Фракция обогащенного лизином гистонового тимусного фактора (tf), способ получения фракции и способ выявления вич-инфекции у человека

1 Данная заявка является частичным продолжением заявки на получение патента США 08/485548, поданной 07 июня 1995 года, которая в свою очередь является частичным продолжением заявки на получение патента США 08/431883, поданной 01 мая 1995 года. Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к области иммунологии и вирусологии и в частности к композициям, которые можно получить из клеток тимуса млекопитающих и использовать в качестве диагностикумов, вакцин и лечебных препаратов, эффективных в случае заражения вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), которое приводит к таким заболеваниям, как синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) и СПИД-ассоциированный комплекс. Уровень техники В костном мозге образуются клетки, которым предназначено стать клетками иммунной системы. Указанные клетки костного мозга дифференцируются в лимфоциты или фагоциты. Лимфоциты - это небольшие клетки крови,функциональная активность которых является одной из ключевых составляющих деятельности иммунной системы. Известны две большие группы лимфоцитов, а именно В- и Тлимфоциты. В-лимфоциты созревают в костном мозге (название "В-лимфоциты" происходит от английского слова "bone" - кость). Т-лимфоциты мигрируют в тимус (название "Т-лимфоциты" происходит от английского слова "thymus" тимус), где пролиферируют и созревают в клетки, способные к иммунному ответу. После выхода из костного мозга и тимуса В- и Тлимфоциты постоянно циркулируют по всему организму. Обнаружены два типа Т-лимфоцитов - регуляторные и цитотоксические, которые задействованы в двух основных механизмах иммунного ответа. "Главными" среди Т-лимфоцитов являются Т-лимфоциты-"хелперы/индукторы". Т-лимфоциты-хелперы, которые могут быть идентифицированы по маркеру Т 4, необходимы для активации как В-лимфоцитов и других Тлимфоцитов, так и природных клеток-киллеров и макрофагов. Цитотоксические Т-лимфоциты являются клетками-киллерами, которые, например, непосредственным образом атакуют клетки, инфицированные вирусами или трансформированные в результате раковых заболеваний,и избавляют от них организм. Фагоциты представлены моноцитами и макрофагами. Моноциты циркулируют в крови и затем мигрируют в ткани, где они превращаются в макрофагов ("больших пожирателей"). Макрофаги обнаруживаются во всех тканях тела и являются подвижными клетками, выполняющими различные функции. Как "клеткимусорщики" макрофаги избавляют организм от состарившихся клеток и их фрагментов. Будучи 2 клетками, которые представляют антиген Тлимфоцитам и первыми расщепляют и процессируют антиген, макрофаги играют решающую роль в инициировании иммунного ответа. Как секреторные клетки моноциты и макрофаги жизненно необходимы для регулирования иммунного ответа. Кроме того, указанные клетки экспрессируют рецепторы для лимфокинов, что позволяет им "активироваться" для того, чтобы бороться с микробами и раковыми клетками. Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) вызывается вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). ВИЧ разрушает хелперные Т-лимфоциты и "укрывается" в макрофагах и моноцитах. Для СПИДа характерно развитие разного рода нетипичных инфекций и редких форм рака. ВИЧ также повреждает ткани головного и спинного мозга, что приводит к прогрессирующему слабоумию. Когда ВИЧ инфицирует организм человека, его нуклеиновая кислота встраивается в состав ДНК клеток иммунной системы, и на протяжении неопределенного периода времени,который варьирует от 3 месяцев до 7 лет, у индивидуума какие-либо симптомы иммунодефицита могут и не проявляться. В некоторых случаях антитела к вирусу вырабатываются на достаточно низком уровне, который не позволяет их определить. Поскольку после заражения ВИЧ клинические симптомы могут обнаруживаться не сразу, а уровень антител может быть недостаточен для диагностики заболевания, термин"ВИЧ-инфекция" далее будет применяться как по отношению к процессу инфицирования вирусом, так и по отношению к развивающемуся впоследствии заболеванию, которое определяют как "заболевание, связанное с ВИЧ". Примерами заболеваний, связанных с ВИЧ, являются СПИД и СПИД-ассоциированный комплекс. После указанного выше инкубационного периода ВИЧ размножается внутри инфицированных клеток и в конце концов разрушает их с высвобождением вновь образовавшихся вирусов. В результате иммунная система больного повреждается, и его организм становится чувствительным к инфекциям, вызываемым условно-патогенными возбудителями, к которым люди со здоровой иммунной системой невосприимчивы. Как правило, в организме человека вирус СПИДа размножается, в результате чего человек погибает от тяжелой формы иммунодефицита. Интересно,что от СПИДа страдают только люди. Когда ВИЧ инфицирует животное из класса млекопитающих, например кролика, мышь, крысу или корову, у животного может наблюдаться временное разрушение Т-лимфоцитов. Однако, на 14 - 21 сутки после заражения у животного образуются антитела, атакующие вирус, и развития СПИДа не происходит. Таким образом, не существует модельной системы на животных для изучения СПИДа. 3 В настоящее время не разработаны ни схемы лечения, ни эффективные препараты для терапии СПИДа. Исследования в этой области продолжаются. Постоянно проводится поиск способов точной диагностики СПИДа на ранних стадиях инфицирования ВИЧ. Существующие коммерчески доступные диагностические тесты, как правило, направлены на выявление у индивидуумов антител к ВИЧ. Такие тесты не эффективны в интервале времени, составляющем примерно от 14 до 21 суток с начала инфицирования ВИЧ, до того момента, когда у индивидуума начинают вырабатываться антитела к вирусу. Следовательно, если индивидуум тестируется именно в данный период, то будут получены ложные отрицательные результаты. С другой стороны, некоторые из указанных тестов могут дать и ложные положительные результаты вследствие неспецифического связывания антител. Другие способы выявления вирусной инфекции могут быть основаны на гибридизации нуклеиновых кислот. Если не указано иное, приведенные ниже сведения соответствуют работе Stein, D.S., et.al., J. Infect Diseases, 165:352 (1992). Косвенным показателем инфицирования ВИЧ может служить результат подсчета клеток, обладающих маркером CD4+, т.е. хелперных Т-лимфоцитов. Гликопротеин 120 (др 120) оболочки ВИЧ-1 специфически связывается с CD4- рецептором,эффективно экспрессирующимся на поверхности хелперных Т- лимфоцитов и в меньшей степени на поверхности моноцитов и макрофагов. Клетки, имеющие CD4-рецепторы, относятся к субпопуляции клеток "хелперов/индукторов",играющих роль клеток-помощников при ответе В-лимфоцитов на антигены, экспрессирующиеся на клетках, несущих рецепторы класса II лейкоцитарного антигена человека (HLA), и индукторных клеток, которые побуждают Тлимфоциты к подавлению иммунного ответа. Избирательная утрата CD4+-лимфоцитов приводит к многочисленным нарушениям функционирования иммунной системы, ассоциированным с чувствительностью к инфекциям, вызываемым условно-патогенными возбудителями,что является отличительным признаком СПИДа. Р 24, коровый антиген ВИЧ, может быть определен до появления антител к ВИЧ. После появления антител к ВИЧ, которые можно детектировать с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (enzyme-linked immunosorbent assay - ELISA), p24 антиген обычно не обнаруживается, однако в некоторых случаях он персистирует в крови и часто может быть выявлен, когда заболевание уже развилось. Титры ВИЧ-1, выявляемые в плазме и культурах мононуклеарных клеток периферической крови, также быстро падают по мере того, как начинают обнаруживаться специфические антитела, что подтверждает существование, по крайней мере, 001100 4 преходящего эффективного иммунного ответа хозяина. К маркерам стимуляции иммунного ответа относится,в частности, 2 микроглобулин. У индивидуумов, прошедших стадию серологической конверсии, уменьшение количества CD4+-лимфoцитoв коррелирует с прогрессивным развитием СПИДа. Уровни 2 микроглобулина в сыворотке и антигена р 24 в крови также независимо друг от друга коррелируют с темпами развития заболевания. Наряду с выявление 2 подсчетомCD4+-клeтoк микроглобулина и антигена р 24 повышает точность прогноза прогрессивного развития СПИДа по сравнению с одним только подсчетом CD4+-лимфoцитoв. Однако у больных, прошедших стадию сероконверсии, редко наблюдается постоянное снижение процентного содержания CD4+лимфоцитов на протяжении последующих трех лет. У 38% больных в интервалах между посещениями врача были обнаружены стабильные или снижающиеся уровни процентного содержания CD4+-клеток, причем у 12% больных за таким снижением следовало выравнивание скоростей утраты CD4+-клeтoк. В целом, у 62% индивидуумов процентное снижение уровняCD4+-клeтoк отмечалось в течение всех трех лет наблюдения. При исследовании 306 ВИЧ-инфицированных сероположительных мужчин-гомосексуалистов, у которых временной момент сероконверсии был неизвестен, как подсчет CD4+лимфoцитoв (500 клеток/мкл), так и выявление антигена р 24 на протяжении 30 месяцев служили показателями развивающегося СПИДа. Как было обнаружено, повышенное количество СD8+-лимфоцитов в определенной степени можно считать прогностическим признаком данного заболевания. Для обеспечения лучшей корреляции конечных клинических показателей, таких, как выживаемость и прогрессивное развитие СПИДа, с суррогатными маркерами эффективности противовирусной терапии, анализируют дополнительные маркеры, такие как неоптерин и 2-микроглобулин, наряду с осуществлением других тестов, в том числе с подсчетом CD4+лимфoцитoв и определением антигена р 24. При исследовании больных СПИДом и индивидуумов со СПИД-ассоциированным комплексом (Jacobson, M.A., BNJ, 302:73 (1991,устойчивых к зидовудину - препарату для лечения СПИДа, и выживших на протяжении 12 недель, было обнаружено следующее. После контролирования трех факторов(возраста, диагностирования СПИДа, вычисления log концентрации неоптерина в сыворотке на момент постановки диагноза), определениеlog числа CD4+-лимфоцитов на протяжении 8-12 недель, но только в пределах указанного интер 5 вала времени, наилучшим образом прогнозировало дальнейшую выживаемость. Снижение концентрации 2-микроглобулина на 8-12 неделе также эффективно прогнозировало выживаемость и, в сочетании с определением log числаCD4+-лимфoцитoв, обеспечило наилучшую модель прогноза. Снижение уровня антигена р 24,концентрации неоптерина в сыворотке крови и показателей статуса Карновского (измерение функции при обычных активностях) не коррелировало удовлетворительным образом с выживаемостью больных при осуществлении терапии.Stein, D.S. и соавт. (см. выше) заключают,что изменения числа CD4+-лимфоцитов и изменения других суррогатных маркеров могут эффективно использоваться в качестве единственной конечной цели исследований противоретровирусной активности лекарственных препаратов или способа лечения больных на начальной стадии ВИЧ-инфекции. Сущность изобретения Одним из объектов изобретения является композиция для диагностики и лечения ВИЧинфекций, таких как СПИД и СПИДассоциированный комплекс. Данная композиция представляет собой фракцию обогащенного лизином гистонового тимусного фактора (TF) млекопитающих, которая способна к преципитации при контактировании с сывороткой крови человека, неинфицированного ВИЧ, с образованием одной непрерывной дуги преципитации в геле после двумерного электрофореза рядом с областью расположения -, 1- и 2 макроглобулинов, и не способна к преципитации при контактировании с сывороткой крови человека, инфицированного ВИЧ, с образованием одной непрерывной дуги преципитации в геле после двумерного электрофореза рядом с областью расположения -, 1- и 2 макроглобулинов. Фракция TF находится в метилированной или неметилированной форме,имеет рН в интервале от 7,64 до 8,6 и изоэлектрическую точку около 5,6, причем молекулярная масса метилированного TF составляет около 28 килодальтон при определении методом электрофореза в 11%-ном полиакриламидном геле в невосстанавливающих условиях в присутствии додецилсульфата натрия, а молекулярная масса неметилированного TF составляет около 35 килодальтон при определении методом электрофореза в 11%-ном полиакриламидном геле в невосстанавливающих условиях в присутствии додецилсульфата натрия. Другим объектом данного изобретения является способ получения фракции TF, включающий выделение обогащенных лизином гистоновых белков из ядер клеток тимуса млекопитающих с использованием пепсина, осуществление катионообменной хроматографии указанных гистоновых белков, элюцию белков соле 001100 6 вым раствором и сбор нужной фракции. Катионообменную хроматографию осуществляют на колонке с карбоксиметилцеллюлозой, а элюцию нужной фракции проводят линейным градиентом хлорида натрия при рН 6,8. Следующим объектом изобретения является способ диагностики, т.е. выявления ВИЧинфекции у человека, включающий получение образца биологической жидкости от индивидуума, подозреваемого на наличие ВИЧинфекции, обеспечение контактирования указанного образца с фракцией TF, сопоставление характера преципитации TF и aTF в исследуемом образце с характером преципитации TF иaTF в образце, полученном от ВИЧинфицированного индивидуума, путем выявления локализации продуктов преципитации по отношению к области расположения -, 1- и 2-макроглобулинов. Отсутствие дуги преципитации или наличие прерывистой дуги преципитации в пределах или вне области расположения-, 1- и 2-макроглобулинов свидетельствует о наличии ВИЧ-инфекции у индивидуума. Изобретение также относится к способам лечения ВИЧ-инфекций и вакцинирования, в которых используется указанная композиция, и к устройствам для выявления ВИЧ-инфекции invitro, в которых используется такая композиция. Перечень фигур чертежей На фиг. 1 приведена хроматограмма препарата тимусного фактора (TF). На фиг. 2 показана пластина геля после осуществления двумерного электрофореза в первом направлении. На фиг. 3 показана пластина геля после осуществления двумерного электрофореза во втором направлении. На фиг. 4-11 приведены фотографии гелей после осуществления двумерного электрофореза, показывающие характер преципитации TF с образцами сыворотки крови ВИЧ-положительных носителей или больных СПИДом людей, а также здоровых людей. На фиг. 12 графически представлены данные фиг. 7 с указанием расстояний, определенных в ходе соответствующего анализа. На фиг. 13 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза,показывающая характер преципитации TF с образцом сыворотки ВИЧ-отрицательного индивидуума. На фиг. 14 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза,показывающая характер преципитации TF с образцом сыворотки ВИЧ-положительного индивидуума. На фиг. 15 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза образца сыворотки, полученного 4 мая 1995 года от тестируемого индивидуума, в соответствии с примером 3. 7 На фиг. 16 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза образца сыворотки, полученного 11 мая 1995 года от тестируемого индивидуума, в соответствии с примером 3. На фиг. 17 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза образца сыворотки, полученного 18 мая 1995 года от тестируемого индивидуума, в соответствии с примером 3. На фиг. 18 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза образца сыворотки, полученного 24 мая 1995 года от тестируемого индивидуума, в соответствии с примером 3. На фиг. 19 приведена фотография геля после осуществления двумерного электрофореза образца сыворотки, полученного 31 мая 1995 года от тестируемого индивидуума, в соответствии с примером 3. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Данное изобретение относится к белку, называемому здесь тимусным фактором (TF), который можно использовать для выявления ВИЧ,вызывающего расщепление другого белка, называемого aTF, который способен связываться сTF. Предполагается, что ВИЧ вызывает расщепление aTF. Следовательно, при инфицировании ВИЧ в организме будут обнаруживаться фрагменты aTF, а при отсутствии инфицирования ВИЧ aTF сохранится в нативной форме. Далее предполагается, что на ранней стадии инфекции количество фрагментированного aTF меньше, чем на более поздней стадии. При этом размеры фрагментов, выявляемых на более поздних стадиях инфекции, меньше по сравнению с размерами фрагментов, выявляемых на ранних стадиях инфекции. Таким образом, обнаружение фрагментов aTF свидетельствует об инфицировании ВИЧ. Количество и размеры фрагментов aTF служат показателем стадии развития инфекции. ATF и его фрагменты могут быть определены по характеру их преципитации с TF, в частности, путем выявления локализации продуктов преципитации по отношению к -,1-, 2-макроглобулинам, например, при осуществлении гель-электрофореза в соответствии с примером 2. При осуществлении двумерного гельэлектрофореза было обнаружено, что TF взаимодействует с сывороткой крови человека, неинфицированного ВИЧ, и формирует непрерывную дугу преципитации с -, 1- и 2 макроглобулинами сыворотки крови. Дуга преципитации прерывается или отсутствует рядом с одним или более макроглобулинами, когда TF взаимодействует с сывороткой крови людей,инфицированных ВИЧ. Предполагается, что TF преципитирует aTF, обнаруживаемый во фрак 001100 8 ции -, 1-, 2-макроглобулинов здоровых людей, который связывает -, 1-, 2-макроглобулины, и поэтому дуга преципитации непрерывна рядом с -, 1-, 2-макроглобулинами. При наличии у человека ВИЧ-инфекции aTF фрагментирован, и это вызывает образование прерывистой дуги преципитации или отсутствие дуг преципитации с макроглобулинами. Таким образом, TF вступает в реакцию преципитации с молекулами aTF, содержащимися в биологических образцах человека. Примерами биологических образцов могут служить кровь, сыворотка и плазма. Помимо двумерного гель-электрофореза, описанного в примере 2,характер реакции преципитации может быть определен различными методами, известными специалисту в данной области, в том числе методами, применяемыми для выявления характера иммунопреципитации между антителами и соответствующими антигенами. Некоторые из указанных методов охарактеризованы в работахTF также можно использовать для лечения ВИЧ-инфекций, таких как СПИД и СПИДассоциированный комплекс. TF может существовать в метилированной и неметилированной форме. Используемый в данном изобретении термин "TF", если не указано, что TF модифицирован (например, метилирован), относится как к метилированной, так и к неметилированной форме TF. Данное изобретение также относится к способам получения TF, в частности, из клеток тимуса. Предпочтительно используют клетки тимуса млекопитающего, но не человека, независимо оттого, инфицировано оно ВИЧ или нет,поскольку инфицированные ВИЧ млекопитающие имеют повышенные титры TF. Примерами таких животных являются мартышки, гориллы,шимпанзе, морские свинки, коровы, кролики,собаки, мыши и крысы. Как метилированная, так и неметилированная формы TF могут связываться с aTF и,таким образом, использоваться для диагностики ВИЧ-инфекции, в частности СПИДа. Однако, по крайней мере, при тестировании сыворотки крови людей, метилированная форма TF обнаруживает меньшее неспецифическое связывание с другими белками по сравнению с неметилированной формой TF. Таким образом, использова 9 ние метилированной формы TF предпочтительнее. Неметилированная форма TF может быть метилирована химическим путем с помощью известных способов, например, как описано в примере 1. Метилированная форма TF может использоваться в качестве лекарственного препарата для лечения ВИЧ-инфекции, в частности,СПИДа.TF предпочтительно выделяют и очищают из клеток тимуса не позднее, чем через 4 ч после умерщвления животных, относящихся к классу млекопитающих, таких как мартышки,гориллы, шимпанзе, морские свинки, коровы,кролики, собаки, мыши и крысы. Ядра клеток тимуса выделяют с помощью известного метода. Часть гистонных фракций, обогащенных лизином, экстрагируют при использовании пепсина для расщепления белков, согласно патенту США 4415 553. Для экстрагирования TF другие методы, основанные на расщеплении белков с помощью трипсина, папаина и BrCN, по видимому, не эффективны. Обогащенную белком фракцию изолята очищают катионообменной хроматографией. Белки фракций TF (метилированные и неметилированные) могут быть сконцентрированы при использовании какого-либо хорошо известного способа, например, высаливанием, в частности, с помощью сульфата аммония, или ультрафильтрацией. Если TF концентрируют осаждением, предпочтительно затем ресуспендировать его в надлежащим образом сбалансированном физиологическом растворе, содержащем ингибитор (ингибиторы) протеаз. Применение TF в качестве терапевтического средства для лечения инфекций, вызванных ВИЧ Авторы изобретения обнаружили, что в организме животных класса млекопитающих,например, коров, которые были инфицированы ВИЧ, но у которых не развился СПИД, выявляется интактный TF. В соответствии с данным изобретением, утверждается, что TF играет определенную роль в предупреждении прогрессивного развития ВИЧ-инфекций, в частности СПИДа. Следовательно, ТF мог бы использоваться в качестве лекарственного средства для лечения людей, инфицированных ВИЧ. Предпочтительно, чтобы TF был выделен из организма млекопитающих, но не человека, у которых после инфицирования ВИЧ СПИД не развивается. Предпочтительно также использовать метилированную форму TF. Более того, в ходе лечения предпочтительно спровоцировать иммунный ответ у инфицированного человека. С этой точки зрения желательно, чтобы TF вводился в организм вместе с адъювантом, или был химически конъюгирован с иммуногенным носителем, что способствует генерации антительного ответа у больного. Примерами иммуногенных носителей являются гемоцианин моллюска фиссуреллы и бычий сывороточный альбумин. 10 Согласно одному из аспектов данного изобретения, TF используется для вакцинирования,терапии или облегчения состояния инфицированных ВИЧ людей, особенно при развитии СПИДа и СПИД-ассоциированного комплекса. Например, TF необходимой степени очистки подготавливают к применению путем смешивания его с адъювантами или физиологически приемлемыми носителями, т.е. такими носителями, которые нетоксичны для реципиентов в используемых дозах и концентрациях. Хотя TF желательно применять вместе с адъювантом, в тех случаях, когда первая вакцинация осуществляется одним TF, повторная вакцинация также может быть проведена без адъюванта. Инъекции (внутримышечные или подкожные), согласно данному изобретению, являются основным способом применения вакцин с лечебной целью. Однако, может быть осуществлено внутривенное введение, введение через катетер или с помощью других хирургических приспособлений. Альтернативным подходом является использование таблеток и им подобных средств, жидких составов и лиофилизированных или аэрозольных препаратов, предназначенных для ингаляции. Жидкие составы могут быть использованы после их приготовления из порошкообразных составов. Кроме того, TF может вводиться в организм с помощью микросфер, липосом и других систем доставки лекарственных препаратов на основе микрочастиц, а также с помощью систем, обеспечивающих постепенное высвобождение лекарственных веществ в различных тканях, в том числе в крови. Доза TF зависит от свойств применяемого состава, например, его способности к связыванию и периода полужизни в плазме in vivo, концентрации TF в препарате, способа введения и участка введения конкретной дозы, клинической толерантности больного, его физического состояния и других факторов, находящихся в компетенции врача. В ходе последовательных вакцинаций могут применяться различные дозы препарата; практикующий врач может осуществить первоначальное введение одной дозы с последующими введениями меньших доз TF. Ниже приведен пример состава, содержащего ТF, его дозировки и схемы применения. Больному вводится внутримышечно или подкожно 8 мг TF (предпочтительно 2 мл состава,содержащего 4 мг/мл TF в физиологически приемлемом растворе) или 57 мкг белкового препарата TF на 1 кг веса тела. Каждый курс лечения состоит из 16 инъекций, с двумяинъекциями в неделю, выполняемыми два дня подряд, с общей длительностью 8 недель. Состояние больного постоянно контролируется, как описано далее. Через три месяца после завершающей инъекции, если состояние больного существенным образом не улучшается, курс лечения повторяют. Он может быть продолжен до тех пор, 11 пока не будет получен удовлетворительный результат, например, приостановка или замедление прогрессивного развития заболевания, купирование заболевания или излечение. Предпочтительно, чтобы TF использовался совместно с гидроксидом алюминия в качестве адъюванта. Итоговый состав с TF содержит в расчете на 1 мл: 4 мг TF, 0,016 М AlPO4 (или 0,5 мг Аl3+),0,14 М NaCl, 0,004 М CH3COONa, 0,004 М KCl,pH 6,2. В альтернативном варианте ВИЧинфицированный больной или неинфицированный индивидуум могут быть вакцинированы пятью месяцами позже, более предпочтительно,в период от шести месяцев до двух лет, и еще более предпочтительно, в период от 8 месяцев до одного года для усиления "иммунологической памяти". См. Anderson et al., J. InfectiousDiseases, 160(6): 960-969 (1989). В целом, редкие иммунизации TF, проводимые с относительно длительными интервалами, более предпочтительны, чем частые иммунизации, с точки зрения генерации максимального иммунного ответа и защитного эффекта.TF можно применять различным образом по отношению к больным разных групп. TF может быть использован и для вакцинирования людей, которые могут подвергнуться риску заражения ВИЧ; кроме того, желательно вакцинировать сероположительных индивидуумов и лиц, ранее контактировавших с ВИЧ.TF может использоваться в комбинации с другими антигенами в виде определенной инокуляционной смеси. Кроме того, может быть осуществлена серия последовательных прививок, в которых используются одинаковые или различные препараты антигенов ВИЧ или другие вакцины. Адекватность выбранных терапевтических параметров, например дозы, схемы применения,используемого адъюванта и т.д. определяется при взятии образцов крови у индивидуума и выявления в сыворотке титров антител и/или титров Т-лимфоцитов в ходе курса лечения. Мониторинг титра Т-лимфоцитов может осуществляться обычными способами. Например, Тлимфоциты могут быть выявлены по образованию Е-розеток, как описано в работах Bach, J.F.,Contemporary Topics in Immunology, Vol. 2:York, 1973; Hoffman, Т.Kunkel, H.G., и Kaplan, M.e., et al.; обе статьи опубликованы в InPress, New York (1976). Например, интенсивность образования Т-клеточных розеток может быть оценена после третьей недели, но перед десятой неделей лечения с помощью TF. Формирование розеток более чем на 65%, свидетельствует об эффективном иммунном ответе,опосредованном лимфоцитами. Другим индикатором титра Т-лимфоцитов является aTF, обра 001100 12 зующийся в организме больного, который может быть выявлен с помощью двумерного электрофореза, как описано далее. Кроме того, клиническое состояние больного может постоянно контролироваться для обнаружения ожидаемого эффекта, например,противоинфекционного. Если достигнуто неадекватное противоинфекционное действие, то больной может быть подвергнут дальнейшему лечению с помощью TF, и параметры лечения могут быть модифицированы; например, для усиления иммунного ответа могут быть использованы такие способы, как повышение количества TF и/или адъюванта, связывание TF в комплекс с носителем или его конъюгирование с иммуногенным белком, а также изменение способа применения.TF может использоваться наряду с другими фармакологическими препаратами, предназначенными для терапии ВИЧ-инфекций, таких как СПИД и СПИД-ассоциированный комплекс. Примерами таких фармакологических препаратов являются азидотимидин, антибиотики, иммуномодуляторы, например интерферон, противовоспалительные и противоопухолевые препараты. Диагностические устройства для выявления ВИЧ-инфекций В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения заявлено диагностическое устройство, используемое для выявления in vitro ВИЧ-инфекций. Устройство сконструировано таким образом, чтобы обеспечить возможность определения взаимодействия между TF и aTF в биологическом образце. Более предпочтительно, в том случае, когда биологическим образцом являются кровь, сыворотка или плазма, чтобы устройство позволяло определять характер преципитации TF с -, 1-, 2-макроглобулинами,содержащимися в образце. Поэтому предпочтительно, чтобы устройство содержало емкости для TF и для тест-образца. Поскольку двумерный гель-электрофорез, как описано далее в примере 2, является предпочтительным диагностическим методом, наиболее желательно, чтобы устройство состояло из гелеобразной подложки с гнездами для размещения TF и тестобразца, например, образца сыворотки. Кроме того, предпочтительно, чтобы устройство было доукомплектовано набором реагентов, необходимых для осуществления диагностики, таких как буферный раствор и TF, содержащихся в специальных контейнерах. Предпочтительно,чтобы устройство имело свой собственный источник электроэнергии, такой как батарейка,для осуществления двумерного электрофореза. Помимо перечисленного, предпочтительно,чтобы устройство было сконструировано таким образом, чтобы его можно было подключать к внешнему источнику электроэнергии. 13 Приведенные ниже примеры предназначены для иллюстрации данного изобретения и не ограничивают его объема. Пример 1. Выделение и очистка тимусного фактора. Указанный пример относится к выделению, очистке и описанию свойств TF, выделенного из тимуса теленка через 4 ч после забоя животного. Экстракция из клеток тимуса обогащенной лизином гистоновой фракции с помощью расщепления пепсином Все буферы и растворы, используемые для осуществления эксперимента, стерилизуют фильтрованием. При необходимости рН буферов доводят с помощью 0,2 н. NaOH или 0,1 н.HCl. Все химические реактивы для приготовления буферов и растворов, включая дистиллированную воду, соответствуют требованиям фармакопеи США. Извлекают тимус и соответствующие соединительные ткани не позднее, чем в течение 4 ч после забоя теленка. Ткани промывают раствором, содержащим 0,14 М NaCl, 0,005 М Na3 ЭДТА, при 4 С в течение 5 мин. Раствор для промывания выливают и ткани промывают второй раз аналогичным образом. После удаления раствора для промывания ткани взвешивают. Затем их гомогенизируют в растворе, содержащем 0,14 М NaCl, 0,005 М KCl, 0,005 М MgCl2,0,003 М CaCl2, 0,15 М ТРИС-HCl, рН 7,6, 0,25 М сахарозы, с помощью тканевого гомогенизатора(Brinkman Polytron Homogenizer, Brinkman Instruments, lnc.,Westbury, New York) при 4 С; при этом число оборотов в минуту и длительность гомогенизации для удаления ядер клеток, соответствуют рекомендациям производителя. Соотношение ткани и буфера составляет 1:4 (по весу). Тканевой гомогенат затем фильтруют через марлевый фильтр под вакуумом. Фильтрат центрифугируют в режиме 1 000 g при 4 С в течение 90 мин. Супернатант удаляют. Осадок ресуспендируют в растворе, содержащем 0,008 М NaCl, 0,003 М МgCl2, 0,003 М СаСl2, 0,08 МNaH2PO4, 0,002 М ТРИС-HCl, 0,25 М сахарозы,рН 5,2. Отношение осадка к буферу составляет 1:4 (по весу). Полученную суспензию гомогенизируют в химическом стакане с магнитной мешалкой при 200 об/мин и 4 С в течение 5 мин. Затем гомогенат центрифугируют при 3 500 g и 4 С в течение 60 мин. Супернатант удаляют. Осадок повторно суспендируют в растворе, содержащем 0,014 М NaCl, 0,002 М MgCl2, 0,001 М СаСl2, 0,001 М Na3-ЭДТА, 0,002 М ТРИС-НСl и 0,25 М сахарозы, рН 4,2. Отношение осадка к буферу составляет 1:4 (по весу). Полученную суспензию гомогенизируют в химическом стакане с магнитной мешалкой при 200 об/мин и 4 С в течение 5 мин. Затем гомогенат центрифугируют при 8 000 g и 4 С в течение 60 мин. Супернатант удаляют. Осадок повторно суспенди 001100Na2HPO4, рН 7,4. Полученную суспензию гомогенизируют в химическом стакане с магнитной мешалкой при 200 об/мин и 4 С в течение 15 мин. Затем гомогенат центрифугируют при 12 000 g и 4 С в течение 60 мин. Супернатант удаляют. Осадок взвешивают и повторно суспендируют в 0,05 МNa3C6H5O7, 0,05 М CH3COONa, 0,1 н. HCl, рН 2,8,при соотношении осадка и буфера 1:4 (по весу). Полученную суспензию гомогенизируют с помощью тканевого гомогенизатора при 1 000 об/мин и 4 С в течение одной минуты. Пепсин (каталожный номер Р 7 000, SigmaChemical Company, St. Louis, Missouri), разбавленный дистиллированной водой в соотношении 1:10 000, с активностью 800-2 500 единиц на 1 мг белка, добавляют к гомогенату при весовом соотношении пепсина (порошка) и осадка 100:1,8. Смесь помещают в химический стакан и перемешивают в атмосфере азота на магнитной мешалке при 45 об/мин и 4 С в течение 12 ч. Полученную смесь затем центрифугируют при 12 000 g и 4 С в течение 60 мин. Осадок удаляют. Супернатант отбирают и осаждают раствором, содержащим насыщенный (NH4)2SO4. Одну часть супернатанта смешивают с одной частью раствора и перемешивают на магнитной мешалке при 600 об/мин и 4 С в течение 6 ч. Затем смесь центрифугируют при 12 000 g и 4 С в течение 60 мин. Супернатант удаляют. Осадок растворяют в растворе, содержащем минимальное количество 0,1 М NaCl, 0,1 М СН 3 СООNа и 0,02 М тиодигликоля. Полученный раствор диализуют против раствора 0,1 М NaCl, 0,1 МCH3COONa, pH 6,4, до тех пор, пока сульфат аммония не удалится из диализата. Белок в диализате определяют методом Лоури. Раствор разбавляют до получения концентрации белка, составляющей 2 мг/мл. PH раствора затем доводят до значения 7,2 с помощью 0,1 н. NaOH. Раствор 0,2 М бромуксусной кислоты готовят отдельно путем растворения бромуксуcной кислоты в 10 мл или менее воды,и pH доводят до 7,0 с помощью 0,1 н. NaOH. Полученный раствор бромуксусной кислоты добавляют к раствору белка и смесь перемешивают с помощью магнитной мешалки в течение 48 ч в атмосфере азота. В ходе реакции pH смеси поддерживают на значении 7,2. По окончании реакции повторяют стадию осаждения сульфатом аммония до стадии измерения концентрации белка по методу Лоури. При необходимости конечный раствор разбавляют или кон 15 центрируют до получения концентрации TF,равной 4 мг/мл в расчете на 200 г клеток тимуса теленка. Хроматография на колонке с карбоксиметилцеллюлозой Один миллилитр полученного, как указано выше, раствора TF, содержащего 4 мг белка,наносят на колонку с карбоксиметилцеллюлозой размером 0,9 х 14 см, уравновешенную 0,05 М ацетатом натрия. Колонку промывают и элюируют линейным градиентом хлорида натрия в 0,05 М растворе ацетата натрия, pH 6,8. Для получения градиента используют сифон для соединения двух колб одинакового размера и формы. Одна колба содержит 50 мл 0,05 М раствора ацетата натрия, pH 6,8, другая колба содержит 50 мл 0,05 М раствора ацетата натрия с добавлением 0,5 М хлорида натрия, pH 6,8. Только одну колбу, содержащую 0,5 М хлорида натрия, присоединяют к колонке. Интервал градиента составляет от 0 до 0,5 М хлорида натрия. Для обеспечения эффективного перемешивания обе колбы необходимо энергично встряхивать. Отбирают фракции объемом 1 мл. Элюат исследуют на проточном спектрометре, измеряя поглощение при 280 нм. Во фракции элюата 45 определяют содержание белка (см. Рис.1). TFфракцию центрифугируют при 10 000 об/мин с выявлением двух полос преципитации. Фракцию 45 собирают и концентрируют путем осаждения сульфатом аммония. Сконцентрированную фракцию далее анализируют следующим образом. 1) Определение молекулярной массы. Молекулярную массу полученной TFфракции определяют путем окрашивания серебром 11%-ного полиакриламидного геля после осуществления электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия в невосстанавливающих условиях по методу Лэммли (Laemmli,U.K., Nature, 227:680 (1970 в соответствии с методикой, описанной в Sigma Technical BulletinMWS-877L (Sigma Chemical Company, St. Louis,Missouri). Быстродействующий серебряный краситель (RSK-1, Sigma Chemical Company) используют для окрашивания белков. Кроме того,используют низкомолекулярный стандарт (М 5630, Sigma Chemical Company), содержащий смесь следующих пяти белков (общая концентрация белков составляет 1 нг/мл): бычьего сывороточного альбумина (мол. масса 66 000); фумарозы из сердца свиньи (мол. масса 48 500); карбонатдегидрогеназы бычьих эритроцитов(мол. масса 29 000); -лактоглобулина коровьего молока (мол. масса 18 400); -лактоальбумина коровьего молока (мол. масса 14 200). В геле выявляют две полосы. Большая полоса соответствует неметилированному TF, который составляет 98% TF-фракции. Меньшая полоса соответствует метилированному TF, который составляет оставшиеся 2% TF-фракции. 16 При использовании калибровочной кривой белка определяют, что неметилированный ТF имеет молекулярную массу около 35 килодальтон (кДа), а метилированный - около 28 кДа. КомпозицияТF (включая метилированный и неметилированный ТF) имеет рН приблизительно от 7,64 до 8,6. Изоэлектрическая точка композиции TF составляет около 5,60,1, как было определено иммуноэлектрическим фокусированием. Метилирование белка, содержащегося в TFфракции Получают препарат метилированного TF для последующего использования, как указано в приведенных ниже примерах. Метилирование осуществляют следующим образом.TF смешивают с достаточным количеством СН 2 ВrСООН для получения 0,2 М раствора СН 2 ВrСООН. Например, 2,78 г СН 2 ВrСООН растворяют в 1 мл дистиллированной воды и добавляют к 100 мл раствора TF, содержащего 700 мг TF (7 мг/мл). РН смеси устанавливают и поддерживают на значении 7,24 с помощью 0,1 М NaOH. Смесь инкубируют в течение 6-8 ч. Белок TF в полученной водной фракции концентрируют путем осаждения сульфатом аммония с помощью известных методик. К 10 мл метилированной TF-фракции добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония. Смесь выдерживают в течение 12 ч в холодильнике и затем центрифугируют при 20 000 об/мин в течение 60 мин. Осадок собирают и растворяют в буфере, содержащем 0,1 М NaCl,0,1 М цитрат натрия, 0,02 М тиодигликоль. Затем смесь в течение 24 ч подвергают диализу против того же самого буфера для удаления сульфата аммония. Пример 2. Диагностика ВИЧ-инфекций. Метилированный TF, полученный, как описано в примере 1, используют для выявления носителей ВИЧ при тестировании соответствующих образцов сыворотки крови. Эксперимент проводят следующим образом. Образцы сыворотки крови людей, используемые для тестирования, как указано в данном примере, получают от Фонда борьбы со СПИДом (AIDS Health Foundation) из ЛосАнджелеса, Калифорния. В лабораториях Фонда образцы тестируют с помощью коммерчески доступной системы на основе ELISA и Вестернблоттинга, которые позволяют обнаружить у индивидуумов антитела к ВИЧ. В первую очередь используют ELISA. Если с помощьюELISA диагностируют ВИЧ-инфекцию (ВИЧположительная реакция), Вестерн-блоттинг проводят в качестве дополнительного теста. При осуществлении настоящего изобретения образцы тестируют методом двумерного электрофореза. Используют установку для проведения электрофореза в мини-гелях (номер Е 0638 по каталогу Sigma Chemical Company). Установка содержит камеру для буфера, вмещаю 17 щую 800 мл буфера, и перистальтический насос для рециркуляции буфера. Источник питания характеризуется интервалом напряжения от 20 до 240 В, интервалом тока от 0 до 100 мА и имеет выходы постоянного тока и напряжения. Концентрация агарозного геля составляет 1% (каталожный номер агарозы А 4679, SigmaChemical Company). Буфер для геля содержит 0,0257 М ТРИС-НСl, 0,009 М декагидратного бората натрия, 0,067 М глицина, 0,0034 М тригидратного ацетата натрия, 0,015 М 2 меркаптоэтанола и 0,015 М тиодигликоля, рН 7,64. На подложку для гель-электрофореза наносят 14,25 мл 1%-ной расплавленной агарозы. Затвердевший гель имеет толщину 0,2 см и размеры 7,5 см х 7,5 см. Поверх затвердевшего геля наносят буфер указанного выше состава. С помощью иглы от шприца в геле проделывают отверстие радиусом 0,9 мм (диаметр иглы составляет 0,9 мм) и вносят 5 мкл образца сыворотки. Для осуществления электрофореза в первом направлении с целью разделения сывороточных белков используют напряжение 9 В/см и плотность тока 27 мА/см 2; напряжение подают в течение 90 мин при температуре 14 С. На фиг. 2 схематически показано, как осуществляют электрофорез в первом направлении, единицей обозначена лунка для образца сыворотки. Для осуществления электрофореза во втором направлении пластину геля поворачивают на 90 и вырезают из геля канавку размером 0,9 х 45 мм со стороны нового положения катода между новым положением катода и лункой, содержащей сыворотку крови, и перпендикулярно линии катоданод. На фиг. 3 схематически показано положение пластины геля при осуществлении электрофореза во втором направлении, цифрой 2 обозначена канавка. Канавку заполняют 100 мкл раствора метилированного TF, полученного, как указано в примере 1. Используют те же самые напряжение и плотность тока, что и при осуществлении электрофореза в первом направлении,и проводят электрофорез во втором направлении в течение 50 мин при 14 С. На протяжении всего эксперимента скорость рециркуляции буфера составляет 25 мл/мин. После окончания электрофореза отключают напряжение и через несколько секунд извлекают гель. Затем гель одновременно фиксируют и окрашивают в течение 45 мин в растворе, содержащем: 3 части метанола, 1 часть этанола, 12 % уксусной кислоты и 0,1 % бромфенолового синего (каталожный номер В-8026, Sigma Chemical Company). Гель обесцвечивают путем вымачивания в дистиллированной воде в течение 3 -4 ч и высушивают. Для определения молекулярной массы осуществляют независимый контрольный двумерный гель-электрофорез в тех же условиях с использованием вместо сыворотки и TF, как описано в примере 1, низкомолекулярных маркеров, выявляемых при окрашивании серебром. 18 Локализация сывороточных белков при осуществлении двумерного гель-электрофореза показана на фиг. 4. Можно видеть, что иммуноглобулиновый краситель 3 выявляется рядом с лункой 1, содержащей образец сыворотки крови пациента, то же самое относится к макроглобулину 4. На большем расстоянии от лунки с сывороткой выявляются 2-макроглобулин 5, 1-макроглобулин 6 и альбумин 7. Преципитацию TF с aTF в образцах сыворотки крови выявляют по образованию тонких непрозрачных линий (дуг преципитации). Форма указанных дуг преципитации свидетельствует о наличии или отсутствии у тестируемого индивидуума ВИЧ-инфекции. Непрерывная дуга преципитации 8, расположенная рядом с -, 2- и 1-макроглобулинами, как показано на фиг. 4, свидетельствует о том, что исследуемый индивидуум не инфицирован ВИЧ; прерывистая (т.е. ломаная) дуга преципитации, расположенная рядом с -, 1- и 2-макроглобулинами, и/или дуга(дуги), которая(ые) не расположена(ы) рядом с каким-либо или со всеми макроглобулинами, свидетельствуют о наличии ВИЧ-инфекции. По мере прогрессивного развития у исследуемого индивидуума ВИЧ-инфекции (например, СПИДа) преципитация уменьшается, и дуги преципитации становятся менее видимыми. Приведенные выше наблюдения позволяют предположить, что aTF, обнаруживаемый в сыворотке крови здоровых людей, расщепляется по мере развития ВИЧ- инфекции, о чем свидетельствуют прерывистые дуги преципитации между TF и фрагментированным aTF. Фрагменты имеют меньшую молекулярную массу, чем нативный aTF, и поэтому под действием электрического поля мигрируют на более далекое расстояние. Таким образом, дуги преципитации локализуются дальше от канавки с TF. Не желая ограничиваться только высказанной гипотезой,авторы изобретения полагают, что aTF должно быть расщепляется на большее число фрагментов по мере прогрессирующего развития СПИДа, связанного с ВИЧ заболевания или ВИЧинфекции, и поэтому появляются более прерывистые дуги преципитации на большем расстоянии от канавки, содержащей TF. Таким образом,форма дуг преципитации также может служить показателем степени прогрессирования заболевания. На основании указанного выше результаты гель-электрофореза (см. фотографии гелей на соответствующих рисунках) могут быть интерпретированы следующим образом: На фиг. 5 показаны прерывистые дуги преципитации 9, которые свидетельствуют о том,что индивидуум является ВИЧположительным. Сыворотка крови данного индивидуума была признана ВИЧ-положительной при использовании как ELISA, так и способа, 19 заявленного в соответствии с данным изобретением. На момент взятия образца крови у индивидуума не обнаруживалось каких-либо клинических симптомов СПИДа. На фиг. 6 - 9 отмечено положение 10, где локализован -макроглобулин, и к которому могла бы примыкать дуга преципитации, образующаяся при исследовании образца плазмы крови здорового индивидуума (как на фиг. 4),причем указанная дуга была бы непрерывной и расположенной рядом с -, 1- и 2 макроглобулинами (как и на фиг. 4). Напротив,на фиг. 6-9 дуги преципитации 11, образовавшиеся при тестировании образцов крови исследуемых индивидуумов, являются прерывистыми и не располагаются рядом с -, 1- и 2 макроглобулинами, а выявляются ниже положения 10. Локализация дуг преципитации при исследовании образцов крови данных индивидуумов соответствует веществам с меньшей мол. массой по сравнению с локализацией дуг преципитации при исследовании образца крови здорового индивидуума. Прерывистость дуг преципитации, а также их соответствие веществам с меньшей мол. массой свидетельствуют о том, что указанные индивидуумы являются ВИЧ-положительными. За три-шесть месяцев до проведения описываемых тестов образцы крови этих же индивидуумов были исследованы с помощью ELISA и признаны ВИЧ-положительными. Для тестирования в соответствии с заявленным изобретением использовали те же самые сыворотки. Во время описанных исследований у индивидуумов проявлялись клинические симптомы СПИДа. Тяжесть заболевания больных была следующей: фиг. 6 (самый тяжелый случай СПИДа), фиг. 7, фиг. 8 (менее тяжелые случаи СПИДа) и фиг. 9 ( наименее тяжелый случай). Наблюдаемая тяжесть клинических симптомов заболевания соответствовала характеру преципитации, показанному на фиг. 6-9. В гелях с дугами преципитации, расположенными на большем расстоянии по сравнению с ожидаемым при тестировании образцов крови здорового индивидуума, выявляются более мелкие фрагменты aTF (и таким образом диагностируются более тяжелые случаи СПИДа), чем в гелях с дугами преципитации, характер расположения которых в наибольшей степени совпадает с таковым, ожидаемым при тестировании образцов крови здорового индивидуума. Указанное расстояние может быть определено при измерении относительного расстояния по вертикали между первой дугой преципитации, т.е. дугой, наиболее близко прилегающей к лунке 1,содержащей сыворотку, и дугой преципитации,локализующейся ожидаемым образом при исследовании образца крови здорового индивидуума. Чем больше относительное расстояние,как по горизонтали, так и по вертикали, между дугой преципитации в исследуемом образце и 20 дугой преципитации в образце, полученном от здорового индивидуума, тем выше тяжесть заболевания. Кроме того, если нельзя провести различия между образцами сыворотки крови,полученными от двух индивидуумов, больных СПИДом, то в том случае, когда выявляются более интенсивные и менее многочисленные дуги, тяжесть заболевания меньше. Пониженное число дуг преципитации и более интенсивная преципитация свидетельствуют о том, что aTF фрагментирован в меньшей степени и его уровень выше, что коррелирует с менее тяжелой стадией заболевания СПИДом. Пример использования первого теста иллюстрируется фиг. 6-10. Для адекватного сопоставления указанных рисунков на всех из них в качестве отправной была выбрана фиксированная точка, соответствующая лунке 1, содержащей образец сыворотки (точка 14). Первая дуга преципитации является дугой, наиболее близко прилегающей по вертикали 15 к отправной точке 14 (см. фиг. 12). Поскольку дуга преципитации в образце, полученном от здорового индивидуума, протягивается от участков локализации - и 1-макроглобулинов до участка локализации 2-макроглобулина (как показано на фиг. 4), специалист в данной области исследований может измерить относительное расстояние от участков локализации либо - и 1 макроглобулинов, либо 2-макроглобулина. В указанном случае выбирают участок локализации -макроглобулина 10. Как по вертикали 17,так и по горизонтали 16, расстояния между дугой и участком локализации -макроглобулина 10 (см. фиг. 12) были измерены и сопоставлены на всех рисунках. Индивидуумы, в образцах которых при осуществлении преципитации в геле расстояния по вертикали 17 и/или горизонтали 16 между преципитационной дугой и участком локализации -макроглобулина 10 были больше, имели более тяжелую форму заболевания, чем те индивидуумы, у которых эти расстояния были меньше. Сравнение результатов исследований показало следующее: фиг. 6 (наиболее тяжелый случай СПИДа), фиг. 7, фиг. 8 и фиг. 9 (наименее тяжелый случай СПИДа соответствует фиг. 9). Специалист понимает, что в качестве отправной точки на всех гелях может быть выбрана другая точка, соответствующая месту внесения сыворотки и которая является стандартизованной для всех фотографий геля, и соответствующие расстояния могут быть измерены по отношению к данной точке с учетом того обстоятельства, что указанная точка локализована на всех фотографиях геля и постоянно используется для измерения указанных расстояний. Могут быть использованы и другие модификации описанного способа тестирования, основанные на той же самой идее. При интерпретации фиг. 10 важным является то, что на момент взятия образца сыворот 21 ки крови для осуществления указанного теста индивидуум был признан ВИЧ-отрицательным на основании результатов ELISA. Однако, тестирование в соответствии с заявленным изобретением показало, что индивидуум являлся ВИЧположительным, о чем свидетельствует прерывистая дуга преципитации 11. Через два месяца при тестировании сыворотки крови данного индивидуума методом ELISA он был признан ВИЧ-положительным. Таким образом, заявленный способ тестирования способен обеспечить более раннюю диагностику ВИЧ-инфекции по сравнению с ELISA. При интерпретации фиг. 11 важно, что образец сыворотки крови был взят после того, как индивидууму с диагностированным по клиническим показателям СПИДом была перелита кровь здорового донора. Дуга преципитации,образование которой обусловлено сывороткой крови донора, отмечена цифрой 12 в области расположения веществ с большей молекулярной массой; это свидетельствует о том, что исходное небольшое число фрагментов нативного aTF обусловлено сывороткой здорового донора и,таким образом, локализация дуги преципитации в соответствии с мол. массой сходна с таковой,ожидаемой при тестировании образца крови здорового индивидуума и в большей степени свойственна более ранней стадии инфекционного процесса (как установлено на основании относительно сходной локализации данной дуги с дугой на фиг. 10). Дуга преципитации, образующаяся при тестировании сыворотки крови больного СПИДом, отмечена стрелкой 13 в области расположения веществ с меньшей мол. массой, что свидетельствует о расщеплении aTF у больного и подтверждает его инфицирование ВИЧ. Описанная здесь методика двумерного гель-электрофореза может осуществляться в широких масштабах для тестирования образцов биологических жидкостей in vitro на присутствие ВИЧ-инфекции у людей с помощью укомплектованного устройства. Гели могут быть высушены для облегчения упаковки и транспортировки. Упакованный гель может содержать лунку для образца и канавку для TF. TF можно хранить в емкости и продавать отдельно или вместе с гелем в качестве диагностического набора. Дополнительно набор может содержать емкости для электрофоретического буфера, красители и/или стандартные маркеры мол. массы. В качестве контроля набор может содержать 22 емкости с образцом (образцами) сыворотки крови здоровых людей. Наряду с описанной выше методикой данное изобретение охватывает и ее различные варианты, а также любые способы, позволяющие определять характер преципитации образца исследуемой биологической жидкости c aTF,предпочтительно по отношению к -, 1- и 2 макроглобулинам. Наборы, содержащие реагенты и материалы, необходимые для осуществления указанных исследований, также включены в объем данного изобретения. Пример 3. В данном примере описывается исследование, согласно которому больной СПИДом ("тестируемый индивидуум") был подвергнут лечению с помощью композиции TF, полученной в соответствии с настоящим изобретением. Больной был 27-летним белым мужчинойгомосексуалистом с весом тела 51,5 кг к началу лечения. Восемнадцать месяцев назад тестирование сыворотки крови больного выявило наличие антител к ВИЧ. Кроме того, больной был диагностирован как ВИЧ-положительный на основании клинических симптомов, количественного определения р 24 антигена, подсчета абсолютного числа CD4+- и СD8+-лимфоцитов(количество клеток/мкл) и определения процентного содержания субпопуляции лимфоцитов. Сыворотка тестировалась 12 апреля 1995 г.,т.е. за две недели до начала лечения с помощью TF. Больной не страдал от СПИДа до и во время лечения TF. Лечение было начато 27 апреля 1995 года. Больной получал 14 мг TF в неделю в виде двух внутримышечных инъекций - первую инъекцию во вторник, вторую - в среду. При каждой инъекции вводилось 7 мг TF (в 2 мл состава содержится 3,5 мг/мл TF). TF был очищен, как описано выше в примере 1, и содержащий его состав подвергнут стерилизации. Состав при рН 6,2 содержал следующие компоненты: 3,5 мг/мл метилированного TF, 8,1 мг/мл хлорида натрия,1,9 мг/мл ацетата натрия, 2,6 мг/мл трифосфата натрия, 2,1 мг/мл хлорида алюминия. В таблице 1 приведены результаты эксперимента. Даты соответствуют времени отбора проб крови у больного. Тестирование проводилось в Unilab Corporation (Tarzana, California) при использовании обычных методов клинических исследований. Показатель Эритроциты Гемоголоболин Число тромбоцитов Лейкоциты Нейтрофилы Лимфоциты Моноциты Эозинофилы БазофилыCD8 АБС. Соотношение хелперы/ супрессоры Общий белок Альбумин Альфа-1 Альфа-2 Бета Гамма Р/24 Даты отбора проб 04 мая 11 мая 1995 1995 4,77 4,85 14,5 15,5 236 206 6,2 6 58 52 33 24 7 12 1 11 1 1 25 31 531 446 52 56 1108 806 0,47 Примечание к таблице: Число эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов учитывалось как х 103/мм 3. Гемоглобин определяли количественно в г/децилитр образца крови. Количество нейтрофилов определяли как процент от общего числа лейкоцитов в образце крови. Количество лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и базофилов определяли как процент от общего числа лейкоцитов в образце. Общее количество клеток крови подсчитывали с помощью гематологического анализатора."CD4%" и "CD8%" означает процентное содержание CD4+- и CD8+- лимфоцитов соответственно. "CD4 АБС" и "CD8 АБС" означает абсолютное количество (в расчете на один микролитр) CD4+- и СD8+-лимфоцитов соответственно. Подсчет CD4+- и СD8+-лимфоцитов осуществляли с помощью проточного цитометра."Соотношение хелперы/супрессоры " получали путем деления значения "CD4 АБС" на значение "CD8 АБС"."Общий белок" определяли количественно в г/децилитр образца крови больного колориметрическим методом с помощью прибора"Гамма" означает -глобулин. Указанные белки сыворотки крови определяли с помощью электрофореза. В каждой графе, относящейся к показателям белков сыворотки, число слева означает количество белка, выраженное в г/децилитр, а число справа соответствует процентному содержанию специфического сывороточного глобулина по отношению к общему числу всех глобулинов сыворотки."Р/24" означает вирусный коровый антиген р 24, который определялся с помощью тестнабора ЕlА для р 24 антигена (Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois). Впоследствии образцы крови, отобранные в дни, указанные в таблице 1, были определены как положительные на антитела к ВИЧ-1 с помощью тест-набора ELISA Organon TechnicaELISA (Raleigh, North Carolina). Co времени первой инъекции до 24 мая 1995 года вес больного увеличился на 2,6 кг. Приведенные выше исследования показывают, что существует тенденция к увеличению количества CD4+-лимфoцитoв и уменьшению количества CD8+-лимфоцитов после начала лечения TF. Кроме того, антиген р 24 после начала лечения TF не обнаруживался, хотя соответствующий показатель у тестируемого индивидуума до начала применения TF и на момент начала лечения был положительным. Результаты тестирования ВИЧ-антител оставались положительными, поскольку у тестируемого индивидуума в крови сохранялись остаточные антите 25 ла. Приведенные данные позволяют предположить, что лечение с помощью TF эффективно противодействует ВИЧ-инфекции и прогрессивному развитию заболевания, вызываемого ВИЧ. В дополнение к указанным исследованиям,выполненным в Unilab Corporation, авторы изобретения провели диагностическое тестирование на ВИЧ с помощью двумерного гельэлектрофореза, описанного ранее в примере 2. Для электрофореза использовали образцы сыворотки, отобранные в дни, указанные в таблице 1. На фиг. 13 и 14 приведены фотографии геля после осуществления двумерного электрофореза двух контрольных образцов сыворотки: образца, полученного от индивидуума, который тестировался как отрицательный методомELISA (Organon Technica), и образца, полученного от индивидуума, который тестировался как положительный с помощью того же самого метода. Как следует из фиг. 13, дуга преципитации 9 является непрерывной и расположена рядом с областью локализации -, 1- и 2 макроглобулинов, что свидетельствует об отсутствии ВИЧ у данного индивидуума. Напротив, дуга преципитации 9 на фиг. 14 является прерывистой, что свидетельствует о наличии ВИЧ-инфекции у данного индивидуума. На фиг. 15-19 приведены фотографии геля после осуществления двумерного электрофореза образцов сыворотки крови тестируемого индивидуума, отобранных, соответственно, 11, 18, 24 и 31 мая 1995 года. Как показано на фиг. 15, через неделю после начала лечения препаратом TF, 4 мая 1995 года, сыворотка крови была тестирована как отрицательная в отношении ВИЧ-инфекции, о чем свидетельствует непрерывная дуга преципитации 9, расположенная рядом с областью локализации -, 1- и 2-макроглобулинов. Как показано на фиг. 16, на второй неделе лечения, 11 мая 1995 года, сыворотка крови тестируемого индивидуума формировала непрерывную дугу преципитации 9 рядом с областью локализации -, 1- и 2-макроглобулинов, которую можно считать в большей степени непрерывной по сравнению с дугой на фиг. 14 (контрольный образец сыворотки от ВИЧположительного индивидуума). Как показано на фиг. 17 и 18, на третьей и четвертой неделях лечения, 18 и 24 мая 1995 года, сыворотка крови тестируемого индивидуума формировала в меньшей степени непрерывную дугу преципитации 9. Однако, на пятой неделе, 31 мая 1995 года, опять выявлялась непрерывная дуга преципитации 9, расположенная рядом с областью локализации -, 1- и 2 макроглобулинов (как показано на фиг. 19), что свидетельствует о ВИЧ-отрицательном статусе. Результаты двумерного гель-электрофореза по 001100TF в соответствии с данным изобретением эффективно противодействует ВИЧ-инфекции и/или прогрессивному развитию заболевания. Пример 4. В данном примере приводятся результаты лечения шести больных с помощью композицииTF, полученной в соответствии с данным изобретением. Эти больные не подвергались какимлибо другим способам лечения и не получали никаких лекарственных препаратов на протяжении шестинедельного периода лечения с помощью TF и после его окончания. В приведенных далее таблицах приведены результаты исследования больных через девять месяцев (больные 1 - 5) и через два месяца (больной 6) после окончания периода лечения. На протяжении шести недель каждый больной получал 14 мг ТF в неделю путем двух внутримышечных инъекций, одна из которых осуществлялась в среду, а другая - в четверг. При каждой инъекции вводилось 7 мг TF (в 2 мл состава содержится 3,5 мг/мл TF). TF был очищен, как описано выше в примере 1, и содержащий его состав подвергнут стерилизации. Состав при рН 6,2 содержал следующие компоненты: 3,5 мг/мл метилированного TF, 8,1 мг/мл хлорида натрия, 1,9 мг/мл ацетата натрия, 2,6 мг/мл трифосфата натрия, 2,1 мг/мл хлорида алюминия. В таблицах 2-7 представлены результаты исследования каждого больного. Указанные исследования были выполнены в лабораториях с помощью обычных клинических методов. В таблицах обозначение "ВИЧ-Ат, ELISA" относится к антителам, выявляемым при использовании ELISA. Сокращения "CD4aбc." и"CD8aбc." обозначают соответственно абсолютное число CD4- и CD8-лимфоцитов (в расчете на один микролитр). "Р 24 Аг"- это вирусный коровый антиген р 24, который определялся методом разрушения р 24- антигенного иммунного комплекса (immune complex disruption - ICD)EIA; EIA выявляет коровый белок р 24 ВИЧ-1 после разрушения иммунных комплексов. Сокращение "ВИЧ-1 РНК, ПЦР" относится к количественной оценке числа копий рибонуклеиновой кислоты (РНК) ВИЧ-1 в 1 мл плазмы крови с помощью полимеразной цепной реакции(ПЦР). Увеличение/снижение числа копий вирусной РНК коррелирует с увеличением/уменьшением в плазме количества вирусных частиц. Обозначение "ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК" относится к титрам ВИЧ-1, определенным в плазме крови и культурах мононуклеарных клеток периферической крови. Сокращение "Колич. определ. ВИЧ-1 в плазме" относится к величине инфекционности ВИЧ-1, выраженной как число инфекционных единиц в мл плазмы (ИЕ/мл). Обозначение "Лейкоциты,абс." соответствует абсолютному количеству лейкоцитов в одном мкл плазмы крови. -1 27 макроглобулин( "-1 Макро"), -2 макроглобулин ( "а-2 Макро") и -иммуноглобулин ("IgG") определяют электрофорезом сывороточных белков. Число, выраженное в процентах, отражает процентное содержание соответствующего глобулина сыворотки по отношению к общему количеству всех сывороточных глобулинов. В Таблице 7 обозначения" IgA" и "IgМ" относятся,соответственно, к иммуноглобулинам А и М. В Таблице 7 содержание IgG, IgA и IgM в плазме выражено в мг/дл. Сокращение "HLA-DR" относится к продукту главного комплекса гистосовместимости человека, локализованного на хромосоме 6. В таблицах 2-7 также использованы следующие обозначения: ну - нормальный уровень у здорового человека; пол. - положительный результат;+ - положительный результат, повышенный положительный уровень обозначается дополнительными "+"; отр. - отрицательный результат;- - определение не проводилось; нп - определение не проводилось; х - степень увеличения нормального уровня здорового человека, например,"2 х" означает увеличение нормального уровня в два раза. Далее приводятся подробные описания состояния каждого больного. Больная 1. В приводимой далее таблице 2 суммируются результаты клинических исследований больной 1. К началу лечения у больной 1 (женщина в возрасте 21 года) наблюдалась полная картинаCD4-клеток составляло 36 в 1 мкл крови и продолжительность жизни оценивалась в 6-12 месяцев. Затем количество СD4-лимфоцитов увеличилось с 36 в 1 мкл крови (на момент начала лечения) до 108 в 1 мкл крови (через девять месяцев после окончания периода лечения). Начиная с четвертой недели от начала лечения коровый антиген р 24 не выявлялся, т.е. его уровень составлял не более 5 мкг/мл плазмы крови. Указанный результат свидетельствовал об утрате вирусной активности к четвертой неделе лечения. ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК после четырех месяцев лечения не обнаруживался. Отрицательный результат в данном случае означает, что Т-лимфоциты больного, выделенные из плазмы, были неинфекционны при смешивании с Т-лимфоцитами контрольной неинфицированной крови при исследовании in vitro. Напротив, при положительном результате Тлимфоциты, выделенные из контрольной ВИЧ-1 инфицированной крови и смешанные с неинфицированной контрольной пробой крови при исследовании in vitro обладают инфекционностью. Увеличение содержания IgG, 1- и 2-макроглобулинов наблюдалось в ходе лечения и после его завершения. Через девять месяцев после лечения у больной не наблюдалось полной картины симптомов СПИДа (например, не было выявлено инфекций, вызываемых условнопатогенными микроорганизмами), хотя женщина все еще оставалась ВИЧ-положительной (т.е. в крови при использовании ELISA обнаруживались антитела к ВИЧ). Таблица 2 Больная 1. Результаты клинических и лабораторных исследований До нача- Во время лечения (внутла лече- римышечные инъекции ния два раза в неделю) 2 4 6 ВИЧ-Ат,ЕLISАCD8, абс. 672 237 775 537 р 24 Аг пол пол отр отр ВИЧ-1 РНК, ПЦР(число копий/мл) 88200 17300 ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК пол отр Кол. определ. ВИЧ-1 в плазме Лейкоциты, абс. х 103 2,23 2,8 4,76 5,7 1,35% 1,24% 2,66% 2,70% 1-Макро 8,12% 7,91% 5,22% 11,1% 2-Макро Больной 2. В приводимой далее таблице 3 суммируются результаты клинических исследований больного 2. К началу лечения больной 2 (мужчина в возрасте 30 лет) был ВИЧ-положительным (т.е. при тестировании с помощью ELISA в крови обнаруживались антитела к ВИЧ), однако кли После лечения (месяцы, прошедшие после окончания лечения, другое лечение не проводилось) 1 нические симптомы СПИДа не проявлялись. Число СD4-лимфоцитов возросло со 193 в 1 мкл крови (до начала лечения с помощью TF) до 305 в 1 мкл крови (через девять месяцев после завершения лечения). В крови больного коровый антиген р 24 не обнаруживался до начала лечения с помощью TF, в ходе лечения и после его завершения, что свидетельствовало о низкой активности вируса. Через четыре месяца после лечения в исследованиях in vitro ВИЧ-1 в плазме крови и культурах МКПК не обнаруживался. Об усилении гуморального иммунитета свиде тельствовало увеличение уровней IgG, 1- и 2 макроглобулинов. Через девять месяцев после окончания лечения у больного по-прежнему не наблюдалось каких-либо симптомов СПИДа. Таблица 3 Больной 2. Результаты клинических и лабораторных исследований До нача- Во время лечения (внутла лече- римышечные инъекции ния два раза в неделю) 2 4 6 ВИЧ-Ат, ELISАCD8, абс. 1348 298 755 840 р 24 Аг отр отр отр отр ВИЧ-1 РНК, ПЦР(число копий/мл) 43200 21100 ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК пол отр Колич. определ. ВИЧ-1 в плазме Лейкоциты, абс. х 103 4,9 3,8 6,1 6,2 1,37% 1,4% 2,4% 2,5% 1-Макро 2,7% 4,2% 8,4% 8,7% 2-Макро После лечения (месяцы, прошедшие после окончания лечения, другое лечение не проводилось) Больная 3. В приводимой далее таблице 4 суммируются результаты клинических исследований больной 3. К началу лечения больная 3 (женщина в возрасте 24 лет) была ВИЧ-положительной (т.е. при тестировании с помощью ELISA в крови обнаруживались антитела к ВИЧ), однако клинические симптомы СПИДа не проявлялись. Число СD4-лимфоцитов возросло с 404 в 1 мкл крови (до начала лечения) до 636 в 1 мкл крови(через девять месяцев после завершения лече 1 ния). Коровый антиген р 24 не обнаруживался на протяжении всего периода исследований. Через четыре месяца после лечения в исследованиях invitro ВИЧ-1 в плазме крови и культурах МКПК не обнаруживался. Об усилении гуморального иммунитета свидетельствовало увеличение уровней IgG, 1- и 2-макроглобулинов. Через девять месяцев после окончания лечения у больной не обнаруживалось каких-либо симптомов СПИДа. Таблица 4 Больная 3. Результаты клинических и лабораторных исследований До нача- Во время лечения (внутла лече- римышечные инъекции ния два раза в неделю) 2 4 6 ВИЧ-Ат, ЕLISАCD8, абс 672 1054 1587 898 р 24 Аг пол пол отр отр ВИЧ-1 РНК, ПЦР(число копий/мл) 88200 17300 ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК пол отр Колич. определ. ВИЧ-1 в плазме Лейкоциты, абс. х 103 2,23 2,8 4,76 5,7 Больной 4. В приводимой далее таблице 5 суммируются результаты клинических исследований больного 4. До начала лечения больной (мужчина в возрасте 27 лет) был ВИЧ-положительным (т.е. при тестировании с помощью ELISA в крови обнаруживались антитела к ВИЧ) и у него наблюдалась полная картина симптомов СПИДа(третья степень проявления заболевания с ин 11,1% 1,5 х 2 х После лечения (месяцы, прошедшие после окончания лечения, другое лечение не проводилось) 1 446 580 1496 1381 отр отр отр 6,8 6,6 8,1% 8,2% 19,8% 18,01% 2,7% 2,4% ну ну ну ну(через девять месяцев после завершения лечения). Коровый антиген р 24 перестал обнаруживаться через четыре недели после лечения и далее также не выявлялся. ВИЧ в плазме крови и культурах МКПК перестал обнаруживаться через шесть недель после лечения и далее также не выявлялся. Об усилении гуморального иммунитета свидетельствовало увеличение уровнейIgG, 1- и 2-макроглобулинов. Через двена дцать месяцев после окончания лечения у больного не обнаруживалось каких-либо симптомов СПИДа. Таблица 5 Больной 4. Результаты клинических и лабораторных исследований До нача- Во время лечения (внутла лече- римышечные инъекции ния два раза в неделю) 2 4 6 ВИЧ-Ат, ЕLISАCD8, абс. 850 752 839 540 р 24 Аг пол пол отр отр ВИЧ-1 РНК, ПЦР(число копий/мл) 116000 30000 ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК пол пол отр Колич. определ. ВИЧ-1 в плазме Лейкоциты, абс. х 103 4,3 3,8 6,3 6,7 1,7% 1,8% 4,0% 4,4% 1-Макро 9,1% 9,0% 7,8% 10,2% 2-Макро Больной 5. Этот больной был описан ранее в примере 3. В приводимой далее таблице 6 суммируются результаты клинических исследований больного 5. До лечения больной был ВИЧположительным (т.е. при тестировании с помощью ELISA в крови обнаруживались антитела к ВИЧ) и у него наблюдались пневмония, рвота и диарея (крови в фекалиях не было). Однако,клинические симптомы СПИДа полностью не проявлялись. Число CD4-лимфоцитов после завершения лечения не изменилось. Коровый После лечения (месяцы, прошедшие после окончания лечения, другое лечение не проводилось) 1 антиген р 24 перестал обнаруживаться во время четвертой недели лечения и далее не выявлялся в течение семи месяцев после окончания лечения. РНК-полимеразная цепная реакция показала, что число копий вируса поддерживалось примерно на уровне 6000-7000 копий/мл. Плазма крови больного после лечения стала неинфекционной. Иммунная система вырабатывала повышенные количества IgG, 1- и 2-макроглобулинов. Вес больного увеличился на 3,73-4,48 кг. Через десять месяцев после окончания лечения у больного не наблюдалось каких-либо симптомов СПИДа. Таблица 6 Пациент 5. Результаты клинических и лабораторных исследований До нача- Во время лечения (внутла лече- римышечные инъекции ния два раза в неделю) 2 4 6 ВИЧ-Aт, ELISACD8, абс нп 1108 979 803 р 24 Аг пол пол отр отр ВИЧ-1 РНК, ПЦР(число копий/мл) 70000 ВИЧ-1 в плазме и культурах МКПК пол пол пол отр Колич. определ. ВИЧ-1 в плазме нп нп Лейкоциты, абс. х 103 4,3 6,2 5,7 5,9 1,3% 2,6% 1,9% 2,0% 1-Макро 9,4% 9,2% 7,3% 8,0% 2-Макро Больной 6. В приводимой далее таблице 7 суммируются результаты клинических исследований больного 6. До начала лечения у больного наблюдалось полное проявление симптомов СПИДа(тяжесть заболевания между 3 и 4 степенями); больной страдал от ретинита, цитомегаловирусной инфекции, грибковой инфекции горла, легких, трахеи и бронхов и был прикован к постели. Число CD4-лимфоцитов после завершения После лечения (месяцы, прошедшие после окончания лечения, другое лечение не проводилось) 1 434 1004 отр отр нп 7,3 2,1% 10,1% 24,6% 415 1150 отр отр нп 6,5 2,4% 11,8% 23,9% 438 926 отр отр нп 5,6 2,4% 11,0% 22,8% ну 1,2 х двух месяцев лечения немного повысилось. Коровый антиген р 24 перестал обнаруживаться в крови через четыре месяца после лечения и далее также не выявлялся. До начала лечения ВИЧ обнаруживался в плазме и культурах МКПК,затем во время лечения перестал обнаруживаться. После лечения плазма стала неинфекционной. В целом, ВИЧ выявляется в культурах клеток периферической крови больного при количестве СD4-лимфоцитов в 1 мкл крови менее 100 и числе копий вирусной РНК 5 х 105. Однако, 33 в случае с больным 6, после одного и двух месяцев лечения в культурах клеток периферической крови ВИЧ не обнаруживался. Существенно, что число копий вирусной РНК снизилась с 5 х 105 до 3 х 104. Это соответствует 1,5 log 34 снижению количества вирусной РНК. Вес больного увеличился на 5,6 кг по сравнению с началом лечения. Через три месяца после окончания лечения у больного СПИД не диагностировался. Таблица 7 Больной 6. Результаты клинических и лабораторных исследований Вид анализа ВИЧ-Ат, ELISA До нача- Во время лечения (внутла лече- римышечные инъекции ния два раза в неделю) 2 4 6+ нп нп нп нп нп нп нп 5 х 105 нп нп нп нп нп нп нп нп нп нп нп нп нп нп нп Заключение Данный пример показывает, что активность ВИЧ была подавлена, как это следует из того, что коровый антиген р 24 перестал обнаруживаться в крови через четыре месяца после лечения и далее не выявлялся (его концентрация в крови составляла менее 5 мкг/мл, что соответствует пределу чувствительности используемого метода тестирования). Также наблюдалось более резкое увеличение числа СD4-лимфоцитов по сравнению с тем, что отмечается при использовании коммерчески доступных в США антивирусных препаратов, например азидотимидина и других. Приведенный пример также показывает, что по мере лечения наблюдалось резкое снижение титров вируса в организме больного, как это было установлено с помощью количественной полимеразной цепной реакции. В плазме крови и культурах МКПК вирус также переставал обнаруживаться. В экспериментах invitro плазма крови больного была неинфекционной. Т-лимфоциты больного были неспособны инфицировать незараженные (нормальные) Тлимфоциты здоровых людей в условиях in vitro. Впоследствии может быть установлено, что плазма вообще не содержит вируса, а больной был иммунизирован и не способен заражать неинфицированных индивидуумов. Культуры МКПК были тестированы как ВИЧ-отрицательные. Данный способ лечения приводил к тому, что у больного с полной картиной симптомов СПИДа вирус не определялся ни в плазме крови, ни в культурах МКПК. По видимому, системы гуморального и клеточного иммунитета указанного больного оказались способными разрушить и нейтрализовать вирус. Заявленное изобретение описано со ссылками на конкретные примеры его осуществления. Однако, специалист в данной области исследований может модифицировать изобретение, не выходя за пределы его объема и приведенных ниже пунктов формулы. После лечения (месяцы, прошедшие после окончания лечения, другое лечение не проводилось) 1 2+ 79 90 700 685 отр отр(5 пг/мл) отр отр отр отр 30924 31795 1413 1323 768 802 218 244 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фракция обогащенного лизином гистонового тимусного фактора (TF) млекопитающих, способная к преципитации при контактировании с сывороткой крови человека, неинфицированного ВИЧ, с образованием одной непрерывной дуги преципитации в геле после двумерного электрофореза рядом с областью расположения -, 1- и 2-макроглобулинов и не способная к преципитации при контактировании с сывороткой крови человека, инфицированного ВИЧ, с образованием одной непрерывной дуги преципитации на геле после двумерного электрофореза рядом с областью расположения -, 1- и 2-макроглобулинов. 2. Фракция TF по п.1, отличающаяся тем,что находится в метилированной или неметилированной форме, имеет рН в интервале от 7,64 до 8,6, причем молекулярная масса метилированного TF составляет около 28 килодальтон при определении методом электрофореза в 11%ном полиакриламидном геле в невосстанавливающих условиях в присутствии додецилсульфата натрия, молекулярная масса неметилированного TF составляет около 35 килодальтон при определении методом электрофореза в 11%ном полиакриламидном геле в невосстанавливающих условиях в присутствии додецилсульфата натрия, и TF имеет изоэлектрическую точку около 5,6. 3. Способ получения фракции TF по п.1,включающий выделение обогащенных лизином гистоновых белков из ядер клеток тимуса млекопитающих с использованием пепсина, осуществление катионообменной хроматографии указанных гистоновых белков, элюцию белков солевым раствором и сбор нужной фракции. 4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что катионообменную хроматографию осуществляют на колонке с карбоксиметилцеллюлозой, а 35 элюцию нужной фракции проводят линейным градиентом хлорида натрия при рН 6,8. 5. Способ выявления ВИЧ-инфекции у человека, включающий получение образца биологической жидкости от индивидуума, подозреваемого на наличие ВИЧ-инфекции, обеспечение контактирования указанного образца с фракцией по п.1, сопоставление характера преципитации TF и aTF в исследуемом образце с характером преципитации TF и aTF в образце, 001100 36 полученном от ВИЧ-инфицированного индивидуума, путем выявления локализации продуктов преципитации по отношению к области расположения -, 1- и 2-макроглобулинов, причем отсутствие дуги преципитации или наличие прерывистой дуги преципитации в пределах или вне области расположения -, 1- и 2 макроглобулинов свидетельствует о наличии ВИЧ-инфекции у индивидуума.