Способ извлечения тритерпенов из бетулинсодержащих растений, эмульсия тритерпенов и ее применение

006296 Настоящее изобретение относится к способу извлечения тритерпенов из растений и/или их частей, а также к эмульсии, водная и жирная фазы которой эмульгированы растительным экстрактом, причем этот растительный экстракт содержит по меньшей мере один тритерпен и/или по меньшей мере одно производное тритерпена, а эмульсия также содержит по меньшей мере одно масло и/или жир и воду. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу изготовления такой эмульсии, а также к применению тритерпенов для изготовления косметических и лекарственных средств. С давних времен природные вещества, ароматические и активные вещества выделяют из целых растений или их частей, таких как листья, корни, плоды или кора, при помощи различных методов экстрагирования. Среди первых природных веществ из растительного материала в 1788 г. был получен бетулин - вещество, которое придает коре березы ее белый цвет (Lowitz, M., Chemische Analysen, Hrsg. Crell, L, том 2, стр. 312). За этим первым выделением последовали научные исследования, в том числе элементарные анализы бетулина, сведения о которых опубликовал У. Хаусманн в 1876 г. (Hausmann, U., Annalen der Chemie, 182, стр. 368). Бетулинсодержащие растения широко распространены в растительном мире. Они преимущественно относятся к скрытосеменным, причем у некоторых видов отряда Fagales (родственных буку), и в данном случае особенно в семействе Betulaceae (березовые), содержание бетулина во внешней коре достигает максимума (Обзорная статья: Hayek, E. W. et al., (1989), A Bicentennial of Betulin, Phytochemistry, 28(9),стр. 2229-2242). Белая часть березовой коры (береста), в частности, у видов Betula pendula (береза повислая), Betula verrucosa (береза бородавчатая) и Betula papyfera, может содержать более чем 30% бетулина. От Райнера Экмана имеются более точные данные, полученные в 1983 г., согласно которым из сухой внешней части коры березы бородавчатой было экстрагировано 21-40% тритерпенов или 16,7-34% бетулина (Ekman, r. (1983b), Finn. Chem. Letters, стр. 162). Бетулин является пентациклическим тритерпеном с углеродным скелетом ряда лупана, который также называют бетулинолом, трохотоном, березовой камфарой и (корили-)резинолом. Характерной особенностью ряда лупана является кольцо с пятью атомами углерода в составе пентациклической системы, которое в положении С-19 имеет -изопентениловую группу. Бетулин также отличается высокой термостабильностью, его температура плавления находится между 250 и 261 С, причем после сублимации рекристаллизованного продукта достигаются еще более высокие значения. Его молекулярный вес составляет 442,7, он растворим в пиридине и тетрагидрофуране, но малорастворим в дихлорметане, хлороформе и холодных органических растворителях, причем с повышением температуры его растворимость значительно возрастает. В воде и холодном петролейном эфире [углеводороды с 5-8 атомами углерода (C5-C8)] бетулин практически нерастворим. Кроме того, кинетические исследования показали очень низкую реакционную способность гидроксильных групп бетулина (Обзорная статья: Jddskeldinеn, Р.(1981), Paperi ja Puu - Papper och Тrd 10, стр. 599-603). Уже в 1899 году Дж. Уилер доказал антисептические свойства бетулина, и поэтому он использовался для стерилизации перевязочных бинтов и пластырей (Wheeler J., (1899), Pharm. J., Die Darstellung desBetulin durch Sublimation, 494, Ref. Chem. Centr. 1900 I, стр. 353). В натуропатии и народной медицине получали и получают до сих пор отвары березовой коры, причем в основном используют лишь внутреннюю часть коры, которая содержит лишь остатки белой бересты и почти не содержит бетулина вследствие его недостаточной растворимости, так как содержание бетулина во внутренней коре составляет менее 0,5%, а в воде или водноспиртовых смесях (до 60% спирта) бетулин нерастворим (Ekman, R. (1983),упомянут выше). Получаемый таким образом отвар применяют для лечения малярии, водянки, подагры и при кожных заболеваниях, а также в виде настойки для компрессов при лечении абсцессов. Березовую кору также применяют для получения винтергринового масла, которое также использовалось для лечения ревматизма, а также в качестве ароматического вещества (Нansel, R. et al., (Hrsg.), (1994), Drogen A-D, SpringerVerlag, Kapitel Betula, стр. 502-511; Hayek, E. W., упомянут выше). Кроме того, известно использование березовых экстрактов в качестве добавки для ванн специально для лечения потливости стоп, а также как средство ухода за волосами в виде добавок к шампуням (Nowak, G. А., (1966), Cosmetic and MedicinalProperties of the Birch, Amer. Perfumer Cosmet, 81, стр. 37). Однако и здесь применялись лишь водные вытяжки из листьев березы, которые практически не содержат бетулина. Более поздние исследования позволяют предполагать лечебное действие бетулина и его производных. В эксперименте с животными бетулиновая кислота ингибировала репликацию ретровирусов, в частности, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ 1). Описанное бактериостатическое и бактерицидное действие бетулина против кишечных бактерий Escherichia соli, Salmonella typhi, Shigella flexneri иStaphylococcus aureus позволяют говорить о возможности его более широкого применения в медицинеnew class of human immunodeficiency virus type 1 specific inhibitors with a new mode of action, J. Med. Chem. 39, стр. 1056-1058; Hayek, E. W. et. al., упомянут выше). Далее, удалось установить противовоспалительное, кортизоноподобное действие бетулина и его производных, а также их цитостатическое действие при использовании различных линий раковых клеток in vitro (Carmen Recio, M., et. al. (1995), Investigations onYasukawa, К., et. al., (1991), Sterol and triterpene derivates from plants , Oncogene 48, стр. 62-76). Для извлечения бетулина из березовой коры, в частности, из бересты, помимо сублимации (Lowitz,M., упомянут выше) рассматривается прежде всего экстрагирование в кипящих растворителях. При этом в качестве растворителей используются главным образом спирты и хлорированные углеводороды (Ukkonen, К. und Еrd, V., (1979), Kemia-Kemi 5, стр. 217-220; Ekman, R. (1983a), упомянут выше; Eckermann,С. und Ekman, R. (1985), Paperi ja Puu - Papper och Тrd 3, стр. 100-106; O'Connell, M. M. et. al., (1988),Phytochemistry 7, стр. 2175-2176; Hua, Y. et. al., (1991), Journal of Wood Chemistry and Technology 11(4),стр. 503-516). Недостатком сублимационных методов является то, что с их применением получают лишь очень небольшой выход целевого вещества, что делает необходимым использование большого количества исходного материала. Другой, особенно серьезный недостаток сублимационных методов заключается в одновременном появлении смолообразных продуктов разложения других составных частей коры/бересты, что делает необходимым многократную повторную сублимацию или перекристаллизацию. При использовании методов экстрагирования особенно серьезный недостаток состоит в том, что в вышеназванных растворителях бетулин растворяется относительно плохо, а экстрагирование возможно только с большими затратами времени. Многократная перекристаллизация требуется и в этом случае. При этом лучшие результаты достигаются с использованием углеводородов, кипящих при повышенной температуре (Eckermann, С. und Ekman, R. (1985), упомянут выше). Однако применительно к косметическим и лекарственным средствам они особенно нецелесообразны из-за неизбежного присутствия в препарате остатков растворителя. Растворители, в которых бетулин хорошо растворяется, как например, пиридин и тетрагидрофуран,в целом относят к ядовитым. Из-за риска причинения ущерба здоровью и немалой опасности, возникающей при обращении с ними, их широкомасштабное использование для экстрагирования исключается. Еще один недостаток указанных растворителей состоит в том, что они одновременно растворяют значительное количество нежелательных буроватых веществ, последующее отделение которых является крайне дорогостоящим и нерентабельным. Таким образом, на сегодняшний день не существует экономичного способа извлечения бетулина из бересты, который позволял бы получать бетулин в большом количестве,с высокой степенью чистоты и без использования очень опасных для здоровья растворителей. Далее, из уровня техники известны лишь способы экстрагирования липофильных природных веществ при высоком давлении и высокой температуре. Например, в US 5,843,311 описан способ выделения органических веществ посредством органических растворителей. При помощи этого аналитического способа, который применяется в малых масштабах, можно исследовать образцы материалов на загрязнения, примеси или добавки. Этот аналитический способ находит применение преимущественно для контроля в пищевой и вкусовой промышленности, в фармацевтической промышленности и при анализе проб грунта. Недостатком этого способа является то, что его применение ограничено аналитическим масштабом. В US 5,647,976 описан реакционный сосуд, который может применяться для экстрагирования веществ посредством растворителей при повышенных давлении и температуре. Этот реакционный сосуд отличается наличием затвора, который позволяет подавать растворитель в реакционный сосуд и удалять из него, не разрушая затвор. Таким образом эффективно предотвращается загрязнение растворителя. Кроме того, этот реакционный сосуд прост в обращении, что делает возможным работу с ним также необученного персонала. В US 5,647,976 описан только вышеназванный реакционный сосуд, но из него не следует никаких указаний относительно осуществления какого-либо способа экстрагирования. Кроме того, в этом документе не содержится сведений о качестве и чистоте веществ, выделяемых в этом реакционном сосуде. В US 5,660,727 описано применение реакционного сосуда, известного из US 5,647,976 в автоматическом ротационном устройстве, которое позволяет проводить анализ нескольких образцов одновременно. Объем реакционных сосудов, которые могут применяться в этом ротационном устройстве,составляет 10-30 мл. Поэтому эти объекты могут применяться только в аналитическом масштабе и не подходят для использования в массовом производстве. В US 5,785,856, частично продолжающем предмет US 5,660,727, наряду с вышеупомянутым ротационным устройством описан также способ экстрагирования веществ с применением растворителей. Этот способ проводят при повышенных давлении и температуре. Для этого реакционный сосуд наполняют образцом анализируемого материала, помещают в ротационное устройство и в автоматическом режиме смешивают с растворителем. Затем повышают давление и температуру до заданных значений. После завершения экстрагирования растворитель отводят в сосуд-приемник. С целью очистки реакционный сосуд, в том числе каналы подачи и отвода растворителя, можно продувать инертным газом, таким как азот. Недостатком этого способа является, в частности, то, что он хотя и подходит для определения растворимых веществ в анализируемом образце, однако при этом не подходит или плохо подходит для препаративного представления и получения веществ в больших количествах и с высокой степенью чистоты, так как именно в этом случае присутствующие в образце загрязнения очень неблагоприятно сказываются на степени чистоты экстрагируемого вещества. Кроме того, в силу замысла его создателей спо-2 006296 соб, описанный в US 5,785,856, ограничен аналитическим масштабом применения. Рассматриваемый документ не содержит никаких сведений о достигаемых значениях степени чистоты и возможности применения в массовом промышленном производстве. Все способы, описанные в уровне техники, осуществляются в периодическом режиме, т.е. определенную соответствующую порцию материала экстрагируют в заполняемом и затем опорожняемом сосуде. До сих пор не было реализовано непрерывного способа, согласно которому растительный материал и свежий растворитель подавались бы непрерывно, экстрагирование проходило бы противоточно, а насыщенный экстрагируемым веществом растворитель, а также полностью проэкстрагированный растительный материал равномерно отводились. Кроме того, ранее было предпринято несколько попыток модифицировать поверхностно-активные свойства бетулина для производства технически применимого продукта. Так, например, Пасич уже в 60 х годах исследовал бетулин и его эфиры, такие как сукцинаты, фталаты и тетрахлорфталаты, в качестве эмульгаторов для белых вазелинов, китового жира и арахисового масла и пришел к выводу, что бетулин в отношении его эмульгирующих качеств, т.е. его способности соединять друг с другом водные и масляные компоненты, сопоставим с известными техническими эмульгаторами. Однако полученные им бетулинсодержащие эмульгаторы имели низкую стабильность. Он применил перекристаллизованный бетулин и не получил достаточной стабильности эмульсий. Лучше всего себя показали фталаты и тетрахлорфталаты, которые производились с точки зрения лучшей водорастворимости. Через короткий промежуток времени из эмульсий выделялись масляные слои, что указывает на неудовлетворительную стабильность. Кроме того, в описанные эмульсии добавлялись консерванты антимикробного действия, причем преимущественно применялись производные бензойной кислоты (Pasich, J., (1965), Triterpenoid emulsifiers of plant origin V. Emulsifying properties of Betulin and certain of its esters. Farm. Polska 21, Nr. 17-18, стр. 661-666). Но именно это добавление консервантов, которые, в свою очередь, могут вызвать токсические и аллергические явления, многократно уменьшает положительный терапевтический эффект бетулина, особенно при использовании на поврежденной коже, вследствие чего известные в литературе препараты бетулинсодержащих эмульсий вообще нельзя использовать в современных средствах ухода за кожей, или можно использовать лишь в ограниченной мере. Несмотря на наличие большого количества березовой коры, направляемой в отходы при лесозаготовках, рассмотренные выше недостатки уровня техники до сих пор не привели к сколь-нибудь значимой технической разработке, использованию или утилизации содержащихся в бересте тритерпенов, в частности, содержащегося в больших количествах бетулина. В настоящее время количество неиспользуемого бетулина огромно. На одном только целлюлозном заводе в Финляндии (UPM Kymmene, Lappeenranta) в год сжигается примерно от 4000 до 5000 т потенциально экстрагируемого бетулина. В Швеции, Финляндии, России и Канаде действуют многочисленные целлюлозные производства подобной величины. Предпосылкой для хозяйственного использования этого сырьевого материала, имеющегося во все возрастающих объемах, является экономичный способ извлечения, который до сих пор не был описан и который предложен в настоящем изобретении. Таким образом, в основу изобретения прежде всего положена задача создать способ, который при приемлемом расходе растворителя обеспечивает получение больших количеств тритерпенов с высокой степенью чистоты, как в периодическом, так и в непрерывном режимах. При помощи этого способа должна также открыться возможность утилизации березовой коры, которая при производстве целлюлозы отправляется в отходы. Кроме того, такой способ должен быть простым, дешевым и быстрым в осуществлении. Также должно обеспечиваться соответствие остаточного количества растворителя в экстракте положениям Европейской фармакопеи, в данном конкретном случае - "Нормам остаточного содержания растворителей" (Guideline for Residual Solvents: ICH Q3C - Impurities (ICH = International Conference onHarmonisation of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use - Международная конференция по гармонизации технических требований к регистрации лекарственных средств для людей). В основу настоящего изобретения также положена задача создания тритерпенсодержащей эмульсии, которая содержит фармацевтически активные компоненты и при этом является достаточно стабильной на протяжении длительного времени без добавления консервантов. К тому же производство такой эмульсии должно быть простым. Первая задача решается за счет того, что согласно предложенному способу извлечения тритерпенов из растений и/или их частей части растений сначала промывают при температуре 20-70 С растворителем,в котором тритерпены нерастворимы или малорастворимы. Затем тритерпены экстрагируют растворителем при повышенном давлении и повышенной температуре. За этим следует охлаждение раствора, содержащего тритерпены, и одновременное понижение давления, причем тритерпены выпадают в растворителе в виде очень малых частиц, и при прогрессирующем охлаждении на этих частицах выкристаллизовываются имеющиеся в растворе тритерпены. Для дополнительного повышения чистоты тритерпенов, после отфильтровывания при комнатной температуре их промывают свежим растворителем. Применением этого способа достигается, в частности, возможность получения тритерпенов простым образом в промышленных масштабах.-3 006296 В рамках настоящего изобретения выражение "промывка в растворителе, в котором тритерпены нерастворимы или малорастворимы" означает, что растворимость тритерпенов составляет не более 1 г/л. Благодаря этой первой стадии промывки происходит удаление примесей, которые легче растворяются. Экстрагирование тритерпенов проводят растворителем при повышенном давлении и повышенной температуре, при необходимости - в сверхкритической области. Для этого в качестве растворителя можно использовать, например, сверхкритический диоксид углерода, а также углеводороды в сверхкритической области, а также жидкие углеводороды при повышенном давлении или смеси разных углеводородов. Перед промывкой [стадия (е)] не требуется дополнительной стадии высушивания осадка на фильтре. Благодаря этому предложенный способ особенно прост в осуществлении. Кроме того, чтобы предложенный способ требовал особенно малых трудозатрат и был еще более дешевым, саму по себе промывку тритерпенов [стадия (е)] можно проводить при нормальных условиях. В особенно предпочтительном варианте осуществления предложенный способ осуществляют непрерывно. Для этого растительный материал и холодный растворитель путем нагнетания подают в трубу,устойчивую к давлению и проводят промывку в противотоке при температуре от 20 до 70 С. Посредством второй нагнетательной системы промытый растительный материал подают во вторую трубу, подогреваемую и также устойчивую к давлению, и подвергают экстрагированию в противотоке свежим,сверхкритически нагретым или жидким растворителем. Вывод промывочного и экстрагирующего растворов из установки производится через соответствующие фильтрующие системы. Части растений за счет своего отличия в плотности, движутся против потока растворителя и выводятся из трубы на конце,противоположном отверстию для выхода растворителя. Раствор-экстракт подают, поддерживая давление в системе экстрагирования, через систему клапанов на распылители и только здесь понижают давление. Березовая кора как недорогое сырье, в частности, как отходы целлюлозного производства, имеется в больших количествах. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения тритерпены извлекают из березовой коры, предпочтительно из белой части березовой коры, называемой берестой. Под "сепарированной берестой" понимается как снимаемый вручную белый внешний слой, который закрывает стволы берез снаружи и поэтому расположен снаружи коры как таковой, так и слой березовой коры, который после этого отделен при помощи молотковой дробилки и посредством флотации от целиковой окорки. В особенно предпочтительном варианте изобретения тритерпены получают со степенью чистоты по меньшей мере 80%, предпочтительно 85%, в особенности 90% и в особо предпочтительном случае свыше 90%. В другом варианте изобретения главной составной частью экстрагируемых тритерпенов является бетулин, причем его содержание составляет по меньшей мере 80%, предпочтительно 85%, в особенности 90% и в особо предпочтительном случае - свыше 90%. Кроме того, для первой стадии промывки, собственно экстрагирования и заключительной стадии промывки целесообразно применять одинаковый растворитель. Таким образом можно достичь наилучших показателей чистоты. К тому же при использовании только одного растворителя предложенный способ особенно прост в осуществлении. В качестве растворителя особенно подходит углеводород с низкой температурой кипения или смесь, содержащая углеводород с низкой температурой кипения, так как углеводород с низкой температурой кипения после использования очень просто удаляется. При этом температура кипения применяемого углеводорода или смеси предпочтительно находится ниже 100 С. Особенно предпочтительно применение n-пентана, n-гексана или n-гептана, которые имеют невысокую стоимость, не несут с собой особой опасности для здоровья и имеются в достаточных количествах и хорошего качества. Особенно предпочтительным оказалось применение на первой стадии промывки растворителя, который выходит со стадии основного экстрагирования в качестве фильтрата. Таким образом грубые примеси исходного материала эффективно удаляются в самом начале и без необходимости дополнительного введения свежего растворителя. При экстрагировании эти примеси или побочные компоненты отрицательно повлияли бы на степень чистоты. Для дальнейшего повышения степени чистоты экстрагированные компоненты можно в конце повторно промыть свежим растворителем. В предпочтительном варианте изобретения первую стадию промывки проводят под давлением 1-300 бар,предпочтительно 10-35 бар и особенно предпочтительно 25 бар. Собственно экстрагирование целесообразно проводить при температуре 50-200 С, предпочтительно 140-160 С и особенно предпочтительно при 150 С, и под давлением 1-300 бар, предпочтительно 10-35 бар и особенно предпочтительно 25 бар. При таких условиях проведения экстрагирования можно получать большие количества чистых тритерпенов, в частности, чистого бетулина. Предложенный способ показал себя особенно эффективным, когда выкристаллизовывание тритерпенов происходит в виде микрокристаллизации со средним размером зерна менее 40 мкм, в частности, 2-32 мкм. Другим объектом настоящего изобретения является эмульсия, водная и жирная фазы которой эмульгируются растительным экстрактом, причем этот растительный экстракт содержит по меньшей-4 006296 мере один тритерпен и/или по меньшей мере одно производное тритерпена, а эмульсия также содержит по меньшей мере одно масло и/или жир и воду. Этот тритерпен и/или его производное консервирует и эмульгирует эмульсию. К тому же он обладает фармацевтической активностью. Благодаря этому, в частности, достигается отсутствие в эмульсии дополнительных консервантов, за счет чего она имеет очень высокую степень чистоты и хорошую переносимость, прежде всего в проблемных случаях применения на поврежденной коже. При этом растительным экстрактом является экстракт березовой коры, предпочтительно белой части березовой коры, которую также называют берестой. В другом варианте изобретения растительный экстракт содержит по меньшей мере одно из следующих веществ: бетулин, бетулиновая кислота, лупеол, эритродиол, аллобетулин, феллоновая кислота,гидроксилактон, бетулинальдегид, -амирин, олеаноловая кислота, урсоловая кислота, этерифицированный бетулин и/или -ситостерол. Эти растительные вещества можно применять в составе предложенной эмульсии, как по отдельности, так и в различных комбинациях друг с другом. Особенно подходящая комбинация состоит из более 80% бетулина, менее 10% бетулиновой кислоты, менее 3% лупеола, менее 4% олеаноловой кислоты, менее 4% эритродиола и менее 1% воды. Эмульсия содержит тритерпен и/или его производное в концентрации 2-10%. В зависимости от желательной консистенции доля тритерпена и/или его производного может варьироваться в вышеуказанных пределах. Например, для применения в жидком лосьоне содержание тритерпена и/или его производного в предложенной эмульсии составляет 2-3,5%. Если же эмульсия используется в креме, то содержание тритерпена и/или его производного составляет предпочтительно 3,5-10%. Масляная и/или жирная составляющая эмульсии может быть выбрана из любых известных в фармакологии и косметике масел и жиров. Особенно подходят животные и растительные жиры, такие как масло жожоба, арахисовое масло и оливковое масло. Особенно предпочтительно применение масла авокадо или миндального масла. Для регулирования консистенции предложенной эмульсии в нее можно добавлять обычные регуляторы влажности и/или загустители и закрепители. В качестве регуляторов влажности можно применять,в частности, глицерин и мочевину. При этом наиболее подходящая концентрация глицерина и/или мочевины составляет 3-10% для каждого из этих веществ в расчете на количество эмульсии. В качестве загустителя можно использовать, например, полисахарид, добавляемый в концентрации 0,2-2%, предпочтительно 0,5%, в расчете на количество используемой воды. Особенно хорошо подходят природные полисахариды, а также другие сахарсодержащие соединения и их производные, так как они не реагируют с другими компонентами эмульсии, в особенности, не изменяют их качеств, и таким образом являются химически инертными. По этой причине очень подходит для применения в эмульсии полисахарид агар-агар. Агар-агар представляет собой смесь агарозы и агаропектина, извлекаемую из ротальгена, и обладает тем достоинством, что он не разлагается под действием большинства микроорганизмов. В качестве альтернативы ему можно использовать полисахарид каррагенан, который встречается в природе в стенках клеток красных и бурых водорослей и обладает теми же достоинствами, что агар-агар. В еще одном варианте предложенная эмульсия содержит 2-10% экстракта белой части березовой коры, 20-30% масла авокадо, 10-20% миндального масла и 40-68% воды. Наиболее предпочтительные значения содержания ингредиентов составляют 4% экстракта белой части березовой коры, 29,3% масла авокадо, 14,7% миндального масла и 52% воды. В другом варианте предложенная эмульсия содержит 2-10% экстракта белой части березовой коры,20-30% масла авокадо, 10-20% миндального масла, 5-10% регулятора влажности и 30-63% воды. При этом наиболее предпочтительны следующие значения содержания ингредиентов: 4% экстракта белой части березовой коры, 29,3% масла авокадо, 14,7% миндального масла, 5% глицерина и/или 5% мочевины, а также 42-47% воды. Экстракт белой части березовой коры, присутствующий во всех вариантах эмульсии, содержит по меньшей мере 80% бетулина, не более 10% бетулиновой кислоты, не более 3% лупеола и не более 4% олеаноловой кислоты. Благодаря своему составу и подтвержденному отсутствию токсичности эмульсия исключительно пригодна в качестве мазевой основы для подмешивания в нее любых известных специалисту душистых,косметических и лекарственных веществ. Еще одним объектом настоящего изобретения является способ изготовления предложенной эмульсии, причем этот способ включает в себя следующие стадии:(c) гомогенизирование полученной эмульсии до требуемой консистенции. При этом диспергирование и гомогенизирование предпочтительно проводят в смесителе-гомогенизаторе, так как предложенный способ осуществлять таким образом особенно просто. Кроме того, можно готовить и малые количества эмульсии для индивидуального применения.-5 006296 В особом варианте способа в воду, которая применяется при эмульгировании, добавляют регулятор влажности, в частности, глицерин и/или мочевину, или загуститель, в частности, полисахарид. Таким образом можно достичь особенно кремоподобной консистенции. Еще одним объектом настоящего изобретения является применение тритерпенов для изготовления косметического средства, предпочтительно в виде мази, лосьона, крема, геля, желе, настойки, шампуня,пудры и/или порошка, в частности, для нанесения на кожу туловища, кожу головы и/или для ингаляций. Благодаря своему химическому родству со стеролами тритерпены, в частности, получаемый бетулин,подходят для ухода за кожей туловища и головы. Он успокаивает и смягчает кожу, уменьшает потерю влаги и предупреждает раздражения и покраснения. Так, это косметическое средство может хорошо применяться для увлажнения и разглаживания кожи, а также уменьшения старческих пятен, а также при шелушении кожи. Еще одно преимущество заключается в нерастворимости тритерпенов в воде, что обеспечивает особенно хорошую защиту кожи, находящейся под сильным и длительным воздействием воды. Благодаря антибактериальному действию особенное преимущество имеет применение в качестве дезодоранта. Сюда можно прибавить и снижение потоотделения за счет эффективной закупорки потовых желез. Другим объектом настоящего изобретения является применение тритерпенов для изготовления лекарственного средства, предпочтительно в виде мази, лосьона, крема, геля, желе, настойки, шампуня,пудры и/или порошка, в частности, для нанесения на кожу туловища, кожу головы и/или для ингаляций,особенно предпочтительно при дерматологических изменениях кожи туловища и/или головы, прежде всего при нейродермите, псориазе, себорейной экземе, меланодермии, предопухолевых состояниях кожи,а также для ингаляций при астматических приступах и/или для замещения гликокортикоидов. Также благодаря высокой чистоте получаемые тритерпены, в частности, бетулин, пригоден для терапевтического применения на коже, имеющей повреждения. Предложенные эмульсии так хорошо подходят для вышеуказанного применения, потому что экстракт белой части березовой коры не имеет мутагенных свойств. Также проводились испытания на токсичность при местном применении, которые не выявили никаких сенсибилизирующих свойств. Описываемые ниже примеры приводятся для пояснения и лучшего понимания настоящего изобретения, но они не должны толковаться как ограничивающие изобретение. ПримерыI. Наблюдения за применением лекарственных средств Врачами, ведущими частную практику, а также клиническими врачами были проведены различные наблюдения за применением лекарственных средств в случаях дерматологических изменений кожи. После установления врачами диагноза проводилось лечение пациентов предложенной эмульсией, изготавливавшейся описанным способом. Пример 1. Пациент мужского пола, возраст 68 лет Диагноз: тяжелый генерализованный псориаз обыкновенный (Psoriasis vulgaris) Предшествовавшее лечение: кортизоновая мазь средней силы действия Применение: лицо Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: применение предложенной эмульсии предотвратило появление псориатических высыпаний после прекращения использования кортизоновой мази. Пример 2. Пациент мужского пола, возраст 48 лет Диагноз: легкий псориаз обыкновенный Предшествовавшее лечение: кортизоновая мазь средней силы действия Применение: голова Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: применение предложенной эмульсии в течение 14 дней привело к заживлению воспалительных очагов в престернальной области на голове размером в монету 5 немецких марок; повторное обострение воспаления (рецидив) после прекращения использования эмульсии; снова заметное улучшение после возобновления лечения. Пример 3. Пациент женского пола, возраст 5 месяцев Диагноз: нейродермит, гиперкеракотическая, преждевременно состарившаяся, растрескавшаяся кожа Применение: туловище Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: очень заметное улучшение, отличная эффективность при одновременно хорошей переносимости.-6 006296 Пример 4. Пациент: женского пола, возраст 10 лет Диагноз: нейродермит, гиперкеракотическая, преждевременно состарившаяся, растрескавшаяся кожа Применение: туловище Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: очень заметное улучшение, отличная эффективность при одновременно хорошей переносимости. Пример 5. Пациент мужского пола, возраст 5 месяцев Диагноз: нейродермит, гиперкеракотическая, преждевременно состарившаяся, растрескавшаяся кожа Применение: туловище Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: очень заметное улучшение, отличная эффективность при одновременно хорошей переносимости. Пример 6. Пациент женского пола, возраст 28 лет Диагноз: нейродермит, нейродермитные высыпания Применение: область локтевого сгиба, лицо, область груди ниже шеи (декольте) Предшествовавшее лечение: Dermatodoron, мазь с сурьмой металлической (stibium metallicum), мазь"Top-Isolon-Bartel", мазь с mesembryanthemum; применение этих мазей не привело к радикальному улучшению состояния пораженных нейродермитом участков. Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: заметное ослабление нейродермита. Пример 7. Пациент женского пола, возраст 79 лет Диагноз: себорейная экзема Применение: голова Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: уменьшение образования струпьев в области головы, красноватые участки бледнели несколько медленнее. Пример 8. Пациент женского пола, возраст 55 лет Диагноз: сильно зудящая, шелушащаяся, мокнущая экзема Применение: лицо, голова Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: видимое улучшение состояния обрабатывавшихся участков. Пример 9. Пациент женского пола, возраст 33 года Диагноз: сухая, зудящая, лихенифицированная экзема с образованием струпьев Применение: голень Лечение: многократное ежедневное нанесение предложенной эмульсии в качестве мазевого препарата на пораженные участки кожи. Результат: еще не оценен.II. Изготовление растительного экстракта Исходный материал: берестаA) Описание и обеспечение качества Береста поставляется 1. целлюлозной компанией "Kaukas" (UPM-Kymmene, Лаппеенранта, Финляндия).Kaukas механически отделяет кору от березовой древесины, а также механически снимает бересту с внутренней части коры. 2. собственными сотрудниками, которые срезают бересту вручную. На первом этапе механически отделенная и нарезанная вручную береста анализируется на предмет своей идентичности. С этой целью бересту подвергают микроскопическому исследованию, при котором обнаруживается несколько отдельных слоев бересты и чечевички, характерные для березы. Дополнительно оценивают экстрагируемое количество тритерпенов n-гексаном при температуре 140-160 С и возрастающем давлении. Экстраги-7 006296 руемое количество тритерпенов с бетулином в качестве главного компонента превышает 10%, так как такие количества присутствуют только в бересте берез с белой корой. Исследования материала на чистоту включают в себя анализ на наличие афлатоксинов, тяжелых металлов, гербицидов и пестицидов в соответствии с европейскими стандартами.B) Измельчение бересты Бересту измельчают в режущей мельнице (фирмы "Retsch") и вытягивают из машины воздушной струей через сито с размером ячеек 1 мм в диаметре. Для последующей экстракции используют только частицы с размером зерна, меньшим или равным 1 мм. Экстрагирование тритерпенов Для экстрагирования используют феномен, заключающийся в том, что тритерпены из бересты практически нерастворимы в холодном n-гексане, но хорошо растворяются в горячем n-гексане (от 140-160 С) под давлением. Этот способ осуществляют в две стадии: 1. Бересту очищают n-гексаном (горячим, ниже температуры кипения 69 С) в аппарате для определения содержания жиров в текстильном волокне по методу Сокслета до тех пор, пока раствор n-гексана не потеряет свой желтоватый цвет. Активный компонент экстрагируют из предварительно промытого гранулята бересты n-гексаном при температуре 140-160 С и повышенном давлении (экстрагирование проводят при помощи установки Dionex ASE со 100-миллилитровыми емкостями). За счет высвобождения перегретого раствора, содержащего n-гексан и тритерпены, происходит непосредственная кристаллизация, в результате чего получают микрокристаллический порошок из тритерпенов прямо в холодномn-гексане. Этот порошок отфильтровывают и дважды промывают в холодном n-гексане. Полученные тритерпены сушат при температуре 80-100 С. Определение чистоты экстракта Чистоту экстракта проверяют посредством газовой хроматографии. Результаты представлены в обзоре, приведенном в приложении 1. Были измерены следующие значения: бетулин - минимум 80% бетулиновая кислота - максимум 10% лупеол - максимум 3% олеаноловая кислота - максимум 4%. В прилагаемом обзоре представлена типовая хроматограмма со значениями содержания 84-86% для бетулина, 4-5% для бетулиновой кислоты, примерно 1% для лупеола и примерно 1% для олеаноловой кислоты. Согласно нормам Международной конференции по гармонизации технических требований к регистрации лекарственных средств для людей (ICH) остаточное количество растворителя n-гексана должно составлять менее 7,250 мг на килограмм экстракта, так как крем, содержащий 4% экстракта бересты, может содержать не более 290 мг/кг n-гексана. Типовые значения составляют 1,500 мг/кг n-гексана в сухом экстракте, что соответствует примерно 60 мг/кг в березовом креме. Выходной контроль: Каждая партия проверяется в соответствии с европейскими нормами на кислотное число (допускается менее 5) и пероксидное число (допускается менее 15) по стандартизованной методике. Содержание березового экстракта анализируют посредством газовой хроматографии. Далее следует проверка на содержание микроорганизмов (допускается менее 100 на грамм), кроме того, не допускается присутствие патогенных микроорганизмов.III. Предложенные композиции (березовый крем): Сведения о предложенных композициях сведены в табл. 1. Эти композиции имеют следующий состав: Таблица 1. Состав композиций-8 006296 Все три композиции содержат одинаковое количество активного ингредиента (экстракт бересты), а также масла авокадо и миндального масла. Они отличаются лишь по содержанию ингредиентов мочевины (только в березовом креме Н) и глицерина (только в березовом креме G), а березовый крем А не содержит этих двух компонентов. Испытание на стабильность Березовый крем можно центрифугировать при перегрузке 500 g, и при этом он сохранит стабильность.IV. Токсикологические исследования 1. Острая токсичность Острую токсичность экстракта бересты определяли путем внутрибрюшинного и подкожного введения мышам и крысам. Мыши: Пяти самцам и пяти самкам подопытных мышей (CD-1) подкожно ввели единичные дозы экстракта бересты (номер партии: Bet. 001) в метоцеле, использовавшемся в качестве носителя. Животные получили дозу из расчета 2000 мг/кг (миллиграмм препарата на килограмм веса тела). Коэффициент смертности определяли через 14 дней после введения единичной дозы препарата для установления дозы половинной смертности LD50. На протяжении того же периода времени за животными наблюдали для выявления признаков токсичности. В качестве таковых рассматривают местные и системные реакции непереносимости, а также изменение веса тела. В конце эксперимента животных умертвили и подвергли макроскопическому исследованию. Испытания на острую токсичность проводились в соответствии с Руководством ЕЭС L 383 А: В 1. При данных условиях эксперимента (2000 мг/кг) не наблюдалось никаких реакций непереносимости. На протяжении эксперимента у животных наблюдался ожидавшийся прирост веса. Результаты приведены в табл. 2. Таблица 2. Острая токсичность у мышей Средний вес тела во время эксперимента При микроскопическом исследовании у трех самцов и трех самок были установлены лишь изменения, которые можно отнести на счет применявшейся техники проведения эксперимента. В этом испытании на токсичность область первой реакции непереносимости, низшее летальное значение дозы, а также величина LD50 находятся выше дозы 2000 мг/кг экстракта бересты. При внутрибрюшинном введении мышам экстракта бересты токсические симптомы наблюдались выше дозы 500 мг/кг. Наблюдались лишь легкие токсические реакции, такие как сниженная пассивная подвижность, нарушения координации движений и сниженное сопротивление растяжению мышц. Отсюда был сделан вывод, что эти токсические симптомы объясняются воспалением брюшины (перитонитом), которое было вызвано раствором экстракта. Величину LD50 установить не удалось, так что оно за время наблюдения 14 дней находится выше значения 2000 мг/кг. Крысы: Пяти самцам и пяти самкам лабораторных крыс Sprague-Dawley подкожно ввели единичные дозы экстракта бересты (номер партии: Bet. 001) в метоцеле, использовавшемся в качестве носителя. Животные получили дозу из расчета 2000 мг/кг. Коэффициент смертности и токсические симптомы определяли через 14 дней после введения единичной дозы препарата. В конце эксперимента животных умертвили и подвергли макроскопическому исследованию. Испытания на острую токсичность проводились в соответствии с Руководством ЕЭС L 383 А: В 1. При данных условиях эксперимента (2000 мг/кг экстракта бересты) реакции непереносимости или смертность не наблюдались. На протяжении эксперимента у животных наблюдался ожидавшийся прирост веса. При микроскопическом исследовании у одного самца и трех самок были установлены лишь изменения, которые можно отнести на счет применявшейся техники проведения эксперимента. Результаты приведены в табл. 3. В этом эксперименте на токсичность область первых реакций непереносимости, низшее летальное значение дозы, а также величина LD50 находятся выше дозы 2000 мг/кг экстракта бересты. При внутрибрюшинном введении крысам экстракта бересты токсические симптомы наблюдались выше дозы 500 мг/кг. Наблюдались лишь легкие токсические реакции, такие как сниженная пассивная подвижность, нарушения координации движений и сниженное сопротивление растяжению мышц. Отсюда был сделан вывод, что эти токсические симптомы объясняются воспалением брюшины (перитонитом), которое было вызвано раствором экстракта. Величину LD50 установить не удалось, так что оно за время наблюдения 14 дней находится выше значения 2000 мг/кг. Вывод: Руководство OECD устанавливает, что если за период времени 14 дней при введении мышам и крысам (пяти самцам и пяти самкам) исследуемого продукта в количестве 2000 мг/кг отсутствует обусловленная этим продуктом смертность, то дальнейшие испытания проводить не требуется. Химические продукты классифицируются по их относительной токсичности. Они называются токсичными, если величина LD50 находится между 50 и 500 мг/кг. Когда величина LD50 составляет от 5000 до 15000 мг/кг, то говорят о практически полном отсутствии токсичности продукта. В данном случае можно исходить из величины LD502000 мг/кг, которая, вероятно, превышает и значение 5000 мг/кг, так как даже при высокой величине 2000 мг/кг токсические симптомы не наблюдались. Как следует из результатов описанных выше экспериментов, экстракт бересты можно назвать нетоксичным. 2. Подострая токсичность Крысы, внутрибрюшинное введение В рамках исследования подострой токсичности подопытным крысам (Sprague-Dawley/Crl: CD BR) на 14 дней ввели экстракт бересты (номер партии: Bet. 009) посредством инъекции внутрибрюшинно. Протокол эксперимента приведен в табл. 4.- 10006296 Таблица 4. Протокол экспериментального исследования подострой токсичности (крысы, внутрибрюшинное введение) виде гомогенно распределенных частиц (микрокристаллический порошок) Данное исследование на подострую токсичность использовалось для определения дозы, которая применялась в четырехнедельном исследовании субхронической токсичности. Результаты этого исследования представлены в табл. 5. Таблица 5. Исследования на подострую токсичность у крыс) р 0,01 по сравнению с контрольной группой 1) 4 самца, 4 самки (дни 11-15) 2) 4 из 5 самок, 2 из 5 самцов Изменения в клинической биохимии (табл. 5) являются значительными по сравнению с контрольной группой только в группах 3 и 4 (р 0,01); в группе 3 в отношении активности аспартатаминотрансферазы (АсАТ) (+113/+132%), в группе 4 только у самок в отношении следующих показателей: общий белок, мочевина в крови, кальций, калий и активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Таблица 6. Гематологические изменения, установленные при исследовании подострой токсичности) р 0,01 по сравнению с контрольной группой Внешний осмотр, проведенный перед вскрытием, показал во всех группах увеличение брюшного отдела, от умеренного до тяжелого, за исключением контрольной группы, в которой у всех животных было лишь незначительное увеличение брюшного отдела. Результаты макроскопического исследования после вскрытия приведены в табл. 7. Таблица 7. Результаты вскрытия при исследовании подострой токсичности - определение групп см. в табл. 4 Пояснения к табл.7: 1) у 4 животных Это двухнедельное исследование, направленное на определение диапазона доз, показало, что дозы,не оказывающие воздействия, находятся ниже 500 мг/кг березового экстракта. Увеличение брюшного отдела от умеренного до сильного наблюдалось при 500 мг/кг и более высоких дозах. Значительное снижение веса тела было установлено во всех группах животных, которым вводили исследуемый препарат,однако только у самцов. Взъерошенная шерсть наблюдалась при 1000 мг/кг и более высоких дозах. Некоторые гематологические и/или биохимические параметры при 1000 мг/кг и более высоких дозах были значительно изменены. Исследование после вскрытия показало белые отложения на диафрагме или органах брюшной полости, которые при 500 мг/кг и более высоких дозах частично сопровождались прили- 12006296 панием. Во всех группах брюшная полость животных была наполнена белой маслянисто/водянистой жидкостью, что можно объяснить применением носителя кунжутного масла. После введения 2000 мг/кг погибли 8 животных из десяти. Исследование после вскрытия выявило: 1) воспаление брюшины у четырех из преждевременно погибших животных; 2) у всех животных брюшная полость наполнена белым пульпообразным/маслянистым содержимым. Для исследования препарата на субхроническую токсичность был выбран диапазон доз от 60 до 540 мг/кг. Собаки (гончие), внутрибрюшинно Было проведено исследование на подострую токсичность с гончими в течение двух недель в качестве эксперимента по определению доз в течение 4 недель в качестве исследования на субхроническую токсичность. Экстракт бересты (номер партии: Bet. 009) вводили внутрибрюшинно с кунжутным маслом в качестве носителя. Результаты приведены в табл. 8. Таблица 8. Исследования на подострую токсичность у собак (гончие), внутрибрюшинно) МПД - максимально переносимая доза Результаты представлены в табл. 9. Таблица 9. Исследования на субхроническую токсичность у собак (гончие), внутрибрюшинно) Эти животные были умерщвлены через неделю после последнего введения препарата из-за их плохого состояния. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ непрерывного извлечения тритерпенов из бетулинсодержащих растений и/или их частей,включающий следующие стадии:(a) непрерывная подача частей растений и растворителя, в котором тритерпены нерастворимы или малорастворимы, и промывка частей растений растворителем в противотоке при 20-70 С;(b) непрерывное экстрагирование тритерпенов растворителем в противотоке при давлении 1-300 бар и температуре 50-200 С;(c) непрерывное охлаждение раствора, содержащего тритерпены, и понижение давления с обеспечением выкристаллизовывания тритерпенов из растворителя;(d) отфильтровывание тритерпенов при комнатной температуре и(e) промывка тритерпенов растворителем. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что тритерпены извлекают из березовой коры, предпочтительно из белой части березовой коры (бересты). 3. Способ по любому из пп.1-2, отличающийся тем, что его ведут до достижения степени чистоты полученных тритерпенов по меньшей мере 80%, предпочтительно 85%, в особенности 90% и особо предпочтительно свыше 90%. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что главной составной частью экстрагируемых тритерпенов является бетулин.- 13006296 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что содержание бетулина составляет по меньшей мере 80%, предпочтительно 85%, в особенности 90% и особо предпочтительно - свыше 90%. 6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что на стадиях (а), (b) и (е) применяют одинаковый растворитель. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют сверхкритический СО 2, углеводород с низкой температурой кипения или смесь, содержащую углеводород с низкой температурой кипения. 8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют nпентан, n-гексан или n-гептан. 9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что на стадии (а) используют растворитель, который отделяют от экстракта, полученного на стадии (b). 10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что промывку на стадии (а) проводят под давлением 1-300 бар, предпочтительно 10-35 бар и особенно предпочтительно - 25 бар. 11. Способ по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что экстрагирование на стадии (b) проводят при температуре 140-160 С и под давлением 10-35 бар. 12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что выкристаллизовывание тритерпенов ведут при условиях, обеспечивающих получение среднего размера зерен менее 40 мкм, в частности от 2 до 32 мкм. 13. Эмульсия, содержащая тритерпены, полученные способом по п.1 из бересты, по меньшей мере одно масло и/или жир и воду, причем тритерпены являются эмульгатором и консервантом и обладают фармацевтической активностью. 14. Эмульсия по п.13, отличающаяся тем, что содержание в ней тритерпенов составляет 2-10% по массе. 15. Эмульсия по п.14, отличающаяся тем, что содержание в ней тритерпенов составляет 2-3,5% или 3,5-10% по массе. 16. Эмульсия по любому из пп.13-15, отличающаяся тем, что маслом является масло авокадо и/или миндальное масло. 17. Эмульсия по любому из пп.13-16, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере один регулятор влажности и/или по меньшей мере один загуститель. 18. Эмульсия по п.17, отличающаяся тем, что регулятором влажности является глицерин и/или мочевина, добавляемые в концентрации 3-10%, предпочтительно 5% для каждого из указанных веществ, в расчете на количество эмульсии. 19. Эмульсия по п.17, отличающаяся тем, что загустителем является полисахарид, добавляемый в концентрации 0,2-2%, предпочтительно 0,5%, в расчете на количество воды. 20. Эмульсия по п.19, отличающаяся тем, что полисахаридом является агар-агар или каррагенан. 21. Эмульсия по любому из пп.13-20, отличающаяся тем, что она содержит 2-10% тритерпенов, 2030% масла авокадо, 10-20% миндального масла и 40-68% воды. 22. Эмульсия по п.21, отличающаяся тем, что она содержит 4% тритерпенов, 29,3% масла авокадо,14,7% миндального масла и 52% воды. 23. Эмульсия по любому из пп.13-20, отличающаяся тем, что она содержит 2-10% тритерпенов, 2030% масла авокадо, 10-20% миндального масла, 5-10% регулятора влажности и 30-63% воды. 24. Эмульсия по п.23, отличающаяся тем, что она содержит 4% тритерпенов, 29,3% масла авокадо,14,7% миндального масла, 5% глицерина и/или 5% мочевины и 42-47% воды. 25. Эмульсия по любому из пп.13-24, отличающаяся тем, что в состав тритерпенов входит по меньшей мере 80% бетулина, не более 10% бетулиновой кислоты, не более 3% лупеола и не более 4% олеаноловой кислоты. 26. Способ изготовления эмульсии по любому из пп.13-25, включающий в себя следующие стадии:(c) гомогенизирование полученной эмульсии до требуемой консистенции. 27. Способ по п.26, отличающийся тем, что диспергирование и гомогенизирование проводят в смесителе-гомогенизаторе. 28. Способ по любому из пп.26 или 27, отличающийся тем, что в воду на стадии (b) добавляют регулятор влажности, в частности, глицерин и/или мочевину, или загуститель, в частности, полисахарид. 29. Применение эмульсии по любому из пп.13-25 для изготовления косметического средства, предпочтительно в виде мази, лосьона, крема, геля, желе, настойки, шампуня, пудры и/или порошка, в частности, для нанесения на кожу туловища и/или головы. 30. Применение эмульсии по любому из пп.13 -25 для изготовления лекарственного средства, предпочтительно в виде мази, лосьона, крема, геля, желе, настойки, шампуня, пудры и/или порошка, в частности, для нанесения на кожу туловища, кожу головы, предпочтительно при дерматологических изменениях кожи туловища и/или головы, в частности, при нейродермите, псориазе, себорейной экземе, мела- 14006296 нодермии, предопухолевых состояниях кожи, а также для ингаляций при астматических приступах и/или для замещения гликокортикоидов.