Иммуногенные белки вируса человеческой папилломы и способы их применения

ИММУНОГЕННЫЕ БЕЛКИ ВИРУСА ЧЕЛОВЕЧЕСКОЙ ПАПИЛЛОМЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Раскрыты усовершенствованные иммуногены против ВПЧ и молекулы нуклеиновых кислот,которые их кодируют. Описанные иммуногены включают те, которые имеются у консенсусных ВПЧ 18 E6 и Е 7. Раскрыты фармацевтическая композиция, рекомбинатные вакцины и живые ослабленные вакцины, а также способы вызова иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ДЗЕ ТРАСТИЗ ОФ ДЗЕ ЮНИВЕРСИТИ ОФ ПЕНСИЛЬВАНИЯ (US) Область техники Настоящее исследование относится к усовершенствованным вакцинам вируса человеческой папилломы (ВПЧ), усовершенствованным способам вызова иммунного ответа и профилактической и/или терапевтической иммунизации индивидуумов против ВПЧ. Уровень техники Заявлен приоритет предварительной заявки США 61/146942, поданной 23 января 2009 г., и заявки на патент США 12/691588, поданной 21 января 2010 г., полное описание которых включено в данное описание посредством ссылки. Папилломавирусы - это маленькие ДНК-вирусы, содержащие семь ранних генов и два поздних гена. Обычно ранние гены папилломавируса обозначаются как Е 1-Е 7, а поздние гены - как L1 и L2. Некоторые виды животных могут инфицироваться представителями семейства папилломавирусов. Инфекция вирусом человеческой папилломы (ВПЧ) широко распространена и может передаваться половым путем. На основании гомологичных последовательностей ДНК различают 56 или более типов ВПЧ. ВПЧ 16 и 18 типов, вызывающие эпителиальную дисплазию и другие болезни, часто связаны с повышенным риском рака, особенно in situ и инвазивных карцином шейки матки, влагалища, вульвы и анального прохода. ДНК-вакцины обладают многими концептуальными преимуществами перед более традиционными способами вакцинации, такими как живые ослабленные вирусы и рекомбинантные вакцины на основе белка. ДНК-вакцины безопасны, стабильны, легко производятся и хорошо переносились людьми при доклинических исследованиях, показавших мало доказательств плазмидной интеграции [Martin, Т., et al.,Plasmid DNA malaria vaccine: the potential for genomic integration after intramuscular injection. Hum GeneAnn N.Y. Acad. Sci., 1995, 772:p. 30-9]. Кроме того, ДНК-вакцины хорошо подходят для повторных введений благодаря тому, что эффективность вакцины не зависит от титров предсуществующих антител к вектору [Chattergoon, M., J. Boyer, and D.B. Weiner, Genetic immunization: a new era in vaccines and immunetherapeutics. FASEB J, 1997, 11(10):p. 753-63]. Однако одним из основных препятствий для клинического выбора ДНК-вакцин остается снижение платформы иммуногенности при переходе к более крупным животным [Liu, M.A. and J.B. Ulmer, Human clinical trials of plasmid DNA vaccines. Adv Genet, 2005. 55:p. 2540]. Последние технологические достижения в разработке иммуногенных ДНК-вакцин, такие как оптимизация кодонов, РНК-оптимизация и добавление лидерных последовательностей иммуноглобулина усиливают экспрессию и иммуногенность ДНК-вакцин [Andre, S., et al., Increased immune response elicitedcandidate vaccines encoding the human immunodeficiency virus type 1 Gag protein. J. Virol., 2001. 75(22): p. 10991-1001; Laddy, D.J., et al., Immunogenicity of novel consensus-based DNA vaccines against avian influenza. Vaccine, 2007. 25(16): p. 2984-9; Frelin, L., et al., Codon optimization and mRNA amplification effectively enhances the immunogenicity of the hepatitis С virus nonstructural 3/4A gene. Gene Ther., 2004. 11(6):p. 522-33], a также недавно разработанная технология системы доставки плазмид, такая как электропорация[Hirao, L.A., et al., Intradermal/subcutaneous immunization by electroporation improves plasmid vaccine delivery and potency in pigs and rhesus macaques. Vaccine, 2008. 26(3): p. 440-8; Luckay, A., et al., Effect of plasmid DNA vaccine design and in vivo electroporation on the resulting vaccine-specific immune responses in rhesus macaques. J. Virol., 2007. 81(10): p. 5257-69; Ahlen, G., et al., In vivo electroporation enhances the immunogenicity of hepatitis С virus nonstructural 3/4A DNA by increased local DNA uptake, protein expression, inflammation, and infiltration of CD3+ T cells. J. Immunol., 2007. 179(7): p. 4741-53]. Кроме того, исследования подтверждают, что использование консенсусных иммуногенов может обладать способностью увеличивать распространенность клеточного иммунного ответа по сравнению с естественными антигенами.[Yan., J., et al., Enhanced cellular immune responses elicited by an engineered HIV-1 subtype В consensusbased envelope DNA vaccine. Mol. Ther., 2007. 15(2): p. 411-21; Rolland, M., et al., Reconstruction and function of ancestral center-of-tree human immunodeficiency virus type 1 proteins. J. Virol., 2007. 81(16): p. 850714]. Следовательно, остается потребность в усовершенствованных вакцинах и способах для предотвращения и лечения инфекции ВПЧ. Сущность изобретения Предоставляются белки, включающие консенсусные последовательности аминокислот ВПЧ типа 18(ВПЧ 18) Е 6 и Е 7, и молекулы нуклеиновых кислот, включающие нуклеотидные последовательности,кодирующие такие белки. Эти конструкты нуклеиновых кислот и кодируемые ими белки, в свою очередь, представляют собой усовершенствованные иммуногенные мишени, на которые может быть выработан иммунный ответ анти-ВПЧ. Также предоставляются конструкты, которые кодируют такие белки, вакцины, которые содержат такие белки, вакцины, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют такие белки,и способы вызова иммунных ответов анти-ВПЧ. Аспекты изобретения включают молекулы нуклеиновых кислот, содержащие нуклеотидную после-1 023892 довательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 1; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 1; фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 5; фрагментов SEQID NO: 5, включающих кодирующие последовательности ВПЧ; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 5; и фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 5, включающих кодирующие последовательности ВПЧ; SEQID NO: 7; фрагментов SEQ ID NO: 7, включая кодирующие последовательности ВПЧ; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 7; и фрагментов последовательностей,обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 7, включая кодирующие последовательности ВПЧ. Настоящее исследование связано с молекулами нуклеиновых кислот, содержащими нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, кодирующих SEQ ID NO: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты SEQ ID NO: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией с фрагментами SEQ IDNO: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих SEQ ID NO: 6; нуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты SEQ ID NO: 6, включая последовательности ВПЧ; нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 6, включая последовательности ВПЧ; и нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией с фрагментами SEQ ID NO: 6, включая последовательности ВПЧ. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтические композиции, содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам композиции, содержащей такие молекулы нуклеиновых кислот. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет рекомбинантную вакцину, содержащую такие молекулы нуклеиновых кислот, и ее использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам такой рекомбинантной вакцины. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет живые ослабленные патогены, содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам таких живых ослабленных патогенов. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет белки, содержащие аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 2; фрагментов SEQ ID NO: 2, фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 6; последовательностей,обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 6; фрагментов SEQ ID NO: 6 и фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией SEQ ID NO: 6. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтические композиции, содержащие такие белки, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам композиции, содержащей такие белки. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет рекомбинантные вакцины, содержащие такие белки, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам такой рекомбинантной вакцины. Кроме того, настоящее изобретение предоставляет живые ослабленные патогены, содержащие такие белки, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам таких живых ослабленных патогенов. Краткое описание фигуры На фигуре представлено описание конструкта плазмиды. Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления Используемое здесь выражение "точные условия гибридизации" или "точные условия" относится к условиям, при которых молекула нуклеиновой кислоты гибридизуется с другой молекулой нуклеиновой кислоты, но не с другими последовательностями. Точные условия зависят от последовательности и будут различны при разных обстоятельствах. Более длинные последовательности специфично гибридизуются при более высоких температурах. Обычно точные условия выбираются примерно на 5 С ниже, чем температура точки плавления (Т.пл.) для специфической последовательности при определенной ионной силе и рН. Т.пл. - температура (при определенной ионной силе, рН и концентрации нуклеиновых кислот), при которой 50% проб, комплементарных последовательности-мишени, равновесно гибридизуются с последовательностью-мишенью. Поскольку последовательности-мишени обычно присутствуют в избытке, при Т.пл. 50% проб находятся в равновесии. Обычно точными условиями будут те, при которых концентрация солей меньше чем 1,0 М ионов натрия, обычно от 0,01 до 1,0 М ионов натрия (или других солей) при рН от 7,0 до 8,3 и тем-2 023892 пературе по меньшей мере примерно 30 С для коротких проб, праймеров или олигонуклеотидов (т.е. от 10 до 50 нуклеотидов) и по меньшей мере примерно 60 С для более длинных проб, праймеров или олигонуклеотидов. Точных условий также можно достигнуть добавлением дестабилизирующих агентов,таких как формамид. Гомологичную последовательность для нуклеотидов и аминокислот можно определить, используяFASTA, BLAST и гэп-BLAST (Altschul et al., Nuc. Acids Res., 1997, 25, 3389, который включен сюда в виде ссылки на полное описание) и программу PAUP 4.0b10 (D.L. Swofford, Sinauer Associates, Massachusetts). "Процент сходства" высчитывается с использованием программы PAUP 4.0b10 (D.L. Swofford,Sinauer Associates, Massachusetts). Средний аналог консенсусной последовательности высчитывается при сравнении со всеми последовательностями в филогенетическом древе. Вкратце, алгоритм BLAST, который означает базовый локальный регулирующий поисковый инструмент, подходит для определения гомологичности последовательности (Altschul et al., J. Mol. Biol.,1990, 215, 403-410, включенный сюда в виде ссылки на полное описание). Программа для осуществленияBLAST анализа общедоступна в Национальном Центре Биотехнологической Информации(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Этот алгоритм включает первичную идентификацию интенсивного подчета пар последовательностей (HSP) путем идентификации коротких "слов" длины W в рассматриваемой последовательности, которые или соответствуют, или удовлетворяют некоторому положительному порогу оценки Т, когда выстраиваются со "словом" той же длины в последовательность базы данных. Т описывается как соседнее "слово" порога оценки (Altschul et al., выше). Эти первичные соседние "слова" действуют как затравки в начале поиска для обнаружения HSP, содержащих их. "Слова"-затравки удлиняются в обоих направлениях по длине каждой последовательности, насколько может увеличиться значение кумулятивного выравнивания. Удлинение "слова"-затравки в каждом направлении останавливается, когда: 1) кумулятивное выравненное значение падает на величину X от своего максимального достигнутого значения; 2) кумулятивное значение доходит до нуля или ниже вследствие накопления одного или более отрицательно оцениваемых остатков выравниваний, или 3) достигнут конец любой последовательности. Параметры W, Т и X алгоритма BLAST определяют чувствительность и скорость выравнивания. Программа BLAST использует как значения по умолчанию длину слова (W), равную 11, оценочную матрицу BLOSUM62 (см. Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 10915-10919, включенная сюда в виде ссылки на полное описание) выравнивания (В), равную 50, ожидаемое (Е), равное 10, М=5,N=4 и сравнение обеих цепей. Алгоритм BLAST (Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 58735787, включенная сюда в виде ссылки на полное описание) и гэп-BLAST представляют статистический анализ схожести между двумя последовательностями. Одна мера схожести, предоставленная алгоритмомBLAST, - наименьшая суммарная вероятность (P(N, которая дает индикатор вероятности, по которой парность нуклеотидных последовательностей появится случайно. Например, нуклеиновая кислота считается подобной другой, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с другой нуклеиновой кислотой меньше, чем 1, предпочтительно меньше, чем 0,1, более предпочтительно меньше, чем 0,01 и наиболее предпочтительно меньше, чем 0,001. Используемый в настоящем описании термин "генетический конструкт" относится к молекулам ДНК или РНК, которые содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок. Кодирующая последовательность включает инициирующие и терминирующие сигналы, функционально связанные с регулирующими элементами, включая промотор и сигнал полиаденилирования, способные направить экспрессию в клетках индивидуума, которому вводится молекула нуклеиновой кислоты. Используемый в настоящем описании термин "экспрессирующаяся форма" относится к генным конструктам, которые содержат необходимые регуляторные элементы, функционально связанные с кодирующей последовательностью, которая кодирует белок так, что когда она находится в клетках индивидуума, кодирующая последовательность экспрессируется. Открытые усовершенствованные вакцины основаны на мультифазной стратегии для усиления клеточных иммунных ответов, вызванных иммуногенами. Были разработаны модифицирванные консенсусные последовательности. Также открыты генетические варианты осуществления, включающие кодонную оптимизацию, РНК-оптимизацию и добавление высокоэффективной лидерной последовательности иммуноглобина. Новый конструкт разработан для вызова более сильного и обширного клеточного иммунного ответа, чем соответствующие кодон-оптимизированные иммуногены. Усовершенствованные вакцины ВПЧ основаны на белках и генетических конструктах, которые кодируют белки с эпитопами, делающими их особенно эффективными в качестве иммуногенов, против которых может быть вызван анти-ВПЧ. Соответственно, вакцины могут вызывать терапевтический или профилактический иммунный ответ. В некоторых вариантах осуществления средствами, доставляющими иммуногены, являются ДНК-вакцина, рекомбинантная вакцина, белковая субъединичная вакцина, соединение, содержащее иммуноген, ослабленная вакцина или инактивированная вакцина. В некоторых вариантах осуществления вакцина включает композицию, выделенную из групп, состоящих из одной или более ДНК-вакцин, одной или более рекомбинантных вакцин, одной или более белковых субъединичных вакцин, одного или более соединений, содержащих иммуноген, одной или более ослабленных вакцин и одной или более инактивированных вакцин. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения вакцина, предоставляемая индивидууму, модулирует активность иммунной системы индивидуума и тем самым усиливает иммунный ответ против ВПЧ. Когда молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, попадает в клетку индивидуума, в клетке экспрессируется нуклеотидная последовательность, и таким образом к индивидууму попадает белок. Предоставляются способы доставки последовательности, кодирующей белок, в молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида, как часть рекомбинантной вакцины и как часть ослабленной вакцины, как изолированные белки или белки, входящие в вектор. Предоставляются композиции и способы, которые профилактически и/или терапевтически иммунизируют индивидуумов против ВПЧ. Составы для доставки молекул нуклеиновых кислот, которые включают нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуноген, функционально связаны с регуляторными элементами. Составы могут включать плазмиду, кодирующую иммуноген, рекомбинантную вакцину, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует иммуноген, живой ослабленный патоген, который кодирует белок по изобретению и/или включает белок по изобретению; инактивированный патоген, включающий белок по изобретению, или соединение, такое как липосома или субъединичная вакцина, которая содержит белок по изобретению. Кроме того, настоящее изобретение связано с инъецируемыми фармацевтическими композициями, которые включают композиции.SEQ ID NO: 1 содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую консенсусный иммуноген белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7. SEQ ID NO: 5 включает SEQ ID NO: 1 и, кроме того, составы лидерной последовательности IgE, связанной с нуклеотидной последовательностью, кодирующей консенсусный иммуноген белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7. SEQ ID NO: 2 содержит аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7. SEQ ID NO: 6 включает SEQ ID NO: 2 и, кроме того,содержит лидерную последовательность IgE, связанную с консенсусной иммуногенной последовательностью. Лидерная последовательность IgE представляет собой SEQ ID NO: 4, может кодироваться SEQID NO: 3. SEQ ID NO: 7 представляет собой нуклеотидную последовательность плазмиды pGX302 с SEQID NO: 5, встроенной туда для экспрессии. В некоторых вариантах осуществления вакцины включают SEQ ID NO: 2 или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вакцины включаютSEQ ID NO: 1 как молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вакцины преимущественно содержат SEQ ID NO: 6 или молекулу нуклеиновой кислоты,которая их кодирует. В некоторых вариантах осуществления вакцины преимущественно содержат SEQID NO: 5 как молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления вакцины преимущественно содержат SEQ ID NO: 7. Фрагменты SEQ ID NO: 1 могут содержать 90 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления фрагменты SEQ ID NO: 1 могут содержать 180 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 270 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 360 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 450 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 540 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 630 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 720 или более нуклеотидов; и в некоторых вариантах осуществления 770 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления фрагменты SEQ IDNO: 1, такие как те, что будут описаны здесь в дальнейшем, могут, кроме того, содержать кодирующие последовательности для лидерных последовательностей IgE. В некоторых вариантах осуществления SEQID NO: 1 не содержат кодирующих последовательностей для лидерных последовательностей IgE. Фрагменты SEQ ID NO: 1 могут содержать менее чем 180 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 270 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 360 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 450 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 540 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 630 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 690 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 760 нуклеотидов, и в некоторых вариантах осуществления менее чем 780 нуклеотидов. Фрагменты SEQ ID NO: 2 могут содержать 30 или более аминокислот. В некоторых вариантах осуществления фрагменты SEQ ID NO: 2 могут содержать 60 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 90 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 120 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 150 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 180 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 210 или более аминокислот; и в некоторых вариантах осуществления 240 или более аминокислот. Фрагменты могут содержать менее чем 90 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 120 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 150 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 180 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 210 аминокислот и в некоторых вариантах осуществления менее чем 240 аминокислот. Все фрагменты SEQ ID NO: 5 содержат кодирующие последовательности, которые кодируют последовательности ВПЧ, т.е. фрагменты SEQ ID NO: 5 должны содержать последовательности в добавление к тем, что кодируют лидерный пептид IgE. В некоторых вариантах осуществления фрагменты SEQID NO: 5 содержат 90 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления фрагменты SEQ IDNO: 5 могут содержать 180 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 270 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 360 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 450 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 540 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 630 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 720 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 810 или более нуклеотидов; и в некоторых вариантах осуществления 830 или более нуклеотидов. Фрагменты SEQ ID NO: 5 могут содержать менее чем 180 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 270 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 360 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 450 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 540 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 630 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 690 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 720 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 780 нуклеотидов и в некоторых вариантах осуществления менее чем 840 нуклеотидов. Фрагменты SEQ ID NO: 6 могут содержать 30 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ. В некоторых вариантах осуществления фрагменты SEQ ID NO: 6 могут содержать 60 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 90 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 120 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 150 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 180 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 210 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 240 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; и в некоторых вариантах осуществления 270 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ. Фрагменты могут содержать менее чем 90 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 120 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 150 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 180 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 210 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 240 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, и в некоторых вариантах осуществления менее чем 270 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения способы вызова иммунного ответа у индивидуумов против иммуногена включают введение индивидуумам аминокислотной последовательности для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7, или их функциональных фрагментов, или их экспрессирующихся кодирующих последовательностей. Некоторые варианты осуществления включают изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7 или их фрагмента. Некоторые варианты осуществления включают рекомбинантную вакцину, которая кодирует аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7 или их фрагмента. Некоторые варианты осуществления включают субъединичную вакцину, которая содержит аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7 или их фрагмента. Некоторые варианты осуществления содержат живую ослабленную вакцину и/или инактивированную вакцину,которая содержит аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е 6 и Е 7. Усовершенствованные вакцины содержат белки и генетические конструкты, которые кодируют белки с эпитопами, делающие их особенно эффективными как иммуногены, против которых можно вызвать иммунный ответ анти-ВПЧ. Соответственно, вакцины можно предоставить для выработки терапевтического или профилактического иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления изобретения средство доставки иммуногена представляет собой вакцину ДНК, рекомбинантную вакцину, белковую субъединичную вакцину, состав, содержащий иммуноген, ослабленную вакцину или инактивированную вакцину. В некоторых вариантах осуществления вакцина содержит комбинацию, отобранную из групп, состоящих из одной или более ДНК-вакцин, одной или более рекомбинантных вакцин, одной или более белковых субъединичных вакцин, одной или более композиций, содержащих иммуноген, одну или более ослабленных вакцин и одну или более инактивированных вакцин. Аспекты изобретения предоставляют способы доставки последовательности, кодирующей белок, в молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида, как часть рекомбинантной вакцины и как часть ослабленной вакцины, как изолированные белки или белки, входящие в вектор. В соответствии с некоторыми аспектами настоящего изобретения предоставляются композиции и способы, которые профилактически и/или терапевтически иммунизируют индивидуума. ДНК-вакцины описаны в патентах США 5593972, 5739118, 5817637, 5830876, 5962428, 5981505,5580859, 5703055, 5676594 и предварительных заявках, цитированных здесь, каждые из которых вклю-5 023892 чены в данное описание в качестве ссылки. В дополнение к протоколам доставки, описанным в этих заявках, альтернативные способы доставки ДНК описаны в патентах США 4945050 и 5036006, которые включены в данное описание в качестве ссылки. Настоящее изобретение связано с усовершенствованными ослабленными живыми вакцинами, усовершенствованными инактивированными вакцинами и усовершенствованными вакцинами, которые используют рекомбинантные векторы для доставки чужеродных генов, которые кодируют антигены, а также с субъединичными и гликопротеидными вакцинами. Примеры ослабленных живых вакцин, которые используют рекомбинантные векторы для доставки чужеродных антигенов, субъединичных вакцин и гликопротеидных вакцин, описаны в патентах США 4510245; 4797368; 4722848; 4790987; 4920209; 5017487; 5077044; 5110587; 5112749; 5174993; 5223424; 5225336; 5240703; 5242829; 5294441; 5294548; 5310668; 5387744; 5389368; 5424065; 5451499; 5453364; 5462734; 5470734; 5474935; 5482713; 5591439; 5643579; 5650309; 5698202; 5955088; 6034298; 6042836; 6156319 и 6589529, каждый из которых включен в данное описание в качестве ссылки. Попадая в клетку, генетический конструкт(ы) может остаться в клетке как функционирующая экстрахромосомная молекула и/или интегрированная в хромосомную ДНК клетки. ДНК может быть введена в клетку, где она остается как отдельный генетический материал в форме плазмиды или плазмид. Альтернативно, линейная ДНК, которая может интегрироваться с хромосомой, может быть введена в клетку. Когда ДНК вводится в клетку, могут быть добавлены реагенты, которые стимулируют интеграцию ДНК в хромосомы. Последовательности ДНК, которые полезны для стимуляции интеграции, также могут быть включены в молекулу ДНК. Альтернативно, РНК может вводиться в клетку. Также предусматривается предоставлять генетические конструкты как линейные микрохромосомы, включающие центромеру, теломеры и точку начала репликации. Генные конструкты могут оставаться частью генетического материала в ослабленных живых микроорганизмах или рекомбинантных бактериальных векторах, которые живут в клетках. Генные конструкты могут быть частью геномов рекомбинантных вирусных вакцин, когда генетический материал или интегрируется в хромосому клетки, или остается экстрахромосомным. Генетические конструкты включают регуляторные элементы, необходимые для генной экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты. Элементы включают промотор, инициирующий кодон, терминирующий кодон и сигнал полиаденилирования. Кроме того, для экспрессии генной последовательности, которая кодирует белок-мишень или иммуномодулирующий белок, часто требуются энхансеры. Необходимо, чтобы эти элементы были функционально встроены в последовательность, которая кодирует требуемые белки и чтобы регуляторные элементы работали у тех, кому они вводятся. Инициирующие кодоны и терминирующий кодон обычно считаются частью нуклеотидной последовательности, которая кодирует требуемый белок. Однако необходимо, чтобы эти элементы функционировали у тех, кому вводится генный конструкт. Инициирующий и терминирующий кодоны должны быть внутри кодирующей последовательности. Используемые промоторы и сигнал полиаденилирования должны работать в клетках тех, кому они вводятся. Примеры промоторов полезны для осуществления настоящего изобретения, особенно в производстве генетической вакцины для человека, включая, но без ограничения, промоторы обезьяньего вируса 40 (SV40), промотор мышиного вируса опухоли молочной железы (MMTV), вирус иммунодефицита человека (MV), такой как промотор BIV длинного концевого повтора (LTR), вирус Молони, ALV, цитомегаловирус (CMV), такой как предранний промотор CMV, вирус Эпштейна-Барр (EBV), вирус саркомы Рауса (RSV), а также промоторы из генов человека, такие как человеческий актин, человеческий миозин,человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин и человеческий металлотионеин. Примеры сигналов полиаденилирования полезны для осуществления настоящего изобретения, особенно для производства генетических вакцин для людей, включая, но без ограничения, сигналы полиаденилирования SV40 и сигналы полиаденилирования LTR. Преимущественно используется сигнал полиаденилирования SV40, который находится в плазмиде рСЕР 4 (Invitrogen, San Diego, CA), называемый сигналом полиаденилирования SV40. Кроме регуляторных элементов, требуемых для экспрессии ДНК, другие элементы также могут быть включены в молекулу ДНК. Такие дополнительные элементы включают энхансеры. Энхансер может быть взят из группы, включающей, но без ограничения, человеческий актин, человеческий миозин,человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин и вирусные энхансеры, такие как CMV,RSV и EBV. Генетические конструкты могут быть предоставлены с точкой начала репликации у млекопитающих для создания экстрахромосомного конструкта и выработки множественных копий конструкта в клетке. Плазмиды pVAX1, pCEP4 и pREP4 от Invitrogen (Сан-Диего, Калифорния) содержат точку начала репликации вируса Эпштейна-Барр и ядерный кодирующий регион антигена EBNA-1, который генерирует многокопийную эписомную репликацию без интеграции. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, связанных с применением иммунизации,-6 023892 используются молекула(ы) нуклеиновой кислоты, которые включают нуклеотидные последовательности,кодирующие белок по изобретению; и, необязательно, гены белков, которые добавочно усиливают иммунный ответ против таких белков-мишеней. Примерами таких генов являются гены, кодирующие другие цитокины и лимфокины, такие как альфа-интерферон, гамма-интерферон, фактор роста тромбоцитов(PDGF), TNF, TNF, GM-CSF, эпидермальный фактор роста (EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL12, IL-18, MHC, CD80, CD86 и IL-15, включая IL-15, обладающий сигнальной последовательностью,удаляющей и опционально включающей сигнальный пептид из IgE. Другие гены, которые могут быть полезны, включают гены, кодирующие МСР-1, MIP-1, MIP-1p, IL-8, RANTES, L-селектин, Р-селектин,Е-селектин, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2,ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-4, мутантные формы IL-18, CD40, CD40L, фактор роста сосудов, IL-7, фактор роста нервов, фактор роста эндотелия сосудов, Fas, TNF рецептор, Fit, Аро-1, р 55,WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, CaspaseICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, Inactive NIK, SAP K, SAP-1,JNK, гены интерферонового ответа, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAILR4, RANK, RANK LIGAND, Ox40, Ox40 LIGAND, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C,NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 и их функциональные фрагменты. Может быть добавлен дополнительный элемент, который служит мишенью для клеточной деструкции, если по каким-либо причинам желательно элиминировать клетки, получившие генетический конструкт. Ген тимидинкиназы (tk) герпеса в экспрессирующейся форме может быть включен в генетический конструкт. Лекарственное средство гангцикловир может быть введено индивидууму, и это лекарственное средство станет причиной избирательного цитолиза любой клетки, продуцирующей tk, тем самым предоставляя средство для избирательной деструкции клеток с генетическим конструктом. Для того чтобы максимизировать продукцию белка, могут быть выбраны регуляторные последовательности, которые хорошо подходят для генной экспрессии в клетках, куда введен конструкт. Более того, могут быть выбраны кодоны, которые наиболее эффективно транскрибируются в клетке. Средний специалист в данной области может получить конструкции ДНК, которые являются функциональными в клетках. В некоторых вариантах осуществления могут быть предоставлены генные конструкты, в которых кодирующие последовательности для белков, описанных здесь, связаны с сигнальным белком IgE. В некоторых вариантах осуществления белки, описанные здесь, связаны с сигнальным белком IgE. В некоторых вариантах осуществления изобретения, для которых используется белок, средний специалист может, например, продуцировать и изолировать белки по изобретению, используя хорошо известные технологии. В некоторых вариантах осуществления изобретения, для которых используется белок, средний специалист может, например, используя хорошо известные технологии, вставлять молекулы ДНК, которые кодируют белок по изобретению, в коммерчески доступные векторы экспрессии для использования в хорошо известных системах экспрессии. Например, коммерчески доступная плазмидаpSE420 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния) может быть использована для продукции белка в Е. coli. Коммерчески доступная плазмида pYES2 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния) может, например, быть использована для продукции в штаммах дрожжей S. cerevisiae. Коммерчески доступная МАХВАС полная бакуловирусная система экспрессии (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния) может, например, быть использована для продукции в клетках насекомых. Коммерчески доступная плазмида pcDNA I илиpcDNA3 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния) может, например, быть использована для продукции в клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомячка. Обладая средними специальными знаниями, можно использовать эти коммерческие векторы и системы экспрессии или другое для продуцирования белка с помощью стандартных технологий и легко доступных исходных материалов (см.,например, Sambrook et al., Molecular Cloning a Laboratory Manual, Second Ed. Cold Spring Harbor Press(1989), включенный в данный документ в качестве ссылки). Таким образом, требуемые белки можно получить как в прокариотических, так и в эукариотических системах, результатом чего будет диапазон обработанных форм белка. Обладая средними специальными знаниями, можно использовать другие коммерчески доступные векторы экспрессии и системы или создать векторы, используя хорошо известные способы и легко доступные исходные материалы. Системы экспрессии, содержащие необходимые контрольные последовательности, такие как промоторы и сигналы полиаденилирования, и предпочтительно энхансеры, легко доступны и известны в данной области в отношении множества хозяев. См., например, Sambrook et al.,Molecular Cloning a Laboratory Manual, Second Ed. Cold Spring Harbor Press (1989). Генетические конструкты включают белки, кодирующие последовательность, функционально связанную с промотором, который работает в клеточной линии, в которую трансфицированы конструкты. Примеры конститутивных промоторов включают промоторы из цитомегаловируса или SV40. Примеры индуцируемых промоторов включают мышиный вирус лейкемии молочной железы или промоторы металлотионеина. Имея средние специальные знания, можно легко создать генетические конструкты, полезные для трансфекции в клетки ДНК, которая кодирует белок по изобретению, из легко доступных исходных материалов. Вектор экспрессии, включающий ДНК, которая кодирует белок, используется для трансформации совместимых хозяев, которые затем культивируются и содержатся при условиях, в которых происходит экспрессия чужеродной ДНК. Произведенный белок извлекается из культуры или путем лизиса клеток, или из среды культуры,как принято и известно специалистам. Имея средние специальные знания и используя хорошо известные технологии, можно выделить белок, произведенный с использованием таких систем экспрессии. Способы очистки белка из естественных источников с использованием антитела, которое специфично связывается с определенным белком, как описано выше, могут также применяться для очистки белка, произведенного по методологии рекомбинантной ДНК. В дополнение к производству белков путем рекомбинантных техник автоматизированные белковые синтезаторы также могут быть использованы для производства выделенного исключительно чистого белка. Такие техники хорошо известны специалистам и полезны, если производные, у которых есть замена, не обеспечиваются в производстве белка, кодируемого ДНК. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены при использовании любой из нескольких хорошо известных технологий, включая введение ДНК (также известное как ДНК-вакцинация), рекомбинантные векторы, такие как рекомбинантный аденовирус, рекомбинантный аденовирус, ассоциированный с вирусом, и рекомбинантная вакцина. Способы введения включают, но не ограничиваются, введение внутримышечно, внутриназально,внутрибрюшинно, внутрикожно, подкожно, внутривенно, внутриартериально, интраокулярно и орально,а также местно, трансдермально, путем ингаляции или суппозиторием или в ткань слизистой оболочки, в виде орошения вагинальной, ректальной, уретральной, ротовой и подъязычной тканей. Предпочтительные пути введения включают внутримышечную, внутрибрюшинную, внутрикожную и подкожную инъекцию. Генетические конструкты могут вводиться посредством, но без ограничения, способов и приборов электропорации, традиционных шприцов, приборов для безыгольной инъекции или "генной пушки для баллистической трансфекции". Примеры приборов для электропорации и способов электропорации, предпочтительных для легкой доставки ДНК-вакцин, включают те, что описаны в патенте США 7245963 Draghia-Akli, et al., патенте США изд. 2005/0052630 подписан Smith, et al., содержание которого включено в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Также предпочтительными являются приборы для электропорации и способы электропорации для легкой доставки ДНК-вакцин, предоставляемые в одновременно находящейся на рассмотрении заявке того же владельца на патент США 11/874072, зарегистрированный 17 октября 2007 г., заявляющей приоритет по статье 35 USC 119(е) предварительных заявок 60/852149, поданной 17 октября 2006 г., и 60/978982, поданной 10 октября 2007 г., включенных в данное описание в полном объеме в качестве ссылки. Нижеследующее представляет собой пример осуществления с использованием технологии электропорации, и обсуждается более детально в патентных ссылках, описанных выше: приборы электропорации могут быть сконфигурированы для доставки в требуемую ткань млекопитающего импульсом энергии, производимым постоянным током, таким же, как заданный ток, введенный пользователем. Прибор для электропорации включает электропорационную составляющую и набор электродов или набор рукояток. Электропорационная составляющая может включать один или более из различных элементов приспособлений для электропорации, включая контроллер, волновой генератор тока, тестер импеданса, регистратор волн, входной элемент, элемент сообщения о статусе, коммуникационный порт, компонент памяти, источник питания и выключатель питания. Электропорационная составляющая может функционировать как один элемент электропорационных приборов, и другие элементы являются отдельными элементами (или компонентами) в сообщении с электропорационной составляющей. В некоторых вариантах осуществления элетропорационная составляющая может функционировать как более чем один элемент электропорационного прибора, который может находиться в сообщении с другими элементами электропорационного прибора, отдельно от электропорационной составляющей. Использование электропорационной технологии для доставки усовершенствованной вакцины ВПЧ не ограничено элементами электропорационных приборов, существующих как части одного электромеханического или механического прибора, поскольку элементы могут функционировать как один прибор или как различные элементы, сообщающиеся друг с другом. Электропорационная составляющая способна доставить энергетический импульс, который производит постоянный ток в нужной ткани и включает в себя механизм обратной связи. Набор электродов включает комплект электродов, в который входит множество электродов различного размера, где набор электродов получает импульс энергии от электропорационной составляющей и доставляет ее в нужную ткань посредством электродов. По меньшей мере один из множества электродов является нейтральным во время доставки импульса энергии и измеряет импеданс в нужной ткани и передает значение импеданса к электропорационной составляющей. Механизм обратной связи может получить значение импеданса и может подогнать импульс энергии, доставляемый электропорационной составляющей, для поддержания постоянного тока. В некоторых вариантах осуществления множество электродов может доставлять импульс энергии в децентрализованную структуру. В некоторых вариантах осуществления множество электродов может доставлять импульс энергии в децентрализованную структуру благодаря контролю электродов запрограммированной последовательностью, и запрограммированная последовательность вводится пользователем электропорационной составляющей. В некоторых вариантах осуществления запрограммированная последовательность включает множество импульсов, доставляемых последовательно, где каждый импульс из множества импульсов доставляется по меньшей мере двумя активными электродами с одним нейтральным электродом, который оценивает импеданс, и где последующий импульс из множества импульсов доставляется различно одним из по меньшей мере двух активных электродов с одним нейтральным электродом, который оценивает импеданс. В некоторых вариантах осуществления механизм обратной связи выполняется или аппаратурой,или программным обеспечением. Предпочтительно механизм обратной связи выполняется аналоговой системой управления с обратной связью. Предпочтительно эта обратная связь происходит каждые 50, 20,10 или 1 мкс, но предпочтительна обратная связь в режиме реального времени или мгновенная (т.е. практически мгновенная, как определяется в доступных техниках установленное время ответа). В некоторых вариантах осуществления нейтральный электрод оценивает импеданс в нужной ткани и передает импеданс механизму обратной связи, и механизм обратной связи реагирует на импеданс и корректирует импульс энергии, поддерживая значение постоянного тока, сходное заданному значению. В некоторых вариантах осуществления механизм обратной связи непрерывно и мгновенно поддерживает постоянный ток в течение доставки импульса энергии. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты доставляется в клетки вместе с введением полинуклеотида с функцией энхансера или организующего агента генетической вакцины. Полинуклеотиды с функцией энхансера описаны в патенте США 5593972, 5962428 и интернациональной заявкеPCT/US94/00899, зарегистрированной 26 января 1994 г., каждый из которых включен в данное описание в качестве ссылки. Организующие агенты генетической вакцины описаны в патенте США 021579 от 1 апреля 1994 г., который включен в данное описание в качестве ссылки. Коагенты,которые вводятся вместе с молекулами нуклеиновых кислот, могут вводиться как смесь с молекулами нуклеиновой кислоты, или вводиться одновременно с введением молекул нуклеиновой кислоты, или отдельно, до или после введения молекул нуклеиновой кислоты. Кроме того, другие агенты, которые могут выполнять функции трансфицирующих агентов и/или реплицирующих агентов и/или воспалительных агентов и которые могут вводиться совместно с GVF, включая факторы роста, цитокины и лимфокины,такие как -интерферон, гамма-интерферон, GM-CSF, фактор роста тромбоцитов (PDGF), TNF, эпидермальный фактор роста (EGF) , IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 и IL-15, а также фактор роста фибробластов, поверхностно-активные агенты, такие как иммуностимулирующие комплексы (ISCOMS), неполный адъювант Фрейнда, аналог LPS, включающий монофосфорилированный липид A (WL), мурамилпептиды, аналоги хинона и везикулы, такие как сквален и гиалуроновая кислота, могут также быть использованы для совместного введения с генетическим конструктом. В некоторых вариантах осуществления может быть использован иммуномодулирующий белок, такой как GVF. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты предоставляется совместно с PLG, чтобы обеспечить доставку/усвоение энхансера. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению содержат от около 1 нг до около 2000 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции, соответствующие настоящему изобретению, содержат от около 5 нг до около 1000 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 10 нг до около 800 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 0,1 до около 500 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 1 до около 350 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 25 до около 250 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 100 до около 200 мкг ДНК. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению разработаны в соответствии с используемым способом введения. В случаях, когда фармацевтические композиции являются инъецируемыми фармацевтическими составами, они стерильны, не содержат пирогенных препаратов и не содержат твердых частиц. Предпочтительно используется изотоническая формула. Обычно добавки для изотоничности могут включать хлористый натрий, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. В некоторых случаях предпочитаются изотонические растворы, такие как фосфатный солевой буфер. Стабилизаторы включают желатин и альбумин. В некоторых вариантах осуществления в состав добавляется сосудосуживающий агент. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения предоставляются способы вызова иммунных ответов. Вакцина может быть основанной на белке, живой ослабленной вакциной,клеточной вакциной, рекомбинантной вакциной, или вакциной нуклеиновой кислоты, или ДНКвакциной. В некоторых вариантах осуществления способы вызова у индивидуума иммунного ответа против иммуногена включают способы вызова мышечных иммунных ответов, состоящих из введения индивидууму одного или более из белка СТАСК, белка ТЕСК, белка МЕС и их функциональных фрагментов,-9 023892 или их экспрессирующихся кодирующих последовательностей в комбинации с очищенными молекулами нуклеиновой кислоты, которые кодируют белок по изобретению, и/или рекомбинантной вакциной, которая кодирует белок по изобретению, и/или субъединичной вакциной, содержащей белок по изобретению,и/или живой ослабленной вакциной, и/или инактивированной вакциной. Один или более из белка СТАСК, белка ТЕСК, белка МЕС и их функциональные фрагменты могут быть введены прежде, одновременно или после введения очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует иммуноген,и/или рекомбинантной вакцины, которая кодирует иммуноген, и/или субъединичной вакцины, которая содержит иммуноген, и/или живой ослабленной вакцины, и/или инактивированной вакцины. В некоторых вариантах осуществления индивидууму вводится изолированная молекула нуклеиновой кислоты,которая кодирует один или более белков, выбранных из группы, содержащей СТАСК, ТЕСК, МЕС и их функциональные фрагменты. Кроме того, настоящее изобретение иллюстрируется следующим примером. Должно быть понятно,что этотпример, показывающий варианты осуществления изобретения, является лишь иллюстративным. Из вышеизложенного обсуждения и этого примера специалист может убедиться в важнейших характеристиках этого изобретения и без отступления от объема его притязаний и не выходя за его границы, может внести различные изменения и модифицировать изобретение, чтобы адаптировать его к различным использованиям и условиям. Таким образом, различные варианты осуществления изобретения в дополнение к тем, что показаны и описаны здесь, будут очевидны специалистам из вышеизложенного описания. Подразумевается, что такие варианты осуществления также попадают в границы прилагаемых утверждений. Все патенты США, заявки США и ссылки на литературу, цитируемые в ходе настоящего описания,тем самым включены сюда в качестве ссылки в полном объеме. Пример. Были подготовлены оптимизированные консенсусные последовательности вируса папилломы человека (ВПЧ) вирусных белков 18 Е 6 и 7. Последовательность предназначена для высоких уровней экспрессии. Эта последовательность пригодна для технологии авторов генетической иммунизации. Результаты экспериментов, поставленных с использованием консенсусной последовательности, были положительными. На фиг. 1 дано описание плазмидного конструкта, который включает последовательность нуклеиновой кислоты консенсусного ВПЧ 18-6 и 7 в плазмиде pGX3002 (SEQ ID NO: 7). Нуклеотидная последовательность консенсусного ВПЧ 18-6 и 7, которая встроена в плазмиду pGX3002, включает кодирующую последовательность лидерного белка IgE, связанного с кодирующими последовательностями консенсусного ВПЧ 18-6 и 7. Плазмида pGX3002 экспрессирует оптимизированные антигены человеческого папилломавируса 18-6 и 7 (ВПЧ 18 Е 6 и 7), приводимые в действие промотором CMV (pCMV) гормона роста крупного рогатого скота с 3' конца и сигналом полиаденилирования (bGHpA) с использованием pVAX основы,которая включает ген устойчивости к канамицину (Kan) и точку начала репликации плазмиды (pUC ori). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген ВПЧ Е 6/Е 7, который индуцирует иммунный ответ у субъекта, причем указанная последовательность выбрана из группы, состоящей изSEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 1, содержащих 90 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией с SEQ ID NO: 1;SEQ ID NO: 5; фрагментов SEQ ID NO: 5, содержащих 90 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; и последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией с SEQ ID NO: 5. 2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая SEQ ID NO: 1. 3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 1. 4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 98% гомологией с SEQ ID NO: 1. 5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 99% гомологией с SEQ ID NO: 1. 6. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая SEQ ID NO: 5. 7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 5. 8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 98% гомологией с SEQ ID NO: 5. 9. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 99% гомологией с SEQ ID NO: 5. 10. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, выбранная из группы, состоящей из фрагментов SEQ ID NO: 1, содержащих 270 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 1, содержащих 450 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 1, содержащих 630 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 1, содержащих 720 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 1, содержащих 770 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 1; фрагментов SEQ ID NO: 5, содержащих 270 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 5; фрагментов SEQ ID NO: 5, содержащих 450 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 5; фрагментов SEQ ID NO: 5, содержащих 630 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 5; фрагментов SEQ ID NO: 5, содержащих 720 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 5; и фрагментов SEQ ID NO: 5, содержащих 770 или более нуклеотидов SEQ ID NO: 5. 11. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная молекула представляет собой плазмиду. 12. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген ВПЧ Е 6/Е 7, который индуцирует иммунный ответ у субъекта, причем указанная последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности, которая кодирует SEQ ID NO: 2; последовательностей, которые кодируют аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 2; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 2, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 2 содержат 120 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; последовательности, которая кодирует SEQ ID NO: 6; последовательностей, которые кодируют аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 6; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 120 или более аминокислот SEQ ID NO: 6. 13. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует SEQ ID NO: 2. 14. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательности, которая кодирует SEQ ID NO: 6; последовательностей, которые кодируют аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 6; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 120 или более аминокислот SEQ ID NO: 6. 15. Молекула нуклеиновой кислоты по п.14, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует SEQ ID NO: 6. 16. Молекула нуклеиновой кислоты по п.14, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 150 или более аминокислот последовательности SEQ ID NO: 6; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 180 или более аминокислот последовательности SEQ ID NO: 6; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 210 или более аминокислот последовательности SEQ ID NO: 6; и фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 240 или более аминокислот последовательности SEQ ID NO: 6. 17. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 2, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 2 содержат 150 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 2, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 2 содержат 180 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 2, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 2 содержат 210 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; и фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты SEQ ID NO: 2, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 2 содержат 240 или более аминокислот SEQ ID NO: 2. 18. Фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума,содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1. 19. Инъецируемая фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1. 20. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.1. 21. Способ по п.20, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу ДНК. 22. Способ по п.21, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой плазмиду. 23. Способ по п.20, где указанную молекулу нуклеиновой кислоты вводят индивидууму путем электропорации. 24. Способ по п.20, где у индивидуума диагностировали наличие инфекции ВПЧ. 25. Рекомбинантная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1. 26. Рекомбинантная вакцина по п.25, где указанная рекомбинантная вакцина представляет собой рекомбинантную осповакцину. 27. Живая ослабленная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1. 28. Белок, содержащий аминокислотную последовательность антигена ВПЧ Е 6/Е 7, который индуцирует иммунный ответ у субъекта, выбранную из группы, состоящей изSEQ ID NO: 2; последовательностей, обладающих по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 2; фрагментов SEQ ID NO: 2, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 2 содержат 120 или более аминокислот SEQ ID NO: 2;SEQ ID NO: 6; последовательностей, обладающих по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 6; фрагментов SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 120 или более аминокислот SEQ ID NO: 6. 29. Белок по п.28, содержащий SEQ ID NO: 2. 30. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 98% гомологией с SEQ ID NO: 2. 31. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 99% гомологией с SEQ ID NO: 2. 32. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 98% гомологией с SEQ ID NO: 6. 33. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 99% гомологией с SEQ ID NO: 6. 34. Белок по п.28, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей изSEQ ID NO: 6; последовательностей, обладающих по меньшей мере 95% гомологией с SEQ ID NO: 6; фрагментов SEQ ID NO: 6, где указанные фрагменты SEQ ID NO: 6 содержат 120 или более аминокислот SEQ ID NO: 6. 35. Белок по п.34, содержащий SEQ ID NO: 6. 36. Белок по п.34, содержащий фрагменты последовательности SEQ ID NO: 6, содержащие 150 или более аминокислот SEQ ID NO: 6; фрагменты последовательности SEQ ID NO: 6, содержащие 180 или более аминокислот SEQ ID NO: 6; фрагменты последовательности SEQ ID NO: 6, содержащие 210 или более аминокислот SEQ ID NO: 6; и фрагменты последовательности SEQ ID NO: 6, содержащие 240 или более аминокислот SEQ ID NO: 6. 37. Белок по п.28, содержащий фрагменты последовательности SEQ ID NO: 2, содержащие 150 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; фрагменты последовательности SEQ ID NO: 2, содержащие 180 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; фрагменты последовательности SEQ ID NO: 2, содержащие 210 или более аминокислот SEQ ID NO: 2; и фрагменты последовательности SEQ ID NO: 2, содержащие 240 или более аминокислот SEQ ID NO: 2. 38. Фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума,содержащая белок по п.28. 39. Инъецируемая фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28. 40. Рекомбинантная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28. 41. Рекомбинантная вакцина по п.40, представляющая собой рекомбинантную осповакцину. 42. Живая ослабленная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28. 43. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей белок по п.28. 44. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму рекомбинантной вакцины по п.25. 45. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму живой ослабленной вакцины по п.27.