Композиции, содержащие антитела против рецептора igf-1, и способы получения антител

КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА IGF-1, И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ Данное изобретение предлагает композиции, относящиеся к антителам против IGF-1R, и способы полученные этих антител. В отдельных вариантах изобретение относится к полностью человеческим, гуманизированным или химерным антителам против IGF-1R или человеческим антителам против IGF-1R, которые связывают человеческий IGF-1R, IGF-1R-связывающие фрагменты и дериваты таких антител и IGF-1R-связывающие полипептиды, включающие такие фрагменты. Другие варианты предлагают нуклеиновые кислоты, кодирующие такие антитела, фрагменты и дериваты антител и полипептиды, клетки, содержащие такие полинуклеотиды, способы получения таких антител, фрагментов и дериватов антител и полипептидов, и способы применения таких антител, фрагментов и дериватов антител и полипептидов, включая способы лечения или диагностирования субъектов с нарушениями или состояниями, связанными с IGF-1R. 015146 Ссылка на противопоставленную заявку Данная заявка заявляет право на преимущество, вытекающее из предварительной американской патентной заявки US Provisional Application Ser.60/638961, зарегистрированной 22 декабря 2004 г., приведенной в данном изобретении в качестве ссылки. Область изобретения Данная заявка предлагает композиции и способы, относящиеся к антителам против рецептора IGF-1. Предпосылки изобретения Инсулиноподобные факторы роста 1 и 2 (insulin-like growth factors, IGF-1 и IGF-2 соответственно) стимулируют дифференциацию и пролиферацию широкого множества разновидностей клеток млекопитающих. Оба IGF-1 и IGF-2 широко циркулируют в плазме по всему организму. Они оказывают влияния на клетки путем связывания и активации рецептора IGF-1 (IGF-1R). IGF-1R является членом семейства тирозинкиназных рецепторов фактора роста. Их аминокислотная последовательность приблизительно на 70% идентична последовательности инсулинового рецептора. Аномальные активности IGF-1, IGF-2 и/или IGF-1R связаны с рядом медицинских состояний,включая различные виды рака, дефекты роста (например, акромегалия, гигантизм и малый рост), псориаз, атеросклероз, гладкий мышечный рестеноз кровеносных сосудов после пластической операции на сосудах, диабет, микрососудистую пролиферацию, нейропатию, потерю мышечной массы и остеопороз. Краткое описание чертежей Фиг. 1 представляет нуклеотидные последовательности, кодирующие вариабельные области легкой цепи L1-L52 и вариабельные области тяжелой цепи H1-Н 52,фиг. 2 - аминокислотные последовательности вариабельных областей легкой цепи L1-L52. Указаны участки CDR и FR,фиг. 3 - аминокислотные последовательности вариабельных областей тяжелой цепи H1-Н 52. Указаны участки CDR и FR,фиг. 4 - аминокислотные последовательности CDR1 участков легкой цепи вариабельных областей легкой цепи L1-L52. Также представлены консенсусные последовательности для групп родственныхCDR последовательностей,фиг. 5 - аминокислотные последовательности CDR2 участков легкой цепи вариабельных областей легкой цепи L1-L52. Также представлены консенсусные последовательности для групп родственныхCDR последовательностей,фиг. 6 - аминокислотные последовательности CDR3 участков легкой цепи вариабельных областей легкой цепи L1-L52. Также представлены консенсусные последовательности для групп родственныхCDR последовательностей,фиг. 7 - аминокислотные последовательности CDR1 участков тяжелой цепи вариабельных областей тяжелой цепи H1-Н 52. Также представлены консенсусные последовательности для групп родственныхCDR последовательностей,фиг. 8 - аминокислотные последовательности CDR2 участков тяжелой цепи вариабельных областей тяжелой цепи H1-Н 52. Также представлены консенсусные последовательности для групп родственныхCDR последовательностей,фиг. 9 - аминокислотные последовательности CDR3 участков тяжелой цепи вариабельных областей тяжелой цепи H1-Н 52. Также представлены последовательности для групп родственных CDR последовательностей,фиг. 10 - аминокислотную последовательность внеклеточной области человеческого IGF-1R, слитой с Fc участком человеческого IgG1 (подчеркнуто), с промежуточным участком, расщепляемым каспазой-3(жирный шрифт),фиг. 11 - аминокислотную последовательность внеклеточной области человеческого инсулинового рецептора, слитой с Fc участком человеческого IgG1 (подчеркнуто),фиг. 12 - протеиновую последовательность внеклеточной области человеческого IGF-1R (включая сигнальный пептид), слитой в С-конце с авидином цыпленка. Инициирование met в IGF-1R ECD обозначает положение 1 на данной фигуре,фиг. 13 - полипептидную последовательность константной области легкой -цепи антитела человека и константной области тяжелой цепи антитела IgG1 человека,фиг. 14 - график, иллюстрирующий, что четыре отображающих фаг антитела связываются значительно лучше с IGF-1R-Fc молекулой, чем они связываются с Fc инсулинового рецептора или мышиным или крысиным Fc,фиг. 15 - кривые, иллюстрирующие способность некоторых антител конкурировать за связываниеIGF-1R с IGF-1 и IGF-2,фиг. 16 - кривые, иллюстрирующие способность некоторых антител ингибировать рост 32D hu IGF1R+IRS-1 клеток,фиг. 17 - кривые, иллюстрирующие способность некоторых антител ингибировать рост Balb/C 3T3-1 015146 Сущность изобретения В данном изобретении предлагается изолированный антигенсвязывающий протеин, включающий или a) CDR3 легкой цепи, содержащие последовательность, выбранную из группы, состоящей из i) CDR3 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR3 последовательности, выбранной из группы, состоящей изCDR3 последовательностей легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 6; ii) М X1 Х 2 Х 3 Х 4 Х 5 Р Х 6 Х 7; iii)Q Q Х 8 Х 9 Х 10 Х 11 Р Х 12 Т и iv) Q S Y X13 Х 14 Х 15 N X16 Х 17 X18; б) CDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательность, выбранную из группы, состоящей из i) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот изCDR3 последовательности, выбранной из группы, состоящей из CDR3 последовательностей тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9; ii) Х 19 Х 20 Х 21 Х 22 Х 23 Х 24 Х 25 Х 26 Х 27 F D I; iii) X28 X29 Х 30 X31 X32X33 X34 X35 Х 36 Х 37 Х 38 М D V; iv) D S S X39; или в) CDR3 последовательность легкой цепи (подпункта а) и CDR3 последовательность тяжелой цепи (подпункта б); где X1 - остаток глутамина или глутамата, Х 2 остаток аланина, глицина, треонина или серина, Х 3 - остаток лейцина, фенилаланина или треонина, X4 остаток глутамина, глутамата или гистидина, X5 - остаток треонина, метионина, триптофана или валина,Х 6 - остаток глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, пролина, фенилаланина, метионина, триптофана или цистеина, Х 7 - остаток треонина, аланина или серина, X8 - остаток аргинина, серина, лейцина или аланина, Х 9 - остаток аспарагина, серина или гистидина, Х 10 - остаток аспарагина или серина, Х 11 остаток триптофана, валина, тирозина, пролина или фенилаланина, X12 - остаток лейцина, тирозина или изолейцина, Х 13 - остаток аспартата или глутамина, Х 14 - остаток серина или пролина, X15 - остаток серина, тирозина, аспартата или аланина, X16 - остаток глутамина, аргинина, валина или триптофана, Х 17 остаток аргинина, валина, изолейцина или без остатка, X18 - остаток валина или без остатка, Х 19 - остаток глутамата или без остатка, Х 20 - остаток тирозина, глицина, серина или без остатка, Х 21 - остаток серина,аспарагина, триптофана, глутамата, аспартата или без остатка, Х 22 - остаток серина, аспартата, триптофана, аланина, аргинина, треонина, глутамина, лейцина, глутамата или без остатка, Х 23 - остаток серина,глицина, аспарагина, треонина, триптофана, валина, аланина или изолейцина, Х 24 - остаток аргинина,глутамина, тирозина, валина, аланина, глицина, серина, фенилаланина или триптофана, Х 25 - остаток аспарагина, лейцина, аспартата, треонина, триптофана, тирозина, валина, аланина или гистидина, Х 26 - остаток аспартата, серина, аспарагина или глутамина, Х 27 - остаток аланина или пролина, Х 28 - остаток аланина или без остатка, Х 29 - остаток глутамата, тирозина, глицина или без остатка, Х 30 - остаток аргинина,серина или без остатка, Х 31 - остаток глицина, аспартата, валина, серина или без остатка, Х 32 - остаток серина, аспартата, глицина или без остатка, Х 33 - остаток фенилаланина, аспартата, тирозина, глицина,серина, гистидина, триптофана или без остатка, Х 34 - остаток триптофана, аспартата, тирозина, серина или без остатка, Х 35 - остаток аспартата, глутамата, аргинина, серина, глицина, тирозина или триптофана,Х 36 - остаток тирозина, лизина, изолейцина, лейцина или фенилаланина, Х 37 - остаток тирозина, серина,фенилаланина, аспартата или глицина, Х 38 - остаток глицина, аспарагина или тирозина, Х 39 - остаток валина, глицина или серина, и данный антигенсвязывающий протеин специфически связывает человеческий IGF-1R. В одном варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего шести аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот изCDR2 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот изCDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот изCDR1 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот изCDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8; и е) CDR3 последовательности тяжелой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы,состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR2 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR1 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано-2 015146 на фиг. 8; и е) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из a) CDR1 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8; и е) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включаюет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из a) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот изCDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR3 последовательности легкой цепи L1L52, как показано на фиг. 6; в) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8; и г) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из a) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8 и г) CDR3 последовательности тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; и б)CDR2 последовательности тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает CDR1 последовательность L1-L52, как показано на фиг. 4. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает последовательность, выбранную из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи, выбранной из следующего перечня: i) RSSQSLLHSNGYNYLD; ii) RASQ(G/S)(I/V)(G/S)X(Y/F)L(A/N) и iii) RSSQS(L/I)XXXXX; б)CDR2 последовательности легкой цепи, выбранной из следующего перечня: i) LGSNRAS; ii) AASTLQS иiii) EDNXRPS; в) CDR1 последовательности тяжелой цепи, выбранной из следующего перечня: i)SSNWWS; ii) XYYWS и iii) SYAM(S/H); и г) CDR2 последовательности тяжелой цепи, выбранной из следующего перечня: i) (E/I)(I/V)(Y/N)(H/Y)SGST(N/Y)YNPSLKS и ii) XIS(G/S)SG(G/S)STYYADSVKG; где обозначения остатков аминокислот, заключенных в круглые скобки, определяют альтернативные остатки для того же самого положения в последовательности, каждый X независимо обозначает остаток любой аминокислоты и каждый Z независимо обозначает остаток глицина, аланина, валина, лейцина,изолейцина, пролина, фенилаланина, метионина, триптофана или цистеина. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает CDR3 последовательность тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает CDR3 последовательность тяжелой цепи, которая отличается прибавлением, заменой или удалением не более чем всего одной аминокислоты из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает CDR3 последовательность тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает две аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего шести аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR2 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR1 последовательности Н 1-Н 52,как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями,заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52,-3 015146 как показано на фиг. 8; и е) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает три аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего шести аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR2 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR1 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8; и е)CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает четыре аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего шести аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот изCDR2 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот изCDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот изCDR1 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот изCDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8 и е) CDR3 последовательности тяжелой цепи,которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает пять аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из а) CDR1 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями,заменами и/или удалениями не более чем всего шести аминокислот из CDR1 последовательности L1L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR2 последовательности L1L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательности легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR3 последовательности L1L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR1 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8; и е) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает а) CDR1 последовательность легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего шести аминокислот из CDR1 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 4; б) CDR2 последовательность легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR2 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 5; в) CDR3 последовательность легкой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR3 последовательности L1-L52, как показано на фиг. 6; г) CDR1 последовательность тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего двух аминокислот из CDR1 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 7; д) CDR2 последовательность тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего пяти аминокислот из CDR2 последовательности Н 1-Н 52, как показано на фиг. 8; и е) CDR3 последовательность тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами и/или удалениями не более чем всего четырех аминокислот из CDR3 последовательности Н 1-Н 52,как показано на фиг. 9. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) вариабельную область легкой цепи, состоящую из i) CDR1 последовательности легкой цепи, приведенной на фиг. 4; ii) CDR2 последовательности легкой цепи, приведенной на фиг. 5; и iii) CDR3 последовательности легкой цепи, приведенной на фиг. 6; б) вариабельную область тяжелой цепи, состоящую изi) CDR1 последовательности тяжелой цепи, приведенной на фиг. 7; ii) CDR2 последовательности тяже-4 015146 лой цепи, приведенной на фиг. 8; и iii) CDR3 последовательности тяжелой цепи, приведенной на фиг. 9; или в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или a) CDR1,CDR2 и CDR3 последовательности легкой цепи, каждая из которых идентична CDR1, CDR2 и CDR3 последовательностям, соответственно, той же последовательности вариабельной области легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из L1-L52; б) CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности тяжелой цепи,каждая из которых идентична CDR1, CDR2 и CDR3 последовательностям, соответственно, той же последовательности вариабельной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из Н 1-Н 52; или в)CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности легкой цепи (подпункта а) и CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности тяжелой цепи (подпункта б). В данном изобретении предлагается изолированный антигенсвязывающий протеин, включающий или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности,содержащей по меньшей мере 15 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области легкой цепи L1L52, как показано на фиг. 1; и iv) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, содержащего последовательность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей изi) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 15 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; и iv) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, содержащего последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; или в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б); где антигенсвязывающий протеин связывает человеческий IGF-1R. В одном варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 85% идентичной последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, содержащей по меньшей мере 25 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью,которая по меньшей мере на 85% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; и iv) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, содержащего последовательность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 85% идентичной последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; и) аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 25 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 85% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; и iv) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, содержащего последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; или в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 90% идентичной последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, содержащей по меньшей мере 35 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последователь-5 015146 ность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; и б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 90% идентичной последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 35 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52,как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична полинуклеотидной последовательности,кодирующей последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; или (в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, содержащей по меньшей мере 50 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; и б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 50 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; или (в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 97% идентичной последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, содержащей по меньшей мере 75 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 97% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; и б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности,по меньшей мере на 97% идентичной последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52,как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 75 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 97% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 1; или в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 99% идентичной последовательности вариабельной области легкой цепиL1-L52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, содержащей по меньшей мере 90 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 99% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 1; и б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 99% идентичной последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; ii) аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 90 остатков заменимых аминокислот последовательности вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 99% идентична полинуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельной области тяжелой цепи Н 1-Н 52,как показано на фиг. 1; или в) вариабельную область легкой цепи (подпункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает или а) последовательность вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из L1L52, как показано на фиг. 2; б) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из Н 1-Н 52, как показано на фиг. 3; или в) вариабельную область легкой цепи (под-6 015146 пункта а) и вариабельную область тяжелой цепи (подпункта б). В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает комбинацию вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7,L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18, L19H19,L20H20, L21H21, L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29, L30H30,L31H31, L32H32, L33H33, L34H34, L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40, L41H41,L42H42, L43H43, L44H44, L45H45, L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51 и L52H52. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин дополнительно включает а) последовательность константной области легкой -цепи, приведенную на фиг. 13; б) последовательность константной области тяжелой цепи IgG1, приведенную на фиг. 13; или в) последовательность константной области легкой -цепи, приведенную на фиг. 13, и последовательность константной области тяжелой цепи IgG1, приведенную на фиг. 13. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин при связывании с IGF-1R а) ингибирует IGF-1R; б) активирует IGF-1R; в) перекрестно конкурирует с контрольным антителом за связывание с IGF-1R; г) связывает тот же самый эпитопом IGF-1R, что и контрольное антитело; д) связывает IGF-1R практически с такой же Kd, что и контрольное антитело; е) связывает IGF-1R практически с такой же низкой скоростью, что и контрольное антитело; где данное контрольное антитело включает комбинацию последовательностей вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, выбранных из группы комбинаций, состоящих из L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6,L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18,L19H19, L20H20, L21H21, L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29,L30H30, L31H31, L32H32, L33H33, L34H34, L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40,L41H41, L42H42, L43H43, L44H44, L45H45, L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51 иL52H52. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин при связывании с человеческим IGF-1R ингибирует связывание IGF-1 и/или IGF-2 с данным человеческим IGF-1R. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин ингибирует рост раковой клетки более чем на 80% в присутствии стимулятора роста, выбранного из группы, состоящей из сыворотки, IGF-1 и IGF-2. В другом варианте раковая клетка является MCF-7 клеткой рака молочной железы человека. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин связывает человеческий IGF-1R с селективностью, которая по меньшей мере в 50 раз выше, чем селективность для инсулинового рецептора человека. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин ингибирует рост опухоли in vivo. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин ингибирует опосредованное IGF-1R фосфорилирование тирозина. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин специфически связывает IGF-1R примата, не принадлежащего человеческому роду: яванского макака, шимпанзе; млекопитающего, не принадлежащего к приматам: грызуна, мыши, крысы, хомяка, морской свинки, кошки или собаки. В другом варианте изолированный антигенсвязывающий протеин включает а) человеческое антитело; б) гуманизированное антитело; в) химерное антитело; г) моноклональное антитело; д) поликлональное антитело; е) рекомбинантное антитело; ж) фрагмент антигенсвязывающего антитела; з) одноцепочечное антитело; и) димер одноцепочечных антительных фракций; к) тример одноцепочечных антительных фракций; л) тетрамер одноцепочечных антительных фракций; м) Fab фрагмент; н) F(ab')2 фрагмент; о) домен-специфическое антитело; п) IgD антитело; р) IgE антитело; с) IgM антитело; т) IgG1 антитело; у) IgG2 антитело; ф) IgG3 антитело; х) IgG4 антитело; или ц) IgG4 антитело по меньшей мере с одной мутацией в шарнирной области, которая облегчает тенденцию образования дисульфидной связи внутри Н-цепи. В данном изобретении предлагается изолированный полинуклеотид, включающий последовательность, которая кодирует легкую цепь, тяжелую цепь или обе цепи антигенсвязывающего протеина. В другом варианте полинуклеотид включает последовательность вариабельной области легкой цепи нуклеиновой кислоты, приведенную на фиг. 1, и/или последовательность вариабельной области тяжелой цепи нуклеиновой кислоты, приведенную на фиг. 1. В другом варианте плазмида включает изолированный полинуклеотид. В другом варианте плазмида является экспрессирующим вектором. В другом варианте изолированная клетка включает полинуклеотид. В другом варианте хромосома клетки включает данный полинуклеотид. В другом варианте клетка является гибридомой. В другом варианте экспрессирующий вектор включает данный полинуклеотид. В другом варианте клетка является СНО клеткой(клеткой яичника китайского хомячка). В другом варианте данное изобретение предлагает способ получения антигенсвязывающего протеина, который связывает человеческий IGF-1R, включающий инкубирование изолированной клетки в условиях, которые позволяют экспрессировать антигенсвязывающий протеин. В данном изобретении предлагается фармацевтическая композиция, включающая антигенсвязывающий протеин. В другом варианте данное изобретение предлагает способ лечения состояния субъекта,включающий введение данному субъекту фармацевтической композиции, в котором состояние лечат уменьшением активности IGF-1R у субъекта. В другом варианте субъект - человек. В другом варианте состояние является миеломной болезнью, жидкой опухолью, раком печени, расстройством вилочковой-7 015146 железы, опосредованной Т-клетками аутоиммунной болезнью, эндокринологическим нарушением, ишемией или невродегенеративным расстройством. В другом варианте жидкая опухоль выбрана из группы,состоящей из острого лимфоидного лейкоза (acute lymphocytic leukemia, ALL) и хронического миелолейкоза (chronic myelogenous leukemia, CML); в котором рак печени выбран из группы, состоящей из гепатомы, печеночно-клеточного рака, холангиоцеллюлярного рака, ангиосаркомы, гемангиосаркомы, злокачественной опухоли из эмбриональных печеночных клеток; в котором расстройство вилочковой железы выбрано из группы, состоящей из тимомы и тиреоидита; в котором опосредованная Т-клетками аутоимунная болезнь выбрана из группы, состоящей из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, системной красной волчанки (systemic lupus erythematosus, SLE), болезни Грейвса, тиреоидита Хашимото, тяжелой миастении, аутоиммунного тиреоидита, болезни Бехчета; в котором эндокринологическое нарушение выбрано из группы, состоящей из диабета II типа, гипертиреоза, гипотиреоза, тиреоидита, гиперадренокортицизма и гипоадренокортицизма; в котором ишемия является ишемией после инфаркта миокарда или в котором невродегенеративное расстройство является болезнью Альцгеймера. В другом варианте состояние выбрано из группы, состоящей из акромегалии, рака мочевого пузыря, опухоли Вильмса,рака яичника, рака поджелудочной железы, доброкачественной гиперплазии предстательной железы,рака молочной железы, рака предстательной железы, рака костей, рака легкого, рака ободочной и прямой кишки, цервикального рака, синовиальной саркомы; диареи, связанной с метастатической карциноидной опухолью; опухолей, секретирующих вазоактивные кишечные пептиды, гигантизма, псориаза, атеросклероза, гладкого мышечного рестеноза кровеносных сосудов, неадекватной микрососудистой пролиферации, глиобластомы, медуллобластомы, сквамозного клеточного рака головы и шеи, рака рта, лейкоплакии рта, внутриэпителиальной неоплазии предстательной железы, рака прямой кишки, рака пищевода, рака желудка, костного рака, метастатического рака, истинной стойкой красной полицитемии, с окислительным стрессом связанного доброкачественного состояния, преждевременной ретинопатии, острого респираторного дистресс-синдрома, чрезмерной дозы ацетаминофена, бронхо-легочной дисплазии, муковисцидоза, фиброза легких и диабетической ретинопатии. В другом варианте способ дополнительно включает назначение субъекту второго лечения. В другом варианте второе лечение назначается субъекту до и/или одновременно с и/или после того, как фармацевтическая композиция вводится субъекту. В другом варианте второе лечение включает лучевую терапию, хирургическое вмешательство или вторую фармацевтическую композицию. В другом варианте вторая фармацевтическая композиция включает средство, выбранное из группы, состоящей из кортикостероида, противорвотного средства, ондансетрона гидрохлорида, гранисетрона гидрохлорида, метроклопрамида, домперидона, галоперидола, циклизина,лоразепама, прохлорперазина, дексаметазона, левомепромазина, трописетрона, противораковой вакцины; ингибирующего GM-CSF средства; GM-CSF ДНК вакцины; клеточной вакцины, дендритной клеточной вакцины, рекомбинантной противовирусной вакцины, вакцины на основе белков теплового шока (heatVEGF, антитела против рецептора VEGF, растворимого фрагмента рецептора VEGF, антитела противTWEAK, антитела против рецептора TWEAK, растворимого фрагмента рецептора TWEAK, AMG 706,AMG 386, антипролиферативного средства, ингибитора фарнезилпротеинтрансферазы, v3 ингибитора,v5 ингибитора, р 53 ингибитора, ингибитора Kit рецептора, ингибитора ret рецептора, PDGFR ингибитора, ингибитора секреции гормона роста, ингибитора ангиопоэтина; опухоли, инфильтрирующей макрофаг-ингибирующий агент; c-fms ингибирующего средства, антитела против c-fms, CSF-1 ингибирующего средства, антитела против CSF-1, растворимого фрагмента c-fms, пегвисоманта, гемцитабина, панитумумаба, иринотекана и SN-38. В другом варианте способ включает назначение субъекту третьего лечения. В другом варианте состояние является раком, второе лечение включает введение панитумумаба и третье лечение включает введение гемцитабина. В другом варианте состояние выбрано из группы, состоящей из акромегалии, рака мочевого пузыря, опухоли Вильмса, рака яичника, рака поджелудочной железы, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака костей, рака легкого, рака ободочной и прямой кишки, цервикального рака, синовиальной саркомы; диареи, связанной с метастатической карциноидной опухолью; опухолей, секретирующих вазоактивные кишечные пептиды, гигантизма, псориаза, атеросклероза, гладкого мышечного рестеноза кровеносных сосудов, неадекватной микрососудистой пролиферации, глиобластомы, медуллобластомы, сквамозного клеточного рака головы и шеи, рака рта, лейкоплакии рта, внутриэпителиальной неоплазии предстательной железы, рака прямой кишки, рака пищевода, рака желудка, костного рака,метастатического рака, истинной стойкой красной полицитемии, связанного с окислительным стрессом доброкачественного состояния, преждевременной ретинопатии, острого респираторного дистресссиндрома, чрезмерной дозы ацетаминофена, бронхо-легочной дисплазии, муковисцидоза, фиброза легких и диабетической ретинопатии. В данном изобретении предлагается способ увеличения продолжительности жизни субъекта, включающий введение данному субъекту фармацевтической композиции.-8 015146 В данном изобретении предлагается способ уменьшения активности IGF-1R у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение данному субъекту фармацевтической композиции. В данном изобретении предлагается способ уменьшения передачи сигнала IGF-1R у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту фармацевтической композиции. В данном изобретении предлагается способ ингибирования связывания IGF-1 и/или IGF-2 с IGF-1R у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту фармацевтической композиции. Подробное описание изобретения Данное изобретение предлагает композиции, комплекты и способы, относящиеся к молекулам, которые связывают рецептор инсулиноподобного фактора роста (insulin-like growth factor receptor, IGF-1R),включая молекулы, которые агонизируют или антагонизируют IGF-1R, такие как антитела против IGF1R, фрагменты антител и дериваты антител, например антагонистические антитела против IGF-1R, фрагменты антител или дериваты антител. Также предлагаются нуклеиновые кислоты и их дериваты и фрагменты, включающие нуклеотидную последовательность, которая кодирует весь полипептид или часть его, которая связывает IGF-1R, например нуклеиновая кислота, кодирующая все антитело против IGF-1R или его часть, фрагмент антитела или дериват антитела; плазмиды и векторы, включающие такие нуклеиновые кислоты, и клетки или клеточные линии, включающие такие нуклеиновые кислоты и/или векторы и плазмиды. Предлагаемые способы включают, например, способы получения, идентификации или изолирования молекул, которые связывают IGF-1R, такие как антитела против IGF-1R, способы определения связывает ли молекула IGF-1R, способы определения агонизирует ли или антагонизирует ли молекула IGF-1R, способы получения композиций, как, например, фармацевтических композиций, включающих молекулу, которая связывает IGF-1R, и способы введения молекулы, которая связывает IGF-1R,субъекту, например способы лечения опосредованного IGF-1R состояния и для агонизирования и антагонизирования биологической активности IGF-1R, IGF-1 и/или IGF-2 in vivo или in vitro. Полинуклеотидные и полипептидные последовательности указываются с применением стандартных одно- или трехбуквенных сокращений. Если не указано особо, полипептидные последовательности имеют аминоконцевые группы слева и карбоксиконцевые группы справа и последовательности одноцепочечной нуклеиновой кислоты и последовательности верхней цепи двуцепочечной нуклеиновой кислоты имеют их 5'-концы слева и их 3'-концы справа. Отдельную полипептидную или полинуклеотидную последовательность также можно описать, объяснив, как она отличается от контрольной последовательности. Полипептидные или полинуклеотидные последовательности отдельных вариабельных областей легкой и тяжелой цепей приведены на фиг. 1, 2 и 3, где они маркированы, например L1 ("вариабельная область 1 легкой цепи"), H1 ("вариабельная область 1 тяжелой цепи") и т.д. Антитела, включающие легкую цепь и тяжелую цепь из фиг. 2 и 3, обозначаются путем комбинирования названий вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи. Например, "L4H7" обозначает антитело, включающее вариабельную область легкой цепи L4 и вариабельную область тяжелой цепи Н 7. Если не указано особо, научные и технические термины, применяемые в связи с данным изобретением, будут иметь значения, которые обычно понятны специалистам данной области. Кроме того, если особо не требуется по контексту, единичные термины должны включать множества и множественные термины должны включать единичные. Обычно номенклатуры и технические приемы, применяемые в связи с клеткой и культурой клетки, молекулярной биологией, иммунологией, микробиологией, генетикой, химией белка и нуклеиновых кислот и гибридизацией, описанные в данном изобретении, общеизвестны и обычно применимы в данной области. Способы и технические приемы, описанные в данном изобретении, обычно осуществляются согласно стандартным способам, общеизвестным в данной области техники, как описано в различных общих или более специфических ссылках, которые цитируются и обсуждаются повсюду в данном изобретении, если не указано особо. См., например, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual., 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,N.Y. (1990), которые включены в данное изобретение в качестве ссылки. Ферментативные реакции и способы очистки осуществляются в соответствии с техническими требованиями производителей, которые обычно выполнимы в данной области или как описано в данном изобретении. Терминология, лабораторные методики и технические приемы, применяемые в связи с аналитической химией, синтетической органической химией, медицинской и фармацевтической химией, описанные в данном изобретении,общеизвестны и обычно применимы в данной области. Стандартные технические приемы можно применять для химического синтеза, химического анализа, фармацевтического препарата, состава и доставки и лечения больных. Следующие термины, если не указано особо, имеют следующие значения. Термин "изолированная молекула" (где молекула представляет собой, например, полипептид, полинуклеотид или антитело) является молекулой, которая благодаря ее происхождению или источнику возникновения (1) не связывается с естественно связанными компонентами, которые сопутствуют ей в ее нативном состоянии, (2) практически не содержит других молекул той же разновидности, (3) экспресси-9 015146 руется клетками из других разновидностей или (4) не встречается в природе. Таким образом, молекула,которая химически синтезируется или синтезируется в клеточной системе, отличной от клетки, из которой она естественно происходит, будет "изолированной" от ее естественно связанных компонентов. Молекула также может оказаться практически без естественно связанных компонентов путем изолирования с применением общеизвестных в данной области техники методов очистки. Степень чистоты молекулы или ее однородность можно проанализировать с помощью ряда общеизвестных в данной области техники способов. Например, степень чистоты образца полипептида можно проанализировать с применением электрофореза в полиакриламидном геле и окрашиванием геля, чтобы сделать видимым полипептид,применяя общеизвестные в данной области техники методы. Для некоторых целей более высокое разрешение может обеспечиваться путем применения ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография high performance liquid chromatography, HPLC) или других общеизвестных в данной области техники способов очистки. Термины "ингибитор IGF-1R" и "антагонист IGF-1R" применяют взаимозаменяемо. Каждый представляет собой молекулу, которая заметно ингибирует по меньшей мере одну функцию IGF-1R. Наоборот, "агонист IGF-1R" представляет собой молекулу, которая заметно увеличивает по меньшей мере одну функцию IGF-1R. Ингибирование, вызванное ингибитором IGF-1R, не должно заканчиваться до тех пор,пока его обнаруживают с помощью анализа. Может применяться любой анализ функции IGF-1R, примеры которых приводятся в данном изобретении. Примеры функций IGF-1R, которые могут ингибироваться ингибитором IGF-1R или увеличиваться агонистом IGF-1R, включают связывание с IGF-1, IGF-12 и/или с другой IGF-1R-активирующей молекулой, киназную активность, передачу сигнала в прямом направлении и т.д. Примеры представителей ингибиторов IGF-1R и агонистов IGF-1R включают IGF-1R связывающие полипептиды, такие как антигенсвязывающие протеины (например, IGF-1R ингибирующие антигенсвязывающие протеины), антитела, фрагменты антител и дериваты антител, но выбор ими не ограничивается. Каждый из терминов "пептид," "полипептид" и "протеин" относится к молекуле, включающей два или несколько аминокислотных остатков, связанных друг с другом с помощью пептидных связей. Данные термины включают в себя, например, нативные или искусственные протеины, фрагменты протеинов и полипептидные аналоги (такие как мутеины, варианты и слитые белки) протеиновой последовательности, а также посттрансляционно или же ковалентно или нековалентно модифицированные протеины. Пептид, полипептид или протеин может быть мономерным или полимерным. Термин "полипептидный фрагмент", как применяется в данном изобретении, относится к полипептиду, который имеет аминоконцевую и/или карбоксиконцевую делецию по сравнению с соответствующим непроцессированным протеином. Фрагменты могут иметь по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 20, 50, 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот в цепи. Фрагменты также могут иметь, например, самое большое 1000, 750, 500, 250, 200, 175, 150, 125, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 14, 13, 12,11 или 10 аминокислот в цепи. На каждом из двух или на обоих концах фрагмент может дополнительно включать одну или несколько дополнительных аминокислот, например аминокислотную последовательность из другого встречающегося в природе протеина (например, Fc или область с лейциновой "застежкой") или искусственную аминокислотную последовательность (например, искусственная линкерная последовательность). Полипептиды, описанные в изобретении, включают полипептиды, которые были модифицированы любым путем и по любой причине, например, для (1) уменьшения восприимчивости к протеолизу, (2) уменьшения восприимчивости к окислению, (3) изменения аффинности связывания для образования протеинового комплекса, (4) изменений аффинностей связывания и (4) придания или модификации других физико-химических или функциональных свойств. Аналоги включают мутеины полипептида. Например, единственную или множественные замены аминокислот (например, консервативные замены аминокислот) можно произвести во встречающейся в природе последовательности (например, в части полипептида вне области(ей), образующей(их) межмолекулярные контакты). "Консервативная замена аминокислоты" является заменой, которая существенно не изменяет структурные характеристики родительской последовательности (например, замена аминокислоты не должна стремиться разрушить спираль, которая встречается в родительской последовательности, или разрушить другие виды вторичной структуры, которые характеризуют родительскую последовательность или необходимы для совокупности функциональных характеристик). Примеры принятых в данной области техники вторичных и третичных структур полипептидов описываются в монографиях: Proteins, Structures and Molecular Principles,Creighton, Ed., W.H. Freeman and Company, New York (1984); Introduction to Protein Structure, C. Branden(1991), которые приведены в данном изобретении в качестве ссылки. Данное изобретение также предлагает непептидные аналоги IGF-1R связывающих полипептидов. Непептидные аналоги обычно применяются в фармацевтической промышленности в качестве лекарственных препаратов со свойствами, аналогичными свойствам модельного пептида. Данные представители непептидного соединения называются "пептидными миметиками" или "пептидомиметиками". Fauchere,J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber, Freidinger TINS p.392 (1985); и Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229(1987), которые приведены в данном изобретении в качестве ссылки. Пептидные миметики, которые в структурном отношении подобны терапевтически применяемым пептидам, могут использоваться для получения эквивалентного терапевтического или профилактического эффекта. Обычно пептидомиметики в структурном отношении подобны парадигмальному полипептиду (т.е. полипептид, который имеет нужное биохимическое свойство или фармакологическую активность), как, например, человеческое антитело, но имеют одну или несколько пептидных связей, возможно замененных связью, выбранной из группы, состоящей из -CH2NH-, -CH2S-, -СН 2-СН 2-, -СН=СН- (цис и транс), -СОСН 2-, -СН(ОН)СН 2- и-CH2SO-, с помощью общеизвестных в данной области способов. Для генерирования более стабильных пептидов может также применяться систематическая замена одной или нескольких аминокислот консенсусной последовательности на D-аминокислоту того же самого типа (например, D-лизин вместо Lлизина). Кроме того, ограниченный набор пептидов, включающих консенсусную последовательность или вариацию, практически идентичную консенсусной последовательности, можно генерировать с помощью общеизвестных в данной области методов (Rizo, Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992), приведенной в данном изобретении в качестве ссылки), например, путем прибавления внутренних остатков цистеина, способных к образованию внутримолекулярных дисульфидных мостиков, которые циклизуют пептид."Вариант" полипептида (например, антитело) включает аминокислотную последовательность, в которой один или несколько аминокислотных остатков вставляются в аминокислотную последовательность, удаляются из нее и/или заменяются в аминокислотной последовательности относительно другой полипептидной последовательности. Варианты, описанные в изобретении, включают слитые протеины."Дериват" полипептида представляет полипептид (например, антитело), который был химически модифицирован, например, путем конъюгирования с другим химическим остатком, таким как полиэтиленгликоль, альбумин (например, человеческий сывороточный альбумин), путем фосфорилирования и гликозилирования. Если не указано особо, термин "антитело" включает кроме антител, содержащих две первичные тяжелые цепи и две первичные легкие цепи, дериваты, варианты, фрагменты и мутеины его,примеры которых приводятся ниже."Антигенсвязывающий протеин" представляет протеин, включающий часть, которая связывает антиген и, возможно, остов или каркасный остаток, позволяющий антигенсвязывающей части принимать конформацию, которая способствует связыванию антигенсвязывающего протеина с антигеном. Примеры антигенсвязывающих протеинов включают антитела, фрагменты антител (например, антигенсвязывающая часть антитела), дериваты антител и аналоги антител. Антигенсвязывающий протеин может включать, например, альтернативный протеиновый остов или искусственный остов с трансплантационнымиCDRs или CDR дериватами. Такие остовы включают остовы, полученные из антитела, включающие мутации, введенные, например, для стабилизации трехмерной структуры антигенсвязывающего протеина, а также полностью синтетические остовы, включающие, например, биосовместимый полимер, но выбор ими не ограничивается. См., например, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654. Кроме того, могут применяться пептидные миметики антитела (peptide antibody mimetics, PAMs), а также остовы, основанные на миметиках антитела, использующие компоненты фибронектина в качестве остова. Антигенсвязывающий протеин может иметь, например, структуру встречающегося в природе иммуноглобулина. Иммуноглобулин является тетрамерной молекулой. Во встречающемся в природе иммуноглобулине каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара имеет одну "легкую" (приблизительно 25 кДа) и одну "тяжелую" цепь (приблизительно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи включает вариабельную область приблизительно из 100-110 или более аминокислот, главным образом, ответственную за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи определяет константную область, главным образом, ответственную за эффекторную функцию. Легкие цепи иммуноглобулина человека классифицируются какилегкие цепи. Тяжелые цепи классифицируются как , , ,илии определяют изотипы антител как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области соединяются J областью из 12 или более аминокислот, в случае тяжелой цепи также включающей D область из 10 и более аминокислот. См., в основном, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2 nd ed. Raven Press, N.Y. (1989 (полностью включенная в качестве ссылки). Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепи образуют антигенсвязывающий центр, так что интактный иммуноглобулин имеет два связывающих центра. Цепи встречающегося в природе иммуноглобулина показывают одинаковую общую структуру относительно консервативных каркасных областей (framework region, FR), соединенных тремя гипервариабельными участками, также названными участками, определяющими комплементарность или CDRs(complementarity determining region, CDR). От N-концов до С-концов как легкие, так и тяжелые цепи включают области FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Распределение аминокислот к каждой области находится в соответствии с определениями Кабата с сотр. in Sequences of Proteins of Immunological"Антитело" относится к интактному иммуноглобулину или к антигенсвязывающей части его, кото- 11015146 рая, если не указано особо, конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание. Антигенсвязывающие части могут продуцироваться методами рекомбинантных ДНК или ферментативным или химическим расщеплением интактных антител. Антигенсвязывающие части включают, между прочим,Fab, Fab', F(ab')2, Fv, домен-специфические антитела (domain antibody, dAb) и фрагменты гипервариабельного участка (complementarity determining region, CDR), одноцепочечные антитела (single-chain antibodies, scFv), химерные антитела, димеры одноцепочечных антительных фракций, тримеры одноцепочечных антительных фракций, тетрамеры одноцепочечных антительных фракций и полипептиды, которые содержат по меньшей мере часть иммуноглобулина, которая достаточна для получения специфического антигенного связывания с полипептидом.Fab фрагмент является одновалентным фрагментом с VL, VH, CL и CH1 областями; F(ab')2 фрагмент является двухвалентным фрагментом с двумя Fab фрагментами, связанными дисульфидным мостиком в шарнирной области; Fd фрагмент имеет VH и CH1 области; Fv фрагмент имеет VL и VH области одного плеча антитела; и dAb фрагмент имеет VH область, VL область или антигенсвязывающий фрагмент VH или VL области (US Pat.6846634, 6696245, US App. Pub.05/0202512, 04/0202995, 04/0038291,04/0009507, 03/0039958, Ward et al., Nature 341:544-546, 1989). Одноцепочечное антитело (scFv) является антителом, в котором VL и VH области соединяются через линкер (например, синтетическая (искусственная) последовательность аминокислотных остатков) с образованием непрерывной протеиновой цепи, в которой линкер имеет достаточную длину, чтобы дать возможность протеиновой цепи отогнуться в обратную сторону и образовать одновалентный антигенсвязывающий центр (см., например, Bird et al., 1988, Science 242:423-26 и Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad.Sci. USA 85:5879-83). Димеры одноцепочечных антительных фракций являются двухвалентными антителами, включающими две полипептидные цепи, в которых каждая полипептидная цепь включает VH и VL области, соединенные линкером, который является слишком коротким, чтобы допустить спаривание между двумя областями на одной и той же цепи, таким образом, позволяя каждой области образовать пару с комплементарной областью на другой полипептидной цепи (см., например, Holliger et al., 1993, Proc.Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, and Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-23). Если две полипептидные цепи димера одноцепочечных антительных фракций идентичны, тогда димер одноцепочечных антительных фракций, являющийся результатом спаривания, будет иметь два идентичных антигенсвязывающих центра. Для получения димера одноцепочечных антительных фракций с двумя различными антигенсвязывающими центрами могут применяться полипептидные цепи, имеющие различные последовательности. Подобным же образом тример одноцепочечных антительных фракций и тетрамер одноцепочечных антительных фракций являются антителами, включающими три и четыре полипептидные цепи соответственно и образующими соответственно три и четыре антигенсвязывающих центра, которые могут быть одинаковыми или разными. Комплементарностьопределяющие области (гипервариабельные участки) (CDRs) и каркасные области (FR) данного антитела могут идентифицироваться с применением системы, описанной Кабатом с сотр. in Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services,PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991. Одна или несколько CDRs могут или ковалентно, или нековалентно внедряться в молекулу с получением антигенсвязывающего протеина. Антигенсвязывающий протеин может внедрить CDR(s) в виде части большей полипептидной цепи, может ковалентно соединить CDR(s) с другой полипептидной цепью или может внедрить CDR(s) нековалентно. CDRs позволяет антигенсвязывающему протеину специфически связывать отдельный представляющий интерес антиген. Антигенсвязывающий протеин может иметь один или несколько связывающих центров. Если имеется более одного связывающего центра, связывающие центры могут быть идентичными друг другу или могут быть разными. Например, встречающийся в природе иммуноглобулин человека обычно имеет два идентичных связывающих центра, в то время как "биспецифическое" или "гетеровалентное" антитело имеет два разных связывающих центра. Термин "человеческое антитело" включает все антитела, которые имеют одну или несколько вариабельных и константных областей, полученных из последовательностей иммуноглобулина человека. В одном варианте все вариабельные и константные области получают из последовательностей иммуноглобулина человека (полностью человеческое антитело). Данные антитела можно приготовить целым рядом способов, примеры которых описываются ниже, включая иммунизацию с представляющим интерес антигеном мыши, который генетически модифицирован для экспрессии антител, полученных из генов, кодирующих человеческую тяжелую и/или легкую цепь. Гуманизированное антитело имеет последовательность, которая отличается от последовательности антитела, полученного из не принадлежащего человеческому роду вида, путем замены, удаления и/или прибавления одной или нескольких аминокислот, так что гуманизированное антитело является менее вероятным для индуцирования иммунного ответа и/или индуцирует менее сильный иммунный ответ по сравнению с не принадлежащим человеческому роду антителом при введении его человеку. В одном варианте определенные аминокислоты в каркасных и константных областях тяжелых и/или легких цепей антитела, не принадлежащего человеческому роду, мутируются с получением гуманизированного антитела. В другом варианте константная(ые) область(и) от человеческого антитела сливается(ются) с вариа- 12015146 бельной(ными) областью(тями), не принадлежащей человеческому роду. В другом варианте один или несколько аминокислотных остатков в одной или нескольких CDR последовательностях не принадлежащего человеческому роду антитела изменяются для уменьшения вероятной иммуногенности не принадлежащего человеческому роду антитела при введении его человеку, в котором измененные аминокислотные остатки или являются некритическими для иммуноспецифического связывания антитела с его антигеном, или изменения для аминокислотной последовательности, которые сделаны, являются консервативными изменениями, так что связывание гуманизированного антитела с антигеном существенно хуже, чем связывание не принадлежащего человеческому роду антитела с антигеном. Примеры того, как получить гуманизированные антитела, можно найти в патентах США U.S. Pat.6054297, 5886152 и 5877293."Химерное антитело" относится к антителу, которое содержит одну или несколько областей от одного антитела и одну или несколько областей от другого или нескольких других антител. В одном варианте одну или несколько CDRs получают из человеческого антитела против IGF-1R. В другом варианте все CDRs получают из человеческого антитела против IGF-1R. В другом варианте CDRs из более чем одного человеческого антитела против IGF-1R смешивают и совмещают в химерном антителе. Например, химерное антитело может включать CDR1 от легкой цепи первого человеческого антитела противIGF-1R, CDR2 и CDR3 от легкой цепи второго человеческого антитела против IGF-1R и CDRs из тяжелой цепи от третьего антитела против IGF-1R. Кроме того, каркасные области можно получить из одних одинаковых антител против IGF-1R, из одного или нескольких различных антител, таких как человеческое антитело, или из гуманизированного антитела. В одном примере химерного антитела часть тяжелой и/или легкой цепи идентична, гомологична или получена из антитела от отдельного вида, или принадлежит к антителу отдельного класса или подкласса, в то время как оставшаяся(иеся) цепь(и) идентична(ы),гомологична(ы) или получена(ы) из антитела(л) от другого вида, или принадлежит другому классу или подклассу антитела. Также включенными являются фрагменты таких антител, которые проявляют нужную биологическую активность (т.е. способность специфически связывать IGF-1R). См., например, патент США U.S. Patent4816567 и работу Morrison, 1985, Science 229:1202-07."Нейтрализующее антитело" или "ингибиторное антитело" является антителом, которое ингибирует связывание IGF-1R с IGF-1 и/или IGF-2, если избыток антитела против IGF-1R уменьшает количествоIGF-1 и/или IGF-2, связанного с IGF-1R, по меньшей мере приблизительно на 20% с применением анализа, описанного в примере 9. В различных вариантах антитело уменьшает количество IGF-1 и/или IGF-2,связанного с IGF-1R по меньшей мере на 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99 и 99,9%."Активирующее антитело" является антителом, которое активирует IGF-1R по меньшей мере на приблизительно 20%, если прибавляли к клетке, ткани или организму, экспрессирующему IGF-1R, где 100% активация представляет уровень активации, достигаемый при физиологических условиях тем же молярным количеством IGF-1 и/или IGF-2. В разных вариантах антитело активирует активность IGF-1R по меньшей мере на 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750 или 1000%. После изучения данного описания, применяя общеизвестные в данной области методики, специалист может легко приготовить фрагменты и аналоги антител. Предпочтительные аминоконцевые и карбоксиконцевые фрагменты или аналоги встречаются около границ функциональных областей. Структурные и функциональные области могут идентифицироваться путем сравнения данных нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности с общедоступными или частными базами данных последовательностей. Осуществляемые с помощью компьютера способы сравнения могут применяться для идентификации мотивов последовательности или для предсказания конформационных областей протеинов, которые встречаются в других протеинах известной структуры и/или функции. Известны способы для идентификации протеиновых последовательностей, которые складываются в известные трехмерные структуры. См., например, Bowie et al., 1991, Science 253:164."CDR трансплантационное антитело" является антителом, включающим одну или несколько CDRs,полученных из антитела определенного вида или изотипа, и каркас другого антитела такого же или другого вида или изотипа."Мультиспецифическое антитело" является антителом, которое распознает более чем один эпитоп на одном или нескольких антигенах. Подклассом этого типа антитела является "биспецифическое антитело",которое распознает два отдельных эпитопа на одном и том же антигене или на различных антигенах. Антигенсвязывающий протеин "специфически связывает" антиген (например, человеческий IGF1R), если он связывает антиген с константной диссоциации 1 нмоль или меньше."Антигенсвязывающая область," "антигенсвязывающий участок" или "антигенсвязывающий центр" является частью антигенсвязывающего протеина, который содержит аминокислотные остатки (или другие остатки), которые взаимодействуют с антигеном и приводят к специфичности антигенсвязывающего протеина и аффинности для антигена. Для антитела, которое специфически связывается со своим антигеном, это будет включать по меньшей мере часть по меньшей мере одной из CDR областей."Эпитоп" является частью молекулы, которая связывается антигенсвязывающим протеином (например, антителом). Эпитоп может содержать раздельные части молекулы (например, в полипептиде - 13015146 аминокислотные остатки, которые не являются соседними в первичной полипептидной последовательности, но которые в контексте третичной или четвертичной структуры полипептида достаточно близки друг к другу, чтобы быть связанными антигенсвязывающим протеином)."Процент идентичности" двух полинуклеотидных или двух полипептидных последовательностей определяется путем сравнения последовательностей, используя компьютерную программу GAP (часть отGCG Wisconsin Package, version 10.3 (Accelrys, San Diego, CA с применением параметров, используемых по умолчанию. Термины "полинуклеотид", "олигонуклеотид" и "нуклеиновая кислота" применяются повсюду равнозначно и включают молекулы ДНК (например, кДНК или геномную ДНК), молекулы РНК (например,мРНК), аналоги ДНК или РНК, генерированные с применением нуклеотидных аналогов (например, пептидные нуклеиновые кислоты и не встречающиеся в природе нуклеотидные аналоги), и их гибриды. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной. В одном варианте молекулы нуклеиновых кислот, описанных в изобретении, включают соседнюю открытую рамку считывания,кодирующую антитело, его фрагмент, дериват, мутеин или вариант, описанный в изобретении. Два одноцепочечных полинуклеотида являются "комплементом" один другого, если их последовательности могут выстраиваться в антипараллельную ориентацию, так что каждый нуклеотид в одном полинуклеотиде расположен напротив комплементарного нуклеотида в другом полинуклеотиде, без введения двухцепочечных разрывов ("брешей") и без неспаренных нуклеотидов при 5' или 3' конце каждой последовательности. Полинуклеотид является "комплементарным" другому полинуклеотиду, если два полинуклеотида могут гибридизироваться один в другой при умеренно строгих условиях. Таким образом, полинуклеотид может быть комплементарен другому полинуклеотиду, не являясь его комплементом."Вектор" является нуклеиновой кислотой, которая может применяться для введения другой нуклеиновой кислоты, связанной с ней в клетке. Одним видом вектора является "плазмида", которая относится к линейной или кольцевой двухцепочечной молекуле ДНК, в которой могут лигироваться (сшиваться) дополнительные сегменты нуклеиновой кислоты. Другой тип вектора является вирусным вектором (например, ретровирусы с дефектной репликацией, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), в котором дополнительные сегменты ДНК могут вводиться в вирусный геном. Некоторые векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они вводятся (например, бактериальные векторы,включающие репликацию бактериального происхождения и эписомные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомные векторы млекопитающих) интегрируются в геном клетки-хозяина при введении в клетку-хозяин и, тем самым, реплицируются наряду с геномом хозяина. "Экспрессирующий вектор" представляет тип вектора, который может направить экспрессию выбранного полинуклеотида. Нуклеотидная последовательность "операбельно связывается" с регуляторной последовательностью, если регуляторная последовательность влияет на экспрессию (например, на уровень, продолжительность или локализацию экспрессии) нуклеотидной последовательности. "Регуляторная последовательность" представляет нуклеиновую кислоту, которая влияет на экспрессию (например, на уровень,продолжительность или локализацию экспрессии) нуклеиновой кислоты, с которой она операбельно связывается. Регуляторная последовательность может, например, оказывать свое влияние непосредственно на регулируемую нуклеиновую кислоту или через воздействие одной или нескольких других молекул(например, полипептидов, которые связываются с регуляторной последовательностью и/или с нуклеиновой кислотой). Примеры регуляторных последовательностей включают промоторы, энхансеры и другие элементы контроля экспрессии (например, сигналы полиаденилирования). Другие примеры регуляторных последовательностей описываются, например, в Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods"Клетка-хозяин" является клеткой, которая может применяться для экспрессии нуклеиновой кислоты, например нуклеиновой кислоты по предлагаемому изобретению. Клетка-хозяин может быть прокариотической, например E.coli, или она может быть эукариотической, например одноклеточным эукариотом (например, дрожжи или другие грибы), растительной клеткой (например, растительной клеткой табака или томата), животной клеткой (например, клеткой человека, клеткой обезьяны, клеткой хомячка,клеткой крысы, клеткой мыши или клеткой насекомого) или гибридомой. Примеры клеток-хозяин включают COS-7 линию клеток почек обезьяны (АТСС CRL 1651) (см. Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), L клетки, С 127 клетки, 3 Т 3 клетки (АТСС CCL 163), клетки яичника китайского хомячка (Chinese hamsterovary, CHO) или их дериваты, такие как Veggie CHO и родственные клеточные линии, которые растут в бессывороточной среде (см. Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31) или CHO штамме DX-B11, который является неполным в DHFR (см. Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20), HeLa клетки, BHK (ATCC CRL 10) клеточные линии, CV1/EBNA клеточные линии, полученные от клеточных линий почек африканской зеленой обезьяны CV1 (АТСС CCL 70) (см. McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821), эмбриональные клетки почки человека 293, 293 EBNA или MSR 293, эпидермальные А 431 клетки человека, клетки Colo205 человека, другие трансформированные клеточные линии примата, нормальные диплоидные клетки, клетки штаммов, полученных из культуры основной (первичной) ткани invitro, первичные эксплантаты, HL-60, U937, HaK или клетки Jurkat. Обычно, клетка-хозяин является культивируемой клеткой, которая может трансформироваться или трансфектироваться с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид, которая далее может экспрессироваться в клетке-хозяине. Фраза"рекомбинантная клетка-хозяин" может применяться для обозначения клетки-хозяин, которая была трансформирована или трансфектирована с экспрессируемой нуклеиновой кислотой. Клетка-хозяин также может быть клеткой, которая включает нуклеиновую кислоту, но не экспрессирует ее на требуемом уровне, если только регуляторная последовательность не вводится в клетку-хозяин, так что она становится операбельно связанной с нуклеиновой кислотой. Следует иметь в виду, что термин клетка-хозяин относится не только к отдельной клетке субъекта, но и к потомству или потенциальному потомству такой клетки. Так как могут происходить некоторые модификации в последующих генерациях (потомствах) вследствие, например, мутации или влияния окружающей среды, такое потомство, в действительности, не может быть идентичным родительской клетке, но все же оно охватывается термином, применяемым в данном изобретении.IGF-1R является тирозинкиназным трансмембранным рецептором (Blume-Jensen et al., 2001, Nature 411:355-65). Человеческий IGF-1R синтезируют в виде предшественника полипептида из 1367 аминокислот, который включает сигнальный пептид из 30 аминокислот, удаляемый во время транслокации в эндоплазматический ретикулум (Swiss-Prot: P08069). Предшественник рецептора IGF-1R гликозилируется и расщепляется протеазой в положениях 708-711 (считая от первой аминокислоты после сигнальной пептидной последовательности) во время созревания в ER-гольджи, приводя к образованию -цепи (1-707) и-цепи (712-1337), которые остаются соединенными дисульфидными связями (Bhaumick et al., 1981, ProcNatl Acad Sci USA 80:1228-31, LeBon et al., 1986, J Biol Chem 261:7685-89, Elleman, et al., 2000, Biochem J 347:771-79). Преобладающая форма IGF-1R (и INSR), которая существует на клеточной поверхности,является протеолитически обработанным и гликозилированным 2 димером, ковалентно соединенным одной или несколькими дисульфидными связями. Внеклеточная часть IGF-1R состоит из -цепи и 191 аминокислот -цепи (712-905). Рецептор содержит единственную трансмембранную остовную последовательность (906-929) и цитоплазматическую область из 408-остатков, которая включает функциональную тирозинкиназу (Rubin et al., 1983, Nature 305:438-440). Сравнительный анализ последовательности показал, что IGF-1R состоит из 11 разных структурных мотивов (рассмотренных в работе Adams et al., 2000, Cell Mol Life Sci 57:1050-93, MarinoBuslje et al., 1998, FEBS Ltrs 441:331-36, Ward et al., 2001, BMC Bioinformatics 2:4). N-концевая половина внеклеточной области содержит две гомологические области, названные L1 (1-151) и L2 (299-461) (Wardet al., 2001, supra), разделенные цистеинобогащенной (cysteine-rich, CR) областью (152-298), состоящей из нескольких структурных модулей с дисульфидными связями, которые находятся на одном уровне с повторяющимися единицами в TNF рецепторе и ламинине (Ward et al., 1995, Proteins 22:141-53). Была изучена кристаллическая структура L1-CR-L2 области (Garrett et al., 1998, Nature 394:395-99). L2 область продолжается тремя областями фибронектина III типа (Marino-Buslje et al., 1998, supra, Mulhern et al.,1998, Trends Biochem Sci 23:465-66, Ward et al., 1999, Growth Factors 16:315-22). Первая FnIII область(FnIII-1, 461-579) имеет 118 аминокислот в цепи. Вторая FnIII область (FnIII-2, 580-798) разрывается главной инсерционной последовательностью (insert sequence, ID) из приблизительно 120 аминокислот в цепи. ID область включает участок, расщепляемый фуринпротеазой, который разделяетицепи созревшего рецептора. Третья FnIII область (FnIII-3) полностью располагается в -цепи (799-901), терминируя несколько остатков перед трансмембранной последовательностью. Каталитическая область тирозинкиназы IGF-1R располагается между аминокислотами положений 973-1229 и была изучена ее структура (Favelyukis et al., 2001, Nature Structural Biol 8:1058-63, Pautsch et al., 2001, Structure 9:955-65). Киназа фланкируется двумя регуляторными областями, околомембранной областью (930-972) и С-концевым хвостом из 108 аминокислот (1220-1337) (Surmacz et al., 1995, Experimental Cell Res 218:370-80, Hongo etal., 1996, Oncogene 12:1231-38). Две регуляторные области содержат остатки тирозина, которые служат в качестве центров причаливания для протеинов сигнальной трансдукции при фосфорилировании активированной IGF-1R тирозинкиназой (рассмотрено Baserga (ed.), 1998 The IGF-1 Receptor in Normal andal., 2000, Cell Mol Life Sci 57:1050-93). Аминокислотная последовательность IGF-1R приблизительно на 70% идентична инсулиновому рецептору (INSR; Swiss-Prot: P06213). Самая высокая гомология между рецепторами располагается в области тирозинкиназы (84%); самая низкая идентичность находится в CR участке и С-конце. IGF-1R также высоко родственен (на 55% идентичен) рецептору, относящемуся к инсулину (IRR; Swiss-Prot:P14616). Человеческий IGF-1R может активироваться инсулиноподобными факторами роста, IGF-1 и IGF-2 и инсулином (insulin, INS) (Hill et al., 1985, Pediatric Research 19:879-86). IGF-1 и IGF-2 кодируют неаллельные гены (Brissenden et al., 1984, Nature 310: 781-8, Bell et al., 1985, Proceedings of the National Acad- 15015146emy of Sciences of the United States of America 82: 6450-54) и оба гена экспрессируют альтернативные протеины, связанные с диффенциальным сплайсингом РНК и процессингом протеина. Наиболее общие и хорошо изученные зрелые формы IGF-1 и IGF-2 имеют 70 и 67 аминокислот в цепи соответственноIGF-1R экспрессирует во всех видах клеток у нормальных взрослых животных за исключением гепатоцитов печени и зрелых В-клеток. Плазма крови человека содержит высокие концентрации IGF-1 иIGF-2, и IGF-1 может детектироваться в большинстве тканей. Рецептор является интегральным компонентом физиологического механизма, контролирующего размер органов и гомеостаз. Без связывания с отдельной теорией "гипотеза соматомедина" заявляет, что опосредованный гормоном роста (GrowthHormone, GH) соматический рост, который происходит в детстве и юношестве, зависит от эндокринной формы IGF-1, которая главным образом продуцируется и секретируется печенью (Daughaday, 2000, Pediatric Nephrology 14: 537-40). Синтез печеночного IGF-1 стимулируется выделением GH в гипофизе в ответ на гипоталамусовый GHRH (GH рилизинг-гормон или рилизинг-фактор ростового гормона). Концентрация IGF-1 в сыворотке у людей увеличивается выше чем в 100 раз между возрастом в 5-15 лет. Биодоступность IGF-1 регулируется IGF-связывающим протеином 3 (IGFBP3) приблизительно на 99% от фактора роста, компартментализованного в связанном состоянии. Первичная недостаточность IGF-1,возникающая от частичных делеций генов, и вторичная недостаточность IGF-1, являющаяся следствием дефектов в продуцировании GH или передачи сигнала, не являются летальными (Woods, 1999, IGF Deficiency in Contemporary Endocrinology: The IGF System, R. a. R. Rosenfeld, С Jr. Totowa, ed.s, Humana Press,NJ: 651-74). Страдающие индивидуумы показывают задержку роста при рождении, растут медленно и могут сталкиваться с некоторыми нарушениями центральной нервной системы. Передача сигнала IGF-1R стимулирует рост и выживание клеток посредством IRS адаптера протеинзависимой активации пути PI3 киназа/Akt. IGF-1R передает сигнал своим главным субстратам, IRS-1 посредством IRS-4 и Shc протеинов (Blakesley et al., 1999, IGF-1 receptor function: transducing the IGF-1signal into intracellular events in The IGF System, R. G. a. R. Rosenfeld, Jr. C.T. Totowa, ed.s, Humana Press,NJ: 143-63). Это приводит к активации путей передачи сигналов Ras/Raf/MAP киназы и PI3 киназы/Akt. Однако индукция опосредованного Akt клеточного выживания через IRS является направлением основного ответа при IGF стимуляции большинства клеток. См. фиг. 10. Антигенсвязывающие протеины. В данном изобретении предлагаются антигенсвязывающие протеины (например, антитела, фрагменты антител, дериваты антител, мутеины антител и варианты антител), которые связывают IGF-1R,например человеческий IGF-1R. Антигенсвязывающие протеины согласно данному изобретению включают антигенсвязывающие протеины, которые ингибируют биологическую активность IGF-1R. Примеры таких биологических активностей включают связывание сигнальной молекулы (например, IGF-1 и/или IGF-2) и трансдукцию сигнала в ответ на связывание сигнальной молекулы. Различные антигенсвязывающие протеины могут связывать различные области или эпитопы IGF1R или действовать с помощью других механизмов воздействия. Примеры включают антигенсвязывающие протеины, которые мешают связыванию IGF-1 и/или IGF-2 с IGF-1R или которые ингибируют сигнальную трансдукцию, но выбор ими не ограничивается. Центр действия может быть, например, внутриклеточным (например, вмешательством во внутриклеточную сигнальную систему) или внеклеточным. Антигенсвязывающий протеин не должен полностью ингибировать вызванную IGF-1 и/или IGF-2 активность, чтобы найти применение в данном изобретении; вернее, антигенсвязывающие протеины, которые уменьшают отдельную активность IGF-1 и/или IGF-2, также предполагаются для применения. (Обсуждение в данном изобретении отдельных механизмов действия для IGF-1R-связывающих антигенсвязывающих протеинов в лечении отдельных болезней является лишь иллюстративным, и способы, представленные в данном изобретении, тем самым, не являются ограничивающими). Было отмечено, что каждый IGF-1 и IGF-2 показывает двухфазовое связывание с IGF-1R. Сообщалось, что высокоаффинное связывание имеет KD в пределе 0,2 нМ; высокоаффинное связывание примерно в 10 раз выше. Таким образом, в одном варианте данное изобретение предлагает ингибитор IGF-1R,который ингибирует как высокоаффинное связывание, так и низкоаффинное связывание IGF-1 и/илиIGF-2 с IGF-R. Предполагалось, что для конформационного изменения требуется высокоаффинное связывание IGF-1 и/или IGF-2 с IGF-1R, которое активирует активность тирозинкиназы IGF-1R, а не низкоаффинное связывание. Таким образом, в другом варианте ингибитор IGF-1R по сравнению с низкоаффинным связыванием предпочтительно ингибирует высокоаффинное связывание IGF-1 и/или IGF-2 сIGF-1R. В данном изобретении предлагаются антигенсвязывающие протеины, которые включают вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из L1-L52, и/или вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из H1-Н 52, и их фрагменты, дериваты, мутеины и варианты (см. фиг. 2 и 3). Такой антигенсвязывающий протеин может обозначаться с применением номенк- 16015146 латуры "LxHy", где х соответствует номеру вариабельной области легкой цепи и у соответствует номеру вариабельной области тяжелой цепи, как они маркированы на фиг. 2 и 3. Например, L2H1 имеет отношение к антигенсвязывающему протеину с вариабельной областью легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность L2, и вариабельной областью тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность H1, как показано на фиг. 2 и 3. Фиг. 2 и 3 также показывают расположение CDR и каркасных областей каждой из последовательностей этих вариабельных областей. CDR участки каждой легкой и тяжелой цепи также группируются по подобию типа и последовательности на фиг. 4-9. Антигенсвязывающие протеины, описанные в изобретении, включают, например, антигенсвязывающие протеины с комбинациями выриабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, выбранными из группы,состоящей из L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12,L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18, L19H19, L20H20, L21H21, L22H22, L23H23,L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29, L30H30, L31H31, L32H32, L33H33, L34H34,L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40, L41H41, L42H42, L43H43, L44H44, L45H45,L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51 и L52H52. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, включающий вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности вариабельной области легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из L1-L52,только 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 остатками, где каждое такое различие последовательностей независимо представляет удаление, включение или замену одного аминокислотного остатка. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность,которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентична последовательности вариабельной области легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из L1-L52. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентична нуклеотидной последовательности, которая кодирует вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из L1-L52. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется полинуклеотидом, который гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, который кодирует вариабельную область легкой цепи,выбранную из группы, состоящей из L1-L52. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется полинуклеотидом, который гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, который кодирует вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из L1-L52. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется полинуклеотидом, который гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида легкой цепи,выбранный из фиг. 1. В другом варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин,включающий вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность,которая отличается от последовательности вариабельной области тяжелой цепи, выбранной из группы,состоящей из H1-Н 52, только 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 остатками, где каждое такое различие последовательностей независимо представляет собой удаление, включение или замену одного аминокислотного остатка. В другом варианте вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентична последовательности вариабельной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из H1-Н 52. В другом варианте вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность,которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90,95, 97 или 99% идентична нуклеотидной последовательности, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из H1-Н 52. В другом варианте вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется полинуклеотидом,который гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, который кодирует вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из H1-Н 52. В другом варианте вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется полинуклеотидом, который гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида, который кодирует вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из H1-Н 52. В другом варианте вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность,которая кодируется полинуклеотидом, который гибридизируется в умеренно жестких условиях в комплемент полинуклеотида тяжелой цепи, выбранный из фиг. 1. Отдельные варианты антигенсвязывающих протеинов, описанных в данном изобретении, включают одну или несколько аминокислотных последовательностей, которые идентичны аминокислотным последовательностям одной или нескольких CDRs и/или FRs, приведенных на фиг. 2-9. В одном варианте антигенсвязывающий протеин включает CDR1 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 4. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает CDR2 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 5. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает CDR3 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 6. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает CDR1- 17015146 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 7. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает CDR2 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 8. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает CDR3 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 9. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR1 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 2. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR2 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 2. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR3 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 2. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR4 последовательность легкой цепи, приведенную на фиг. 2. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR1 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 3. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR2 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 3. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR3 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 3. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает FR4 последовательность тяжелой цепи, приведенную на фиг. 3. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включает одну или несколько CDR последовательностей, которые отличаются от CDR последовательности, приведенной на фиг. 2-9, не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотным остатком. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включает по меньшей мере одну CDR от L1-L52 и/или Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2-9, и по меньшей мере однуCDR последовательность из антитела против IGF-1R, описанную в US Pat. App. Pub.03/0235582,04/0228859, 04/0265307, 04/0886503, 05/0008642, 05/0084906, 05/0186203, 05/0244408, РСТ Pub.WO 03/059951, WO 03/100008, WO 04/071529 A2, WO 04/083248, WO 04/087756, WO 05/016967, WO 05/016970 или WO 05/058967 (каждая из которых полностью приводится в данном изобретении в качестве ссылки для всех случаев), где антигенсвязывающий протеин связывает рецептор IGF-1. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает 2, 3, 4 или 5 CDR последовательностей из L1-L52 и/или Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2-9. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает 2, 3, 4 или 5 CDR последовательностей из антитела против IGF-1R, описанных в опубликованных патентных заявках US Pat. App. Pub.03/0235582, 04/0228859, 04/0265307, 04/0886503, 05/0008642, 05/0084906,05/0186203, 05/0244408, РСТ Pub.WO 03/059951, WO 03/100008, WO 04/071529 A2, WO 04/083248,WO 04/087756, WO 05/016967, WO 05/016970 или WO 05/058967. В другом варианте по меньшей мере одна из CDR3 последовательностей антигенсвязывающего протеина является CDR3 последовательностью из L1-L52 и/или Н 1-Н 52, как показано на фиг. 2, 3, 6 и 9. В другом варианте CDR3 последовательность легкой цепи антигенсвязывающего протеина является CDR3 последовательностью легкой цепи изL1-L52, как показано на фиг. 2 и 6, и CDR3 последовательность тяжелой цепи антигенсвязывающего протеина является последовательностью тяжелой цепи из Н 1-Н 52, как показано на фиг. 3 и 9. В другом варианте антигенсвязывающий протеин включает 1, 2, 3, 4 или 5 CDR последовательностей, каждая из которых независимо отличается 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0 прибавлениями, заменами и/или удалениями единственной аминокислоты из CDR последовательности L1-L52 и/или Н 1-Н 52, и антигенсвязывающий протеин дополнительно включает 1, 2, 3, 4 или 5 CDR последовательностей, каждая из которых независимо отличается 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0 прибавлениями, заменами и/или удалениями единственной аминокислоты из CDR последовательности, опубликованной в патентных заявках US Pat. App. Pub.03/0235582,04/0228859, 04/0265307, 04/0886503, 05/0008642, 05/0084906, 05/0186203, 05/0244408, РСТ Pub.WO 03/059951, WO 03/100008, WO 04/071529 A2, WO 04/083248, WO 04/087756, WO 05/016967, WO 05/016970 или WO 05/058967. В другом варианте CDR последовательность(и) - из опубликованных патентных заявок - US Pat. App. Pub.03/0235582, 04/0228859, 04/0265307, 04/0886503, 05/0008642,05/0084906, 05/0186203, 05/0244408, РСТ Pub.WO 03/059951, WO 03/100008, WO 04/071529 A2,WO 04/083248, WO 04/087756, WO 05/016967, WO 05/016970 или WO 05/058967. В другом вариантеCDR последовательность(и) - из антитела(л), которое(ые) связывает(ют) L2 часть внеклеточной области рецептора IGF-1. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не содержит CDR3 последовательность легкой цепи и/или CDR3 последовательность тяжелой цепи из антитела против IGF-1R из опубликованных патентных заявок - US Pat. App. Pub.03/0235582, 04/0228859, 04/0265307, 04/0886503,05/0008642, 05/0084906, 05/0186203, 05/0244408, РСТ Pub.WO 03/059951, WO 03/100008, WO 04/071529 A2, WO 04/083248, WO 04/087756, WO 05/016967, WO 05/016970 или WO 05/058967. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включаетCDR1 легкой цепи, содержащую последовательность RSSQSLLHX1X2GYNX3LX4 (SEQ ID NO: 236), в которой X1 - остаток серина или треонина, Х 2 - остаток аспарагина, серина или гистидина, Х 3 - остаток тирозина или фенилаланина и Х 4 - остаток аспартата или аспарагина. В другом варианте легкая цепьCDR1 включает последовательность TRSSGX1IX2X3NYVQ (SEQ ID NO: 237), в которой X1 - остаток серина или аспартата, Х 2 - остаток аланина или аспартата и Х 3 - остаток серина или аспарагина. В другом варианте CDR1 легкой цепи включает последовательность RASQX1X2X3X4X5LX6 (SEQ ID NO: 238), в которой X1 - остаток глицина или серина, Х 2 - остаток изолейцина, валина или пролина и Х 3 - остаток серина, глицина или тирозина, Х 4 - остаток любой аминокислоты, Х 5 - остаток фенилаланина, тирозина,аспарагина или триптофана и Х 6 - остаток аланина или аспарагина. В другом варианте Х 2 - остаток изо- 18015146 лейцина или валина, Х 3 - остаток глицина или серина, Х 4 - остаток аргинина, серина аспарагина, серина,тирозина или изолейцина и X5 - остаток фенилаланина или тирозина. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включаетCDR2 легкой цепи, включающую последовательность LX1X2X3RX4S (SEQ ID NO: 239), в которой X1 остаток глицина или валина, Х 2 - остаток серина или фенилаланина, Х 3 - остаток аспарагина, тирозина или треонина и Х 4 - остаток аланина или аспартата. В другом варианте CDR2 включает последовательность AX1SX2LX3S (SEQ ID NO: 240), в которой X1 - остаток аланина или треонина, Х 2 - остаток треонина или глицина и Х 3 - остаток глутамина или глутамата. В другом варианте CDR2 включает последовательность X1X2NX3RPS (SEQ ID NO: 241), в которой X1 - остаток глутамата, глутамина или глицина, Х 2 остаток аспартата или лизина и Х 3 - остаток любой аминокислоты. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включаетCDR3 легкой цепи, содержащую последовательность МХ 1 Х 2 Х 3 Х 4 Х 5 РХ 6 Х 7 (SEQ ID NO: 242), в которой Х 1 - остаток глутамина или глутамата, Х 2 - остаток аланина, глицина, серина или треонина, Х 3 - остаток лейцина или треонина, X4 - остаток глутамина, глутамата или гистидина, X5 - остаток треонина, триптофана, метионина или валина, Х 6 - остаток неполярной боковой цепи и Х 7 - остаток треонина, серина или аланина. В другом варианте CDR3 включает последовательность QQX1X2X3X4PX5T (SEQ ID NO: 243), в которой X1 - остаток аргинина, серина, лейцина или аланина, Х 2 - остаток аспарагина, серина или гистидина, Х 3 - остаток серина или аспарагина, Х 4 - остаток неполярной боковой цепи и Х 5 - остаток лейцина,изолейцина, тирозина или триптофана. В другом варианте CDR3 включает последовательностьQSYX1SX2NX3X4V (SEQ ID NO: 244), в которой X1 - остаток аспартата или глутамина, Х 2 - остаток серина или аспартата, Х 3 - остаток глутамина, валина или триптофана и X4 - остаток аргинина или без остатка. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включаетCDR1 тяжелой цепи, содержащую последовательность X1X2X3WWS (SEQ ID NO:245), в которой X1 остаток серина или без остатка, Х 2 - остаток серина или аспарагина и Х 3 - остаток аспарагина или изолейцина. В другом варианте CDR1 тяжелой цепи включает последовательность X1X2YWS (SEQ ID NO: 246), в которой X1 - остаток глицина, аспарагина или аспартата и Х 2 - остаток тирозина или фенилаланина. В другом варианте CDR1 тяжелой цепи включает последовательность SYX1X2X3 (SEQ ID NO: 247), в которой X1 - остаток аланина или глицина, Х 2 - остаток метионина или изолейцина и Х 3 - остаток серина или гистидина. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включаетCDR2 тяжелой цепи, содержащую последовательность X1X2X3X4X5GX6TX7YNPSLX8S (SEQ ID NO: 248),в которой X1 - остаток глутамата, тирозина или серина, Х 2 - остаток изолейцина или валина, Х 3 - остаток тирозина, аспарагина или серина, Х 4 - остаток гистидина, тирозина, аспартата или пролина, Х 6 - остаток серина или аргинина, Х 6 - остаток серина или аспарагина, Х 7 - остаток аспарагина или тирозина и X8 остаток лизина или глутамата. В другом варианте CDR2 тяжелой цепи включает последовательностьX1ISX2X3X4X5X6X7YYADSVKG (SEQ ID NO: 249), в которой X1 - остаток треонина, аланина, валина или тирозина, Х 2 - остаток глицина, серина или тирозина, Х 3 - остаток серина, аспарагина или аспартата, Х 4 остаток глицина или серина, X5 - остаток глицина, серина или аспартата, Х 6 - остаток серина, треонина или аспарагина и Х 7 - остаток треонина, лизина или изолейцина. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который включаетCDR3 тяжелой цепи, включающую последовательность X1X2X3X4X5X6X7X8X9FDI (SEQ ID NO: 250), в которой X1 - остаток глутамата или без остатка, Х 2 - остаток тирозина, глицина или серина или без остатка, Х 3 - остаток серина, аспарагина, триптофана или глутамата или без остатка, Х 4 - остаток серина, аспартата, триптофана, аланина, аргинина, треонина, глутамина, лейцина или глутамата или без остатка, Х 5 остаток серина, глицина, аспарагина, треонина, триптофана, аланина, валина или изолейцина, Х 6 - остаток аргинина, глутамина, тирозина, валина, аланина, глицина, серина, фенилаланина или триптофана, Х 7 остаток лейцина, аспарагина, аспартата, треонина, триптофана, тирозина, валина, аланина или гистидина,X8 - остаток аспартата, серина, аспарагина или глутамина и Х 9 - остаток аланина или пролина. В другом варианте CDR3 тяжелой цепи включает последовательность X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11MDV (SEQ IDNO: 251), в которой X1 - остаток аланина или без остатка, Х 2 - остаток глутамата, тирозина или глицина или без остатка, Х 3 - остаток серина или аргинина или без остатка, Х 4 - остаток аспартата, глицина, серина или валина или без остатка, Х 5 - остаток серина, глицина или аспартата или без остатка, Х 6 - остаток глицина, фенилаланина, аспартата, серина, триптофана или тирозина или без остатка, Х 7 - остаток тирозина, триптофана, серина или аспартата или без остатка, X8 - остаток аспартата, аргинина, серина, глицина, тирозина или триптофана, Х 9 - остаток тирозина, изолейцина, лейцина, фенилаланина или лизина, Х 10 остаток тирозина, фенилаланина, аспартата или глицина и Х 11 - остаток глицина, тирозина или аспарагина. В другом варианте CDR3 тяжелой цепи включает последовательность X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO: 252), в которой X1 - остаток аспартата или валина или без остатка, Х 2 - остаток глицина,тирозина, аргинина или аспартата или без остатка, Х 3 - остаток аспарагина, лейцина, глицина, изолейцина, серина, валина, фенилаланина или тирозина или без остатка, Х 4 - остаток лейцина, серина, триптофана, аланина, тирозина, изолейцина, глицина или аспартата или без остатка, Х 5 - остаток глицина, алани- 19015146 на, тирозина, серина, аспартата или лейцина, Х 6 - остаток валина, аланина, глицина, треонина, пролина,гистидина или глутамина, Х 7 - остаток глутамата, глицина, серина, аспартата, валина, триптофана, гистидина или аргинина, X8 - остаток глутамина, аланина, глицина, тирозина, пролина, лейцина, аспартата или серина, Х 9 - остаток неполярной боковой цепи и Х 10 - остаток аспартата или аланина. В другом варианте CDR3 тяжелой цепи включает последовательность X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10YFDX11 (SEQ ID NO: 253), в которой X1 - остаток глицина или без остатка, Х 2 - остаток пролина или без остатка, Х 3 - остаток аргинина или аспартата или без остатка, Х 4 - остаток гистидина или пролина, Х 5 - остаток аргинина или глицина, Х 6 - остаток аргинина, серина или фенилаланина, Х 7 - остаток аспартата или серина, X8 - остаток глицина, триптофана или тирозина, Х 9 - остаток тирозина или аланина, Х 10 - остаток аспарагина или триптофана и Х 11 - остаток аспарагина или лейцина. В другом варианте CDR3 тяжелой цепи включает последовательность X1X2X3X4DSSX5X6X7X8X9X10X11X12 (SEQ ID NO: 254), в которой X1 - остаток фенилаланина или без остатка, Х 2 - остаток аспарагина или глицина или без остатка, Х 3 - остаток тирозина или лейцина или без остатка, Х 4 - остаток тирозина или глицина или без остатка, Х 5 - остаток глицина,серина или валина, Х 6 - остаток тирозина, фенилаланина, триптофана или глутамина или без остатка, Х 7 остаток тирозина, глицина или изолейцина или без остатка, X8 - остаток тирозина, лейцина или глицина или без остатка, Х 9 - остаток метионина, глицина или фенилаланина или без остатка, Х 10 - остаток аспартата или метионина или без остатка, Х 11 - остаток валина, аспартата или тирозина или без остатка и Х 12 остаток валина или без остатка. В одном варианте данное изобретение предлагает изолированный антигенсвязывающий протеин,включающий или a) CDR3 легкой цепи, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из i) CDR3 последовательности легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из CDR3 последовательностей легкой цепи L1-L52, как показано на фиг. 6; ii) MQALQTPZT; iii)QQ(R/S)(N/S)(S/N)ZPLT и iv) QSYDSSNXJV; б) CDR3 тяжелой цепи, содержащую последовательность,выбранную из группы, состоящей из i) CDR3 последовательности тяжелой цепи, которая отличается прибавлениями, заменами или удалениями не более чем всего трех аминокислот из CDR3 последовательности, выбранной из группы, состоящей из CDR3 последовательностей тяжелой цепи Н 1-Н 52, как показано на фиг. 9; ii) SRLDAFDI; iii) SXYDYYGMDV; iv) HRXDXAWYFDL и v) DSSG; или в) CDR3 последовательность легкой цепи (подпункта а и CDR3 последовательность тяжелой цепи (подпункта б; где символы аминокислотных остатков, заключенные в круглые скобки, определяют альтернативные остатки для того же положения в последовательности, каждый X независимо представляет остаток любой аминокислоты, каждый Z независимо представляет остаток глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, пролина, фенилаланина, метионина, триптофана или цистеина, каждый J независимо представляет остаток глутамина, аргинина, валина или триптофана, и антигенсвязывающий протеин связывает человеческий IGF-1R. Нуклеотидные последовательности, приведенные на фиг. 1, или аминокислотные последовательности, представленные на фиг. 2-9, можно изменить, например, неспецифическим мутагенезом или сайтнаправленным мутагенезом (например, сайтспецифический мутагенез с использованием олигонуклеотидов) для создания измененного полинуклеотида, включающего по сравнению с немутированным полинуклеотидом замены, удаления или вставки одного или нескольких отдельных нуклеотидов. Примеры методик получения таких изменений описываются в работах Walder et al., 1986, Gene 42:133; Bauer et al.,1985, Gene 37:73; Craik, BioTechniques, January 1985, 12-19; Smith et al., 1981, Genetic Engineering- Principles and Methods, Plenum Press; и в патентах США - U.S. Patent4518584 и 4737462. Эти и другие способы можно применять для получения, например, дериватов антител против IGF-1R, которые обладают нужным свойством, например повышенной аффинностью, авидностью или специфичностью дляIGF-1R, увеличенной активностью или стабильностью in vivo или in vitro, или пониженными побочными действиями in vivo по сравнению с недериватизированным антителом. Другие дериваты антител против IGF-1R в пределах объема изобретения включают ковалентные или агрегированные конъюгаты антител против IGF-1R или их фрагменты с другими протеинами или полипептидами, как, например, при экспрессии рекомбинантных слитых протеинов, включающих гетерологические генные полипептиды, слитые с N-концом или С-концом полипептида антитела против IGF1R. Например, конъюгированный пептид может быть гетерологическим сигнальным (или лидерным) полипептидом, например лидерным полипептидом дрожжевого -фактора, или пептидом, таким как эпитомная метка. Слитые протеины, содержащие антигенсвязывающий протеин, могут включать пептиды,прибавленные для облегчения очистки или идентификации антигенсвязывающего протеина (например,poly-His). Антигенсвязывающий протеин также может соединяться с FLAG пептидом Asp-Tyr-Lys-AspAsp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (SEQ ID NO: 255), как описано в публикации Норр et al., BioTechnology 6:1204, 1988 и патенте США - U.S. Patent 5011912. FLAG пептид является высокоантигенным и предлагает эпитоп, обратимо связанный специфическим моноклональным антителом (mAb), облегчая быстрый анализ и легкую очистку экспрессирующего рекомбинантного протеина. Реагенты, пригодные для получения слитых протеинов, в которых FLAG пептид сливается с данным полипептидом, являются коммерчески доступными (Sigma, St. Louis, МО). Олигомеры, которые содержат один или несколько антигенсвязывающих протеинов, могут приме- 20015146 няться в качестве антагонистов IGF-1R. Олигомеры могут быть в форме ковалентносвязанных или нековалентносвязанных димеров, тримеров или высших олигомеров. Для применения предполагаются олигомеры, включающие два или несколько антигенсвязывающих протеинов, причем один пример с гомодимером. Другие олигомеры включают гетеродимеры, гомотримеры, гетеротримеры, гомотетрамеры,гетеротетрамеры и т.д. Один вариант относится к олигомерам, включающим многочисленные антигенсвязывающие протеины, соединенные путем ковалентных или нековалентных взаимодействий между пептидными остатками, слитыми с антигенсвязывающими протеинами. Такие пептиды могут быть пептидными линкерами(спейсерами) или пептидами, которые обладают свойством стимулирования олигомеризации. Лейциновые застежки и некотрые полипептиды, полученные из антител, имеются среди пептидов, которые могут стимулировать олигомеризацию антигенсвязывающих протеинов, прикрепленных к ним, как описано более подробно ниже. В отдельных вариантах олигомеры включают от двух до четырех антигенсвязывающих протеинов. Антигенсвязывающие протеины олигомера могут быть в любой форме, как, например, в любой из форм,описанных выше, например в форме вариантов или фрагментов. Предпочтительно, когда олигомеры содержат антигенсвязывающие протеины, которые обладают IGF-1R связывающей активностью. В одном варианте олигомер получают с применением полипептидов, полученных из иммуноглобулинов. Получение слитых протеинов, включающих некоторые гетерологические полипептиды, слитые с различными частями полипептидов, полученных из антитела (включая Fc область), было описано, например, в работах Ashkenazi et al., 1991, PNAS USA 88:10535; Byrn et al., 1990, Nature 344:677; и Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology,Suppl. 4, pages 10.19.1-10.19.11. Один вариант данного изобретения относится к димеру, включающему два слитых белка, созданных путем слияния IGF-1R связывающего фрагмента антитела против IGF-1R с Fc областью антитела. Димер можно получить, например, с помощью вставки (инсерции) слияния генов, кодирующего слитый протеин в соответствующий экспрессирующий вектор, экспрессии слияния генов в клетки-хозяин,трансформированные рекомбинантным экспрессирующим вектором, и предоставления возможности экспрессирующему слитому протеину составить очень подобные антителу молекулы, после чего образуются межцепочечные дисульфидные связи между Fc остатками с получением димера. Термин "Fc полипептид", как применяется в данном изобретении, включает нативные или мутеиновые формы полипептидов, полученных из Fc области антитела. Также включаются процессированные формы таких полипептидов, содержащих шарнирную область, которая стимулирует димеризацию. Слитые белки, включающие Fc остатки (и олигомеры, образованные из них), дают преимущество для легкой очистки с помощью аффинной хроматографии на колонках с протеином А или протеином G. Один соответствующий Fc полипептид, описанный в РСТ заявке WO 93/10151 (включенной в изобретение в качестве ссылки), является одноцепочечным полипептидом, простирающимся от N-концевой шарнирной области до нативного С-конца Fc области антитела IgG1 человека. Другим пригодным Fc полипептидом является Fc мутеин, описанный в патенте США U.S. Patent 5457035 и в публикации Baumet al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001. Аминокислотная последовательность данного мутеина идентична нативной Fc последовательности, представленной в WO 93/10151, за исключением того, что аминокислота 19 была заменена - Leu заменен на Ala, аминокислота 20 была заменена - Leu заменен на Glu и аминокислота 22 была заменена - Gly заменен на Ala. Мутеин показывает пониженную аффинность для Fc рецепторов. В других вариантах вариабельная область тяжелой и/или легкой цепи антитела против IGF-1R может заменяться на вариабельную область тяжелой и/или легкой цепи антитела. Наоборот, олигомер является слитым протеином, включающим многочисленные антигенсвязывающие протеины с пептидными линкерами (спейсерные пептиды) или без них. Среди соответствующих пептидных линкеров имеются линкеры, описанные в патентах США U.S. Patents 4751180 и 4935233. Другой способ получения олигомерных антигенсвязывающих протеинов включает применение лейциновой застежки. Области лейциновых застежек представляют собой пептиды, которые стимулируют олигомеризацию протеинов, в которых они находятся. Лейциновые застежки первоначально идентифицировали в нескольких ДНК-связывающих протеинах (Landschulz et al., 1988, Science 240:1759) и с тех пор были найдены в целом ряде различных протеинов. Среди известных лейциновых застежек имеются встречающиеся в природе пептиды и их дериваты, которые димеризуются или тримеризуются. Примеры областей лейциновых застежек, пригодных для получения растворимых олигомерных протеинов, описываются в РСТ заявке WO 94/10308, и лейциновая застежка, полученная из поверхностноактивного протеина D (surfactant protein D, SPD) легкого, описана в работе Норре et al., 1994, FEBS Letters 344:191, включенной в данное изобретение в качестве ссылки. Применение модифицированной лейциновой застежки, которая допускает стабильную тримеризацию гетерологического протеина, слитого с ней, описывается в работе Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78. В одном методе рекомбинатные слитые протеины, включающие фрагмент или дериват антитела против IGF-1R, слитый с пептидом- 21015146 лейциновой застежки, экспрессируются в соответствующих клетках-хозяине и растворимые олигомерные фрагменты или дериваты антител против IGF-1R, которые образуются, извлекаются из культурного супернатанта. Данное изобретение предлагает антигенсвязывающие протеины, которые мешают связыванию IGF1 и/или IGF-2 с IGF-1R. Такие антигенсвязывающие протеины можно приготовить против IGF-1R или его фрагмента, варианта или деривата и подвергнуть скринингу в стандартных анализах на способность мешать связыванию IGF-1 и/или IGF-2 с IGF-1R. Примеры соответствующих анализов являются анализами, которые проверяют антигенсвязывающие протеины на способность ингибировать связывание IGF1 и/или IGF-2 с клетками, экспрессирующими IGF-1R, или которые проверяют антигенсвязывающие протеины на способность уменьшать биологический или клеточный ответ, который является результатом связывания IGF-1 и/или IGF-2 с клеточной поверхностью рецепторов IGF-1R. Данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который блокирует связывание IGF1 и/или IGF-2 с IGF-1R, но не блокирует в существенной степени связывание инсулина с инсулиновым рецептором (insulin receptor, INS-R). В одном варианте антигенсвязывающий протеин не связывает INSR. В другом варианте антигенсвязывающий протеин связывает INS-R с такой низкой аффинностью, что он эффективно не блокирует связывание инсулина с INS-R. В другом варианте антигенсвязывающий протеин связывает INS-R, но INS-R, связанный с антигенсвязывающим протеином, может еще связывать инсулин. В другом варианте селективность антигенсвязывающего протеина в отношении IGF-1R по меньшей мере в 50 раз выше, чем селективность его в отношении инсулинового рецептора. В другом варианте селективность антигенсвязывающего протеина более чем в 100 раз выше, чем селективность в отношении инсулинового рецептора. Данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который демонстрирует видоспецифичность. В одном варианте антигенсвязывающий протеин связывает один или несколько IGF-1R млекопитающего, например человеческий IGF-1R, и один или несколько IGF-1R мыши, крысы, морской свинки, хомяка, песчаной крысы, кошки, кролика, собаки, козла, овцы, коровы, лошади, верблюда и примата, не принадлежащего человеческому роду. В другом варианте антигенсвязывающий протеин связывает один или несколько IGF-1R примата, например человеческий IGF-1R, и один или несколько IGF1R яванского макака, мартышки, резуса и шимпанзе. В другом варианте антигенсвязывающий протеин специфично связывает IGF-1R человека, яванского макака, мартышки, резуса или шимпанзе. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не связывает один или несколько IGF-1R мыши, крысы, морской свинки, хомяка, песчаной крысы, кошки, кролика, собаки, козла, овцы, коровы, лошади, верблюда и примата, не принадлежащего человеческому роду. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не связывает вид цепкохвостной обезьяны, как, например, мартышки. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не показывает специфического связывания ни с каким встречающимся в природе протеином, кроме IGF-1R. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не показывает специфического связывания ни с каким встречающимся в природе протеином, кроме IGF-1R млекопитающего. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не показывает специфического связывания ни с каким встречающимся в природе протеином, кроме IGF-1R примата. В другом варианте антигенсвязывающий протеин не показывает специфического связывания ни с каким встречающимся в природе протеином, кромеIGF-1R человека. В другом варианте антигенсвязывающий протеин специфически связывает IGF-1R мыши, крысы, яванского макака и человека. В другом варианте антигенсвязывающий протеин специфически связывает IGF-1R мыши, крысы, яванского макака и человека с аналогичной связывающей аффинностью. В другом варианте антигенсвязывающий протеин блокирует связывание человеческого IGF-1 иIGF-2 с IGF-1R мыши, крысы, яванского макака и человеческим IGF-1R. В другом варианте антигенсвязывающий протеин блокирует связывание человеческого IGF-1 и IGF-2 с IGF-1R мыши, крысы, яванского макака и человеческим IGF-1R с подобной Ki. В другом варианте антигенсвязывающий протеин блокирует связывание человеческого IGF-1 и IGF-2 с IGF-1R мыши, крысы, яванского макака и человеческим IGF-1R с Ki от приблизительно 0,57 до приблизительно 0,61 нМ. Селективность антигенсвязывающего протеина в отношении IGF-1R можно определить с применением общеизвестных в данной области техники способов и после изучения описания. Например, селективность можно определить с применением вестерн-блоттинга, FACS (fluorescent-activated cell sorter FACS, клеточный сортер с возбуждением флуоресценции), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay ELISA, твердофазный иммуноферментный анализ) или R1A (radioimmunoassay - RIA, радиоиммуноанализ). Данное изобретение предлагает связывающий IGF-1R антигенсвязывающий протеин (например, антитело против IGF-1R), который имеет одну или несколько из следующих характеристик: связывает как человеческий, так и мышиный IGF-1R, ингибирует связывание IGF-1 и IGF-2 с человеческим IGF-1R,ингибирует связывание IGF-1 и IGF-2 с мышиным или крысиным IGF-1R, предпочтительно ингибирует высокоаффинное связывание IGF-1 и/или IGF-2 с IGF-1R, связывается с L2 областью IGF-1R, вызывает относительно малую даун-регуляцию клеточной поверхности, экспрессирующей IGF-1R после 17 часовой выдержки (по сравнению с МАВ 391 (RD systems, Minneapolis, MN); например, количествоIGF-1R уменьшается менее чем на 20%), вызывает уровень даун-регуляции клеточной поверхности, экс- 22015146 прессирующей IGF-1R на Со 1 о-205 или MiaPaCa-2 ксенотрансплантированных опухолевых клетках у мышей в виде МАВ 391 после четырех недель однонедельных доз в 200 мкг. Антигенсвязывающие фрагменты антигенсвязывающих протеинов, описанных в изобретении, можно получить с помощью стандартных методик. Примеры таких фрагментов включают Fab и F(ab')2 фрагменты, но выбор ими не ограничивается. Также рассматриваются фрагменты и дериваты антитела, полученные с помощью генной инженерии. Дополнительные варианты включают химерные антитела, например гуманизированные версии не принадлежащие человеческому роду (например, мышиные или крысиные) моноклональных антител. Такие гуманизированные антитела можно приготовить по известным методикам, и при введении антител людям дают преимущество в пониженной иммуногенности. В одном варианте гуманизированное моноклональное антитело включает вариабельную область мышиного антитела (или всю, или часть антигенсвязывающего центра ее) и константную область, полученную из человеческого антитела. Наоборот,фрагмент гуманизированного антитела может включать антигенсвязывающий центр мышиного моноклонального антитела и фрагмент вариабельной области (без антигенсвязывающего центра), полученный из человеческого антитела. Методики продуцирования химерных и других моноклональных антител,полученных генной инженерией, включают методики, описанные в работах Riechmann et al., 1988, Nature 332:323, Liu et al., 1987, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84:3439, Larrick et al., 1989, Bio/Technology 7:934, andWinter et al., 1993, TIPS 14:139. В одном варианте химерное антитело является CDR трансплантационным антителом. Методики гуманизирования антител обсуждаются, например, в опубликованной патентной заявке США U.S. Pat. App.10/194975 (опубликованной 27 февраля 2003 г.), в патентах США U.S. Pat.5869619, 5225539, 5821337, 5859205 и в работах Padlan et al., 1995, FASEB J. 9:133-39 и Tamura etal., 2000, J. Immunol. 164:1432-41. Были разработаны методики для генерирования человеческих или частично человеческих антител у не принадлежащих человеческому роду животных. Например, были получены мыши, у которых различными способами были инактивированы один или несколько эндогенных генов иммуноглобулина. Гены иммуноглобулина человека были введены в мыши для замены инактивированных мышиных генов. Антитела, продуцированные в животном, включают полипептидные цепи иммуноглобулина человека, кодируемые человеческим генетическим материалом, введенным в животное. В одном варианте не принадлежащие человеческому роду животное, как, например, трансгенную мышь, иммунизируют полипептидом IGF-1R, так что в животном генерируются антитела, направленные против полипептида IGF-1R. Одним примером соответствующего иммуногена является растворимый человеческий IGF-1R, как, например, полипептид, включающий внеклеточную область протеина, представленную на фиг. 10, или другой иммуногенный фрагмент протеина на фиг. 10. Примеры методик для получения и использования трансгенных животных для продуцирования человеческих или частично человеческих антител описываются в патентах США U.S. Patents 5814318, 5569825 и 5545806 и в монографиях и работах Davis et al., 2003, Production of human antibodies from transgenic mice in Lo, ed. Antibody Engineering: Methods and Protocols,Humana Press, NJ: 191-200, Kellermann et al., 2002, Curr Opin Biotechnol. 13:593-97, Russel et al., 2000, Infect Immun. 68:1820-26, Gallo et al., 2000, Eur J Immun. 30:534-40, Davis et al., 1999, Cancer Metastasis Rev. 18:421-25, Green, 1999, J Immunol Methods. 231:11-23, Jakobovits, 1998, Advanced Drag Delivery Reviews 31:33-42, Green et al., 1998, J Exp Med. 188:483-95, Jakobovits A, 1998, Exp. Opin. Invest. Drugs. 7:607-14,Tsuda et al., 1997, Genomics. 42:413-21, Mendez et al., 1997, Nat Genet. 15:146-56, Jakobovits, 1994, Currof Sciences USA 90: 3720-24, and Tuaillon et al., 1994, Journal of Immunology 152: 2912-20. Данное изобретение предлагает моноклональные антитела, которые связывают IGF-1R. Моноклональные антитела могут продуцироваться с помощью любой известной в данной области методики, например путем иммортализации клеток селезенки, собранных от трансгенного животного после завершения схемы иммунизации. Клетки селезенки могут иммортализироваться с помощью любой известной в данной области методики, например путем слияния их с миеломными клетками с получением гибридом. Миеломные клетки для применения в продуцирующих гибридомы методиках слияния предпочтительно являются антителонепродуцирующими, имеют высокую эффективность слияния и ферментативные недостаточности, которые делают их неспособными к росту в некоторых селективных средах, которые поддерживают рост только нужных слитых клеток (гибридом). Примеры соответствующих клеточных- 23015146 линий для применения в мышиных слияниях включают Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 и S194/5XXO Bul; примеры клеточных линий,применяемых в крысиных слияниях, включают R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F и 4 В 210. Другими клеточными линиями, пригодными для клеточных слияний, являются U-266, GM1500-GRG2, LICR-LONНМу 2 и UC729-6. В одном варианте гибридомную клеточную линию продуцируют иммунизацией животного (например, трансгенного животного с последовательностями иммуноглобулина человека) с иммуногеном IGF1R; сбором клеток селезенки от иммунизированного животного; слиянием собранных клеток селезенки с миеломной клеточной линией, тем самым, генерируя гибридомные клетки; созданием гибридомных клеточных линий из гибридомных клеток и идентификацией гибридомной клеточной линии, которая продуцирует антитело, которое связывает полипептид IGF-1R. Такие гибридомные клеточные линии и моноклональные антитела против IGF-1R, продуцированные ими, относятся к данному изобретению. Моноклональные антитела, секретируемые гибридомной клеточной линией, могут очищаться с применением любых известных в данной области методик. Гибридомы или mAbs могут дополнительно подвергаться скринингу (отбору) для определения mAbs с особыми свойствами, как, например, со способностью блокировать вызванную IGF-1 и/или IGF-2 активность. Примеры таких скринингов (отборов) предлагаются ниже в примерах. Молекулярная эволюция комплементарности определяющих участков (гипервариабельные участки)(CDRs) в центре антителосвязывающего центра также была использована для изолирования антител с повышенной аффинностью, например антител с повышенной аффинностью для с-erbB-2, как описано в работе Schier et al., 1996, J. Mol. Biol. 263:551. Таким образом, такие методики пригодны в приготовлении антител для IGF-1R. Антигенсвязывающие протеины, направленные против IGF-1R, могут применяться, например, в анализах для детектирования наличия полипептидов IGF-1R in vitro или in vivo. Антигенсвязывающие протеины также могут применяться в очистке протеинов IGF-1R с помощью иммуноаффинной хроматографии. Данные антигенсвязывающие протеины, которые дополнительно могут блокировать связываниеIGF-1 и/или IGF-2 с IGF-1R, могут применяться для ингибирования биологической активности, которая является следствием такого связывания. Блокирующие антигенсвязывающие протеины могут применяться в способах, описанных в данном изобретении. Такие антигенсвязывающие протеины, которые функционируют в качестве антагонистов IGF-1 и/или IGF-2, могут применяться при лечении любого вызванного IGF-1 и/или IGF-2 состояния, включая рак, но не ограничиваясь им. В одном варианте при лечении таких состояний применяют человеческое моноклональное антитело против IGF-1R, генерированное с помощью приемов, включающих иммунизацию трансгенной мыши. Антигенсвязывающие протеины могут применяться в методике in vitro или вводиться in vivo для ингибирования вызванной IGF-1 и/или IGF-2 биологической активности. Таким образом, можно лечить расстройства, вызванные или усиленные (прямо или косвенно) взаимодействием IGF-1 и/или IGF-2 с клеточной поверхностью IGF-1R, примеры которых приведены выше. В одном варианте данное изобретение предлагает терапевтический способ, включающий введение in vivo блокирующего IGF-1 и/илиIGF-2 антигенсвязывающего протеина млекопитающему, нуждающемуся в нем, в количестве, эффективном для снижения вызванной IGF-1 и/или IGF-2 биологической активности. Антигенсвязывающие протеины, описанные в изобретении, включают частично человеческие и полностью человеческие моноклональные антитела, которые ингибируют биологическую активностьIGF-1 и также ингибируют биологическую активность IGF-2. Один вариант относится к человеческому моноклональному антителу, которое, по меньшей мере, частично блокирует связывание IGF-1 и IGF-2 с клеткой, которая экспрессирует человеческий IGF-1R. В одном варианте антитела генерируются иммунизацией трансгенной мыши иммуногеном IGF-1R. В другом варианте иммуноген является полипептидом человеческого IGF-1R (например, растворимый фрагмент, включающий всю или часть внеклеточной области IGF-1R). В данном изобретении также предлагаются гибридомные клеточные линии, полученные от таких иммунизированных мышей, в которых гибридома секретирует моноклональное антитело,которое связывает IGF-1R. Хотя человеческие, частично человеческие или гуманизированные антитела будут пригодны для многих применений, особенно тех, которые включают введение антитела человеку, для некоторых применений будут пригодны другие типы антигенсвязывающих протеинов. Не принадлежащие человеческому роду антитела, описанные в изобретении, можно, например, получить из любого антителопродуцирующего животного, такого как мышь, крыса, кролик, козел, осел или не принадлежащий человеческому роду примат (такой как обезьяна (например, яванский макак или резус обезьяна) или человекообразная обезьяна (например, шимпанзе. Не принадлежащие человеческому роду антитела, описанные в изобретении, могут использоваться, например, в применениях in vitro и в клеточной культуре или любом другом применении, где иммунный ответ на антитело, описанное в изобретении, не происходит,является несущественным, может не допускаться, не иметь отношения или являться нежелательным. В одном варианте не принадлежащее человеческому роду антитело, описанное в изобретении, вводят не принадлежащему человеческому роду субъекту. В другом варианте не принадлежащее человеческому- 24015146 роду антитело не выявляет иммунного ответа у не принадлежащего человеческому роду субъекта. В другом варианте не принадлежащее человеческому роду антитело является антителом из того же самого вида, что и не принадлежащий человеческому роду субъект, например мышиное антитело, описанное в изобретении, вводят мыши. Антитело из особого вида можно приготовить, например, иммунизацией животного этого же вида с нужным иммуногеном (например, растворимый полипептид IGF-1R) или применением искусственной системы для генерирования антител этого же вида (например, бактериальная система или система на основе фагового дисплея для генерирования антител особого вида), или превращением антитела из одного вида в антитело из другого вида путем замены, например, константной области антитела константной областью из другого вида или путем замены одного или нескольких аминокислотных остатков антитела с тем, чтобы оно было более похоже на последовательность антитела из другого вида. В одном варианте антитело является химерным антителом, включающим аминокислотные последовательности, полученные из антител из двух или нескольких различных видов. Антигенсвязывающие протеины можно приготовить с помощью любого набора стандартных методик. Например, они могут очищаться от клеток, которые естественно экспрессируют их (например, антитело можно очистить от гибридомы, которая их продуцирует), или продуцироваться в рекомбинантных экспрессирующих системах с применением любой известной в данной области методики. См., например,Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.), PlenumLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1988). Для получения рекомбинантных полипептидов, описанных в изобретении, может применяться любая известная в данной области экспрессирующая система. Обычно, клетки-хозяин трансформируются рекомбинантным экспрессирующим вектором, который включает ДНК, кодирующую нужный полипептид. Среди клеток-хозяин, которые могут применяться, имеются прокариоты, дрожжевые или высшие эукариотические клетки. Прокариоты включают грамотрицательные и грамположительные организмы,например Е. coli или палочковидные бактерии. Высшие эукариотические клетки включают клетки насекомых и установленные клеточные линии млекопитающих. Примеры соответствующих линий клетокхозяина млекопитающих включают COS-7 линию клеток почки обезьяны (АТСС CRL 1651) (Gluzman etal., 1981, Cell 23:175), L клетки, 293 клетки, С 127 клетки, 3 Т 3 клетки (АТСС CCL 163), клетки яичника китайского хомячка (Chinese hamster ovary, CHO), HeLa клетки, ВНК (АТСС CRL 10) клеточные линии иCVI/EBNA клеточные линии, полученные из клеточной линии почки африканской зеленой обезьяны CVI(АТСС CCL 70), как описано в работе McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821. Соответствующие клонирующие и экспрессирующие векторы для применения с бактериальными, грибковыми, дрожжевыми и клеточными хозяинами млекопитающих описываются в монографии Pouwels et al. (Cloning Vectors: ALaboratory Manual., Elsevier, New York, 1985). Трансформированные клетки можно культивировать в условиях, которые стимулируют экспрессию полипептида, и полипептид можно выделить с помощью стандартных методик очистки протеина. Одна такая методика очистки включает применение аффинной хроматографии, например, на матрице полностью или частично связанного на ней IGF-1R (например, внеклеточная область). Полипептиды, предполагаемые для применения в данном изобретении, включают практически гомогенные полипептиды рекомбинантного антитела против IGF-1R млекопитающего практически без загрязняющих эндогенных материалов. Антигенсвязывающие протеины можно приготовить и провести скрининг (отбор) по нужным свойствам с помощью любого ряда известных методик. Некоторые из методик включают изолирование нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептидную цепь (или часть ее) представляющего интерес антигенсвязывающего протеина (например, антитело против IGF-1R), и воздействие нуклеиновой кислоты посредством метода рекомбинантных ДНК. Нуклеиновая кислота может сливаться с другой представляющей интерес нуклеиновой кислотой или изменяться (например, с помощью мутагенеза или других стандартных методик), например, для прибавления, удаления или замены одного или нескольких аминокислотных остатков. Данное изобретение предлагает антигенсвязывающие фрагменты антитела против IGF-1R, описанного в изобретении. Такие фрагменты могут полностью состоять из полученных из антитела последовательностей или могут включать дополнительные последовательности. Примеры антигенсвязывающих фрагментов включают Fab, F(ab')2, одноцепочечные антитела, димеры одноцепочечных антительных фракций, тримеры одноцепочечных антительных фракций, тетрамеры одноцепочечных антительных фракций и домен-специфические антитела. Другие примеры предлагаются в публикации Lunde et al.,2002, Biochem. Soc. Trans. 30:500-06. Одноцепочечные антитела могут образоваться путем соединения фрагментов вариабельных областей (Fv участок) тяжелой и легкой цепи через аминокислотный мостик (короткий пептидный линкер),приводя к единственной полипептидной цепи. Такие одноцепочечные Fvs (scFvs) были приготовлены при слиянии ДНК, кодирующей пептидный линкер между ДНК-ами, кодирующими полипептиды двух вариабельных областей (VL и VH). Полученные полипептиды можно отгибать в обратную сторону с образованием антигенсвязывающих мономеров или они могут образовать мультимеры (например, димеры,- 25015146 тримеры или тетрамеры) в зависимости от длины гибкого линкера между двумя вариабельными областями (Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10:423; Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108). Комбинированием разных VL- и VH-содержащих полипептидов могут образоваться мультимерные scFvs, которые связывают различные эпитопы (Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40). Методики, разработанные для получения одноцепочечных антител, включают методики, описанные в патенте США U.S. Patent4946778 и в работах Bird, 1988, Science 242:423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879; Ward et al.,1989, Nature 334:544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol Biol. 178:379-87. Одноцепочечные антитела, полученные из антител, предлагаемых в данном изобретении, включают scFvs, содержащие комбинации вариабельных областей L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11,L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18, L19H19, L20H20, L21H21, L22H22,L23H23, L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29, L30H30, L31H31, L32H32, L33H33,L34H34, L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40, L41H41, L42H42, L43H43, L44H44,L45H45, L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51 и L52H52, но выбор ими не ограничивается. Антигенсвязывающие протеины (например, антитела, фрагменты антител и дериваты антител),описанные в изобретении, могут включать любую известную константную область. Константная область легкой цепи может быть, например, константной областью легкой цепи - или -типа, например константной областью легкой цепи - или -типа человека. Константная область тяжелой цепи может быть,например, константной областью тяжелой цепи -, -, -, - или -типа, например константной областью тяжелой цепи -, -, -, - или -типа человека. В одном варианте константная область легкой или тяжелой цепи является фрагментом, дериватом, вариантом или мутеином встречающейся в природе константной области. Известны методики для получения антитела другого подкласса или изотипа из представляющего интерес антитела, т.е. переключение подкласса. Таким образом, IgG антитела могут получаться, например, из IgM антитела и наоборот. Такие методики позволяют приготовить новые антитела, которые обладают антигенсвязывающими свойствами данного антитела (родительское антитело), но также проявляют биологические свойства, связанные с изотипом или подклассом антитела, отличного от родительского антитела. Могут применяться методы рекомбинантных ДНК. В таких методиках может применяться клонированная ДНК, кодирующая отдельные полипептиды антитела, например ДНК, кодирующая константную область антитела нужного изотипа. См. также Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:303-16. В одном варианте антигенсвязывающий протеин, описанный в изобретении, включает область тяжелой цепи IgG1, приведенную на фиг. 13, или фрагмент области тяжелой цепи IgG1, приведенный на фиг. 13. В другом варианте антигенсвязывающий протеин, описанный в изобретении, включает константную область легкой -цепи, представленную на фиг. 13, или фрагмент константной области легкой-цепи, представленный на фиг. 13. В другом варианте антигенсвязывающий протеин, описанный в изобретении, включает как область тяжелой цепи IgG1 или фрагмент ее, приведенный на фиг. 13, так и область легкой -цепи или ее фрагмент, приведенный на фиг. 13. Таким образом, антигенсвязывающие протеины, описанные в изобретении, включают протеины,содержащие, например, комбинации вариабельных областей L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6,L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18,L19H19, L20H20, L21H21, L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29,L30H30, L31H31, L32H32, L33H33, L34H34, L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40,L41H41, L42H42, L43H43, L44H44, L45H45, L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51 иL52H52, имеющих нужный изотип (например, IgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgE и IgD), а также Fab или F(ab')2 фрагменты его. Кроме того, если нужен IgG4, он также может быть нужным для введения точковой мутации (CPSCPСРРСР) в шарнирную область, как описано у Bloom et al., 1997, Protein Science 6:407 (введено в изобретение в качестве ссылки), чтобы облегчить тенденции образования дисульфидных связей внутри Н-цепей, которые могут привести к гетерогенности в IgG4 антителах. Кроме того, также известны методики для получения антигенсвязывающих протеинов с другими свойствами (т.е. изменением аффинностей антигена, с которым они связываются). Одна такая методика,называемая перестановкой цепи, включает отображение наборов генов вариабельной области иммуноглобулина на поверхности нитевидного бактериофага, часто называемая фаговым дисплеем. Перестановка цепи была использована для получения антител высокой аффинности для гаптен 2-фенилоксазол-5-она,как описано в работе Marks et al., 1992, BioTechnology, 10:779. В отдельных вариантах антигенсвязывающие протеины, описанные в данном изобретении, имеют связывающую аффинность (Ka) для IGF-1R по меньшей мере 106, измеренную, как описано в примерах. В других вариантах антигенсвязывающие протеины показывают Ka по меньшей мере 107, по меньшей мере 108, по меньшей мере 109 или по меньшей мере 1010. В другом варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который имеет низкую скорость диссоциации из IGF-1R. В одном варианте антигенсвязывающий протеин имеет Koff,равную 110-4 с-1, или меньшую. В другом варианте Koff составляет 510-5 с-1 или меньше. В другом вари- 26015146 анте Koff является практически такой же, как у антитела с комбинацией последовательностей вариабельных областей легкой и тяжелой цепей, выбранных из группы комбинаций, состоящих из L1H1, L2H2,L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15,L16H16, L17H17, L18H18, L19H19, L20H20, L21H21, L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26,L27H27, L28H28, L29H29, L30H30, L31H31, L32H32, L33H33, L34H34, L35H35, L36H36, L37H37,L38H38, L39H39, L40H40, L41H41, L42H42, L43H43, L44H44, L45H45, L46H46, L47H47, L48H48,L49H49, L50H50, L51H51 и L52H52. В другом варианте антигенсвязывающий протеин связывает IGF-1R практически с такой же Koff, что и антитело, которое включает один или несколько CDRs из антитела с комбинацией последовательностей вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, выбранных из группы комбинаций, состоящих из L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7, L8H8, L9H9, L10H10,L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18, L19H19, L20H20, L21H21,L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29, L30H30, L31H31, L32H32,L33H33, L34H34, L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40, L41H41, L42H42, L43H43,L44H44, L45H45, L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51 и L52H52. В другом варианте антигенсвязывающий протеин связывает IGF-1R практически с такой же Koff, что и антитело, которое включает одну из аминокислотных последовательностей, приведенных на фиг. 2-9. В другом варианте антигенсвязывающий протеин связывает IGF-1R практически с такой же Koff, что и антитело, которое включает один или несколько CDRs из антитела, которое включает одну из аминокислотных последовательностей, приведенных на фиг. 2-9. В данном изобретении предлагается антигенсвязывающий протеин, который связывается с L2 областью человеческого IGF-1R. Антигенсвязывающие протеины, которые связываются с L2 областью, можно получить с помощью любой известной в данной области методики. Например, такие антигенсвязывающие протеины можно изолировать с помощью первичного полипептида IGF-1R (например, связанным в мембране препаратом), растворимого фрагмента внеклеточной области IGF-1R (пример которого приводится в примере 1), или меньшего фрагмента внеклеточной области IGF-1R, включающего или состоящего из L2 области (примеры которого приводятся в примере 10). Таким образом изолированные антигенсвязывающие протеины можно подвергнуть скринингу для определения их связывающей специфичности, используя любой известный в данной области способ (пример которого приведен в примере 10). Данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который связывает человеческийIGF-1R, экспрессирующий на поверхности клетки, и при таком связывании ингибирует активность передачи сигнала IGF-1R в клетке, не вызывая существенного уменьшения количества IGF-1R на поверхности клетки. Для определения или оценки количества IGF-1R на поверхности и/или на внутренней стороне клетки можно применять любой способ. В одном варианте данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин, который связывается с L2 областью человеческого IGF-1R, экспрессирующего на поверхности клетки, и при таком связывании ингибирует активность передачи сигнала IGF-1R в клетке без существенного увеличения скорости интернализации IGF-1R из поверхности клетки. В других вариантах связывание антигенсвязывающего протеина с экспрессирующей IGF-1R клеткой вызывает менее чем приблизительно 75, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 5, 1 или 0,1% интернализацию клеточной поверхности IGF-1R. В другом варианте связывание антигенсвязывающего протеина с экспрессирующей IGF-1R клеткой вызывает постепенное уменьшение количества IGF-1R на клеточной поверхности, так что в пределах нескольких часов контактирования клетки с антигенсвязывающим протеином обнаруживается небольшое уменьшение или не обнаруживается уменьшения IGF-1R на поверхности клетки, но после нескольких дней или недель выдержки клетки с антигенсвязывающим протеином обнаруживается заметное уменьшение IGF-1R на поверхности клетки. Данное изобретение предлагает антигенсвязывающий протеин с временем полужизни in vitro или invivo по меньшей мере один день (например, при введении человеку). В одном варианте антигенсвязывающий протеин имеет время полужизни по меньшей мере три дня. В другом варианте антигенсвязывающий протеин имеет время полужизни четыре дня или больше. В другом варианте антигенсвязывающий протеин имеет время полужизни восемь дней или больше. В другом варианте антигенсвязывающий протеин дериватизируют или модифицируют так, что он имеет более продолжительное время полужизни по сравнению с недериватизированным или немодифицированным антигенсвязывающим протеином. В другом варианте антигенсвязывающий протеин содержит одну или несколько точковых мутаций для увеличения времени полужизни в кровяном русле, как, например, описано в WO 00/09560, опубликованной 24 февраля 2000 г., приведенной в качестве ссылки. Кроме того, данное изобретение предлагает мультиспецифические антигенсвязывающие протеины,например биспецифический антигенсвязывающий протеин, например антигенсвязывающий протеин,который связывает два разных эпитопа IGF-1R или эпитоп IGF-1R и эпитоп другой молекулы через два различных антигенсвязывающих центра или участка. Кроме того, биспецифический антигенсвязывающий протеин, как описано в данном изобретении, может включать IGF-1R связывающий центр от одного из описанных в данном изобретении антител и второй IGF-1R связывающий участок от другого из опи- 27015146 санных в данном изобретении антител, включая антитела, описанные в данном изобретении со ссылкой на другие публикации. Наоборот, биспецифический антигенсвязывающий протеин может включать антигенсвязывающий центр от одного из описанных в данном изобретении антител и второй антигенсвязывающий центр от другого антитела IGF-1R, которое известно в данной области, или от антитела, которое получают известными способами или способами, описанными в данном изобретении. Многочисленные способы получения биспецифических антител известны в данной области и обсуждаются в патентной заявке США US Patent Application 09/839632, поданной 20 апреля 2001 г. (введенной в данное изобретение в качестве ссылки). Такие способы включают применение межвидовых гибридом, как описано у Milstein et al., 1983, Nature 305:537, и др. (U.S. Patent 4474893, U.S. Patent 6106833), и химического связывания фрагментов антител (Brennan et аl., 1985, Science 229:81; Glennie et al., 1987, J.Immunol. 139:2367; U.S. Patent 6010902). Кроме того, биспецифические антитела можно получить посредством рекомбинантных способов, например, с помощью остатков лейциновых застежек(т.е. изFos и Jun протеинов, которые предпочтительно образуют гетеродимеры; Kostelny et al., 1992, J. Immnol. 148:1547) или других интерактивных структурных областей замкаи ключа , как описано в патенте США U.S. Patent 5582996. Дополнительные пригодные методики включают методики, описанные в работе Kortt et al., 1997, supra; и патентах США U.S. Patent 5959083 и U.S. Patent 5807706. Антигенсвязывающий протеин, описанный в данном изобретении, включает дериват антитела. Дериватизированное антитело может включать любую молекулу или вещество, которое придает нужное свойство антителу, как, например, увеличенное время полужизни в отдельном применении. Дериватизированное антитело может включать, например, детектируемый (или меченый) остаток (например, радиоактивная, колориметрическая, антигенная или ферментативная молекула, детектируемая гранула (как,например, магнитная или electrodense(например, золотая) гранула) или молекула, которая связывается с другой молекулой (например, биотин или стрептавидин, терапевтический или диагностический остаток (например, радиоактивный, цитотоксический или фармацевтически активный остаток), или молекулу, которая увеличивает соответствие антитела определенному применению (например, введение субъекту, как, например, человеку, или другие применения in vivo или in vitro). Примеры молекул, которые могут применяться для дериватизации антитела, включают альбумин (например, человеческий сывороточный альбумин) и полиэтиленгликоль (ПЭГ) (polyethylene glycol, PEG). Соединенные с альбумином и ПЭГ (ПЭГилированные) дериваты антител можно приготовить с помощью известных в данной области методик. В одном варианте антитело конъюгируется или, иначе, соединяется с транстиретином(transthyretin, TTR) или вариантом TTR. TTR или вариант TTR может химически модифицироваться, например, химическим реагентом, выбранным из группы, состоящей из декстрана, поли(нвинилпирролидона), полиэтиленгликолей, гомополимеров пропиленгликоля, сополимеров полипропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированных полиолов и поливиниловых спиртов. Патентная заявка США US Pat. App.20030195154. Данное изобретение предлагает способы скрининга для молекулы, которая связывается с IGF-1R с помощью антигенсвязывающих протеинов, описанных в данном изобретении. Для проведения скрининга может применяться любая пригодная методика. В одном варианте молекула IGF-1R или ее фрагмент, с которым антигенсвязывающий протеин, описанный в данном изобретении, связывается, контактирует с антигенсвязывающим протеином, описанным в изобретении, и с другой молекулой, где другая молекула связывается с IGF-1R, если она уменьшает связывание антигенсвязывающего протеина с IGF-1R. Связывание антигенсвязывающего протеина можно обнаружить с помощью любого приемлемого способа, например ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, твердофазный иммуноферментный анализ). Детектирование связывания антигенсвязывающего протеина с IGF-1R можно упростить с помощью введения детектируемой метки в антигенсвязывающий протеин, как рассматривалось выше. В другом варианте связывающую IGF-1R молекулу дополнительно анализируют для определения того, ингибирует ли она опосредованную IGF-1R, IGF-1 и/или IGF-2 передачу сигнала. Нуклеиновые кислоты. Данное изобретение предлагает изолированные молекулы нуклеиновых кислот. Нуклеиновые кислоты включают, например, полинуклеотиды, которые кодируют весь антигенсвязывающий протеин или часть его, например, одну или обе цепи антитела, описанного в изобретении, или его фрагмент, дериват,мутеин или вариант; достаточное количество полинуклеотидов для применения в качестве зондов гибридизации, праймеров полимеразной реакции синтеза цепи (PCR, polymerase chain reaction) или праймеров секвенирования для идентификации, анализа, мутации или амплификации полинуклеотида, кодирующего полипептид; антисмысловые нуклеиновые кислоты для ингибирования экспрессии полинуклеотида и комплементарные последовательности их. Нуклеиновые кислоты могут быть любой длины. Они могут содержать, например, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450,500, 750, 1000, 1500, 3000, 5000 или более нуклеотидов в цепи и/или могут включать одну или несколько дополнительных последовательностей, например регуляторные последовательности, и/или являться частью большей нуклеиновой кислоты, например вектором. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными и могут включать нуклеотиды РНК и/или ДНК и искусственные вариан- 28015146 ты их (например, пептидные нуклеиновые кислоты). Нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды антител (например, только вариабельную область тяжелой или легкой цепи или первичный полипептид), можно изолировать из В-клеток мышей,которые были иммунизированы IGF-1R. Нуклеиновую кислоту можно изолировать стандартными методиками, как, например, полимеразной реакцией синтеза цепи (polymerase chain reaction, PCR). Фиг. 1 относится к последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельные области тяжелой цепи и вариабельные области легкой цепи, приведенные на фиг. 2 и 3. Для специалистов понятно, что вследствие вырождения генетического кода каждая из полипептидных последовательностей на фиг. 2-9 также кодируется большим количеством последовательностей других нуклеиновых кислот. Данное изобретение предлагает каждую вырожденную нуклеотидную последовательность, кодирующую каждый антигенсвязывающий протеин, описанный в изобретении. Изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, которые гибридизируются с другими нуклеиновыми кислотами (например, нуклеиновыми кислотами, включающими нуклеотидную последовательность, приведенную на фиг. 1) при определенных условиях гибридизации. Методы гибридизации нуклеиновых кислот хорошо известны в данной области техники. См., например, Current Protocols in Molecular Biology, John WileySons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Как определено в данном изобретении, умеренно жесткое условие гибридизации применяет раствор для предварительной промывки, содержащий 5X хлорида натрия/цитрата натрия (sodium chloride/sodium citrate, SSC), 0,5% SDS (sodium dodecyl sulfate,додецилсульфат натрия), 1,0 мМ EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid, этилендиаминтетрауксусная кислота, рН 8,0), буфер для гибридизации из 50% формамида, 6 Х SSC, и температуру гибридизации 55 С(или другие аналогичные растворы для гибридизации, как, например, содержащий около 50% формамида, с температурой гибридизации 42 С) и условия для промывки при температуре 60 С, в 0,5 Х SSC, 0,1%SDS. Жесткое условие гибридизации гибридизирует в 6 Х SSC при 45 С с последующей одной или несколькими промывками в 0,1 Х SSC, 0,2% SDS при 68 С. Кроме того, специалист в данной области техники может манипулировать условиями гибридизации и/или промывки, чтобы увеличить или уменьшить точность гибридизации с тем, чтобы нуклеиновые кислоты, содержащие нуклеотидные последовательности, которые по меньшей мере на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентичны друг другу, обычно оставались бы гибридизованными друг с другом. Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и рекомендации для разработки соответствующих условий излагаются в: Sambrook,Fritsch, and Manlatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual., Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 9 and 11; и Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al.,eds., John WileySons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4) и могут легко определяться специалистом в данной области техники, основываясь, например, на длине цепи и/или составе оснований ДНК. Изменения в нуклеиновую кислоту могут вводиться с помощью мутации, тем самым, приводя к изменениям в аминокислотной последовательности полипептида (например, антигенсвязывающий протеин), которую он кодирует. Мутации могут вводиться с помощью любой известной в данной области методики. В одном варианте один или несколько определенных аминокислотных остатков заменяются с применением, например, схемы сайтнаправленного мутагенеза. В другом варианте один или несколько рандоминизированно выбранных остатков изменяют с помощью, например, схемы неспецифического мутагенеза. Однако мутантный полипептид может экспрессироваться и подвергаться скринингу для получения нужного свойства (например, связывание с IGF-1R или блокирование связывания IGF-1 и/илиIGF-2 с IGF-1R). Мутации могут вводиться в нуклеиновую кислоту без существенного изменения биологической активности полипептида, которую он кодирует. Например, можно получить нуклеотидные замены, приводящие к аминокислотным заменам в заменимых аминокислотных остатках. В одном варианте нуклеотидная последовательность, представленная на фиг. 1, или ее нужный фрагмент, вариант или дериват мутируется так, что кодирует аминокислотную последовательность, включающую одно или несколько удалений или замен аминокислотных остатков, которые приведены на фиг. 2-9, являясь остатками, где две или несколько последовательностей отличаются. В другом варианте мутагенез вставляет аминокислоту по соседству с одним или несколькими аминокислотными остатками, приведенными на фиг. 2-9,которые являются остатками, где две или несколько последовательностей отличаются. Или же одна или несколько мутаций могут вводиться в нуклеиновую кислоту, которая селективно изменяет биологическую активность (например, связывание IGF-1R, ингибирование IGF-1 и/или IGF-2 и т.д.) полипептида,которую он кодирует. Например, мутация может количественно или качественно изменить биологическую активность. Примеры количественного изменения включают увеличение, уменьшение или исключение активности. Примеры качественных изменений включают изменение антигенной специфичности антигенсвязывающего протеина. Данное изобретение предлагает молекулы нуклеиновых кислот, которые пригодны для применения в качестве праймеров или гибридизационных зондов для детектирования описанных в изобретении последовательностей нуклеиновых кислот. Молекула нуклеиновой кислоты по предлагаемому изобретению может включать только часть последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей первичный полипептид, описанный в изобретении, например фрагмент, который может применяться в качестве зон- 29