Способы лечения боли введением антагониста фактора роста нервов и нестероидного противовоспалительного средства и содержащие их композиции

010159 Перекрестная ссылка на родственные заявки По этой заявке испрашивается приоритет предварительных заявок на выдачу патента США 60/448823, поданной 19 февраля 2003 г., и 60/448853, поданной 19 февраля 2003 г., содержания которых полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. Область техники, к которой относится изобретение Изобретение относится к способам и композициям для профилактики или лечения боли у пациента введением комбинации антагониста фактора роста нервов и НСПВС. Предшествующий уровень техники В настоящее время для облегчения боли рекомендуется ряд способов лечения, предусматривающих введение нестероидных противовоспалительных средств (НСПВС). Было показано, что введение НСПВС проявляет свойства облегчения боли. Однако известны недостатки лечения НСПВС, включающие нежелательные побочные эффекты, такие как раздражение желудочно-кишечного тракта и почек и токсическое действие на печень. Более того, НСПВС не могут достичь адекватного облегчения боли даже в их максимальных терапевтически допустимых дозах при некоторых болезненных состояниях. Фактор роста нервов (NGF) представлял собой первый идентифицированный нейротропин, и его роль в развитии и выживании и периферических, и центральных нейронов была достаточно охарактеризована. Было показано, что NGF представляет собой решающий фактор выживания и поддержания при развитии периферических симпатических и эмбриональных сенсорных нейронов и холинергических нейронов основания переднего мозга (Smeyne, et al., Nature 368:246-249 (1994); Creowley, et al., Cell 76:1001-1011 (1994. NGF оказывает стимулирующую регуляцию на экспрессию нейропептидов в сенсорных нейронах (Lindsay, et al., Nature 337:362-364 (1989, и его активность опосредована через 2 различных рецептора, связанных с мембраной, рецептор TrkA тирозинкиназы и рецептор р 75, который структурно связан с другими членами семейства рецепторов фактора опухолевого некроза (Chao, et al.,Science 232:518-521 (1986. В дополнение к его воздействиям на нервную систему, NGF все больше вовлекался в процессы вне нервной системы. Например, было показано, что экзогенно введенный NGF усиливает проницаемость сосудов (Otten, et al., Eur. J. Pharmacol. 106:199-201 (1984, усиливает Т- и В-клеточные иммунные ответы (Otten, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10059-10063 (1989, вызывает дифференцировку лимфоцитов и пролиферацию тучных клеток и вызывает высвобождение растворимых биологических сигналов из тучных клеток (Matsuda, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:6508-6512 (1988); Pearce, et al., J.Physiol 372:379-393 (1986); Bischoff, et al., Blood 79:2662-2669 (1992); Horigome, et al., J. Biol Chem. 268:1488114887 (1993.NGF продуцируется рядом типов клеток, включая тучные клетки (Leon, et al., Proc. Natl. Acad. Sci.(1993, фибробласты (Lindholm, et al., Eur. J. Neurosci. 2:795-801 (1990, бронхиальные эпителиальные клетки (Kassel, et al., Clin. Exp. Allergy 31:1432-40 (2001, почечные мезангиальные клетки (Steiner, et al.,Am. J. Physiol. 261:F792-798 (1991 и трубочки скелетных мышц (Schwartz, et al., J. Photochem. Photobiol. В 66:195-200 (2002. Рецепторы NGF были обнаружены на различных типах клеток вне нервной системы. Например, TrkA был обнаружен на моноцитах, Т- и В-лимфоцитах и тучных клетках человека. Связь между повышенными уровнями NGF и различными воспалительными состояниями наблюдалась у пациентов, а также в нескольких экспериментальных моделях на животных. Эти воспалительные состояния включают системную красную волчанку (Bracci-Laudiero, et al., Neuroreport 4:563-565 (1993,рассеянный склероз (Bracci-Laudiero, et al., Neurisci. Lett. 147:9-12 (1992, псориаз (Raychaudhuri, et al.,Acta Derm. L'enereol. 78:84-86 (1998, артрит (Falcimi, et al., Ann. Rheum. Dis. 55:745-748 (1996, интерстициальный цистит (Okragly, et al., J. Urology 161:438-441 (1999 и астму (Braun, et al., Eur. J Immunol. 28:3240-3251 (1998. Согласованно повышенный уровень NGF в периферических тканях связан с гиперальгезией и воспалением, и он наблюдался при ряде форм артрита. Синовиальная оболочка пациентов, пораженных ревматоидным артритом, экспрессирует высокие уровни NGF в то время, как сообщалось, что в невоспаленной синовиальной оболочке NGF не выявляется (Aloe, et al., Arch. Rheum. 35:351-355 (1992. Аналогичные результаты наблюдались у крыс с экспериментально вызванным ревматоидным артритом (Aloe,et al., Clin. Exp. Rgeumatol. 10:203-204 (1992. Сообщалось о повышенных уровнях NGF у трансгенных мышей с артритом наряду с увеличением количества тучных клеток (Aloe, et al., Int. J. Tissue ReactionsExp. Clin. Aspects 15:139-143 (1993. Существуют 2 общие категории лекарственной терапии для лечения боли, причем каждая действует посредством различных механизмов и оказывает различные эффекты, и они обе имеют недостатки. Первая категория включает нестероидные противовоспалительные средства (НСПВС), которые используются для лечения незначительной боли, но терапевтическое применение которых ограничено нежелательными воздействиями на желудочно-кишечный тракт, такими как эрозия слизистой оболочки желудка,образование пептической язвы или воспаление 12-перстной кишки и толстой кишки и токсическое действие на почки при длительном применении. Вторая категория включает опиоидные анальгетики, такие-1 010159 как морфин, которые применяются для лечения боли от умеренной до сильной, но терапевтическое применение которых ограничено ввиду нежелательных эффектов, таких как запор, тошнота и рвота, угнетение дыхания, психические нарушения, почечная колика, устойчивость к длительному применению и риск развития зависимости. Очевидно, что существует необходимость в улучшенном лечении боли, которое обеспечивает улучшенную терапевтическую выгоду (например, сниженную силу и/или частоту боли) и/или снижает частоту возникновения нежелательных побочных эффектов, вызванных многими современными схемами лечения. Все приведенные в настоящем описании ссылки, включая патентные заявки и публикации, полностью включены в качестве ссылки. Краткое изложение сущности изобретения Настоящее изобретение основано на открытии того, что антагонисты NGF эффективны при лечении боли в сочетании с НСПВС. Такая терапия приводит к неожиданно усиленному лечению боли. Кроме того, такая терапия в целом обеспечивает возможность применения сниженной дозировки НСПВС для получения такого же количества уменьшения боли и/или других форм усиления лечения боли НСПВС. В первом аспекте настоящее изобретение характеризует способ лечения (или в других вариантах осуществления профилактики) боли, включающий введение некоторого количества антагониста фактора роста нервов и некоторого количества НСПВС так, что в сочетании они обеспечивают эффективное облегчение боли. Относительные количества и соотношения антагониста NGF и НСПВС могут варьироваться. В некоторых вариантах осуществления вводится количество антагониста NGF, достаточное для того, чтобы обеспечить возможность снижения обычной дозы НСПВС, требуемой для получения такой же степени эффекта облегчения боли. В некоторых вариантах осуществления вводится количество антагониста NGF, достаточное для того, чтобы обеспечить возможность снижения обычной дозы НСПВС,требуемой для получения такой же степени эффекта облегчения боли по меньшей мере примерно на 5%,по меньшей мере примерно на 10%, по меньшей мере примерно на 20%, по меньшей мере примерно на 30%, по меньшей мере примерно на 40%, по меньшей мере примерно на 50%, по меньшей мере примерно на 60%, по меньшей мере примерно на 70%, по меньшей мере примерно на 80%, или по меньшей мере примерно на 90%, или более. Это уменьшение может отражаться с точки зрения количества, введенного в данное введение, и/или количестве, введенном в течение данного периода времени (сниженная частота). В другом аспекте изобретение характеризует слособы усиления лечения боли НСПВС, предусматривающие введение эффективного количества НСПВС в сочетании с эффективным количеством антагониста NGF. Используемый в настоящем описании термин введение в сочетании включает одновременное введение и/или введение в различное время. Введение в сочетании также охватывает введение в виде совместной композиции (т.е. антагонист NGF и НСПВС присутствуют (комбинируются) в одной и той же композиции) и/или введение в виде отдельных композиций. Используемый в настоящем описании термин введение в сочетании охватывает любое обстоятельство, при котором НСПВС и антагонистNGF вводятся в эффективном количестве индивидууму. Как далее обсуждается в настоящем описании,понятно, что антагонист NGF и НСПВС могут вводиться с различной частотой и/или интервалами введения. Например, антитело против NGF можно вводить 1 раз/нед., тогда как НСПВС можно вводить чаще. Понятно, что антагонист NGF и НСПВС могут вводиться одним и тем же путем введения или различными путями введения, и что различные схемы введения могут изменяться в течение хода введения (введений). Введение может происходить перед началом боли. В другом аспекте изобретение предоставляет способы снижения частоты возникновения боли, облегчения боли, уменьшения боли и/или задержки развития или прогрессирования боли у индивидуума,причем указанные способы предусматривают введение эффективного количества антагониста NGF в сочетании с эффективным количеством НСПВС. Способы изобретения подходят для лечения или профилактики любой боли любой этиологии,включая боль, при которой в целом назначается применение НСПВС. В некоторых вариантах осуществления боль представляет собой послеоперационную боль. В некоторых вариантах осуществления боль представляет собой боль, связанную с ожогом. В других вариантах осуществления боль представляет собой боль, связанную с ревматоидным артритом. В других вариантах осуществления боль представляет собой боль, связанную с остеоартритом. Антагонист NGF, подходящий для применения в способах изобретения, представляет собой любое средство, которое может прямо или косвенно привести к сниженной биологической активности NGF. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает (физически взаимодействует с) NGF(тормозит и/или блокирует) нисходящую передачу сигналов от рецепторов NGF (например, ингибиторы передачи сигналов киназы или другой нисходящей передачи сигналов, вызванной NGF, в клеткемишени). В других вариантах осуществления антагонист NGF ингибирует (снижает) синтез и/или высвобождение NGF. В других вариантах осуществления антагонист NGF уменьшает экспрессию или функцию рецепторов NGF TrkA и/или р 75. В другом варианте осуществления антагонист NGF представляет-2 010159 собой антагонист NGF, который не является иммуноадгезином TrkA (т.е. является отличным от иммуноадгезина TrkA). В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF выбран из любого одного или более из следующих: антитело против NGF, антисмысловая молекула, направленная на нуклеиновую кислоту, кодирующую NGF (включая антисмысловую молекулу, направленную на нуклеиновую кислоту, кодирующую NGF), антисмысловая молекула, направленная на рецепторы NGF (такие как TrkA и/или р 75), вещество, ингибирующее NGF, структурный аналог NGF, доминантно-негативная мутация рецептора TrkA и/или р 75, которая связывает NGF, антитело против TrkA, антитело против р 75 и ингибитор киназы. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF (такой как антитело против NGF) связывает NGF (такой как hNGF) и значительно не связывается с родственными нейротропинами, такими как NT-3, NT-4/5 и/или BDNF. В другом варианте осуществления антагонист NGF представляет собой антитело против NGF. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF специфически связывается с NGF. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF распознает человеческийNGF. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF специфически связывает человеческий NGF. В еще одних вариантах осуществления антитело специфически связывает тот же эпитоп 6NGF, что и антитело, выбранное из одного или более из следующих: Mab 911, Mab 912 и Mab 938 (см.Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF гуманизировано (включая гуманизированное Mab 911, такое как антитело Е 3, описанное в настоящем описании). В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой антитело Е 3(как описано в настоящем описании). В других вариантах осуществления антитело против NGF включает один или более CDR антитела Е 3 (например, 1, 2, 3, 4, 5 или, в некоторых вариантах осуществления, все 6 CRD из Е 3). В других вариантах осуществления антитело против NGF является человеческим. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, показанную в табл. 1 (SEQ ID NO:1), и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, показанную в табл. 2 (SEQ ID NO:2). В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, показанную в табл. 1 (SEQ ID NO:1). В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF включает аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи,показанную в табл. 2 (SEQ ID NO:2). В еще одних вариантах осуществления антитело включает модифицированную константную область, такую как константная область, которая является иммунологически инертной, например, не запускает лизис, опосредованный комплементом, или не стимулирует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC). В других вариантах осуществления константная область модифицирована, как описано в Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624; заявке РСТPCT/GB99/01441; и/или в заявке на патент Великобритании 9809951.8. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывается с молекулой NGF. В еще одних вариантах осуществления антагонист NGF представляет собой антитело, которое специфически связывается с NGF. Однако антагонист NGF может альтернативно связываться с рецептором TrkA. Антагонист NGF может представлять собой моноклональное антитело против человеческого NGF (анти-hNGF),которое способно связывать hNGF и эффективно ингибировать связывание hNGF с человеческим TrkA(hTrkA). Аффинитет связывания антитела против NGF с NGF (таким как hNGF) может составлять от примерно 0,10 до примерно 0,30 нМ, от примерно 0,15 до примерно 0,75 нМ и от примерно 0,18 до примерно 0,72 нМ. В одном варианте осуществления аффинитет связывания составляет примерно 2 и 22 пкМ. В некоторых вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 10 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет менее чем примерно 10 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 0,1 или примерно 0,07 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет менее примерно 0,1 или менее примерно 0,07 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 100, примерно 50, примерно 10, примерно 1 нМ, примерно 500, примерно 100 или примерно от 50 до любого из примерно 2 пкМ, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 40 или примерно 50 пкМ. В некоторых вариантах осуществления аффинитет связывания составляет любую величину из примерно 100 нМ, примерно 50, примерно 10, примерно 1 нМ, примерно 500, примерно 100 или примерно 50 пкМ или менее примерно 50 пкМ. В некоторых вариантах осуществления аффинитет связывания составляет менее, чем любая величина из 100 нМ, примерно 50, примерно 10, примерно 1 нМ, примерно 500, примерно 100 или примерно 50 пкМ. В еще одних вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 40 или более примерно 40 пкМ. Как хорошо известно в данной области, аффинитет связывания может быть выражен в виде KD или константы диссоциации, и увеличенный аффинитет связывания соответствует сниженной KD. Аффинитет связывания мышиного моноклонального антитела 911 против NGF (Hongo et al., Hybridoma 19:215227 (2000 с человеческим NGF составляет примерно 10 нМ, а аффинитет связывания гуманизированного антитела против NGF E3 (описанного в настоящем описании) с человеческим NGF составляет примерно 0,07 нМ. В случаях, когда антагонист NGF представляет собой антитело, антитело может представлять собой-3 010159 фрагмент антитела, включая фрагмент антитела, выбранный из группы, состоящей из фрагментов Fab,Fab', F(ab')2, Fv, диател, одноцепочечных молекул антитела и мультиспецифических антител, образованных из фрагментов антитела, и одноцепочечной молкулы Fv (scFv). НСПВС может представлять собой любое нестероидное противовоспалительное соединение. НСПВС классифицируются по их способности ингибировать циклооксигеназу. Циклооксигеназа 1 и циклооксигеназа 2 представляют собой 2 основные изоформы циклооксигеназы, а самые стандартные НСПВС представляют собой смешанные ингибиторы обеих изоформ. Самые стандартные НСПВС относятся к одной из следующих пяти структурных категорий: (1) производные пропионовой кислоты, такие как ибупрофен, напроксен, напросин, диклофенак и кетопрофен; (2) производные уксусной кислоты, такие как толметин и слиндак; (3) производные фенамовой кислоты, такие как мефенамовая кислота и меклофенамовая кислота; (4) производные бифенилкарбоновой кислоты, такие как дифлунизал и флуфенизал; и (5) оксикамы, такие как пироксим, судоксикам и изоксикам. Был описан другой класс НСПВС, которые избирательно ингибируют циклооксигеназу 2. Ингибиторы Сох-2 были описаны, например в патентах США 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; 5510368; 5436265; 5409944 и 5130311, которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Определенные иллюстративные ингибиторы СОХ-2 включают целекоксиб (SC-58635), рофекоксиб, DUP-697, флозулид (CGP-28238), мелоксикам, 6 метокси-2-нафтилуксуную кислоту (6-MNA), МК-966, набуметон (пролекарство для 6-MNA), нимезулид,NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614; или их комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретение предоставляет способы, в которых аспирин /или ацетоминофен применяются в сочетании с антагонистом NGF (таким как антитело против NGF). Антагонист NGF и/или НСПВС могут вводиться индивидууму любым подходящим путем. Например, их можно вводить вместе или отдельно и/или одновременно, и/или последовательно, перорально,внутривенно, сублингвально, подкожно, внутриартериально, ректально, в спинной мозг, интраторакально, внутрибрюшинно, в желудочки головного мозга, сублингвально, трансдермально или путем ингаляции. Введение может быть системным, т.е. внутривенным или локализованным. Во втором аспекте настоящее изобретение характеризует композиции, включающие антагонист фактора роста нервов и НСПВС. Антагонист фактора роста нервов и НСПВС могут присутствовать вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами, или могут присутствовать в отдельных композициях. В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет синергическую композицию антагониста NGF и НСПВС. В третьем аспекте настоящее изобретение характеризует набор для применения в любом из способов, раскрытых в настоящем описании, причем указанный набор предусматривает антагонист NGF и НСПВС. Набор может, кроме того, включать инструкции для любого из описанных в настоящем описании способов. Инструкции могут включать введение антагониста NGF (такого как антитело против NGF) в сочетании с НСПВС (т.е. одновременное введение и/или введение в различное время). В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF и НСПВС упакованы вместе, но они могут быть или могут не быть в одном и том же контейнере. Так, в некоторых вариантах осуществления набор включает антагонист NGF и НСПВС, присутствующие в одном и том же контейнере, и инструкции по применению в любом из описанных в настоящем описании способов. В других вариантах осуществления набор включает антагонист NGF и НСПВС, присутствующие в отдельных контейнерах. В других вариантах осуществления изобретение предоставляет способ лечения боли у индивидуума, предусматривающий введение индивидууму эффективного количества антитела против фактора роста нервов (NGF) и НСПВС. В других вариантах осуществления НСПВС выбран из группы, состоящей из ибупрофена, напроксена, напросина, диклофенака, кетопрофена, толметина, слиндака, мефенамовой кислоты, меклофенамовой кислоты, дифлунизала, флуфенизала, пироксима, судоксикама, изоксикама, целекоксиба, рофекоксиба, DUP-697, флозулида, мелоксикама, 6-метокси-2-нафтилуксусной кислоты, МК 966, набуметона, нимезулида, NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614. В некоторых вариантах осуществления НСПВС является ибупрофеном. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF связывает человеческий NGF. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF связывает человеческий NGF с аффинитетом связывания примерно 10 нМ или менее чем примерно 10 нМ. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой человеческое антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело представляет собой антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи, показанную в SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи,показанную в SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления боль представляет собой послеоперационную боль. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для лечения боли, включающую эффективное количество антитела против NGF и НСПВС и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет набор для лечения боли, включающий антитело против NGF, НСПВС и инструкции по введению антитела против NGF в сочетании с-4 010159 НСПВС для лечения боли. Краткое описание чертежей Фиг. 1 демонстрирует, что кумулятивная оценка боли в баллах снижена у животных, получавших лечение S[+]ибупрофеном в дозе 10 или 30 мг/кг в комбинации с антагонистом NGF (антагонистом против NGF Mab 911; см. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000. Животные были разделены на две группы (контрольная и получавшая лечение антителами). Антагонист NGF вводили за 15 часов перед операцией, внутрибрюшинно (время = -15 ч) в дозе 1 мг/кг. Операцию выполняли, как описано во время 0. Боль в покое оценивали через 24 ч после операции (0 на графике). Затем всех животных лечили ибупрофеном (300 мг/мл в 45% жидкости бета-циклодекстрина) в концентрации 10 или 30 мг/кг массы тела. Не получавших лечение антителом животных также лечили ибупрофеном в дозе 10, 30, 100 и 300 мг/кг. Ибупрофен доставляли подкожно в заднюю часть шеи. Через 1 ч после введения дозы ибупрофена оценивали боль в покое. Лечение антагонистом против NGF плюс ибупрофеном более эффективно в уменьшении боли, чем лечение или одним ибупрофеном, или одним антителом против антагониста NGF. Фиг. 2 представляет собой график, показывающий кумулятивную оценку боли в баллах у животных, получавших лечение диклофенаком в дозе 5 мг/кг, в комбинации с антагонистом NGF (антителоMab 911 против антагониста NGF; см. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000. Животные были разделены на две группы (контрольная и получавшая лечение антителами). Антагонист NGF вводили за 15 часов перед операцией, внутрибрюшинно (время = -15 ч) в дозе 1 мг/кг. Операцию выполняли, как описано во время 0. Боль в покое оценивали через 24 ч после операции (0 на графике). Затем всех животных лечили диклофенаком в дозе 5 мг/кг массы тела. Не получавших лечение антителом животных также лечили диклофенаком в дозе 5 мг/кг. Диклофенак вводили подкожно в заднюю часть шеи. Через 1 ч после введения диклофенака оценивали боль в покое. Подробное описание изобретения Заявители обнаружили, что боль можно предотвратить или лечить введением эффективного количества антагониста NGF (такого как антитело против NGF) в сочетании с НСПВС. Способы и композиции настоящего изобретения можно использовать для лечения или профилактики боли, включая любую боль, при которой в целом назначается применение НСПВС. Применением антагониста фактора роста нервов и НСПВС в сочетании, в соответствии с настоящим изобретением, теперь можно лечить боль меньшей дозой НСПВС, снижая посредством этого вероятность побочных эффектов, связанных с лечением НСПВС. В некоторых вариантах осуществления вводится количество антагониста NGF, достаточное для того, чтобы обеспечить возможность снижения обычной дозы НСПВС, требуемой для получения такой же степени эффекта облегчения боли, по меньшей мере примерно на 5%, по меньшей мере примерно на 10%, по меньшей мере примерно на 20%, по меньшей мере примерно на 30%, по меньшей мере примерно на 50%, по меньшей мере примерно на 60%, по меньшей мере примерно на 70%, по меньшей мере примерно на 90%, или более. Лечение боли НСПВС можно также усилить, как описано в настоящем описании, введением НСПВС в сочетании с антагонистом NGF. В одном аспекте изобретение предоставляет способы лечения или профилактики боли у индивидуума (такого как млекопитающее, и человека, и не человека), предусматривающие введение эффективного количества антагониста NGF в сочетании с эффективным количеством НСПВС. В другом аспекте изобретение предоставляет способы усиления лечения или профилактики NSAD боли у индивидуума,предусматривающие введение эффективного количества антагониста NGF (такого как антитело противNGF) в сочетании с эффективным количеством НСПВС. В другом аспекте изобретение предоставляет способы профилактики, облегчения и/или профилактики развития или прогрессирования боли. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF способно связывать NGF и эффективно ингибировать связывание NGF с его рецептором TrkA или р 75 in vivo, или эффективно ингибировать активацию NGF его рецептора TrkA или р 75. В некоторых вариантах осуществления аффинитет связывания антитела против NGF составляет от примерно 0,01 до примерно 1,00 нМ или от примерно 0,05 до примерно 0,25 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 1,примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 50, примерно 100 пкМ, или более. В одном варианте осуществления аффинитет связывания составляет примерно 2 и 22 пкМ. В некоторых вариантах осуществления антитело связывает по существу тот же эпитоп 6 NGF, что и антитело,выбранное из одного или более из следующих: Mab 911, Mab 912 и Mab 938 (см. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000. Антитело может также представлять собой фрагмент антитела, такой как фрагмент антитела, выбранный из одного или более из следующих фрагментов: Fab, Fab', F(ab')2, Fv, диател, одноцепочечных молекул антитела и мультиспецифических антител, образованных из фрагментов антитела, и одноцепочечной молекулы Fv (scFv). Антитело может также быть химерным, и оно может быть гуманизированным или человеческим. Антитело может также быть биспецифическим. Иллюстративные НСПВС, которые можно применять в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются, (1) производные пропионовой кислоты, такие как ибупрофен, напроксен, напросин,диклофенак и кетопрофен; (2) производные уксусной кислоты, такие как толметин и слиндак; (3) произ-5 010159 водные фенамовой кислоты, такие как мефенамовая кислота и меклофенамовая кислота; (4) производные бифенилкарбоновой кислоты, такие как дифлунизал и флуфенизал; и (5) оксикамы, такие как пироксим,судоксикам и изоксикам. Был описан другой класс НСПВС, которые избирательно ингибируют циклооксигеназу 2. Ингибиторы Сох-2 были описаны, например, в патентах США 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; 5510368; 5436265; 5409944 и 5130311, которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Определенные иллюстративные ингибиторы СОХ-2 включают целекоксиб (SC-58635), рофекоксиб, DUP-697, флозулид (CGP28238), мелоксикам, 6-метокси-2-нафтилуксусную кислоту (6-MNA), МК-966, набуметон (пролекарство для 6-MNA), нимезулид, NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614; или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления аспирин и/или ацетоминофен применяются в сочетании с антагонистом NGF (таким как антитело против NGF). Способы и композиции настоящего изобретения можно применять для лечения боли любой этиологии, включая острую и хроническую боль, любую боль с воспалительным компонентом и боль, при которой обычно назначаются НСПВС. Примеры боли включают послеоперационную боль, боль после хирургических вмешательств (включая зубную боль), мигрень, головную боль и невралгию тройничного нерва, боль, связанную с ожогом, раной или почечным камнем, боль, связанную с травмой (включая травматическое повреждение головы), нейропатическую боль, боль, связанную с мышечно-скелетными расстройствами, такими как ревматоидный артрит, остеоартрит, висцеральную боль, колит, панкреатит,гастрит, анкилозирующий спондилит, серо-негативные (неревматоидные) артропатии, не суставной ревматизм и околосуставные расстройства и боль, связанную с раком (включая приступообразную боль и боль, связанную с терминальными стадиями рака), периферическую нейропатию, постгерпетическую невралгию и боль, связанную с серповидноклеточным кризом. Примеры боли с воспалительным компонентом (в дополнение к некоторым из видов боли, описанных выше) включают ревматическую боль,боль, связанную с мукозитом, и дисменоррею. В некоторых вариантах осуществления способы и композиции настоящего изобретения используются для лечения или профилактики послеоперационной боли и/или раковой боли. В других вариантах осуществления боль представляет собой болевое показание, по поводу которого НСПВС в целом не назначаются, такую как нейропатическая боль. В других вариантах осуществления способы и композиции, описанные в настоящем описании, используются для лечения и/или профилактики боли, связанной с ожогом. В других вариантах осуществления способы и композиции, описанные в настоящем описании, используются для лечения и/или профилактики боли, связанной с ревматоидным артритом. В других вариантах осуществления способы и композиции, описанные в настоящем описании, используются для лечения и/или профилактики боли, связанной с остеоартритом. В другом аспекте изобретение предоставляет композиции и наборы для лечения боли, включающие антагонист NGF (такой как антитело против NGF) и НСПВС, подходящих для применения в любых из способов, описанных в настоящем описании. Общие методики При отсутствии других указаний в практике настоящего изобретения должны использоваться обычные методики молекулярной биологии (включая рекомбинантные методики), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые находятся в пределах возможностей специалистов в данной области. Такие методики полностью объяснены в литературе, такой как Molecular cloning: AD. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995). Определения Антитело (взаимозаменяемо используемое во множественной форме) представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углеводород, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., посредством по меньшей мере одного участка распознавания антигена, расположенного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Используемый в настоящем описании термин охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также их фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')2, Fv, одноцепочечный (ScFv), их мутанты, гибридные белки, включающие антительную часть, гуманизированные антитела, химерные антитела, диатела, ли-6 010159 нейные антитела, одноцепочеченые антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая включает сайт распознавания антигена требуемой специфичности. Антитело включает антитело любого класса, такое как IgG, IgA или IgM (или его подкласс), и антитело не должно быть из какого-либо конкретного класса. В зависимости от аминокислотной последовательности антитела константного домена его тяжелых цепей, иммуноглобулины могут быть отнесены к различным классам. Существует 5 основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и несколько из них могут быть, кроме того, разделены на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются, соответственно, альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны. Моноклональное антитело относится к гомогенной популяции антител, в которой моноклональное антитело состоит из аминокислот (естественно встречающихся и неестественно встречающихся),которые участвуют в избирательном связывании антигена. Моноклональные антитела высоко специфичны, причем они направлены против одного антигенного сайта. Термин моноклональное антитело охватывает не только интактные моноклональные антитела и моноклональные антитела полной длины, но также их фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')2, Fv, одноцепочечный (ScFv), их мутанты, гибридные белки, включающие антительную часть, гуманизированные моноклональные антитела, химерные моноклональные антитела и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина,которая включает сайт распознавания антигена требуемой специфичности и способности связываться с антигеном. Нет намерения ограничиваться в отношении источника антитела или способа, которым оно получено (например, гибридомой, фаговой селекцией, рекомбинантной экспрессией, трансгенными животными и т.д.). Гуманизированные антитела относятся к молекуле, имеющей сайт связывания антигена, который по существу лишен иммуноглобулина из нечеловеческих видов, и остальную структуру иммуноглобулина молекулы, основанную на структуре и/или последовательности человеческого иммуноглобулина. Сайт связывания антигена может включать или полные вариабельные домены, слитые на константные домены, или только области, определяющие комплементарность (CDR), трансплантированные на соответствующие каркасные регионы в вариабельных доменах. Сайты связывания антигена могут быть дикого типа или модифицированы одним или более замещениями аминокислот, например, модифицированы для того, чтобы ближе напоминать человеческий иммуноглобулин. Некоторые формы гуманизированных антител сохраняют все последовательности CDR (например, гуманизированное мышиное антитело,которое содержит все 6 CDR из мышиных антител). Другие формы гуманизированных антител имеют одну или более CDR (1, 2, 3, 4, 5, 6), которые изменены относительно исходного антитела. В некоторых случаях остатки каркасной области (FR) или другие остатки человеческого иммуноглобулина, замещенные соответствующими нечеловеческими остатками. Кроме того, гуманизированные антитела могут включать остатки, которые не обнаруживаются в антителе реципиента или в антителе донора. Используемый в настоящем описании термин фактор роста нервов и NGF относится к фактору роста нервов и его вариантам (включая, например, сплайсинговые варианты и варианты белковой переработки), которые удерживают по меньшей мере часть активности NGF. Используемый в настоящем описании термин "NGF" включает все виды нативной последовательности NGF млекопитающих, включая людей, нечеловекообразных обезьян, собак, кошек, лошадей или коров. Рецептор NGF относится к полипептиду, который связан с NGF или активирован им. РецепторыNGF включают рецептор TrkA и рецептор р 75 любого вида млекопитающих, включая, но не ограничиваясь, людей, собак, кошек, лошадей, приматов или коров. Антагонист NGF относится к любой молекуле, которая блокирует, подавляет или снижает (включая значительно) биологическую активность NGF, включая нисходящие пути, опосредованные передачей сигналов NGF, такие как связывание с рецепторами и/или вызванная клеточная реакция на NGF. Термин антагонист не подразумевает какого-либо специфического механизма биологического действия, и считается, что он явно включает и охватывает все возможные фармакологические, физиологические и биохимические взаимодействия с NGF, и прямые, и косвенные, или взаимодействующие с NGF,его рецептором, или посредством другого механизма, и его последствия, которые могут быть достигнуты различными и химически разнородными композициями. Иллюстративные антагонисты NGF включают,но не ограничиваются, антитело против NGF, антисмысловую молекулу, направленную на NGF (включая антисмысловую молекулу, направленную на нуклеиновую кислоту, кодирующую NGF), соединение, ингибирующее NGF, структурный аналог NGF, доминантно-негативную мутацию рецептора TrkA, которая связывает NGF, и иммуноадгезин TrkA, антитело против р 75, антисмысловую молекулу, направленную на любой или оба из рецепторов TrkA и/или р 75 (включая, антисмысловую молекулу, направленную на нуклеиновую кислоту, кодирующую TrkA или р 75) и ингибитор киназы. Для цели настоящего изобретения следует ясно понимать, что термин антагонист охватывает все ранее идентифицированные термины и функциональные состояния и характеристики, посредством которых сам NGF, биологическая активность NGF (включая, но не ограничивая его способность опосредовать любой аспект боли) или по-7 010159 следовательности биологической активности по существу аннулируются, уменьшаются или нейтрализуются в любой значительной степени. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает(физически взаимодействует) с NGF (например, антитело), связывается с рецептором NGF (таким как рецептор TrkA или рецептор р 75) снижает (тормозит и/или блокирует) нисходящую передачу сигналов рецептора NGF, и/или ингибирует (снижает) синтез, продукцию или высвобождение NGF. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает (физически взаимодействует) с NGF (например,антитело), связывается с рецептором NGF (таким как рецептор TrkA или рецептор р 75) и/или снижает(тормозит и/или блокирует) нисходящую передачу сигналов рецептора NGF. В другом варианте осуществления антагонист NGF связывается с NGF и предотвращает димеризацию рецептора TrkA и/или автофосфорилирование TrkA. В других вариантах антагонист NGF ингибирует или снижает синтез NGF. В других вариантах осуществления антагонист NGF ингибирует или снижает синтез и/или продукцию (высвобождение). Примеры типов антагонистов NGF предоставлены в настоящем описании. Используемый в настоящем описании термин антитело против NGF относится к антителу, которое способно связываться с NGF и ингибировать биологическую активность NGF и/или нисходящий путь (пути), опосредованный передачей сигналов NGF. Иммуноадгезин TrkA относится к растворимой химерной молекуле, включающей фрагмент рецептора TrkA, например, внеклеточный домен рецептора TrkA и последовательность иммуноглобулина,которая сохраняет специфичность связывания рецептора TrkA. Биологическая активность NGF в целом относится к способности связывать рецепторы NGF и/или активировать пути передачи сигналов рецепторов NGF. Без ограничения биологическая активность включает любую одну или более из следующих: способность связывать рецепторы NGF (такие как р 75 и/или TrkA); способность содействовать димеризации и/или автофосфорилированию рецепторов TrkA; способность активировать пути передачи сигналов рецепторов NGF; способность содействовать клеточной дифференцировке, пролиферации, выживанию, росту и другим изменениям клеточной физиологии,включая (в случае нейронов, включая периферические и центральные нейроны) изменение морфологии нейронов, синаптогенез, синаптическую функцию, высвобождение нейромедиаторов и/или нейропептидов и регенерацию после повреждения и способность опосредовать боль. Термин эпитоп используется для обозначения сайтов связывания для (моноклональных или поликлональных) антител на антигенах, таких как белковые антигены. Используемый в настоящем описании термин лечение представляет собой подход для получения благоприятных или желательных клинических результатов. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются, один или более из следующих: ослабление или облегчение любого аспекта боли, включая острую, хроническую, воспалительную, нейропатическую или послеоперационную боль. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются, один или более из следующих: включая уменьшение тяжести, облегчение одного или более симптомов, связанных с болью,включая любой аспект боли (такой как укорочение длительности боли и/или уменьшение болевой чувствительности или болевого ощущения). Снижение частоты возникновения боли значит любое снижение тяжести (которые могут включать снижение необходимости и/или количества (например, воздействия) других средств и/или способов лечения, в целом используемых по поводу этих состояний, длительности и/или частоты (включая, например, задержку или увеличение времени до возникновения боли у индивидуума). Как понятно специалистам в данной области, индивидуумы могут варьироваться с точки зрения их реакции на лечение, и также, например, способ снижения частоты возникновения боли у индивидуума отражает введение антагониста NGF, описанного в настоящем описании, в сочетании с НСПВС, как описано в настоящем описании, на основании целесообразного ожидания, что такое введение может, вероятно, вызвать такое уменьшение частоты возникновения у этого конкретного индивидуума. Облегчение боли или одного или более симптомов боли означает уменьшение или смягчение одного или более симптомов боли, по сравнению с отсутствием введения антагониста NGF в сочетании с НСПВС. Облегчение также включает укорочение или уменьшение длительности симптома. Смягчение боли или одного или более симптомов боли означает уменьшение степени одного или более нежелательных клинических проявлений боли у индивидуума или популяции индивидуумов, получавших лечение антагонистом NGF в сочетании с НСПВС в соответствии с изобретением. Используемый в настоящем описании термин задержка развития боли означает отсрочку, препятствие, замедление, задержку, стабилизацию и/или отложенное прогрессирование боли. Эта задержка может быть различной длительности, в зависимости от анамнеза заболевания и/или индивидуумов, получающих лечение. Как очевидно для специалиста в данной области, достаточная или значительная задержка может в действительности охватывать профилактику в том, что у индивидуума не развивается боль. Способ, который задерживает развитие симптома, представляет собой способ, который снижает вероятность развития симптома в данной временной рамке и/или снижает степень симптомов в данной временной рамке, по сравнению с отсутствием применения способа. Такие сравнения обычно основаны на клинических исследованиях с использованием статистически значимого количества индивидуумов.-8 010159 Развитие или прогрессирование боли означает исходные проявления и/или следующее прогрессирование расстройства. Развитие боли может быть выявлено и оценено с использованием стандартных клинических методик, которые хорошо известны в данной области. Однако развитие также относится к прогрессированию, которое может быть не выявляемым. С целью данного изобретения развитие или прогрессирование относится к биологическому течению симптомов. Развитие включает возникновение, рецидив и начало. Используемый в настоящем описании термин начало или возникновение боли включает исходное начало и/или рецидив. Эффективное количество представляет собой количество, достаточное для получения благоприятных или желательных клинических результатов, включая облегчение или снижение болевого ощущения. Для целей настоящего изобретения, эффективное количество антагониста NGF (такого как антитело против NGF) и НСПВС включает количество, достаточное для лечения, облегчения, снижения интенсивности или профилактики боли (включая восприятие боли и ощущение боли) любого типа, включая острую, хроническую, воспалительную, нейропатическую или послеоперационную боль. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество НСПВС и антагониста NGF, способное модулировать порог чувствительности к внешним стимулам до уровня, сравнимого с уровнем, наблюдающимся у здоровых индивидуумов. В других вариантах осуществления этот уровень может не быть сравнимым с уровнем, наблюдающимся у здоровых индивидуумов, но снижен, по сравнению с индивидуумами, не получавшими комбинированную терапию. Эффективное количество антагониста NGF также охватывает количество антагониста NGF, достаточное для усиления лечения боли НСПВС (терапевтического эффекта),как описано в настоящем описании, или для снижения дозы НСПВС, необходимой для лечения или профилактики боли, как описано в настоящем описании. В соответствии с представлениями в данной области, эффективное количество антагониста NGF в сочетании с НСПВС может варьироваться, наряду с другими причинами, в зависимости от типа боли (и анамнеза пациента, а также других факторов, таких как тип (и/или дозировка) или используемого антагониста NGF и/или НСПВС). Эффективное количество в контексте настоящего изобретения может также представлять собой такое количества антагониста NGF и НСПВС, при котором достигается синергизм. Эффективное количество антагониста в контексте настоящего изобретения в целом означает количество, достаточное для того, чтобы привести к усилению терапевтического эффекта НСПВС, применяемого по подводу боли (которое, в свою очередь, значит, что снижена дозировка и/или наблюдается какой-либо другой благоприятный эффект) и/или привести к благоприятному эффекту, по сравнению с лечением одним НСПВС. Эффективное количество антагонистаNGF может также привести к синергическому эффекту, по сравнению с введением с одним антагонистомNGF или НСПВС. Индивидуум представляет собой позвоночное, предпочтительно млекопитающее, предпочтительнее человека. Млекопитающие включают, но не ограничиваются, сельскохозяйственных животных,спортивных животных, домашних животных, приматов, лошадей, коров, собак, мышей и крыс. Термин НСПВС относится к нестероидному противовоспалительному соединению. НСПВС делятся на категории в зависимости от их способности ингибировать циклооксигеназу. Циклооксигеназа 1 и циклооксигеназа 2 представляют собой две основных изоформы циклооксигеназы, и большинство стандартных НСПВС представляют собой смешанные ингибиторы этих двух изоформ. Большинство стандартных НСПВС относятся к одной из следующих пяти структурных категорий: (1) производные пропионовой кислоты, такие как ибупрофен, напроксен, напросин, диклофенак и кетопрофен; (2) производные уксусной кислоты, такие как толметин и слиндак; (3) производные фенамовой кислоты, такие как мефенамовая кислота и меклофенамовая кислота; (4) производные бифенилкарбоновой кислоты, такие как дифлунизал и флуфенизал; и (5) оксикамы, такие как пироксим, судоксикам и изоксикам. Был описан другой класс НСПВС, которые избирательно ингибируют циклооксигеназу 2. Ингибиторы Сох-2 были описаны, например, в патентах США 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; 5510368; 5436265; 5409944 и 5130311, которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Определенные иллюстративные ингибиторы СОХ-2 включают целекоксиб (SC-58635), рофекоксиб, DUP-697, флозулид (CGP-28238), мелоксикам, 6 метокси-2-нафтилуксусную кислоту (6-MNA), МK-966, набуметон (пролекарство для 6-MNA), нимезулид, NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614; или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления аспирин и/или ацетоминофен применяются в сочетании с антагонистом NGF (таким как антитело против NGF). Аспирин представляет собой другой тип не стероидного противовоспалительного соединения. Используемый в настоящем описании термин в сочетании включает одновременное введение и/или введение в различное время. Введение в сочетании также охватывает введение в виде совместной композиции (т.е. антагонист NGF и НСПВС присутствуют (комбинируются) в одной и той же композиции) и/или введение в виде отдельных композиций. Используемый в настоящем описании термин введение в сочетании предназначен охватывать любое обстоятельство, при котором НСПВС и антагонистNGF вводятся в эффективном количестве индивидууму, которое может происходить одновременно и/или отдельно. Как далее обсуждается в настоящем описании, понятно, что антагонист NGF и НСПВС могут вводиться с различной частотой и/или интервалами введения. Например, антитело против NGF можно-9 010159 вводить 1 раз/нед., тогда как НСПВС можно вводить чаще. Понятно, что антагонист NGF и НСПВС могут вводиться одним и тем же путем введения или различными путями введения. Послеоперационная боль (взаимозаменяемо именуемая болью после разреза или посттравматической болью) относится к боли, возникающей или происходящей от внешней травмы, такой как порез, прокол, разрез, разрыв или рана ткани индивидуума (включая боль, которая возникает в результате хирургических процедур, инвазивных, или не инвазивных). Используемый в настоящем описании термин послеоперационная боль не включает боль, которая возникает (появляется или происходит) без внешней физической травмы. В некоторых вариантах осуществления послеоперационная боль является внутренней или внешней (включая периферическую) болью, и рана, порез, травма, разрыв или разрез могут возникнуть случайно (как при травматической ране) или умышленно (как при операционном разрезе). Используемый в настоящем описании термин боль включает восприятие боли и ощущение боли,и боль можно оценивать объективно с использованием балльных оценок боли и других способов, хорошо известных в данной области. Используемый в настоящем описании термин послеоперационная боль включает аллодинию (т.е. повышенную реакцию (т.е. восприятие боли) в ответ на обычно не болевой раздражитель) и гиперальгезию (т.е. повышенную реакцию на обычно болевой или неприятный раздражитель), которые, в свою очередь, могут быть термическими или механическими (тактильными) по природе. В некоторых вариантах осуществления боль характеризуется термической чувствительностью, механической чувствительностью и/или болью в покое. В некоторых вариантах осуществления послеоперационная боль включает механически вызванную боль или боль в покое. В других вариантах осуществления послеоперационная боль включает боль в покое. Лечение боли НСПВС усиливается, когда аспект лечения НСПВС улучшается (по сравнению с введением НСПВС без введения антагониста NGF). Например, эффективность лечения НСПВС можно увеличить в присутствии антагониста NGF, относительно эффективности НСПВС в отсутствие антагониста NGF. В качестве другого примера, лечение или профилактика боли НСПВС может быть усилена применением антагониста NGF в сочетании с НСПВС, когда это применение обеспечивает возможность лучшего облегчения боли (например, когда применяется доза НСПВС, которая не обеспечивает возможность эффективного лечения или профилактики боли). Способы изобретения В отношении всех способов, описанных в настоящем описании, ссылки на антагонисты NGF и НСПВС также включают композиции, включающие одно или несколько этих средств. Настоящее изобретение можно применять для лечения боли у индивидуумов, включающих всех млекопитающих, и человека, и не человека. В одном аспекте изобретение предоставляет способы лечения боли у индивидуума, включающие введение эффективного количества антагониста NGF (такого как антитело против NGF) в сочетании с эффективным количеством НСПВС. В некоторых вариантах осуществления вводится количество антагониста NGF, достаточное для того, чтобы обеспечить возможность снижения обычной дозы НСПВС, требуемой для получения такой же степени эффекта облегчения боли по меньшей мере примерно на 5%, по меньшей мере примерно на 10%, по меньшей мере примерно на 20%, по меньшей мере примерно на 30%,по меньшей мере примерно на 50%, по меньшей мере примерно на 60%, по меньшей мере примерно на 70%, по меньшей мере примерно на 80% или по меньшей мере примерно на 90%, или более. В другом аспекте изобретение предоставляет способы усиления лечения боли НСПВС у индивидуума, предусматривающие введение эффективного количества антагониста NGF в сочетании с эффективным количеством НСПВС. В некоторых вариантах осуществления боль включает одну или несколько из следующих: острую и/или хроническую боль, любую боль с воспалительным компонентом, послеоперационную боль (включая зубную боль), мигрень, головную боль и невралгию тройничного нерва, боль, связанную с ожогом,раной или почечным камнем, боль, связанную с травмой (включая травматическое повреждение головы),нейропатическую боль, боль, связанную с серповидноклеточным кризом, боль, связанную с дисменорреей или кишечной дисфункцией, и боль, связанную с раком (включая приступообразную боль и боль,связанную с терминальными стадиями рака). В других вариантах осуществления боль представляет собой боль, которую обычно лечат НСПВС (таким как ибупрофен). В других вариантах осуществления боль связана с ожогом.В других вариантах осуществления боль связана с ревматоидным артритом. В других вариантах осуществления боль связана с остеоартритом. В другом аспекте изобретение предоставляет способы профилактики, облегчения и/или профилактики развития или прогрессирования боли. Так, в некоторых вариантах осуществления, антагонист NGF,такой как антитело против NGF, и/или НСПВС вводятся перед болезненным событием (таким как операция). Например, антагонист NGF можно ввести за 30 мин, за 1, 5, 10, 15 ч, 24 ч или даже более, например за 1 день, несколько дней или даже 1 неделю, 2 недели, 3 недели или более перед видами активности,которые, вероятно, приведут или связаны с риском вызванной боли, такие как внешняя травма или операция. Лечение или профилактика боли оценивается с использованием способов, хорошо известных в данной области. Оценку можно выполнять на основании объективного показателя, такого как наблюдение- 10010159 поведения, такого как реакция на раздражители, выражения лица и тому подобные. Оценка может быть также основана на субъективных показателях, таких как характеристика пациентом боли с использованием различных шкал боли (см., например, Katz et al., Surg Clin North Am. (1999) 79 (2):231-52; Caraceniet al. J Pain Symtom Manage (2002) 23 (3):239-55). Диагностика и оценка боли при ревматоидном артрите хорошо установлена в данной области. Оценку можно выполнить на основании показателей, известных в данной области, таких как характеристика пациентом боли с использованием различных шкал боли (см., например, Katz et al., Surg Clin NorthAm. (1999) 79 (2):231-52; Caraceni et al. J Pain Symtom Manage (2002) 23(3):239-55). Существуют также обычно используемые шкалы измерения патологического состояния, такие как the American College ofand Rheumatology (1982) 25:1048-1053). Диагностика и оценка боли при остеоартрите хорошо установлена в данной области. Оценку можно выполнить на основании показателей, известных в данной области, таких как характеристика пациентом боли с использованием различных шкал боли (см., например, Katz et al., Surg Clin North Am. (1999) 79(2):231-52; Caraceni et al. J Pain Symtom Manage (2002) 23(3):239-55). Например, шкалу WOMAC боли при подъеме после операции (включая боль, тугоподвижность и физическую функцию) и 100 мм зрительную аналоговую шкалу (VAS) можно использовать для оценки боли и оценки реакции на лечение. Понятно, что когда антагонист NGF (такой как антитело против NGF) и НСПВС вводятся в сочетании, или в виде одной, или отдельной композиции (композиций), антагонист фактора роста нервов и НСПВС представлены в соотношении, которое согласуется с проявлением желательного эффекта. В некоторых вариантах осуществления соотношение по массе между антагонистом фактора роста нервов и НСПВС может составлять примерно 1 к 1. В некоторых вариантах осуществления соотношение может составлять от примерно 0,001 до примерно 1 и от примерно 1000 до примерно 1, от примерно 0,01 до примерно 1 и от примерно 100 до примерно 1, или от примерно 0,1 до примерно 1 и от примерно 10 до примерно 1. Предусмотрены другие соотношения. Следует понимать, что количество антагониста фактора роста нервов и НСПВС, требуемое для применения при лечении или профилактике боли, будет варьироваться не только в зависимости от выбранных конкретных соединений или композиций, но также от пути введения, природы состояния, подвергающегося лечению, и возраста и состояния пациента, и, в конечном счете, будет выбираться по усмотрению лечащего врача. Антагонисты NGF В способах изобретения используется антагонист NGF, который относится к любой молекуле, которая блокирует, подавляет или снижает (включая значительно) биологическую активность NGF, включая нисходящие пути, опосредованные передачей сигналов NGF, такие как связывание с рецепторами и/или клеточная реакция, вызванная NGF. Термин антагонист не подразумевает специфический механизм безотносительного биологического действия, и считается, что он явно включает и охватывает все возможные фармакологические, физиологические и биохимические взаимодействия с NGF и их последствия, которые могут быть достигнуты разнообразными различными и химически различающимися композициями. Иллюстративные антагонисты NGF включают, но не ограничиваются, антитело против NGF,полипептид (включая полипептид, включающий домен, связывающий NGF, полученный из антитела против NGF, например, связывающий домен, включающий области CDR, достаточные для связыванияNGF), антисмысловую молекулу, направленную на NGF (включая антисмысловую молекулу, направленную на нуклеиновую кислоту, кодирующую NGF), антисмысловую молекулу, направленную на оба рецептора TrkA и/или р 75 (включая антисмысловые молекулы, направленные на молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую TrkA или р 75), соединение, ингибирующее NGF, структурный аналог NGF, доминантно-негативную мутацию рецептора TrkA и/или р 75, которая связывает NGF, антитело противTrkA, который связывает NGF, иммуноадгезин TrkA, антитело против TrkA, антитело против р 75 и ингибитор киназы. Для цели настоящего изобретения следует четко понимать, что термин антагонист охватывает ранее идентифицированные термины, названия и функциональные состояния и характеристики, посредством которых сам NGF, биологическая активность NGF (включая, но не ограничиваясь,способность опосредовать любой аспект боли) или последствия биологической активности по существу аннулируется, уменьшается или нейтрализуется в любой значимой степени. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF (например, антитело против NGF) связывает (физически взаимодействует с)NGF, связывается с рецептором NGF (таким как рецептор TrkA и/или р 75) и/или снижает и/или блокирует) нисходящую передачу сигналов рецептора NGF. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает (физически взаимодействует с) NGF. В других вариантах осуществления антагонист NGF связывается с рецептором NGF (таким как рецептор TrkA и/или р 75). В других вариантах осуществления антагонист снижает (тормозит и/или блокирует) нисходящую передачу сигналов рецептора NGF (например, передачу сигналов ингибиторов киназы). В других вариантах осуществления антагонист ингибирует (снижает) синтез и/или высвобождение NGF. В другом варианте осуществления- 11010159 антагонист NGF представляет собой иммуноадгезин TrkA. В другом варианте осуществления антагонистNGF отличен от антитела против NGF. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает NGF (такой как hNGF) и значительно не связывается с родственными нейротропинами, такими какNT-3, NT-4/5 и/или BDNF. В некоторых вариантах осуществления антагонист связывает человеческийNGF и значительно не связывает NGF от других видов позвоночных (в некоторых вариантах осуществления млекопитающих). В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает человеческийNGF, а также один или несколько NGF от других видов позвоночных (в некоторых вариантах осуществления млекопитающих). В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывает NGF, а также по меньшей мере один другой нейротропин. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF связывается с NGF видов млекопитающих, таких как лошадь или собака, но значительно не связывается сNGF от других видов млекопитающих. Антитела против NGF В некоторых вариантах осуществления изобретения антагонист NGF включает антитело противNGF. Антитело против NGF должно проявлять любую одну или несколько из следующих характеристик:(а) связывание с NGF и ингибирование биологической активности NGF и/или нисходящего пути (путей),опосредованного функцией передачи сигналов NGF; (b) лечение или профилактика любого аспекта боли,в частности, в сочетании с НСПВС; (с) блокада или уменьшение активации рецепторов NGF (включая димеризацию и/или автофосфорилирование рецепторов trkA); (d) увеличение выведения NGF; (е) усиление лечения боли НСПВС. Антитела против NGF известны в данной области (см., например, заявки РСТWO 02096458;WO 01/78698, WO 01/64247, патенты США 5844092, 5877016 и 6153189; Hongo et al., Hybridoma,19:215-227 (2000); Cell. Molec. Biol. 13:559-568 (1993); номера доступа GenBank U39608, U39609, L17078 или L17077. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF специфически связывается с NGF. В еще одних вариантах осуществления антитело является гуманизированным (таким как описанное в настоящем описании антитело Е 3). В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой антитело Е 3 (как описано в настоящем описании). В других вариантах осуществления антитело против NGF включает один или более CDR антитела Е 3 (например, 1, 2, 3, 4, 5 или, в некоторых вариантах осуществления, все 6 CRD из Е 3). В других вариантах осуществления антитело против NGF является человеческим. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, показанную в табл. 1 (SEQ ID NO:1), и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, показанную в табл. 2 (SEQ IDNO:2). В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, показанную в табл. 1 (SEQ ID NO:1). В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF включает аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, показанную в табл. 2 (SEQ ID NO:2). В еще одних вариантах осуществления антитело включает модифицированную константную область, такую как константная область, которая является иммунологически инертной, например, не запускает лизис, опосредованный комплементом,или не стимулирует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC). В других вариантах осуществления константная область модифицирована, как описано в Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624; заявке РСТPCT/GB99/01441; и/или в заявке на патент Великобритании 9809951.8. В других вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой любое антитело, описанное в заявке на патент США под серийным 10/745775. В некоторых вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой гуманизированное мышиное моноклональное антитело против NGF, называемое антителом Е 3, которое включает константную область тяжелой цепи человеческого IgG2a, содержащую следующие мутации: от А 330 Р 331 до S330S331 (нумерация аминокислот со ссылкой на последовательность IgG2a дикого типа; см. Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624); каппа константной области человеческой легкой цепи и вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, показанные в табл. 1 и 2. Таблица 1. Вариабельная область тяжелой цепи Таблица 2. Вариабельная область легкой цепи Следующие полинуклеотиды, кодирующие вариабельную область тяжелой цепи Е 3 или легкой цепи Е 3 были депонированы в АТСС 8 января 2003 г.: Вектор Eb.911.3E представляет собой полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи, показанной в табл. 2; Вектор Eb.pur.911.3 Е представляет собой полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи, показанной в табл. 2, и Вектор Db.911.3E представляет собой полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи, показанной в табл. 1. Эти полинуклеотиды также кодируют константные домены. Существует по меньшей мере две методики для определения CDR: (1) подход, основанный на перекрестно-видовой изменчивости последовательностей (т.е. Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Insitut.es of Health, Bethesda Md; и (2) поход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов антиген-антитело (Chothia et al. (1989) Nature 342:877; Allazikani et al. (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948. Используемый в настоящем описании термин CDR может относиться к CDR, определенным любым подходом или комбинацией обоих подходов. В другом варианте осуществления антитело против NGF включает один или несколько CDR антитела Е 3 (например, 1, 2, 3, 4, 5 или в некоторых вариантах осуществления все 6 CDR из Е 3). Определение областей CDR достаточно известно в данной области. CDR могут представлять собой Kabat, Chothia или комбинацию Kabat и Chothia. Антитела, которые можно применять в настоящем изобретении, могут охватывать моноклональные антитела, поликлональные антитела, фрагменты антител (например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc и т.д.), химерные антитела, биспецифические антитела, гетероконъюгатные антитела, одноцепочечные (ScFv), их мутанты, гибридные белки, включающие антительную часть, гуманизированные антитела и любую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая включает сайт распознавания антигена требуемой специфичности, включая варианты гликозилирования антител, варианты аминокислотной последовательности антител и ковалентно модифицированные антитела. Антитела могут быть мышиными, крысиными, человеческими или любого другого происхождения (включая химерные и гуманизированные антитела). Для целей настоящего изобретения антитело взаимодействует с NGF таким образом, который ингибирует NGF и/или нисходящие пути, опосредованные функцией передачи сигналов NGF. В одном варианте осуществления антитело представляет собой человеческое антитело, которое распознает один или несколько эпитопов на человеческом NGF. В другом варианте осуществления антитело представляет собой мышиное или крысиное антитело, которое распознает один или несколько эпитопов на человеческом NGF. В другом варианте осуществления антитело распознает один или несколько эпитопов на NGF, выбранном из группы, состоящей из: грызунов, собак, кошек, лошадей и коров. В другом варианте осуществления антитело включает модифицированную константную область, такую как константная область, которая является иммунологически инертной (т.е. не запускает опосредованный комплементом лизис) или не стимулирует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC). Активность ADCC можно оценить с использованием способов, раскрытых в патенте США 5500362. В других вариантах осуществления константная область модифицирована, как описано в Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-1624; публикации РСТPCT/GB99/01441 и/или в заявке на патент Великобритании 9809951.8. Аффинитет связывания антитела против NGF с NGF (таким как hNGF) может составлять от примерно 0,01 до примерно 1 нМ, от примерно 0,05 до примерно 0,25 нМ, от примерно 0,10 до примерно 0,80 нМ, от примерно 0,15 до примерно 0,75 нМ и от примерно 0,18 до примерно 0,72 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 1, примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 40 или более чем примерно 40 пкМ. В одном варианте осуществления аффинитет связывания составляет между примерно 2 нкМ и 22 пкМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет менее примерно 100, примерно 50, примерно 10, примерно 1 нМ, примерно 500, примерно 100, примерно 50, примерно 10 пкМ. В некоторых вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 10 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет менее примерно 10 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 0,1 или примерно 0,07 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет менее примерно 0,1 или менее примерно 0,07 нМ. В других вариантах осуществления аффинитет связывания составляет любой из от примерно 100, примерно 50, примерно 10, примерно 1 нМ, примерно 500 примерно 100, примерно 50 пкМ до любого из примерно 2 пкМ, примерно 5,примерно 10, примерно 15, примерно 20 или примерно 40 пкМ. В некоторых вариантах осуществления аффинитет связывания составляет любой из примерно 100, примерно 50, примерно 10, примерно 1 нМ,- 13010159 примерно 500, примерно 100 или примерно 50 пкМ, или менее примерно 50 пкМ. В еще одних вариантах осуществления аффинитет связывания составляет примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 15,примерно 20, примерно 40 пкМ или более примерно 40 пкМ. Одним способом определения аффинитета связывания антител с NGF является измерение аффинитета монофункциональных фрагментов Fab антитела. Для получения монофункциональных фрагментовFab антитело (например, IgG) можно расщепить папаином или экспрессировать рекомбинантно. Аффинитет фрагмента Fab против NGF антитела можно определить поверхностным резонансом плазмона(устройство для определения поверхностного резонанса плазмона (SPR) BIAcore 3000, BIAcore, INC,PiscawayN-этил-N'-(3 диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Человеческий NGF можно развести в 10 мМ ацетате натрия при рН 4,0 и инъецировать поверх активированного чипа в концентрации 0,005 мг/мл. Используя вариабельное время потока по отдельным каналам чипа, можно достичь два диапазона плотности антигена: 100-200 единиц реакции(RU) для детальных кинетических исследований и 500-600 RU для скрининговых анализов. Чип можно блокировать этаноламином. Исследования регенерации показали, что смесь элюционного буфера Pierce(продукт 21004, Pierce Biotechnology IL) и 4 М NaCl (2:1) эффективно удаляет связанный Fab, одновременно сохраняя активность hNGF на чипе в течение 200 инъекций. Буфер HBS-EP (0,01 М HEPES, рН 7,4, 0,15 NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% поверхностно-активное вещество Р 20) используют в качестве рабочего буфера для анализов BIAcore. Серийные разведения (0,1-10 определенный KD) образцов очищенного Fab инъецируют в течение 1 мин в концентрации 100 мкл/мин и допускаются величины времени диссоциации до 2 ч. Концентрации белков Fab определяют ELISA и/или электрофорезом SDS-PAGE с использованием Fab известной концентрации (по данным определения аминокислотным анализом) в качестве стандарта. Скорости кинетической ассоциации (kon) и скорости диссоциации (koff) получают одновременно подгонкой данных к модели связывания Langmuir 1:1 (Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6:99-110) с использованием программы оценки BIA. Величины константы равновесной диссоциации (KD) можно рассчитать в виде koff/kon. Этот протокол подходит для использования при определении аффинитета связывания антитела с NGF любого вида, включая человеческий NGF, NGF других позвоночных (в некоторых вариантах осуществления, млекопитающих) (такой как мышиный NGF, крысиный NGF, NGF приматов), а также для использования с другими нейротропинами, такими как родственные нейротропины NT3, NT4/5 и/или BDNF. В некоторых вариантах осуществления антитело связывает человеческий NGF и значительно не связывает NGF от других видов позвоночных (в некоторых вариантах осуществления, млекопитающих). В некоторых вариантах осуществления антитело связывает человеческий NGF, а также один или несколько NGF от других видов позвоночных (в некоторых вариантах осуществления, млекопитающих,таких как грызуны). В еще одних вариантах осуществления антитело связывает NGF и не вступает в значительное перекрестное взаимодействие с другими нейротропинами (такими как родственные нейротропины NT3, NT4/5 и/или BDNF). В некоторых вариантах осуществления антитело связывает NGF, а также, по меньшей мере, один другой нейротропин. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с NGF видов млекопитающих, таких как лошадь или собака, но значительно не связывается с NGF от других видов млекопитающих. Эпитопы могут быть непрерывными или прерывистыми. В одном варианте осуществления антитело связывает по существу тот же эпитоп hNGF, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из MAb 911, MAb 912 и MAb 938, как описано в публикации Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000). В другом варианте осуществления антитело связывает по существу тот же эпитоп hNGF, что и MAb 911. В еще одном варианте осуществления антитело связывает по существу тот же эпитоп hNGF, что и MAb 909 (см.Hongo, et al., выше). Например, эпитоп может включать один или несколько из: К 32, К 34 и Е 35 в пределах вариабельной области 1 (аминокислоты 23-35) hNGF; остатки F79 и Т 81 в пределах вариабельной области 4 (аминокислоты 81-88) hNGF; остатки Н 84 и К 88 в пределах вариабельной области 4; остатокR103 между вариабельной областью 5 (аминокислоты 94-98) hNGF и С-концом (аминокислоты 111-118)hNGF; остаток E11 в пределах превариабельной области 1 (аминокислоты 10-23) hNGF; Y52 между вариабельной областью 2 (аминокислоты 40-49) hNGF и вариабельной областью 3 (аминокислоты 59-66)hNGF; остатки L112 и S113 в пределах С-конца hNGF; остатки R59 и R69 в пределах вариабельной области 3 hNGF; или остатки V18, V20 и G23 в пределах превариабельной области 1 hNGF. Кроме того,эпитоп может включать одну или несколько из вариабельной области 1, вариабельной области 3, вариабельной области 4, вариабельной области 5, N-концевой области и/или С-конца hNGF. В еще одном варианте осуществления антитело значительно снижает доступность для растворителя остатка R103 hNGF. Понятно, что хотя описанные выше эпитопы относятся к человеческому NGF, средний специалист в данной области может совместить структуры человеческого NGF с NGF других видов и идентифицировать вероятные копии этих эпитопов. В одном аспекте антитела (например, человеческие, гуманизированне, мышиные, химерные), которые могут ингибировать NGF, можно получить использованием иммуногенов, которые экспрессируют- 14010159 полную длину или частичную последовательность NGF. В другом аспекте можно использовать иммуноген, включающий клетку, которая избыточно экспрессирует NGF. Другой пример иммуногена, который можно использовать, представляет собой белок NGF, который содержит NGF полной длины или часть белка NGF. Антитела против NGF можно получить любым способом, известным в данной области. Путь и схема иммунизации животного-хозяина в целом согласуются с принятыми и обычными методиками для стимуляции и продукции антител, как далее описано в настоящем описании. Общие методики для продукции человеческих и мышиных антител известны в данной области и описаны в настоящем описании. Предусматривается, что можно манипулировать любым млекопитающим индивидуумом, включая людей или полученные у них клетки, продуцирующие антитела, для того, чтобы служить в качестве основы для продукции линии клеток гибридомы млекопитающих, включая человека. Обычно животноехозяин инокулируется внутрибрюшинно, внутримышечно, перорально, подкожно, внутриподошвенно и/или внутрикожно некоторым количеством иммуногена, включая то, как описано в настоящем описании. Гибридомы можно получить из лимфоцитов и иммортализованных клеток миеломы с использованием общей методики гибридизации соматических клеток Kohler, В. and Milstein, С. (1975) Nature 256:495-497 или в модификации Buck, D.W., et al. In Vitro, 18:377-381 (1982). При гибридизации можно использовать доступные линии миеломы, включая, но не ограничиваясь, X63-Ag8.653 и линии из SalkInstitute, Cell Distribution Center, San Diego, Calif., USA. В целом, методика включает слияние клеток миеломы и лимфоидных клеток с использованием фузогена, такого как полиэтиленгликоль, или электрическими средствами, хорошо известными специалистам в данной области. После слияния клетки отделяют от среды слияния и выращивают в избирательной ростовой среде, такой как среда гипоксантинааминоптерина-тимидина (HAT), для удаления негибридизированных родительских клеток. Для культивирования гибридом, которые секретируют моноклональные антитела, можно использовать любую из описанных в настоящем описании сред с добавкой сыворотки или без нее. В качестве другой альтернативы методике слияния клеток, можно использовать В-клетки, иммортализованные EBV (вирусом Эпштейна-Барра), для продукции моноклональных антител против NGF настоящего изобретения. При желании, гибридомы распространяются и субклонируются, и надосадочные жидкости анализируют для выявления антииммуногенной активности обычными процедурами иммуноанализа (например, радиоиммуноанализа, ферментного иммуноанализа или флюоресцентного иммуноанализа). Гибридомы, которые можно использовать в качестве источника антител, охватывают все производные, клетки потомства родительских гибридом, которые продуцируют моноклональные антитела, специфичные для NGF, или их части. Гибридомы, которые продуцируют такие антитела, можно выращивать in vitro или in vivo с использованием известных процедур. При желании, моноклональные антитела можно выделить из культуральной среды или биологических жидкостей обычными процедурами очистки иммуноглобулина, такими как осаждение сульфатом аммония, гель-электрофорез, диализ, хроматография и ультрафильтрация. Нежелательную активность в случае ее присутствия можно удалить, например, проведением получения над адсорбентами, изготовленными из иммуногена, прикрепленного к твердой фазе, и элюированием или высвобождением желательных антител из иммуногена. Иммунизация животного-хозяина человеческимNGF или фрагментом, содержащим аминокислотную последовательность-мишень, конъюгированную с белком, который является иммуногенным у видов, подлежащих иммунизации, например, гемоцианин в форме замочной скважины или блюдечка, сывороточный альбумин, бычий тиреоглобулин или ингибитор трипсина соевых бобов с использованием бифункционального или дериватизирующего средства,например, сложного малеимидобензоилового эфира сульфосукцинимида (сопряженное связывание через цистеиновые остатки), N-гидроксисукцинимида (через лизиновые остатки), глутаральдегида, янтарного ангидрида, SOCl2 или R1N=C=NR, где R и R1 представляют собой различные алкильные группы, может дать популяцию антител (например, моноклональных антител). При желании, интересующее антитело против NGF (моноклональное или поликлональное) можно секвенировать, и полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид антитела противNGF, можно затем клонировать в вектор для экспрессии или распространения. Последовательность, кодирующая интересующее антитело, может поддерживать в векторе в клетке-хозяине, и клетку-хозяина можно затем размножить и заморозить для будущего применения. В альтернативе, полинуклеотидную последовательность можно использовать для генетического манипулирования для гуманизации антитела или для улучшения аффинитета или других характеристик антитела. Например, константную область можно подвергнуть манипуляциям генной инженерии для того, чтобы она больше напоминала человеческие константные области во избежание иммунной реакции, если антитело используется в клинических испытаниях и способах лечения у людей. Может быть желательно подвергнуть генетическим манипуляциям последовательность антитела для получения большего аффинитета к NGF и больше эффективности при ингибировании NGF. Для специалиста в данной области будет очевидно, что можно произвести одно или несколько изменений полинуклеотида в антителе против NGF и все же сохранить его способность связываться с NGF.- 15010159 Существует 4 общих стадии для гуманизации моноклонального антитела. Они представляют собой:(1) определение нуклеотида и прогнозируемой аминокислотной последовательности легкого и тяжелого вариабельных доменов исходного антитела, (2) проектирование гуманизированного антитела, т.е. решение, какую каркасную область антитела использовать во время процесса гуманизации; (3) действительные методологии/методики гуманизации; и (4) трансфекция и экспрессия гуманизированного антитела(см., например, патенты США 4816567, 5807715, 5866692, 6331415, 5530101, 5693761, 5693762,5585089 и 6180370. Был описан ряд молекул гуманизированного антитела, включающих связывающий антиген сайт,полученный из нечеловеческого иммуноглобулина, включая химерные антитела, имеющие области V грызунов или модифицированные области V грызунов и их ассоциированные определяющие комплементарность области (CDR), слитые с человеческими константными доменами (см., например, Winter et al.CDR грызунов, пересаженный в человеческую опорную каркасную область (FR) перед слиянием с константным доменом соответствующего человеческого антитела (см., например, Riechmann et al. Nature 332:323-327 (1988), Verhoeyen et al. Science 239:1534-1536 (1988) и Jones et al. Nature 321:522-525 (1986. Другая ссылка описывает CDR грызунов, поддерживаемые рекомбинантно облицованные каркасные области грызунов (см., например, европейскую патентную публикацию 519596). Эти гуманизированные молекулы предназначены для минимизации нежелательной иммунологической реакции в отношении молекул античеловеческих антител грызунов, которая ограничивает длительность и эффективность терапевтических видов применения этих частей у людей-реципиентов. Например, константную область антитела можно сконструировать методами генной инженерии так, что она будет иммунологически инертной (например, не запускает лизис комплементом (см., например, PCT/GB99/01441; заявка на патент Великобритании 9809951.8). Другие способы гуманизации антител, которые можно также использовать, раскрыты Daugherty et al., Nucl. Acids. Res. 19:2471-2476 (1991) и в патентах США 6180377, 6054297, 5997867, 5866692, 6210671, 6350861, и в публикации РСТ 01/27160. Другие способы описаны в заявке на патент США под серийным 10/745775. В еще одной альтернативе полностью человеческие антитела можно получить использованием имеющихся в продаже мышей, которые были подвергнуты модификации генной инженерией для экспрессии специфических белков человеческого иммуноглобулина. Трансгенные животные, которые предназначены для продукции более желательных (например, полностью человеческих антител) или более целесообразного иммунного ответа, можно также использовать для генерирования гуманизированных или человеческих антител. Примерами такой технологии являются Xenomouse от Abgenix, Inc. (Fremont, CA) и HuMAb-Mouse и ТС Mouse от Medarex, Inc. (Princeton, NJ). Очевидно, что хотя приведенное выше обсуждение относится к гуманизированным антителам, общие обсужденные принципы применимы для получения антител для использования, например, у собак,кошек, приматов, лошадей и коров. Кроме того, очевидно, что один или несколько описанных в настоящем описании аспектов гуманизации антител могут комбинироваться, например, пересадка CDR, мутация каркаса и мутация CDR. В альтернативе, антитела можно получить рекомбинантно и экспрессировать с использованием любого способа, известного в данной области. В другой альтернативе, антитела можно изготовить рекомбинантно технологией воспроизведения фага (см., например, патенты США 5565332, 5580717,5733743, 6265150 и Winteer et al., Annu. Rev. Immunol. 12:433-455 (1994). Альтернативно, можно использовать технологию воспроизведения фага (McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990) для продукции человеческих антител и фрагментов антител in vitro из генных репертуаров вариабельного (V) домена иммуноглобулина от иммунизированных доноров. В соответствии с этой методикой, гены домена V антитела клонируются внутрь рамки или в ген или большого, или маленького белка покрытия нитевидного бактериофага, такого как М 13 или fd, и проявляются в виде функциональных фрагментов антитела на поверхности частицы фага. Ввиду того, что нитевидная частица содержит копию однонитевой ДНК генома фага, селекции, основанные на функциональных свойствах антитела, также приводят к отбору гена,кодирующего антитело, проявляющего эти свойства. Таким образом, фаг имитирует некоторые из свойств В-клетки. Воспроизведение фага можно выполнить в различных форматах (обзор см., например,в публикации Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3, 564-571(1993). Несколько источников сегментов V гена можно использовать для воспроизведения фага. Clacksonet al., Nature 352:624-628 (1991) выделили разнообразный ряд антител против оксазолона из маленькой,случайной комбинаторной библиотеки генов V, полученной из селезенок иммунизированных мышей. Можно сконструировать репертуар генов V от иммунизированных людей-доноров, и антитела к разнообразному ряду антигенов (включая аутоантигены) можно выделить, по существу следуя методикам,описанным Mark et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991) или Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993). При естественном иммунном ответе гены антитела накапливают мутации с высокой скоростью (соматическая гипермутация). Некоторые из введенных изменений придадут более высокий аффинитет, и В-клетки,- 16010159 проявляющие высокоаффинный поверхностный иммуноглобулин предпочтительно реплицируются и дифференцируются во время введения последующей разрешающей дозы антигена. Этот естественный процесс можно имитировать использованием методики, известной как перетасовка цепи (Marks, et al.,Bio/Technol. 10:779-783 (1992. В этом способе аффинитет первичных человеческих антител, полученных воспроизведением фага, можно улучшить последовательным замещением генов области V тяжелой и легкой цепи репертуарами естественно встречающихся вариантов (репертуаров) генов домена V,полученных у неиммунизирозанных доноров. Эта методика обеспечивает возможность продукции антител и фрагментов антител с аффинитетами в диапазоне пкМ-нМ. Стратегия изготовления очень больших репертуаров антител фага (также известных, как источник всех библиотек) была описана Waterhouse etal., Nucl. Acids Res. 21:2265-2266 (1993). Перетасовку гена можно также использовать для получения человеческих антител из антител грызунов, где человеческое антитело имеет аффинитеты и специфичности, аналогичные исходному антителу грызунов. В соответствии с этим способом, который также именуется впечатыванием эпитопа, ген домена V тяжелой или легкой цепи антител грызунов, полученных методикой воспроизведения фага, замещается репертуаром генов человеческого домена V, создавая химеры грызуна-человека. Отбор на антигене приводит к выделению человеческих, вариабельных областей, способных восстановить сайт, связывающий функциональный антиген, т.е. эпитоп управляет (впечатывает) выбором партнера. Когда процесс повторяется для замещения остающегося домена V грызунов, получается человеческое антитело (см. патентную заявку РСТ WO 9306213, опубликованную 1 апреля 1993 г.). В отличие от традиционной гуманизации антител грызунов, которые не имеют каркас или остатки CDR, происходящие от грызунов. Очевидно, что хотя приведенное выше обсуждение относится к гуманизированным антителам, общие обсужденные принципы применимы к получению по требованию антител для использования, например, у собак, кошек, приматов, лошадей и коров. Антитела можно изготовить рекомбинантно сначала выделением антител и клеток, продуцирующих антитела, от животных-хозяев, получая генную последовательность, и используя генную последовательность для рекомбинантной экспрессии антитела в клетках-хозяевах (например, клетках СНО). Другой способ, который можно использовать, представляет собой экспрессиюю последовательности антител у растений (например, табака) или трансгенного молока. Были раскрыты способы рекомбинантной экспрессии антител у растений или молока (см., например, Peeters, et al. Vaccine 19:2756 (2001); Lonberg, N.and D. Huszar Int.Rev.Immunol 13:65 (1995); и Pollock, et al., J. Immunol Methods 231:147 (1999). Способы получения производных антител, например, гуманизированных, одиночноцепочечных и т.д., известны в данной области. Иммунные анализы и методики сортировки проточной цитометрией, такие как сортировка клеток,активированная флюоресценцией (FACS), можно также использовать для выделения антител, которые специфичны для NGF. Антитела могут быть связаны со многими различными носителями. Носители могут быть активными и/или инертными. Примеры хорошо известных носителей включают полипропилен, полистирол, полиэтилен, декстран, нейлон, амилазы, стекло, естественные и модифицированные целлюлозы, полиакриламиды, агарозы и магнетит. Природа носителя может быть или растворимой, или нерастворимой для целей изобретения. Специалистам в данной области известны другие подходящие носители для связывания антител или способы установить их с использованием обычного экспериментирования. ДНК, кодирующая моноклональные антитела, легко изолируется и секвенируется с использованием обычных процедур (например, использованием олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи моноклональных антител). Клетки гибридомы служат в качестве предпочтительного источника такой ДНК. После изоляции ДНК можно поместить в векторы экспрессии, которые затем трансфецируются в клетки-хозяева, такие как клеткиE.coli, обезьяньи клетки COS, клетки яичников китайского хомячка (СНО) или клетки миеломы, которые иначе не продуцируют белок иммуноглобулина для получения синтеза моноклональных антител в рекомбинантных клетках-хозяевах. ДНК может также быть модифицированной, например, замещением кодирующей последовательности на константные домены тяжелой и легкой цепи человека вместо гомологичных мышиных последовательностей (Morrison et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851 (1984) или ковалентным присоединением к иммуноглобулину, кодирующему всю или часть кодирующей последовательности, на неиммуноглобулиновом полипептиде. Таким образом, получаются химерные или гибридные антитела, которые имеют специфичность связывания описанного в настоящем оплсании моноклонального антитела против NGF. ДНК, кодирующую антагонистическое антитело против NGF (такое как гуманизированное антагонистическое антитело против человеческого NGF), можно использовать для доставки и экспрессии антагонистического антитела против человеческого NGF желательной клеткой,как описано в настоящем описании. Методики доставки ДНК далее описаны в настоящем описании. Антитела против NGF можно характеризовать с использованием способов, хорошо известных в данной области. Например, один способ представляет собой идентификацию эпитопа, с которым оно связывается, называемый картирование эпитопа. Существует много способов, известных в данной области, для картирования и характеристики локализации эпитопов на белках, включая растворение структуры кристалла комплекса антитело-антиген, конкурентные анализы, анализы экспрессии генных фраг- 17010159 ментов и анализы на основе синтетических пептидов, как описано, например, в 11 главе Harlow and Lane,Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York,1999. В дополнительном примере картирование эпитопа можно использовать для определения последовательности, с которой связывается атитело против NGF. Картирование эпитопа имеется в продаже из многих источников, например, Pepscan Systems (Edethertweg 15, 8219 РН Lelystad, The Netherlands). Эпитоп может представлять собой линейный эпитоп, т.е. содержащийся в одном фрагменте секвенирования аминокислот, или конформационный эпитоп, образованный трехмерным взаимодействием аминокислот,которые необязательно могут содержаться в одном фрагменте секвенирования. Пептиды различной длины (например, по меньшей мере, длиной 4-6 аминокислот) можно выделить или синтезировать (например, рекомбинантно) и использовать для анализов связывания с антителом против NGF. В другом примере эпитоп, с которым связывается антитело против NGF, можно определить при систематическом скрининге использованием перекрывающих пептидов, полученных из последовательности NGF, и определением связывания антителом против NGF. В соответствии с анализами экспрессии генных фрагментов, открытая рамка считывания, кодирующая NGF, фрагментирована или случайно, или специфическими генетическими конструкциями, и определяется реактивность экспрессированных фрагментов NGF с подлежащим тестированию антителом. Генные фрагменты могут, например, продуцироваться PCR (полимеразной реакцией синтеза цепи), а затем транскрибироваться и транслироваться в белок in vitro в присутствии радиоактивных аминокислот. Затем определяется связывание антитела с радиоактивно меченными фрагментами NGF иммунопреципитацией и гель-электрофорезом. Определенные эпитопы можно также идентифицировать использованием больших библиотек случайных пептидных последовательностей, проявляемых на поверхности частиц фага (библиотек фагов). Альтернативно, определенную библиотеку перекрывающих фрагментов пептидов можно тестировать на связывание с испытуемым антителом в простых анализах связывания. В дополнительном примере мутагенез домена, связывающего антиген, эксперименты обмена доменов и сканирующий мутагенез аланина можно выполнить для идентификации требуемых остатков, достаточных и/или необходимых для связывания эпитопа. Например,эксперименты обмена доменов можно выполнить с использованием мутантного NGF, в котором различные фрагменты полипептида NGF были замещены (обменены) последовательностями из близко родственного, но антигенно отличного белка (такого как другой член семейства белков нейротропинов). Оценкой связывания антитела с мутантным NGF можно оценить значение определенного фрагментаNGF для связывания антитела. Еще одним способом, который можно использовать для характеристики антитела против NGF, является использование конкурентных анализов с другими антителами, которые, как известно, связываются с тем же антигеном, т.е. различными фрагментами на NGF, для определения того, связывается ли антитело против NGF с тем же эпитопом, что и другие антитела. Конкурентные анализы хорошо известны специалистам в данной области. Примеры антител, которые можно использовать в конкурентных анализах для настоящего изобретения, включают Mab 911, 912, 938, как описано в публикации Hongo, et al.,Hybridoma 19:215-227 (2000). Другие антагонисты NGF Можно использовать антагонисты NGF, отличные от антител против NGF. В некоторых вариантах осуществления изобретения антагонист NGF включает по меньшей мере одну антисмысловую молекулу,способную блокировать или уменьшать экспрессию функционального NGF, или функционального рецептора trkA и/или р 75. Нуклеотидные последовательности NGF, trkA и р 75 известны и легко доступны из общедоступных баз данных (см., например, Borsani et al., Nuc. Acids Res. 1990, 18, 4020; AccessionNumber NM 002506; Ullrich et al., Nature 303:821-825 (1983). Общеизвестно получение молекул антисмыслового олигонуклеотида, которые специфически связывают мРНК NGF, trkA или р 75 без перекрестного взаимодействия с другими полинуклеотидами. Иллюстративные сайты нацеливания включают, но не ограничиваются, кодон инициации, регуляторные области 5', кодирующую последовательность и нетранслированную область 3'. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды имеют длину примерно от 10 до 100 нуклеотидов, имеют длину примерно от 15 до 50 нуклеотидов, имеют длину примерно от 18 до 25 нуклеотидов, или более. Олигонуклеотиды могут включать модификации каркаса, такие как, например, фосфортиоатные связи, и модификации 2'-О сахаров, хорошо известные в данной области (см., например, Agrawal and Zhao (1998), AntisenseNucleic Acid Drug Development 8, 135-139. Иллюстративные антисмысловые молекулы включают антисмысловые молекулы NGF, описанные в патентной публикации США 20010046959; см. также http://www.rna-tec.com/repair.htm. Альтернативно, экспрессия и/или высвобождение NGF можно уменьшить с использованием оглушения гена, морфолиноолигонуклеотидов, РНКи или рибосом, способов, которые хорошо известны в данной области. См., например, Rossi, J.J. et al., eds., "Intracellular Ribozyme Applications: Principles andProtocols," Horizon Scientific Press (Duarte, CA, 1999); US 6506559; WO 02/244321; WO 01/192513; WO 01/29058. В других вариантах осуществления антагонист NGF включает по меньшей мере одно соединение,ингибирующее NGF. Используемый в настоящем описании термин соединение, ингибирующее NGF,относится к соединению, отличному от антитела против NGF, которое прямо или косвенно снижает, ин- 18010159 гибирует, нейтрализует или устраняет биологическую активность NGF. Соединение, ингибирующееNGF, должно проявлять любую одну или несколько из следующих характеристик: (а) связывание с NGF и ингибирование биологической активности и/или нисходящего пути (путей), опосредованного функцией передачи сигналов NGF; (b) лечение или профилактика любого аспекта боли, в частности, в сочетании с НСПВС; (с) блокирование или уменьшение активации рецепторов NGF (включая димеризацию и/или автофосфорилирование рецепторов trkA); (d) увеличение выведения NGF; (е) ингибирование (снижение) синтеза, продукции или высвобождения NGF; (f) усиление лечения боли НСПВС. Иллюстративные соединения, ингибирующие NGF, включают мелкомолекулярные ингибиторы NGF, описанные в патентной публикации США 20010046959; соединения, которые ингибируют связывание NGF с р 75, как описано в публикации РСТWO 00/69829; соединения, которые ингибируют связывание NGF с TrkA/p75, как описано в публикации РСТWO 98/17278. Дополнительные примеры соединений, ингибирующихNGF, включают соединения, описанные в публикациях РСТW0 02/17914, WO 02/20479, в патентах США 5342942, 6127401 и 6359130. Другие иллюстративные соединения, ингибирующие NGF, представляют собой соединения, которые являются конкурентными ингибиторами NGF (см. патент США 6291247). Кроме того, специалист в данной области может получить другие мелкомолекулярные соединения, ингибирующие NGF. В некоторых вариантах осуществления соединение, ингибирующее NGF, связывает NGF. Иллюстративные сайты нацеливания (связывания) включают, но не ограничиваются, часть NGF, которая связывается с рецептором TrkA и/или рецептором р 75, и те части NGF, которые прилегают к связывающей рецепторы области и которые частично ответственны за правильную трехмерную форму части, связывающей рецепторы. В другом варианте осуществления соединение, ингибирующее NGF, связывается с рецепторами NGF (такими как TrkA и/или р 75) и ингибирует биологическую активность NGF. Иллюстративные сайты нацеливания включают те части TrkA и/или р 75, которые связываются с NGF. В варианте осуществления, включающем маленькую молекулу, маленькая молекула может иметь молекулярную массу примерно любой величины от 100 до 20000 дальтон, от 500 до 15000 дальтон или от 1000 до 10000 дальтон. Библиотеки маленьких молекул имеются в продаже. Маленькие молекулы можно вводить с использованием любых средств, известных в данной области, включая ингаляцию, введение внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, подкожно, подоболочечно, в желудочки головного мозга, перорально, энтерально, парентерально, интраназально или дермально. В некоторых вариантах осуществления, когда антагонист NGF представляет собой маленькую молекулу, он вводится в количестве от 0,1 до 300 мг/кг массы пациента, разделенном на 1-3 или более доз. Для взрослого пациента с нормальной массой тела можно вводить дозы в диапазоне от 1 мг до 5 г на 1 дозу. В других вариантах осуществления антагонист NGF включает по меньшей мере один структурный аналог NGF. Структурные аналоги NGF в настоящем изобретении относятся к соединениям, которые имеют одинаковую трехмерную структуру в виде части структуры NGF и которые связываются с рецептором NGF в физиологических условиях in vitro или in vivo. В одном варианте осуществления структурный аналог NGF связывается с рецептором TrkA и/или р 75. Иллюстративные структурные аналоги NGF включают, но не ограничиваются, бициклические пептиды, описанные в публикации РСТWO 97/15593; бициклические пептиды, описанные в патенте США 6291246; циклические соединения,описанные в патенте США 6017878, и пептиды, полученные из NGF, описанные в публикации РСТWO89/09225. Подходящие структурные аналоги NGF могут также конструироваться и синтезироваться посредством молекулярного моделирования связывания рецепторов NGF, например, способом, описанным в публикации РСТWO 98/06048. Структурные аналоги NGF могут представлять собой мнономеры или димеры/олигомеры в любой желательной комбинации их или других структур для получения улучшенных аффинитетов и биологических эффектов. В других вариантах осуществления изобретение предоставляет антагонист NGF, включающий по меньшей мере один доминантно-негативный мутант рецептора TrkA и/или рецептора р 75. Специалист в данной области может получить доминантно-негативные мутанты, например, рецептора TrkA, так что рецептор будет связывать NGF, и, таким образом, действовать в качестве слива для захвата NGF. Однако доминантно-негативные мутанты не будут иметь нормальной биологической активности рецептораet al., Cell 1990, 61, 647; Valenzuela et al., Neuron 1993, 10, 963; Tsoulfas et al., Neuron 1993, 10, 975; и Lamballe et al., EMBO J. 1993, 12, 3083, каждая из которых полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. Доминантно-негативные мутанты можно вводить в белковой форме или в форме вектора экспрессии, так что доминантно-негативный мутант (например, мутантный рецептор TrkA) экспрессирован in vivo. Белок или вектор экспрессии можно вводить с использованием любого средства, известного в данной области, такого как введение внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, подкожно, подоболочечно, в желудочки головного мозга, перорально, энтерально, парентерально, интраназально, дермально или путем ингаляции. Например, введение вектора экспрессии включает локальное или системное введение, включая инъекцию, пероральное введение, введение в виде частиц с использованием инъ- 19010159 екционного пистолета или катетера и местное введение. В других вариантах осуществления белок или вектор экспрессии вводится прямо в симпатический или сенсорный ствол или ганглий. Специалист в данной области знаком с введением векторов экспрессии для получения экспрессии экзогенного белка invivo (см., например, патенты США 6436908; 6413942; 6376471). Можно также использовать нацеленную доставку терапевтических композиций, содержащих антисмысловой полинуклеотид, вектор экспрессии или субгеномные полинуклеотиды. Опосредованные рецепторами методики доставки ДНК описаны, например, в публикациях Findeis et al., Trends Biotechmol(1993) 11:202; Chiou et al. Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer (J.A. Wolff,ed.) (1994); Wu et al., J. Biol Chem. 1988) 263:621; Wu et al., J. Biol. Chem. (1994) 269:542; Zenke et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) (1990) 87:3655; Wu et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:338. Терапевтические композиции, содержащие полинуклеотид, вводятся в диапазоне от примерно 100 нг до примерно 200 мг (или более) ДНК для локального введения в протоколе генной терапии. В некоторых вариантах осуществления в ходе протокола генной терапии можно также использовать диапазоны концентрации менее примерно 500 нг, от примерно 500 нг до примерно 50 нг, от примерно 1 мкг до примерно 2 мг, от примерно 5 мкг до примерно 500 мкг и от примерно 20 мкг до примерно 100 мкг или более ДНК. Терапевтические полинуклеотиды и полипептиды настоящего изобретения можно доставить с использованием носителей генной доставки. Носители генной доставки могут быть вирусного или невирусного происхождения (см. в целом Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51; Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5:845; Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1:185; и Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148). Экспрессию таких кодирующих последовательностей можно вызвать с использованием эндогенных промотеров и/или усилителей млекопитающих или гетерологичных промотеров и/или усилителей. Экспрессия кодирующей последовательности может быть или констутивной, или регулируемой. Векторы на вирусной основе для доставки желательного полинуклеотида и экспрессии в желательной клетке хорошо известны в данной области. Иллюстративные векторы на вирусной основе включают,но не ограничиваются, рекомбинантные ретровирусы (см., например, публикации РСТWO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; патенты США 5219740, 4777127; патент Великобритании 2200651 и патент Испании 0345242), векторы на основе альфа-вируса (например, векторы на основе вируса Синдбис, вируса леса Семлики (АТСС VR67; ATCC VR-1247), вируса реки Росс (АТСС VR-373; ATCC VR-1246) и вируса венесуэльского лошадиного энцефалита (АТСС VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR-1249; АТСС VR-532), и аденоассоциированного вируса (AAV) (см., например, публикации РСТWO 04/12649, WO 93/03769, WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 и WO 95/00655). Можно также использовать введение ДНК, связанной с убитым аденовирусом, как описано в публикации Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147. Можно также использовать невирусные носители доставки, включая, но не ограничиваясь, поликатионную, конденсированную ДНК, соединенную с одним убитым аденовирусом (см., например, Curiel,Hum. Gene Ther. (1992) 3:147); ДНК, соединенную с лигандом (см., например, Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264:16985); клетки-носители доставки эукариотических клеток (см., например, патент США 5814482; публикации РСТWO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763; и WO 97/42338) и нейтрализацию нуклеинового заряда или слияние с клеточными мембранами. Можно также использовать депротеинизированную ДНК. Иллюстративные способы введения депротеинизированной ДНК описаны в публикации РСТWO 90/11092 и в патенте США 5580859. Липосомы, которые могут действовать в качестве носителей генной доставки, описаны в патенте США 5422120; публикациях РСТWO 95/13796;WO 94/23697; WO 91/14445 и патенте Испании 0524968. Дополнительные подходы описаны в публикации Philip, Mol. Cell. Biol. (1994) 14:2411 и в публикации Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:1581. Также очевидно, что вектор экспрессии можно использовать для направления экспрессии любого из антагонистов NGF на основе белка, описанных в настоящем описании (например, антитело против NGF,иммуноадгезин TrkA и т.д.). Например, полинуклеотид, кодирующий антагонистическое антитело против NGF, можно также использовать для доставки и экспрессии антагонистического антитела противNGF в желательной клетке. Очевидно, что вектор экспрессии можно использовать для направления экспрессии антагонистического антитела против NGF. Вектор экспрессии можно вводить внутрибрюшинно,внутривенно, внутримышечно, подкожно, подоболочечно, в желудочки головного мозга, перорально,энтерально, парентерально, интраназально, дермально или путем ингаляции. Например, введение векторов экспрессии включает локальное или системное введение и местное введение. Как далее обсуждается в настоящем описании, специалист в данной области знаком с введением векторов экспрессии для получения экспрессии экзогенного белка in vivo (см., например, патенты США 6436908; 6413942 и 6376471. В данной области известны другие фрагменты рецептора TrkA, которые способны блокироватьNGF (от частичной до полной блокады) и/или биологическую активность NGF. В другом варианте осуществления антагонист NGF включает по меньшей мере один иммуноадгезинTrkA. Используемые в настоящем описании иммуноадгезины TrkA относятся к растворимым химерным молекулам, включающим внеклеточный домен рецептора TrkA (или его часть), и последовательности иммуноглобулина, которая сохраняет специфичность связывания (в некоторых вариантах осуществле- 20010159 ния, по существу сохраняет специфичность связывания) рецептора TrkA и способна связываться с NGF. Иммуноадгезин TrkA способен блокировать (снизить и/или подавить) биологическую активность NGF,как описано в настоящем описании. Иммуноадгезины TrkA известны в данной области, и было обнаружено, что они блокируют (снижают или подавляют) связывание NGF с рецептором TrkA (см., например, патент США 6153189). В одном варианте осуществления иммуноадгезин TrkA включает слияние аминокислотной последовательности рецептора TrkA, способной связывать NGF (или аминокислотную последовательность, которая по существу сохраняет специфичность связывания рецептора TrkA) и последовательность иммуноглобулина (или аминокислоту, которая по существу сохраняет специфичность связывания рецептора TrkA). В некоторых вариантах осуществления рецептор TrkA представляет собой последовательность человеческого рецептора TrkA, и слияние происходит с последовательностью константного домена иммуноглобулина. В других вариантах осуществления последовательность константного домена иммуноглобулина представляет собой последовательность константного домена тяжелой цепи иммуноглобулина. В других вариантах осуществления ассоциация двух слияний рецептора TrkA-тяжелой цепи иммуноглобулина(например, через ковалентное соединение дисульфидной связью (связями приводит к структуре, подобной гомодимерному иммуноглобулину. Легкая цепь иммуноглобулина может, кроме того, быть ассоциирована с одной или обеими химерами иммуноглобулина рецептора TrkA в связанный дисульфидом димер для получения гомотримерной или гомотетрамерной структуры. Примеры подходящих иммуноадгезинов TrkA включают иммуноадгезины, описанные в патенте США 6153189. В другом варианте осуществления антагонист NGF включает по меньшей мере одно антитело против TrkA, способное блокировать, подавлять, изменять и/или снижать физическое взаимодействие NGF с рецептором TrkA и/или нисходящую передачу сигналов, посредством чего биологическая активностьNGF снижается и/или блокируется. Антитела против TrkA известны в данной области. Иллюстративные антитела против TrkA включают антитела, описанные в публикациях РСТWO 97/21732, WO 00/73344, WO 02/15924 и патентной публикации США 20010046959. В другом варианте осуществления антагонист NGF включает по меньшей мере одно антитело против р 75, способное блокировать, подавлять и/или снижать физическое взаимодействие NGF с рецептором р 75 и/или нисходящую передачу сигналов, посредством чего биологическая активность NGF снижается и/или блокируется. В другом варианте осуществления антагонист NGF включает по меньшей мере один ингибитор киназы, способный ингибировать нисходящую передачу сигналов киназы, связанных с активностью рецепторов TrkA и/или р 75. Иллюстративные ингибиторы киназы представляют собой К 252 а или К 252b, которые известны в данной области и описаны в публикациях Knusel et al., J. Neurochem. 59:715-722 (1992);al., Chemical Abstracts 111:728, XP00204135, см. резюме и 12th Collective Chemical Substance Index, p. 34237, с 3 (5-7), (55-60,66-69), p. 34238, c.1 (41-44), c.2 (25-27, 32-33), p. 3423, c.3 (48-50, 52-53); патент США 6306849. Ожидается, что клиницист при поиске сможет идентифицировать ряд других категорий антагонистов NGF. Идентификация антагонистов NGF Антитела против NGF и другие антагонисты NGF можно идентифицировать или охарактеризовать с использованием способов, известных в данной области, посредством чего выявляется и/или измеряется снижение, облегчение или нейтрализация биологической активности NGF. Например, анализ активации рецепторов киназы (KIRA), описанный в патентах США 5766863 и 5891650, можно использовать для идентификации средств против NGF. Этот анализ типа ELISA подходит для качественного или количественного измерения активации киназы измерением автофосфорилирования домена киназы тирозинкиназы белка рецептора (далее именуемого "rPTK"), например, рецептора TrkA, а также для идентификации и характеристики потенциальных антагонистов выбранного rPTK, например TrkA. Первая стадия анализа включает фосфорилирование домена киназы рецептора киназы, например, рецептора TrkA, причем рецептор присутствует в клеточной мембране эукариотической клетки. Рецептор может представлять собой эндогенный рецептор или нуклеиновую кислоту, кодирующую рецептор, или конструкт рецептора может быть трансформирован в клетку. Обычно первая твердая фаза (например, лунка первой аналитической планшеты) покрывается по существу однородной популяцией таких клеток (обычно линии клеток млекопитающих) так, что клетки прилипают к твердой фазе. Часто клетки являются прикрепленными к субстрату, и, посредством этого они естественно прикрепляются к первой твердой фазе. Если используется конструкт рецептора, он обычно включает слияние рецептора киназы и сигнальный полипептид. Сигнальный полипептид распознается средством захвата, часто антителом захвата, в частиELISA анализа. Анализируемое вещество, такое как перспективное антитело против NGF или другой антагонист NGF, затем добавляется вместе с NGF в лунки, имеющие прикрепленные клетки, так что рецептор тирозинкиназы (например, рецептор TrkA) подвергается воздействию (или контактирует) с NGF и анализируемым веществом. Этот анализ обеспечивает возможность идентификацию антител (или другого антагониста NGF), которые ингибируют активацию TrkA его лигандом NGF. После контакта с NGF и анализируемым веществом прикрепленные клетки солюбилизируются с использованием буфера лизиса(который содержит в себе солюбилизирующий детергент) и осторожного перемешивания, высвобождая посредством этого клеточный лизат, который может быть подвергнут непосредственно части ELISA анализа без необходимости концентрации или осветления клеточного лизата. Полученный таким образом клеточный лизат затем готов быть подвергнутым стадии ELISA анализа. В качестве первого этапа стадии ELISA вторую твердую фазу (обычно лунку титровочной планшетыELISA) покрывают средством захвата (часто антителом захвата), которое специфически связывается с рецептором тирозинкиназы или, в случае конструкта рецептора, с сигнальным полипептидом. Покрытие второй твердой фазы проводится так, что средство захвата прикрепляется ко второй твердой фазе. Средство захвата представляет собой в целом моноклональное антитело, но, как описано в примерах в настоящем описании, могут также использоваться поликлональные антитела. Полученный клеточный лизат затем подвергается воздействию или контактирует с прикрепляющим средством захвата так, что рецептор или конструкт рецептора прикрепляется ко (или захватывается во) вторую твердую фазу. Затем проводится этап промывания с тем, чтобы удалить несвязанный клеточный лизат, оставляя захваченный рецептор или конструкт рецептора. Прикрепившийся или захваченный рецептор или конструкт рецептора затем подвергается воздействию или контактирует с антителом против фосфотирозина, которое идентифицирует фосфорилированные остатки тирозина в рецепторе тирозинкиназы. В одном варианте осуществления антитело против фосфотирозина сопряженно связано (прямо или косвенно) с ферментом, который катализирует изменение цвета нерадиоактивного цветового реактива. Соответственно, фосфорилирование рецептора можно измерить последующим изменением цвета реагента. Фермент может быть непосредственно связан с антителом против фосфотирозина, или конъюгирующая молекула (например,биотин) может быть конъюгирована с антителом против фосфотирозина, и фермент может быть в последующем связан с антителом против фосфотирозина посредством конъюгирующей молекулы. Наконец,измеряют связывание антитела против фосфотирозина с захваченным рецептором или конструктом рецептора, например, изменением цвета у цветного реагента. Антагонисты NGF можно также идентифицировать инкубацией перспективного средства с NGF и мониторингом любой одной или нескольких из следующих характеристик:(а) связывание с NGF и ингибирование биологической активности NGF и/или нисходящего пути(путей), опосредованного функцией передачи сигналов NGF;(b) блокирование или уменьшение активации рецепторов NGF;(d) ингибирование активации рецепторов NGF (включая димеризацию и/или автофосфорилирование TrkA);(e) лечение, облегчение или профилактика любого аспекта боли, в частности, в сочетании с НСПВС;(f) ингибирование (снижение) синтеза, продукции или высвобождения NGF;(g) усиление лечения боли НСПВС. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF идентифицируется инкубацией перспективного средства с NGF и мониторингом связывания и сопутствующего уменьшения или нейтрализации биологической активности NGF. Анализ связывания можно выполнить очищенным полипептидом (полипептидами) NGF или клетками, естественно экспрессирующими или трансфецированными для экспрессии полипептида (полипептидов) NGF. В одном варианте осуществления анализ связывания представляет собой анализ конкурентного связывания, где оценивается способность перспективного антитела конкурировать с известным антагонистом NGF за связывание NGF. Анализ можно выполнять в различных форматах, включая формат ELISA. В других вариантах осуществления антагонист NGF идентифицируется инкубацией перспективного средства с NGF и мониторингом сопутствующего ингибирования димеризации и/или автофосфорилирования рецептора TrkA. После первоначальной идентификации активность перспективного антагониста против NGF можно далее подтвердить и уточнить биологическими анализами, которые, как известно, тестируют нацеленные виды биологической активности. Альтернативно, биологические анализы можно использовать для прямого скрининга кандидатов. Например, NGF способствует ряду морфологически распознаваемых изменений в реагирующих клетках. Они включают, но не ограничиваются, содействие дифференцировке клеток РС 12 и усиление роста нейритов из этих клеток (Urfer et al., Biochem. 36:4775-4781 (1997); Tsoulfas et al., Neuron 10:975-990 (1993,содействие разрастанию нейритов из эксплантатов, реагирующих сенсорных и симпатических ганглиев,(Levi-Montalcini, R. and Angeletti, P. Nerve growth factor. Physiol. Rev. 48, 534-569, 1968) и содействие выживанию нейронов, зависимых от NGF, таких как нейроны эмбрионального дорсального корневого ганглия, тройничного ганглия или симпатического ганглия (например, ChunPatterson, Dev. Biol. 75:705-711, (1977); BuchmanDavies, Development 118:989-1001, (1993). Таким образом, анализ на ингибирование биологической активности NGF влечет за собой культивирование клеток, реагирующих наNGF, с NGF плюс анализируемое вещество, такое как перспективное антитело против NGF и перспективный антагонист NGF. После соответствующего времени нужно анализировать реакцию клеток (дифференцировку клеток, разрастание нейритов или выживание клеток).- 22010159 Определение способности антагониста перспективного NGF блокировать или нейтрализовать биологическую активность NGF можно также проводить мониторингом способности перспективного средства ингибировать опосредованное NGF выживание в биологическом анализе выживания эмбриональных крысиных дорсальных корневых ганглиев, как описано в публикации Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000). Способ идентификации модуляторов активности NGF описан в PCT/US2004/01609. Композиции Композиции изобретения включают эффективное количество антагониста NGF (такого как антитело против NGF) и НСПВС, как описано в различных вариантах осуществления, описанных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления композиции, кроме того, содержат фармацевтически приемлемый эксципиент. В некоторых вариантах осуществления композиция предназначена для применения в любом из способов, описанных в настоящем описании (таких как способы лечения послеоперационной боли). Примеры таких композиций, а также то, как их составлять, также описаны в предыдущем разделе и ниже. Антагонист NGF и НСПВС могут присутствовать в одной композиции или присутствовать в виде отдельных композиций. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления антагонистNGF и НСПВС присутствуют в одной и той же композиции. В других вариантах осуществления антагонист NGF и НСПВС присутствуют в отдельных композициях. В другом аспекте изобретение предоставляет синергическую композицию антагониста NGF и НСПВС. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет фармацевтические композиции,включающие антагонист NGF, для применения при лечении боли (такой как послеоперационная боль),причем указанное применение включает одновременное и/или последовательное введение НСПВС. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет фармацевтические композиции, включающие НСПВС для лечения боли, причем указанное применение включает одновременное и/или последовательное введение антагониста NGF. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет фармацевтические композиции, включающие антагонист NGF и НСПВС для отдельного, одновременного и/или последовательного применения для лечения боли. В некоторых вариантах осуществления антагонист NGF представляет собой антитело против NGF (такое как антитело Е 3, как описано в настоящем описании). В других вариантах осуществления НСПВС представляет собой ибупрофен. В еще одних вариантах осуществления антагонист NGF представляет собой антитело против NGF, и НСПВС представляет собой ибупрофен. Понятно, что композиция может включать более одного антагониста NGF. Например, композиция может включать более одного члена класса антагонистов NGF (например, смесь антител против NGF,которые распознают различные эпитопы NGF), а также члены различных классов антагонистов NGF (например, антитела против NGF и соединения, ингибирующего NGF). Другие иллюстративные композиции включают более одного антитела против NGF, которые распознают один и тот же эпитоп (эпитопы),различные виды антител против NGF, которые связываются с различными эпитопами NGF, или различные соединения, ингибирующие NGF. В других вариантах осуществления композиция включает один или несколько антагонистов NGF, выбранных из группы, состоящей из антагониста, который связывает(физически взаимодействует с) NGF (например, антитело), антагонист, который связывается с рецептором NGF (таким как рецептор TrkA или рецептор р 75), и антагонист, который снижает (тормозит и/или блокирует) нисходящую передачу сигналов рецептора NGF. Композиция, применяемая в настоящем изобретении, может, кроме того, включать фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы (Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. Е. Hoover), в форме лиофилизированных композиций или водных растворов. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и могут включать буферы,такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); полипептиды низкой молекулярной массы (менее примерно 10 остатков), белки, такие как сывороточный альбумин,желатин, или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводороды, включая глюкозу, маннозу или декстраны; хелатообразующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; образующие соль противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностноактивные вещества, такие как TWEEN , PLURONICS или полиэтиленгликоль (PEG). Фармацевтически приемлемые эксципиенты, кроме того, описаны в настоящем описании. Композиции, описанные в настоящем описании, могут содержать дополнительные соединения, которые, как известно, можно использовать для лечения боли. Антагонист NGF и НСПВС и их композиции можно также применять в сочетании с другими средствами, которые служат для усиления и/или дополнения эффективности средств.- 23010159 В других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет композиции (описанные в настоящем описании) для применения в любом из способов, описанных в настоящем описании, или в контексте применения в качестве лекарственного средства, и/или использования для изготовления лекарственного средства. Наборы Изобретение также предоставляет наборы для применения в настоящих способах. Наборы изобретения включают один или несколько контейнеров, включающих антагонист NGF (такой как антитело против NGF), НСПВС и в некоторых вариантах осуществления, кроме того, включают инструкции по применению в соответствии с любым из способов, описанных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления набор включает антитело против NGF (такое как антитело Е 3, описанное в настоящем описании). В других вариантах осуществления набор включает антитело против NGF, включающее один или несколько CDR антитела Е 3 (например, 1, 2, 3, 4, 5 или, в некоторых вариантах осуществления,все 6 CDR из Е 3). Набор может, кроме того, включать описание отбора индивидуума, подходящего для лечения, на основе идентификации того, есть ли у индивидуума боль или есть ли у индивидуума риск боли. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет наборы для применения с любым из способов, описанных в настоящем описании, причем указанный набор включает антагонист NGF. В еще одних вариантах осуществления набор включает антитело против NGF. В еще одних вариантах осуществления набор включает гуманизированное антитело против NGF (такое как антитело Е 3, описанное в настоящем описании). В еще одних вариантах осуществления инструкции включают описание введения антагониста NGF в сочетании с НСПВС для лечения, профилактики и/или облегчения любой боли(такой как послеоперационная боль, боль, связанная с ожогом, ревматоидным артритом или остеоартритом). В некоторых вариантах осуществления набор включает антагонист NGF (такой как антитело противNGF), НСПВС и инструкции по введению антагониста NGF и НСПВС одновременно и/или последовательно для эффективного лечения боли. В другом варианте осуществления набор включает антагонистNGF (такой как антитело против NGF) и инструкции по введению антагониста NGF (такого как антитело против NGF) и НСПВС в сочетании друг с другом для эффективного лечения боли. В других вариантах осуществления набор включает антагонист NGF (такой как антитело против NGF), и НСПВС (такой как ибупрофен) и инструкции по введению антагониста NGF и НСПВС в сочетании друг с другом для эффективного лечения боли. Соответственно, любые способы, описанные в настоящем описании, могут быть отражены в инструкциях. В некоторых вариантах осуществления набор включает антитело против NGF. В других вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи, показанную в табл. 1, и вариабельную область легкой цепи, показанную в табл. 2. В еще одних вариантах осуществления антитело против NGF представляет собой антитело Е 3, как описано в настоящем описании. Антагонист NGF (такой как антитело против NGF) и НСПВС могут присутствовать в отдельных контейнерах или в одном контейнере. Понятно, что набор может включать одну отдельную композицию или две или более композиций, причем одна композиция включает антагонист NGF и одна композиция включает НСПВС. Наборы данного изобретения находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает,но не ограничивается, флакончики, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, запаянные мешочкиMylar или пластиковые мешочки) и им подобные. Наборы могут необязательно предоставлять дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретационная информация. Инструкции, относящиеся к применению антагониста NGF, в целом включают информацию по дозировке, схеме введения и пути введения для предполагаемого лечения. Контейнеры могут представлять собой стандартные дозы, насыпные упаковки (например, многодозовые упаковки) или субстандартные дозы. Инструкции, поставляемые в наборах изобретения, представляют собой обычно письменные инструкции на этикетке или вкладыше упаковки (например, лист бумаги, включенный в набор), но также приемлемы инструкции, считываемые машиной (например, инструкции на магнитном или оптическом диске хранения информации). Этикетка или вкладыш упаковки указывает, что композиция применяется для лечения, облегчения и/или профилактики боли (включая послеоперационную боль). Инструкции могут быть предоставлены для осуществления любого из способов, описанных в настоящем описании. Наборы настоящего изобретения находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, но не ограничивается, флакончики, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, запаянные мешочкиMylar или пластиковые мешочки) и им подобные. Предусмотрены также упаковки для использования в комбинации со специальным устройством, таким как ингалятор, устройство для интраназального введения (например, распылитель) или инфузионное устройство, такое как мининасос. Набор может иметь стерильный канал доступа (например, контейнер может представлять собой мешочек или флакончик с раствором для внутривенного введения, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожных инъекций). Контейнер может также иметь стерильный канал доступа (например, контейнер может представ- 24010159 лять собой мешочек или флакончик с раствором для внутривенного введения, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожных инъекций). По меньшей мере одно активное средство в композиции представляет собой антагонист NGF, такой как антитело против NGF. Контейнер может, кроме того,включать второе фармацевтически активное средство. Наборы могут необязательно предоставлять дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретационная информация. Обычно набор включает контейнер и этикетку или вкладыш (вкладыши) упаковки на контейнере или связанные с ним. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет изготовленные изделия, включающие содержимое описанных выше наборов. В некоторых вариантах осуществления наборы включают антагонист NGF (такой как антитело против NGF) и/или НСПВС с информацией, указывающей применение для лечения боли (в сочетании друг с другом). Введение антагониста NGF и НСПВС и оценка лечения Антагонист NGF и НСПВС можно вводить индивидууму любым подходящим путем. Например, их можно вводить вместе или отдельно, перорально, внтуривенно, сублингвально, подкожно, внутриартериально, внтуримышечно, интраназально, ректально, интраторакально, внутрибрюшинно, в желудочки головного мозга, трансдермально или путем ингаляции. Их можно вводить перорально, например, в форме таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, вафель, жевательной резинки, леденцов на палочке, суппозиториев или им подобных, полученных процедурами, признанными в настоящей области. Для специалиста в данной области будет очевидно, что описанные в настоящем описании примеры не предназначены быть ограничивающими, но лишь иллюстрируют имеющиеся методики. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления антагонист NGF, такой как антитело противNGF, вводится индивидууму в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение, например, в виде болюса или непрерывным вливанием в течение периода времени, внутримышечным, внутрибрюшинным, в спинной мозг, подкожным, внутрисуставным, внутрисиновиальным, подоболочечным, пероральным, ингаляционным или местным путями. Имеющиеся в продаже распылители для жидких композиций, включая струйные распылители и ультразвуковые распылители, можно использовать для введения. Жидкие композиции могут распыляться непосредственно, а лиофилизированный порошок может распыляться после растворения. Альтернативно, антагонист NGF (такой как антитело против NGF) может быть введен в виде аэрозоля с использованием фторкарбоновой композиции и ингалятора отмеренной дозы, или ингаляционно в виде лиофилизированного и молотого порока. Методики сайт-специфической или нацеленной локальной доставки можно также использовать для введения. Примеры методик сайт-специфической или нацеленной локальной доставки включают различные имплантированные депонированные источники антагониста NGF и/или НСПВС, или катетеры локальной доставки, такие как инфузионные катетеры, имплантируемый катетер или игольный катетер,синтетические трансплантаты, адвентиционные обертки, шунты или другие имплантируемые устройства,сайт-специфические носители, прямую инъекцию, использование методики или устройства анальгезии,управляемой пациентом (РСА), и/или прямое нанесение (см., например, публикацию РСТWO 00/5 3211 и патент США 5981568). Для введения можно применять различные композиции средств (антагонистов NGF), таких как антитела против NGF, или их фрагменты. В некоторых вариантах осуществления средства, такие как антитела против NGF, или их фрагменты, можно вводить без добавок. В некоторых вариантах осуществления средства, включающие антитело против NGF, могут быть в различных композициях, включая композиции, включающие фармацевтически приемлемый эксципиент. Фармацевтически приемлемые эксципиенты известны в данной области и представляют собой относительно инертные вещества, которые способствуют введению фармакологически активного вещества. Например, эксципиент может придать форму или консистенцию или действовать в качестве разбавителя. Подходящие эксципиенты включают, но не ограничиваются, стабилизирующие средства, смачивающие и эмульгирующие средства, соли для изменения осмолярности, инкапсулирующие средства, буферы и усилители проницаемости кожи. Эксципиенты, а также композиции для парентеральной и непарентеральной доставки лекарственных средств изложены в руководстве Remington, et al., The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing(2000). В некоторых вариантах осуществления эти средства (антагонисты NGF) составлены в композиции для введения инъекцией (например, внутрибрюшинно, внутривенно, подкожно, внутримышечно и т.д.). Соответственно, эти средства можно комбинировать с фармацевтически приемлемыми носителями, такими как солевой раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и им подобные. Конкретная схема дозировки, т.е. доза, время введения и повторение, будут зависеть от конкретного индивидуума и медицинского анамнеза этого индивидуума. Схема введения (включая используемый антагонист (антагонисты)NGF) может варьироваться с течением времени. Антитела против NGF можно вводить с использованием любого подходящего способа, включая инъекцию (например, внутрибрюшинно, внутривенно, подкожно, внутримышечно и т.д.). Антитела против NGF можно вводить ингаляцией, как описано в настоящем описании. В целом, для введения антител против NGF исходная возможная дозировка может составлять примерно 0,2 или примерно 2 мг/кг. В не- 25010159 которых вариантах осуществления обычная суточная дозировка может находиться в диапазоне примерно от 3 до 30 мкг/кг, до 300 мкг/кг, до 3 мг/кг, до 30 мг/кг, до 100 мг/кг или более, в зависимости от упомянутых выше факторов. Для повторных введений в течение нескольких дней или больше, в зависимости от состояния, лечение продолжается до тех пор, пока не произойдет желательное подавление симптомов заболевания или до тех пор, пока не будут достигнуты терапевтические уровни, достаточные для уменьшения боли. Иллюстративная схема введения включает введение исходной дозы примерно 2 мг/кг с последующей еженедельной поддерживающей дозой примерно 1 мг/кг антитела против NGF или с последующей поддерживающей дозой примерно 1 мг/кг каждую вторую неделю. Однако можно использовать другие схемы введения, в зависимости от типа фармакокинетического распада, которого желает достичь врач. Другие схемы введения включают схему до 1 раза в день, от 1 до 4 раз в неделю, или менее часто. В некоторых вариантах осуществления соединения вводятся примерно однократно в неделю, примерно от 1 до 4 раза в месяц. Дозировки антител против NGF описаны в настоящем описании. Ход лечения легко контролируется обычными методиками и анализами. В некоторых вариантах осуществления, когда он не представляет собой антитело, антагонист NGF в соответствии с изобретением можно вводить в количестве от 0,1 до 300 мг/кг массы тела пациента, разделенной на 1-3 дозы или как раскрыто в настоящем описании. У некоторых взрослых пациентов с нормальной массой тела можно вводить дозы в диапазоне примерно от 0,3 до 5,00 мг/кг. Конкретная схема дозировки, т.е. доза, время введения и повторение, будут зависеть от конкретного индивидуума и медицинского анамнеза этого индивидуума, а также от свойств отдельных средств (таких как период полувыведения средства и другие соображения, хорошо известные в данной области). НСПВС можно вводить на уровни дозировки до обычных уоовней дозировки для таких анальгетиков. В некоторых вариантах осуществления НСПВС вводится в на сниженном уровне. Подходящие уровни дозировки будут зависеть от обезболивающего эффекта выбранного НСПВС, но обычно подходящие уровни составляют примерно от 0,001 до 25 мг/кг/день, примерно от 0,005 до 10 мг/кг/день, или примерно от 0,05 до 1 мг/кг/день, или менее. Соединение можно вводить по схеме до 6 раз в день (или более), 14 раза в день, или его можно вводить менее часто. В некоторых вариантах осуществления НСПВС вводится непрерывно или очень часто (например, как при РСА). При введении в комбинации или в виде одной, или в виде отдельной композиции (композиций), антагонист фактора роста нервов и НСПВС присутствуют в соотношении, которое согласуется с проявлением желательного эффекта. В некоторых вариантах осуществления соотношение по массе между антагонистом фактора роста нервов и НСПВС составит приблизительно 1 к 1. В некоторых вариантах осуществления это соотношение может составлять между примерно 0,001 к примерно 1 и примерно 1000 к примерно 1, примерно 0,01 к примерно 1 и 100 к примерно 1, или примерно 0,1 к примерно 1 и примерно 10 к примерно 1. Предусмотрены другие соотношения. Следует понимать, что количество антагониста фактора роста нервов и НСПВС, требуемое для применения при лечении или профилактике боли, будет варьироваться не только в зависимости от конкретных выбранных соединений или композиций, но также от пути введения, природы состояния, подвергаемого лечению, и возраста и состояния пациента, курса или стадии лечения, и в конечном итоге, оно будет определяться по усмотрению лечащего врача. Например, соответствующая дозировка антагониста NGF (такого как антитело против NGF) будет зависеть от используемого антагониста (антагонистов) NGF (или их композиций), типа и тяжести боли, которую предстоит лечить, от того, вводится ли средство в профилактических или терапевтических целях, предшествующей терапии, клинического анамнеза пациента и реакции на средство и по усмотрению лечащего врача. Обычно клиницист будет вводить антагонист NGF (такой как антитело против NGF) до тех пор,пока не будет достигнута дозировка, которая получает желательный результат. Эмпирические соображения, такие как период полувыведения, в целом будут влиять на определение дозировки. Например, антитела, которые совместимы с иммунной системой человека, такие как гуманизированные антитела или полностью человеческие антитела, можно применять для удлинения периода полувыведения антитела и для профилактики атаки антитела иммунной системой хозяина. Частоту введения можно определить и подобрать в течение курса лечения, и она в целом, но необязательно, основана на лечении и/или подавлении, и/или облегчении, и/или задержке возникновения боли. Альтернативно, могут быть целесообразны композиции антагониста NGF и/или НСПВС продолжительного непрерывного высвобождения. В данной области известны различные композиции и устройства для достижения продолжительного высвобождения. В одном варианте осуществления дозировки для антагониста NGF можно определить эмпирически у индивидуумов, которым было произведено одно или несколько введений средства, которое ингибирует активность NGF, для лечения боли. Индивидуумам вводят возрастающие дозировки средства, которое ингибирует NGF, например, антитела против NGF, в сочетании с НСПВС. Для оценки эффективности лечения можно следить за показателем боли. Введение антагониста NGF и/или НСПВС в соответствии со способом настоящего изобретения может быть непрерывным или прерывистым, в зависимости, например, от физиологического состояния реципиента. От того, является ли цель введения терапевтической или профилактической, и от других факторов, известных опытным практикам. Введение антагониста NGF может быть по существу непре- 26010159 рывным в течение заранее выбранного периода времени, или оно может производиться в виде серии доз,вводимых через промежуток времени, например, или до, во время или после развития боли; до и после; во время и после; до и во время; или до, во время и после развития боли. Например, введение может осуществляться до, во время и/или после ранения, пореза, травмы, операции и любого другого явления,которое, вероятно, вызовет развитие боли. В некоторых вариантах осуществления могут присутствовать более одного антагониста NGF, такого как антитело. Антагонисты могут быть одинаковыми или отличными друг от друга. Могут присутствовать по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5 или более различных антагонистов NGF. В целом, эти антагонисты NGF обладают дополнительной активностью, которая не оказывает их неблагоприятного эффекта друг на друга. Антагонисты NGF можно также применять в сочетании с другими средствами, которые служат для усиления и/или дополнения эффективности средств. В некоторых вариантах осуществления могут присутствовать более одного НСПВС. НСПВС могут быть одинаковыми или отличными друг от друга. Могут присутствовать по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5 или более различных НСПВС. В целом, эти НСПВС обладают дополнительной активностью, которая не оказывает их неблагоприятного эффекта друг на друга. НСПВС можно также применять в сочетании с другими средствами, которые служат для усиления и/или дополнения эффективности средства (средств). Терапевтические композиции антагониста NGF (такого как антитело) и НСПВС, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, готовят для хранения смешиванием антитела, имеющего желательную степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами (Remington, et al., The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing(2000 в форме лиофилизированных композиций или водных растворов. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы нетоксичны для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и могут включать буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; соли, такие как хлорид натрия, антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); полипептиды низкой молекулярной массы (менее примерно 10 остатков), белки, такие как сывороточный альбумин, желатин, или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводороды, включая глюкозу, маннозу или декстран; хелатообразующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза,маннит, трегалоза или сорбит; образующие соль противоионы, такие как натрий; комплексы металловTWEEN, PLURONICS или полиэтиленгликоль (PEG). Липосомы, содержащие антагонист NGF (такой как антитело) получают способами, известными в данной области, такими как описано в публикациях Epstein, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688(1985); Hwang, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4030 (1980); и патентах США 4485045 и 4544545. Липосомы с увеличенным временем циркуляции раскрыты в патенте США 5013556. Особенно полезные липосомы можно генерировать способом выпаривания в обращенной фазе липидной композицией,включающей фосфатидилхолин, холестерин и дериватизированный PEG фосфатидилэтаноламин (PEGРЕ). Липосомы подвергают экструзии через фильтры с определенным размером пор для получения липосом с желательным диаметром. Активные ингредиенты могут также заключаться в микрокапсулы, полученные, например, методиками коацервации или межповерхностной полимеризации, например, соответственно гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметацилатные) микрокапсулы, в коллоидных системах доставки лекарственных средств (например, липосомах, альбуминовых микросферах, микроэмульсиях, наночастицах и нанокапсулах) или в макроэмульсиях. Такие методики раскрыты в руководстве Remington, et al., The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000). Можно получить средства пролонгированного высвобождения. Подходящие примеры средств пролонгированного высвобождения включают полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, причем матрицы представлены в виде изделий, имеющих определенную форму, например, пленки или микрокапсулы. Примеры матриц пролонгированного высвобождения включают полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат) или поли(виниловый спирт,полилактиды (патент США 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и 7-этил-L-глутамата,неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты-гликолевой кислоты,такие как LUPRON DEPOT (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислотыгликолевой кислоты и ацетата лейпролида), ацетатизобутират сахарозы и поли-D-(-)-3-гидроксимасляная кислота. Композиции, подлежащие применению для введения in vivo, должны быть стерильными. Это легко- 27010159 осуществляется, например, фильтрацией через мембраны стерилизующей фильтрации. Терапевтические композиции антагониста NGF (такого как антитело против NGF) в целом помещаются в контейнер,имеющий канал стерильного доступа, например, мешочек с раствором для внутривенных инъекций или флакончик, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожных инъекций. Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть представлены в виде стандартных лекарственных форм, таких как таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии или суппозитории, для перорального, парентерального или ректального введения, или введения ингаляцией или инсуффляцией. Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим носителем, например, обычными таблетирующими ингредиентами, таким как кукурузный крахмал, лактоза, сахароза, сорбит, тальк, стеариновая кислота, стеарат магния, дикальцийфосфат или смолы, и другими фармацевтическим разбавителями, например, водой, для образования твердой предварительно составленной композиции, содержащей однородную смесь соединения настоящего изобретения или его нетоксичную фармацевтически приемлемую соль. При названии этих фармацевтических композиций однородными подразумевается, что активный ингредиент равномерно диспергирован по всей композиции так, что композицию можно легко подразделить на одинаково эффективные стандартные лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Эту твердую предварительно составленную композицию затем подразделяют на стандартные лекарственные формы описанного выше типа, содержащие от примерно 0,01 до примерно 0,1 мг до примерно 500 мг активного ингредиента настоящего изобретения. Таблетки или пилюли новой композиции можно покрыть или компаундировать другим образом для предоставления лекарственной формы, придающей преимущество пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может включать компонент внутренней дозировки и внешней дозировки, причем последний представлен в форме оболочки вокруг первого. Эти два компонента могут отделяться энтеросолюбильным слоем, который служит для противодействия разрушению в желудке и обеспечивает возможность внутреннему компоненту проходить интактным в 12-перстную кишку или отсрочить освобождение. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий можно использовать разнообразные материалы, причем такие материалы включают ряд полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы. Жидкие формы, в которых композиции настоящего изобретения могут быть включены для перорального введения или инъекцией, включают водные растворы, подходящим образом ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как масло семян хлопка, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и аналогичные фармацевтические носители. Подходящие диспергирующие или суспендирующие средства для водных суспензий включают синтетические и естественные смолы, такие как трагакант,акация, альгинат, декстран, карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон или желатин. Активные ингредиент могут также быть включены в имеющие высокую вязкость продукты контролируемого высвобождения, такие как ацетатизобутират сахарозы или другие. Эти композиции можно использовать или для перорального введения, или для инъекций. Инъекция может привести к образованию локального депо средства, который высвобождается локально в течение периода от 1 дня до 3 месяцев. Композиции для введения инъекцией включают композиции, содержащие антагонист NGF и НСПВС в качестве активных ингредиентов в сочетании с поверхностно-активным агентом (или смачивающим агентом, или поверхностно-активным веществом) или в форме эмульсии (в виде эмульсии воды в масле или масла в воде). Подходящие поверхностно-активные агенты включают, в частности, неионные агенты, такие как полиоксиэтиленсорбитаны (например, Tween 20, 40, 60, 80 или 85) и другие сорбитаны (например, Span 20, 40, 60, 80 или 85). Композиции с поверхностно-активным агентом могут содержать от 0,05 до 5% поверхностно-активного агента, или от 0,1 до 2,5%. Следует понимать, что при необходимости можно добавлять другие ингредиенты, например, маннит или другие фармацевтически приемлемые носители. Подходящие эмульсии можно получить с использованием имеющихся в продаже жировых эмульсий,таких как Intralipid, Liposyn, Infonutrol, Lipofundin и Lipiphysan. Активный ингредиент может быть или растворен в предварительно смешанной эмульсионной композиции, или, альтернативно,он может быть растворен в масле (например, масле соевых бобов, масле сафлора, масле семян хлопка,кунжутном масле, кукурузном масле или миндальном масле) и эмульсии, образованной после смешивания с фосфолипидом (например, яичными фосфолипидами, фосфолипидами соевых бобов или лецитином соевых бобов) и водой. Следует понимать, что можно добавить другие ингредиенты, например, глицерин или глюкозу, для доведения тоничности эмульсии. Подходящие эмульсии обычно должны содержать до 20% масла, например от 5 до 20%. Жировая эмульсия может включать капельки жира от 0,1 до 1,0 мкм, в частности, от 0,1 до 0,5 мкм, и иметь рН в диапазоне от 5,5 до 8,0. В некоторых вариантах осуществления композиции представляют собой композиции, полученные смешиванием антагониста фактора роста нервов с Intralipid или его компонентов (масла соевых бобов,- 28010159 яичных фосфолипидов, глицерина и воды). Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых, водных или органических растворителях, или их смеси и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты, как изложено выше. Композиции вводят пероральным или интраназальным респираторным путем для локального или системного эффекта. Композиции в предпочтительно стерильных фармацевтически приемлемых растворителях могут распыляться использованием газов. Распыленные растворы могут вдыхаться непосредственно из распыляющего устройства, или распыляющее устройство может быть прикреплено к лицевой маске, тенту или аппарату периодической искусственной вентлляции легких под положительным давлением. Композиции в виде раствора, суспензии или порошка можно вводить (включая перорально или интраназально) из устройств, которые доставляют композицию соответствующим образом. Эффективность лечения можно оценить способами, хорошо известными в данной области. Следующие примеры представлены для иллюстрации, а не ограничения изобретения. Примеры Пример 1. Лечение моноклональным антителом против NGF в сочетании с НСПВС по поводу послеоперационной боли Заявители использовали модель боли, которая имитирует послеоперационную боль, для оценки эффективности антитела против NGF в сочетании с НСПВС, ибупрофеном. Для каждого эксперимента 16 самцов взрослых крыс Sprague Dawley с массой тела от 200 до 220 г (Harlan; Indianapolis, IN) содержали в нормальных световых условиях в течение по меньшей мере 1 недели перед использованием при доступе без ограничений к пище и воде. После 2-часового периода акклиматизации в камерах тестирования в день операции крыс делили на две группы: одна получала антитело за 15 ч перед операцией, другая в это время получала носитель (5% декстрозу/0,45% солевой раствор по Фармакопее США). Антитело 911 против антагониста NGF (см. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000 вводили в дозе 1 мг/кг массы тела. Ибупрофен вводили в различных концентрациях в диапазоне от 10, 30, 100 до 300 мг/кг (подкожно) через 24 ч после операции всем животным. Операция была основана на процедуре, описанной Brennan, et al., Pain 64:493-501 (1996). Животных анестезировали 2% изофлюраном и воздушной смесью, которую поддерживали во время операции, через носовую воронку. Подошвенную поверхность правой задней лапы готовили тампоном с повидономйодом, производили центральный продольный разрез длиной 1 см через кожу и фасцию, начиная в 0,5 см от края пятки и продолжая к пальцам стопы. Измерения производили линейкой при стопе, удерживаемой в согнутом положении. Подошвенную мышцу поднимали с использованием пинцета с изогнутыми браншами, и в ней производили продольный разрез. Мышцу разрезали на полную глубину, между местом ее отхождения и участком прикрепления. Кровотечение останавливали во время всей операции давлением,оказываемым посредством марлевого тампона. Рану закрывали двумя матрацными швами (черная одноволоконная нить "Ethicon" 5-0). Эти шовные нити завязывали узлами 5-6 раз при первом узле, затянутом неплотно. Участок раны протирали раствором бацитрацина. Животным давали возможность восстановиться и находиться в покое в чистых клетках в течение 22 ч перед тем как начиналось поведенческое тестирование. Для каждого эксперимента животных делили на две группы (контрольную и получавшую лечение антителом). Антитело лротив NGF вводили за 15 ч перед операцией. Боль в покое оценивали через 22 ч после операции в обеих группах (исходное состояние в следующих графиках). Через 20 ч после операции всех животных затем лечили ибупрофеном в дозе 10, 30, 100 или 300 мг/кг (подкожно). Боль в покое оценивали, начиная через 1 ч после лечения ибупрофеном. Боль в покое оценивали в различное время после операции с использованием кумулятивной балльной оценки боли. Крыс помещали на пластиковую сетку (решетку: 8 мм 2) в прозрачной пластиковой клетке и давали возможность акклиматизироваться в течение 15-20 мин. Поведение оценивали по шкале от 0 до 2. Балльную оценку 0 давали, если животное опиралось на разрезанную лапу, по данным оценки,если отмечалось, что лапа бледнела или упиралась в решетку. Балльную оценку 1 давали, если животное щадило лапу при коже, лишь касающейся решетки без побледнения или углублений кожи. Балльную оценку 2 давали, если лапа удерживалась, полностью не касаясь решетки. Каждое животное наблюдали в течение 1 мин через каждые 5 мин в течение 30 мин. Сумму из 6 баллов (всего 0-12), полученную в течение 1/2 ч, использовали для оценки боли в разрезанной стопе. Результаты этих экспериментов показаны в таблице и на фиг. 1. Таблица 1. Кумулятивная балльная оценка боли у животных после лечения антителом против антагониста NGF в дозе 1 мг/кг и ибупрофеном в дозе 0, 10, 30, 100 или 300 мг/кг через 1 день после операции. Данные показаны в виде средней величины ( стандартное отклонение). Данные анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа, а затем отдельные пары анализировали с использованием коррекции Bonferroni для множественных сравнений с использованием программного обеспечения Как показано в таблице, балльная оценка боли в покое для крыс, получавших лечение Mab 911 (в дозе 1 мг/кг), была значимо ниже, чем в контроле без ибупрофена (р 0,001). Аналогичным образом,балльная оценка боли в покое при лечении Mab 911 в дозе 1 мг/кг и 10 мг/кг ибупрофена была значимо ниже, чем при лечении одним ибупрофеном в дозе 10 мг/кг (р 0,001); и балльная оценка боли в покое при лечении Mab 911 в дозе 1 мг/кг и 30 мг/кг ибупрофена была значимо ниже, чем при лечении одним ибупрофеном в дозе 30 мг/кг (р 0,05). На фиг. 1 представлена балльная оценка боли в покое, измеренная у животных при лечении антителом против NGF в дозе 1 мг/кг и без него и при лечении различными дозами ибупрофена и без него. Предоперационное лечение антителом против NGF и ибупрофеном более эффективно в уменьшении боли в покое, чем один ибупрофен или лечение одним антителом. Считается,что лечение Mab 911 (1 мг/кг) в комбинации с ибупрофеном в дозе 10 мг/кг, по меньшей мере, также эффективно, как один ибупрофен в дозе 300 мг/кг. Для испытания эффекта лечения моноклональным антителом 911 против NGF в сочетании с диклофенаком для лечения послеоперационной боли эксперименты проводили, как описано выше, за исключением того, что животным вводили носитель или диклофенак в дозе 5 мг/кг вместо ибупрофена. Результаты показаны на фиг. 2. Уменьшение балльной оценки боли наблюдалось для средней величины при лечении и 911 в дозе 1 мг/кг, и диклофенаком в дозе 5 мг/кг, по сравнению с лечением одним диклофенаком в дозе 5 мг/кг. Хотя представленное выше изобретение было описано с определенными деталями в качестве иллюстрации и примера в целях ясности понимания, описания и примеры не должны рассматриваться как ограничивающие диапазон изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ лечения боли у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества антитела против фактора роста нервов (NGF) и НСПВС, при котором антитело против NGF и НСПВС в сочетании обеспечивают эффективное облегчение боли. 2. Способ по п.1, в котором НСПВС выбран из группы, состоящей из ибупрофена, напроксена, напросина, диклофенака, кетопрофена, толметина, сулиндака, мефенамовой кислоты, меклофенамовой кислоты, дифлунизала, флуфенизала, пироксикама, судоксикама, изоксикама, целекоксиба, рофекоксиба,DUP-697, флозулида, мелоксикама, 6-метокси-2-нафтилуксусной кислоты, МК-966, набуметона, нимезулида, NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614. 3. Способ по п.1, в котором НСПВС представляет собой ибупрофен. 4. Способ по пп.1, 2 или 3, в котором указанное антитело связывает человеческий NGF. 5. Способ по п.4, в котором указанное антитело имеет аффинность связывания с NGF человека примерно 10 или менее чем примерно 10 нМ. 6. Способ по любому из пп.1-5, в котором указанное антитело представляет собой человеческое антитело. 7. Способ по любому из пп.1-5, в котором указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело. 8. Способ по п.7, в котором указанное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2. 9. Способ по любому из пп.1-8, в котором боль представляет собой послеоперационную боль. 10. Способ по п.1, в котором индивидуум является человеком. 11. Фармацевтическая композиция для лечения боли у индивидуума, включающая эффективное количество антитела против NGF и НСПВС и фармацевтически приемлемый носитель. 12. Фармацевтическая композиция по п.11, в которой указанное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2. 13. Фармацевтическая композиция по п.11, где индивидуум является человеком. 14. Набор для лечения боли у индивидуума, включающий антитело против NGF и НСПВС и инструкции по введению антитела против NGF в сочетании с НСПВС для лечения боли у индивидуума. 15. Набор по п.14, в котором указанное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2. 16. Набор по п.14, где индивидуум является человеком.