Вакцина против вируса ветряной оспы

011884 Данное изобретение относится к композициям, способным индуцировать иммунный ответ против вируса ветряной оспы. Вирус ветряной оспы (VZV) представляет собой герпесвирус человека, который является возбудителем ветряной оспы (ветрянка) и опоясывающего герпеса (опоясывающего лишая). Ветрянка возникает в результате исходной или первичной инфекции, которой обычно заражаются в детстве и которая является относительно неопасной. Однако у взрослых, которые не переболели ветрянкой в детстве, и иногда у индивидуумов, которые имеют ослабленный иммунитет, VZV может быть опасным для жизни. Аналогично VZV-инфекция может быть опасной для жизни новорожденных, так как данный вирус способен проникать через плаценту. Известно, что при непосредственном контакте ветрянка является высоко трансмиссивным инфекционным заболеванием. Подобно большинству герпесвирусов VZV имеет тенденцию инфицировать некоторые клетки, в которых его развитие задерживается. После варьирующего латентного периода вирус ветряной оспы(VZ) может высвобождаться, инициируя инфекцию в других клетках. Эта реактивация вируса VZ вызывает, по оценкам специалистов, 5 миллионов случаев опоясывающего герпеса в год (Plotkin et al., Postgrad Med. J. 61: 155-63 (1985. Опоясывающий герпес характеризуется воспалением церебральных ганглиев и периферических нервов и связан с острой болью. Было показано, что люди, вакцинированные ослабленными штаммами VZV, получают защитный иммунитет против инфекций, вызванных VZV (Arbeter et al., J. Pediatr. 100, 886-93 (1982) and Brunell etal., Lancet ii: 1069-72 (1982. В частности, штамм OKA VZV использовали в исследованиях, касающихся предупреждения опоясывающего герпеса и постгерпетической невралгии. Штамм OKA в течение многих лет также использовали в приготовлении вакцин против ветряной оспы, и он является хорошо охарактеризованным - см., например, ЕР 651789 и ссылки, процитированные в нем. Большое клиническое испытание с использованием штамма OKA при симптомах опоясывающего герпеса было опубликовано в The New England Journal of Medicine, 2005,22, том 352: 2271-2284(M.N. Oxman et al.). До сих пор существует потребность в улучшенных вакцинах против опоясывающего герпеса и родственных заболеваний, таких как постгерпетическая невралгия (PHN). Изложение сущности изобретения Первый аспект. Согласно настоящему изобретению в первом аспекте предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген VZV или его иммуногенное производное в комбинации с живым ослабленным VZV или цельным инактивированным VZV. Кроме того, изобретение относится к вакцинной композиции, содержащей антиген VZV или его иммуногенное производное в комбинации с живым ослабленным VZV или цельным инактивированнымVZV. Кроме того, изобретение относится к способу предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии (PHN), включающему доставку индивидууму иммуногенной композиции, содержащей антиген VZV или его иммуногенное производное в комбинации с живым ослабленным VZV или цельным инактивированным VZV. В другом воплощении данное изобретение относится к способу предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, включающему последовательную или совместную доставку индивидууму антигена VZV или его иммуногенного производного и живого ослабленного VZV или цельного инактивированного VZV. В еще одном другом воплощении данное изобретение относится к набору, содержащему живой ослабленный VZV или цельный инактивированный VZV и, отдельно, антиген VZV или его иммуногенный фрагмент, компоненты, подходящие для совместной или последовательной доставки или для смешивания в виде единой композиции перед доставкой. Данное изобретение также относится к способу изготовления иммуногенной композиции, включающему объединение живого ослабленного VZV или цельного инактивированного VZV с антигеномVZV или его иммуногенным производным. Кроме того, изобретение относится к применению живого ослабленного штамма VZV или цельного инактивированного VZV и антигена VZV или его иммуногенного производного в приготовлении иммуногенной композиции для предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии. Второй аспект. Во втором аспекте данное изобретение относится к иммуногенной композиции и/или вакцине, содержащей gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент в комбинации с адъювантом Th-1. Данное изобретение также относится к применению композиции, содержащей gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент в комбинации с адъювантом Th-1, в приготовлении лекарственного средства для предупреждения или уменьшения интенсивности реактивации опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии.-1 011884 Данное изобретение также относится к способу предупреждения или уменьшения интенсивности реактивации опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, включающему доставку индивидууму, нуждающемуся в этом, иммуногенной композиции или вакцины, содержащей gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент в комбинации с адъювантом Th-1. Описание графических материалов На фиг. 1 приведена последовательность укороченного gE VZV. На фиг. 2-4 показаны гуморальные ответы, полученные в клинических исследованиях человека с использованием композиций по изобретению. На фиг. 5 и 6 показан клеточно-опосредованный иммунитет, полученный в клинических исследованиях человека с использованием композиций по изобретению. Подробное описание изобретения В самом широком аспекте настоящее изобретение относится к композициям и схемам лечения, как раскрыто в данном описании, для индукции иммунного ответа в отношении VZV. В одном из аспектов иммунный ответ, полученный в результате воздействия таких композиций, является, соответственно,более воспроизводимым и статистически значимым по сравнению с иммунным ответом, полученным у индивидуумов, которые не подвергались воздействию композиций по изобретению. Иммунный ответ можно оценивать с помощью анализа одного или более аспектов клеточно-опосредованного иммунного(CMI) ответа и/или антительных ответов с использованием любой из методик, описанных ниже. В другом аспекте данное изобретение относится к подходам для предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии (PHN). Во избежание сомнений данное изобретение в одном из аспектов относится к применению в предупреждении заболеваемости опоясывающим герпесом. Когда опоясывающий герпес все-таки возникает, тогда тяжесть реактивации опоясывающего герпеса, соответственно, снижается по сравнению с невакцинированным контролем(уменьшение интенсивности опоясывающего герпеса). В другом аспекте, когда опоясывающий герпес все-таки возникает, тогда данное изобретение относится к применению в предупреждении заболеваемости PHN. В другом аспекте, когда PHN все-таки возникает, тогда тяжесть PHN, соответственно, снижается по сравнению с невакцинированным контролем (уменьшение интенсивности PHN). Снижение тяжести можно соответствующим образом оценить по уменьшению боли, вызываемой опоясывающим герпесом или PHN, например, используя известные измерения тяжести боли (например, Coplan et al. J. Pain. 2004; 5(6), 344-56). Снижение тяжести также можно оценить по другим критериям, таким как продолжительность опоясывающего герпеса или PHN, доля площади тела, пораженной опоясывающим герпесом илиPHN, или участок развития опоясывающего герпеса/PHN. Приведенные выше утверждения относятся ко всем аспектам данного изобретения. Когда в первом аспекте данного изобретения используют живой ослабленный штамм, тогда в одном из аспектов живой ослабленный штамм VZV представляет собой штамм OKA, хорошо известный в данной области, например, как раскрыто в Arbeter et al. (Journal of Pediatrics, vol. 100,6, p. 886 ff),WO 9402596, и процитированные в данном описании ссылки, такие как US 3985615, все включены в данное описание изобретения посредством ссылки. В данном изобретении также можно использовать любой другой подходящий живой ослабленный штамм. Например, штаммы Varilrix и Varivax являются подходящими, имеются в продаже и могли бы быть использованы в данном изобретении. Цельные инактивированные штаммы VZV, такие как инактивированный VZV OKA, также являются подходящими для применения в настоящем изобретении. Антиген VZV для применения в данном изобретении может представлять собой любой подходящий антиген VZV или его иммуногенный фрагмент, представляющий собой, соответственно, очищенный антиген VZV. В одном из аспектов антигеном или производным является антиген или производное, которые способны вызывать, когда доставляются в комбинации, совместно или последовательно с живым ослабленным штаммом VZV или с цельным инактивированным VZV иммунный ответ, который является усиленным по сравнению с иммунным ответом, вызванным одним живым ослабленным/цельным инактивированным штаммом или одним антигеном VZV. Такой ответ, например, может быть усиленным в контексте одного или более чем одного из следующего: интенсивности иммунного ответа, продолжительности иммунного ответа, числа или процента реагирующих, или широты ответа (например, спектр определяемых антител или Т-клеточных ответов) или может обеспечить улучшение на клиническом уровне в контексте заболеваемости, ослабления боли или симптомов. Улучшения иммунного ответа можно оценивать, например, по уровням антител или активности клеточно-опосредованного иммунитета (CMI), используя стандартные методики в данной области; улучшения на клиническом уровне также можно оценить, используя известные клинические критерии. В частности, в одном из аспектов иммунный ответ, вызванный композицией или вакциной по настоящему изобретению, демонстрирует одно или более чем одно из следующего: статистически значимое увеличение CMI и/или антительного ответа по сравнению с уровнями превакцинации, при сравнении с одним антигеном VZV или с живым ослабленным штаммом/цельным инактивированным штаммом;-2 011884 улучшенный мультивалентный CMI ответ по сравнению с уровнями превакцинации, при сравнении с одним антигеном VZV или с живым ослабленным штаммом/цельным инактивированным штаммом. При мультивалентном CMI ответе рассматривается целый ряд маркеров CMI, таких как (но не ограничиваясь ими) IFN-гамма, IL2, TNF-альфа и CD40L, и улучшенный мультивалентный ответ индуцирует CMI ответ, охватывающий широкий диапазон таких маркеров, или более сильный ответ по одному или более маркерам при сравнении с одним антигеном VZV или с живым ослабленным штаммом/цельным инактивированным штаммом; более длительно сохраняющийся (персистирующий) CMI или антительный ответ по сравнению с уровнями превакцинации, при сравнении с одним антигеном VZV или с живым ослабленным штаммом/цельным инактивированным штаммом. В одном из аспектов персистенцию измеряют через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 24, 36 или 48 месяцев. В одном из аспектов улучшения иммунного ответа оценивают у населения старших возрастов, соответственно у населения в возрасте старше 50 лет, для которых риск опоясывающего герпеса или PHN увеличивается относительно населения в возрасте до 50 лет. Улучшенные иммунные ответы также можно исследовать у населения с ослабленным иммунитетом. В одном из аспектов такое население является целевым населением для любого воплощения настоящего изобретения. В одном из аспектов данное население имеет возраст старше 50 лет, соответственно старше 60 лет,старше 70 лет или даже старше 80 лет и более. В одном из аспектов данное население имеет возраст 50-70 лет. Таким образом, в одном из аспектов данное изобретение относится к применению композиций и подходов по изобретению в предупреждении и/или снижении тяжести опоясывающего герпеса или PHN у человека в возрасте старше 50 лет. В одном из аспектов данное изобретение относится к применению композиций и подходов по изобретению в предупреждении и/или снижении тяжести опоясывающего герпеса или PHN у индивидуумов с ослабленным иммунитетом, таких как пациенты, которым была сделана трансплантация, или пациенты,которые являются ВИЧ-позитивными. Термин "иммуногенное производное" охватывает любую молекулу, которая сохраняет способность индуцировать иммунный ответ в отношении VZV после введения человеку. Иммуногенные соединения,рассматриваемые в данном изобретении, способны, соответственно, заметно реагировать в иммуноанализе (таком как ELISA или анализ стимуляции Т-клеток) с антисывороткой и/или с Т-клетками пациента с VZV. Скрининг иммуногенной активности можно проводить, используя методики, хорошо известные квалифицированному специалисту. Например, такие скрининги можно проводить, используя такие способы, как способы, описанные в Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory, 1988. Подходящие способы получения производных хорошо известны в данной области и включают стандартные методики молекулярной биологии, как раскрыто, например, в Sambrook et al. [MolecularCloning: A Laboratory Manual, third edition, 2000, Cold Spring Harbor Laboratory Press], такие как методики добавления, делеции, замещения или перегруппировки аминокислот или их химических модификаций. В одном из аспектов производные, например, включают продукты укорочения или другие фрагменты. В одном из аспектов производные в контексте этого изобретения представляют собой аминокислотные последовательности, содержащие эпитопы, т.е. антигенные детерминанты, по существу, отвечающие за иммуногенные свойства полипептида и способные вызывать иммунный ответ, причем в одном из аспектов они представляют собой Т-клеточные эпитопы. В одном из аспектов уровень иммуногенной активности иммуногенного производного составляет по меньшей мере 50%, в одном из аспектов по меньшей мере примерно 70% и в одном из аспектов по меньшей мере или более чем примерно 90% иммуногенности полипептида, из которого оно происходит,соответственно как оценено методами иммуноанализа, описанными выше. В некоторых аспектах данного изобретения можно идентифицировать иммуногенные части, которые имеют больший уровень иммуногенной активности, чем иммуногенная активность соответствующего полноразмерного полипептида,например, имеющие иммуногенную активность более чем примерно 100, или 150%, или более. В одном из аспектов антиген VZV представляет собой гликопротеин, в одном из аспектов - антигенgE (также известный как gp1) или его иммуногенное производное. Антиген gE, его безъякорные производные (которые также являются иммуногенными производными) и их получение описаны в ЕР 0405867 и ссылках, приведенных в нем [см. также Vafai A. AntibodyEP 192902 также раскрывает gE и его получение. Раскрытие всех процитированных документов в данном описании полностью включено посредством ссылки. В одном из аспектов gE представляет собой укороченный gE, имеющий последовательность, приведенную на фиг. 1, как раскрыто в Virus Research, vol. 40, 1996, р. 199 ff, включенной в данное описание изобретения во всей полноте посредством ссылки. Ссылка на gE, приведенная в данном описании ниже,включает ссылку на укороченный gE, если иное не очевидно из контекста.-3 011884 Другие подходящие антигены включают в себя в качестве примера gB, gH, gC, gl, IE63 (см., например, Huang et al. J. Virol. 1992, 66: 2664, Sharp et al. J. Inf. Dis. 1992, 165: 852, Debrus, J. Virol. 1995 May; 69(5): 3240-5 и ссылки, процитированные в ней), IE62 (см., например, Arvin et al. J. Immunol. 1991, 146: 257, Sabella J. Virol. 1993 Dec.; 67(12): 7673-6 и ссылки, процитированные в ней), ORF4 или ORF10 (Arvinet al. Viral Immunol. 2002, 15: 507). Настоящее изобретение также предполагает, что можно использовать комбинации антигена с живым ослабленным или убитым VZV, и в одном из аспектов в любую такую комбинацию может быть включен gE. В одном из аспектов данное изобретение относится, например, к комбинациям gE с IE63 иgE c IE62. Антигены VZV и производные антигенов VZV можно тестировать на подходящую иммуногенную активность путем использования в модельных системах, как описано в примерах настоящего изобретения, или посредством клинических испытаний у людей. Один или более чем один из следующих индикаторов активности является подходящим для рассмотрения при оценке иммуногенной активности: усиленные CD4 или CD8 Т-клеточные ответы на VZV или антигенные производные; увеличение специфических антител к VZV или антигенным производным; усиленная продукция цитокинов, таких как интерферон- или IL-2, или TNF-; усиленная экспрессия CD40L на CD4 и CD8 Т-клетках; снижение заболеваемости опоясывающим герпесом ниже уровня заболеваемости, обнаруженной у обычного населения из индивидуумов, подверженных аналогичному риску, а также уменьшенная тяжесть заболевания и/или связанной с ним боли до уровня, обнаруженного у обычного населения из индивидуумов, подверженных аналогичному риску. Повышения или снижения, как описано выше, являются, соответственно, статистически значимыми в отношении соответствующих контролей, таких как соответствующая по возрасту невакцинированная группа. В одном из аспектов живой ослабленный VZV или убитый VZV и антиген VZV или антигенные производные, по существу, не мешают друг другу, так что при использовании в комбинации 2 компонента все еще способны обеспечивать иммуногенный ответ в отношении VZV. В одном из аспектов данный ответ представляет собой защитный иммуногенный ответ независимо от того, используются ли 2 компонента в виде композиции или при последовательном введении, или совместном введении. Будет понятно,что некоторая интерференция является допустимой, но при условии, что общий защитный иммунный ответ в некоторой степени улучшается (например, увеличение интенсивности, повышенный процент реагирующих или расширенные антигенные ответы) по сравнению с ответом на любой из исходных компонентов, используемых индивидуально. В одном из аспектов данное изобретение относится к комбинации антигена gE и штамма OKA, используемой для совместного или последовательного введения в любом порядке. Когда доставка является совместной, тогда 2 компонента доставляют в разные участки для инъекции, но в течение одних и тех же суток, например. В одном из аспектов для 2 компонентов используют разные пути доставки, в частности подкожную доставку для вирусного штамма, такого как OKA, и внутримышечную доставку для антигена, такого как gE. Настоящее изобретение также расширяется для охвата, во всех описанных воплощениях, применения комбинаций антигенов VZV или производных с живым ослабленным штаммом VZV или убитымVZV. Подходящие комбинации антигенов включают в одном из аспектов gE или его иммуногенное производное. Объединенная композиция, или любой из индивидуальных компонентов, или оба индивидуальных компонента могут дополнительно содержать адъювант или иммуностимулятор, такой как, но не ограничиваясь этим, детоксифицированный липид А из любого источника и нетоксичные производные липида А, сапонины и другие реагенты, способные, соответственно, стимулировать ответ Th-1-типа. В одном из аспектов данная композиция содержит адъювант, способный стимулировать ответTh-1-типа. Высокие уровни цитокинов Th-1-типа имеют тенденцию благоприятствовать индукции клеточноопосредованных иммунных ответов в отношении данного антигена, тогда как высокие уровни цитокиновTh-2-типа имеют тенденцию благоприятствовать индукции гуморальных иммунных ответов в отношении данного антигена. Отличие иммунного ответа Th-1- и Th-2-типа не является абсолютным. В реальности индивидуум будет поддерживать иммунный ответ, который описывается как являющийся преимущественно Th-1 или преимущественно Th-2. Однако часто удобно рассматривать семейства цитокинов в контексте описанного Мосманном и Коффманом для мышиных CD4-позитивных Т-клеточных клонов (Mosmann, T.R. andproperties. Annual Review of Immunology, 7, p. 145-173). Традиционно, ответы Th-1-типа ассоциированы с продуцированием Т-лимфоцитами цитокинов IFN- и IL-2. Другие цитокины, часто непосредственно ассоциированные с индукцией иммунных ответов Th-типа, такие как IL-12, не продуцируются Т-клетками. Напротив, ответы Th-2-типа ассоциированы с секрецией IL-4, IL-5, IL-6, IL-10.-4 011884 Подходящие адъювантные системы, которые стимулируют преимущественно Th-1-ответ, включают монофосфориллипид А или его производное, в частности 3-де-О-ацилированный монофосфориллипид А. Давно уже известно, что энтеробактериальный липополисахарид (LPS) представляет собой мощный стимулятор иммунной системы, хотя его применение в адъювантах было ограничено из-за его токсических эффектов. Нетоксичное производное LPS, представляющее собой монофосфориллипид А (MPL), образующийся путем удаления коровой углеводной группы и фосфата из редуцирующего конца глюкозамина, было описано Ribi et al. (1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Дополнительную детоксифицированную версию MPL получают в результате удаления ацильной цепи из 3-го положения дисахаридного скелета и называют как 3-О-деацилированный монофосфориллипид A (3D-MPL). Его можно очистить и получить способами, указанными в GB 2122204 В, причем данная ссылка раскрывает также получение дифосфориллипида А и его 3-O-деацилированных вариантов. В одном из аспектов 3D-MPL находится в форме эмульсии, имеющей маленький размер частиц менее 0,2 мкм в диаметре, и способ ее изготовления изложен в WO 94/21292. Водные препараты, содержащие монофосфориллипид А и поверхностно-активное вещество, были описаны в WO 9843670A2. Адъюванты, происходящие из бактериального липополисахарида, подлежащие приготовлению в виде композиций по настоящему изобретению, можно очистить и переработать из бактериальных источников или, в качестве альтернативы, они могут быть синтетическими. Например, очищенный монофосфориллипид А описан в Ribi et al. 1986 (выше), а 3-О-деацилированный монофосфорил или дифосфориллипид А, происходящий из Salmonella sp., описан в GB 2220211 и US 4912094. Были описаны другие очищенные и синтетические липополисахариды (Hilgers et al., 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79(4): 392-6; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1):141-6 и ЕР 0549074 B1). В одном из аспектов бактериальный липополисахаридный адъювант представляет собой 3D-MPL. Соответственно, производные LPS, которые могут быть использованы в настоящем изобретении,представляют собой те иммуностимуляторы, которые похожи по структуре на производные LPS, илиMPL, или 3D-MPL. В другом воплощении настоящего изобретения производные LPS могут представлять собой ацилированный моносахарид, который представляет собой субфрагмент структуры MPL, приведенной выше. О сапонинах сообщается в Lacaille-Dubois, M. and Wagner H. (1996. А review of the biological andpharmacological activities of saponins. Phytomedicine, vol. 2, p. 363-386). Сапонины представляют собой стероидные и тритерпеновые гликозиды, широко распространенные в царствах растений и морских животных. Известно, что сапонины образуют коллоидные растворы в воде, которые пенятся при встряхивании, и осаждают холестерин. Когда сапонины находятся около клеточных мембран, они создают в мембранах пороподобные структуры, которые вызывают разрыв мембраны. Гемолиз эритроцитов является примером этого явления, которое является свойством некоторых, но не всех сапонинов. Сапонины известны в качестве адъювантов в вакцинах для системного введения. Адъювантная и гемолитическая активность отдельных сапонинов была подробно исследована в данной области (LacailleDubois and Wagner, выше). Например, Quil А (происходящий из коры южно-американского дереваQuillaja Saponaria Molina) и его фракции описаны в US 5057540 и в "Saponins as vaccine adjuvants",Kensil, C.R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2): 1-55 и ЕР 0362279 В 1. Структуры в виде частиц, названные иммуностимулирующими комплексами (ISCOMS), содержащие фракции Quil A, являются гемолитическими и были использованы в изготовлении вакцин (Morein, В., ЕР 0109942 В 1;-5 011884 А) были описаны как мощные системные адъюванты и способ их получения раскрыт в патенте США 5057540 и ЕР 0362279 В 1. Другие сапонины, которые использовали в исследованиях системной вакцинации, включают сапонины, происходящие из других видов растений, таких как Gypsophila иSaponaria (Bomford et al., Vaccine, 10(9): 572-577, 1992). Улучшенная система включает комбинацию нетоксичного производного липида А и производного сапонина, в частности комбинацию QS21 и 3D-MPL, как раскрыто в WO 94/00153, или менее реактогенную композицию, где QS21 погашен холестерином, как раскрыто в WO 96/33739. В одном из аспектов в настоящем изобретении используют комбинацию QS21 с 3D-MPL. В одном из аспектов адъювант для применения в данном изобретении содержит QS21 и липосомный препарат, содержащий холестерин и 3D-MPL. Особенно мощный адъювантный препарат, включающий QS21 и 3D-MPL в эмульсии типа масло в воде, описан в WO 95/17210 и также является подходящим для применения в настоящем изобретении. Соответственно, в одном из воплощений настоящего изобретения предложена композиция, содержащая антиген VZV или производное по настоящему изобретению, адъювантированные детоксифицированным липидом А или нетоксичным производным липида А. В одном из аспектов данная композиция адъювантирована монофосфориллипидом А или его производным. В одном из аспектов данная композиция дополнительно содержит сапонин, который в одном из аспектов представляет собой QS21, а в другом аспекте QS21 погашен холестерином, как раскрыто вWO 96/33739. Иммуногенная композиция по данному изобретению возможно содержит эмульсию типа масло в воде, которую можно использовать в комбинации с другими адъювантами, такими как QS21 и/или 3D-MPL, как раскрыто выше. Адъювантные препараты, содержащие эмульсию типа масло в воде, раскрыты в WO 9911241 и WO 9912565, включенных в данное описание изобретения посредством ссылки. Альтернативный выбор адъюванта представляет собой выбор неметилированных динуклеотидовCpG ("CpG"). CpG представляет собой сокращение для цитозингуанозиновых динуклеотидных мотивов,присутствующих в нуклеиновой кислоте. Олигонуклеотиды CpG раскрыты в WO 96/02555 и ЕР 468520. В одном из аспектов комбинацию любого из адъювантов по изобретению, описанную в данном изобретении (QS21 или QS21, погашенный холестерином, + 3D-MPL, возможно с эмульсией типа масло в воде), используют с gE или его иммуногенным производным при совместном или последовательном введении с живым ослабленным VZV или цельным инактивированным VZV. Согласно настоящему изобретению также предложен способ получения набора, подходящего для индукции иммунного ответа против опоясывающего герпеса, включающему смешивание препарата антигена VZV по настоящему изобретению совместно с адъювантом или комбинацией адъювантов и объединение в наборе с живым ослабленным VZV. Количество антигена VZV выбирают из количества, которое индуцирует иммунозащитный ответ без значительных нежелательных побочных эффектов в типичных вакцинах. Такое количество будет варьировать в зависимости от того, какой конкретный иммуноген используется и как он презентируется. Обычно ожидают, что каждая доза будет содержать 1-1000 мкг белка, как, например, 2-100 или 5-60 мкг. Когда используется gE, тогда в одном из аспектов у человека можно использовать 25-100 мкг gE, как,например, 40-100 мкг gE для применения у человека, в одном из аспектов примерно 25 мкг, примерно 50 или примерно 100 мкг gE, соответственно 25, 50 или 100 мкг gE. Для штамма OKA, например,подходящая доза составляет 500-50000 БОЕ (бляшкообразующая единица)/0,5 мл, как, например,2000-6000 БОЕ/0,5 мл с подходящей дозой штамма GSK Varilrix OKA, составляющей, например,6000-25000 БОЕ/дозу, например 10000 БОЕ/дозу. Могут быть использованы более высокие дозы, такие как 30000, 40000, 50000, 60000, 70000, 80000, 90000 или даже 100000 БОЕ. Оптимальное количество для конкретной вакцины можно установить стандартными исследованиями, включающими наблюдение подходящих иммунных ответов у субъектов. После первичной вакцинации субъекты могут получать одну или несколько повторных иммунизаций с соответствующими промежутками времени между ними. Композиция(и) по настоящему изобретению может быть приготовлена в виде препарата для любого подходящего способа введения, включающего, например, местное, пероральное, назальное введение,введение через слизистую, внутривенное, внутрикожное, внутрибрюшинное, подкожное и внутримышечное введение. Доставка штамма OKA в одном из аспектов осуществляется с помощью подкожной доставки. Иммуногенная композиция по настоящему изобретению может быть использована в вакцинной композиции, возможно в комбинации с адъювантом и/или с (другим) подходящим носителем. Антиген VZV или ослабленный VZV по настоящему изобретению может быть использован совместно в композиции для индукции иммунного ответа в отношении VZV или раздельно: либо совместно,либо последовательно в схеме первичной - повторной иммунизации. Для совместной или последовательной доставки компоненты вакцины могут быть использованы в любом порядке. В одном из воплощений после доставки живого ослабленного VZV или цельного инактивированного VZV происходит доставка антигена VZV или его иммуногенного производного. В другом воплощении после доставки антигенаVZV или его иммуногенного производного следует доставка живого ослабленного VZV или цельного инактивированного VZV. Кроме того, изобретение относится к способу предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, включающему доставку индивидууму, подверженному риску опоясывающего герпеса, иммуногенной композиции, содержащей живой ослабленныйVZV и антиген VZV. В другом воплощении данное изобретение относится к способу предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, включающему последовательную или совместную доставку индивидууму, подверженному риску опоясывающего герпеса, живого ослабленного VZV и антигена VZV. В одном из аспектов данное изобретение относится к схеме первичной - повторной иммунизации,где сначала доставляется антиген VZV, в одном из аспектов адъювантированный антиген, после чего иммунную систему подвергают повторной антигенной стимуляции с помощью доставки ослабленногоVZV. Схема первичной - повторной иммунизации у людей включает в одном из аспектов примирование с помощью 25-100 мкг gE, в одном из аспектов - 40-100 мкг gE, как, например, 50 или примерно 50 мкг gE или его иммуногенным производным, адъювантированным с помощью QS21 (например QS21, погашенным холестерином, как описано выше) и 3D-MPL и повторную иммунизацию штаммом OKA VZV. Когда используются схемы первичной - повторной иммунизации или когда используются схемы множественной вакцинации, тогда можно использовать 2, 3, 4 или более иммунизаций. Подходящие схемы для первичной - повторной иммунизации включают 1, 2, 3, 4, 5 или 6 месяцев между отдельными иммунизациями. Схема первичной - повторной иммунизации включает в одном из аспектов доставку антигена VZV или его иммуногенного производного, соответственно, адъювантированного антигена VZV или производного в момент времени 0 месяцев и повторную иммунизацию живым ослабленным VZV в момент времени 2 месяца. В альтернативной схеме доставки имеет место совместная доставка обоих из двух отдельных компонентов (антигена VZV или производного и живого ослабленного VZV) в момент времени 0 и 2 месяца. В еще одном другом воплощении данное изобретение относится к набору, содержащему живой ослабленный VZV или инактивированный цельный VZV и антиген VZV. Данное изобретение также относится к способу изготовления иммуногенной композиции, включающему объединение живого ослабленного VZV/цельного инактивированного VZV и антигена VZV. Кроме того, изобретение относится к применению живого ослабленного штамма VZV в приготовлении комбинированной вакцины с антигеном VZV для предупреждения опоясывающего герпеса и к применению антигена VZV в приготовлении комбинированной вакцины с живым ослабленным штаммомVZV для предупреждения опоясывающего герпеса. Во втором аспекте данного изобретения антиген gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент можно использовать с адъювантом для получения иммуногенной композиции или вакцины. Т.е. антиген gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент можно использовать в схеме вакцинации в отсутствие живого ослабленного штамма или цельного инактивированного штамма. Таким образом, второй аспект данного изобретения относится к иммуногенной композиции или вакцине, содержащей gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент в комбинации с адъювантом Th-1. Данное изобретение, в частности, также относится к применению композиции, содержащей gE или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент в комбинации с адъювантом Th-1, в приготовлении лекарственного средства для предупреждения или уменьшения интенсивности реактивации опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии. Термин "иммуногенное производное" в отношении gE является таким же, как описано выше, наряду со способами получения производных, таких как фрагменты gE. Иммуногенные фрагменты, как описано в данном изобретении, представляют собой иммуногенные производные, которые сохраняют способность индуцировать иммунный ответ в отношении VZV после введения человеку. В одном из аспектов данного изобретения используется укороченный gE, в котором gE имеет С-концевое укорочение. В одном из аспектов данное укорочение удаляет от 4 до 20% всех аминокислотных остатков на карбоксиконце. В одном из аспектов gE не содержит карбоксиконцевого якорного участка (соответственно, приблизительно аминокислоты 547-623 последовательности дикого типа). В одном из аспектов gE представляет собой укороченный gE, имеющий последовательность, приведенную на фиг. 1, и, как раскрыто в Virus Research (Haumont et al., vol 40, 1996, p. 199-204), включенной в данное описание изобретения во всей полноте посредством ссылки.-7 011884 Ссылка на gE ниже включает ссылку на укороченный gE или другие фрагменты или производноеgE, если иное не очевидно из контекста. В другом аспекте данного изобретения композиция содержит полноразмерный gE. В другом аспекте gE или его производное или фрагмент является лиофилизированным. В другом аспекте gE или его производное или фрагмент растворяют в растворе, содержащем адъювант (такой как адъювант, содержащий QS21, холестерин и 3D-MPL), перед доставкой. В одном из воплощений данная композиция или вакцина содержит gE и адъювант Th-1 и не содержит антиген IE63 или его часть. В одном из воплощений данная композиция или вакцина содержит gE и адъювант Th-1 и не содержит какой-либо другой антиген VZV. В одном из воплощений данная композиция или вакцина содержит gE и адъювант Th-1 и не содержит какой-либо другой вирусный антиген. В одном из аспектов gE или его иммуногенный фрагмент не находится в форме слитого белка. В одном из аспектов данная композиция или вакцина состоит, по существу, из QS21, укороченного антигена gE VZV и липосом, содержащих холестерин и 3D-MPL. В одном из аспектов данная композиция или вакцина состоит из 3D-MPL, QS21, укороченного антигена gE VZV, липосом, содержащих холестерин, и фармацевтически приемлемого носителя. Данную композицию можно использовать в приготовлении лекарственного средства для предупреждения или снижения интенсивности реактивации опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии. Данную композицию или вакцину соответственно используют у людей в возрасте 50 лет или старше 50 лет. Соответственно, данная популяция представляет собой людей в возрасте старше 55, 60, 65, 70,75, 80 или старше 80 лет. Соответственно, возраст данной популяции составляет 50-70 лет. В одном из аспектов популяцией индивидуумов являются индивидуумы, у которых была ветрянка,или которые получили живую вакцину против ветрянки. Таким образом, данное изобретение относится к применению композиции, как описано выше, в получении лекарственного средства для предупреждения или снижения интенсивности реактивации опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии у людей в возрасте 50 лет или старше. Таким образом, данное изобретение также относится к способу предупреждения или снижения интенсивности реактивации опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, включающему доставку индивидууму, нуждающемуся в этом, композиции по изобретению. В одном из аспектов композицию по первому и второму аспектам данного изобретения используют у тех индивидуумов, у которых вирус ветряной оспы не реактивировался. Данную композицию можно использовать в таких дозах и такими путями доставки, которые описаны выше для первого аспекта данного изобретения. Конкретно, количество антигена gE выбирают как количество, которое индуцирует иммунозащитный ответ без значительных нежелательных побочных эффектов в типичных вакцинах. Такое количество будет варьировать в зависимости от того, какой конкретный иммуноген используется и как он презентируется. Обычно ожидают, что каждая доза будет содержать 1-1000 мкг белка, как, например, 2-100 или 5-60 мкг. Когда используют gE, тогда, соответственно, используют 25-100 мкг gE, в одном из аспектов 40-100 мкг gE, как, например, примерно 25, 50 или примерно 100 мкг gE, соответственно 25, 50 или 100 мкг gE. Оптимальное количество для конкретной вакцины можно установить стандартными исследованиями, включающими наблюдение подходящих иммунных ответов у субъектов. После первичной вакцинации субъекты могут получать одну или несколько повторных иммунизаций, разделенных соответствующими промежутками времени. В одном из аспектов композицию gE и адъюванта или вакцину используют в однодозовой схеме доставки. В одном из аспектов композицию gE и адъюванта или вакцину используют в двухдозовой схеме доставки. В одном из аспектов композицию или вакцину по изобретению используют в двухдозовой схеме доставки с интервалом 2 месяца между дозами. В одном из аспектов адъювантом Th-1 является любой адъювант, определенный выше для первого аспекта данного изобретения. Конкретно, можно использовать комбинацию 3D-MPL и QS21, например,как раскрыто в WO 94/00153, или менее реактогенную композицию, где QS21 погашен холестерином,как раскрыто в WO 96/33739 и US 6846489. Альтернативный адъювант содержит QS21 и 3D-MPL в эмульсии типа масло в воде, как описано в WO 95/17210. В одном из аспектов препарат содержит С-концевое укорочение антигена gE VZV, например, которое приведено на фиг. 1, в комбинации с 3D-MPL и QS21. В другом аспекте данное изобретение относится к набору, содержащему в виде отдельных компонентов адъювант Th-1 и антиген gE или его иммуногенный фрагмент, как описано выше, подходящие для немедленного получения вакцинной композиции. В одном из аспектов оба компонента представляют собой жидкости. В одном из аспектов один компонент лиофилизирован и подходит для растворения другим компонентом. В одном из аспектов данный набор содержит антиген gE, имеющий последовательность, приведенную на фиг. 1, и адъювант, содержащий QS21, и липосомы, содержащие холестерин и 3D-MPL.-8 011884 Получение вакцин в общем описано в New Trends and Developments in Vaccines, Voller et al. (eds),University Park Press, Baltimore, Maryland, 1978. Аспекты настоящего изобретения включают в себя следующее. А. Иммуногенную композицию, содержащую антиген VZV или его иммуногенное производное в комбинации с живым ослабленным VZV или цельным инактивированным VZV. Б. Способ предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии (PHN), включающий доставку индивидууму иммуногенной композиции, содержащей антиген VZV или его иммуногенное производное в комбинации с живым ослабленным VZV или цельным инактивированным VZV. В. Способ предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, включающий последовательную или совместную доставку индивидууму антигенаVZV или его иммуногенного производного и живого ослабленного VZV или цельного инактивированного VZV. Г. Способ согласно п.В, где антиген VZV доставляют перед живым ослабленным VZV. Д. Способ согласно п.В, где антиген VZV доставляют после живого ослабленного VZV. Е. Способ согласно п.В, где антиген VZV доставляют совместно с живым ослабленным VZV, предпочтительно каждый компонент доставляют в разные руки пациента. Ж. Набор, включающий живой ослабленный VZV или цельный инактивированный VZV и, отдельно, антиген VZV или его иммуногенное производное, компоненты, подходящие для совместной или последовательной доставки или для смешивания в виде единой композиции перед доставкой. З. Способ изготовления иммуногенной композиции, включающий объединение живого ослабленного VZV или цельного инактивированного VZV с антигеном VZV или его иммуногенным производным. И. Применение живого ослабленного штамма VZV в приготовлении иммуногенной композиции для предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, где живой ослабленный штамм VZV используют в комбинации с антигеном VZV или его иммуногенным производным. К. Применение цельного инактивированного штамма VZV в приготовлении иммуногенной композиции для предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, где цельный инактивированный штамм VZV используют в комбинации с антигеном VZV или его иммуногенным производным. Л. Применение антигена VZV или его иммуногенного производного в приготовлении иммуногенной композиции для предупреждения и/или уменьшения тяжести опоясывающего герпеса и/или постгерпетической невралгии, где антиген VZV используют в комбинации с живым ослабленным штаммом VZV или с цельным инактивированным штаммом VZV. М. Применение согласно любому из пп.И, К, где антиген или его производное доставляют в подходе с первичной - повторной иммунизацией перед доставкой штамма VZV. Н. Применение согласно любому из пп.И, К, где антиген или его производное доставляют в подходе с первичной - повторной иммунизацией после доставки штамма VZV. О. Применение согласно любому из пп.И, К, где антиген или его производное доставляют совместно со штаммом VZV. П. Применение согласно любому из пп.И, К, где антиген или его производное доставляют в смеси со штаммом VZV. Р. Применение, способ, набор или композиция согласно любому из предшествующих параграфов,где штамм живого ослабленного VZV представляет собой штамм OKA. С. Применение, способ, набор или композиция согласно любому из предшествующих параграфов,где антиген VZV представляет собой антиген gE или его иммуногенное производное. Т. Применение, способ, набор, композиция или вакцина согласно любому из предшествующих пунктов, где антиген VZV доставляют вместе с адъювантом, способным стимулировать ответ Th-1-типа. Настоящее изобретение проиллюстрировано следующими неограничивающими примерами. Пример 1. Можно создать три экспериментальные группы для исследования обоих аспектов данного изобретения. Схема введения-9 011884 Используемый gE может представлять собой укороченный gE, как раскрыто на фиг. 1.Varilrix представляет собой имеющийся в продаже штамм OKA. Добровольцев (например, 50 на группу - здоровых, в возрасте 50-70 лет) можно выбрать для вакцинации согласно приведенному выше протоколу и результаты можно оценить путем измерения как клеточно-опосредованного иммунного, так и антительного ответов, например, методами внутриклеточного окрашивания (ICS, Roederer et al. 2004, Clin. Immunol. 110: 199) или ELISA соответственно, которые хорошо известны в данной области. Специфический клеточно-опосредованный иммунитет можно оценить, например, путем инкубацииin vitro PBMC (мононуклеарных клеток периферической крови) пациента с экстрактами вируса ветряной оспы, а также со специфическими антигенами VZV или пептидами gE, IE63 и IE62. Анализ можно провести, например, на уровне: а) лимфопролиферации (данные выражены как индекс стимуляции [SI]): GM, кратное увеличение(внутриклеточное окрашивание на цитокины): GM, кратное увеличение GM и % реагирующих. Эффективность можно оценить, находя значимое увеличение CMI и/или антительного ответа по сравнению с уровнями превакцинации. Эффективность других антигенов или подходов можно оценить, используя эти или аналогичные методики и сравнивая уровни пре-вакцинации с уровнями поствакцинации. Пример 2. Эксперимент из примера 1 проводили на добровольцах разного возраста следующим образом: Схема вакцинации была следующей: Адъювант AS1 содержит 3D-MPL и QS21 в погашенной форме с холестерином и был получен, как описано в WO 9633739, включенной в данное описание изобретения посредством ссылки. Конкретно,адъювант AS1 получали, по существу, как в примере 1.1 из WO 9633739. Данный адъювант содержит липосомы, которые в свою очередь включают диолеилфосфатидилхолин (DOPC), холестерин и 3D-MPL(в количестве 1000 мкг DOPC, 250 мкг холестерина и 50 мкг 3D-MPL, причем каждое значение дано приблизительно на дозу вакцины), QS21 (50 мкг/дозу), PBS и воду для доведения до объема 0,5 мл. В способе получения липосом, содержащих MPL, DOPC (диолеилфосфатидилхолин), холестерин иMPL растворяют в этаноле. Липидная пленка образуется путем выпаривания растворителя под вакуумом. Добавляют физиологический раствор с фосфатным буфером или PBS (9 мМ Na2HPO4, 41 мМKH2PO4, 100 мМ NaCl) с рН 6,1 и подвергают данную смесь предварительной гомогенизации с последующим микропсевдоожижением при 15000 фунт/кв.дюйм (103,425 МПа) (20 циклов). Это приводит к получению липосом, которые стерильно фильтруют через мембрану 0,22 мкм в асептической (класс 100) зоне. Стерильный продукт затем распределяют в стерильные стеклянные контейнеры и хранят в холодном помещении (от 2 до 8 С). Полученные этим способом липосомы содержат MPL в мембране ("MPL" в воплощении WO 9633739). Укороченный gE из фиг. 1 экспрессировали в клетках CHO K1, используя стандартные методики, и очищали, используя по порядку анионообменную хроматографию, хроматографию гидрофобного взаимодействия, ионообменную хроматографию, диафильтрацию и нанофильтрацию с последующей стерилизацией через фильтр 0,22 мкм. Конкретно, при очистке gE использовали следующие стадии. Первая стадия: анионообменная хроматография. Культуральный супернатант, содержащий gE (приблизительно 30 мг/л), очищают либо непосредственно после осветления клеточной суспензии, либо после размораживания при 4 С. После переноса в- 10011884 20-литровую стеклянную бутыль рН супернатанта доводят до 6. Стадия улавливания происходит при температуре окружающей среды на хроматографической колонке, содержащей смолу Q Sepharose XL. После санитарной обработки гидроксидом натрия данную колонку доводят до кондиции в буфере для улавливания (20 мМ пиперазин, рН 6). Затем на колонку наносят супернатант, и промывают данную колонку уравновешивающим буфером и раствором 20 мМ пиперазина + 150 мМ NaCl, рН 6. Фракцию, содержащую gE, затем элюируют раствором 20 мМ пиперазина + 250 мМ NaCl, pH 6. Вторая стадия: хроматография гидрофобных взаимодействий. Эта хроматографическая стадия происходит при температуре окружающей среды на смолеToyopearl butyl-650 M (Tosoh Biosep). Фракцию, элюированную 20 мМ пиперазином + 250 мМ NaCl на стадии с Q Sepharose XL, доводят до концентрации 1 М в сульфате аммония и до рН 7,5. После санитарной обработки гидроксидом натрия и перед нанесением этой фракции колонку доводят до кондиции в буфере для улавливания (50 мМ KH2PO4 + 1 М сульфат аммония, рН 7,5). После нанесения колонку промывают буфером (50 мМ KH2PO4 + 100 мМ (NH4)2SO4, рН 7,5). gE элюируют буфером 50 мМ KH2PO4 + 25 мМ (NH4)2SO4, рН 7,5. Третья стадия: аффинная хроматография на иммобилизованных ионах металла. Эта хроматографическая стадия происходит при температуре окружающей среды на смоле Chelating Sepharose Fast Flow (хелатная сефароза с быстрым током). Эту смолу насыщают ионами металла (Ni) путем применения раствора сульфата никеля (1%) и избыток несвязавшихся ионов (Ni) удаляют промывкой. Фракцию gE, элюированную 50 мМ KH2PO4 + 25 мМ (NH4)2SO4, рН 7,5 в гидрофобной фазе, доводят до 0,5 М NaCl и до рН 7,5. После санитарной обработки колонку уравновешивают в буфере для улавливания (50 мМ KH2PO4 + 0,5 М NaCl, рН 7,5). Раствор gE наносят на колонку, которую затем промывают раствором 50 мМ KH2PO4 + 0,5 М NaCl, рН 5,6. Затем элюируют gE буфером: 50 мМ ацетата натрия + 0,5 М NaCl, рН 5 и нейтрализуют 1 М раствором Трис, рН 9,5. Четвертая стадия: диафильтрация. Замену буфера и удаление солей из фракции gE, элюированной при рН 5 на предыдущей стадии,проводят с помощью тангенциальной ультрафильтрации. Эту стадию полностью проводят при 4 С. Ультрафильтрацию осуществляют с помощью системы Millipore Proflux М 12, оснащенной мембраной Pellicon2 Mini из регенерированной целлюлозы (кат.Р 2 С 010 С 01) с пределом номинальной молекулярной массы 10 кДа и площадью поверхности 0,1 м 2, расположенной в корпусе миникассеты Pellicon2(кат.XX42PMINI). После промывки водой и санитарной обработки гидроксидом натрия всю систему с мембраной промывают 2 л модифицированного буфера PBS (=8,1 мМ Na2HPO4 2H2O, 1,47 мМ KH2PO4, 137 мМNaCl, 2,68 мМ KCl, рН 7,2) и затем уравновешивают 2 л того же буфера до тех пор, пока рН в фильтрате не достигнет значения 7,2. Контролируют измерение проницаемости мембраны. Тест на целостность мембраны проводят путем помещения системы под давление вплоть до 1 бар (100 кПа) до стадии диафильтрации и в конце стадии диафильтрации. Если эту мембрану используют дважды с интервалом в одну неделю, то целостность будут тестировать 3 раза (один раз перед каждой ультрафильтрацией и один раз после второй фильтрации). Мембрана считается интактной, если потеря давления, записанная в течение 5 мин, составляет менее 0,1 бар (10 кПа). Концентрацию фракции gE, элюированной на аффинной стадии при рН 5, оценивают путем измерения оптической плотности при 280 нм. Корреляция между поглощением при 280 нм и концентрацией белка gE, полученная microBCA, зафиксирована на уровне 1 OD280=1,75 мг/мл. Раствор, содержащий gE, подвергают диафильтрации против 10 объемов модифицированного буфера PBS (=8,1 мМ Na2HPO4 2H2O, 1,47 мМ KH2PO4, 137 мМ NaCl, 2,68 мМ KCl, рН 7,2). Условия давления устанавливают так, что период диафильтрации составляет примерно 1,5-2 ч (ток фильтрата приблизительно 60 мл/мин). Затем отделяют диафильтрационный остаток и на основе исходной OD280 промывают мембрану модифицированным PBS с получением приблизительной конечной концентрации 0,4 мг/мл. Пятая стадия: нанофильтрация. Эта стадия позволяет удалить вирусы с диаметром более 15 нм путем задержки. Данную стадию полностью проводят при 4 С. Нанофильтрацию проводят на фильтре PLANOVA 15N (средний размер пор 15 нм; площадь поверхности фильтрации 0,12 м 2 (ASAHA кат.15NZ-120. Раствор gE фильтруют на данной мембране при постоянном давлении 0,45 бар (45 кПа) и получают на другой стороне (фильтра) с удаленными вирусами. Трубки и корпус (колонка XK50) подвергают санитарной обработке в течение 2 ч раствором NaOH,0,5 М. Все это затем промывают и нейтрализуют модифицированным буфером PBS (такой же буфер, как и буфер для диафильтрации) до тех пор, пока рН не достигнет значения 7,2. После фиксации нанофильтра PLANOVA 15N (сторона, на которую осуществляют подачу) под держателем данный фильтр промывают и уравновешивают раствором модифицированного PBS.- 11011884 Остаток после диафильтрации, содержащий раствор gE, сначала предварительно фильтруют через 0,22 мкм (mini kleenpak OU Acropak20, в зависимости от объема, подлежащего фильтрации) до нанофильтрации при постоянном давлении 0,45 бар (45 кПа) на PLANOVA 15N. В конце нанофильтрации фильтр промывают достаточным объемом модифицированного PBS с получением конечной концентрации основного объема приблизительно 0,3 мг/мл. В конце мембрану промывают 50 мл модифицированного PBS. Раствор извлекают через отверстие для остатка. Затем проводят тест на целостность мембраны PLANOVA 15N следующим образом: первый тест состоит в помещении мембраны под давление (1,0 кг/см 2) и наблюдении за образованием пузырьков воздуха. Этот тест определяет любые большие трещины; второй тест: удаление частиц золота (PARTICORPLANOVA-QCVAL4) контролирует структуру мембраны (хорошее распределение больших пор и капилляров). Вакцинная композиция. Компонент gE вакцины содержит 50 мкг gE и эксципиенты: хлорид натрия, хлорид калия, однозамещенный фосфат калия, двузамещенный фосфат натрия и воду для инъекции, а также адъювант AS1. Функция неорганических солей состоит в обеспечении изотоничности и физиологического рН. В стерильном стеклянном контейнере смешивали воду для инъекции, концентрированный, забуференный фосфатом физиологический раствор и антиген gE для того, чтобы достичь концентрации ингредиентов, приведенной ниже: Данный раствор перемешивают в течение 30-40 мин, рН проверяют и доводят до 7,20,1 с помощью HCl или NaC, или тем, что является подходящим, и перемешивают в течение еще 10 мин. Конечный основной объем хранят в полипропиленовых бутылях при -20 С и переносят в GSK Bio для наполнения. Вакцину распределяют в 3 мл стерильные сосуды из силиконизированного стекла (0,25 мл/сосуд), которые закрывают серыми пробками из хлорбутильной резины и запечатывают центрированным отрывным алюминиевым колпачком. Проверенные, одобренные сосуды затем хранят при -20 С. Доставка вакцины. Вакцину gE-AS1 для введения получали смешиванием препарата жидкого антигена с жидким адъювантом AS1 непосредственно перед инъекцией (максимум за 1 ч до инъекции). OKA (Varilrix) представлял собой имеющуюся в продаже партию, приготовленную согласно инструкциям производителя. Вакцинные препараты были следующими: Компонент gE AS1 вводили путем внутримышечной инъекции. Компонент Varilrix вводили путем подкожной инъекции. Анализ результатов. Протокол клинического испытания, составленный при подготовке к клиническому испытанию,описывает типы исследований, которые следовало провести в данном испытании, как следующие: а) лимфопролиферация (данные выражены как индекс стимуляции [SI]): GM, кратное увеличениеGM и % реагирующих после стимуляции лизатом VZV;- 12011884 б) IFN- и/или IL2, TNF-, CD40L, CD4- и CD8-ответы, определенные ICS (внутриклеточное окрашивание): GM, кратное увеличение GM и % реагирующих после стимуляции лизатом VZV и gE, пептиды IE62 и IE63. Лимфопролиферация. Антигенспецифические лимфоциты периферической крови можно повторно стимулировать in vitro для пролиферации, если инкубировать их с соответствующим антигеном. Вследствие этого количество антигенспецифических лимфоцитов можно оценивать путем подсчета в анализе включения тритированного тимидина. В настоящем исследовании антиген VZV или пептид, происходящий из белков VZV, будет использоваться в качестве антигена для повторной стимуляции VZV-специфических лимфоцитов. Результаты будут выражены как индекс стимуляции (SI), который соответствует отношению антигенспецифической и фоновой лимфопролиферации. Проточная цитометрия цитокинов (CFC). Антигенспецифические CD4 и CD8 Т-клетки периферической крови можно повторно стимулировать in vitro для экспрессии CD40L, IL-2, TNF- и IFN- при их инкубации с соответствующим антигеном. Впоследствии можно подсчитать антигенспецифические CD4 и CD8 Т-клетки с помощью проточной цитометрии после традиционного иммунофлуоресцентного мечения клеточного фенотипа, а также внутриклеточную продукцию цитокинов. В настоящем исследовании антиген VZV или пептид, происходящий из белков VZV, будет использоваться в качестве антигена для повторной стимуляции VZVспецифических Т-клеток. Результаты будут выражены как частота цитокин(ы)-позитивных CD4 или CD8 Т-клеток в CD4 и CD8 Т-клеточной субпопуляции. Специфическое антитело (анти-VZV и анти-gE). Уровни антител против VZV и gE будут измерены с использованием классических ELISA анализов. Результаты эксперимента показаны в табличной форме. Фиг. 2-6 представляют результаты в графической форме для антитела (фиг. 2-4, см. табл. 1.1 а-в) и ответов CMI (фиг. 5 и 6, см. табл. С 1/ тест "все дублеты CD4" с антигеном gE или Varilirix, значения медиан). Гуморальный иммунный ответ. Таблица I.1 а. Индексы серопозитивности и GMT для VZV IGG антител (АТР когорта иммуногенности). Таблица I.1 б. Индексы серопозитивности и GMT для VZV.GE антител (АТР когорта иммуногенности). Таблица I.1 в. Индексы серопозитивности и GMT для IFA антител (АТР когорта иммуногенности). Таблица I.2 б. Индексы сероконверсии для титра gE антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности). Таблица I.3 а. Ответ на вакцину для титра VZV антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности). Таблица I.3 б. Ответ на вакцину для титра gE антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности). Таблица 1.3 в. Ответ на вакцину для титра IFA антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности).GMC - геометрическое среднее концентрации антител, рассчитанное для всех субъектов.GMC - геометрическое среднее концентрации антител, рассчитанное для всех субъектов.GMT - геометрическое среднее титра антител, рассчитанное для всех субъектов.- 16011884 Таблица I.2 б Индексы сероконверсии для титра gE антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности)N - число серонегативных субъектов в сутки 0.n/% - число/процент первоначально серонегативных субъектов, которые стали серопозитивными в определенный момент поствакцинации. 95% Cl - 95% доверительный интервал; LL - нижний предел,UL - верхний предел. Таблица I.3 а Ответ на вакцину для титра VZV антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности)N - число серопозитивных субъектов в сутки 0.n/% - число/процент первоначально серопозитивных субъектов с четырехкратным увеличением в определенный момент поствакцинации. 95% Cl - 95% доверительный интервал; LL - нижний предел,UL - верхний предел.- 17011884 Таблица I.3 б Ответ на вакцину для титра gE антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности)N - число серопозитивных субъектов в сутки 0.n/% - число/процент первоначально серопозитивных субъектов с четырехкратным увеличением в определенный момент поствакцинации. 95% Cl - 95% доверительный интервал; LL - нижний предел,UL - верхний предел. Таблица I.3 в Ответ на вакцину для титра IFA антител в каждый момент поствакцинации (АТР когорта иммуногенности)N - число серопозитивных субъектов в сутки 0.n/% - число/процент первоначально серопозитивных субъектов с четырехкратным увеличением в определенный момент поствакцинации. 95% Cl - 95% доверительный интервал; LL - нижний предел,UL - верхний предел.- 18011884 Анализ CMI ответов приведен ниже. Перечень таблиц Таблица С.1. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD4 Т-клетках в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта). Дополнительная таблица С.1. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD8 Т-клетках в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта). Таблица С.2. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): статистика вывода: Р-значения критериев Крускала-Уоллиса для CD4 Т-клеток в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта). Дополнительная таблица С.2. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): статистика вывода: Р-значения критериев Крускала-Уоллиса для CD8 Т-клеток в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта). Таблица С.3. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD4 Т-клетках в момент постпревакцинации (вся вакцинированная когорта). Дополнительная таблица С.3 Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD8 Т-клетках в момент постпревакцинации (вся вакцинированная когорта). Таблица С.4. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): статистика вывода: Р-значения критериев Крускала-Уоллиса для CD4 Т-клеток в момент постпревакцинации (вся вакцинированная когорта). Дополнительная таблица С.4. Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): статистика вывода: Р-значения критериев Крускала-Уоллиса для CD8 Т-клеток в момент постпревакцинации (вся вакцинированная когорта).- 19011884 Таблица С.1 Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD4 Т-клетках в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта)- 22011884 Дополнительная таблица С.1 Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD8 Т-клетках в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта)- 25011884 Таблица С.2 Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): статистика вывода: Р-значения критериев Крускала-Уоллиса для CD4 Т-клеток в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта)- 26011884 Дополнительная таблица С.2 Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): статистика вывода: Р-значения критериев Крускала-Уоллиса для CD8 Т-клеток в каждый момент времени (вся вакцинированная когорта)- 27011884 Таблица С.3 Внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS): описательная статистика на CD4 Т-клетках в момент постпревакцинации (вся вакцинированная когорта)