Композиции антитела против cd3

КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛА ПРОТИВ CD3 Настоящее изобретение относится к терапевтическим, диагностическим и/или профилактическим композициям и дозировкам антител против CD3, а также к способам применения указанных композиций и дозировок. 014025 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к композиции и дозировке антител против CD3, а также к способам их применения. Уровень техники изобретения Доказано, что антитела к сигнальной молекуле CD3-эпсилон рецепторного комплекса Т-клеток могут применяться в качестве иммуносупрессоров и при лечении аутоиммунных нарушений. Поэтому усовершенствованные способы получения антител против CD3, способы очистки антител против CD3 и фармацевтические композиции, содержащие антитела против CD3, должны оказаться полезными. Сущность изобретения Настоящее изобретение предлагает композицию и дозировку моноклональных антител, специфически направленных против CD3. Изобретение также предлагает способы производства моноклональных антител против CD3 и способы очистки антител против CD3. Фармацевтические композиции антитела против CD3, описанные в настоящем изобретении, включают pH-буферное средство, эффективное в диапазоне 3,0-6,2; соль; поверхностно-активное вещество и фармацевтически эффективное количество антитела против CD3. Соль представляет собой, например, хлорид натрия; поверхностно-активное вещество представляет собой, например, ионное, анионное или цвиттер-ионное поверхностно-активное вещество. Например,поверхностно-активное вещество представляет собой ионное поверхностно-активное вещество, такое как полисорбат, например полисорбат 80. pH-буферное средство включает, например, ацетат натрия. В некоторых вариантах осуществления pH-буферное средство выбирают из цитрата натрия/лимонной кислоты и ацетата натрия/уксусной кислоты.pH-буферное средство эффективно в диапазоне 10-50 мМ. pH-буферное средство, применяемое в композициях, описанных в настоящем изобретении, обеспечивает диапазон pH 5,0-6,0. Например, pHбуферное средство обеспечивает диапазон pH 5,2-5,8. В некоторых вариантах осуществления pHбуферное средство обеспечивает диапазон pH 5,4-5,6. Например, pH-буферное средство обеспечивает pH приблизительно 5,5. В композициях, описанных в настоящем изобретении, соль содержится в количестве 100140 мМ. Поверхностно-активное вещество составляет 0,02% вес./об. Фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,05-10 мг антитела против CD3. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,1-5,0 мг антитела против CD3. Например, фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом,чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,5-3,0 мг антитела против CD3. В композициях антител против CD3, описанных в настоящем изобретении, антитело против CD3 представляет собой, например, 28F11, 27 Н 5, 23F10, 15 С 3, Ортоклон OKT3, OKT31 человека (HOKT31) или ChAglyCD3. Фармацевтические композиции антител против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении,включают pH-буферное средство, содержащее ацетат натрия, эффективное в диапазоне 3,0-6,2, хлорид натрия, поверхностно-активное вещество, содержащее полисорбат, и фармацевтически эффективное количество антитела против CD3. Полисорбат представляет собой, например, полисорбат 80. pH-буферное средство эффективно в диапазоне 10-50 мМ. pH-буферное средство, используемое в композициях, описываемых в настоящем изобретении, обеспечивает диапазон pH 5,0-6,0. Например, pH-буферное средство обеспечивает диапазон pH 5,2-5,8. В некоторых вариантах осуществления pH-буферное средство обеспечивает диапазон pH 5,4-5,6. Например, pH-буферное средство обеспечивает pH приблизительно 5,5. В фармацевтических композициях, описываемых в настоящем изобретении, соль содержится в количестве 100-140 мМ. Поверхностно-активное вещество составляет 0,02% вес./об. Фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,05-10 мг антитела против CD3. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически эффективное антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,1-5,0 мг антитела против CD3. Например, фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,5-3,0 мг антитела против CD3. Антитело против CD3 представляет собой, например, 28F11,27 Н 5, 23F10, 15 С 3, Ортоклон OKT3, OKT31 человека (HOKT31) или ChAglyCD3. В одном варианте осуществления композиций антитела против CD3, предлагаемых в настоящем изобретении, фармацевтическая композиция содержит эффективное количество антитела против CD3 на одну дозу в диапазоне 0,5-3,0 мг, 1-3 мг ацетата натрия, 5-9 мг хлорида натрия и 0,1-0,3 мкг полисорбата 80, так что композицию доводят до 1,0 мл с помощью воды. Например, фармацевтическая композиция содержит 2,05 мг ацетата натрия, 7,31 мг хлорида натрия и 0,216 мкг полисорбата 80. pH фармацевтической композиции составляет, например, 5,5.-1 014025 Также в настоящем описании предлагаются способы лечения аутоиммунного заболевания или воспалительного нарушения у субъекта путем введения субъекту эффективной дозы антитела против CD3,определенной таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,05-10 мг антитела против CD3 в день в течение пяти дней. Например, эффективную дозу антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,1-5,0 мг антитела противCD3 в день в течение пяти дней. Предпочтительно эффективную дозу антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,5-3,0 мг антитела против CD3 в день в течение пяти дней. В способах, описываемых в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят внутривенно. Например, композицию вводят путем продолжительного внутривенного вливания. Также в настоящем описании предлагаются способы лечения или профилактики отторжения трансплантата у субъекта путем введения субъекту после или одновременно с трансплантацией антитела против CD3 в эффективной дозе и увеличения дозы каждый день с этого времени до тех пор, пока не будет достигнуто 50% или большее насыщение TCR-CD3, с последующими 5 дневными дозами, с тем чтобы полный курс лечения не превышал восьми дней. В способах, описываемых в настоящем изобретении,композицию антитела против CD3 вводят внутривенно. Например, композицию вводят путем продолжительного внутривенного вливания. Предпочтительно эффективная доза антитела против CD3 приводит к уровню высвобождения цитокинов менее 3 по шкале токсичности WHO. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,15,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Примеры моноклональных антител включают 28F11, 27 Н 5, 23F10 и 15 С 3, предлагаемые в настоящем изобретении, так же как Ортоклон OKT3, OKT31 человека (HOKT31) и ChAglyCD3. Предпочтительно моноклональное антитело представляет собой антитело, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и 28F11, 27 Н 5, 23F10 или 15 С 3. Также предпочтительно, чтобы антитела представляли собой полностью человеческие антитела ("huCD3 антитела"). Антитело против CD3 обладает одним или несколькими из следующих характерных признаков: антитело связывается с CD3-положительными (CD3+) клетками, но не с CD3-отрицательными (CD3-) клетками; антитело против CD3 вызывает антигенную модуляцию, которая приводит к изменению (например, уменьшению) уровня экспрессии на клеточной поверхности или активности CD3 или Т-клеточного рецептора (TCR); антитело против CD3 ингибирует связывание мышиного моноклонального антитела против OKT3 человека с Т-лимфоцитами; или антитело против CD3 связывается с эпитопом CD3, который полностью или частично включает аминокислотную последовательность EMGGITQTPYKVSISGT (SEQ ID NO: 57). Антитело против CD3 конкурирует с мышиным антителом OKT3 против CD3 за связывание с CD3, и воздействие антитела против CD3 удаляет или маскирует CD3 и/или TCR, не оказывая влияния на экспрессию на клеточной поверхности CD2,CD4 или CD8. Ингибирование связывания мышиного античеловеческого моноклонального антитела против OKT3 человека с Т-лимфоцитом определяют как уменьшение способности мышиного антитела OKT3 образовывать комплекс с CD3 на клеточной поверхности Т-лимфоцита. Антитело против CD3 содержит вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 6, 10 или 22, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, 8, 16-20 или 25-26. Предпочтительно три CDR тяжелой цепи включают аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90, 92, 95, 97 98, 99% или более идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из GYGMH (SEQ ID NO: 27);IIWYDGSKKNYADSVKG (SEQ ID NO: 34); GTGYNWFDP (SEQ ID NO: 35) и AIWYNGRKQDYADSVKG (SEQ ID NO: 44), и легкая цепь с тремя CDR, которые включают аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90, 92, 95, 97 98, 99% или более идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из аминокислотной последовательности RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 30); DASNRAT (SEQ ID NO: 31); QQRSNWPPLT (SEQ ID NO: 32); RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 36);NO: 43); QQRSNWPWT (SEQ ID NO: 45); DASSLES (SEQ ID NO: 46) и QQFNSYPIT (SEQ ID NO: 47). Антитело связывается с CD3. Антитело против CD3, предлагаемое в настоящем изобретении, проявляет по меньшей мере два или более (а именно два или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, десять или более, одиннадцать или более) из следующих характерных признаков: антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи (VH), кодируемый последовательностью VH гена зародышевого типа DP50 человека или последовательностью нуклеиновой-2 014025 кислоты, которая гомологична последовательности VH гена зародышевого типа DP50 человека; антитело содержит вариабельный участок легкой цепи (VL), кодируемый последовательностью VL гена зародышевого типа L6 человека или последовательностью нуклеиновой кислоты, которая гомологична последовательности VL гена зародышевого типа L6 человека; антитело содержит VL, кодируемый последовательностью VL гена зародышевого типа L4/18a человека или последовательностью нуклеиновой кислоты,которая гомологична последовательности VL гена зародышевого типа L4/18a человека; антитело включает CDR1 участок VH, содержащий аминокислотную последовательность YGMH (SEQ ID NO: 58); антитело включает CDR2-участок VH, содержащий аминокислотную последовательность DSVKG (SEQ IDIWYX1GX2X3X4X5YX6DSVKG (SEQ ID NO: 60); антитело включает CDR3-участок VH, содержащий аминокислотную последовательность XAXBGYXCXDFDXE (SEQ ID NO: 61); антитело включает CDR3 участок VH, содержащий аминокислотную последовательность GTGYNWFDP (SEQ ID NO: 62) или аминокислотную последовательность QMGYWHFDL (SEQ ID NO: 63); антитело включает аминокислотную последовательность VTVSS (SEQ ID NO: 64) в положении, которое является С-концевым по отношению к CDR3-участку, где указанное положение находится в вариабельном участке, С-концевом по отношению к CDR3-участку; антитело включает аминокислотную последовательность GTLVTVSS (SEQ ID NO: 65) в положении, которое является С-концевым по отношению к CDR3-участку, где указанное положение находится в вариабельном участке, С-концевом по отношению к CDR3-участку; антитело включает аминокислотную последовательность WGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 66) в положении, которое является С-концевым по отношению к CDR3-участку, где указанное положение находится в вариабельном участке, С-концевом по отношению к CDR3-участку; антитело связывается с эпитопом, который полностью или частично включает аминокислотную последовательность EMGGITQTPYKVSISGT (SEQ ID NO: 57); и антитело содержит мутацию в тяжелой цепи в аминокислотном остатке в положении 234, 235, 265 или 297 или их комбинации, и при которой высвобождение цитокинов из Т-клетки в присутствии указанного антитела снижено по сравнению с высвобождением цитокинов из Т-клетки в присутствии антитела, которое не содержит мутацию в тяжелой цепи в положении 234, 235, 265 или 297 или их комбинации. Нумерация остатков тяжелой цепи, предлагаемая в настоящем описании, является нумерацией EU index (см.Kabat et al., "Proteins of Immunological Interest", US Dept. of HealthHuman Services (1983, как показано, например, в патентах США 5624821 и 5648260, содержание которых таким образом полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Антитело против CD3 может содержать мутацию аминокислоты. Обычно мутация присутствует в константном участке. Результатом мутации является антитело, имеющее измененную эффекторную функцию. Эффекторная функция антитела изменяется путем изменения, а именно увеличения или уменьшения, сродства антитела к эффекторной молекуле, такой как Fc рецептор или компонент комплемента. Например, результатом мутации является антитело, которое способно уменьшать высвобождение цитокинов из Т-клетки. Например, мутация присутствует в тяжелой цепи в аминокислотном остатке 234,235, 265 или 297 или их комбинации. Предпочтительно результатом мутации является остаток аланина в любом из положений 234, 235, 265 или 297, или остаток глутамата в положении 235, или их комбинация. Термин "цитокин" относится ко всем известным цитокинам человека, которые связываются с внеклеточными рецепторами, экспрессируемыми на клеточной поверхности, и посредством этого модулируют функции клетки, включая, без ограничения, IL-2, IFN-, TNF-, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 и IL-13. Предпочтительно антитело против CD3, предлагаемое настоящим изобретением, содержит одну или несколько мутаций, которые предотвращают опосредованное константным участком тяжелой цепи высвобождение одного или нескольких цитокина(ов) in vivo. Полностью человеческие CD3 антитела, предлагаемые настоящим изобретением, содержат, например, мутацию L234 L235 А 234 Е 235 в Fc-участке, так что высвобождение цитокинов под воздействием антитела против CD3 значительно уменьшается или прекращается. Как описано ниже в примере 4, мутацияL234 L235 А 234 Е 235 в Fc-участке антител против CD3, предлагаемых настоящим изобретением, уменьшает или прекращает высвобождение цитокинов, когда антитела против CD3 подвергается воздействию лейкоцитов человека, тогда как мутации, описанные ниже, сохраняют значительную способность высвобождения цитокинов. Например, значительное уменьшение высвобождения цитокинов определяют при сравнении высвобождения цитокинов при воздействии антитела против CD3, имеющего мутацию L234L235 А 234 Е 235 в Fc-участке, с уровнем высвобождения цитокинов при воздействии другого антитела против CD3, имеющего одну или несколько из мутаций, описанных ниже. Другие мутации в Fc-участке включают, например, L234 L235 А 234 A235, L235E235, N297A297 и D265A265. В альтернативном варианте антитело против CD3 кодируется нуклеиновой кислотой, которая содержит одну или несколько мутаций, которые заменяют остаток нуклеиновой кислоты остатком нуклеиновой кислоты зародышевого типа. Под "остатком нуклеиновой кислоты зародышевого типа" понимается остаток нуклеиновой кислоты, который встречается в природе в гене зародышевого типа, кодирующем константный или вариабельный участок. Таким образом, антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, содержат одну или несколько мутаций, которые заменяют нуклеиновую кислоту остатком-3 014025 нуклеиновой кислоты зародышевого типа. Гены антитела зародышевого типа включают, например,DP50 (Номер доступа: IMGT/EMBL/GenBank/DDBJ:L06618),L6 (Номер доступа: IMGT/EMBL/GenBank/DDBJ:X01668) иL4/18a (Номер доступа: EMBL/GenBank/DDBJ:Z00006). Тяжелая цепь антитела huCD3 происходит из V (вариабельного) гена зародышевого типа, такого как, например, ген зародышевого типа DP50. Последовательности нуклеиновых кислот и аминокислот гена зародышевого типа DP50 включают, например, последовательности нуклеиновых кислот и аминокислот, представленные ниже Антитела huCD3 включают вариабельный участок тяжелой цепи (VH), кодируемый последовательностью VH гена зародышевого типа DP50 человека. Последовательность VH гена зародышевого типаDP50 показана, например, в SEQ ID NO: 48 на фиг. 5. Антитела huCD3, предлагаемые в настоящем изобретении, включают VH-участок, который кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80% гомологична последовательности VH гена зародышевого типа DP50. Предпочтительно последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 90, 95, 96, 97% гомологична последовательности VH гена зародышевого типа DP50 и более предпочтительно по меньшей мере на 98, 99% гомологична последовательности VH гена зародышевого типа DP50. VH-участок антитела huCD3 по меньшей мере на 80% гомологичен аминокислотной последовательности VH-участка,кодируемого последовательностью VH гена зародышевого типа DP50. Предпочтительно аминокислотная последовательность VH-участка антитела huCD3 по меньшей мере на 90, 95, 96, 97% гомологична аминокислотной последовательности, кодируемой последовательностью VH гена зародышевого типа DP50 и более предпочтительно по меньшей мере на 98, 99% гомологична последовательности, кодируемой последовательностью VH гена зародышевого типа DP50. Антитела huCD3 также включают вариабельный участок легкой цепи (VL), кодируемый последовательностью VL гена зародышевого типа L6 или L4/18a человека. Последовательность VL гена зародышевого типа L6 человека показана, например, в SEQ ID NO: 56 на фиг. 6, а последовательность VL гена зародышевого типа L4/18a человека показана, например, в SEQ ID NO: 53 на фиг. 7. В альтернативном варианте антитела huCD3 включают VL-участок, который кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80% гомологична последовательности VL гена зародышевого типаL6 или L4/18a. Предпочтительно последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 90, 95,96, 97% гомологична последовательности VL гена зародышевого типа L6 или L4/18a и более предпочтительно по меньшей мере на 98, 99% гомологична последовательности VL гена зародышевого типа L6 илиL4/18a. VL-участок антитела huCD3 по меньшей мере на 80% гомологичен аминокислотной последовательности VL-участка, кодируемого последовательностью VL гена зародышевого типа L6 или L4/18a. Предпочтительно аминокислотная последовательность VL-участка антитела huCD3 по меньшей мере на 90, 95, 96, 97% гомологична аминокислотной последовательности, кодируемой последовательностью VL гена зародышевого типа L6 или L4/18a и более предпочтительно по меньшей мере на 98, 99% гомологична последовательности, кодируемой последовательностью VL гена зародышевого типа L6 или L4/18a. Антитела huCD3 имеют, например, частично консервативные аминокислотные последовательности,которые происходят из гена DP50 зародышевого типа. Например, CDR1 участок антител huCD3, используемых в настоящем изобретении, имеет, по меньшей мере, непрерывную аминокислотную последовательность YGMH (SEQ ID NO: 58).CDR2 антител против CD3 включает, например, по меньшей мере, непрерывную аминокислотную последовательность DSVKG (SEQ ID NO: 59). Например, участок CDR2 включает непрерывную аминокислотную последовательность IWYX1GX2X3X4X5YX6DSVKG (SEQ ID NO: 60), где X1, X2, X3, X4, Х 5 и Х 6 представляют собой любую аминокислоту. Например, X1, X2, Х 3 и Х 4 представляют собой гидрофильные аминокислоты. В некоторых антителах против CD3, используемых в настоящем изобретении, X1 представляет собой аспарагин или аспартат, Х 2 представляет собой аргинин или серин, Х 3 представляет собой лизин или аспарагин, Х 4 представляет собой лизин или глутамин, Х 5 представляет собой аспартат,аспарагин или тирозин и/или Х 6 представляет собой валин или аланин. Например, CDR2 участок VH включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из AIWYNGRKQDYADSVKG (SEQ ID NO: 69), IIWYDGSKKNYADSVKG (SEQ ID NO: 70), VIWYDGSKKYYVDSVKGCDR3-участок антител против CD3 содержит, например, по меньшей мере, непрерывную аминокислотную последовательность XAXBGYXCXDFDXE (SEQ ID NO: 61), где ХА, XB, XC, XD и ХЕ представляют собой любую аминокислоту. В некоторых антителах против CD3, используемых в настоящем изобретении, ХА и XB представляют собой нейтральные аминокислоты, XD представляет собой ароматическую аминокислоту, и/или при этом ХЕ представляет собой гидрофобную аминокислоту. Например, ХА представляет собой глицин или глутамин, XB представляет собой треонин или метионин, XC представляет собой аспарагин или триптофан, XD представляет собой триптофан или гистидин и/или ХЕ представляет собой пролин или лейцин. Например, CDR3-участок включает или непрерывную аминокислотную последовательность GTGYNWFDP (SEQ ID NO: 62), или непрерывную аминокислотную последовательность QMGYWHFDL (SEQ ID NO: 63). Антитела против CD3 включают каркасную область 2 (FRW2), которая содержит аминокислотную последовательность WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO: 73). Антитела против CD3, используемые в настоящем изобретении, включают каркасную область 3 (FRW3), которая содержит аминокислотную последовательность RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA (SEQ ID NO: 74). Некоторые антитела против CD3 включают непрерывную аминокислотную последовательностьVTVSS (SEQ ID NO: 64) в положении, которое является С-концевым по отношению к CDR3-участку. Например, антитело содержит непрерывную аминокислотную последовательность GTLVTVSS (SEQ IDNO: 65) в положении, которое является С-концевым по отношению к CDR3-участку. Другие антитела против CD3 включают непрерывную аминокислотную последовательность WGRGTLVTVSS (SEQ IDhuCD3 антитела 23F10 (SEQ ID NO: 6). В другом аспекте настоящее изобретение предлагает способы лечения, профилактики или облегчения симптомов нарушения, связанного с иммунитетом, путем введения субъекту композиции антитела против CD3. Композиции антитела против CD3, предлагаемые настоящим изобретением, вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,53,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят пациенту, страдающему воспалительным нарушением в кишечнике, язвенным колитом, болезнью Крона, рассеянным склерозом, ревматоидным артритом или диабетом I типа, или предрасположенному к ним. Композицию вводят, например, внутривенно. Предусмотрены и другие способы введения. Например, композиции антитела против CD3 вводят подкожно,перорально, парентерально, назально, внутримышечно или любой комбинацией указанных способов введения. В другом аспекте настоящее изобретение предлагает способы лечения или профилактики отторжения трансплантата путем введения субъекту антитела против CD3 в дозировке в диапазоне 0,0510 мг/день после трансплантации и увеличения дозы каждый день с этого времени до тех пор, пока не будет достигнуто 50% или большее насыщение TCR-CD3, с последующими 5 дневными дозами, с тем,чтобы полный курс лечения не превышал восьми дней. Предпочтительно композицию антитела противCD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 используют для лечения или профилактики отторжения почки после трансплантации органа или ткани. Композицию вводят профилактически (например, до острого кризиса отторжения для предупреждения криза), и/или композицию используют для лечения острого криза отторжения, последовавшего за трансплантацией. Композицию вводят, например, внутривенно. Предусмотрены и другие способы введения. Например, композиции антитела против CD3 вводят подкожно, перорально, парентерально, назально, внутримышечно или в любой комбинации указанных способов введения. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, хранят в соответствующих емкостях, таких как флаконы, так что доза композиции антитела против CD3 на одну емкость находится в диапазоне 1-10 мг/емкость. Например, доза композиции антитела против CD3 на одну емкость находится в диапазоне 2-5 мг/емкость. Предпочтительно доза на одну емкость находится в диапазоне 3,5-4,5 мг/емкость, например доза на одну емкость составляет 4 мг/емкость. Необязательно субъекту затем вводят второе средство, такое как, без ограничения, противовоспалительные соединения или иммуносупрессорные соединения. Подходящие соединения включают, без ограничения, метотрексат, циклоспорин А (в том числе, например, микроэмульсию циклоспорина), такролимус, кортикостероиды, статины, интерфероны I типа, Ремикейд (Инфликсимаб), Энбрел (Этанерцепт) и Хумиру (Адалимумаб). Например, субъектам с диабетом I типа или латентным аутоиммунным диабетом взрослых (LADA) также вводят второе средство, такое как, например, GLP-1 или соединение, приво-5 014025 дящее бета-клетки в состояние покоя (т.е. соединение, которое уменьшает или же ингибирует высвобождение инсулина, такое как соединения, открывающие калиевые каналы). В другом аспекте настоящее изобретение предлагает способы очистки антитела против CD3 путем аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии и гидроксиапатитной хроматографии. Например, аффинная хроматография представляет собой белок А-хроматографию. Ионообменная хроматография представляет собой, например, анионообменную хроматографию. Краткое описание чертежей Фиг. 1A-1D представляют собой серию изображений последовательности нуклеотидов и аминокислотных последовательностей вариабельного легкого и вариабельного тяжелого участков huCD3 антитела 28F11, где CDR выделены рамками. Фиг. 2A-2D представляют собой серию изображений последовательности нуклеотидов и аминокислотных последовательностей вариабельного легкого и вариабельного тяжелого участков huCD3 антитела 23F10. Фиг. 3 А-3D представляют собой серию изображений последовательности нуклеотидов и аминокислотных последовательностей вариабельного легкого и вариабельного тяжелого участков huCD3 антитела 27 Н 5. Фиг. 3 Е представляет собой выравнивание пяти легких цепей клона 27 Н 5, где звездочкапредставляет консервативную аминокислоту; двоеточие (:) представляет консервативную мутацию; точка (.) представляет полуконсервативную мутацию. Фиг. 4A-4D представляют собой серию изображений последовательности нуклеотидов и аминокислотных последовательностей вариабельного легкого и вариабельного тяжелого участков huCD3 антитела 15 С 3. Фиг. 5 представляет собой выравнивание, изображающее вариабельные участки тяжелой цепи 15 С 3, 27 Н 5 и 28F11 антител huCD3, а также последовательность зародышевого типа DP-50, последовательность соединительного участка 5-02 тяжелой цепи человека и последовательность соединительного участка 2 тяжелой цепи человека. Для каждой последовательности показаны CDR-участки. Фиг. 6 представляет собой выравнивание, изображающее VkIII вариабельные участки 15 С 3 (вариабельная легкая цепь 1, т.е. "VL1") и 28F11 антител huCD3, а также последовательность зародышевого типа L6, последовательность соединительного участка каппа 4 человека и последовательность соединительного участка каппа 1 человека. Для каждой последовательности показаны CDR-участки. Фиг. 7 представляет собой выравнивание, изображающее VkI вариабельные участки 15 С 3 (вариабельная легкая цепь 2, т.е. "VL2") и 27 Н 5 VL2 антител huCD3, а также последовательность зародышевого типа L4/18a, последовательность соединительного участка каппа 4 человека и последовательность соединительного участка каппа 5 человека. Длякаждой последовательности показаны CDR-участки. Фиг. 8 представляет собой выравнивание, изображающее VkII вариабельные участки 27 Н 5 VL1 антитела huCD3 и DPK22, а также последовательность соединительного участка каппа 5 человека. Для каждой последовательности показаны CDR-участки. Подробное описание Настоящее изобретение предлагает композицию и дозировку моноклонального антитела, например,полностью человеческих моноклональных антител, специфичных в отношении CD3-эпсилон цепи(CD3). Полностью человеческие антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, называются huCD3 антитела. Композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют pH в диапазоне 3,0-7,0. Предпочтительно композиция имеет pH в диапазоне 5,0-6,0, более предпочтительно композиция имеет pH в диапазоне 5,2-5,8 и наиболее предпочтительно композиция имеет pH в диапазоне 5,4-5,6. Например, в одном варианте осуществления композиция имеет pH 5,5. Антитела против CD3, используемые в настоящем изобретении, связываются с CD3, который полностью или частично включает аминокислотные остатки от положения 27 до положения 43 процессированной CD3-эпсилон субъединицы человека (т.е. без лидерной последовательности). Аминокислотная последовательность CD3-эпсилон субъединицы человека показана, например, в номерах доступа GenBank NP000724; ААА 52295; Р 07766; А 32069; САА 27516 и ААН 49847. Например, антитело против CD3 связывается с CD3 эпитопом, который полностью или частично включает аминокислотную последовательность EMGGITQTPYKVSISGT (SEQ ID NO: 57). Примером моноклонального антитела huCD3, которое связывается с данным эпитопом, служит 28F11 антитело, предлагаемое в настоящем изобретении. 28F11 антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи (SEQ ID NO: 2), кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, показанной ниже в SEQ ID NO: 1, и вариабельный участок легкой цепи (SEQ ID NO: 4), кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ IDChothia et al. 1989, Е.A. Kabat et al., 1991, выделены рамками на фиг. 1B и 1D и фиг. 5 и 6 (см. Chothia, С.,et al., Nature 342:877-883 (1989); Kabat, E.A., et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991. CDR тяжелой цепи антитела 28F11 имеют следующие последовательности: GYGMH (SEQ ID NO: 27),-6 014025VIWYDGSKKYYVDSVKG (SEQ ID NO: 28) и QMGYWHFDL (SEQ ID NO: 29). CDR легкой цепи антитела 28F11 имеют следующие последовательности: RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 30), DASNRAT (SEQID NO: 31) и QQRSNWPPLT (SEQ ID NO: 32). Как показано на фиг. 2A-2D, антитело 23F10 включает вариабельный участок тяжелой цепи (SEQID NO: 6), кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 5, и вариабельный участок легкой цепи (SEQ ID NO: 8), кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ IDNO: 7. Аминокислоты, окружающие CDR, как определили Chothia et al. 1989, Е.А. Kabat et al., 1991, выделены на фиг. 2 В, 2D. CDR тяжелой цепи антитела 23F10 имеют следующие последовательности:GYGMH (SEQ ID NO: 27), VIWYDGSKKYYVDSVKG (SEQ ID NO: 28) и QMGYWHFDL (SEQ ID NO: 29). CDR легкой цепи антитела 23F10 имеют следующие последовательности: RASQSVSSYLA (SEQ IDNO: 30), DASNRAT (SEQ ID NO: 31) и QQRSNWPPLT (SEQ ID NO: 32). Как показано на фиг. 3A-3D, антитело 27 Н 5 включает вариабельный участок тяжелой цепи (SEQ IDNO: 10), кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 9, и вариабельный участок легкой цепи, выбранный из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16-20 и кодируемый последовательностями нуклеиновых кислот SEQ ID NO: 11-15. Аминокислоты, окружающие CDR, как определили Chothia et al. 1989, Е.А. Kabat et al., 1991, выделены рамками на фиг. 3 В, 3D, 5 и 7-8. CDR тяжелой цепи 27 Н 5 антитела имеют следующие последовательности: SYGMH (SEQ ID NO: 33),IIWYDGSKKNYADSVKG (SEQ ID NO: 34) и GTGYNWFDP (SEQ ID NO: 35). CDR легкой цепи 27 Н 5 антитела имеют следующие последовательности: RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 36); GASSRAT (SEQ IDQQYYSTLT (SEQ ID NO: 41); DASSLGS (SEQ ID NO: 42) и WASQGISSYLA (SEQ ID NO: 43). Как показано на фиг. 4A-4D, антитело 15 С 3 включает вариабельный участок тяжелой цепи (SEQ IDNO: 22), кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 21, и вариабельный участок легкой цепи, выбранный из аминокислотных последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 25-26,и кодируемый последовательностями нуклеиновых кислот, показанными в SEQ ID NO: 23-24. Аминокислоты, окружающие CDR, как определили Chothia et al., 1989, E.A. Kabat et al., 1991 выделены рамками на фиг. 4 В, 4D и 5-7. CDR тяжелой цепи 15 С 3 антитела имеют следующие последовательности:SYGMH (SEQ ID NO: 33), AIWYNGRKQDYADSVKG (SEQ ID NO: 44) и GTGYNWFDP (SEQ ID NO: 35). CDR легкой цепи 15 С 3 антитела имеют следующие последовательности: RASQSVSSYLA (SEQ IDDASSLES (SEQ ID NO: 46); QQFNSYPIT (SEQ ID NO: 47). Антитела против CD3, используемые в настоящем изобретении, также включают антитела, которые включают вариабельную аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 92, 95, 97, 98, 99% или более идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 6, 10 или 22, и/или вариабельную аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 92, 95, 97, 98, 99% или более идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, 8, 1620 или 25, 26. В альтернативном варианте моноклональное антитело представляет собой антитело, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и 28F11, 27 Н 5, 23F10 или 15 С 3. Если не определено иначе, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, имеют значения, которые обычно понятны специалистам в данной области техники. Далее, если иное не требуется контекстом, термины в единственном числе включают множественное, а термины во множественном числе включают единственное число. Как правило, номенклатуры и методики, используемые в связи с культурами клеток и тканей, молекулярной биологией и белковой и олигоили полинуклеотидной химией и гибридизацией, описанные в настоящем изобретении, являются хорошо известными и широко используемыми. Стандартные методики применяют для рекомбинантной ДНК,синтеза олигонуклеотидов и культуры и трансформации тканей (например, электропорации, липофекции). Ферментативные реакции и очистку проводят в соответствии с инструкцией производителя, или в соответствии с хорошо разработанными способами, или как описано в настоящем изобретении. Упомянутые выше методики и процессы, как правило, осуществляют в соответствии с общепринятыми хорошо известными способами и как описано в различных общих и более специальных руководствах, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании. См., например, Sambrook et al. Molecular Cloning: ALaboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989. Номенклатуры и лабораторные процедуры и методики, применяемые в связи с аналитической химией, синтетической органической химией и медицинской и фармацевтической химией, описанные в настоящем изобретении, являются хорошо известными и широко используемыми. Стандартные методики применяют для химического синтеза, химического анализа, получения фармацевтического препарата, композиции и введения и лечения пациентов. Следующие термины, как они используются в соответствии с настоящим описанием, если не указано иное, должны пониматься в следующих значениях. Термин "антитело", как он применяется в настоящем изобретении, относится к молекулам иммуноглобулина и к иммунологически активным частям молекул иммуноглобулина (Ig), т.е. к молекулам,-7 014025 которые содержат участок связывания антигена, который специфически связывает антиген (вступает с ним в иммунную реакцию). Такие антитела включают, не ограничиваясь этим, поликлональные, моноклональные, химерные, одноцепочечные, Fab, Fab' и F(ab')2 фрагменты и библиотеку экспрессируемых последовательностей Fab. Под терминами "специфически связывает" и "вступает в иммунную реакцию с" понимается, что антитело вступает в реакцию с одной или несколькими антигенными детерминантами нужного антигена и не вступает в реакцию (т.е. не связывается) с другими полипептидами, или связывается с другими полипептидами с гораздо более низким сродством (Kd больше 10-6). Известно, что основные структурные единицы антитела образуют тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем в каждую пару входит одна "легкая" (примерно 25 кДа) и одна "тяжелая" цепь (примерно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи включает вариабельный участок примерно от 100 до 110 или более аминокислот, в первую очередь отвечающий за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи определяет константный участок, отвечающий в первую очередь за эффекторную функцию. Человеческие легкие цепи подразделяют на каппа и лямбда легкие цепи. Тяжелые цепи подразделяют на мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон, и определяют изотипы антител IgM, IgD, IgA и IgE соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные участки соединяются J-участками длиной примерно 12 или более аминокислот, а тяжелая цепь также включает D-участок длиной примерно 10 или более аминокислот. См. в общем в FundamentalImmunology Ch. 7 (Paul, W., ea., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989. Вариабельные участки каждой пары из легкой и тяжелой цепи образуют связывающий центр антитела. Термин "моноклональное антитело" (MAb) или "композиция моноклонального антитела", как он применяется в настоящем изобретении, относится к популяции молекул антител, которые содержат только один тип молекул антител, состоящий из единственного генного продукта легкой цепи и единственного генного продукта тяжелой цепи. В частности, участки, определяющие комплементарность,(CDR) моноклонального антитела одинаковы во всех молекулах в популяции. MAb содержат антигенсвязывающий центр, способный вступать в иммунную реакцию с конкретным эпитопом антигена, отличительной особенностью которого является уникальная аффинность связывания с ним. Обычно молекулы антител, полученные от человека, относятся к одному из классов IgG, IgM, IgA,IgE и IgD, которые отличаются друг от друга типом тяжелой цепи, присутствующей в молекуле. Некоторые классы также подразделяются на подклассы, такие как IgG1, IgG2 и другие. К тому же у людей легкая цепь может представлять собой каппа цепь или лямбда цепь. Термин "эпитоп", как он применяется в настоящем изобретении, включает любую белковую детерминанту, способную специфически связываться с иммуноглобулином, scFv или Т-клеточным рецептором. Термин "эпитоп" включает любую белковую детерминанту, способную специфически связываться с иммуноглобулином или Т-клеточным рецептором. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи сахаров, и обычно имеют специфические особенности трехмерной структуры, а также специфические особенности заряда. Говорят, что антитело специфически связывает антиген, если константа диссоциации составляет 1 мкМ; предпочтительно 100 нМ и наиболее предпочтительно 10 нМ. Термины "иммунологическое связывание" и "свойства иммунологического связывания", как они применяются в настоящем изобретении, относятся к нековалентным взаимодействиям такого типа, какие происходят между молекулой иммуноглобулина и антигеном, к которому иммуноглобулин специфичен. Сила или аффинность взаимодействия при иммунологическом связывании может быть выражена через константу диссоциации (Kd) взаимодействия, где меньшая Kd означает большую аффинность. Свойства иммунологического связывания отдельных полипептидов количественно определяют при помощи хорошо известных способов. Один из таких способов влечет измерение скоростей образования и диссоциации комплекса антигенсвязывающего центра и антигена, где указанные скорости зависят от концентраций участников комплекса, аффинности взаимодействия и геометрических параметров, которые одинаково влияют на скорость в обоих направлениях. Таким образом, как "константа скорости прямой реакции"(Kon), так и "константа скорости обратной реакции" (Koff) могут быть определены путем вычисления концентраций и фактических скоростей ассоциации и диссоциации (см. Nature 361:186-87 (1993. Отношение Koff/Kon позволяет сократить все параметры, не связанные с аффинностью, и оно равно константе диссоциации Kd (см. в общем Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473). Говорят, что антитело настоящего изобретения специфически связывается с CD3 эпитопом, если константа равновесия связывания (Kd) составляет 1 мкМ, предпочтительно 100 нМ, более предпочтительно 10 нМ и наиболее предпочтительно от больше или равно 100 пМ до примерно 1 пМ, при измерении с помощью методов анализа, таких как анализ радиолигандного связывания или подобные методы анализа, известные специалистам в данной области. Специалистам в данной области техники известно, что существует возможность определить, не проводя лишних экспериментов, имеет ли человеческое моноклональное антитело ту же самую специфичность, что и человеческое моноклональное антитело, применяемое в настоящем изобретении (например, моноклональное антитело 28F11, 27 Н 5, 23F10 или 15 С 3), путем определения, препятствует ли пер-8 014025 вое связыванию второго с полипептидом CD3 антигена. Если человеческое моноклональное антитело при тестировании конкурирует с человеческим моноклональным антителом, применяемым в настоящем изобретении, что показывает уменьшение связывания человеческого моноклонального антитела, применяемого в настоящем изобретении, значит оба моноклональных антитела связываются с одним и тем же эпитопом или с близкорасположенными эпитопами. Другим способом определения, имеет ли человеческое моноклональное антитело специфичность человеческого моноклонального антитела, применяемого в настоящем изобретении, является предварительное инкубирование человеческого моноклонального антитела, применяемого в настоящем изобретении, с полипептидом CD3 антигена, с которым он обычно реагирует, и последующее добавление тестируемого человеческого моноклонального антитела для определения, ингибируется ли способность тестируемого человеческого моноклонального антитела связываться с полипептидом CD3 антигена. Если тестируемое человеческое моноклональное антитело ингибируется, то по всей вероятности оно имеет ту же самую или функционально эквивалентную эпитопную специфичность, как и моноклональное антитело, применяемое в настоящем изобретении. Термин "идентичность последовательностей" обозначает, что две полинуклеотидные или аминокислотные последовательности идентичны (а именно совпадают все нуклеотиды или все остатки) в окне сравнения. Термин "степень идентичности последовательностей" вычисляют путем сравнения двух оптимально выравненных последовательностей в области сравнения, определения количества положений, в которых встречаются идентичные основания нуклеиновых кислот (например, А, Т, С, G, U или I) или остатки в обеих последовательностях, чтобы получить количество совпадающих положений, деления количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения (т.е. на размер окна) и умножения результата на 100, чтобы получить степень идентичности последовательностей в процентах. Термин "значительная идентичность", как он используется в настоящем изобретении, обозначает особенность полинуклеотидной или аминокислотной последовательности, при которой полинуклеотид или аминокислота содержат последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична, предпочтительно по меньшей мере на 90-95% идентична, более предпочтительно по меньшей мере на 99% идентична при сравнении с контрольной последовательностью в окне сравнения по меньшей мере из 18 нуклеотидных (6 аминокислотных) положений, часто в окне по меньшей мере из 24-48 нуклеотидных(8-16 аминокислотных) положений, где степень идентичности последовательностей вычисляют, сравнивая контрольную последовательность с последовательностью, которая может включать делеции или вставки, которые не превышают 20% контрольной последовательности в окне сравнения. Контрольная последовательность может представлять собой часть большей последовательности. Как применяется в настоящем изобретении, двенадцать обычных аминокислот и их аббревиатуры соответствуют обычной практике. См. Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Gren,Eds., Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991. Стереоизомеры (например, D-аминокислоты) двенадцати обычных аминокислот, неприродные аминокислоты, такие как -,-двузамещенные аминокислоты, N-алкил аминокислоты, молочная кислота и другие необычные аминокислоты также могут быть пригодными составляющими полипептидов настоящего изобретения. Примеры необычных аминокислот включают 4-гидроксипролин, -карбоксиглутамат, -N,N,N-триметиллизин, -N-ацетиллизин, Офосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин, -N-метиларгинин и другие аналогичные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В используемой в настоящем изобретении системе обозначения полипептидов направление влево является аминоконцевым направлением, а направление вправо является карбоксиконцевым направлением в соответствии со стандартным использованием и правилами. Консервативными замещениями аминокислот называют взаимозаменяемость остатков, имеющих схожие боковые цепи. Например, группа аминокислот, имеющих алифатические боковые цепи, включает глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; группа аминокислот, имеющих алифатическигидроксильные боковые цепи, включает серин и треонин; группа аминокислот, имеющих амидосодержащие боковые цепи, включает аспарагин и глутамин; группа аминокислот, имеющих ароматические боковые цепи, включает фенилаланин, тирозин и триптофан; группа аминокислот, имеющих основные боковые цепи, включает лизин, аргинин и гистидин; и группа аминокислот, имеющих серосодержащие боковые цепи, включает цистеин и метионин. Предпочтительные группы консервативного замещения аминокислот представляют собой валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутаминовая кислота-аспарагиновая кислота и аспарагин-глутамин. Как рассматривается в настоящем изобретении, незначительные вариации в аминокислотных последовательностях антител или молекул иммуноглобулина предполагаются включенными в настоящее изобретение при условии, что вариации в аминокислотной последовательности сохраняют по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80, 90, 95% и наиболее предпочтительно 99%. В частности, предусмотрены консервативные замены аминокислот. Консервативными являются замены, которые имеют место внутри семейства аминокислот, которые близки по строению боковых цепей. Генетически кодируемые аминокислоты обычно подразделяют на семейства: (1) кислые аминокислоты включают аспартат, глутамат; (2) основные аминокислоты включают лизин, аргинин, гистидин; (3) неполяр-9 014025 ные аминокислоты включают аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан; (4) незаряженные полярные аминокислоты включают глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серин, треонин, тирозин. Гидрофильные аминокислоты включают аргинин, аспарагин, аспартат, глутамин,глутамат, гистидин, лизин, серин и треонин. Гидрофобные аминокислоты включают аланин, цистеин,изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, триптофан, тирозин и валин. Другие семейства аминокислот включают (i) серин и треонин, которые образуют алифатически-гидрокси-семейство; (ii) аспарагин и глутамин, которые образуют амидосодержащее семейство; (iii) аланин, валин, лейцин и изолейцин, которые образуют алифатическое семейство; и (iv) фенилаланин, триптофан и тирозин, которые образуют ароматическое семейство. Термин "средство" применяется в настоящем изобретении для обозначения химического соединения, смеси химических соединений, биологической макромолекулы или экстракта из биологических материалов. Термин пациент включает людей и животных. Настоящее изобретение также включает фрагменты Fv, Fab, Fab' и F(ab')2 против CD3, одноцепочечные антитела против CD3, биспецифические антитела против CD3, гетероконъюгатные антитела против CD3,триспецифические антитела, иммуноконъюгаты и их фрагменты. Биспецифические антитела представляют собой антитела, которые обладают специфичностью связывания по меньшей мере к двум различным антигенам. В настоящем случае одна из специфичностей связывания является специфичностью к CD3. Вторая мишень связывания представляет собой любой другой антиген и преимущественно представляет собой белок клеточной поверхности, или рецептор, или субъединицу рецептора. Терапевтическое применение и композиции. Следует понимать, что применение терапевтических форм в соответствии с настоящим изобретением осуществляется с соответствующими носителями, эксципиентами и другими средствами, которые включают в композиции, чтобы обеспечить лучшую передачу, доставку, переносимость и т.п. Множество соответствующих композиций можно найти в справочнике, известном всем химикам-фармацевтам:Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975, особенно в главе 87, написанной Blaug, Seymour. Указанные композиции включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, липидосодержащие (катионные или анионные) везикулы (такие как Lipofectin), ДНК конъюгаты, безводные абсорбционные пасты, эмульсии типа "масло в воде" и типа "вода в масле", эмульсии карбовакса (полиэтиленгликоль различных молекулярных масс), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. Все вышеупомянутые смеси могут подходить для лечения и терапии в соответствии с настоящим изобретением при условии, что активный ингредиент композиции не инактивируется композицией, и композиция является физиологически совместимой со способом применения и переносимой. См. также Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance". Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. "Lyophilization and development ofexcipients for parenteral formulations". PDA J. Pharm. Sci. Technol. 52:238-311 (1998) и ссылки там для получения дополнительной информации, относящейся к композициям, эксципиентам и носителям, хорошо известной химикам-фармацевтам. Композиции являются, предпочтительно, практически чистыми. Термин "практически чистый", как он используется в настоящем изобретении, обозначает, что целевой компонент является преобладающим компонентом (т.е. в молярном отношении он преобладает над всеми остальными отдельными компонентами композиции), и предпочтительно практически очищенная фракция представляет собой композицию, в которой целевой компонент составляет по меньшей мере приблизительно 50% (в молярном отношении) от всех присутствующих макромолекулярных компонентов. Как правило, практически чистая композиция составляет более чем приблизительно 80% от всех присутствующих в композиции макромолекулярных компонентов, более предпочтительно более чем приблизительно 85, 90, 95 и 99%. Наиболее предпочтительно целевой компонент очищают до существенной гомогенности (примеси нельзя обнаружить в композиции с помощью обычных способов детектирования), и композиция включает практически один макромолекулярный компонент. Терапевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, которые включают антитело против CD3, применяемое в настоящем изобретении, применяют для лечения или облегчения симптомов, вызванных нарушениями, связанными с иммунной системой, такими как, например, аутоиммунные заболевания или воспалительные нарушения. Аутоиммунные заболевания включают, например, синдром приобретенного иммунодифицита(СПИД, который представляет собой вирусное заболевание с аутоиммунным компонентом), гнездную алопецию, анкилозирующий спондилит, антифосфолипидный синдром, аутоиммунную болезнь Аддисона, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, аутоиммунное поражение внутреннего уха (AIED), аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (АЛПС), аутоиммунную тромбоцито- 10014025 пеническую пурпуру (АТП), болезнь Бехчета, кардиомиопатию, глютеиновую болезнь - герпетиформный дерматит; синдром хронической усталости и иммунной дисфункции (СХУИД), хроническую воспалительную демиелинизирующую полиневропатию (ХВДП), рубцующий пемфигоид, синдром холодовой агглютинации, синдром CREST, болезнь Крона, болезнь Дегоса, юношеский дерматомиозит, дискоидную волчанку, эссенциальную смешанную криоглобулинемию, фибромиалгию-фибромиозит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, тиреоидит Хашимото, фиброз легких, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ИТП), первичную нефропатию IgA-типа, инсулинзависимый сахарный диабет (диабет I типа), юношеский хронический артрит (болезнь Стилла), юношеский ревматоидный артрит, болезнь Меньера, смешанное поражение соединительной ткани, множественный склероз, миастениюgravis, пернициозную анемию, нодозный полиартериит, полихондрию, полигландулярные синдромы,ревматическую полимиалгию, полимиозит и дерматомиозит, первичную агаммаглобулинемию, первичный биллиарный цирроз, псориаз, псориатический артрит, синдром Рейно, синдром Рейтера, ревматический полиартрит, ревматоидный артрит, саркоидоз, склеродермию (прогрессирующий системный склероз (ПСС), также известна как системный склероз (СС, синдром Шгрена, синдром мышечной скованности, системную эритематозную волчанку, артериит Такаясу, темпоральный артериит/гигантоклеточный артериит, язвенный колит, увеит, витилиго и гранулематоз Вегенера. Воспалительные нарушения включают, например, хронические и острые воспалительные нарушения. Примеры воспалительных нарушений включают болезнь Альцгеймера, астму, атопическую аллергию, аллергию, атеросклероз, бронхиальную астму, экзему, гломерулонефрит, реакцию "трансплантат против хозяина", гемолитические анемии, остеоартрит, сепсис, инсульт, трансплантацию тканей и органов, васкулит, диабетическую ретинопатию и вентилятор-индуцированное повреждение легких. Композиции антитела против CD3 применяют к субъекту, страдающему заболеванием, связанным с иммунитетом, таким как аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение. Субъекта, страдающего аутоиммунным заболеванием или воспалительным нарушением, идентифицируют известными способами. Например, субъектов, страдающих аутоиммунным заболеванием, таким как болезнь Крона,язвенный колит или воспалительная болезнь кишечника, идентифицируют при помощи любого из различных клинических и/или лабораторных тестов, таких как физикальное обследование, рентгеновское обследование и анализы крови, мочи и стула, чтобы определить иммунный статус. Например, пациентов,страдающих множественным склерозом, идентифицируют, например, при помощи магнитнорезонансного исследования наличия поражений центральной нервной системы (ЦНС), которые диссеминированы во времени и пространстве (т.е. встречаются в различных частях ЦНС по меньшей мере три месяца). Пациентов, страдающих ревматоидным артритом, идентифицируют при помощи, например,исследований крови и/или рентгеновского обследования или других способов визуализации. Пациентов,страдающих диабетом I типа, идентифицируют, например, если все три следующих теста положительны,с последующим вторым положительным тестом в другой день: (1) концентрация глюкозы в плазме натощак больше или равна 126 мг/дл при симптомах диабета; (2) случайная концентрация глюкозы в плазме (измеренная в любое время суток) больше или равна 200 мг/дл при симптомах диабета; или (3) результат орального теста на толерантность к глюкозе (ОТТГ) больше или равен 200 мг/дл при измерении с интервалом в два часа (ОТТГ проводят после трехчасового промежутка). Применение композиции антитела против CD3 к пациенту, страдающему заболеванием, связанным с иммунитетом, таким как аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение, считают успешным, если достигнут какой-либо из ряда лабораторных или клинических результатов. Например, применение композиции антитела против CD3 к пациенту, страдающему заболеванием, связанным с иммунитетом, таким как аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение, считают успешным, если один или несколько из симптомов, связанных с нарушением, облегчен, уменьшен, ослаблен или перестал прогрессировать далее, т.е. в сторону ухудшения. Применение композиции антитела против CD3 к пациенту, страдающему заболеванием, связанным с иммунитетом, таким как аутоиммунное заболевание или воспалительное нарушение, считают успешным, если нарушение, например аутоиммунное нарушение,приходит в состояние ремиссии или перестает прогрессировать далее, т.е. в сторону ухудшения. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в лечении,диагностике и/или предупреждении воспалительного заболевания кишечника (ВЗК). ВЗК представляет собой хроническое воспаление и ирритацию ткани в желудочно-кишечном (ЖК) тракте. ВЗК связано с симптомами, такими как абдоминальные судороги и боль, диарея, аноректальное кровотечение, жар и повышение уровня лейкоцитов в крови. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту, страдающему, имеющему диагноз или предрасположенному к ВЗК. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в дозировке, достаточной для облегчения по меньшей мере одного симптома ВЗК, лечения ВЗК, предупреждения ВЗК и/или предупреждения развития ВЗК в сторону ухудшения у субъекта. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела противCD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5;- 11014025 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. В другом варианте осуществления композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в лечении, диагностике и/или предупреждении язвенного колита. Язвенный колит представляет собой хроническое воспаление и ирритацию толстой кишки. Язвенный колит связан с симптомами, такими как анемия; утомление; потеря веса; потеря аппетита; аноректальное кровотечение; уменьшение содержания жидкости и питательных веществ в организме; повреждения кожи; боль в суставах; и остановка в весе (характерно для детей). Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту, страдающему, имеющему диагноз или предрасположенному к язвенному колиту. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении,вводят в дозировке, достаточной для облегчения по меньшей мере одного симптома язвенного колита,лечения язвенного колита, предупреждения язвенного колита и/или предупреждения развития язвенного колита в сторону ухудшения у субъекта. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. В другом варианте осуществления композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в лечении, диагностике и/или предупреждении болезни Крона. Болезнь Крона представляет собой хроническое воспаление и ирритацию кишечника. Болезнь Крона связана с симптомами, такими как абдоминальная боль, диарея, потеря веса, плохой аппетит, жар, ночная потливость,ректальная боль и аноректальное кровотечение. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту, страдающему, имеющему диагноз или предрасположенному к болезни Крона. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в дозировке, достаточной для облегчения по меньшей мере одного симптома болезни Крона, лечения болезни Крона, предупреждения болезни Крона и/или предупреждения развития болезни Крона в сторону ухудшения у субъекта. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. В другом варианте осуществления композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в лечении, диагностике и/или предупреждении множественного склероза (МС). МС представляет собой хроническое воспалительное заболевание, которое поражает центральную нервную систему (ЦНС). Симптомы МС включают, например, нарушения чувствительности, проблемы со зрением, мышечную слабость, депрессию, затруднения координации и речи и боль. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту, страдающему, имеющему диагноз или предрасположенному к МС. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в дозировке, достаточной для облегчения по меньшей мере одного симптома МС, лечения МС, предупреждения МС и/или предупреждения развития МС в сторону ухудшения у субъекта. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,0510 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например,композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. В другом варианте осуществления композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в лечении, диагностике и/или предупреждении инсулинзависимого сахарного диабета (диабета I типа). Диабет I типа представляет собой заболевание, отличительным признаком которого является постоянная гипергликемия (повышенный уровень сахара в крови), вызванная недостаточной секрецией гормона инсулина. Диабет I типа характеризуется утратой продуцирующих инсулин бета-клеток островков Лангерганса поджелудочной железы. Диабет I типа представляет собой аутоиммунное нарушение, при котором собственная иммунная система организма атакует бета-клетки в островках Лангерганса поджелудочной железы, уничтожая их или существенно их повреждая, благодаря чему уменьшается или прекращается выработка инсулина. Симптомы диабета I типа включают, например,повышенную жажду, повышенную уринацию, потерю веса, несмотря на возросший аппетит, тошноту,рвоту, абдоминальную боль и утомление. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту, страдающему, имеющему диагноз или предрасположенному к диабету I типа. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в дозировке, достаточной для облегчения по меньшей мере одного симптома диабета I типа, лечения диабета I типа, предупреждения диабета I типа и/или предупреждения развития диабета I типа в сторону ухудшения у субъекта. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более- 12014025 предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. В другом варианте осуществления композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в лечении, диагностике и/или предупреждении ревматоидного артрита (РА). Ревматоидный артрит представляет собой аутоиммунное заболевание, которое вызывает хроническое воспаление суставов. Ревматоидный артрит также может вызывать воспаление ткани вокруг сустава, а также других органов тела. РА связан с симптомами, такими как утомление, потеря аппетита, субфебрильная температура тела, боль в мышцах и суставах и тугоподвижность. Композиции антитела противCD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту, страдающему, имеющему диагноз или предрасположенному к РА. Композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в дозировке, достаточной для облегчения по меньшей мере одного симптома РА, лечения РА, предупреждения РА и/или предупреждения развития РА в сторону ухудшения у субъекта. Например,композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела противCD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Настоящее изобретение также предлагает способы лечения или облегчения симптомов, вызванных нарушением, связанным с иммунитетом, или симптомов, вызванных отторжением, последовавшим за трансплантацией органа. Например, композиции, применяемые в настоящем изобретении, применяют для лечения или облегчения симптомов любых аутоиммунных заболеваний и воспалительных нарушений, предусмотренных в настоящем описании. Терапевтические композиции, применяемые в настоящем изобретении, также применяют в качестве иммуносупрессорных средств при трансплантации органов или тканей. Как применяется в настоящем изобретении, "иммуносупрессорное средство" обозначает средство, воздействие которого на иммунную систему приводит к немедленному или замедленному уменьшению активности по меньшей мере одного пути иммунного ответа, происходит ли указанный ответ естественно или вызывается искусственно, имеет ли указанный ответ место как часть врожденной иммунной системы, адаптивной иммунной системы,или обеих. Указанные иммуносупрессорные композиции антитела против CD3 вводят субъекту до, во время и/или после трансплантации органов или тканей. Например, композицию антитела против CD3,предлагаемую в настоящем изобретении, применяют для лечения или профилактики отторжения после трансплантации органов или тканей. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,15,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Предпочтительно терапевтические композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят субъекту внутривенно или подкожно. Предусмотрены и другие способы применения. Например, композиции антитела против CD3 применяют внутривенно, подкожно, перорально, парентерально, назально, внутримышечно или в любой комбинации указанных способов применения. В одном варианте осуществления композиции антитела против CD3, применяемые в настоящем изобретении, применяют в сочетании со вторым средством, таким как, например, GLP-1 или соединение,приводящее бета-клетки в состояние покоя (т.е. соединение, которое уменьшает или же ингибирует высвобождение инсулина, такое как соединения, открывающие калиевые каналы). Примеры подходящихGLP-1 соединений описаны, например, в опубликованной заявке США 20040037826, а примеры подходящих соединений, приводящих бета-клетки в состояние покоя, описаны в опубликованной заявке США 20030235583, каждая из которых таким образом полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В другом варианте осуществления композиции антитела против CD3, применяемые для лечения нарушения, связанного с иммунитетом, применяют в сочетании с любым из множества известных противовоспалительных и/или иммуносупрессорных препаратов. Подходящие известные препараты включают,без ограничения, метотрексат, циклоспорин А (в том числе, например, микроэмульсию циклоспорина),такролимус, кортикостероиды, статины, интерферон-бета, Ремикейд (Инфликсимаб), Энбрел (Этанерцепт) и Хумиру (Адалимумаб). Например, при лечении ревматоидного артрита композиции антитела против CD3, применяемые в настоящем изобретении, можно применять вместе с кортикостероидами, метотрексатом, циклоспорином А, статинами, Ремикейдом (Инфликсимабом), Энбрелом (Этанерцептом) и/или Хумирой (Адалимумабом). При лечении увеита композиции антитела против CD3 можно применять в сочетании, например, с кортикостероидами, метотрексатом, циклоспорином А, циклофосфамидом и/или статинами. Таким же- 13014025 образом, пациентов, пораженных такой болезнью, как болезнь Крона или псориаз, можно лечить комбинацией композиции антитела против CD3, применяемой в настоящем изобретении, и Ремикейда (Инфликсимаба) и/или Хумиры (Адалимумаба). Пациенты с множественным склерозом могут получать комбинацию композиции антитела противCD3, применяемой в настоящем изобретении, в сочетании с, например, глатирамера ацетатом (Копаксоном), интерфероном бета-1 а (Авонексом), интерфероном бета-1a (Ребифом), интерфероном бета-1b (Бетасероном или Бетафероном), митоксантроном (Новантроном), дексаметазоном (Декадроном), метилпреднизолоном (Депо-Медролом), и/или преднизоном (Дельтазоном) и/или статинами. В одном варианте осуществления иммуносупрессорные композиции антитела против CD3, применяемы в настоящем изобретении, применяют в сочетании со вторым средством, таким как, например,GLP-1 или соединение, приводящее бета-клетки в состояние покоя, как описано выше. В другом варианте осуществления указанные иммуносупрессорные композиции антитела противCD3 применяют в сочетании с любым из множества известных противовоспалительных и/или иммуносупрессорных препаратов. Подходящие для применения вместе с антителами против CD3, применяемыми в настоящем изобретении, противовоспалительные и/или иммуносупрессорные препараты включают,без ограничения, метотрексат, циклоспорин А (в том числе, например, микроэмульсию циклоспорина),такролимус, кортикостероиды и статины. В еще одном варианте осуществления, применяемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят пациенту на основании детектирования наличия у пациента аутоантител. Такие аутоантитела известны как антитела с аффинностью связывания к одному или нескольким белкам, эндогенно экспрессируемым человеком. В одном аспекте, применяемом в настоящем изобретении, проводят тестирование пациента на наличие аутоантител, специфически участвующих в одном или нескольких аутоиммунных заболеваниях, хорошо известными способами. В одном конкретном варианте осуществления пациента тестируют на наличие антител против инсулина, глутаматдекарбоксилазы и/или белкаIA-2, и затем к нему применяют антитело против CD3 на основании положительного детектирования одного или нескольких таких аутоантител. В другом варианте осуществления, применяемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят человеку для предупреждения, ослабления или уменьшения рекрутинга иммунных клеток в тканях человека. Антитело против CD3, применяемое в настоящем изобретении, вводят субъекту при необходимости для предупреждения и лечения состояний, вызванных измененным или нерегулируемым рекрутингом иммунных клеток в пораженных участках тканей. В другом варианте осуществления, применяемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят человеку для предупреждения, ослабления или уменьшения экстравазации и диапедеза иммунных клеток в тканях человека. Таким образом, антитела против CD3, применяемые в настоящем изобретении, вводят для предупреждения и/или лечения состояний, вызванных измененной или нерегулируемой инфильтрацией иммунных клеток в пораженных участках тканей. В другом варианте осуществления, применяемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят человеку для предупреждения, ослабления или уменьшения эффектов, опосредованных выбросом цитокинов в человеческом организме. Термин "цитокин" относится ко всем известным цитокинам человека, которые связываются с внеклеточными рецепторами на клеточной поверхности и посредством этого модулируют функции клетки, включая, без ограничения, IL-2, IFN-, TNF-, IL-4, IL5, IL-6, IL-9, IL-10 и IL-13. В другом варианте осуществления, применяемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят человеку для предупреждения, ослабления или уменьшения эффектов, опосредованных выбросом цитокиновых рецепторов в человеческом организме. Термин "цитокиновый рецептор" относится ко всем известным цитокиновым рецепторам человека, которые связываются с одним или несколькими цитокинами, как определяется в настоящем изобретении, включая, без ограничения, рецепторы упомянутых выше цитокинов. Таким образом, антитело против CD3, применяемое в настоящем изобретении, вводят для лечения и/или предупреждения состояний, опосредованных измененной активацией, связыванием или лигированием одного или нескольких цитокиновых рецепторов в человеческом организме. Можно представить, что применение антитела против CD3 in vivo ослабит внутриклеточную передачу сигнала, опосредованную цитокиновым рецептором (рецепторами) в таком человеческом организме. В одном аспекте, применяемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят человеку после уменьшения функции панкреатических бета-клеток. В одном варианте осуществления человека подвергают тесту на функцию бета-клеток, секрецию инсулина или уровень с-пептида с помощью известных способов. Затем, если обнаружено достаточное снижение любого из показателей,человеку назначают достаточный курс приема антитела против CD3 для предупреждения дальнейшего развития у него аутоиммунного разрушения функции бета-клеток.- 14014025 Диагностические и профилактические композиции. Композиции антитела против CD3 (также именуемые в настоящем изобретении композициями антитела), предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в диагностических и профилактических композициях. В одном варианте осуществления композицию MAb против CD3, предлагаемую в настоящем изобретении, применяют к пациентам, которые входят в группу риска развития одного из указанных выше аутоиммунных заболеваний. Предрасположенность пациента к одному или нескольким из указанных выше аутоиммунных заболеваний можно определить с помощью генотипических, серологических или биохимических маркеров. Например, наличие определенных подтипов HLA и серологических аутоантител (против инсулина, GAD65 и IA-2) указывает на диабет I типа. В другом варианте осуществления, предлагаемом в настоящем изобретении, композицию антитела против CD3 вводят людям, у которых диагностировано одно или несколько из указанных выше аутоиммунных заболеваний. На основании диагноза антитело против CD3 применяют, чтобы смягчить или обратить эффект аутоиммунности. В одном из таких примеров человеку с диагнозом диабет I типа вводят достаточную дозу антитела против CD3, чтобы восстановить панкреатическую функцию и минимизировать ущерб от аутоиммунной инфильтрации в поджелудочной железе. В другом варианте осуществления человеку с диагнозом ревматоидный артрит вводят антитело против CD3, чтобы уменьшить инфильтрацию иммунных клеток и разрушение суставов конечностей. Предпочтительно терапевтические, диагностические и/или профилактические композиции антитела против CD3, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют к субъекту внутривенно или подкожно. Предусмотрены и другие способы применения. Например, композиции антитела против CD3 применяют внутривенно, подкожно, перорально, парентерально, назально, внутримышечно или в любой комбинации указанных способов применения. Все публикации и патентные документы, на которые в настоящем описании даны ссылки, включены в настоящее описание в качестве ссылки, как если бы каждая такая публикация или документ были конкретно по отдельности отмечены, как включенные в настоящее описание в качестве ссылки. Ссылки на публикации и патентные документы не означают признания, что они относятся к предшествовавшему уровню техники, и это не представляет собой какого-либо признания в отношении их содержания или даты. Притом, что настоящее изобретение в настоящее время охарактеризовано при помощи письменного описания, специалистам в данной области техники следует понимать, что настоящее изобретение можно применять во множестве вариантов осуществления и что предшествовавшее описание и примеры ниже даны с целью иллюстрации, а не ограничения следующей далее формулы изобретения. Примеры Следующие примеры, включая проведенные эксперименты и полученные результаты, предлагаются с целью иллюстрации, и их не следует понимать как ограничивающие настоящее изобретение. Пример 1. Разработка и анализ композиции. В исследовании композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, наблюдали за стабильностью антитела против CD3 в 20 композициях при определенной температуре в течение трех месяцев. Исследуемые композиции содержали ацетатное, цитратное и фосфатное буферные вещества, охватывающие диапазон pH 4,0-8,0, и включали выбранные эксципиенты Tween 80, маннит, ЭДТА, хлорид натрия и сахарозу. Композиции, изученные в исследовании, представлены в таблице ниже. Таблица 1 Изученные композиции Для контроля за различными физическими и химическими свойствами продукта применяли ряд способов определения стабильности. Указанные способы выбирали из применяемых для тестирования целостности продукта в выпускаемых партиях, и они включали pH, концентрацию белка, внешний вид,гель-проникающую хроматографию (ГП ВЭЖХ), ДСН-ПААГ (восстанавливающий и невосстанавливающий) и изоэлектрическое фокусирование. Стабильность продукта определяли в каждой композиции при предполагаемой температуре хранения 53 С и повышенной температуре хранения 253 С и 403 С. Повышенную температуру использовали, чтобы получить ускоренные результаты по стабильности в каждой композиции, которые использовали, чтобы подтвердить выбор композиции, определенной на основании результатов, полученных в реальном времени. Кроме того, образцы выдерживали при -205 С, чтобы исследовать влияние замораживания-оттаивания на стабильность молекулы. Для дальнейшего изучения влияния композиции на склонность продукта к агрегации, образцы подвергали встряхиванию в течение 48 ч при температуре окружающей среды. Результаты, полученные в этом исследовании в каждом из анализов, указали подходящие композиции, в которых не произошло заметных изменений при предполагаемой температуре хранения или повышенной температуре, где изменения были наименьшими при сравнении с началом исследования. В итоге, результаты исследования показали, что ацетатные композиции F2, F3, F4 и F5 при pH 5,5 оказываются наиболее подходящими композициями для антитела против CD3. Затем в качестве итогового буфера для композиции антитела против CD3 был выбран 25 мМ ацетат натрия/125 мМ хлорид натрия/0,02% Tween 80, pH 5,5. Композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют pH в диапазоне 3,0-7,0. Предпочтительно композиция имеет pH в диапазоне 5,0-6,0, и более предпочтительно композиция имеет pH в диапазоне 5,2-5,8, и наиболее предпочтительно композиция имеет pH в диапазоне 5,4-5,6. Например, в одном варианте осуществления композиция имеет pH 5,5. Пример 2. Дозировка композиций антитела против CD3. Способ выбора дозы, описанный в настоящем изобретении, применяли, чтобы определить дозы, которые бы охватили терапевтическое окно для композиций антитела против CD3, чтобы провести над ними более масштабные исследования. В то же самое время начальная доза для тестирования была выбрана так, чтобы не быть опасной для пациентов. Так как некоторые моноклональные антитела против CD3, описанные в настоящем изобретении,например 28F11, 15 С 3, 27 Н 5 и 23F10, не дают перекрестной реакции со "стандартными" лабораторными типами CD3, оказывается невозможным получить данные по токсикологии и эффективности в токсикологической и предклинической фармакологии. В частности, исследования с помощью ГПП продемонстрировали отсутствие перекрестной реактивности с CD3 мышей, крыс, кроликов, макак-резусов, макаккрабоедов и павианов для некоторых из моноклональных антител против CD3, описанных в настоящем изобретении. Процесс выбора дозы поэтому проводили на основании данных, полученных in vitro на Тклетках человека, сравнивая антитело против CD3, которое не давало перекрестной реакции со стандартными лабораторными типами CD3 (т.е. "не реагирующее перекрестно с CD3 антитело"), с другими продаваемыми в настоящее время антителами против CD3 при помощи информации, опубликованной относительно антител против CD3, которые в настоящее время в разработке или доступны в продаже (см.,например, Orthoclone marketed sheet; Woodle Transplantation 1999; Friend Transplantation 1999; HeraldNEJM 2002; Keymeulen NEJM 2005): дозировки, применяемые клинически для Ортоклона OKT3, hOKT31 (Ala-Ala) и ChAgIyCD3, при дозировке 5-25 мг на инъекцию оказались эффективны для достижения 80% или более модуляции молекул CD3 с поверхности Т-клеток и создания среднего уровня в сыворотке больше 800 нг/мл; продолжительность применения Ортоклона OKT3, hOKT31 (Ala-Ala) и ChAglyCD3 составляет 1014, 7-14 и 6 последовательных дней соответственно; исследования in vitro, оценивающие модуляцию CD3 и TCR рецепторов на Т-клетках человека, последовательно продемонстрировали, что IC50 не реагирующего перекрестно антитела против CD3 оказывается в 2-3 раза выше, чем для Ортоклона; исследования in vitro, оценивающие проблемы безопасности, такие как CRS (синдром высвобожде- 16014025 ния цитокинов), последовательно продемонстрировали, что не реагирующие перекрестно антитела против CD3 индуцируют минимальное количество TNF-, IFN-, IL-6 или IL-2 или вообще не индуцируют,при сравнении с Ортоклоном, после инкубации с лейкоцитами периферической крови человека. Параметры in vitro анализа имитировали клиническое воздействие на лейкоциты в периферической крови пациентов. Индукция цитокина не реагирующим перекрестно антителом против CD3 на несколько порядков величины ниже, чем Ортоклоном. Таким образом, для того чтобы определить иммунологическую и предварительную терапевтическую эффективность в терапевтическом окне, пациенты должны получать 5 дневных последовательных доз не реагирующего перекрестно с CD3 антитела. Курсовая доза на пять последовательных дней у пациентов должна составлять 0,5-5,0 мг/день, что существенно ниже, чем эффективная доза Ортоклона, но,тем не менее, вызывает минимальный CRS. Предпочтительно курсовая доза на пять последовательных дней составляет 0,7-2 мг/день. Например, курсовая доза на пять последовательных дней составляет 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9 или 2,0 мг/день. Курсовая доза, предлагаемая в настоящем изобретении, ведет к значительно менее сильному CRS,судя на основании данных, полученных in vitro. Пример 3. Получение и очистка композиций антитела против CD3. Ниже предложена блок-схема, показывающая стадии способа производства антител против CD3 в целом. Детали стадий способа и технологического контроля на каждой стадии способа представлены в табличном виде на табл. 2-4. Блок-схема способа производства антитела против CD3 1 - необходимо только, если осуществляют более 1 цикла, и профили элюирования не удается сравнить только с помощью одного визуального анализа. В конце каждой стадии очистки и во время распределения в емкость для очищенного продукта обрабатываемый продукт фильтруют через фильтр 0,2 мкм. Для каждой стадии очистки время между извлечением обрабатываемого продукта из хранилища с 53 С, осуществлением стадии очистки и возвращением прошедшего 0,2 мкм фильтрацию продукта в холодильную камеру не должно превышать 36 ч. Состав итогового буфера композиции выглядит следующим образом: Исходные вещества, применяемые в способе производства антитела против CD3. Среду СМ 34, которая содержит основной раствор, применяют во время хранения клеток. Исходный базовый банк клеток хранят при криогенной температуре в среде СМ 34, дополненной димексилсульфоксидом. Среду СМ 41, содержащую основной раствор и реагенты, применяют во время получения инокулята. Кроме того, к минимальной среде перед применением добавляют Supplement E, который содержит соль. Среду СМ 42, которая содержит основной раствор, реагенты и аминокислоты, применяют во время стадии выращивания. Среду СМ 42 дополняют питательными добавками SF31, SF32 и Supplement E. Указанные питательные добавки содержат основные порошки, соли, аминокислоты, глюкозу, витамины,реагенты и следовые элементы. Все аминокислоты, включенные в среду, и питательные композиции не являются продуктам животного происхождения. Пример 4. Схема лечения для применения композиций антитела против CD3 в лечении аутоиммунных заболеваний. Композицию антитела против CD3 или соответствующее плацебо вводили путем внутривенного вливания с 1 по 5 день исследования в дозах в диапазоне 0,05-10 мг/день или плацебо. Предпочтительно композицию антитела против CD3 применяли в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 применяли в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 применяли в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Если уровень дозы оказывался связан со значительной модуляцией комплекса CD3 на Т-клетках и/или со значительным синдромом высвобождения цитокинов, один или несколько более низких уровней дозы исследовали вместо одного или нескольких более высоких уровней дозы. Искомый уровень дозы композиции антитела против CD3 приводил к уровню высвобождения цитокинов менее чем "3" по шкалеWHO для высвобождения цитокинов. Критерии уровня 3 по шкале WHO для симптомов высвобождения цитокинов показаны ниже в табл. 5. Таблица 5 Критерии градации токсичности WHO Симптомы гриппа (симптомы высвобождения цитокинов)- 21014025 Пример 5. Схема лечения для применения композиций антитела против CD3 в лечении отторжения трансплантата. Композицию антитела против CD3 вводят ежедневно до тех пор, пока не наблюдают более 50% покрывания/насыщения TKP-CD3. Например, композицию антитела против CD3 вводят ежедневно до тех пор, пока наблюдаемый уровень покрывания/насыщения TKP-CD3 не становится больше 60, больше 70 или больше 80%. Начальная доза находится в диапазоне 0,05-10 мг/день. Предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,1-5,0 мг/день и более предпочтительно композицию антитела против CD3 вводят в дозировке 0,5-3,0 мг/день. Например, композицию антитела против CD3 вводят в дозировке, выбранной из 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9 и 3,0 мг/день. Если насыщение TKP-CD3 составляет менее 50%, дозу увеличивают каждый день до тех пор, пока не достигают желаемого покрывания/насыщения. Когда достигают указанной цели, лечение продолжают в течение 5 дней, но так, чтобы максимальная продолжительность полного курса лечения не превышала 8 дней. Композицию антитела против CD3 вводят путем внутривенного (iv) вливания. Предпочтительно iv вливание представляет собой непрерывное вливание в течение периода времени от 30 мин до 3 ч и более предпочтительно 1-2 ч. Например, композицию антитела против CD3 вводят путем непрерывного iv вливания в течение 2 ч каждый день. Средний специалист в данной области техники понимает, что продолжительность непрерывного iv вливания непосредственно связана с дозой применяемой композиции и объемом емкости iv. Вычисление времени, необходимого для непрерывного вливания при заданной дозировке и объеме емкости, относится к компетенции среднего специалиста в данной области техники. Другие варианты осуществления. Притом что настоящее изобретение приведено в сочетании с его пробным описанием, предшествующее описание имеет целью проиллюстрировать, но не ограничить объем настоящего изобретения,который определен объемом прилагаемой формулы изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации входят в объем нижеследующей формулы изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция антитела против CD3, по существу, состоящая из:pH-буферное средство представляет собой ацетат натрия;d) фармацевтически эффективного количества антитела против CD3. 2. Фармацевтическая композиция антитела против CD3, по существу, состоящая из:d) фармацевтически эффективного количества антитела против CD3. 3. Фармацевтическая композиция антитела против CD3, по существу, состоящая из:a) эффективного количества на одну дозу антитела против CD3 в диапазоне 0,5-3,0 мг;c) 5-9 мг хлорида натрия иd) 0,1-0,3 мкг полисорбата 80,где объем указанной композиции доведен до 1,0 мл с помощью воды. 4. Композиция по п.1, в которой указанный хлорид натрия представляет собой 125 мМ NaCl. 5. Композиция по п.1, в которой указанное поверхностно-активное вещество представляет собой ионное, анионное или цвиттер-ионное поверхностно-активное вещество. 6. Композиция по п.5, в которой указанное ионное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат. 7. Композиция по п.2 или 6, в которой указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80. 8. Композиция по п.1 или 2, в которой pH-буферное средство обеспечивает диапазон pH, выбранный из диапазона pH 5,2-5,8 и диапазона pH 5,4-5,6. 9. Композиция по любому из пп.1, 2 или 3, в которой pH-буферное средство обеспечивает pH 5,5. 10. Композиция по п.2, в которой поверхностно-активное вещество составляет 0,02% вес./об. 11. Композиция по п.1, в которой фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне, выбранном из 0,0510 мг антитела против CD3, 0,1-5,0 мг антитела против CD3 и 0,5-3,0 мг антитела против CD3. 12. Композиция по п.1 или 2, в которой антитело против CD3 представляет собой антитело 28F11,которое содержит определяющую комплементарность область 1 VH (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, определяющую комплементарность область 2 VH (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, определяющую комплементарность- 22014025 область 3 VH (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 32; антитело 27 Н 5, которое содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28,CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; антитело 23F10, которое содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 33, CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, CDR3 VH,содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, 39 или 43, CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, 40 или 42 и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 38 или 41; антитело 15 С 3, которое содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 44, CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30 или 39, CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31 или 46, и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45 или 47, Ортоклон OKT3, OKT31 человека (HOKT31) или ChAglyCD3. 13. Композиция по п.2, в которой фармацевтически эффективное количество антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,1-5,0 мг антитела против CD3 или в диапазоне 0,5-3,0 мг антитела против CD3. 14. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная композиция содержит 2,05 мг ацетата натрия, 7,31 мг хлорида натрия и 0,216 мкг полисорбата 80. 15. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная композиция имеет pH 5,5. 16. Применение антитела против CD3, определенного таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,1-5,0 мг антитела против CD3 в день в течение пяти дней, в производстве лекарственного средства для лечения аутоиммунного заболевания или воспалительного нарушения у субъекта. 17. Применение по п.16, в котором указанную эффективную дозу антитела против CD3 определяют таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,5-3,0 мг антитела против CD3 в день в течение пяти дней. 18. Применение по п.16, в котором указанное введение является внутривенным. 19. Применение антитела против CD3 в эффективной дозе, определенного таким образом, чтобы обеспечить количество на одну дозу в диапазоне 0,1-5,0 мг, в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики отторжения трансплантата у субъекта. 20. Применение по п.19, в котором указанное введение является внутривенным. 21. Применение по п.19, в котором указанная эффективная доза антитела против CD3 приводит к уровню высвобождения цитокинов менее 3 по шкале токсичности WHO. 22. Применение по п.19, в котором указанное лекарственное средство предназначено для введения после или одновременно с трансплантацией.