах,хранившихся при 40 С, в каждой временной точке начиная с 3 месяцев и позже, преобладающие пики в других случаях аналогичны эталонным пикам. В целом анализ препаратов с полисорбатом 80, хранившихся при 5 С, позволяет сделать следующие особенно важные заключения: 1) опалесценция, рН, ELISA, СЕХ-ВЭЖХ, SEC-ВЭЖХ и SDS-PAGE анализы, все, показывают минимальные изменения в препарате через 9 месяцев; 2) препараты, хранившиеся при 5 С, выглядят скорее как эталонные образцы через 9 месяцев, нежели как "ускоренные" образцы; 3) пептидное картирование показывает изменения при 5 С; 4) тенденция, наблюдающаяся в данных SEC-ВЭЖХ при 5 С, позволяет прогнозировать стабильность в течение по меньшей мере 17,2 месяцев (см. фиг. 6), однако, если исключить изменчивость (вариабельность) колонки, прибора и буфера, данные позволяют предсказать стабильность более чем в течение 30 месяцев (см. фиг. 7). Кроме того, "ускоренные" образцы с полисорбатом 80, хранившиеся при 25 С, признаны годными через 9 месяцев (фиг. 4). Кроме того, анализ препаратов без полисорбата, хранившихся при 5 С, позволяет сделать следующие особенно важные заключения: 1) опалесценция, рН и ELISA анализы, все, показывают минимальные изменения в препарате через 9 месяцев; 2) результаты анализов методами СЕХ-ВЭЖХ и SDS-PAGE показывают данные, сравнимые с эталонными образцами или с контролем или с образцом, хранившимся при -80 С, во временной точке 9 месяцев; 3) анализ SEC-ВЭЖХ показывает минорные изменения через 9 месяцев, хотя более заметные изменения наблюдаются при повышенных ("ускоренных") температурах; 4) тенденция, наблюдающаяся в данных SEC-ВЭЖХ при 5 С, позволяет прогнозировать стабильность в течение по меньшей мере 18 месяцев, даже при вариабельности результатов анализа (см. фиг. 8). На фиг. 3-5 графически показаны прогнозы относительно сроков хранения препаратов (содержащих и не содержащих PS80), приготовленных по данному изобретению и хранящихся при 5, 25 и 40 С соответственно. В общем на фиг. 3-5 показано, что хранение препаратов по настоящему изобретению при повышенных температурах уменьшает предполагаемый срок хранения. На фиг. 3, в частности, показано,что препарат имеет предполагаемый срок хранения по меньшей мере 18 ч, когда препарат хранится при 5 С. Фиг. 4 показывает, что хранение препарата при комнатной температуре (25 С) может снижать срок хранения примерно до 12 месяцев. Далее, фиг. 5 показывает, что хранение препарата при 40 С может снижать срок хранения примерно до 4 месяцев. Пример V. Исследование стабильности при использовании метионина в качестве антиоксиданта Проводятся исследования по определению влияния метионина на сохранение стабильности антитела и препаратов антитела. Анализ методом SEC-ВЭЖХ проводят после 6 месяцев хранения при различных температурах на четырх образцах антитела (с применением IgG4 антитела против CD22): препарат антитела с 20 мМ сукцината при рН 6,0; препарат антитела с 20 мМ сукцината и 10 мМ метионина; препарат антитела с 20 мМ сукцината при 0,01% PS80 и препарат антитела с 20 мМ сукцината, 10 мМ метионина и 0,01% PS80. В целом результаты показывают, что метионин желаемым образом снижает образование высокомолекулярного продукта (HMW). Кроме того, метионин снижает зависимое от температуры повышение процентного содержания HMW (см. фиг. 10). Кроме того, исследование стабильности в зависимости от рН (при рН 5,8, 6,0 и 6,2) проводят через 6 месяцев хранения при различных температурах (5 и 40 С) на четырх следующих образцах антитела