Синтетическая биологически активная молекула и способы ее получения

006631 Изобретение касается синтетической биологически активной молекулы и способа ее получения. У X.S.Chen, T.StehleS.C.Harrison, 1998, "Interaction of polyomavirus internal protein VP2 with themajor capsid protein VP1 and implications for participation of VP2 in viral entry", The EMBO Journal, Vol. 17, 12, pp.3233-3240 описаны взаимодействия, обеспечивающие прикрепление вирусных белков VP2 иVP3 полиомавируса к вирусному белку 1. В соответствии с указанной публикацией прикрепление имеет место на участке С-концевого сегмента VP2 или VP3. В патенте US 4950599 описано, что полиомавирус пригоден для переноса активных веществ в клетки. Более того, в DE 19618797-А 1 заявлено, что капсомер, происходящий от полиомавируса, пригоден для транспортировки молекулярного материала в клетки. В ЕР-0-259149 А 2 описано использование ротавирусного внутреннего капсидного белка VP6 в качестве иммунологической молекулы-носителя и в качестве вакцины для стимулирования иммунного ответа на ротавирусные инфекции. В этой связи иммуногенные пептиды связывают с VP6 за счет пептидпептидных взаимодействий, которые не определены в каких бы то ни было подробностях. В этом случаеVP6 не образует структурного капсомера, но, напротив, проявляет отчетливый структурный полиморфизм. VP6 представлен в качестве мономерной или олигомерной формы. Хотя олигомерный VP6 способен образовывать частицы, такие частицы не являются капсидами или капсомерами, будучи неструктурированными белками-переносчиками. У M.J.Redmond et al., 1991, "Rotavirus particles function as immunological carriers for the delivery ofpeptides from infectious agents and endogenous proteins", Mol. Immunol., 28, 269-278 описано использование ротавирусного внутреннего капсидного белка VP6 в качестве транспортной частицы. В этой связи VP6 связывают с иммуногенными пептидами или белками через связывающий белок, происходящий от пептидной последовательности ротавирусного белка VP4. Антиген, соединнный с пептидной последовательностью, происходящей от VP4, расположен с внешней стороны частицы-переносчика и, следовательно, не защищен от разрушения.GB 2257431-А описывает использование химерного белка, который происходит от оболочечного белка фага MS-2. Этот белок способен образовывать капсиды. Антигенные пептиды или подобное, присоединенные к нему, связаны с наружней частью капсида. Спонтанное образование химерного белка в ходе экспрессии в E.coli несет в себе высокий риск загрязнения бактериальными ДНК или белками.DE 4335025-A1 заявляет эндосомолитически активную вирусоподобную частицу, которая была модифицирована мембрано-активными пептидами на ее внешней поверхности. Получение упомянутой частицы является сложным. Объектом настоящего изобретения является преодоление недостатков, имеющихся в известном уровне техники. В частности, оно призвано предоставить простую возможность специфического связывания активных веществ с белком VP1 полиомавируса. Указанная цель достигается созданием новой биологически активной молекулы и разработкой способа ее получения. Биологически активная молекула применяется в составе лекарственных средств. В описании используются следующие определения. Производная аминокислотная последовательность - аминокислотная последовательность, которая не изменена по сравнению с аминокислотной последовательностью, от которой она происходит, или которая отличается от не заменами, вставками или делециями аминокислот. С-концевая часть - участок или область С-концов. Синтетическая молекула - искусственно полученная молекула. Сочетание или присоединение - ковалентное или нековалентное связывание. Нековалентное связывание может быть осуществлено, например, с помощью хелатной связи. Генная инженерия - технология, которая включает методы внесения определнных нуклеиновых кислот в клетки. В соответствии с настоящим изобретением заявляется синтетическая биологически активная молекула, причем аминокислотная последовательность (А 1), происходящая от С-концевой части вирусного белка 2 (VP2) или 3 (VP3) полиомавируса, соединена с активным веществом. Предлагаемая синтетическая биологически активная молекула делает возможным простое специфическое связывание активных веществ с VP1 полиомавируса. Это приводит к образованию структурированного капсомера. С использованием упомянутого капсомера возможно простым образом получать капсиды в качестве универсальных переносчиков активных веществ. Преимущественно аминокислотная последовательность (А 1) включает от 10 до 55, предпочтительно от 28 до 38 аминокислот. Ограничение относительно короткой аминокислотной последовательностью снижает стоимость и упрощает получение синтетической биологически активной молекулы. Целесообразно, чтобы аминокислотная последовательность, по крайней мере, в некоторых участках соответствовала последовательности VP2 по аминокислотным положениям 250-319, предпочтительно по аминокислотным положениям 260-300 и, в частности, предпочтительно по аминокислотным положениям 287-297. Упомянутая аминокислотная последовательность обеспечивает гарантированное прикрепление к VP1.-1 006631 В синтетической биологически активной молекулеаминокислотная последовательность (А 1) предпочтительно характеризуется аминокислотами в нижеследующей последовательности: Предпочтительно активное вещество связывают с аминокислотной последовательностью (А 1) через линкер. Такой линкер может быть составлен по крайней мере одной аминокислотой, пептидом, белком,липидом или подобным. Активное вещество может быть выбрано из следующей группы: нуклеиновая кислота, олигонуклеотид, белок, пептид, пептидное вещество, РНП, модификации указанных веществ и низкомолекулярные фармацевтически активные вещества. Конкретно приемлемыми являются те активные вещества, которые сочетаются с аминокислотной последовательностью через одну из реактивных групп, упомянутых далее. Синтетическая биологически активная молекула может быть представлена соединенной с аминокислотной последовательностью, происходящей от VP1 полиомавируса, и/или может являться компонентом лекарственного средства. Далее в соответствии с настоящим изобретением представляется способ получения синтетической биологически активной молекулы по настоящему изобретению, который включает следующие стадии:(a) получение аминокислотной последовательности (А 1), происходящей от С-концевой части VP2 или VP3 полиомавируса, включающей средство для связывания, причем средство для связывания способно присоединять активное вещество; и(b) связывание активного вещества с аминокислотной последовательностью (А 1) через связывающий агент. Связывающий агент может представлять собой аминокислоту глицин, цистеин или глицин, связанный с лизином. Преимущественно связывающий агент получают в виде дополнительной, предпочтительно синтетической аминокислотной последовательности (А 2), связанной с N- или С-концом аминокислотной последовательности (А 1). Синтетическая биологически активная молекула может быть получена, по крайней мере частично,методами генной инженерии. В этом случае аминокислотная последовательность (А 1), дополнительная аминокислотная последовательность (А 2) и активное вещество могут быть полностью или частично получены с помощью методов генной инженерии. Целесообразным является наличие в дополнительной аминокислотной последовательности (А 2) остатков глицина и/или аминокислот с функциональными боковыми группами, чтобы было возможным выбрать функциональные боковые группы из следующих групп: амино, сульфгидрильный, карбоксильный, гидроксильный, гуанидиновый, фенильный, индольный и имидазольный радикал. Связывающий агент может быть реактивной (реакционно-способной) группой, связанной с С- илиN-концом аминокислотной последовательности (А 1) через аминокислоту, предпочтительно глицин, цистеин или глицин, связанный с лизином. Указанное может иметь один из следующих компонентов: аминокислоту с монобромацетильным радикалом, аминокислоту с монохлорацетильным радикалом, аминокислоту с 3-нитро-2-пиридинсульфенильным радикалом (Npys). Предполагаемые реактивные группы могут быть использованы как универсальные. Они подходят для присоединения множества активных веществ. В частности, была подтверждена предпочтительность связывания активного вещества с аминокислотной последовательностью (А 1) или с дополнительной аминокислотной последовательностью (А 2) через тиоэфирный или дисульфидный мостик. На практике такой тип связи легко может быть получен. Понятно, что также допустимо использование других реактивных групп. Подходящими группами являются, например, N-сукцинимидилбромацетат или N-сукцинимидил-3-(2-пиридилтио)пропионат (SPDP). Активное вещество может быть связано с аминокислотной последовательностью (А 1) или с дополнительной аминокислотной последовательностью (А 2) через линкер. Линкер может быть составлен по крайней мере из одной аминокислоты, пептида, белка, липида или подобным. Далее в соответствии с настоящим изобретением представляется способ получения синтетической биологически активной молекулы по настоящему изобретению, причм способ включает следующие стадии:(a) синтез аминокислотной последовательности (А 1), происходящей от С-концевой части белка 2(b) синтез фармацевтически активного вещества, а именно пептида, и обеспечение связывания его с аминокислотной последовательностью (А 1),причем стадии (а) и (b) осуществляют методами пептидного синтеза или методами генной инженерии. На стадии (b) аминокислотную последовательность (А 1) достраивают активным веществом. Удлинение и присоединение активного вещества осуществляют путем последовательного присоединения аминокислотных остатков. Данный способ может быть осуществлен достаточно легко.-2 006631 Дальнейшие преимущественные варианты, касающиеся обоих упоминавшихся выше способов,можно найти в зависимых пунктах. Примеры А. Синтез и очистка пептидов Пептиды синтезируют с помощью одновременного множественного пептидного синтезаsynthesis - a practical approach", IRL Press, Oxford). Реакции соединения проводят в каждом случае с 6 эквивалентами Fmoc-защищенной аминокислоты, 1-гидроксибензотриазола (HOBt), 12 эквивалентами нметилморфолина с использованием 2-(1 Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуронийтетрафторбората(TBTU) на полимерной смоле-носителе (тип: смола Tentagel S Trityl, RAPP Polymere, Tbingen, Германия) с загрузкой 2 ммоль на 1 г смолы. Пептиды включают С-концевую СООН-группу. В синтезе используют следующие защитные группы: Cys (Trt), Arg (Pbf), Ser (But), Thr (But), AspOBut - сложный трет-бутиловый эфир; Воc - трет-бутоксикарбонил; и Pbf - 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил. Все защитные группы удаляют с использованием трифторуксусной кислоты (ТФУ), тиоанизола и тиокрезола (95:2,5:2,5) при комнатной температуре в течение 3 ч с добавлением 3% триизопропилсилана и последующим добавлением 10% триметилхлорсилана в течение 1 ч. После лиофилизации пептиды находятся в форме своих трифторацетатных кислых солей. Пептиды очищают с помощью препаративной ВЭЖХ на делительной колонке Bischoff Polyencap 300, 10 мкм, 250x16 мм, с использованием градиента от 0,05% трифторуксусной кислоты в воде (элюент А) до 0,05% трифторуксусной кислоты в 80% ацетонитрила в воде (элюент В). В качестве альтернативы использовали делительную колонку Vydac типа 218-ТР 101522 (10-15 мкм, 250x22 мм) с градиентом 43-73% элюента В в течение 30 мин при скорости протока 15 мл/мин. С помощью пептидного синтеза, например, синтезируют следующую аминокислотную последовательность: В данной последовательности реактивную группу связывают с N-концевой частью аминокислотной последовательности через аминокислоту, предпочтительно глицин. Реактивная группа может быть представлена монохлорацетилглицином. Как альтернатива, также возможным является присоединение монобромацетильного радикала. Присоединение монохлорацетилглицина в твердофазном синтезе Равное количество эквивалентов монохлорацетилглицина и 1-гидроксибензотриазола (HOBt) растворяют в диметилформамиде (DMF), смешивают с эквивалентным количеством N,N'диизопропилкарбодиимида (DIC) и добавляют к смоле с пептидом. По отношению к смоле, на которую загружен пептид, монохлорацетилглицин присутствует в избытке. Реакцию проводят, изредка помешивая, в течение по крайней мере 1 ч. Реактивная группа облегчает ковалентное присоединение биологически активной молекулы, полученной таким образом, к активному веществу, например, пептиду, который имеет свободную SH-группу. Реакция SH-группы с атомом хлора в монохлорацетильной группе приводит к образованию стабильного тиоэфирного соединения в соответствии со следующим уравнением: Образование конъюгата между якорным пептидом, модифицированным монохлорацетилом, и пептидом,имеющим концевой цистеин Якорный пептид, модифицированный монохлорацетилом, используют в избытке по отношению к пептиду, с которым он должен быть конъюгирован. Реакцию проводят в 0,1 М NaHCO3 при [sic] pH=7-8 при комнатной температуре. В случае плохой растворимости пептида или якоря в водном растворе получение конъюгата проводят в 4 М гуанидингидрохлориде, рН=8,0 (W.LindnerF.A.Robey, 1987, Int. J.Pept. Protein Res., 30, 794-800). Как альтернатива, в реакционной смеси соотношение органического растворителя, например ДМСО, может быть увеличено. С целью избежания образования нежелательных побочных продуктов в качестве восстанавливающих агентов могут быть добавлены водорастворимые фосфины. Также, что необязательно, возможным является проведение реакции конъюгации при следующих условиях. Монохлорацетилированный якорный пептид и пептид, имеющий концевую SH-группу, инкубируют при комнатной температуре в 1-метил-2-пирролидоне в присутствии примерно 10-кратного избытка диизопропилэтиламина и приблизительно 5-кратного избытка трибутилфосфина. По завершении-3 006631 реакции добавляют H2O и продукт осаждают добавлением эфира и очищают методом гель-фильтрации(J.P.Defoort, B.Nardelli, W.HuandJ.P.Tam, 1992, Int. J. Protein Res., 40, 214-221). Также, что необязательно, реакцию конъюгации можно провести следующим образом. Пептид,включающий SH-группу, растворяют в 0,2 М фосфатном буфере, 10 мМ ЭДТА - рН=7,4. К полученной смеси добавляют якорный пептид, модифицированный монохлорацетилом, растворенный в диметилформамиде. После реакции очистку проводят методами гель-фильтрации или ОФ-ВЭЖХ (L.ZhangJ.P.Tam, 1997, J. Amer. Chem. Soc, 119, 2363-2370). Выделенные пентамеры VP1 получают путем экспрессии VP1 в качестве рекомбинантного белка сN-концевой аффинной гексагистидиновой меткой (His-tag) в E.coli. Белок очищают с помощью аффинной хроматографии Ni-NTA. Метку His-tag удаляют обработкой фактором Ха. Белок анализируют методом электрофореза в ДСН-ПААГ с последующим окрашиванием кумасси голубым. Данный исходный материал (белок VP1 в 20 мМ HEPES, рН=7,3, 1 мМ ЭДТА, 200 мМ NaCl, 5% глицерина) концентрируют на фильтре Centricon-100 (Amincon [sic]) и разделяют с помощью гельфильтрационной жидкостной хроматографии быстрого разрешения (Superdex 200) с элюционным буфером (50 мМ Трис, 0,15 М NaCl, 5 мМ ЭДТА, рН=8,5) на высокомолекулярную капсидную фракцию и пентамерные субъединицы (молекулярная масса примерно 225 кД). Обе фракции концентрируют наCentricon-100. Иодацетамид (Sigma) добавляют к содержащему пентамеры раствору в 10-кратном молярном избытке с целью блокирования потенциально реактивных SH-групп. Реакцию проводят при комнатной температуре в течение 2 ч. Фракцию модифицированных пентамеров отделяют от избытка иодацетамида с помощью гель-фильтрации. VP1-специфичные моноклональные антитела адсорбируют с помощью VP1-специфичных антител и аффинного матрикса (подложка с белком А от BioRad). Покрытый антителами матрикс используют для осаждения очищенной фракции пентамеров. На следующей стадии инкубации к пентамерному матриксу добавляют якорную последовательность. Образцы анализируют в ДСН-полиакриламидном геле (12,5%). Образование конъюгата между якорным пептидом, Npys-модифицированным, и пептидом, имеющим концевой цистеин В дополнение к реакции между монохлор- или монобромацетилированным якорным пептидом и пептидом, имеющим концевой цистеин, с образованием тиоэфира конъюгат между якорным пептидом и пептидной последовательностью необязательно может быть образован через 3-нитро-2 пиридинсульфенильную группу (Npys) у концевого цистеина якоря и SH-группы пептида, который должен быть присоединен. Для этого Npys-модифицированный цистеин вместо монохлорацетилированного глицина присоединяют к N-концу якорной последовательности. Упомянутый Npys-модифицированный цистеин является активированным дисульфидом, который способен взаимодействовать с тиолами, такими как, например, цистеины, с образованием асимметричного дисульфида. В результате происходит удаление 3-нитро-2-тиопиридона, УФ-максимум которого при 329 нм позволяет исследовать кинетику реакции между двумя соединениями спектрометрическими методами. Для реакции выбирают следующие условия (F.Albericio, D.Andreu, E.Giralt, C.Navalpotro, E.Pedroso,B.PonsatiM.Ruiz-Gayo, 1989, Int. J. Peptide Res., 34, 124-128). Npys-модифицированный пептид добавляют к пептиду, предназначенному для присоединения, имеющему концевую SH-группу, и растворяют в 0,1 М ацетата натрия, 0,1 М хлорида натрия, рН=4,5, и рН затем доводят до 5,0 с последующей инкубацией при перемешивании в течение по крайней мере 12 ч. Затем рН доводят до 7,0 добавлением 1 Н NaOH с последующей дополнительной инкубацией в течение 3 ч. После реакции смесь диализуют против 10 мНNaHCO3. Оптимальный диапазон рН реакции находится между 4,5 и 7,0. Такие условия гарантируют минимизацию нежелательных побочных реакций, таких как, например, образование симметричных дисульфидов между пептидными молекулами, предназначенными для присоединения, или потеря группы Npys.Npys-модифицированный пептид должен присутствовать в реакции в избытке по отношению к конъюгированному пептиду (F.Albericio, D.Andreu, E.Giralt, C.Navalpotro, E.Pedroso, B.PonsatiM.Ruiz-Gayo,1989, Int. J. Peptide Res., 34, 124-128). Примеры настоящего изобретения проиллюстрированы в следующих списках последовательностей. Список последовательностей 1 показывает аминокислотную последовательность, происходящую отVP2 полиомавируса, положения 287-297. Она в составе синтетической биологически активной молекулы выполняет роль якоря для прикрепления активного вещества к VP1. Список последовательностей 2 показывает первый служащий примером вариант синтетической биологически активной молекулы. Производная от ВИЧ-1 пептидная последовательность соответствует положениям 1-21; присоединенная аминокислотная последовательность, являющаяся якорем, занимает положения 22-33. Она происходит от VP2 полиомавируса. Список последовательностей 3 показывает другой пример аминокислотной последовательности,пригодной в качестве якоря. Список последовательностей 4 показывает последовательность VP2 полиомавируса. Показаны последовательности между положениями 250 и 300, которые пригодны в качестве якорей.-4 006631 Списки последовательностей 5 и 6 показывают дополнительные синтетические биологически активные молекулы. Они могут быть соединены с VP1 полиомавируса и затем внесены в инфицированные клетки с целью лечения ВИЧ-инфекции. СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ 1 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Синтетическая биологически активная молекула, состоящая из фармацевтически активного вещества и аминокислотной последовательности (А 1), происходящей от С-концевой части белка 2 (VP2) или 3 (VP3) полиомавируса, причм активное вещество связано с аминокислотной последовательностью(А 1) таким образом, что может быть ассоциировано с белком 1 (VP1) полиомавируса через аминокислотную последовательность (А 1) с образованием структурного капсомера, причем указанная молекула может необязательно содержать средство для связывания активного вещества с аминокислотной последовательностью (А 1), и при этом аминокислотная последовательность (А 1), связанная с активным веществом, не является VP2 или VP3.- 10006631 2. Синтетическая биологически активная молекула по п.1, отличающаяся тем, что аминокислотная последовательность (А 1) включает 10-55, предпочтительно 28-38 аминокислот. 3. Синтетическая биологически активная молекула по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что аминокислотная последовательность (А 1) по крайней мере в некоторых участках соответствует последовательности VP2 по аминокислотным положениям 250-319, предпочтительно по аминокислотным положениям 260-300 и, особенно предпочтительно по аминокислотным положениям 287-297. 4. Синтетическая биологически активная молекула по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что аминокислотная последовательность (А 1) имеет следующую структуру: 5. Синтетическая биологически активная молекула по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что средство связывания включает линкер, или реактивную группу, или дополнительную аминокислотную последовательность (А 2). 6. Синтетическая биологически активная молекула по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что фармацевтически активное вещество выбрано из группы, включающей нуклеиновую кислоту, олигонуклеотид, белок, пептид, пептидное вещество, рибонуклеопротеин (РНП), модификации указанных веществ и низкомолекулярные фармацевтически активные вещества. 7. Синтетическая биологически активная молекула по любому из предыдущих пунктов, дополнительно связанная с аминокислотной последовательностью, происходящей от VP1 полиомавируса. 8. Лекарственное средство, содержащее синтетическую биологически активную молекулу по любому из предыдущих пунктов. 9. Способ получения синтетической биологически активной молекулы по любому из пп.1-7, включающий следующие стадии:(a) получение аминокислотной последовательности (А 1), происходящей от С-концевой части VP2 или VP3 полиомавируса, включающей средство для связывания, причем средство для связывания способно присоединять фармацевтически активное вещество; и(b) обеспечение связывания фармацевтически активного вещества с аминокислотной последовательностью (А 1). 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что средство для связывания содержит глицин, цистеин или глицин, связанный с лизином. 11. Способ по п.9 или 10, отличающийся тем, что средство для связывания выбрано из группы,включающей линкер, реакционно-способную группу и дополнительную аминокислотную последовательность (А 2). 12. Способ по пп.9-11, отличающийся тем, что дополнительная аминокислотная последовательность (А 2) соединена с N- или С-концевой частью аминокислотной последовательности (А 1), получена синтетическим путем и может содержать не только аминокислоты, указанные в п.10, но и дополнительно другие природные и/или синтетические аминокислоты. 13. Способ по любому из пп.9-12, отличающийся тем, что составные части молекулы по пп.1-7, а именно, последовательность А 1, необязательно последовательность (А 2), фармацевтически активное вещество, так же как и вся молекула по пп.1-7, могут быть получены методами генной инженерии. 14. Способ по пп.9-13, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность (А 2) дополнительно содержит глицин и/или аминокислоты с боковыми реакционно-способными группами. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что боковые реакционно-способные группы выбраны из группы, включающей амино, сульфгидрильный, карбоксильный, гидроксильный, гуанидиновый, фенильный, индольный и имидазольный радикалы. 16. Способ по любому из пп.9-15, отличающийся тем, фармацевтически активное вещество связано с С- или N-концевой частью аминокислотной последовательности (А 1) предпочтительно через глицин,цистеин или глицин, связанный с лизином. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что реакционно-способная группа представляет собой монобромацетильный радикал, монохлорацетильный радикал или 3-нитро-2-пиридинсульфенильный радикал (Npys). 18. Способ по любому из пп.9-17, отличающийся тем, что фармацевтически активное вещество связано с аминокислотной последовательностью (А 1) или с дополнительной аминокислотной последовательностью (А 2) через тиоэфирный или дисульфидный мостик. 19. Способ по любому из пп.9-18, отличающийся тем, что активное вещество связано с аминокислотной последовательностью (А 1) или с дополнительной аминокислотной последовательностью (А 2) через дополнительный линкер. 20. Способ получения синтетической биологически активной молекулы по п.1, включающий следующие стадии:(a) синтез аминокислотной последовательности (А 1), происходящей от С-концевой части белка 2(b) синтез фармацевтически активного вещества, а именно пептида, и обеспечение связывания его с аминокислотной последовательностью (А 1),причем стадии (а) и (b) осуществляют методами пептидного синтеза или методами генной инженерии. 21. Способ по любому из пп.9-20, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность (А 1) включает 10-55, предпочтительно 28-38 аминокислот. 22. Способ по любому из пп.9-21, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность(А 1), по крайней мере, в некоторых участках соответствует последовательности VP2 по аминокислотным положениям 250-319, предпочтительно по аминокислотным положениям 260-300 и особенно предпочтительно по аминокислотным положениям 287-297. 23. Способ по любому из пп.9-22, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность (А 1) имеет следующую структуру: 24. Способ по любому из пп.9-19 и 21-23, отличающийся тем, что фармацевтически активное вещество выбрано из группы, включающей нуклеиновую кислоту, олигонуклеотид, белок, пептид, РНП, пептидное вещество и модификации указанных веществ. 25. Способ по любому из пп.9-24, отличающийся тем, что синтетическая биологически активная молекула дополнительно связана с аминокислотной последовательностью, происходящей от VP1 полиомавируса.