Антитела к ifn-γ и способ получени я и применения антител

Формула / Реферат | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Код ссылки

Номер патента: 11876

Опубликовано: 30.06.2009

Авторы: Уэлчер Эндрю А., Ли Юэ-Шэн, Чьют Хилари Т., Хуан Хайчунь

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Выделенное антитело, содержащее определяющий комплементарность участок 3 (CDR3) тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, включающую по меньшей мере 7 аминокислот SEQ ID NO: 36 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 36, способное специфически связываться с IFN-g.

2. Антитело по п.1, включающее CDR3 легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представляющую собой:

(a) аминокислотную последовательность, включающую по меньшей мере 8 аминокислот SEQ ID NO: 43 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 43; или

(b) аминокислотную последовательность, включающую по меньшей мере 9 аминокислот SEQ ID NO: 44 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 44.

3. Антитело по п.2, включающее одно или более из CDR1 тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; CDR2 тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35; CDR3 тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37; CDR1 легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 или SEQ ID NO: 40, и/или CDR2 легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 или SEQ ID NO: 42.

4. Антитело по п.2, где CDR3 тяжелой цепи имеет SEQ ID NO: 36, a CDR3 легкой цепи имеет SEQ ID NO: 43.

5. Антитело по любому из пп.1-4, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30, где сопоставление аминокислотной последовательности тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

6. Антитело по п.5, где аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30.

7. Антитело по п.6, где аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи идентична SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30.

8. Антитело по любому из пп.1-7, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31, где сопоставление аминокислотной последовательности легкой цепи с SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

9. Антитело по п.8, где аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31.

10. Антитело по п.9, где аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31.

11. Антитело по любому из пп.1-4, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32, где сопоставление аминокислотной последовательности тяжелой цепи с SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

12. Антитело по п.11, где аминокислотная последовательность тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32.

13. Антитело по п.12, где аминокислотная последовательность тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 32.

14. Антитело по любому из пп.1-4 и 11-13, содержащее аминокислотную последовательность легкой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33, где сопоставление аминокислотной последовательности легкой цепи с SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

15. Антитело по п.14, где аминокислотная последовательность легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33.

16. Антитело по п.15, где аминокислотная последовательность легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 33.

17. Антитело по п.1, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представляющую собой:

(a) аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 96% идентичную SEQ ID NO: 6;

(b) аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 93% идентичную SEQ ID NO: 10;

(d) аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную SEQ ID NO: 30;

где сопоставление аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

18. Антитело по п.17, где аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 10 или на 95% идентична SEQ ID NO: 14.

19. Антитело по п.18, где аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30.

20. Антитело по любому из пп.17-19, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31, где выравнивание между аминокислотной последовательностью легкой цепи и SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

21. Антитело по п.20, где аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31.

22. Антитело по любому из пп.17-21, где аминокислотная последовательность CDR3 тяжелой цепи включает по меньшей мере 5 аминокислот в SEQ ID NO: 36 и/или SEQ ID NO: 37 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 36 и/или SEQ ID NO: 37.

23. Антитело по п.20 или 21, где аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи включает по меньшей мере 6 аминокислот в SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44.

24. Антитело по п.1, способное ингибировать биологическую активность IFN-g человека и IFN-g шимпанзе и не ингибирующее биологическую активность IFN-g обезьяны циномолгус и IFN-g мыши, и не способное ингибировать биологическую активность мутантного варианта IFN-g человека, где гистидин в положении 19 заменен аспартатом и/или где серин в положении 20 заменен пролином.

25. Антитело по п.24, способное ингибировать биологическую активность мутантного варианта IFN-g обезьяны циномолгус, в котором гистидин в положении 19 заменяет аспартат, серин в положении 20 заменяет пролин и серин в положении 65 заменяет аргинин.

26. Антитело по п.1, содержащее CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи, CDR3 легкой цепи, CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи, где

CDR1 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;

CDR2 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35;

CDR3 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37;

CDR1 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 или SEQ ID NO: 40;

CDR2 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 или SEQ ID NO: 42;

CDR3 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43 шыш SEQ ID NO: 44.

27. Антитело по п.26, в котором

CDR3 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36,

CDR1 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38,

CDR2 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 и

CDR3 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

28. Антитело по п.26 или 27, содержащее

аминокислотную последовательность тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32, где сопоставление аминокислотной последовательности тяжелой цепи с SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот, и

аминокислотную последовательность легкой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33, где сопоставление аминокислотной последовательности легкой цепи с SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

29. Антитело по п.28, в котором

аминокислотная последовательность тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32 и

аминокислотная последовательность легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33.

30. Антитело по п.29, в котором

аминокислотная последовательность тяжелой цепи имеет SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 32 и

аминокислотная последовательность легкой цепи имеет SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и/или SEQ ID NO: 33.

31. Антитело по п.26 или 27, содержащее

аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30, где сопоставление между аминокислотной последовательностью вариабельной области тяжелой цепи и SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот; и

аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31, где сопоставление между аминокислотной последовательностью вариабельной области легкой цепи и SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

32. Антитело по п.31, в котором

аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30 и

аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 31.

33. Антитело по п.32, где

аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30 и

аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31.

34. Антитело по п.1, содержащее:

(a) аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, включающую SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30, или фрагмент любой из этих последовательностей и

(b) аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, включающую SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31, или фрагмент любой из этих последовательностей.

35. Антитело по п.34, содержащее:

(a) аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30 и

(b) аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31.

36. Антитело по п.35, содержащее SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 8.

37. Выделенное антитело, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, представляющую собой:

(a) аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 97% идентичную SEQ ID NO: 8;

(b) аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 96% идентичную SEQ ID NO: 12;

(d) аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 31;

где сопоставление SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31 с аминокислотной последовательностью легкой цепи охватывает по меньшей мере 50 аминокислот,

способное специфически связываться с IFN-g.

38. Антитело по п.37, где аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 97% идентична SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31.

39. Антитело по п.38, где аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31.

40. Антитело по п.37, где аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи включает по меньшей мере 6 аминокислот в SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44.

41. Антитело по любому из пп.37-40, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30, где сопоставление аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот.

42. Антитело по п.41, где аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 и/или SEQ ID NO: 30.

43. Антитело по п.41 или 42, где аминокислотная последовательность CDR3 тяжелой цепи включает по меньшей мере 5 аминокислот в SEQ ID NO: 36 и/или SEQ ID NO: 37 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 36 и/или SEQ ID NO: 37.

44. Антитело по любому из пп.1-43, представляющее собой одноцепочечное антитело.

45. Антитело по любому из пп.1-43, представляющее собой полностью человеческое антитело.

46. Антитело по любому из пп.1-43, представляющее собой гуманизированное антитело.

47. Выделенный полинуклеотид, кодирующий антитело по любому из пп.1-46.

48. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.47.

49. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.48.

50. Способ получения антитела, способного специфически связываться с IFN-g, включающий культивирование клетки-хозяина по п.49.

51. Способ лечения заболевания, опосредованного IFN-g, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1, 3-46.

52. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество антитела по любому из пп.1-46.

53. Способ лечения заболевания, опосредованного IFN-g, включающий введение композиции по п.52.

54. Способ по п.51 или 53, где заболевание, опосредованное IFN-g, представляет собой СПИД, ревматоидный артрит, включая ювенильный ревматоидный артрит; воспалительные заболевания кишечника, включая язвенный колит и болезнь Крона; рассеянный склероз, болезнь Аддисона, диабет (I типа), эпидидимит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, хронический лимфоматозный тиреоидит, гемолитическую анемию, системную красную волчанку (СКВ), волчаночный нефрит, астенический бульбарный паралич, пемфигус, псориаз, псориатический артрит, атеросклероз, устойчивость к эритропоэтину, реакцию "трансплантат против хозяина", отторжение трансплантата, аутоиммунэюх гепатитиндуцированное поражение печени, билиарный цирроз печени, алкогольиндуцированное поражение печени, включая алкогольный цирроз, ревматизм, саркоидоз, склеродерму, синдром Шегрена, спондилоартропатии, включая анкилозирующий спондилит, тиреоидит или васкулит.

55. Способ по п.54, где заболевание, опосредованное IFN-g, выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, включая ювенильный ревматоидный артрит, воспалительных заболеваний кишечника, включая язвенный колит и болезнь Крона, рассеянного склероза, системной красной волчанки (СКВ), волчаночного нефрита, псориаза и псориатического артрита.

Текст

Смотреть все

011876 Эта заявка претендует на приоритет предварительной заявки US 60/419057, поданной 16 октября 2002 года, и предварительной заявки US 60/479241, поданной 17 июня 2003 года. Область изобретения Изобретение относится к человеческим моноклональным антителам, которые связывают интерферон-гамма (IFN-). Описаны также композиции и способы лечения заболеваний, опосредованных IFN-. Предпосылки изобретения Интерфероны (IFN) были первоначально названы так за их способность препятствовать (от англ.interfere) вирусной инфекции клеток-хозяев (Isaacs and Lindenman, 1957, Proc. R. Soc. 147: 28-267). После их открытия был идентифицирован целый ряд членов интерферонового семейства, имеющих различные биологические функции помимо антивирусной защиты, в том числе клеточный рост и клеточный иммунитет. Интерфероны типов IFN-, IFN-, IFN- и IFN- представляют собой интерфероны I типа и связывают рецептор IFN типа I, тогда как IFN- представляет собой интерферон II типа и связывает рецептор IFN типа II (Pfeffer et al., 1998, Cancer Res. 58: 2489-2499). Передача сигнала IFN- зависит по меньшей мере от пяти разных белков: IFNGR1 и IFNGR2 (субъединицы рецептора IFN-), Jak1, Jak2 и транскрипционного фактора STAT1 (Schindler and Darnell, 1995,Annu. Rev. Biochem. 64: 621-651; Bach et al., 1997, Annu. Rev. Immunol. 15: 563-591). Рецепторы IFNобнаружены на большинстве типов клеток, за исключением зрелых эритроцитов (Farrar and Schreiber,1993, Annu. Rev. Immunol. 11: 571-611). Белки Jak1, Jak2 и STAT1 опосредуют передачу сигнала IFN-.IFN- регулирует различные биологические функции, такие как антивирусные ответы, клеточный рост, иммунный ответ и опухолевая супрессия, а также IFN- может принимать участие в различных заболеваниях человека. Таким образом, в данной области существует потребность в агентах, которые могут модулировать биологическую активность IFN-. Краткое изложение сущности изобретения В изобретении предложены моноклональные антитела, которые связываются с интерфероном(IFN-), и полинуклеотиды, кодирующие их. Эти антитела могут ингибировать или модулировать по меньшей мере один из видов биологической активности IFN- и могут быть полезны для смягчения последствий заболеваний, опосредованных IFN-. В изобретении также предложены гибридомные клетки, которые продуцируют и могут секретировать в клеточные культуральные среды моноклональные антитела по изобретению. Антитела по изобретению могут быть полезны для лечения заболеваний, опосредованных IFN-. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, возможно моноклональные антитела и/или человеческие антитела, которые могут содержать тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 2, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, возможно моноклональные антитела, которые могут представлять собой человеческие антитела, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает константную область тяжелой цепи IgG1, IgG2 или IgG4. В некоторых воплощениях антитело по изобретению содержит аминокислотную последовательность константной области тяжелой цепи IgG1, как определено в SEQ ID NO: 2, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах антитела по изобретению содержат тяжелую цепь и легкую цепь, где вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, определенную в любой изSEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В других аспектах вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, определенную в любой из SEQ ID NO: 8,SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В дополнительных аспектах тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в любой из SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ IDNO: 21 или SEQ ID NO: 32, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Согласно другим аспектам легкая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в любой из SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 33,или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В изобретении также предложены антитела, которые специфически связываются с IFN-, у которых тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 6, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи,содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 8, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения также предложены антитела и их иммунологически функциональные иммуноглобулиновые фрагменты, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать либо модулировать биологическую активность IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую-1 011876 цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95,96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной вSEQ ID NO: 6, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область легкой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93,94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 8, где это антитело взаимодействует с IFN-. Кроме того, в изобретении предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQID NO: 10, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, и легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 12, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 10, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80,85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 12, причем это антитело взаимодействует с IFN-. Кроме того, в изобретении предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQID NO: 30, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 12, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, и где вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92,93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 30, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, и где вариабельная область легкой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 12, где это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 14,или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, и легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 16, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 14, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 16, причем это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 14,или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 31, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функцио-2 011876 нальный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 14, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 31, причем это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 17, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 18, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 17, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 18, причем это антитело взаимодействует с IFN-. Кроме того, в изобретении предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 19, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, и легкая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 20, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 19, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 20, где это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 21, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, и легкая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 22, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 21, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 22, причем это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 32, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, и легкая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 20, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент.-3 011876 В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, и где вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92,93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 32, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, и где вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 20, где это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 21, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, и легкая цепь включает аминокислотную последовательность, определенную в SEQ ID NO: 33, или и ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, которые могут ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи, причем эта вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью,определенной в SEQ ID NO: 21, и где легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи, причем эта вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, определенной в SEQ ID NO: 33, причем это антитело взаимодействует с IFN-. В изобретении также предложены одноцепочечные антитела, одноцепочечные Fv-антитела, F(ab)антитела, F(ab)'-антитела и (Fab')2-антитела. В конкретных аспектах изобретения предложена легкая цепь, включающая аминокислотную последовательность, как определено в любой из SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 31 или SEQ ID NO: 33, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Кроме того, в изобретении предложена тяжелая цепь, включающая аминокислотную последовательность, как определено в любой из SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 17,SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32, или ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Изобретение также относится к выделенным человеческим антителам, которые специфически связывают IFN-, где такое антитело включает: (а) каркасные участки тяжелой цепи человека, определяющий комплементарность участок 1 (CDR1-участок) тяжелой цепи человека, CDR2-участок тяжелой цепи человека и CDR3-участок тяжелой цепи человека; и (б) каркасные участки легкой цепи человека, CDR1 участок легкой цепи человека, CDR2-участок легкой цепи человека и CDR3-участок легкой цепи человека. В некоторых аспектах CDR1-участок тяжелой цепи человека может представлять собой CDR1-участок тяжелой цепи моноклональных антител (мАТ) 1119, 1118, 1118 или 1121, как показано на фиг. 12 иSEQ ID NO: 34, и CDR1-участок легкой цепи человека может представлять собой CDR1-участок легкой цепи мАТ 1119, 1118, 1121 или 1121, как показано на фиг. 13 и SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 или SEQID NO: 40. В других аспектах CDR2-участок тяжелой цепи человека может представлять собой CDR2 участок тяжелой цепи мАТ 1119, 1118, 1118 или 1121, как показано на фиг. 12 и SEQ ID NO: 35, иCDR2-участок легкой цепи человека может представлять собой CDR2-участок легкой цепи мАТ 1119,1118, 1121 или 1121, как показано на фиг. 13 и SEQ ID NO: 41 или SEQ ID NO: 42. В других аспектахCDR3-участок тяжелой цепи человека представляет собой CDR3-участок тяжелой цепи мАТ 1119, 1118,1118 или 1121, как показано на фиг. 12 и SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37, и CDR3-участок легкой цепи человека представляет собой CDR3-участок легкой цепи мАТ 1119, 1118, 1121 или 1121, как показано на фиг. 13 и SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44. Кроме того, в изобретении предложены способы лечения заболевания, связанного с повышенной продукцией или чувствительностью к IFN-, и/или заболевания, опосредованного IFN-, включающие стадию введения нуждающемуся в этом фармацевтически эффективного количества одного или множества моноклональных антител по изобретению или его антигенсвязывающего или иммунологически функционального иммуноглобулинового фрагмента. В изобретении также предложены способы детекции уровня IFN- в биологическом образце, включающие стадию, на которой образец приводят в контакт с моноклональным антителом по изобретению или его антигенсвязывающим фрагментом. В изобретении также предложено выделенное антитело, которое может специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN- и содержит CDR3 тяже-4 011876 лой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представляющую собой: (а) аминокислотную последовательность, состоящую из по меньшей мере 7 аминокислот SEQ ID NO: 36 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 36; или (b) аминокислотную последовательность, включающую SEQ ID NO: 37. Антитело может дополнительно включать CDR3 легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представляющую собой: (а) аминокислотную последовательность, состоящую из по меньшей мере 8 аминокислот SEQ ID NO: 43 в том же порядке и пространственном расположении, как они представлены в SEQ ID NO: 43; или (б) аминокислотную последовательность, состоящую из по меньшей мере 9 аминокислот SEQ ID NO: 44 в том же порядке и пространственном расположении, как они представлены в SEQ ID NO: 44. Антитело может дополнительно содержать один или более CDR, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35,SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 и SEQ ID NO: 42. CDR3 тяжелой цепи может состоять по меньшей мере из аминокислот SEQ ID NO: 36, и CDR3 легкой цепи может состоять по меньшей мере из аминокислот SEQ ID NO: 43. Кроме того, в изобретении предложены выделенные антитела, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, содержащиеCDR3 легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представляющую собой: (а) аминокислотную последовательность, состоящую из по меньшей мере 8 аминокислот SEQ ID NO: 43 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 43; или (б) аминокислотную последовательность, состоящую из по меньшей мере 9 аминокислот SEQ ID NO: 44 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 44. Антитело может дополнительно включать CDR, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, SEQ IDNO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 или SEQ ID NO: 42. Выделенное антитело по изобретению, которое может специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, может включать 6 CDR, имеющих по меньшей мере аминокислотные последовательности: (a) SEQ ID NO: 34; (б) SEQ ID NO: 35; (в) SEQ IDSEQ ID NO: 42 и (е) SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44. Выделенные антитела по изобретению, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, могут включать аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентична SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30, причем сопоставление указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ IDNO: 30 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот, и/или аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентична SEQ ID NO: 8,SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31, причем сопоставление указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот. В другом аспекте антитела по изобретению, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, могут включать аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентична SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 32, где сопоставление указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 или SEQID NO: 32 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот, и/или аминокислотную последовательность,которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентична SEQ IDNO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 33, где сопоставление указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 33 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот. Одна аминокислотная последовательность в этих антителах может включать по меньшей мере 5 аминокислот SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37, и/или одна аминокислотная последовательность в этих антителах может включать по меньшей мере 6 аминокислотSEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44 в том же порядке и пространственном расположении, как они расположены в SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44. В одном аспекте изобретения предложено антитело, которое может представлять собой выделенное полностью человеческое антитело, где это антитело может ингибировать или модулировать биологическую активность IFN- человека. В другом аспекте антитело по изобретению, которое может представлять собой выделенное полностью человеческое антитело, не может ингибировать или модулировать биологическую активность IFN- обезьян cynomolgus и мышей. Еще в одном аспекте полностью человеческое антитело по изобретению может ингибировать или модулировать биологическую активность IFN человека и шимпанзе, но не может ингибировать или модулировать биологическую активность IFNобезьяны cynomolgus и/или мыши. Еще в одном аспекте замена остатка 19 в IFN- человека на аспарагиновую кислоту и/или остатка 20 на пролин предотвращает ингибирование или дает антагонистический-5 011876 эффект в отношении ингибирования биологической активности IFN- человека этим антителом. Кроме того, это антитело может ингибировать биологическую активность мутантного варианта IFN- обезьяныcynolmolgus, замещенного по остаткам 19, 20 и 65 на гистидин, серин и серин, соответственно. В других аспектах выделенные антитела по изобретению, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, могут включать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичную SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 32, причем сопоставление указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 32 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот, и/или могут включать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно 99% идентичную SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 33, причем сопоставление указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 илиSEQ ID NO: 33 охватывает по меньшей мере 50 аминокислот. Еще в одном воплощении изобретение охватывает выделенное антитело, которое может специфически связываться с IFN-, содержащее: (а) аминокислотную последовательность, включающую SEQ IDNO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 30, или фрагмент одной из этих последовательностей и (б) аминокислотную последовательность, включающую SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ IDNO: 16 или SEQ ID NO: 31, или фрагмент одной из этих последовательностей. Антитело может содержать тяжелую цепь и легкую цепь. Антитело может содержать: (a) SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ IDNO: 14 или SEQ ID NO: 30 и (б) SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 31. Кроме того, любое из антител по изобретению может представлять собой гуманизированные антитела или полностью человеческие антитела. В изобретении также предложены полинуклеотиды, включая выделенные полинуклеотиды, которые кодируют любое из антител по изобретению или его участки, как описано здесь, включая CDRучастки, вариабельные области тяжелой цепи, вариабельные области легкой цепи, одноцепочечные антитела, одноцепочечные Fv-антитела, F(ab)-антитела, F(ab)'-антитела и (Fab')2-антитела. Кроме того, в изобретении предложены векторы, содержащие такие полинуклеотиды, и клетки-хозяева, возможно клеткихозяева млекопитающих, содержащие такие полинуклеотиды и/или векторы. Антитела по изобретению могут быть получены путем культивирования таких клеток-хозяев. Конкретные предпочтительные воплощения по изобретению станут очевидными из следующего более подробного описания некоторых предпочтительных воплощений и формулы изобретения. Краткое описание графических материалов На фиг. 1 А-1 В представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 1 А; SEQ ID NO: 1),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 1 В; SEQ ID NO: 2) константной области тяжелой цепи анти-IFN- антител 1118, 1118, 1119, 1121 и 1121. На фиг. 2 А-2 В представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 2 А; SEQ ID NO: 3),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 2 В; SEQ ID NO: 4) константной области легкой цепи анти-IFN- антител 1118, 1118, 1119, 1121 и 1121. На фиг. 3A-3B представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 3A; SEQ ID NO: 5),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 3B; SEQ ID NO: 6) вариабельной области тяжелой цепи анти-IFN- антитела 1119. На фиг. 4 А-4 В представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 4 А; SEQ ID NO: 7),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 4 В; SEQ ID NO: 8) вариабельной области легкой цепи анти-IFN- антитела 1119. На фиг. 5 А-5 В представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 5 А; SEQ ID NO: 9),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 5 В; SEQ ID NO: 10) вариабельной области тяжелой цепи анти-IFN- антитела 1118. На фиг. 5 С представлена аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи (SEQ ID NO: 30) анти-IFN- антитела 1118. На фиг. 5D представлена нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи (SEQ ID NO: 56) анти-IFN- антитела 1118. На фиг. 6 А-6 В представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 6 А; SEQ ID NO: 11),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 6 В; SEQ ID NO: 12) вариабельной области легкой цепи анти-IFN- антитела 1118 или 1118. На фиг. 7 А-7 В представлена нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 7 А; SEQ ID NO: 13),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 7 В; SEQ ID NO: 14) вариабельной области тяжелой цепи анти-IFN- антитела 1121 или 1121. На фиг. 8 А-В предсталвнеа нуклеотидная последовательность участка кДНК (фиг. 8 А; SEQ ID NO: 15),кодирующего аминокислотную последовательность (фиг. 8 В; SEQ ID NO: 16) вариабельной области легкой цепи анти-IFN- антитела 1121. На фиг. 8 С представлена аминокислотная последовательность (SEQID NO: 31) вариабельной области легкой цепи анти-IFN- антитела 1121. На фиг. 8D представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 57) вариабельной области легкой цепи анти-IFN- антитела 1121. Фиг. 9 содержит график, демонстрирующий нейтрализацию или ингибирование биологической ак-6 011876 тивности IFN- в биоанализе А 549 с моноклональными антителами 1119, 1118 и 1121. Фиг. 10 содержит график, демонстрирующий нейтрализацию или ингибирование биологической активности IFN- в биоанализе THP-1/HLA DR моноклональными антителами 1119, 1118 и 1121. Фиг. 11 содержит график, демонстрирующий нейтрализацию или ингибирование биологической активности IFN- в биоанализе цельной крови (два донора) моноклональным антителом 1119. Фиг. 12 демонстрирует сопоставление аминоконцевого участка (включая вариабельную область) тяжелых цепей анти-IFN- моноклональных антител, обозначенных как 1118, 1118, 1121 и 1119. Эти последовательности включают сигнальную последовательность, кодируемую кДНК, выделенными в примере 3. Сигнальная последовательность простирается от положения 1 до 19. Участки CDR подчеркнуты. Как показано на этой фигуре, CDR1 охватывает аминокислоты 50-54, CDR2 охватывает аминокислоты 69-85 и CDR3 охватывает аминокислоты 118-125. Нумерация по системе по Kabat et al. (1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD) начинается с первой аминокислоты зрелого антитела и исключает сигнальную последовательность. Таким образом,положение 20 на этой фигуре будет соответствовать положению 1 по Kabat et al. (см. выше). Фиг. 13 демонстрирует сопоставление аминоконцевого участка (включая вариабельную область) легких цепей анти-IFN- моноклональных антител, обозначенных 1118, 1121, 1121 и 1119. Последовательности включают сигнальную последовательность, кодируемую кДНК, выделенными в примере 3. Сигнальная последовательность простирается от положения 1 до 20. CDR-участки подчеркнуты. Как отмечено на этой фигуре, CDR1 охватывает аминокислоты 44-55, CDR2 охватывает аминокислоты 71-77 и CDR3 охватывает аминокислоты 110-118. Так как система нумерации по Kabat et al. (выше) исключает сигнальную последовательность, то положение 21 на этой фигуре соответствует положению 1 по Kabat et al. Фиг. 14 демонстрирует продукцию IP-10 в ответ на IFN- цельной кровью, взятой у шимпанзе за 2 или 1 неделю(и) (линии, обозначенные "-2" и "-1" на фиг. 14) до или через 2, 8, 15, 29 или 36 дней (линии, обозначенные "2", "8", "15", "29" или "36" на фиг. 14) после начала курса, состоящего из 3 инъекций анти-IFN- антитела, которые делали 1 раз в неделю. Фиг. 15 аналогична фиг. 14, за исключением того, что использовали кровь от другого шимпанзе. Подробное описание изобретения Используемые здесь заголовки раздела предназначены только для организационных целей и не должны интерпретироваться как ограничивающие описываемый предмет изобретения. Все ссылки, приведенные в этой заявке, специально включены сюда посредством ссылки для любой цели. Определения Стандартные методики могут быть использованы для синтеза рекомбинантной ДНК, олигонуклеотидов и для тканевой культуры и трансформации (например, электропорация, липофекция). Ферментативные реакции и методики очистки могут быть осуществлены согласно инструкциям производителя или выполнены, как обычно в данной области техники или как описано здесь. Вышеупомянутые методики и процедуры могут быть, в основном, воплощены стандартными методами, хорошо известными в данной области и описанными в разных общих и более конкретных ссылках, которые приведены и обсуждаются в настоящем описании. См., например, Sambrook et al., 2001, MOLECULAR CLONING:LABORATORY MANUAL, 3d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., которое включено сюда посредством ссылки для любой цели. Если конкретные определения не даны, то используемая в связи с этим номенклатура и лабораторные процедуры, а также методы аналитической химии,синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии, описанные здесь, хорошо известны и обычно используются в данной области. Стандартные методики могут быть использованы для химического синтеза, химических анализов, изготовления и доставки фармацевтического препарата и лечения пациентов. Если не указано иначе, то указанные ниже термины, используемые в настоящем описании, следует понимать как имеющие следующие значения. Используемый здесь термин "выделенный полинуклеотид" должен подразумевать полинуклеотид геномного, кДНК- или синтетического происхождения либо некоторую их комбинацию, где в результате чего выделенный полинуклеотид: (1) не связан со всем полинуклеотидом или с участком полинуклеотида,в котором выделенный полинуклеотид встречается в природе, (2) связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе, или (3) не встречается в природе в виде части более длинной последовательности. Упоминаемый здесь термин "выделенный белок" означает, что данный белок: (1) свободен от, по меньшей мере, некоторых других белков, с которыми его обычно обнаруживают в природе, (2) по существу, свободен от других белков из того же источника, например из того же вида, (3) экспрессируется клеткой другого вида, (4) был отделен от по меньшей мере примерно 50% полинуклеотидов, липидов,углеводов или других веществ, с которыми он связан в природе, (5) не связан (путем ковалентного или нековалентного взаимодействия) с участками белка, с которыми этот "выделенный белок" связан в природе, (6) функциональным образом связан (путем ковалентного или нековалентного взаимодействия) с полипептидом, с которым он не связан в природе, или (7) не встречается в природе. Такой выделенный белок может кодироваться геномной ДНК, кДНК, мРНК или другой РНК синтетического происхождения-7 011876 или любой их комбинацией. Предпочтительно, выделенный белок, по существу, свободен от белков или полипептидов или других примесей, которые встречаются в его природном окружении, которое обычно препятствует его применению (терапевтическому, диагностическому, профилактическому, научно-исследовательскому или какому-либо другому). Термины "полипептид" или "белок" означают одну или более чем одну цепь из аминокислот, где каждая цепь включает аминокислоты, ковалентно связанные пептидными связями, и где указанный полипептид или белок могут содержать множество цепей, нековалентно и/или ковалентно связанных вместе пептидными связями, имеющих последовательность нативных белков, т.е. белков, продуцируемых природными и, в частности, нерекомбинантными клетками или генетически сконструированными или рекомбинантными клетками, и содержат молекулы, имеющие аминокислотную последовательность нативного белка, или молекулы, имеющие делеции, вставки и/или замены одной или более аминокислот нативной последовательности. Термины "полипептид" и "белок", в частности, охватывают анти-IFNантитела или последовательности, которые имеют делеции, вставки и/или замены одной или более аминокислот анти-IFN- антитела. Таким образом, "полипептид" или "белок" могут включать одну (называемую "мономер") или множество (называемых "мультимер") аминокислотных цепей. Термин "полипептидный фрагмент" относится к полипептиду, который может быть мономерным или мультимерным, который имеет аминоконцевую делецию, карбоксиконцевую делецию и/или внутреннюю делецию или замену природного или рекомбинантно продуцируемого полипептида. В некоторых воплощениях полипептидный фрагмент может включать аминокислотную цепь по меньшей мере от 5 до примерно 500 аминокислот в длину. Понятно, что в некоторых воплощениях фрагменты имеют по меньшей мере 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 или 450 аминокислот в длину. Особенно полезные полипептидные фрагменты содержат функциональные домены, в том числе связывающие домены. В случае анти-IFN- антитела, полезные фрагменты включают, но не ограничиваются ими, CDRучасток, особенно CDR3-участок тяжелой или легкой цепи; вариабельный домен тяжелой или легкой цепи; участок цепи антитела или именно его вариабельную область, включая два CDR; и тому подобное. Используемый здесь термин "иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент" относится к полипептидному фрагменту, который, по меньшей мере, содержит CDR-участки тяжелых и легких цепей иммуноглобулина. Иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент по изобретению способен связываться с антигеном. В предпочтительных воплощениях антиген представяет собой лиганд, который специфически связывается с рецептором. В этих воплощениях связывание иммунологически функционального иммуноглобулинового фрагмента по изобретению предотвращает или ингибирует связывание лиганда с его рецептором, прерывая биологический ответ, являющийся следствием связывания лиганда с рецептором. Предпочтительно, иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент по изобретению специфически связывается с IFN-. Наиболее предпочтительно этот фрагмент специфически связывается, и/или ингибирует, или модулирует биологическую активность IFN- человека. Используемый здесь применимый к объекту термин "природный" относится к объекту, который может быть обнаружен в природе. Например, полипептидная или полинуклеотидная последовательность,которая имеется в организме (в т.ч. вирусов), которая может быть выделена из природного источника и не модифицирована человеком специально, является природной. Термин "функциональным образом связанный" означает, что компоненты, к которым применяется этот термин, связаны друг с другом так, что могут в подходящих условиях осуществлять присущие им функции. Например, последовательность, контролирующая транскрипцию, "функциональным образом связанная" с белок-кодирующей последовательностью, лигирована с последней таким образом, что при условиях, совместимых с транскрипционной активностью контролирующих последовательностей, достигается экспрессия белок-кодирующей последовательности. Используемый здесь термин "контролирующая последовательность" относится к полинуклеотидной последовательности, которая может влиять на экспрессию, процессинг или внутриклеточную локализацию кодирующих последовательностей, с которыми они лигированы. Природа таких контролирующих последовательностей может зависеть от организма-хозяина. В конкретных воплощениях последовательности, контролирующие транскрипцию у прокариот, могут включать промотор, сайт связывания рибосом и последовательность, терминирующую транскрипцию. В других конкретных воплощениях последовательности, контролирующие транскрипцию у эукариот, могут содержать промоторы, включающие в себя один или множество сайтов распознавания для транскрипционных факторов; последовательности,усиливающие транскрипцию; последовательности, терминирующие транскрипцию, и последовательности полиаденилирования. В некоторых воплощениях "контролирующие последовательности" могут включать лидерные последовательности и/или последовательности партнеров слияния. Упоминаемый здесь термин "полинуклеотид" означает одноцепочечные или двухцепочечные нуклеотидные полимеры из по меньшей мере 10 оснований в длину. В некоторых воплощениях нуклеотиды,составляющие полинуклеотид, могут представлять собой рибонуклеотиды или дезоксирибонуклеотиды или модифицированную форму любого типа нуклеотида. Указанные модификации включают модификации основания, например бромуридин, модификации рибозы, например арабинозид и 2',3'-дидезоксири-8 011876 бозу, и модификации межнуклеотидных связей, например фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанилотиоат, фосфораниладат и фосфороамидат. Термин "полинуклеотид", в частности, включает одно- и духцепочечные формы ДНК. Упоминаемый здесь термин "олигонуклеотид" включает в себя природные и модифицированные нуклеотиды, связанные вместе природными и/или не встречающимися в природе олигонуклеотидными связями. Олигонуклеотиды представляют собой подгруппу полинуклеотидов, которые обычно являются одноцепочечными и имеют в длину 200 оснований или меньше. В некоторых воплощениях олигонуклеотиды имеют 10-60 оснований в длину. В некоторых воплощениях олигонуклеотиды имеют 12, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19 или 20-40 оснований в длину. Олигонуклеотиды могут быть одноцепочечными или двухцепочечными, например, для применения в конструировании генного мутанта. Олигонуклеотиды по изобретению могут быть смысловыми или антисмысловыми олигонуклеотидами относительно белок-кодирующей последовательности. Если не указано иное, левый конец одноцепочечной полинуклеотидной последовательности представляет собой 5'-конец; направление двухцепочечной полинуклеотидной последовательности влево называют 5'-направлением. Направление 5'-3' добавления появляющихся РНК-транскриптов называется направлением транскрипции; области последовательности ДНК-цепи, имеющие ту же последовательность, что и РНК, и которые находятся 5' от 5'-конца РНК-транскрипта, обозначаются как "последовательности в обратном направлении"; области последовательности ДНК-цепи, имеющие ту же последовательность, что и РНК, и расположенные 3' от 3'-конца РНК-транскрипта, обозначаются как "последовательности в прямом направлении". Термин "природные нуклеотиды" включает в себя дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Термин "модифицированные нуклеотиды" включает в себя нуклеотиды с модифицированными или замещенными сахарными группами и т.п. Термин "олигонуклеотидные связи" включает такие олигонуклеотидные связи, как фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанилотиоат, фосфораниладат, фосфороамидат и т.п. См., например, LaPlanche et al., 1986, Nucl. Acids Res.,14: 9081; Stec et al., 1984, J. Am. Chem. Soc., 106: 6077; Stein et al., 1988, Nucl. Acids Res., 16: 3209; Zon etPRACTICAL APPROACH, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed.), Oxford University Press, Oxford England; Stec et al.,патент US 5151510; Uhlmann and Peyman, 1990, Chemical Reviews, 90: 543, содержание которых включено сюда посредством ссылки для любой цели. Олигонуклеотид может включать в себя детектируемую метку для облегчения детекции олигонуклеотида или его гибридизации. Термин "вектор" используют для обозначения любой молекулы (например, нуклеиновой кислоты,плазмиды или вируса), используемой для переноса кодируемой информации в клетку-хозяина. Термин "вектор экспрессии" относится к вектору, который подходит для трансформации клетки-хозяина и содержит нуклеотидные последовательности, которые направляют и/или контролируют экспрессию встроенных гетерологичных нуклеотидных последовательностей. Экспрессия включает, но не ограничивается этим,такие процессы, как транскрипция, трансляция и сплайсинг РНК в том случае, если присутствуют интроны. Термин "клетка-хозяин" используют для обозначения клетки, в которую была введена или может быть введена нуклеотидная последовательность и которая затем экспрессирует или способна экспрессировать выбранный ген, представляющий интерес. Этот термин включает в себя потомство родительской клетки, независимо от того, является ли это потомство идентичным по морфологии или генетической структуре исходному родителю или нет, до тех пор, пока присутствует выбранный ген. Термин "трансдукция" используют для обозначения переноса генов от одной бактерии к другой,обычно с помощью фага. "Трансдукция" также относится к захвату и переносу эукариотических клеточных последовательностей ретровирусами. Термин "трансфекция" используют для обозначения захвата чужеродной или экзогенной ДНК клеткой,и клетка является "трансфицированной", когда экзогенная ДНК была введена под клеточную мембрану. Целый ряд методов трансфекции хорошо известен в данной области и раскрыт здесь. См., например,Graham et al., 1973, Virology 52: 456; Sambrook et al., 2001, MOLECULAR CLONING, LABORATORYMANUAL, Cold Spring Harbor Laboratories; Davis et al., 1986, BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,Elsevier; и Chu et al., 1981, Gene 13: 197. Такие способы могут быть использованы для введения одной или более экзогенных ДНК-группировок в подходящие клетки-хозяева. Используемый здесь термин "трансформация" относится к изменению в генетических характеристиках клетки, и клетка является трансформированной, когда она была модифицирована так, чтобы содержать новую ДНК. Например, клетка является трансформированной, когда она генетически модифицирована по сравнению с ее нативным состоянием. После трансфекции или трансдукции ДНК-трансформант может рекомбинировать с ДНК клетки посредством физической интеграции в хромосому клетки,или может поддерживаться временно в виде эписомного элемента без репликации, или может реплицироваться независимо как плазмида. Клетку считают стабильно трансформированной, когда такая ДНК реплицируется одновременно с делением клетки. Термин "природный" или "нативный", при использовании применительно к биологическим веществам, таким как молекулы нуклеиновой кислоты, полипептиды, клетки-хозяева и т.п., обозначает вещества, которые встречаются в природе и не подвергнуты манипуляциям со стороны человека. Аналогично,-9 011876 используемый здесь термин "неприродный" или "ненативный" относится к веществу, которое не обнаружено в природе или которое было структурно модифицировано или синтезировано человеком. Термин "антиген" относится к молекуле или участку молекулы, способному связываться с таким селективно связывающимся агентом, как антитело, и, дополнительно, такому, которое может быть использовано животным для продуцирования антител, способных связываться с эпитопом этого антигена. Антиген может иметь один или более эпитопов. Термин "эпитоп" включает любую детерминанту, предпочтительно полипептидную детерминанту,способную специфически связываться с иммуноглобулиновым или Т-клеточным рецептором. Эпитоп представляет собой область антигена, которая связывается антителом. В некоторых воплощениях эпитопные детерминанты содержат химически активные поверхностные группировки таких молекул, как аминокислоты, сахарные боковые цепи, фосфорил или сульфонил, и в некоторых воплощениях могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики и/или специфические характеристики заряда. В некоторых воплощениях антитело, как говорят, специфически связывает антиген, распознавая предпочтительно свой антиген-мишень в сложной смеси белков и/или макромолекул. Про антитело говорят, что оно специфически связывает антиген, когда равновесная константа диссоциации составляет не более 10-7 или 10-8 М. В некоторых воплощениях равновесная константа диссоциации может составлять не более 10-9 или не более 10-10 М. Как используется здесь, если первая последовательность состоит из, например, 10 аминокислот последовательности RASQSVSSSY (SEQ ID NO: 56), то другая последовательность имеет 7 аминокислот в"том же порядке и пространственном расположении", как они встречаются в первой последовательности,если 7 аминокислот идентичны аминокислотам в этой последовательности и встречаются в тех же положениях друг относительн друга, как они встречаются в этой последовательности. Например, последовательность RAAAAVSSSY (SEQ ID NO: 57) имеет 7 аминокислот в том же порядке и пространственном расположении, как они встречаются в RASQSVSSSY (SEQ ID NO: 56). Однако это не верно для последовательности RASSVSSSY (SEQ ID NO: 58), поскольку она содержит внутреннюю делецию по сравнению с RASQSVSSSY (SEQ ID NO: 56), где по сторонам от делеции находятся 3 и 6 аминокислот. Таким образом, она имеет не более 6 аминокислот в том же порядке и пространственном расположении, что и первая последовательность. Самая короткая возможная последовательность, которая может иметь 7 аминокислот в том же порядке и пространственном расположении, что и в RASQSVSSSY (SEQ ID NO: 56),будет иметь 7 аминокислот в длину, например SQSVSSS (SEQ ID NO: 59). Термин "идентичность", известный в данной области, относится к родству между последовательностями двух или более полипептидных молекул или двух или более молекул нуклеиновой кислоты, которое определяется сравнением их последовательностей. В зависимости от обстоятельств, в данной области"идентичность" означает также степень родства между молекулами нуклеиновой кислоты или полипептидами, которая определяется по совпадению цепей двух или более нуклеотидных или двух или более аминокислотных последовательностей. "Идентичность" характеризует процент идентичных совпадений между меньшей из двух или более последовательностей с отрезами для сопоставления (gap alignments)(если таковые есть), исследуемых с помощью специфической математической модели или компьютерной программы (т.е. "алгоритмов"). Термин "сходство" используют в данной области техники в отношении родственного понятия, но, в отличие от "идентичности", "сходство" относится к характеристике родства, включая как идентичные совпадения, так и совпадения по консервативным заменам. Если две полипептидные последовательности имеют, например, 10/20 идентичных аминокислот и остаток представляет собой все неконсервативные замены, то и процентная идентичность, и сходство будут равны 50%. Если в том же примере существуют пять дополнительных положений, где существуют консервативные замены, то процентная идентичность остается 50%, а процентное сходство будет составлять 75% (15/20). Таким образом, в тех случаях, когда имеются консервативные замены, процентное сходство между двумя полипептидами будет выше, чем процентная идентичность между этими двумя полипептидами. Идентичность и сходство родственных нуклеиновых кислот и полипептидов могут быть легко определены известными способами. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, способы, описанные в COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY (Lesk, A.M., ed.), 1988, Oxford University Press, New York;Stockton Press, New York; Carillo et al., 1988, SIAM J. Applied Math., 48: 1073; и Durbin et al., 1998,BIOLOGICAL SEQUENCE ANALYSIS, Cambridge University Press. Предпочтительные способы определения идентичности разработаны так, что дают наибольшее совпадение между рассматриваемыми последовательностями. Способы определения идентичности описаны в общедоступных компьютерных программах. Предпочтительные способы с использованием компьютерных программ для определения идентичности между двумя последовательностями включают, но не ограничиваются ими, пакет программ GCG, включая GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid. Res., 12: 387;al., 1990, J. Mol. Biol., 215: 403-410). Программу BLASTX можно достать в Национальном центре биотехнологической информации (NCBI) и из других источников (BLAST Manual. Altschul et al. NCB/NLM/NIHBethesda, MD 20894; Altschul et al., 1990, выше). Хорошо известный алгоритм Смита-Уотермана (SmithWaterman) также может быть использован для определения идентичности. Некоторые схемы сопоставления для сравнения двух аминокислотных или полинуклеотидных последовательностей могут давать совпадение только короткого участка этих двух последовательностей, и этот небольшой сравнимый участок может иметь очень высокую идентичность последовательностей, даже если не существует никакого существенного родства между двумя указанными полноразмерными последовательностями. Соответственно, в некоторых воплощениях выбранный способ сопоставления (программаGAP) будет давать сопоставление, охватывающее по меньшей мере 50 последовательно расположенных аминокислот целевого полипептида. В некоторых воплощениях сопоставление может охватывать по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 100, 110 или 120 аминокислот целевого полипептида. Если полинуклеотиды подвергают сопоставлению с использованием GAP, то сопоставление может охватывать по меньшей мере примерно 100, 150 или 200 нуклеотидов, которые могут быть последовательно расположенными. Например, при использовании компьютерного алгоритма GAP (Genetics Computer Group, Universityof Wisconsin, Madison, WI) два полипептида, для которых нужно определить процентную идентичность последовательностей, совмещают с оптимальным совпадением их соответствующих аминокислот (охват совпадения ("matched span"), определяемого этим алгоритмом). В некоторых воплощениях штраф на внесение пробела (gap opening penalty) (который вычисляют как трижды среднюю диагональ; где "средняя диагональ" представляет собой среднее значение диагонали используемой матрицы сравнения; при этом"диагональ" представляет собой балл или число, присвоенное каждому точному аминокислотному совпадению специфической матрицой сравнения) и штраф за продолжение пробела (gap extension penalty)(который обычно составляет одну десятую штрафа за внесение делеции), а также матрицу сравнения,такую как РАМ 250 или BLOSUM 62, используют в сочетании с этим алгоритмом. В некоторых воплощениях этот алгоритм использует также стандартную матрицу сравнения (см. Dayhoff et al., 1978, Atlasof Protein Sequence and Structure, 5: 345-352 для матрицы сравнения РАМ 250; Hemkoff et al., 1992, Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 89: 10915-10919 для матрицы сравнения BLOSUM 62). В некоторых воплощениях параметры для сравнения полипептидных последовательностей включают следующие: алгоритм: Needleman et al., 1970, J. Mol. Biol., 48: 443-453; матрица сравнения (Comparison matrix): BLOSUM 62 из Henikoff et al., 1992, выше; штраф на введение пробела (Gap Penalty): 12; штраф на продолжение пробела (Gap Length Penalty): 4; порог сходства (Threshold of Similarity): 0.GAP-программу можно использовать с вышеуказанными параметрами. Для нуклеотидных последовательностей параметры могут включать штраф на введение пробела 50 и штраф на продолжение пробела 3, т.е. штраф 3 за каждый символ в каждом пробеле. В некоторых воплощениях вышеупомянутые параметры представляют собой параметры по умолчанию для сравнений полипептидов (вместе с отсутствием штрафа для концевых пробелов), использующих GAP-алгоритм. Как использовано здесь, 20 стандартных аминокислот и их аббревиатуры имеют стандартное применение. См. IMMUNOLOGY - A SYNTHESIS, 2nd Edition, (E.S. Golub and D.R. Gren, Eds.), SinauerAssociates: Sunderland, MA, 1991, включена сюда посредством ссылки для любой цели. Стереоизомеры(например, D-аминокислоты) 20 стандартных аминокислот; неприродные аминокислоты, такие как -, двузамещенные аминокислоты, N-алкиламинокислоты, молочная кислота и другие нестандартные аминокислоты, могут быть также подходящими компонентами полипептидов по изобретению. Примеры нестандартных аминокислот включают 4-гидроксипролин, -карбоксиглутамат, -N,N,N-триметиллизин, N-ацетиллизин, О-фосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин,-N-метиларгинин и другие подобные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В используемом здесь обозначении полипептидов левое направление представляет собой аминоконцевое направление, а правое направление представляет собой карбоксиконцевое направление в соответствии со стандартным применением и договоренностью. Природные остатки могут быть разделены на классы на основании общих свойств боковых цепей: 1) гидрофобные: норлейцин (Nor), Met, Ala, Val, Leu, Ile; 2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) кислотные: Asp, Glu; 4) основные: His, Lys, Arg; 5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro; и 6) ароматические: Trp, Tyr, Phe. Консервативные аминокислотные замены могут подразумевать замену одного представителя одного из этих классов на другой представитель того же класса. Консервативные аминокислотные замены- 11011876 могут подразумевать неприродные аминокислотные остатки, которые обычно включаются при химическом синтезе пептидов, а не в результате синтеза в биологических системах. Они включают пептидомиметики и другие обращенные или инвертированные формы аминокислотных группировок. Неконсервативные замены могут означать замену представителя одного из этих классов представителем из другого класса. Такие замещенные остатки могут быть введены в участки человеческого антитела, которые гомологичны нечеловеческим антителам, или в негомологичные участки молекулы. При создании таких замен в соответствии с конкретными воплощениями может быть принят во внимание гидропатический индекс аминокислот. Каждой аминокислоте был присвоен гидропатический индекс на основе ее гидрофобности и зарядовых характеристик. Индексы следующие: изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин (+3,8); фенилаланин (+2,8); цистеин/цистин (+2,5); метионин (+1,9); аланин (+1,8); глицин (-0,4); треонин (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамин (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин (-3,9) и аргинин (-4,5). В данной области важность гидропатического аминокислотного индекса заключается в присвоении белку интерактивной биологической функции (см., например, Kyte et al., 1982, J. Mol. Biol. 157: 105-131). Известно, что некоторые аминокислоты могут быть заменены другими аминокислотами, имеющими похожий гидропатический индекс или балл, и при этом сохранять аналогичную биологическую активность. При создании замен на основе гидропатического индекса в некоторых воплощениях имеет место замена аминокислот, чьи гидропатические индексы находятся в пределах 2. В некоторых воплощениях включены замены с индексами, которые находятся в пределах 1, и в некоторых воплощениях включены замены с индексами, которые находятся в пределах 0,5. В данной области техники также подразумевается, что замена похожих аминокислот может быть эффективно произведена на основе гидрофильности, особенно если биологически функциональный белок или пептид, созданный таким образом, предназначен для применения в иммунологических воплощениях, как раскрыто здесь. В некоторых воплощениях наибольшая локальная средняя гидрофильность белка, определяемая гидрофильностью его соседних аминокислот, коррелирует с его иммуногенностью и антигенностью, т.е. с биологическим свойством этого белка. Этим аминокислотным остаткам были присвоены следующие значения гидрофильности: аргинин(+3,0); лизин (+3,0); аспартат (+3,01); глутамат (+3,01); серин (+0,3); аспарагин (+0,2); глутамин (+0,2); глицин (0); треонин (-0,4); пролин (-0,51); аланин (-0,5); гистидин (-0,5); цистеин (-1,0); метионин (-1,3); валин (-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5) и триптофан (-3,4). При создании замен, основанных на похожих значениях гидрофильности, в некоторых воплощениях включена замена аминокислот, чьи значения гидрофильности находятся в пределах 2, в некоторых воплощениях включены значения гидрофильности, которые находятся в пределах 1, и в некоторых воплощениях включены значения гидрофильности, которые находятся в пределах 0,5. На основе гидрофильности можно также идентифицировать эпитопы из первичных аминокислотных последовательностей. Эти участки обозначены также как "эпитопные коровые участки". Примерные аминокислотные замены представлены в табл. 1. Таблица 1 Аминокислотные замены- 12011876 Специалист-практик сможет определить подходящие варианты описываемого здесь полипептида с использованием хорошо известных методов. В некоторых воплощениях специалист в данной области может идентифицировать подходящие области молекулы, которые могут быть изменены без нарушения активности участками-мишенями, которые, как полагают, не являются существенными для активности. В других воплощениях специалист может идентифицировать остатки и участки молекул, которые являются консервативными среди похожих полипептидов. В других воплощениях даже участки, которые могут быть существенными для биологической активности или для структуры, могут быть подвергнуты консервативным аминокислотным заменам без нарушения биологической активности или без нежелательного воздействия на полипептидную структуру. Кроме того, специалист в данной области может проанализировать результаты структурно-функциональных исследований, идентифицирующих остатки в похожих полипептидах, важные для активности или структуры. С учетом такого сравнения специалист может предсказать значимость аминокислотных остатков в белке, которые соответствуют аминокислотным остаткам, важным для активности или структуры в похожих белках. Специалист в данной области может выбрать химически аналогичные аминокислотные замены для таких предсказанных важных аминокислотных остатков. Специалист в данной области может также проанализировать трехмерную структуру и аминокислотную последовательность относительно таковой структуры в похожих полипептидах. Принимая во внимание такую информацию, специалист в данной области может прогнозировать охват сопоставления аминокислотных остатков антитела относительно его трехмерной структуры. В некоторых воплощениях специалист в данной области может предпочесть не делать радикальных изменений в аминокислотных остатках, которые предположительно находятся на поверхности этого белка, поскольку такие остатки могут вовлекаться в важные взаимодействия с другими молекулами. Более того, специалист в данной области может приготовить тест-варианты, содержащие единственную аминокислотную замену в каждом желательном аминокислотном остатке. Эти варианты могут быть затем проанализированы с использованием анализов активности, известных специалистам в данной области. Такие варианты могут быть использованы для сбора информации о подходящих вариантах. Например, если обнаружено, что изменение в конкретном аминокислотном остатке привело к нарушенной, нежелательно пониженной или неподходящей активности, то можно избежать вариантов с таким изменением. Другими словами, на основании информации, собранной из таких рутинных экспериментов, специалист в данной области может легко определить аминокислоты, в которых следует избегать дополнительных замен, либо одиночных,либо в сочетании с другими мутациями. Ряд научных публикаций был посвящен предсказанию вторичной структуры. См., например, Moult,1996, Curr. Op. in Biotech. 7: 422-427; Chou et al., 1974, Biochemistry 13: 222-245; Chou et al., 1974,Biochemistry 113: 211-222; Chou et al., 1978, Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 47: 45-148; Chou et al.,1979, Ann. Rev. Biochem. 47: 251-276; и Chou et al., 1979, Biophys. J. 26: 367-384. Более того, в настоящее время имеются компьютерные программы, помогающие предсказывать вторичную структуру. Один способ предсказания вторичной структуры основан на моделировании гомологии. Например, два полипептида или белка, которые имеют идентичность последовательностей более 30% или сходство более 40%,часто имеют похожие структурные конфигурации. Современный рост базы данных по структуре белков (PDB, protein structural database) обеспечил повышенную предсказуемость вторичной структуры, включая возможное количество складок в полипептидной или белковой структуре. См. Holm et al., 1999, Nucl. Acid. Res. 27: 244-247. Предположили (Brenneret al., 1997, Curr. Op. Struct. Biol. 7: 369-376), что имеется ограниченное количество складок в данном полипептиде или белке и что в случае, если разрешено критическое количество структур, структурное предсказание станет гораздо более точным. Дополнительные способы предсказания вторичной структуры включают "перебирание" (threading)(Bowie et al., 1991, Science 253: 164-170; Gribskov et al., 1990, Meth. Enzym. 183: 146-159; Gribskov et al.,1987, Proc. Nat. Acad. Sci. 84: 4355-4358) и "эволюционную связь" (см. Holm, 1999, выше; и Brenner, 1997,выше). Согласно некоторым воплощениям аминокислотные замены представляют собой замены, которые:(1) уменьшают чувствительность к протеолизу, (2) уменьшают чувствительность к окислению, (3) изменяют аффинность связывания образующихся белковых комплексов, (4) изменяют аффинности связывания и/или (5) обеспечивают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства таких полипептидов. Согласно конкретному воплощению единичные или множественные аминокислотные замены (в некоторых воплощениях консервативные аминокислотные замены) могут быть произведены в природной последовательности (в некоторых воплощениях в участке полипептида за пределами домена(доменов), образующих межмолекулярные контакты). В предпочтительных воплощениях консервативная аминокислотная замена обычно, по существу, не изменяет структурные характеристики родственной последовательности (например, замена аминокислоты не должна приводить к разрушению спирали, которая имеется в родственной последовательности, или нарушать другие типы вторичной структуры, которая характеризует родственную последовательность). Примеры принятых в данной об- 13011876 ласти техники вторичных и третичных структур полипептидов описаны в PROTEINS, STRUCTURES ANDThornton et al., 1991, Nature 354: 105, каждая из которых включена здесь посредством ссылки. Пептидные аналоги обычно используют в фармацевтической промышленности в качестве непептидных лекарств со свойствами, аналогичными свойствам модельного пептида. Эти типы непептидного соединения называются "пептидными миметиками" или "пептидомиметиками". См. Fauchere, 1986, Adv.Drug Res. 15: 29; VeberFreidinger, 1985, TINS, p. 392; и Evans et al., 1987, J. Med. Chem. 30: 1229, которые включены сюда посредством ссылки для любой цели. Такие соединения часто создаются с помощью компьютерного молекулярного моделирования. Пептидомиметики, которые структурно похожи на терапевтически полезные пептиды, могут быть использованы для получения похожего терапевтического или профилактического эффекта. Обычно пептидомиметики структурно похожи на исходный полипептид(т.е. полипептид, который имеет биохимическое свойство или фармакологическую активность), такой как человеческое антитело, но имеют одну или более пептидных связей, возможно замененных связью,выбранной из -CH2-NH-, -CH2-S-, -CH2-CH2-, -CH=CH-(цис и транс), -СОСН 2-, -СН(ОН)СН 2- и -CH2SO-,способами, хорошо известными в данной области. Направленная замена одной или более аминокислот консенсусной последовательности D-аминокислотой того же типа (например, D-лизином вместо L-лизина) может быть использована в некоторых воплощениях для получения более стабильных пептидов. Кроме того, пространственно ограниченные пептиды, содержащие консенсусную последовательность или, по существу, идентичную разновидность консенсусной последовательности, могут быть получены способами, известными в данной области (RizoGierasch, 1992, Ann. Rev. Biochem. 61: 387, включено сюда посредством ссылки для любой цели); например, путем добавления внутренних цистеиновых остатков, способных образовывать внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые циклизуют этот пептид. Используемые здесь термины "антитело" или "антительный пептид(ы)" относятся к мономерному или мультимерному белку, содержащему одну или более полипептидных цепей. Антитело может специфически связываться с антигеном и может обладать способностью ингибировать или модулировать биологическую активность антигена. "Антитела" включают природные антитела, которые описаны ниже. В некоторых воплощениях антитела получают методами рекомбинантных ДНК. В дополнительных воплощениях антитела получают ферментативным или химическим расщеплением природных антител. Антитела включают, но не ограничиваются ими, F(ab)-, F(ab')-, F(ab')2-, Fv- и одноцепочечные Fv-фрагменты,а также одноцепочечные, химерные, гуманизированные, полностью человеческие, поликлональные и моноклональные антитела. Антитело, которое подразумевается здесь, как минимум, включает полипептид, который может специфически связываться с антигеном, включая всю или часть вариабельной области легкой или тяжелой цепи. Вариабельная область включает по меньшей мере три определяющих комплементарность участка тяжелых или легких цепей (CDR, также известные как гипервариабельиые области, обозначенные какService N.I.H., Bethesda, MD; см. также Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17; Chothia et al.,1989, Nature 342: 877-83), встроенных в каркасный участок (обозначены каркасные участки 1-4: FR1,FR2, FR3 и FR4 по Kabat et al., выше; см. также Chothia and Lesk, выше). Участки CDR и каркасные сегменты расположены следующим образом, начиная с аминоконца вариабельной области: FR1-CDR1-FR2CDR2-FR3-CDR3-FR4. Первичные последовательности каркасных участков вариабельных областей антител имеют небольшое количество остатков, которые консервативны во всех типах. Однако многие остатки высококонсервативны в пределах типов и/или внутри видов и/или типов, и многие положения в антителах обычно заняты одной из известных групп аминокислот. См. Kabat et al., выше. Или же последовательность может распознаваться как антитело по его предсказанной третичной структуре. Третичная структура вариабельных областей, которая включает 9 -цепей, образующих структуру, известную как -бочка Greekkey, чрезвычайно консервативна, и положения CDR внутри этой структуры также высококонсервативны. См., например, Bork et al., 1994, J. Mol. Biol. 242: 309-20; Hunkapiller and Hood, 1989, Adv. Immunol. 44: 163; Williams and Barclay, 1988, Ann. Rev. Immunol. 6: 381-405; Chothia and Lesk, выше; Kabat et al., выше. Третичная структура может быть предсказана с помощью различных компьютерных программ, таких как, например, GENEFOLD (Tripos, Inc., St. Louis, МО; Godzik and Skolnik, 1992, Proc. Natl. Acad.Sci. USA 89: 12098-12102; Godzik et al., 1992, J. Mol. Biol. 227: 227-38; Godzik et al., 1993, Protein Engng. 6: 801-10), программа "перебирания" белков, которая накладывает анализируемую белковую последовательность на структурные образцы из Protein Data Bank (PDB) (Berman et al., 2000, Nucleic Acids Res. 28: 235-242; Jaroszewski et al., 1998, Prot. Sci. 7: 1431-1440). Для того, чтобы использовать GENEFOLD с целью классификации новой аминокислотной последовательности, эту последовательность вводят в программу,которая определяет вероятностный балл, отражающий, как хорошо она сворачивается в ранее известные белковые структуры ("матричные" структуры), которые присутствуют в базе данных GENEFOLD. Для- 14011876 подсчета баллов GENEFOLD берет за основу сходство первичной аминокислотной последовательности,скрытые образцы остатков, локальные взаимодействия и сравнения вторичной структуры. ПрограммаGENEFOLD накладывает аминокислотную последовательность на все матричные структуры (или "перебирает") в уже существующей базе данных белковых складок, которая включает разрешенные структуры для целого ряда антител. Результат GENEFOLD представляет собой три списка белков из базы данных, третичные структуры которых, наиболее вероятно, будут определяться вводимой аминокислотной последовательностью. Три списка содержат три разных системы бальной оценки, рассчитанные на основании: (i) только последовательности, (ii) последовательности плюс предпочтения локальной конформации плюс скрытые элементы и (iii) последовательности плюс предпочтения локальной конформации плюс скрытые элементы плюс вторичная структура. В каждом случае эта программа определяет оптимальное сопоставление, рассчитывает вероятность (Р-значение) того, что эта степень сопоставления была случайной, и представляет обратное Р-значению значение в виде шкалы с 999,9 (9,999102), являющимся самым высоким возможным баллом. Таким образом, самый высокий балл указывает на наименьшую вероятность того, что сопоставление было случайным. Таким образом, эти баллы отражают степень, с которой новый белок совпадает с различными эталонными структурами, и являются полезными для установления принадлежности нового белка к членам известного семейства белков. Например,последовательность, имеющая структуру вариабельной области антитела, как ожидают, будет сопоставима с по меньшей мере одной известной вариабельной областью антитела с достаточно высоким Р-значением, например по меньшей мере примерно 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800 или выше. Термин "тяжелая цепь" включает любой иммуноглобулиновый полипептид, имеющий достаточную последовательность вариабельной области для обеспечения специфичности связывания IFN-. Термин"легкая цепь" включает в себя любой иммуноглобулиновый полипептид, имеющий достаточную последовательность вариабельной области для обеспечения специфичности связывания IFN-. Такая тяжелая или легкая цепь может, но необязательно, связываться с IFN- в отсутствие легкой цепи, если она представляет собой тяжелую цепь, или тяжелой цепи, если она представляет собой легкую цепь. Полноразмерная тяжелая цепь включает домен вариабельной области: VH, и три домена константной области: CH1,CH2 и CH3. VH-домен находится на аминоконце полипептида, а CH3-домен находится на карбоксиконце. Используемый здесь термин "тяжелая цепь" охватывает полноразмерную тяжелую цепь и ее фрагменты. Полноразмерная легкая цепь включает домен вариабельной области: VL, и домен константной области:CL. Подобно тяжелой цепи, домен вариабельной области легкой цепи находится на аминоконце полипептида. Используемый здесь термин "легкая цепь" охватывает полноразмерную легкую цепь и ее фрагменты. F(ab)-фрагмент состоит из одной легкой цепи и CH1 и вариабельных областей одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь F(ab)-молекулы не может образовывать дисульфидную связь с молекулой другой тяжелой цепи. F(ab')-фрагмент содержит одну легкую цепь и одну тяжелую цепь, которая содержит больше константных областей между CH1- и CH2-доменами, так что межцепьевая дисульфидная связь может образовываться между двумя тяжелыми цепями с образованием F(ab')2-молекулы. Fv-участок включает вариабельные области как тяжелой, так и легкой цепи, но не имеет константных областей. Одноцепочечные антитела представляют собой Fv-молекулы, в которых вариабельные области тяжелой и легкой цепей соединены гибким линкером с образованием единой полипептидной цепи, которая образует антигенсвязывающий участок. Одноцепочечные антитела подробно обсуждаются в публикации международной патентной заявки WO 88/01649 и патентах US 4946778 и 5260203. Изобретение также охватывает полностью человеческие, гуманизированные и химерные антитела. Как подразумевается здесь, полностью человеческие антитела включают аминокислотные последовательности, кодируемые только полинуклеотидами, которые в конечном счете имеют человеческое происхождение, или аминокислотные последовательности, которые идентичны таким последовательностям. Как подразумевается здесь, антитела, кодируемые иммуноглобулин-кодирующей ДНК человека, встроенной в мышиный геном, продуцирующиеся в трансгенной мыши, представляют собой полностью человеческие антитела, так как они кодируются ДНК, которая в конечном счете имеет человеческое происхождение. В этой ситуации иммуноглобулин-кодирующая ДНК человека может быть перегруппирована(для кодирования антитела) внутри мыши и могут иметь место также соматические мутации. Антитела,кодируемые первоначально ДНК человека, которая подвергается таким изменениям в мыши, представляют собой полностью человеческие антитела, как подразумевается здесь. Применение таких трансгенных мышей позволяет осуществить отбор полностью человеческих антител относительно человеческого антигена. В природе в большинстве случаев это невозможно, поскольку иммунный ответ человека против собственного антигена в норме не наблюдается. Специалист в данной области поймет, что полностью человеческие антитела полезны для применения в качестве терапевтических средств, особенно при лечении хронических заболеваний, так как они вряд ли будут вызывать иммунный ответ против самих себя. В противоположность этому, многие не являющиеся человеческими антитела, как известно, усиливают иммунный ответ против самих себя при использовании у людей; ситуация, которая делает постоянное применение таких антител у людей нецелесообразным. Таким образом, полностью человеческие антитела решают давнюю проблему, с которой сталкиваются при использовании антител для лечения хро- 15011876 нических состояний, включая заболевания человека. См., например, Billiau, 1988, Immunol. Today 9: 3740; Horneff et al., 1991, Clin. Immunol.Immunopathol. 59: 89-103; Tjandra et al., 1990, ImmunolCellBiol. 68: 367-76. Таким образом, полностью человеческие анти-IFN- антитела особенно хорошо подходят для лечения хронических заболеваний человека, опосредованных IFN-, таких как аутоиммунные заболевания. В гуманизированном антителе полное антитело, за исключением участков CDR, кодируется полинуклеотидом человеческого происхождения или идентично такому антителу, за исключением его CDR.CDR, которые кодируются нуклеиновыми кислотами, происходящими не из человеческого организма,"пересаживают" в каркас в форме -слоя вариабельной области человеческого антитела для создания антитела, специфичность которого определяется "пересаженными" CDR. Создание таких антител описано, например, в WO 92/11018, Jones et al., 1986, Nature 321: 522-25, Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534-36. Эта работа подчеркивает ключевое значение участков CDR в формировании антигенсвязывающего сайта. Химерное антитело содержит константную область человека (которая кодируется полинуклеотидом человеческого происхождения или идентична такой константной области человека) и невариабельную область, на являющуюся человеческой. Создание таких антител описано, например, в патентеUS 5681722. Подразумевается, что двухвалентное антитело, иное, чем "полиспецифическое" или "полифункциональное" антитело, в некоторых воплощениях содержит связывающие сайты, имеющие идентичную антигенную специфичность. Оценка связывания антитела и специфичности согласно изобретению: антитело специфически связывает и/или, по существу, ингибирует адгезию IFN- на его рецепторе, когда избыток антитела уменьшает число рецепторов, связанных с IFN-, или, наоборот, по меньшей мере примерно на 20, 40, 60, 80,85% или более (по результатам измерения в анализе конкурентного связывания in vitro). Можно ожидать,что специфически связанное антитело будет иметь равновесную константу диссоциации связывания сIFN-, которая меньше или равна 10-8 моль, возможно, меньше или равна 10-9 или 10-10 моль. Для терапевтического применения важной характеристикой анти-IFN- антитела является информация о том, может ли оно ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-. IFN- имеет много различных биологических эффектов, которые могут быть определены во множестве различных анализов в разных типах клеток. Способность анти-IFN- антитела ингибировать или модулировать биологическую активность IFN- может быть определена с помощью анализа А 549, описанного в примере 6 ниже, или с помощью похожего анализа, в котором определяют способность антитела снимать ингибирование клеточной пролиферации, наблюдаемой в присутствии IFN-. Чтобы этот анализ давал значимые результаты, пролиферация клеток, используемых в этом анализе, должна ингибироваться IFN-, используемым в этом анализе. Человеческий IFN- может ингибировать пролиферацию некоторых типов клеток, включая клетки А 549 (примеры 6 и 7). Мышиный IFN- может ингибировать пролиферацию клетокRAW 264.7 (пример 7), но не клеток А 549. В частности, при тестировании способности антитела ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, не являющимся человеческим, могут быть использованы иные типы клеток, чем клетки А 549, поскольку IFN-, не являющийся человеческим, может обладать способностью ингибировать пролиферацию клеток А 549 или может не обладать такой способностью. Не каждое антитело, которое специфически связывается с антигеном, может блокировать связывание антигена с его нормальным рецептором и таким образом ингибировать или модулировать биологические эффекты антигена при связывании с его рецептором. Как известно в данной области, такой эффект может зависеть от того, с каким участком антигена связывается антитело, а также от абсолютных и относительных концентраций антигена и антитела, в данном случае IFN- и анти-IFN- антитела. Для того, чтобы антитело можно было рассматривать в качестве способного ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-, как подразумевается здесь, оно должно обладать способностью снимать ингибирование клеточной пролиферации, наблюдаемой в присутствии IFN-, при определении с использованием флуоресценции в анализе А 549 (пример 6) или похожем анализе, по меньшей мере примерно на 20, 40, 60, 80, 85, 100% или более, когда концентрация IFN- находится в диапазоне,например, около примерно ЕС 80 или ЕС 90, где эффекты агента, который ингибирует его биологическую активность, могут быть легко обнаружены. EC80, как понимается здесь, представляет собой количествоIFN-, необходимое для того, чтобы наблюдалось 80% от максимального эффекта IFN-. Если концентрация IFN- значительно выше ЕС 90, то эффекты ингибирующего агента могут быть менее очевидны изза избытка IFN-. Концентрация антитела, необходимая для ингибирования или модуляции биологической активности IFN-, может сильно варьировать и может зависеть от того, насколько сильно это антитело связывается с IFN-. Например, для ингибирования или модуляции биологической активности в анализе А 549 может быть достаточно одной молекулы антитела или меньше одной на одну молекулуIFN-. В некоторых воплощениях может быть необходимо соотношение IFN-:антитело, составляющее примерно 2:1, 1:1, 1:2, 1:4, 1:6, 1:8, 1:10, 1:20, 1:40, 1:60, 1:100 или 1:50000, для ингибирования или модуляции биологической активности IFN-, если концентрация IFN- составляет от примерно ЕС 50 до при- 16011876 мерно ЕС 90. Соотношения IFN-антитело, находящиеся между этими значениями, также возможны. В дополнительных воплощениях варианты антител могут включать антитела, содержащие модифицированный Fc-фрагмент или модифицированную константную область тяжелой цепи. Fc-фрагмент, который означает "фрагмент, который кристаллизуется, или константная область тяжелой цепи могут быть модифицированы мутацией с целью придания антителу других характеристик (см., например, Burton andShields et al., 2001, Journal of Biol. Chem. 276: 6591-6604; Telleman and Junghans. 2000, Immunology 100: 245-251; Medesan et al., 1998, Eur. J. Immunol. 28: 2092-2100; которые все включены сюда посредством ссылки). Такие мутации могут включать замены, вставки, делеции или любую их комбинацию и обычно осуществляются посредством сайт-направленного мутагенеза с использованием одного или более мутагенных олигонуклеотидов описанными здесь методами, а также методами, известными в данной областиCloning Techniques, 1987, Academic Press, Inc., San Diego, CA., которые включены сюда посредством ссылки). В некоторых воплощениях варианты антитела включают в себя гликозилированные варианты, где количество и/или тип сайта гликозилирования является измененным по сравнению с аминокислотными последовательностями родительского полипептида. В некоторых воплощениях варианты белка включают в себя большее или меньшее количество N-связанных сайтов гликозилирования, чем нативный белок.N-связанный сайт гликозилирования характеризуется последовательностью Asn-X-Ser или Asn-X-Thr,где аминокислотный остаток, обозначенный как X, может представлять собой любой аминокислотный остаток, за исключением пролина. Замена аминокислотных остатков с образованием этой последовательности обеспечивает новый сайт, потенциальный для добавления N-связанной углеводной цепи. Или же замены, которые исключают эту последовательность, будут удалять уже существующую N-связанную углеводную цепь. Также предложена перегруппировка N-связанных углеводных цепей, где один или более N-связанных сайтов гликозилирования (обычно те сайты, которые являются природными) элиминируются и создаются один или более новых N-связанных сайтов. Дополнительные предпочтительные варианты антитела включают цистеиновые варианты, где один или более остатков цистеина делетируются или заменяются другой аминокислотой (например, серином) по сравнению с родительской аминокислотной последовательностью. Цистеиновые варианты могут быть полезны, когда антитела должны повторно сворачиваться в биологически активную конформацию, например, после выделения нерастворимых телец-включений. Цистеиновые варианты обычно имеют меньше цистеиновых остатков, чем нативный белок, и типично имеют четное количество для минимизации взаимодействий неспаренных цистеинов. Термин "агент" используют здесь для обозначения химического соединения, смеси химических соединений, биологической макромолекулы или экстракта, изготовленного из биологических материалов. Используемые здесь термины "метка" или "меченый" относятся к включению детектируемого маркера, например, путем включения меченной изотопом аминокислоты или присоединения к полипептиду или нуклеиновой кислоте флуоресцентного маркера, хемилюминесцентного маркера или фермента,имеющего детектируемую активность, или присоединения к полипептиду биотиновых группировок, которые могут быть обнаружены меченым авидином (например, стрептавидином, предпочтительно включающим детектируемый маркер, такой как флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, или ферментативную активность, которая может быть обнаружена, в частности, оптическими или колориметрическими способами). В некоторых воплощениях метка может быть также терапевтической. Различные методы мечения полипептидов и гликопротеинов известны в данной области и преимущественно могут быть использованы в раскрытых здесь способах. Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваются ими, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3H, 14C, l5N, 35S, 90Y,99mTc, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные метки (например, флуоресцеинизотиоцианат или ФИТЦ, родамин или лантанидные люминофоры), ферментные метки (например, пероксидазу хрена, -галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные метки, гаптеновые метки, такие как биотинильные группы, и заранее установленные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером(например, парные последовательности "лейциновой молнии" (leucine zipper), связывающие сайты для вторичных антител, металлосвязывающие домены или эпитопные метки (tags. В некоторых воплощениях метки соединены спейсерными "ножками" (такими, как (СН 2)n, где n меньше примерно 20) различной длины для уменьшения возможного стерического несоответствия. Используемый здесь термин "биологический образец" включает, но не ограничивается этим, любое количество вещества из живого организма или организма, переставшего жить. Такие живые организмы включают, но не ограничиваются ими, людей, мышей, обезьян, крыс, кроликов и других животных. Такие вещества включают, но не ограничиваются ими, кровь, сыворотку, мочу, клетки, органы, ткани,кость, костный мозг, лимфатические узлы и кожу. Используемый здесь термин "фармацевтический агент или лекарство" относится к химическому соединению или композиции, способной индуцировать желаемый терапевтический эффект при правильном- 17011876 введении пациенту. Термин "заболевание, опосредованное IFN-" включает, но не ограничивается этим, воспалительные, инфекционные и аутоиммунные заболевания. Используемый здесь термин "аутоиммунное заболевание" относится к болезненным состояниям и условиям, когда иммунный ответ пациента направлен против собственных элементов пациента. Например, заболевания, опосредованные IFN-, включают, но не ограничиваются ими, синдром приобритенного иммунодефицита (СПИД), ревматоидный артрит,включая ювенильный ревматоидный артрит; воспалительные заболевания кишечника, включая язвенный колит и болезнь Крона; рассеянный склероз, болезнь Аддисона, диабет (I типа), эпидидимит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, хронический лимфоматозный тиреоидит, гемолитическую анемию, системную красную волчанку (СКВ), волчаночный нефрит, астенический бульбарный паралич, пемфигус, псориаз, псориатический артрит, атеросклероз, устойчивость к эритропоэтину, реакцию "трансплантат против хозяина", отторжение трансплантата, аутоиммунное гепатит-индуцированное поражение печени, билиарный цирроз печени, алкоголь-индуцированное поражение печени, включая алкогольный цирроз, ревматизм, саркоидоз, склеродерму, синдром Шегрена, спондилоартропатии, включая анкилозирующий спондилит, тиреоидит и васкулит. Термин "заболевание, опосредованное IFN-гамма" также охватывает любое медицинское состояние, связанное с повышенными уровнями IFN- или повышенной чувствительностью к IFN-. Лечение заболевания, опосредованного IFN-, включая аутоиммунное заболевание, подразумевает облегчение по меньшей мере одного симптома расстройства, уменьшение тяжести заболевания или замедление или предупреждение развития более серьезного заболевания, которое наблюдается с некоторой частотой после лечения состояния. Лечение не должно подразумевать, что заболевание полностью излечено. Полезный терапевтический агент требуется только для уменьшения тяжести заболевания, уменьшения тяжести симптома или симптомов, связанных с заболеванием или его лечением, или для обеспечения улучшения качества жизни пациента, или для замедления развития более серьезного заболевания,которое может наблюдаться с некоторой частотой после лечения состояния. Например, если заболевание представляет собой ревматоидный артрит, то терапевтический агент может уменьшать опухание суставов,уменьшать количество пораженных суставов или замедлять или ингибировать потерю костной массы. Пациент с СКВ может иметь наряду с другими симптомами такие симптомы, как кожные поражения,лихорадка, слабость, артрит, увеличение лимфатических узлов, плеврит, перикардит и/или анемия. Такие симптомы могут быть оценены любым из целого ряда стандартных способов, включая, например, визуальное наблюдение, фотографирование, измерение температуры, силы схвата или размера сустава и/или микроскопическое исследование крови для определения концентрации эритроцитов. Данное изобретение охватывает способ лечения, включающий введение пациенту, страдающему от заболевания, опосредованного IFN-, антитела против IFN- по изобретению в количестве и в течение времени, достаточных для индукции устойчивого улучшения по сравнению с исходным уровнем индикатора, который отражает тяжесть конкретного расстройства или тяжесть симптомов, вызванных этим расстройством, или для замедления или предупреждения развития более серьезного заболевания, которое следует после лечения состояния в некоторых или во всех случаях. Изобретение не исключает возможное лечение другими терапевтическими агентами до, после и/или в процессе лечения антителом к IFN-. Используемый здесь термин "по существу, чистый" или "по существу, очищенный" означает соединение или разновидность, которая является преобладающей разновидностью (т.е. на молярной основе она более широко распространена, чем любая другая индивидуальная разновидность в композиции). В некоторых воплощениях, по существу, очищенная фракция представляет собой композицию, где эта разновидность включает по меньшей мере примерно 50% (на молярной основе) всех присутствующих макромолекулярных разновидностей. В некоторых воплощениях, по существу, чистая композиция будет содержать более чем примерно 80, 85, 90, 95 или 99% всех макромолярных разновидностей, присутствующих в композиции. В некоторых воплощениях эту разновидность очищают до существенной гомогенности (контаминантные разновидности не могут быть определены в композиции стандартными методами детекции), где композициясостоит, по существу, из одной макромолекулярной разновидности. Термин "пациент" обозначает человека и животных. Если не указано иное, то термины в единственном числе охватывают и объект во множественном числе. Поскольку IFN- представляет собой цитокин со множеством функций, включая защиту организма от вирусной инфекции и регуляцию некоторых аспектов иммунного ответа, повышенная активность IFN может вносить вклад в некоторые патологические состояния. Согласно некоторым воплощениям изобретения антитела, направленные против IFN-, могут быть использованы для лечения заболеваний, опосредованных IFN-, включая заболевания, упомянутые выше, но не ограничиваясь ими. В одном аспекте изобретения предложены полностью человеческие моноклональные антитела против человеческого IFN- и имеющие биологическую и иммунологическую специфичность в отношении связывания с человеческим IFN-. Вариабельные области (SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10,SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 31), включенные в такие- 18011876 антитела, полные тяжелые и легкие цепи таких антител (SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22) и антитела, включающие специфические участки CDR(CDR1, CDR2 и/или CDR3 тяжелой и легкой цепи; SEQ ID NO: 34-SEQ ID NO: 44), входят в объем данного изобретения. Конкретные воплощения этого аспекта изобретения представляют собой последовательности, соответствующие участкам CDR, особенно участкам CDR1-CDR3, тяжелых и легких цепей,предложенных в изобретении. Кроме того, изобретение охватывает антитела, содержащие CDR3-последовательность, раскрытую здесь (SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 43 и/или SEQ ID NO: 44),которая может содержать также последовательности, по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96,97, 98 или примерно на 99% идентичные любой из последовательностей вариабельной области или последовательностей полных тяжелых или легких цепей, раскрытых здесь, где это антитело может ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-. В другом аспекте изобретения предложены выделенные нуклеиновые кислоты или полинуклеотиды, кодирующие антитела по изобретению. Антитела по изобретению могут специфически связываться сIFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-. В частности, изобретение охватывает полинуклеотиды, включающие нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21,SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11,SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 и/или последовательности, которые по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно на 99% идентичны этим последовательностям, где сопоставление вышеуказанных последовательностей и тестируемой последовательности охватывает по меньшей мере примерно 50, 60, 70, 80, 90 или 100 аминокислот. Кроме того, в изобретении предложены полинуклеотиды, сожержащие SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 и/илиSEQ ID NO: 48, кодирующие антитела, которые могут специфически связываться с IFN- и/или ингибировать или модулировать биологическую активность IFN-. Кроме того, изобретение охватывает полинуклеотиды, которые по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или примерно на 99% идентичны SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ IDNO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33, причем антитело, кодируемое частично каждым из этих полинуклеотидов, может ингибировать или модулировать биологическую активность и/или специфически связываться с IFN-, и где сопоставление нуклеотидных последовательностей, указанных непосредственно выше, и тестируемой последовательности охватывает по меньшей мере примерно 100,150 или 200 нуклеотидов. В табл. 2 дано краткое описание последовательностей и их связи с идентификационными номерами последовательностей. Таблица 2- 20011876 Еще в одном аспекте изобретения предложены гибридомные клетки и клеточные линии, которые экспрессируют иммуноглобулиновые молекулы и антитела по изобретению, возможно, моноклональные антитела. В дополнительном аспекте гибридомная клетка или клетка из клеточной линии, которая экспрессирует и/или секретирует иммуноглобулиновую молекулу или антитело по изобретению, может быть имплантирована пациенту, в результате чего антитело по изобретению или его иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент экспрессируется и/или секретируется в пациенте, ингибируя или модулируя таким образом активность IFN-. В изобретении также предложены биологически и иммунологически очищенные препараты антител, предпочтительно моноклональных антител, против IFN-, и имеющих биологическую и иммунологическую специфичность в отношении специфического связывания с человеческим IFN-. Возможность клонировать и воспроизводить очень большие по размеру человеческие локусы в дрожжевых искусственных хромосомах (YACs) и вводить их в мышиную зародышевую линию позволяет развить полезный подход к выяснению функциональных компонентов очень больших или грубо картированных локусов, а также получить полезные модели заболеваний людей. Более того, применение такой технологии для замены мышиных локусов их человеческими эквивалентами дает уникальную возможность проникнуть в суть экспрессии и регуляции генных продуктов человека в процессе развития, их связь с другими системами и их вовлечение в индукцию и развитие заболевания. Важное практическое применение такой стратегии состоит в изменении гуморальной иммунной системы мыши путем введения человеческих иммуноглобулиновых (Ig) локусов мышам, в которых эндогенные Ig-гены были инактивированы (международная заявка WO 93/12227). Эта система дает возможность изучать механизмы, лежащие в основе запрограммированной экспрессии и сборки антител, а также их роль в развитии В-клеток. Более того, такая стратегия предлагает источник продукции полностью человеческих моноклональных антител (мАТ). Ожидают, что полностью человеческие мАТ минимизируют иммуногенные и аллергические ответы, присущие мышиным мАТ или мАТ, производным от мышиных, и, таким образом, увеличат эффективность и безопасность вводимых антител. Полностью человеческие антитела могут быть использованы при лечении хронических и рецидивирующих заболеваний человека, таких как остеоартрит, ревматоидный артрит и другие воспалительные состояния, лечение которых требует повторного введения антител. Таким образом, одно особое преимущество анти-IFNантител по изобретению состоит в том, что эти антитела являются полностью человеческими и могут быть введены пациентам без напряжения для организма, хотя применение мышиных античеловеческих антител, или других ранее описанных не являющимися полностью человеческими антител, или не являющихся человеческими антител из видов, не являющихся человеком, обычно связано с необходимостью сводить к миниуму побочные реакции. Используя описанные здесь способы, специалист в данной области может конструировать мышиные штаммы, дефектные по продукции мышиных антител, с большими фрагментами человеческих Ig-локусов, так чтобы такие мыши продуцировали человеческие антитела и не продуцировали мышиные антитела. Большие человеческие Ig-фрагменты могут поддерживать большое разнообразие вариабельных генов, а также надлежащую регуляцию продукции антител и экспрессии. Используя клеточный аппарат мыши для обеспечения разнообразия и селекции антител и отсутствие иммунологической толерантности к человеческим белкам, можно в этих мышиных штаммах получать репертуар человеческих антител,который обеспечивает высокоаффинные антитела против любого интересующего антигена, включая человеческие антигены. При использовании гибридомной технологии могут быть получены и отобраны антиген-специфические человеческие мАТ с желаемой специфичностью. В некоторых воплощениях специалист может использовать константные области из видов, иных нежели человек, вместе с человеческой вариабельной областью (областями) в таких мышах для продукции химерных антител. Природная структура антител Большинство природных структурных единиц-антител обычно представляют собой тетрамер. Каждый такой тетрамер обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара имеет одну полноразмерную "легкую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу примерно 25 кДа) и одну полноразмерную "тяжелую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу примерно 50-70 кДа). Аминоконцевой участок каждой легкой и тяжелой цепи обычно включает вариабельную область из примерно 100-110 или более аминокислот, которая обычно отвечает за распознавание антигена. Карбоксиконцевой участок каждой цепи обычно определяет константную область, отвечающую за эффекторную функцию. Человеческие легкие цепи обычно подразделяют на каппа- и лямбда-легкие цепи. Тяжелые цепи обычно классифицируют как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и изотип антител определяют как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. IgG имеет несколько подклассов, включая, но не ограничиваясь ими, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. IgM включает подклассы, но не ограничиваясь ими, IgM1 и IgM2.IgA аналогично подразделяют на подклассы, включая, но не ограничиваясь этим, IgA1 и IgA2. Внутри полноразмерных легких и тяжелых цепей вариабельные и константные области обычно соединены "Jучастком из примерно 12 или более аминокислот, где тяжелая цепь также содержит "D-участок из при- 21011876 мерно 10 или более аминокислот. См., например, FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY, Ch. 7, 2nd ed. (Paul,W., ed.), 1989, Raven Press, N.Y. (включено посредством ссылки во всей полноте для всех целей). Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепи обычно образуют антигенсвязывающий сайт. Некоторые природные антитела, которые обнаружены у верблюдов и лам, представляют собой димеры, состоящие из двух тяжелых цепей и не содержащие легких цепей. Muldermans et al., 2001, J. Biotechnol. 74: 277-302; Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem. 276: 26285-90. Изобретение охватывает димерные антитела, состоящие из двух тяжелых цепей, которые могут связываться с IFN- и/или ингибировать биологическую активность IFN-. Кристаллографическое исследование верблюжьего антитела обнаружило,что CDR3 тяжелой цепи, имеющий 19 аминокислот в длину, образует поверхность, которая взаимодействует с антигеном и покрывает две другие гипервариабельные области (Desmyter et al., выше). Таким образом, CDR3 важен для связывания антигена в димерных верблюжьих антителах, а также в более типичных тетрамерных антителах. Вариабельные области обычно имеют ту же общую структуру, где консервативные каркасные участки (FR) соединены тремя гипервариабельными областями, также называемыми участками, определяющими комплементарность, или CDR. Участки CDR из двух цепей каждой пары обычно погружены внутрь каркасных участков, что позволяет связываться со специфичным эпитопом. Вариабельные области как легкой, так и тяжелой цепи обычно содержат, от N-конца к С-концу, домены FR1, CDR1, FR2,CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Аминокислоты в каждом домене обычно распределены в соответствии с толкованием, приведенным в Kabat с соавт., что более подробно объясняется ниже (Kabat et al., Sequences ofLesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 878-883). CDR-участки создают основные поверхностные точки контакта для связывания антигена. См., например, Chothia and Lesk, выше. Кроме того, CDR3 легкой цепи и особенно CDR3 тяжелой цепи могут образовывать наиболее важные детерминанты при связывании антигена внутри вариабельных областей легкой и тяжелой цепей. См.,например, Chothia and Lesk, выше; Desiderio et al. (2001), J. Mol. Biol. 310: 603-15; Xu and Davis (2000),Immunity 13 (1): 37-45; Desmyter et al. (2001), J. Biol. Chem. 276 (28): 26285-90; и Muyldermans (2001), J.Biotechnol. 74 (4): 277-302. В некоторых антителах CDR3 тяжелой цепи, по-видимому, образует основную область контакта между антигеном и антителом (Desmyter et al., выше). Схемы селекции in vitro, в которых изменяется только CDR3, могут быть использованы для варьирования связывающих свойств антитела (Muyldermans, выше; Desiderio, выше).CDR-участки могут быть расположены в последовательности вариабельных областей тяжелой цепи следующим образом. CDR1 начинается приблизительно в остатке 31 зрелого антитела и имеет обычно примерно 5-7 аминокислот в длину, и ему почти всегда предшествует Cys-Xxx-Xxx-Xxx-Xxx-Xxx-XxxXxx-Xxx (SEQ ID NO: 48) (где "Ххх" представляет собой любую аминокислоту). Остаток после CDR1 тяжелой цепи почти всегда представляет собой триптофан, часто Trp-Val, Trp-Ile или Trp-Ala. Между последним остатком в CDR1 и первым в CDR2 почти всегда располагаются 14 аминокислот, и CDR2 обычно содержит от 16 до 19 аминокислот. CDR2 может непосредственно предшествовать последовательность Leu-Glu-Trp-Ile-Gly (SEQ ID NO: 49), и за ним может непосредственно следовать Lys/ArgLeu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala-Thr/Ser/Ile/Ala. Другие аминокислоты могут предшествовать или следовать заCDR2. Между последним остатком в CDR2 и первым в CDR3 почти всегда располагаются 32 аминокислоты, и CDR3 может состоять из примерно 3-25 остатков в длину. Cys-Xxx-Xxx почти всегда непосредственно предшествует CDR3, и Trp-Gly-Xxx-Gly (SEQ ID NO: 50) почти всегда следует за CDR3.CDR-участки легкой цепи могут располагаться в последовательности легкой цепи следующим образом.CDR1 начинается приблизительно в остатке 24 зрелого антитела и имеет обычно примерно 10-17 остатков в длину. Ему почти всегда предшествует Cys. Между последним остатком CDR1 и первым остаткомCDR2 почти всегда располагаются 15 аминокислот, и CDR2 почти всегда имеет 7 остатков в длину.CDR2 обычно предшествуют Ile-Tyr, Val-Tyr, Ile-Lys или Ile-Phe. Между CDR2 легкой цепи и CDR3 почти всегда располагаются 32 остатка, и CDR3 имеет обычно примерно 7-10 аминокислот в длину. CDR3 почти всегда предшествует Cys, и за ним обычно следует Phe-Gly-Xxx-Gly (SEQ ID NO: 51). Специалист в данной области поймет, что длины каркасных участков, окружающих CDR, могут содержать вставки или делеции, которые делают их длину отличающейся от типичной длины. Как подразумевается здесь, длина каркасных участков тяжелой цепи находится в следующих диапазонах: FR1 аминокислоты 0-41; FR2 - аминокислоты 5-24; FR3 - аминокислоты 13-42 и FR4 - аминокислоты 0-21. Кроме того, согласно изобретению предполагается, что длины каркасных участков легкой цепи находятся в следующих диапазонах: FR1 - 6-35 аминокислот; FR2 - 4-25 аминокислот; FR3 - 2-42 аминокислот иFR4 - 0-23 аминокислот. Природные антитела обычно содержат сигнальную последовательность, которая направляет антитело на клеточный путь секреции белка и которая не присутствует в зрелом антителе. Полинуклеотид,кодирующий антитело по изобретению, может кодировать природную сигнальную последовательность или гетерологичную сигнальную последовательность, как описано ниже.- 22011876 Созревание антител in vitro Антитела могут подвергаться созреванию in vitro, что приводит к образованию антител с измененными свойствами, такими как более высокая аффинность к антигену или более низкая константа диссоциации. Изменение только остатков внутри CDR, особенно CDR3, может давать измененные антитела,которые связываются с тем же антигеном, но с большей аффинностью. См., например, Schier et al., 1996,J. Mol. Biol. 262: 551-67; Yang et al., 1995, J. Mol. Biol. 254: 392-403. Изобретение охватывает антитела,созданные благодаря разнообразию схем селекции in vitro, таких как созревание аффинности, и/или "тасование" (shuffling) цепей (Kang et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. 88: 11120-23), или "тасование" ДНК(Stemmer, 1994, Nature 370:389-391), в соответствии с которыми могут быть выбраны антитела, имеющие полезные свойства. Во многих схемах известное антитело рандомизируют in vitro по определенным позициям, часто внутри CDR, и подвергают процессу селекции, в результате чего могут быть выделены антитела с желаемыми свойствами, такими как повышенная аффинность в отношении определенного антигена. См., например, van den Beucken et al., 2001, J. Mol. Biol. 310: 591-601: Desiderio et al., 2001, J.Mol. Biol. 310: 603-15; Yang et al., 1995, J. Mol. Biol. 254: 392-403; Schier et al., 1996, J. Mol. Biol. 263: 55167. Обычно такие мутантные антитела могут содержать несколько измененных остатков в одном или более CDR, в зависимости от схемы мутагенеза и стадий селекции. См., например, van den Beucken et al.,выше. Биспецифичные или бифункциональные антитела Биспецифичное или бифункциональное антитело обычно представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две разных пары тяжелая цепь/легкая цепь и два разных связывающих сайта. Биспецифичные антитела могут быть получены разными способами, включая, но не ограничиваясь этим,слияние гибридом или сшивание F(ab')-фрагментов. См., например, SongsivilaiLachmann, 1990, Clin.Exp. Immunol. 79: 315-321; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148: 1547-1553. Получение антител В изобретении предложены антитела, которые специфично связываются с IFN- человека. Эти антитела могут быть получены путем иммунизации полноразмерным IFN- или его фрагментами. Антитела по изобретению могут быть поликлональными или моноклональными и/или могут быть рекомбинантными антителами. В некоторых воплощениях получают полностью человеческие антитела по изобретению, например, путем иммунизации трансгенных животных, способных продуцировать человеческие антитела (см., например, международную заявку на патент, публикация WO 93/12227).CDR легкой цепи и вариабельных областей тяжелой цепи анти-IFN- антител по изобретению могут быть "пересажены" в каркасные участки (FR) из того же или другого вида. В некоторых воплощенияхCDR легкой цепи и вариабельных областей тяжелой цепи анти-IFN- антитела могут быть "пересажены" в консенсусные FR человека для создания "гуманизированного" антитела. Такие гуманизированные антитела охвачены настоящим изобретением. Для создания консенсусных FR человека FR из нескольких человеческих аминокислотных последовательностей тяжелой цепи или легкой цепи сопоставляют для идентификации консенсусной аминокислотной последовательности. FR тяжелой цепи или легкой цепи анти-IFN- антитела могут быть заменены FR из другой тяжелой цепи или легкой цепи. Редкие аминокислоты в FR тяжелых и легких цепей анти-IFN- антитело обычно не замещают, тогда как оставшиеся аминокислоты в FR могут быть замещены. Редкие аминокислоты представляют собой специфические аминокислоты, которые находятся в позициях, в которых они обычно не находятся в FR. "Пересаженные" вариабельные области из анти-IFN- антител по изобретению могут быть использованы с константной областью, которая отличается от первоначальной константной области анти-IFN- антитела. Или же"пересаженные" вариабельные области представляют собой часть одноцепочечного Fv-антитела. "Пересадка" CDR описана, например, в патентах US 6180370, 5693762, 5693761, 5585089 и 5530101, которые включены сюда посредством ссылки для любой цели. Антитела по изобретению могут быть получены с использованием трансгенных мышей, имеющих значительный участок человеческого антитело-продуцирующего локуса, встроенный в антитело-продуцирующие клетки мышей, и которые, кроме того, модифицированы методами генной инженерии таким образом, чтобы быть дефектными по продукции эндогенных мышиных антител. Такие мыши способны продуцировать человеческие иммуноглобулиновые молекулы и антитела и не продуцируют или продуцируют, по существу, уменьшенные количества мышиных иммуноглобулиновых молекул и антител. Технологии, используемые для достижения этого результата, описаны в патентах, заявках и ссылках,раскрытых здесь в описании. В некоторых воплощениях специалист может использовать способы, раскрытые в публикации международной патентной заявки WO 98/24893, которая включена сюда посредством ссылки для любой цели. См. также статью Mendez et al., 1997, Nature Genetics 11: 146-156, которая включена здесь посредством ссылки для любой цели. Моноклональные антитела (мАТ) по изобретению могут быть получены разными способами, включая стандартную методологию получения моноклональных антител, например стандартный способ гибридизации соматических клеток по Kohler и Milstein (1975, Nature 256: 495). Хотя процедуры гибридизации соматических клеток являются предпочтительными, в принципе, могут быть использованы и другие- 23011876 способы получения моноклональных антител, например вирусная или онкогенная трансформация Влимфоцитов. Одна из возможных животных систем для получения гибридом представляет собой мышь. Получение гибридом в мыши традиционно, и протоколы иммунизации и способы выделения иммунизированных спленоцитов для слияния хорошо известны в данной области. Партнеры для слияния (например,клетки мышиной миеломы) и методики слияния также известны. В некоторых воплощениях полностью человеческие моноклональные антитела против IFN-, возможно, человеческого IFN-, могут быть получены с использованием трансгенных мышей, несущих части иммунной системы человека, а не системы мыши. Эти трансгенные мыши, названные здесь как мыши"HuMab", содержат мини-локус генов иммуноглобулинов человека, который кодирует неперегруппированные последовательности тяжелых (- и -) и -легких цепей иммуноглобулинов человека вместе с заданными мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы - и -цепей (Lonberg et al., 1994, Nature 368: 856-859). Соответственно, мыши имеют пониженную экспрессию мышиных IgM или -, и в ответ на иммунизацию введенные трансгены человеческих тяжелых цепей и легких цепей подвергаются переключению классов и соматической мутации с образованием высокоаффинных -моноклональных IgG антител человека (Lonberg et al., выше; Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; HardingFishwild et al., 1996, Nature Biotechnology 14: 845-851, причем содержания всех их таким образом включены посредством ссылки во всей их полноте. См. далее патенты US 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429; все Lonberg и Kay, а также патент US 5545807Surani с соавт., публикации международной патентной заявки WO 93/1227, опубликованной 24 июня 1993 года; WO 92/22646, опубликованной 23 декабря 1992 года; и WO 92/03918, опубликованной 19 марта 1992 года, все раскрытия которых таким образом включены посредством ссылки во всей их полноте. Альтернативно, штаммы трансгенных мышей НСо 7 и НСо 12, описанные в приведенных ниже примерах,могут быть использованы для получения человеческих анти-IFN- антител. В этих воплощениях антитела по изобретению специфически связываются с IFN- с равновесной константой диссоциации (KD) менее 10-7, 10-8, 10-9 или 10-10 М. В некоторых воплощениях изобретения антитела связываются с IFN- с KD, составляющей от приблизительно 10-8 до 10-12 М. В предпочтительных воплощениях антитела по изобретению представляют собой IgG1-, IgG2- илиIgG4-изотип. Антитела могут представлять собой IgG1-изотип. В других воплощениях антитела по изобретению представляют собой IgM-, IgA-, IgE- или IgD-изотип. В предпочтительных воплощениях по изобретению антитела содержат каппа-легкую цепь человека и тяжелую цепь IgG1 человека. Экспрессия антител по изобретению, включающих константную область тяжелой цепи IgG1, описана ниже в примерах. В конкретных воплощениях вариабельные области антител лигируют с константной областью, отличной от константной области IgG1-изотипа. В некоторых воплощениях антитела по изобретению были клонированы для экспрессии в клетках млекопитающих. В некоторых воплощениях консервативные модификации в тяжелых цепях и легких цепях антиIFN- антител (и соответствующие модификации в кодирующих нуклеотидах) будут давать анти-IFNантитела, имеющие функциональные и химические характеристики, аналогичные таковым для анти-IFN антитела. В противоложность этому, значительные модификации в функциональных и/или химических характеристиках анти-IFN- антитела могут быть выполнены путем выбора замен в аминокислотной последовательности тяжелых и легких цепей, которые существенно различаются по их эффекту на поддержание: (а) структуры молекулярного скелета в участке замены, например это касается -слойной или спиральной конформации, (б) заряда или гидрофобности молекулы в сайте-мишени или (в) размера боковой цепи. Например, "консервативная аминокислотная замена" может означать замену нативного аминокислотного остатка ненативным остатком, так что происходит небольшое воздействие на полярность или заряд аминокислотного остатка в этой позиции или не происходит никакого воздействия. Более того,любой нативный остаток в полипептиде может быть также замещен аланином, как было ранее описано для "аланин-сканирующего мутагенеза". Желаемые аминокислотные замены (консервативные или неконсервативные) могут быть определены специалистами в данной области тогда, когда такие замены будут желательны. В некоторых воплощениях аминокислотные замены могут быть использованы для идентификации важных остатков антиIFN- антитела или для увеличения или уменьшения аффинности анти-IFN- антител, описанных здесь. В альтернативных воплощениях антитела по изобретению могут экспрессировать другие клеточные линии кроме гибридомных клеточных линий. В этих воплощениях последовательности, кодирующие специфические антитела, могут быть использованы для трансформации подходящей клетки-хозина мле- 24011876 копитающих. Согласно этим воплощениям трансформацию можно осуществить любым известным способом введения полинуклеотидов в клетку-хозяина, включая, например, упаковывание полинуклеотида в вирус (или в вирусный вектор) и трансдукцию клетки-хозяина вирусом (или вектором), или с применением методик трансфекции, известных в данной области, как раскрыто в примерах в патентах US 4399216,4912040, 4740461 и 4959455 (которые таким образом все включены сюда посредством ссылки для любой цели). Обычно используемая методика трансформации может зависеть от хозяина, подлежащего трансформации. Способы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваются ими, декстран-опосредованную трансфекцию, преципитацию фосфатом кальция, полибрен-опосредованную трансфекцию, слияние протопластов,электропорацию, инкапсуляцию полинуклеотида(полинуклеотидов) в липосомы и прямую микроинъекцию ДНК в ядра. Молекулы нуклеиновой кислоты (или полинуклеотиды), кодирующие аминокислотную последовательность константной области тяжелой цепи, вариабельную область тяжелой цепи, константную область легкой цепи или вариабельную область легкой цепи анти-IFN- антитела по изобретению, входят в объем настоящего изобретения. Такие полинуклеотиды могут быть встроены в подходящий вектор экспрессии стандартными методами лигирования. В предпочтительном воплощении полинуклеотид, кодирующий константную область тяжелой цепи или легкой цепи анти-IFN- антитела, присоединяют справа к концу полинуклеотида, кодирующего соответствующую вариабельную область, и лигируют в вектор экспрессии. Вектор обычно выбирают таким образом, чтобы он был функциональным в конкретной используемой клетке-хозяине (т.е. вектор должен быть совместим с аппаратом клетки-хозяина, так что может осуществляться амплификация этого гена и/или экспрессия этого гена). В качестве обзора экспрессирующих векторов см. МЕТН. ENZ. 185 (Goeddel, ed.), 1990, Academic Press. Обычно векторы экспрессии, используемые в любой из клеток-хозяев, будут содержать последовательности для поддержания плазмиды и для клонирования и экспрессии экзогенных нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности, в совокупности называнные "фланкирующими последовательностями", в некоторых воплощениях будут обычно содержать одну или более из следующих нуклеотидных последовательностей: промотор, одну или более энхансерных последовательностей, точку инициации репликации (origin), последовательность терминации транскрипции, полную интронную последовательность, содержащую донорный и акцепторный сплайс-сайт, последовательность, кодирующую лидерную последовательность для секреции полипептида, сайт связывания рибосом, последовательность полиаденилирования, полилинкерный участок для вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей подлежащий экспрессии полипептид, и селектируемый маркерный элемент. Каждая из этих последовательностей обсуждается ниже. Возможно, вектор может содержать "tag-кодирующую последовательность (tag-метка), т.е. олигонуклеотидную молекулу, расположенную на 5'- или 3'-конце последовательности, кодирующей полипептид анти-IFN- антитела; причем эта олигонуклеотидная последовательность кодирует полиHis (например, гексаHis), или другую "tag", например FLAG, НА (гемагглютинин вируса гриппа), или myc, для которого в продаже имеются антитела. Эта "tag" обычно является связанной с полипептидом после его экспрессии и может служить в качестве средства для аффинной очистки или детекции IFN- антитела из клетки-хозяина. Аффинная очистка может быть осуществлена, например, с помощью колоночной хроматографии с использованием антител против "tag" в качестве аффинной матрицы, "tag" может быть затем удалена из очищенного анти-IFN- антительного полипептида разными способами, например с использованием определенных пептидаз для расщепления. Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (т.е. из того же вида и/или штамма, что и клетка-хозяин), гетерологичными (т.е. из вида, отличающегося от вида или штамма клетки-хозяина), гибридными (комбинация фланкирующих последовательностей из более чем одного источника),синтезированными или нативными. Как таковой, источник фланкирующей последовательности может представлять собой любой прокариотический или эукариотический организм, любой позвоночный или беспозвоночный организм или любое растение, при условии, что фланкирующая последовательность является функциональной в аппарате клетки-хозяина и может быть в нем активирована. Фланкирующие последовательности, полезные в векторах по этому изобретению, могут быть получены любым из нескольких хорошо известных в данной области способов. Обычно фланкирующие последовательности, полезные для осуществления изобретения, будут предварительно идентифицированы картированием и/или расщеплением рестрикционными эндонуклеазами и, таким образом, могут быть выделены из подходящего тканевого источника с использованием подходящих рестрикционньгх эндонуклеаз. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность фланкирующей последовательности. В этом изобретении фланкирующая последовательность может быть синтезирована с использованием способов, описанных здесь для синтеза или клонирования нуклеиновых кислот. Независимо от того, известна ли вся или только часть фланкирующей последовательности, она может быть получена с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или посредством скрининга ге- 25011876 номной библиотеки с применением подходящего зонда, такого как олигонуклеотид и/или фрагмент фланкирующей последовательности из того же или другого вида. Если фланкирующая последовательность не известна, то фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, может быть выделен из большего фрагмента ДНК, который может содержать, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или гены. Выделение может быть выполнено путем расщепления рестрикционными эндонуклеазами для получения соответствующего фрагмента ДНК, затем выделения с использованием очистки в агарозном геле, колоночной хроматографии Qiagen (Chatsworth, CA) или других способов, известных специалисту. Выбор подходящих ферментов для выполнения этой задачи будет очевиден среднему специалисту в данной области. Точка инициации репликации обычно представляет собой часть тех прокариотических экспрессирующих векторов, которые имеются в продаже, и эта точка инициации способствует амплификации вектора в клетке-хозяине. Если выбранный вектор не содержит сайт инициации репликации, то он может быть химически синтезирован на основе известной последовательности и лигирован в вектор. Например,сайт инициации репликации из плазмиды pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA) подходит для большинства грамотрицательных бактерий, а различные вирусные сайты инициации (например, SV40,полиомавируса, аденовируса, вируса везикулярного стоматита (VSV) или папилломавирусов, таких какHPV или BPV) полезны для клонирования векторов в клетках млекопитающих. Обычно сайт инициации репликативного компонента не требуется для экспрессирующих векторов млекопитающих (например,сайт инициации SV40 часто используется только потому, что он также содержит ранний промотор этого вируса). Последовательность терминации транскрипции типично расположена на 3'-конце полипептид-кодирующей области и служит для окончания транскрипции. Обычно последовательность терминации транскрипции в прокариотических клетках представляет собой G-C-богатый фрагмент, за которым следует поли-Т-последовательность. Хотя эта последовательность легко клонируется из библиотеки или даже имеется в продаже как часть вектора, она может быть также легко синтезирована с использованием способов синтеза нуклеиновых кислот, таких как способы, описанные здесь. Селектируемый маркерный ген кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки-хозяина, растущей в селективной культуральной среде. Типичные селектируемые маркерные гены кодируют белки, которые: (а) придают прокариотическим клеткам-хозяевам устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например к ампициллину, тетрациклину или канамицину; (б) восполняют ауксотрофные дефициты клетки или (в) обеспечивают критические питательные вещества, не доступные из комплексной или заданной среды. Предпочтительными селектируемыми маркерами являются ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Преимущественно ген устойчивости к неомицину может быть также использован для отбора как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах. Для амплификации гена, который будет экспрессироваться, могут быть использованы другие селектируемые гены. Амплификация представляет собой процесс, в котором гены, требуемые для продуцирования белка, необходимого для роста или клеточного выживания, повторяются тандемно внутри хромосом в последующих поколениях рекомбинантных клеток. Примеры подходящих селектируемых маркеров для клеток млекопитающих включают дигидрофолатредуктазу (dihydrofolate reductase, DHFR) и беспромоторные тимидинкиназные гены. Клетки-трансформанты млекопитающих помещают под давление отбора, где только трансформанты однозначно приспособлены для выживания благодаря селектируемому гену, присутствующему в векторе. Давление отбора накладывают путем культивирования трансформированных клеток в условиях, в которых концентрацию селективного агента в среде постепенно повышают, тем самым, приводя к амплификации и селектируемого гена, и ДНК, которая кодирует другой ген,например антитело, способное связываться с полипептидом IFN-. В результате этого, из амплифицированной ДНК синтезируются повышенные количества полипептида, такого как анти-IFN- антитело. Сайт связывания рибосом обычно необходим для инициации трансляции мРНК и характеризуется последовательностью Шайна-Далгарно (прокариоты) или последовательностью Козака (эукариоты). Этот элемент обычно располагается 3' от промотора и 5' от кодирующей полипептид последовательности, подлежащей экспрессии. В некоторых случаях, например когда в экспрессирующей системе эукариотической клетки-хозяина желательно гликозилирование, можно воздействовать на различные пре- или пропоследовательности для улучшения гликозилирования или выхода. Например, можно изменять сайт расщепления пептидазой для конкретного сигнального пептида или добавлять пропоследовательности, которые также могут влиять на гликозилирование. Конечный белковый продукт может иметь в положении -1 (относительно первой аминокислоты зрелого белка) одну или более дополнительных аминокислот, характерных для экспрессии, которые, возможно, были не полностью удалены. Например, конечный белковый продукт может иметь один или два аминокислотных остатка, обнаруженных в сайте расщепления пептидазой, присоединенных к аминоконцу. Или же использование некоторых сайтов расщепления ферментами может давать немного укороченную форму желаемого полипептида, если фермент расщепляет в такой области- 26011876 внутри зрелого полипептида. Векторы экспрессии и клонирования согласно изобретению обычно будут содержать промотор, который распознается организмом-хозяином и функциональным образом связан с молекулой, кодирующей анти-IFN- антитело. Промоторы представляют собой нетранскрибируемые последовательности, расположенные "в обратном направлении" (т.е. в направлении 3'5') от стартового кодона структурного гена(обычно в пределах примерно от 100 до 1000 п.о.), которые контролируют транскрипцию структурного гена. Промоторы традиционно подразделяют на два класса: индуцибельные промоторы и конститутивные промоторы. Индуцибельные промоторы инициируют повышенные уровни транскрипции с ДНК,находящейся под их контролем, в ответ на некоторое изменение условий культивирования, например присутствие или отсутствие питательного вещества или изменение в температуре. Напротив, конститутивные промоторы постоянно транскрибируют ген, с которым они функциональным образом связаны,т.е. с незначительным контролем в процессе экспрессии гена или вовсе без контроля. Большое количество промоторов, распознаваемых различными возможными клетками-хозяевами, хорошо известно. Подходящий промотор функциональным образом связывают с ДНК, кодирующей тяжелую цепь или легкую цепь, включающую анти-IFN- антитело по изобретению, путем удаления промотора из исходной ДНК с помощью расщепления рестрикционным ферментом и вставки последовательности желаемого промотора в вектор. Подходящие промоторы для применения в хозяевах-дрожжах также хорошо известны в данной области. Преимущественно, с дрожжевыми промоторами используют дрожжевые энхансеры. Подходящие промоторы для применения с клетками-хозяевами млекопитающих хорошо известны и включают, но не ограничиваются ими, промоторы, полученные из геномов вирусов, таких как полиомавирус, вирус оспы птиц, аденовирус (такой, как аденовирус 2), вирус папилломы быка, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита В и наиболее предпочтительно обезьяний вирус 40 (SV40). Другие подходящие промоторы млекопитающих включают гетерологичные промоторы млекопитающих, например промоторы теплового шока и актиновый промотор. Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают, но не ограничиваются ими, ранний промотор SV40 (Benoist and Chambon, 1981, Nature 290: 304-10); промотор CMV(Thomsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. USA 81: 659-663); промотор, содержащийся в 3'-длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса (Yamamoto, et al., 1980, Cell 22: 787-97); тимидинкиназный промотор вируса герпеса (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78: 1444-45); промотор и регуляторные последовательности из металлотионинового гена (Brinster et al., 1982, Nature 296: 39-42) и прокариотические промоторы, такие как бета-лактамазный промотор (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 75: 3727-31); или tac промотор (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80: 21-25). Интерес представляют также следующие контролирующие транскрипцию области животных, которые проявляют тканевую специфичность и были использованы в трансгенных животных: контролирующая область гена эластазы I, которая активна в панкреатических ацинарных клетках (Swift et al., 1984, Cell 38: 639-46; Ornitzet al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 399-409 (1986); MacDonald, 1987, Hepatology 7: 425515); контролирующая область инсулинового гена, которая активна в панкреатических бета-клетках(Hanahan, 1985, Nature 315: 115-22); контролирующая область иммуноглобулинового гена, которая активна в лимфоидных клетках (Grosschedl et al., 1984, Cell 38: 647-58; Adames et al., 1985, Nature 318: 53338; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7: 1436-44); контролирующая область вируса опухоли молочной железы мыши, которая активна в тестикулярных клетках, клетках молочной железы, лимфоидных и тучных клетках (Leder et al., 1986, Cell 45: 485-95); контролирующая область альбуминового гена, которая активна в печени (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel 1: 268-76); контролирующая область альфа-фетопротеинового гена, которая активна в печени (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell Biol. 5: 1639-48; Hammer etal., 1987, Science 235: 53-58); контролирующая область альфа 1-антитрипсинового гена, которая активна в печени (Kelsey et al., 1987, Genes u Devel 1: 161-71); контролирующая область бета-глобинового гена,которая активна в миелодных клетках (Mogram et al., 1985, Nature 315: 338-40; Kollias et al., 1986, Cell 46: 89-94); контролирующая область гена миелинового основного белка, которая активна в олигодендроцитных клетках в головном мозге (Readhead et al., 1987, Cell 48: 703-12); контролирующая область гена миозина легких цепей-2, которая активна в скелетной мышце (Sani, 1985, Nature 314: 283-86); и контролирующая область гена гонадотропин-высвобождающего гормона, которая активна в гипоталамусе (Masonet al., 1986, Science 234: 1372-78). Энхансерная последовательность может быть встроена в вектор для усиления транскрипции ДНК,кодирующей легкую цепь или тяжелую цепь, составляющие анти-IFN- антитело по изобретению, высшими эукариотами. Энхансеры представляют собой cis-действующие элементы ДНК, обычно примерно 10-300 п.о. в длину, которые воздействуют на промотор для усиления транскрипции. Энхансеры не зависят от ориентации и положения, они были обнаружены как 5', так и 3' относительно единицы транскрипции. Известно несколько энхансерных последовательностей, доступных из генов млекопитающих (например, глобина, эластазы, альбумина, альфа-фетопротеина и инсулина). Однако обычно используют энхансер из вируса. Энхансер SV40, энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер полиома- 27011876 вируса и энхансеры аденовируса, известные в данной области, представляют собой примеры энхансерных элементов для активации эукариотических промоторов. Хотя энхансер может располагаться в векторе либо в 5'-, либо в 3'-направлении относительно кодирующей последовательности, он обычно располагается в сайте, находящемся 5' от промотора. Последовательность, кодирующая подходящую нативную или гетерологичную сигнальную последовательность (лидерную последовательность или сигнальный пептид), может быть внедрена в вектор экспрессии для стимуляции секреции антитела из клетки. Выбор сигнального пептида или лидерной последовательности зависит от типа клеток-хозяев, в которых антитело должно продуцироваться, и гетерологичная сигнальная последовательность может замещать нативную сигнальную последовательность. Примеры сигнальных пептидов, которые функциональны в клетках-хозяевах млекопитающих, включают следующие: сигнальную последовательность для интерлейкина-7 (IL-7), описанную в патенте US 4965195; сигнальную последовательность для рецептора интерлейкина-2, описанную в Cosman et al. (1984, Nature 312: 768); сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в патенте ЕР 0367566; сигнальный пептид рецептора I типа интерлейкина-1, описанный в патенте US 4968607; сигнальный пептид рецептора II типа интерлейкина-1, описанный в патенте ЕР 0460846; сигнальную последовательность IgK человека(которая представляет собой METDTLLLWVLLLWVPGSTG; SEQ ID NO: 52); сигнальную последовательность гормона роста человека (которая представляет собой MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSA;SEQ ID NO: 53) и сигнальные последовательности MGSTAILALLLAVLQGVCA (SEQ ID NO: 54) и METPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 55) человека, которые кодировались кДНК, кодирующими тяжелые и легкие цепи, выделенные в примере 3. Векторы экспрессии по изобретению могут быть сконструированы на основе исходного вектора,например вектора, имеющегося в продаже. Такие векторы могут содержать или не содержат все желаемые фланкирующие последовательности. Если одна или более фланкирующих последовательностей,описанных здесь, еще не присутствуют в векторе, то они могут быть индивидуально получены и лигированы в вектор. Способы, используемые для получения каждой фланкирующей последовательности, хорошо известны специалисту в данной области. После того, как вектор был сконструирован и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, тяжелую цепь или легкую и тяжелую цепи, составляющие анти-IFN- антитело, была встроена в соответствующий сайт вектора, завершенный вектор может быть введен в подходящую клетку-хозяин для амплификации и/или экспрессии полипептида. Трансформация вектора экспрессии анти-IFN- антитела в выбранную клетку-хозяин может быть проведена хорошо известными методами, включая трансфекцию, заражение, копреципитацию фосфатом кальция, электропорацию, микроинъекцию, липофекцию, ДЭАЭ-декстран-опосредованную трансфекцию или другие известные способы. Выбранный способ будет отчасти зависеть от типа используемой клетки-хозяина. Эти и другие подходящие способы хорошо известны специалисту и изложены, например, в Sambrook et al., выше. При культивировании в подходящих условиях клетка-хозяин синтезирует анти-IFN- антитело, которое затем может быть собрано из культуральной среды (если клетка-хозяин секретирует его в среду) или прямо из клетки-хозяина, продуцирующей его (если оно не секретируется). Выбор подходящей клетки-хозяина будет зависеть от различных факторов, таких как желаемые уровни экспрессии, полипептидные модификации, которые желательны или необходимы для активности (такие, как гликозилирование или фосфорилирование), и легкость складывания в биологически активную молекулу. Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваются ими, иммортализованные клеточные линии, доступные из Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая, но не ограничиваясь ими, клетки яичника китайского хомячка (СНО, Chinese hamster ovary), клетки HeLa, клетки почки детеныша хомячка (BHK, baby hamster kidney), клетки почки обезьяны (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) и множество других клеточных линий. В некоторых воплощениях клеточные линии можно выбрать, определяя, какие клеточные линии имеют высокие уровни экспрессии и конститутивно продуцируют антитела со свойствами связывания IFN- В другом воплощении может быть выбрана клеточная линия, происходящая из В-клеток, которая не продуцирует свое собственное антитело, но обладает способностью продуцировать и секретировать гетерологичное антитело. Антитела по изобретению полезны для обнаружения IFN- в биологических образцах и идентификации клеток или тканей, которые продуцируют белок IFN-. Антитела по изобретению, которые специфически связываются с IFN-, могут быть полезны в лечении заболеваний, опосредованных IFN-. Указанные антитела могут быть использованы в анализах связывания для определения IFN- и для ингибирования образования комплекса IFN- с рецепторами IFN-. Указанные антитела, которые связываются сIFN- и блокируют взаимодействие с другими связывающимися соединениями, могут находить терапевтическое применение в регуляции заболеваний, опосредованных IFN-. В предпочтительных воплощениях антитела к IFN- могут блокировать связывание IFN- с его рецептором, в результате чего может быть нарушена индуцируемая IFN- каскадная передача сигнала. В некоторых воплощениях изобретения предложены фармацевтические композиции, содержащие- 28011876 терапевтически эффективное количество одного или более антител по изобретению вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, солюбилизатором, эмульгатором, консервантом и/или адъювантом. Предпочтительно, чтобы приемлемые вещества для приготовления композиций были нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях. В предпочтительных воплощениях предложены фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество анти-IFN- антител. В некоторых воплощениях приемлемые для приготовления композиций вещества предпочтительно нетоксичны для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция может содержать в своем составе вещества для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмотического давления, вязкости,прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проникновения композиции. В таких воплощениях подходящие для приготовления композиций вещества включают, но не ограничиваются ими, аминокислоты (такие, как глицин,глутамин, аспарагин, аргинин или лизин); антимикробные агенты; антиоксиданты (такие, как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферы (такие, как борат, бикарбонат, Трис-HCl,цитраты, фосфаты или другие органические кислоты); наполнители (такие, как маннит или глицин); хелатирующие агенты (такие, как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА; комплексообразующие агенты (такие, как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды и другие углеводы (такие, как глюкоза, манноза или декстрины); белки (такие, как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); красящие вещества, корригенты и разбавляющие агенты; эмульгирующие агенты; гидрофильные полимеры (такие,как поливинилпирролидон); низкомолекулярные полипептиды; солеобразующие противоионы (такие,как натрий); консерванты (такие, как бензалкония хлорид, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или перекись водорода); растворители (такие, как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); сахарные спирты (такие, как маннит или сорбит); суспендирующие агенты; поверхностно-активные вещества или увлажняющие агенты (такие, как плюроник (pluronics), ПЭГ, эфиры сорбита, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 80, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапал (tyloxapal; агенты,повышающие стабильность (такие, как сахароза или сорбит); агенты, повышающие тоничность (такие,как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, манит, сорбит); средства доставки; разбавители; наполнители и/или фармацевтические адъюванты. См. REMINGTON'SPHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition, (A.R. Gennaro, ed.), 1990, Mack Publishing Company. В некоторых воплощениях оптимальная фармацевтическая композиция будет определяться специалистом в данной области в зависимости, например, от предполагаемого пути введения, способа доставки и желаемой дозировки. См., например, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, выше. В некоторых воплощениях такие композиции могут влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость выведения in vivo антител по изобретению. В некоторых воплощениях первичный носитель или носитель в фармацевтической композиции может быть либо водным, либо неводным по своей природе. Например, подходящий носитель или основа могут представлять собой воду для инъекции, физиологический солевой раствор или искусственную цереброспинальную жидкость, возможно дополненную другими веществами, обычными в композициях для парентерального введения. Нейтральный забуференный солевой раствор или солевой раствор, смешанный с сывороточным альбумином, являются дополнительными примерами носителей. В предпочтительных воплощениях фармацевтические композиции содержат Трис-буфер с рН примерно 7,0-8,5 или ацетатный буфер с рН примерно рН 4,0-5,5 и могут дополнительно содержать сорбит или его подходящий заместитель. В некоторых воплощениях по изобретению композиции с анти-IFN- антителом могут быть приготовлены для хранения путем смешивания выбранной композиции, имеющей желаемую степень чистоты, с возможными агентами для приготовления композиции (REMINGTON'S PHARMACEUTICALSCIENCES, выше) в форме лиофилизированного кека или водного раствора. Кроме того, в некоторых воплощениях продукт с анти-IFN- антителом может быть приготовлен в виде лиофилизата с подходящими наполнителями, такими как сахароза. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть выбраны для парентеральной доставки. Или же композиции могут быть выбраны для ингаляции или для доставки через пищеварительный тракт,например перорально. Приготовление таких фармацевтически приемлемых композиций находится в пределах квалификации специалиста в данной области. Компоненты для приготовления композиций представлены предпочтительно в концентрациях, которые приемлемы для участка введения. В некоторых воплощениях используют буферы для поддержания у композиции физиологического значения рН или немного более низкого рН, обычно в интервале от примерно 5 до примерно 8. Если предусматривается парентеральное введение, то терапевтические композиции для применения в этом изобретении могут быть предложены в форме апирогенного, парентерально вводимого водного- 29011876 раствора, содержащего желаемое анти-IFN- антитело в фармацевтически приемлемом носителе. Особенно подходящим носителем для парентеральной инъекции является стерильная дистиллированная вода, в которой анти-IFN- антитело приготовлено в виде стерильного изотонического раствора, надлежащим образом хранящегося. В некоторых воплощениях приготовление может включать приготовление желаемой молекулы в виде препарата с агентом, таким как инъецируемые микросферы, биоразрушающиеся частицы, полимерные соединения (такие, как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), шарики или липосомы, которые могут обеспечивать контролируемое или замедленное высвобождение продукта, который может доставляться посредством депо-инъекции. В некоторых воплощениях может быть также использована гиалуроновая кислота, обладающая эффектом поддержания замедленного высвобождения в кровоток. В некоторых воплощениях имплантируемые устройства для доставки лекарств могут быть использованы для введения желаемой молекулы антитела. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть приготовлены в виде препарата для ингаляции. В этих воплощениях анти-IFN- антитела преимущественно готовят в виде сухого вдыхаемого порошка. В предпочтительных воплощениях растворы анти-IFN- антитела для ингаляции могут быть также приготовлены с пропеллентом для аэрозольной доставки. В некоторых воплощениях растворы могут распыляться. Поэтому способы введения в легкие и способы приготовления препаратов дополнительно описаны в международной патентной заявке PCT/US94/001875, которая включена сюда посредством ссылки и описывает доставку в легкие химически модифицированных белков. Также предусматривается, что композиции можно вводить перорально. Анти-IFN- антитела, которые вводят таким способом, могут быть приготовлены с носителями или без носителей, обычно используемых в приготовлении твердых лекарственных форм, таких как таблетки и капсулы. В некоторых воплощениях капсула может быть изготовлена так, чтобы высвобождать активную часть композиции в том месте желудочно-кишечного тракта, в котором биодоступность максимальна, а пресистемное разрушение минимально. Можно включать дополнительно агенты для облегчения всасывания анти-IFN- антитела. Могут быть использованы также разбавители, корригенты, низкоплавкие воска, растительные масла, смазывающие вещества, суспендирующие агенты, разрыхлители для таблеток и связующие вещества. Фармацевтическая композиция по изобретению предпочтительно предложена для содержания эффективного количества одного или множества анти-IFN- антител в смеси с нетоксичными наполнителями, которые пригодны для изготовления таблеток. Растворяя таблетки в стерильной воде или другом подходящем носителе, можно получить одну дозу раствора. Подходящие наполнители включают, но не ограничиваются ими, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат или бикарбонат натрия, лактоза или фосфат кальция; или связывающие агенты, такие как крахмал, желатин или аравийская камедь; или смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Для специалистов в данной области будут очевидны и другие фармацевтические композиции, в том числе препараты анти-IFN- антител с замедленной или контролируемой доставкой. Способы приготовления множества других средств с замедленной или контролируемой доставкой, таких как липосомные носители, биоразрушающиеся микрочастицы или пористые шарики и депо-инъекции, также известны специалистам в данной области. См., например, международную патентную заявку PCT/US93/00829,которая включена сюда посредством ссылки и раскрывает контролируемое высвобождение пористых полимерных микрочастиц для доставки фармацевтических композиций. Препараты с замедленным высвобождением могут включать полупроницаемые полимерные матрицы в виде оформленных продуктов,например пленок или микрокапсул. Матрицы с замедленным высвобождением могут включать полиэфиры, гидрогели, полилактиды (как раскрыто в патенте US 3773919 и публикации европейской патентной заявки ЕР 058481, каждый из которых включен сюда посредством ссылки), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата (Sidman et al., 1983, Biopolymers 22: 547-556), поли-(2-гидроксиэтилметакрилат) (Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15: 167-277 и Langer, 1982, Chem. Tech. 12: 98-105),этиленвинилацетат (Langer et al., выше) или поли-D(-)-3-гидроксимасляную кислоту (публикация европейской патентной заявки ЕР 133988). Композиции с замедленным высвобождением могут также включать липосомы, которые могут быть получены любым из нескольких способов, известных в данной области. См., например, Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 3688-3692; публикации европейских патентных заявок ЕР 036676, ЕР 088046 и ЕР 143949, включенных сюда посредством ссылки. Фармацевтические композиции, используемые для введения in vivo, типично предложены в виде стерильных препаратов. Стерилизация может быть выполнена путем фильтрации через стерильные мембраны для фильтрации. При лиофилизации композиции стерилизация с использованием этого способа может проводиться либо до, либо после лиофилизации и разведения. Композиции для парентерального введения могут храниться в лиофилизированной форме или в растворе. Парентеральные композиции обычно помещают в контейнер, имеющий стерильно закрытое входное отверстие, например мешок для внутривенного раствора или флакон, имеющий пробку, прокалываемую иглой для внутривенных инъекций. После того, как фармацевтическая композиция приготовлена в виде препарата, она может храниться в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества, кристалла или в виде обезвоженного или лиофилизированного порошка. Такие препараты могут храниться либо в гото- 30

МПК / Метки

МПК: C12N 15/63, A61P 37/00, C12P 21/08, C12N 15/13, A61K 39/395, C12N 1/21, C12N 5/10, C07K 16/24

Метки: ifn-&gamma, антител, антитела, способ, применения, получени

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/30-11876-antitela-k-ifn-gamma-i-sposob-polucheni-ya-i-primeneniya-antitel.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антитела к ifn-γ и способ получени я и применения антител</a>